JPH07113637B2 - 検定装置および免疫検定方法 - Google Patents

検定装置および免疫検定方法

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JPH07113637B2 JP1505913A JP50591389A JPH07113637B2 JP H07113637 B2 JPH07113637 B2 JP H07113637B2 JP 1505913 A JP1505913 A JP 1505913A JP 50591389 A JP50591389 A JP 50591389A JP H07113637 B2 JPH07113637 B2 JP H07113637B2
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Description

【発明の詳細な説明】 技術分野 この発明は、膜ベースの検定装置および免疫検定方法に
関し、さらには複数の膜をベースとする装置および選択
的に透過し得る膜を含む免疫検定方法に関する。
背景技術 今日、いくつかの検定装置が市販されている。典型的に
は、これらの装置では、フィルタまたは膜に直接に、も
しくは抗体固定化ラテックス粒子のトラッピングにより
間接的に固定化された捕獲抗体を用いて、サンドイッチ
免疫検定が行なわれている。検体またはその抽出物は、
固定化捕獲抗体を有するフィルタまたは膜を含む装置に
適用される。これらの市販の装置は、毛管作用を利用し
て、試料および試薬をフィルタまたは膜を通してその下
に存在する吸収材に流入させる。最後に、一方の構成要
素が適切なシグナル発生置換基、例えば酵素ラベルで標
識されたサンドイッチを形成する。基質の添加は、酵素
と反応して着色反応生成物を生成することにより酵素標
識を検出するであろう。酵素は、その存在が抗原の存在
を必要とするサンドイッチの構成要素に結合するので、
着色反応は抗原の存在をも示す。これらの装置にはいく
つかの不利な点があり、その一つに、低い検定感度があ
る。例えば、ヒト絨毛性ゴナドトロピンのような主要分
析物を測定するために、これらの検定に、通常1011標的
分子/mlをも含む検体が必要である。低感度の理由の一
つは、検定装置における毛管流動速度の制御が困難なこ
とにある。反応が終了する前に、試薬が毛管流動によっ
て反応域から離脱してしまう。サンドイッチの形成また
は酵素の検出における抗原−抗体相互作用および他の段
階により多くの時間をかければ、動力学が改良され、よ
り少量の分析物の検出が可能となる。多層構造を有する
いくつかの検定装置には、吸収材に背景色が発生し、弱
い陽性結果と陰性結果との識別を妨げるという別の問題
がある。
毛管流動速度の制御の困難さを解消するための一つの試
みが、1982年12月28日にTomらに発行された米国特許4,3
66,241号に記載されており、これはサンドイッチ免疫検
定を行なうための方法および装置を開示している。この
装置は、免疫学的な対の一構成要素が吸着する免疫吸着
層、液体吸収部材および吸収性の強い抗液体流動ディス
クを含むものとして記述されている。この吸収性の強い
抗液体流動ディスクは、液体の吸収層への侵入を遅ら
せ、免疫吸収部材を通して流動する液体の均一な流動速
度を達成する。流動は、免疫吸収部材の免疫学的な対の
一構成要素が固定されている特定の領域に限定されるこ
とはない。
Tomらは、さらに、中間層に酵素を添加して検出層から
の化合物の移動を妨げることにより、多層免疫吸収帯の
第１層におけるシグナルの発生を妨げることを開示して
いる。第13欄に記載された実施例は、検出用酵素（dete
ctor enzyme）が第１層および第３層に存在することを
記述している。このシステムは、検出を第３層で行なう
ように設計されている。基質は、第１層には添加されな
い。その代わり、それは、第３層にその場で生成する。
別の酵素が第１層と第３層との間の層に存在しており、
この酵素は、基質が第３層から第１層に移動するのを妨
げ、第３層でのみ検出が行なわれるようにする。ここに
は、酵素に直接作用する酵素阻害剤を用いて吸収材層を
処理することにより、吸収剤層における背景色を減少す
ることは教唆されていない。
1986年12月30日にValkirsらに発行された米国特許4,53
