JPH07135984A - ５−アミノレブリン酸の製法 - Google Patents
５−アミノレブリン酸の製法Info
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- JPH07135984A JPH07135984A JP15320593A JP15320593A JPH07135984A JP H07135984 A JPH07135984 A JP H07135984A JP 15320593 A JP15320593 A JP 15320593A JP 15320593 A JP15320593 A JP 15320593A JP H07135984 A JPH07135984 A JP H07135984A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 生産性高くＡＬＡを製造する方法を提供する
こと。 【構成】 メタノサルシナバーケリーを、メタノール及
び緩衝液を含んでなる培地で培養し、培養液を固液分離
して分離液を取出し、前記分離液から５−アミノレブリ
ン酸（ＡＬＡ）を採取して５−アミノレブリン酸を製造
する場合に、前記緩衝液をリン酸緩衝液のみとする。
こと。 【構成】 メタノサルシナバーケリーを、メタノール及
び緩衝液を含んでなる培地で培養し、培養液を固液分離
して分離液を取出し、前記分離液から５−アミノレブリ
ン酸（ＡＬＡ）を採取して５−アミノレブリン酸を製造
する場合に、前記緩衝液をリン酸緩衝液のみとする。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、メタノサルシナ(Metha
nosarcina)属に属するメタノール資化性の５−アミノレ
ブリン酸生産菌を、メタノール及び緩衝液を含んでなる
培地で培養し、培養液を固液分離して分離液を取出し、
前記分離液から５−アミノレブリン酸（ＡＬＡ）を採取
する５−アミノレブリン酸の製法に関し、例えば、メタ
ノサルシナバーケリー等のメタン細菌を用いて、除草剤
として効果のあるＡＬＡを生産する技術に関する。
nosarcina)属に属するメタノール資化性の５−アミノレ
ブリン酸生産菌を、メタノール及び緩衝液を含んでなる
培地で培養し、培養液を固液分離して分離液を取出し、
前記分離液から５−アミノレブリン酸（ＡＬＡ）を採取
する５−アミノレブリン酸の製法に関し、例えば、メタ
ノサルシナバーケリー等のメタン細菌を用いて、除草剤
として効果のあるＡＬＡを生産する技術に関する。
【０００２】
【従来の技術】従来、このような方法としては、メタノ
サルシナバーケリー等のメタン細菌を、メタノール、及
び、イミダゾール、リン酸水素二カリウム（Ｋ2ＨＰ
Ｏ4)、リン酸二水素カリウム（ＫＨ2ＰＯ4)からなる緩
衝液及び、塩化アンモニウム（ＮＨ4Ｃｌ）、硫酸マグ
ネシウム七水和物（ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ）、塩化ナトリ
ウム（ＮａＣｌ）、塩化カルシウム二水和物（ＣａＣｌ
2・２Ｈ2Ｏ）、Ｌ−システイン塩酸塩、クエン酸チタン
(III) 、ビタミン溶液、ミネラル溶液、硫酸鉄七水和物
（ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ）及びレブリン酸を含んでなる培
地で培養し、ＡＬＡを生産することが考えられており、
緩衝液としては他の組成のものは用いられておらず、こ
れらの組成は必須であると考えられていた。尚、前記ビ
タミン溶液とは、ビオチン、葉酸、ピリドキシン塩酸
塩、チアミン塩酸塩、リボフラビン、ニコチン酸、パン
トテン酸カルシウム、ｐ−アミノ安息香酸、リポ酸を含
んでなる組成物であり、前記ミネラル溶液とは、硫酸亜
鉛七水和物（ＺｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ）、塩化マンガン四水
和物（ＭｎＣｌ 2・４Ｈ2Ｏ）、ほう酸（Ｈ3ＢＯ3）、塩
化銅二水和物（ＣｕＣｌ2・２Ｈ2Ｏ）、塩化ニッケル六
水和物（ＮｉＣｌ2・６Ｈ2Ｏ）、モリブデン酸二ナトリ
ウム二水和物（Ｎａ2ＭｏＯ4・２Ｈ2Ｏ）、を含んでな
る組成物である。
サルシナバーケリー等のメタン細菌を、メタノール、及
び、イミダゾール、リン酸水素二カリウム（Ｋ2ＨＰ
Ｏ4)、リン酸二水素カリウム（ＫＨ2ＰＯ4)からなる緩
衝液及び、塩化アンモニウム（ＮＨ4Ｃｌ）、硫酸マグ
ネシウム七水和物（ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ）、塩化ナトリ
ウム（ＮａＣｌ）、塩化カルシウム二水和物（ＣａＣｌ
2・２Ｈ2Ｏ）、Ｌ−システイン塩酸塩、クエン酸チタン
(III) 、ビタミン溶液、ミネラル溶液、硫酸鉄七水和物
（ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ）及びレブリン酸を含んでなる培
地で培養し、ＡＬＡを生産することが考えられており、
緩衝液としては他の組成のものは用いられておらず、こ
れらの組成は必須であると考えられていた。尚、前記ビ
タミン溶液とは、ビオチン、葉酸、ピリドキシン塩酸
塩、チアミン塩酸塩、リボフラビン、ニコチン酸、パン
トテン酸カルシウム、ｐ−アミノ安息香酸、リポ酸を含
んでなる組成物であり、前記ミネラル溶液とは、硫酸亜
鉛七水和物（ＺｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ）、塩化マンガン四水
和物（ＭｎＣｌ 2・４Ｈ2Ｏ）、ほう酸（Ｈ3ＢＯ3）、塩
化銅二水和物（ＣｕＣｌ2・２Ｈ2Ｏ）、塩化ニッケル六
水和物（ＮｉＣｌ2・６Ｈ2Ｏ）、モリブデン酸二ナトリ
ウム二水和物（Ｎａ2ＭｏＯ4・２Ｈ2Ｏ）、を含んでな
る組成物である。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】ところが、上述の従来
の技術によってＡＬＡを生産する方法では、その生産性
を向上させることは困難であった。そのためＡＬＡを高
効率で生産する方法が望まれていた。そこで本発明の目
的は、上記実情に鑑み、生産性高くＡＬＡを製造する方
法を提供することにある。
の技術によってＡＬＡを生産する方法では、その生産性
を向上させることは困難であった。そのためＡＬＡを高
効率で生産する方法が望まれていた。そこで本発明の目
的は、上記実情に鑑み、生産性高くＡＬＡを製造する方
法を提供することにある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】この目的を達成するため
の第一発明の５−アミノレブリン酸の製法の特徴手段
は、緩衝液をリン酸緩衝液のみとする点にあり、また、
第２発明の５−アミノレブリン酸の製法の特徴手段は、
緩衝液をリン酸緩衝液及び酢酸緩衝液とする点にあり、
また、前記メタノール及び緩衝液を含んでなる培地が、
塩化アンモニウム（ＮＨ4Ｃｌ）、硫酸マグネシウム七
水和物（ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ）、塩化ナトリウム（Ｎａ
Ｃｌ）、塩化カルシウム二水和物（ＣａＣｌ2・２Ｈ
2Ｏ）、Ｌ−システイン塩酸塩、クエン酸チタン(III)
、ビタミン溶液、ミネラル溶液を含んでなり、前記ビ
タミン溶液が、ビオチン、葉酸、ピリドキシン塩酸塩、
チアミン塩酸塩、リボフラビン、ニコチン酸、パントテ
ン酸カルシウム、ｐ−アミノ安息香酸、リポ酸を含んで
なり、前記ミネラル溶液が、硫酸亜鉛七水和物（ＺｎＳ