2,901号および1978年５月30日にRupeらに発行された米
国特許4,092,115号の両者は、フィルタまたは膜上に位
置する構造を有する装置に関し、これらのフィルタまた
は膜は試薬が結合し得る透過膜上への試料の流動を可能
にするものである。
1986年11月18日にHossumらに発行された米国特許4,623,
461号は、種々の免疫検定に使用しうる横断流動診断装
置（transverse flow diagnostic device）を開示す
る。この装置は、全ての流体および反応体が、フィルタ
部材を通して、フィルタ最上面の局在部分上の適用した
点からフィルタの周辺部分に外に向けて流動するように
組み立てられている。装置の周辺部分に位置する吸収部
材は、横断毛管作用（transverse capillary action）
を働かせてフィルタ平面における適用点から液体を外側
に吸引する。
1983年10月４日にColeらに発行された米国特許4,407,94
3は、その表面が免疫化学的に活性化された微孔性膜の
ゼイン固定内部表面および外部表面への抗原または抗体
の固定化を開示している。膜を通して流動する大量の流
体に露出した、大比率の表面を有する構造は、この表面
との反応性の接触の可能性を増加させ、反応時間を減少
させる試みに用いられる。インキュベーション時間は、
流体の流動速度が、ドロップが膜の上部に載っていると
きにそのドロップによって作用する流体静力学的圧力の
みによって決定されるように、流体を膜の上面に滴下す
る技法によって支配される。吸収剤層は、それを通して
試薬を吸引するための毛管作用を働かせるためには使用
されない。
1981年１月20日にColeらに発行された米国特許4,236,99
9号は、液体試料の予め定められた成分を試験するため
の多層装置を開示している。この試験装置は、液体レザ
バを規定する、伸縮する頂部および基台部材を具備し、
頂部部材は、微孔性膜の周辺に向かって開口している１
以上の試験ウェルを有する。微孔性膜は、その内部表面
および外部表面に固定された共反応体（co−reactant）
を有し、この共反応体は分析物と反応することが可能で
ある。弾性部材が押し下げられた場合には、膜は、ブロ
ッティングまたは毛管作用によって、試験ウェルを通過
する全ての液体を吸収することが可能な吸収材部材と接
触する。吸収材層およびそれを膜の下層と接触させる部
材がないと、液体は膜を通過しない。装置が押し下げら
れていない場合には、液体は微孔性膜を通過しないであ
ろう。この吸収材層は、実質的に非湿潤性、すなわち、
通常の水溶液に対してはオシメのインナーライニングと
比較し得る表面層と、実質的に湿潤性の層とを有する。
1975年６月10日にBagshaweに発行された米国特許3,888,
629号は、マトリックスパッドを有する容器と、液体を
マトリックスパッドを通して流動させるマトリックスパ
ッドの支持体とを具備する、ラジオイムノアッセイへの
使用に適した反応セルを開示している。このマトリック
スは、分析物と結合し得る多孔質吸収材料を含んでい
る。所望の化学反応は、マトリックス中で起こり得る。
実質的にマトリックスと接触している多孔セル材料を用
いることにより、迅速なろ過が誘導される。
1973年３月27日にLiottaに発行された米国特許3,723,06
4号は、物質の濃度を定量的に決定する積層試験装置を
開示している。この装置は、ほぼ４層からなる。第１多
孔層は試薬系を含浸し、この第１層に隣接して被検流体
に対して異なる透過性を有する複数の領域を含む膜があ
り、第２層に隣接して多孔質透過層があり、表示ストリ
ップが続く。ここでは、選択的透過性は、分析物との化
学反応、または膜層の細孔サイズによるサイズ選択で起
こる。
ミリポア・イムノザイム・トキソプラズマ抗体試験（Mi
llipore Immunozyme Toxoplasma Antibody Test）を記
述する文献、No.PB 847（1979）は、微孔性免疫吸収
材、多孔質疎水性層および吸収材ブロッタ（absorbent
blotter）を有するカセットを開示している。カセット
頂部が押し下げられたときに、その内部に存在する液体
は免疫吸収材を通過してブロッタに流れ込む。このよう
にして、この装置は、吸収材層に形成されることがある
背景色が上層における結果の検出を妨げることを防止す
る。
発明の要約 この発明は、ある物質を含有することが推定され、もし
くは知られている試料において、その物質の有無を検出
もしくは定量するための改良された検定装置に関する。
この装置は、（ａ）被検体の捕獲試薬が結合した透過
膜、（ｂ）中間層、および（ｃ）吸収材層を含む多層を
有し、（ｂ）層は（ａ）および（ｃ）層と直接の伝達が
ある。前記改良は、（ｂ）層が選択的透過性層であって
それを貫通する少なくとも１つの孔を有していることに
あり、この孔は捕獲試薬の直下にあり、この孔の領域も
しくは複数の孔が合体した領域は捕獲試薬によって覆わ
れた領域よりも小さい。
この発明の検定装置は、結合対の一要素によって捕獲し
得る物質の検出または測定するための免疫検定に用いる
ことができる。
図 面 第１図は、この発明による、孔を有する（ｂ）層の平面
図、 第２図は、装置の外形を示す断面の正面図である。
発明の詳細な説明 この出願において、「選択的透過性」という用語は、も
し存在していたとして、有機溶媒のような他の液体を通
過させるかどうかにかかわらず、水溶液を実質的に通過
させない（すなわち、実質的に不透水性の）材料を指
す。
この発明に従って、種々のタイプの受容体分子、例え
ば、以下で議論されるように特定の免疫もしくは非免疫
結合対の一要素を捕獲試薬として使用することができ
る。適切な捕獲試薬の選択は、関心のある分析物、関心
のある分析物を検出するために必要な検定感度等の種々
の基準に依存する。この発明の好ましい態様は、捕獲試
薬としてモノクローナル抗体または免疫反応性モノクロ
ーナル抗体断片を使用する。しかしながら、適当な親和
性を有するモノクローナル抗体が得られない場合には、
所望の感度を達成するために、必要な親和性を有するポ
リクローナル抗体が好ましい。
捕獲試薬に加えて、陽性および陰性標準試薬を透過性層
表面に結合させて検定および検出システムが適性に機能
しているかどうかを決定することもできる。
試料が検出用抗体（detector antibody）と前インキュ
ベートすることなく装置に添加された場合には、適切な
陽性標準は精製抗原であり得る。分析物を含有する試料
との前インキュベーションが行なわれる場合には、それ
は検出用抗体に結合した抗原であり得る。これは、抗原
と検出用抗体との捕獲された複合体をこの検定で検出す
ることが可能であることを示すが、そのような複合体を
形成または捕獲可能であることは示していない。検出用
抗体上のビオチンが試験された、鍵となる基（key grou
p tested）である場合には、結合したビオチンを有する
いかなる物質でも前記複合体と置き換えることができ、
かつ陽性標準としても役立つ。そのような物質には、ビ
オチニル化（biotinylated）ウシ血清アルブミンまたは
他のビオチニル化タンパク質が含まれる。他の可能な陽
性標準物質は、抗−酵素のような検出系の成分に対する
抗体である。これは、検出系における酵素が膜上に捕獲
される場合に陽性の結果が得られることを示している。
他のタイプの陽性標準も可能である。このように、適切
な陽性標準の選択は、一定の条件を満たした場合（抗原
が存在した場合、またはビオチンが存在した場合、ある
いは酵素が捕獲された場合等）の陽性反応を試験するた
めに企図される。
良好な陰性標準物質は、捕獲抗体と同じ種およびサブク
ラスのモノクローナル抗体であって、捕獲試薬と等しい
濃度（単位面積当たりの量）で適用されたものである。
この陰性標準抗体は、被検抗原、または検出系の成分に
対する（この検定において）論証可能な親和性は持たな
い。このように、適切に使用された場合には、陰性標準
は非特異的反応に対する試験を提供する。
捕獲試薬がスポットされる透過性層に使用し得る材料に
は、種々の天然または合成材料が含まれ、これらは個別
の材料であっても材料の組み合わせであってもよく、有
機、無機またはそれらの組み合わせであってもよい。透
過性層は吸収性が強く、すなわち検定において使用され
る溶質の移動を実質的に妨げることなくそれを通しての
水溶液の流動を可能にしなければならない。選択された
材料はまた、下に記述されるように、装置の局所領域
に、捕獲試薬が共有結合的もしくは非共有結合的に、直
接もしくは間接的に結合し得るものでなければならな