Ｏ4・７Ｈ2Ｏ）、塩化マンガン四水和物（ＭｎＣｌ 2・
４Ｈ2Ｏ）、ほう酸（Ｈ3ＢＯ3）、塩化銅二水和物（Ｃ
ｕＣｌ2・２Ｈ2Ｏ）、塩化ニッケル六水和物（ＮｉＣｌ
2・６Ｈ2Ｏ）、モリブデン酸二ナトリウム二水和物（Ｎ
ａ2ＭｏＯ4・２Ｈ2Ｏ）、を含んでなるものであれば尚
良く、それらの作用効果は以下の通りである。
の第一発明の５−アミノレブリン酸の製法の特徴手段
は、緩衝液をリン酸緩衝液のみとする点にあり、また、
第２発明の５−アミノレブリン酸の製法の特徴手段は、
緩衝液をリン酸緩衝液及び酢酸緩衝液とする点にあり、
また、前記メタノール及び緩衝液を含んでなる培地が、
塩化アンモニウム（ＮＨ4Ｃｌ）、硫酸マグネシウム七
水和物（ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ）、塩化ナトリウム（Ｎａ
Ｃｌ）、塩化カルシウム二水和物（ＣａＣｌ2・２Ｈ
2Ｏ）、Ｌ−システイン塩酸塩、クエン酸チタン(III)
、ビタミン溶液、ミネラル溶液を含んでなり、前記ビ
タミン溶液が、ビオチン、葉酸、ピリドキシン塩酸塩、
チアミン塩酸塩、リボフラビン、ニコチン酸、パントテ
ン酸カルシウム、ｐ−アミノ安息香酸、リポ酸を含んで
なり、前記ミネラル溶液が、硫酸亜鉛七水和物（ＺｎＳ
Ｏ4・７Ｈ2Ｏ）、塩化マンガン四水和物（ＭｎＣｌ 2・
４Ｈ2Ｏ）、ほう酸（Ｈ3ＢＯ3）、塩化銅二水和物（Ｃ
ｕＣｌ2・２Ｈ2Ｏ）、塩化ニッケル六水和物（ＮｉＣｌ
2・６Ｈ2Ｏ）、モリブデン酸二ナトリウム二水和物（Ｎ
ａ2ＭｏＯ4・２Ｈ2Ｏ）、を含んでなるものであれば尚
良く、それらの作用効果は以下の通りである。
【０００５】
【作用】一般にメタノサルシナ属に属するメタノール資
化性のＡＬＡ生産菌を培養すると、菌体の増殖に伴って
前記菌体はＡＬＡを生産し、菌体外にＡＬＡを蓄積する
ことが知られている。本発明者らは、メタノサルシナ属
に属するメタノール資化性のＡＬＡ生産菌を培養して、
ＡＬＡを生産する場合に、培養する培地中のイミダゾー
ル添加量を増加すると、前記ＡＬＡ生産菌のＡＬＡ生産
性が低下するという新知見を得た。本発明はこの新知見
に基づき成されたものである。
化性のＡＬＡ生産菌を培養すると、菌体の増殖に伴って
前記菌体はＡＬＡを生産し、菌体外にＡＬＡを蓄積する
ことが知られている。本発明者らは、メタノサルシナ属
に属するメタノール資化性のＡＬＡ生産菌を培養して、
ＡＬＡを生産する場合に、培養する培地中のイミダゾー
ル添加量を増加すると、前記ＡＬＡ生産菌のＡＬＡ生産
性が低下するという新知見を得た。本発明はこの新知見
に基づき成されたものである。
【０００６】つまり、ＡＬＡ生産菌を培養する培地中の
緩衝液に含まれるイミダゾール量を増加すると、ＡＬＡ
の生産性が低下する訳であるから、イミダゾールにはＡ
ＬＡ生産菌がＡＬＡを生産する生産性を抑制する作用が
あると考えられる。従って、逆に、イミダゾールの量を
減少させるとＡＬＡの生産性は向上するものであると考
えられる。
緩衝液に含まれるイミダゾール量を増加すると、ＡＬＡ
の生産性が低下する訳であるから、イミダゾールにはＡ
ＬＡ生産菌がＡＬＡを生産する生産性を抑制する作用が
あると考えられる。従って、逆に、イミダゾールの量を
減少させるとＡＬＡの生産性は向上するものであると考
えられる。
【０００７】また、本発明者らは、イミダゾールを添加
した従来の培地においてＡＬＡ生産菌を培養したとして
もイミダゾールを添加した従来の培地において、培養し
た場合と同様の培養度を示すことを実験的に証明し、Ａ
ＬＡ生産にイミダゾールは必須でないことを明らかにし
た。
した従来の培地においてＡＬＡ生産菌を培養したとして
もイミダゾールを添加した従来の培地において、培養し