い。用途を見出し得る典型的な材料は、多糖体、例え
ば、紙、酢酸セルロース、ニトロセルロースおよび焼成
ニトロセルロース等のセルロース材；シリカ、不活性化
アルミナ、硅藻土、MgSO4または塩化ビニル、塩化ビニ
ル−プロピレン共重合体、および塩化ビニル−酢酸ビニ
ル共重合体のようなポリマーを有する、多孔質ポリマー
マトリックスに実質的に均一に分散された無機細分材料
等の無機材料；天然に産生する、例えば木綿と、合成さ
れた、例えばナイロン布との両者を含む布；多孔質ゲ
ル、例えば、シリカゲル、アガロース、デキストリン、
およびゼラチン；ポリマーフィルム、例えばポリアクリ
ルアミド等である。
特に、タンパク質が共有結合的に結合し得る膜について
も言及することができる。そのリストには、市場から購
入し得る下記のものが含まれる。約0.5ないし約５μｍ
のポアサイズを有する微孔性親和性膜、接触した際にタ
ンパク質を固定する高密度の共有結合サイトを提供する
化学的に予め活性化された表面を有する膜、および基本
膜（base membrane）が、７ないし９のpH範囲において
リジンまたはアルギニンのε−アミノ基によってタンパ
ク質の固定を可能にするよう化学的に誘導された親水性
フッ化ポリビニリデンである、化学的に活性化された親
水性微孔性膜。高感度検定については、膜の選択は、膜
のブロッキングによる非特異的な結合を妨げる能力に主
に依存する。これは、選択された試薬、ブッロク剤、お
よび膜それ自体に順に依存する。この発明の実施におい
て好ましい膜は、化学的に活性化された親水性微孔性膜
である。
この多層装置の選択的透過性層は、検定条件下におい
て、水溶液の流動を妨げる。この流動に対する抵抗は、
検定の全体の感度の他に、捕獲試薬が検定に使用される
他の試薬に接触する時間を増加させ、それによりサンド
イッチの形成および酵素の検定における、後に続く工程
を改善するので、重要である。選択的透過性層には流動
特性が公知である多種の組成物を使用することができ、
これには、ポリエチレン、ポリエチレン裏打ポリテトラ
フルオロエチレンおよび繊維状多孔質ポリテトラフルオ
ロエチレンが含まれる。この発明の実施においては、繊
維状多孔質ポリテトラフルオロエチレンが選択的透過性
膜の好ましい材料である。膜の繊維状多孔性は、表面に
沿った放射状の流動を助長し、それにより液体を選択的
透過性層の孔が位置する中心へ流動させるように見え
る。検定の間、水性試験は、水性検定試薬に対して選択
的透過性である繊維状多孔質ポリテトラフルオロエチレ
ン膜を通過しない。
繊維状多孔質ポリテトラフルオロエチレン膜は、約１な
いし約60μｍの範囲をとる種々のポアサイズおよび約0.
063mmないし約0.065mmの範囲をとる種々の厚さのものが
利用可能である。製造方法により、これらの膜は、本来
の繊維の寸法および配置まで標準ろ紙の構造を再現す
る。
この発明に実施において、繊維状多孔質ポリテトラフル
オロエチレンまたは他の選択的透過性膜は約0.1ないし
約0.15mlの範囲の厚さ、および約５μｍないし約６μｍ
のポアサイズを有していることが好ましい。約0.15mmを
こえる厚さを有する膜は、孔を通過する液体の滑らかな
流動を妨げることがあるので、避けることが好ましい。
一方、選択的透過性膜が薄すぎる場合には、装置が組み
立てられたときに破損する可能性がある。また、より薄
い膜はより透明になる傾向にあり、このため、選択的透
過性層の下に位置する吸収材層に発生した色を中間膜を
通して見ることを可能にする。中間層を通して色の透過
は、弱い陽性結果と陰性結果との識別の困難とを増加さ
せる。
吸収材層は、過剰の試薬溶液の貯蔵部として役立つ。し
たがって、色の生成に必要な全ての反応体は吸収材層に
存在する。吸収材層中における着色の発生は望ましいも
のではないので、吸収材層に種々の試薬を添加して吸収
材層における背景色の生成を減少させることができる。
驚くべきことに、また思いがけないことに、この発明に
よって、酵素ベースの検出システムを用いた場合に、検
出のために選択された酵素に特異的な酵素阻害剤で飽和
させることにより吸収材層における着色の発生を最小に
止めることが可能であることが見出された。
アルカリホスファターゼは、多くの異なるリン酸エステ
ルを加水分解し、比較的広い特異性を有する酵素であ
る。この特異性は、構造上関連のある、異なる多数の基