た場合と同様の培養度を示すことを実験的に証明し、Ａ
ＬＡ生産にイミダゾールは必須でないことを明らかにし
た。
【０００８】従って、緩衝液をリン酸緩衝液のみとす
る、あるいは、リン酸緩衝液及び酢酸緩衝液とすること
により、従来どおりの培養度を維持しつつ、イミダゾー
ルによるＡＬＡ生産性抑制作用が全くなくなるために、
高いＡＬＡ生産性を得ることが出来るようになった。
る、あるいは、リン酸緩衝液及び酢酸緩衝液とすること
により、従来どおりの培養度を維持しつつ、イミダゾー
ルによるＡＬＡ生産性抑制作用が全くなくなるために、
高いＡＬＡ生産性を得ることが出来るようになった。
【０００９】さらに、ＡＬＡ生産菌を培養する培地が、 塩化アンモニウム（ＮＨ4Ｃｌ） 硫酸マグネシウム七水和物（ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ） 塩化ナトリウム（ＮａＣｌ） 塩化カルシウム二水和物（ＣａＣｌ2・２Ｈ2Ｏ） Ｌ−システイン塩酸塩 クエン酸チタン(III) ビタミン溶液 ミネラル溶液 を含んでなるものであった場合には、メタン細菌の一種
であるメタノサルシナバーケリーを培養する場合の高い
培養度が得られ、それに伴うＡＬＡ生産性も高く維持す
ることができる。
であるメタノサルシナバーケリーを培養する場合の高い
培養度が得られ、それに伴うＡＬＡ生産性も高く維持す
ることができる。
【００１０】
【発明の効果】結局、高いＡＬＡ生産性が得られるよう
になったので、効率良く、大量にＡＬＡを生産すること
ができ、それによりＡＬＡ採取のための作業手間を少な
くできる。さらに少ない作業手間で生産可能で、かつ、
リン酸緩衝液のみからなる緩衝液は安価なので、ＡＬＡ
製造コストを下げることが出来るものである。
になったので、効率良く、大量にＡＬＡを生産すること
ができ、それによりＡＬＡ採取のための作業手間を少な
くできる。さらに少ない作業手間で生産可能で、かつ、
リン酸緩衝液のみからなる緩衝液は安価なので、ＡＬＡ
製造コストを下げることが出来るものである。
【００１１】このＡＬＡは、除草剤として用いることの
出来るものであるので、大量のＡＬＡを安価に提供する
ことによって、除草を必要とする技術に対して大きく役
に立てるようになった。
出来るものであるので、大量のＡＬＡを安価に提供する
ことによって、除草を必要とする技術に対して大きく役
に立てるようになった。
【００１２】また、培地中に含まれるメタノールを供給
するに、メタノールを含有する工場廃水等を用いれば、
廃水中に含まれる有機成分等をメタン細菌によって生分
解処理することができながら、従来は不要物として処分
されていた廃水から有価物としてのＡＬＡを、安価に生
産できるようになり、廃水処理技術及びＡＬＡ生産技術
としても有利に利用することが出来るようになった。
するに、メタノールを含有する工場廃水等を用いれば、
廃水中に含まれる有機成分等をメタン細菌によって生分
解処理することができながら、従来は不要物として処分
されていた廃水から有価物としてのＡＬＡを、安価に生
産できるようになり、廃水処理技術及びＡＬＡ生産技術
としても有利に利用することが出来るようになった。
【００１３】
【実施例】以下に本発明の実施例を説明する。メタン細
菌であるメタノサルシナバーケリー（Methanosarcina b
arkeri、以下バーケリーと称す）を基本培地（後述）に
メタノールを１％及び酢酸ナトリウム（ＣＨ3ＣＯＯＮ
ａ）を１．２ｇ／リットル、リン酸水素二カリウム（Ｋ
2ＨＰＯ 4）０．３４８ｇ／リットル、リン酸二水素カリ
ウム（ＫＨ2ＰＯ4）０．２２４ｇ／リットル、レブリン
酸３０ｍＭを添加してなる培地において、常法に従って
培養し、MarzerallとGranick法〔Sasaki. K, et al. J.