質に対して作用することが可能であるというものである
が、割合が非常に異なる。これは、多種の検定様式にお
いて検出システムの一部として非常に頻繁に使用され
る。アルカリホスファターゼに対する多数の阻害剤が知
られている。Be++およびZn++は、アルカリホスファター
ゼを阻害する。アルカリホスファターゼによって触媒さ
れた反応の生成物である無機リン酸塩もまた、反応の重
要な阻害剤である。システイン、ヒスチジンおよびフェ
ニルアラニンを含む多くのアミノ酸は、アルカリホスフ
ァターゼの弱い阻害剤である。EDTA（エチレンジアミン
四酢酸）のようなキレート剤は阻害剤である。これは、
おそらく、キレート剤が必須のZn++イオンを酵素の構造
から除去してしまうためである（アルカリホスファター
ゼは亜鉛金属結合タンパクであって、その活性には構造
上の亜鉛を必要とするが、過剰の亜鉛イオンは上述のよ
うに酵素を阻害する）。インドソベンゾエート、インド
アセタミド、および1,3,4,5−テトラクロロ−３α−６
α−ジフェニルグリコウリルもまたアルカリホスファタ
ーゼを阻害する。
西洋ワサビペルオキシダーゼ（HRP）およびβ−ガラク
トシダーゼは、種々の検定様式において検出に通常使用
される別の酵素である。HRPは、アジド、フッ化物、ヒ
ドロキシルアミン、過酸化ヒドロメチル水素（hydromet
hylhydrogen peroxide）および還元剤によって阻害され
る。β−ガラクトシダーゼは、重金属、有機水銀化合
物、金属キレート剤、アルコールおよびナトリウムイオ
ンを含む高濃度アルカリイオンによって阻害される。
酵素の阻害について記述された複数の刊行物が存在する
にもかかわらず、酵素検出システムを用いる検定装置の
吸収材層における背景色発生の減少への酵素阻害剤の使
用を述べたものはない。下に記述するように、酵素検出
は検出の好ましい方法であり、背景色生成の減少は弱い
陽性結果と陰性結果との識別を容易にするので、驚くべ
きことに、また思いがけないことに、酵素の阻害は、吸
収材における背景色生成を正常化するための最高の道具
であった。
使用される検定装置、選択された検定用酵素、選択され
た酵素に対して特異的な選ばれた阻害剤、および阻害剤
の溶解度特性等の因子に依存して、下に記述される実施
例の多くの変形が可能であることは明らかにされなけれ
ばならない。これらの変形は、発明の範囲にある。
以下では、背景色生成を最小にするために、この発明の
装置の吸収材層をどのように処理したかを説明する。
吸収材層を200mM塩化亜鉛および0.3％のアルキルアリー
ルポリエーテルアルコールのような界面活性剤を含有す
るイソプロパノール溶液で飽和させた。例えば、トリト
ンＸ−100（Triton X−100）がアルキルアリールポリエ
ーテルアルコールである。表面活性剤は層を親水性に
し、過剰の亜鉛イオンは、この場合アルカリホスファタ
ーゼである検出用酵素を阻害することにより吸収層にお
ける色の発生を妨げる。吸収層を親水性にするために、
当業者に公知のいかなる界面活性剤をも使用することが
できる。アルキルアリールポリエーテルアルコールは、
単に、適切であろうと思われる多くの界面活性剤の１つ
である。
同様に、阻害剤を溶解する溶媒の選択は重大なものでは
ない。以下の２つの考察が適切な溶媒の選択に考慮され
る。
（１）その溶媒における阻害剤の溶解度限界の値、およ
び（２）この溶媒で飽和された後吸収材層がいかに素早
く乾燥するか、である。
吸収材層の表面上に亜鉛イオンを固定化する必要はなか
った。これは、吸収材の過剰の吸収能力が、吸収材層か
ら他の層へ亜鉛イオンまたは試薬が移動するのを妨げた
ためである。これにより、亜鉛イオンは吸収材層中に留
まってアルカリホスファターゼを阻害し、透過性層の表
面上の色発生を妨げなかった。検定装置の構造、選択さ
れた阻害剤および吸収材層の能力により、吸収材層に阻
害剤を固定化することが好ましい。
固体塩化亜鉛は、0.3％の界面活性剤アルキルアリール
ポリエーテルアルコールを含有するイソプロパノール、
メタノール、クロロホルム、または上述の基準を満たす
他の溶媒に直接溶解し得る。Mineral Research,Inc.（H
arrisburg,NC）から購入することが可能な50％塩化亜鉛
水溶液を、吸収剤層を飽和させるための溶液の調製に使