Ferment. Technol. Vol.65, No.5 511〜515(1987) 参
照〕でＡＬＡの生成量を調べたところ、６日間の培養で
上清液中に約１１ｍｇ／リットルのＡＬＡを生産したこ
とがわかった。また、この培養物を遠心分離によって固
液分離した、その上清液を分離液として取出し、その上
清液を常法に従って分離精製することで、生産されたＡ
ＬＡを採取することが出来た。
菌であるメタノサルシナバーケリー（Methanosarcina b
arkeri、以下バーケリーと称す）を基本培地（後述）に
メタノールを１％及び酢酸ナトリウム（ＣＨ3ＣＯＯＮ
ａ）を１．２ｇ／リットル、リン酸水素二カリウム（Ｋ
2ＨＰＯ 4）０．３４８ｇ／リットル、リン酸二水素カリ
ウム（ＫＨ2ＰＯ4）０．２２４ｇ／リットル、レブリン
酸３０ｍＭを添加してなる培地において、常法に従って
培養し、MarzerallとGranick法〔Sasaki. K, et al. J.
Ferment. Technol. Vol.65, No.5 511〜515(1987) 参
照〕でＡＬＡの生成量を調べたところ、６日間の培養で
上清液中に約１１ｍｇ／リットルのＡＬＡを生産したこ
とがわかった。また、この培養物を遠心分離によって固
液分離した、その上清液を分離液として取出し、その上
清液を常法に従って分離精製することで、生産されたＡ
ＬＡを採取することが出来た。
【００１４】尚、基本培地は、１リットル中の組成が以
下のようになっている。 塩化アンモニウム（ＮＨ4Ｃｌ) ……………………… １．００ｇ 硫酸マグネシウム七水和物（ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ）… １．００ｇ 塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）…………………………… ２．２５ｇ 塩化カルシウム二水和物（ＣａＣｌ2・２Ｈ2Ｏ）…… ０．２５ｇ Ｌ−システイン塩酸塩 ………………………………… ０．３０ｇ クエン酸チタン（III) ………………………………… ０．０７５ｇ ビタミン溶液……………………………………………… ２０ｍｌ ミネラル溶液……………………………………………… ６ｍｌ 硫酸鉄七水和物（ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ）……………… ０．００２ｇ またビタミン溶液は、以下の組成であり、 ビオチン ……………………………………………… ２ｍｇ／リットル 葉酸 …………………………………………………… ２ｍｇ／リットル ピリドキシン塩酸塩 ………………………………… １０ｍｇ／リットル チアミン塩酸塩 ……………………………………… ５ｍｇ／リットル リボフラビン ………………………………………… ５ｍｇ／リットル ニコチン酸 …………………………………………… ５ｍｇ／リットル パントテン酸カルシウム …………………………… ５ｍｇ／リットル ｐ−アミノ安息香酸 ………………………………… ５ｍｇ／リットル リポ酸 ………………………………………………… ５ｍｇ／リットル ミネラル溶液とは以下の組成である。 硫酸亜鉛七水和物（ＺｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ）………… ０．１ｇ／リットル 塩化マンガン四水和物（ＭｎＣｌ2・４Ｈ2Ｏ）…… ０．０４ｇ／リットル ほう酸（Ｈ3ＢＯ3）…………………………………… ０．３ｇ／リットル 塩化銅二水和物（ＣｕＣｌ2・２Ｈ2Ｏ）…………… ０．０１ｇ／リットル 塩化ニッケル六水和物（ＮｉＣｌ2・６Ｈ2Ｏ）…… ０．０１ｇ／リットル モリブデン酸二ナトリウム二水和物（Ｎａ2ＭｏＯ4・２Ｈ2Ｏ） …… ０．０３ｇ／リットル 以下にバーケリーを培養して、ＡＬＡを生産した場合
の、バーケリーの培養度及びＡＬＡ生産量の経時変化を
調べた試験例及びその比較例を図面に基づいて示す。
下のようになっている。 塩化アンモニウム（ＮＨ4Ｃｌ) ……………………… １．００ｇ 硫酸マグネシウム七水和物（ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ）… １．００ｇ 塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）…………………………… ２．２５ｇ 塩化カルシウム二水和物（ＣａＣｌ2・２Ｈ2Ｏ）…… ０．２５ｇ Ｌ−システイン塩酸塩 ………………………………… ０．３０ｇ クエン酸チタン（III) ………………………………… ０．０７５ｇ ビタミン溶液……………………………………………… ２０ｍｌ ミネラル溶液……………………………………………… ６ｍｌ 硫酸鉄七水和物（ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ）……………… ０．００２ｇ またビタミン溶液は、以下の組成であり、 ビオチン ……………………………………………… ２ｍｇ／リットル 葉酸 …………………………………………………… ２ｍｇ／リットル ピリドキシン塩酸塩 ………………………………… １０ｍｇ／リットル チアミン塩酸塩 ……………………………………… ５ｍｇ／リットル リボフラビン ………………………………………… ５ｍｇ／リットル ニコチン酸 …………………………………………… ５ｍｇ／リットル パントテン酸カルシウム …………………………… ５ｍｇ／リットル ｐ−アミノ安息香酸 ………………………………… ５ｍｇ／リットル リポ酸 ………………………………………………… ５ｍｇ／リットル ミネラル溶液とは以下の組成である。 硫酸亜鉛七水和物（ＺｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ）………… ０．１ｇ／リットル 塩化マンガン四水和物（ＭｎＣｌ2・４Ｈ2Ｏ）…… ０．０４ｇ／リットル ほう酸（Ｈ3ＢＯ3）…………………………………… ０．３ｇ／リットル 塩化銅二水和物（ＣｕＣｌ2・２Ｈ2Ｏ）…………… ０．０１ｇ／リットル 塩化ニッケル六水和物（ＮｉＣｌ2・６Ｈ2Ｏ）…… ０．０１ｇ／リットル モリブデン酸二ナトリウム二水和物（Ｎａ2ＭｏＯ4・２Ｈ2Ｏ） …… ０．０３ｇ／リットル 以下にバーケリーを培養して、ＡＬＡを生産した場合
の、バーケリーの培養度及びＡＬＡ生産量の経時変化を
調べた試験例及びその比較例を図面に基づいて示す。
【００１５】〔試験例〕基本培地にメタノールを１％、
及び、酢酸ナトリウム（ＣＨ3ＣＯＯＮａ）１．２ｇ／
リットル、リン酸水素二カリウム（Ｋ2ＨＰＯ4）０．３
４８ｇ／リットル、リン酸二水素カリウム（ＫＨ2Ｐ
Ｏ4）０．２２４ｇ／リットルの組成となる緩衝液、及
び、レブリン酸３０ｍＭを添加してなる培地においてバ
ーケリーを培養し、その培養度を、バーケリーを培養し
て発生するガス量によって調べるとともに、前述と同様
にＡＬＡの生成量を調べた。
及び、酢酸ナトリウム（ＣＨ3ＣＯＯＮａ）１．２ｇ／
リットル、リン酸水素二カリウム（Ｋ2ＨＰＯ4）０．３
４８ｇ／リットル、リン酸二水素カリウム（ＫＨ2Ｐ
Ｏ4）０．２２４ｇ／リットルの組成となる緩衝液、及
び、レブリン酸３０ｍＭを添加してなる培地においてバ
ーケリーを培養し、その培養度を、バーケリーを培養し
て発生するガス量によって調べるとともに、前述と同様
にＡＬＡの生成量を調べた。
【００１６】〔比較例〕基本培地にメタノールを１％、
及び、酢酸ナトリウム（ＣＨ3ＣＯＯＮａ）１．２ｇ／
リットル、リン酸水素二カリウム（Ｋ2ＨＰＯ4）０．７
０ｇ／リットル、リン酸二水素カリウム（ＫＨ2ＰＯ4）
０．４５ｇ／リットル、イミダゾール２．７２ｇ／リッ
トルの組成となる緩衝液、及び、レブリン酸３０ｍＭを
添加してなる培地においてバーケリーを培養し、その培
養度を、バーケリーを培養して発生するガス量によって
調べるとともに前述と同様にＡＬＡの生成量を調べた。
及び、酢酸ナトリウム（ＣＨ3ＣＯＯＮａ）１．２ｇ／
リットル、リン酸水素二カリウム（Ｋ2ＨＰＯ4）０．７
０ｇ／リットル、リン酸二水素カリウム（ＫＨ2ＰＯ4）
０．４５ｇ／リットル、イミダゾール２．７２ｇ／リッ
トルの組成となる緩衝液、及び、レブリン酸３０ｍＭを
添加してなる培地においてバーケリーを培養し、その培
養度を、バーケリーを培養して発生するガス量によって
調べるとともに前述と同様にＡＬＡの生成量を調べた。
【００１７】これらの結果を、培養経過を図１に、ＡＬ
Ａ生産量を図２に示す。尚、試験例における結果は実
線、比較例における結果を破線で示す。
Ａ生産量を図２に示す。尚、試験例における結果は実
線、比較例における結果を破線で示す。
【００１８】図１から、酢酸緩衝液及びリン酸緩衝液か
らなる緩衝液を用いた（試験例）場合には、従来のよう
にイミダゾールを含んでなる緩衝液を用いた（比較例）
場合と同等の培養経過を示すことがわかり、イミダゾー
ルはバーケリーの培養度には影響を与えていないことが
わかる。また、図２から、試験例の場合、６日でほぼ原
料を消費して、約１１ｍｇ／リットルのＡＬＡを生産す
ることが出来るものの、比較例の場合、その生産性は低
く、６日目においても約７．５ｍｇ／リットルのＡＬＡ
しか生産しておらず、イミダゾールはＡＬＡの生産性に
悪影響を与えていることがわかるとともに、本発明のＡ
ＬＡの製法によれば、従来の約１．５倍のＡＬＡ生産が
可能であることがわかった。
らなる緩衝液を用いた（試験例）場合には、従来のよう
にイミダゾールを含んでなる緩衝液を用いた（比較例）
場合と同等の培養経過を示すことがわかり、イミダゾー
ルはバーケリーの培養度には影響を与えていないことが
わかる。また、図２から、試験例の場合、６日でほぼ原
料を消費して、約１１ｍｇ／リットルのＡＬＡを生産す
ることが出来るものの、比較例の場合、その生産性は低
く、６日目においても約７．５ｍｇ／リットルのＡＬＡ
しか生産しておらず、イミダゾールはＡＬＡの生産性に
悪影響を与えていることがわかるとともに、本発明のＡ
ＬＡの製法によれば、従来の約１．５倍のＡＬＡ生産が
可能であることがわかった。
【００１９】〔別実施例〕先の実施例においてはバーケ
リーを培養してＡＬＡを生産したが、他のＡＬＡ生産菌
でも良く、さらに、バーケリーを用いてＡＬＡを生産す
る場合にレブリン酸を培地に添加することによりＡＬＡ
の生産性が向上することが知られているために、これを
添加して培養を行った。しかし、レブリン酸以外にもＡ
ＬＡの生産性を向上させる物質は知られており、例えば
β−アラニン、λ−アミノ酪酸等他の物質を添加してＡ
ＬＡ生産性を高めて培養を行うことも可能である。
リーを培養してＡＬＡを生産したが、他のＡＬＡ生産菌
でも良く、さらに、バーケリーを用いてＡＬＡを生産す
る場合にレブリン酸を培地に添加することによりＡＬＡ
の生産性が向上することが知られているために、これを
添加して培養を行った。しかし、レブリン酸以外にもＡ
ＬＡの生産性を向上させる物質は知られており、例えば
β−アラニン、λ−アミノ酪酸等他の物質を添加してＡ
ＬＡ生産性を高めて培養を行うことも可能である。
【００２０】また、酢酸ナトリウムは、バーケリーの増
殖性を向上する目的で緩衝液に加えてあるが、これにつ
いても必ずしも添加しなくとも、ＡＬＡの生産が可能で
あるため、酢酸ナトリウムについても必ずしも本発明に
必要なわけではない。つまり、本発明に用いる緩衝液は
リン酸緩衝液のみでもよい。
殖性を向上する目的で緩衝液に加えてあるが、これにつ
いても必ずしも添加しなくとも、ＡＬＡの生産が可能で
あるため、酢酸ナトリウムについても必ずしも本発明に
必要なわけではない。つまり、本発明に用いる緩衝液は
リン酸緩衝液のみでもよい。
【００２１】また、先の実施例に挙げた基本培地は、バ
ーケリーを培養する場合の培地の一例であって、これに
限る訳ではなく、微生物の種類等に応じて種々変更する
ことは可能である。
ーケリーを培養する場合の培地の一例であって、これに
限る訳ではなく、微生物の種類等に応じて種々変更する
ことは可能である。
【００２２】また、ＡＬＡ生産菌の培養液からＡＬＡを
採取する方法についても、培養物を膜分離により固液分
離する等の他の方法で固液分離することも可能である。
しかし、遠心分離で固液分離すると共にイオン交換樹脂
で精製すれば、容易に高純度のＡＬＡが得られる利点が
ある。
採取する方法についても、培養物を膜分離により固液分
離する等の他の方法で固液分離することも可能である。
しかし、遠心分離で固液分離すると共にイオン交換樹脂
で精製すれば、容易に高純度のＡＬＡが得られる利点が
ある。
【図１】微生物（バーケリー）の培養経過を示すグラフ
【図２】ＡＬＡ（５−アミノレブリン酸）の生成を示す
グラフ
グラフ
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 庄林 学 兵庫県尼崎市浜１丁目１番１号 株式会社 クボタ技術開発研究所内
Claims (3)
- 【請求項１】 メタノサルシナ(Methanosarcina)属に属
するメタノール資化性の５−アミノレブリン酸生産菌
を、メタノール及び緩衝液を含んでなる培地で培養し、
培養液を固液分離して分離液を取出し、前記分離液から
５−アミノレブリン酸（ＡＬＡ）を採取する５−アミノ
レブリン酸の製法であって、前記緩衝液をリン酸緩衝液
のみとする５−アミノレブリン酸の製法。 - 【請求項２】 メタノサルシナ(Methanosarcina)属に属
するメタノール資化性の５−アミノレブリン酸生産菌
を、メタノール及び緩衝液を含んでなる培地で培養し、
培養液を固液分離して、分離液を取出し、前記分離液か
ら５−アミノレブリン酸（ＡＬＡ）を採取する５−アミ
ノレブリン酸の製法であって、前記緩衝液をリン酸緩衝
液及び酢酸緩衝液とする５−アミノレブリン酸の製法。 - 【請求項３】 前記メタノール及び緩衝液を含んでなる
培地が、 塩化アンモニウム（ＮＨ4Ｃｌ） 硫酸マグネシウム七水和物（ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ） 塩化ナトリウム（ＮａＣｌ） 塩化カルシウム二水和物（ＣａＣｌ2・２Ｈ2Ｏ） Ｌ−システイン塩酸塩 クエン酸チタン(III) ビタミン溶液 ミネラル溶液 硫酸鉄七水和物（ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ） 及びレブリン酸を含んでなり、前記ビタミン溶液が、ビ
オチン、葉酸、ピリドキシン塩酸塩、チアミン塩酸塩、
リボフラビン、ニコチン酸、パントテン酸カルシウム、
ｐ−アミノ安息香酸、リポ酸を含んでなり、前記ミネラ
ル溶液が、硫酸亜鉛七水和物（ＺｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ）、
塩化マンガン四水和物（ＭｎＣｌ2・４Ｈ2Ｏ）、ほう酸
（Ｈ3ＢＯ3）、塩化銅二水和物（ＣｕＣｌ2・２Ｈ
2Ｏ）、塩化ニッケル六水和物（ＮｉＣｌ2・６Ｈ
2Ｏ）、モリブデン酸二ナトリウム二水和物（Ｎａ2Ｍｏ
Ｏ4・２Ｈ2Ｏ）、を含んでなる請求項１または請求項２
記載の５−アミノレブリン酸の製法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15320593A JPH07135984A (ja) | 1993-06-24 | 1993-06-24 | ５−アミノレブリン酸の製法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15320593A JPH07135984A (ja) | 1993-06-24 | 1993-06-24 | ５−アミノレブリン酸の製法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07135984A true JPH07135984A (ja) | 1995-05-30 |
Family
ID=15557348
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP15320593A Pending JPH07135984A (ja) | 1993-06-24 | 1993-06-24 | ５−アミノレブリン酸の製法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH07135984A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE102016116794A1 (de) | 2016-09-08 | 2018-03-08 | Universität Bielefeld | Verfahren und Mittel zur Herstellung von Aminolävulinsäure |
-
1993
- 1993-06-24 JP JP15320593A patent/JPH07135984A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE102016116794A1 (de) | 2016-09-08 | 2018-03-08 | Universität Bielefeld | Verfahren und Mittel zur Herstellung von Aminolävulinsäure |
| WO2018046512A1 (de) * | 2016-09-08 | 2018-03-15 | Universitaet Bielefeld | Verfahren und mittel zur herstellung von aminolävulinsäure |
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