用することも可能である。
50％塩化亜鉛水溶液を使用した場合には、0.3％のアル
キルアリールポリエーテルアルコールを含有するイソプ
ロパノールのガロン当り前記溶液約206gを溶解してイソ
プロパノール溶液中に塩化亜鉛の最終濃度200mMを達成
するように計量した。別の試みは、洗剤を含有するイソ
プロパノールで吸収剤層を飽和し、この層を乾燥させ、
その後吸収剤層を塩化亜鉛溶液で飽和させることであ
る。
吸収剤層（複数）に適切な材料の選択は重大なものでは
ない。これらの材料には、セルロース、酢酸セルロー
ス、ポリエステル、多孔質ポリエチレンおよびポリエチ
レンテレフタレートのような他のポリオレフィンが含ま
れる。重要なことは、事実上選択的透過性層を移動する
色がないように、吸収剤層を、背景色の発生を最小にす
る適切な阻害剤溶液で飽和させることである。
選択的透過性層の必要不可欠な特徴は、透過性膜上にス
ポットされた捕獲試薬の直下に、選択的透過性層を通し
て伸びる１ないし約７個の孔を有しており、孔（複数）
のサイズは捕獲試薬によって覆われる領域よりも小さい
領域を覆う。この発明の好ましい態様は、選択的透過性
層に５個の孔を有している。第１図に示すように、１つ
の孔は中心にあり、残りの孔は中心孔の周りに対称的に
配置されている。検定の終りに陽性結果を定義する円形
捕獲試薬スポットの明確な輪郭を得ることが可能である
限りにおいて、別のタイプの配置も可能である。
孔の形状が重要でないのに対して、孔のサイズは重要で
ある。孔は、円形、楕円形、矩形等であり得るが、孔が
大きすぎる場合には流れの制御は失われる。捕獲抗体ス
ポットの直径をこえる単独の孔が使用される場合には、
感度が失われる。また、より大きな孔は、ドットの代わ
りに、最上層を通してより暗い円を見せる傾向にあり、
これは弱い陽性結果との混同を招く可能性がある。これ
らの孔は、約25μｍ×約1000μｍ（about 25 micromete
rs by about 1000 micrometers）のサイズであり得る。
この発明の好ましい態様は、上述したように配置された
５個の孔を有する選択的透過性層を使用する。好ましい
孔のサイズは、約100μｍ×約300μｍである。このサイ
ズの孔は、30ゲージ針を用いることにより得られる。こ
れらの寸法を有する５個の孔は、捕獲試薬スポットの下
の約0.4ないし10％の領域を占め、透過性層上面の領域
と比較した場合、これは透過性層の上面全域の約0.04％
ないし１％を構成するものと見積もられている。
前述の層を有する装置を第２図に示す。これは、キャッ
プ１、透過性層２、Ｏ−リング３、上述の孔９を有する
選択的透過性層４、タブ８を有するベース７に順に置か
れている本体６内に収納された吸収剤ブラグ５を有して
いる。装置が組み立てられたときには、Ｏ−リング３が
キャップ内に押し込まれているので、透過性層２、選択
的透過性層４、および吸収剤プラグ５は互いの直接下に
ある。タブ８を引き下げると、低真空が発生する。これ
は、試薬が装置を通して適切に流動することを保証す
る。続く流動は、毛管作用によって容易に起こる。
遠心、ろ過またはそれらの組み合わせのような、通常用
いられている実験室技法は、検定の前に、検体から特定
の物質を除去することが可能である。透過性膜のポアサ
イズよりも大きな寸法を有する特定の物質を含有する検
体に対しては、いくつかの試料処理工程が必要である。
そのようなサイズの特定の物質は透過性層の表面に捕獲
される。そこでは、背景汚染が起こる可能性があり、そ
れにより検定の実施を妨げる。
この発明を用いて検出および／または定量することがで
きる物質は、以下に説明される。ポリペプチドおよびタ
ンパク質、多糖類、核酸、およびそれらの組み合わせ、
細菌、ウイルス、染色体、遺伝子、ミトコンドリア、
核、細胞膜等。典型的なタンパク質は、核タンパク質、
糖タンパク質、硬タンパク質、プロテオグリカン、ムコ
タンパク質、ヒストン、アルブミン、インシュリン、ペ
プシン等である。さらに、グルカゴン、卵胞刺激ホルモ
ン、黄体形成ホルモン等のペプチドおよびタンパクホル
モンの他に、フィブリノーゲン、トロンビン等の血液凝
固因子に言及することもできる。ウイルスに関しては、
以下に言及することができる。アデノウイルス；単純ヘ
ルペス、帯状水痘、ヘルペスウイルスＢ、サイトメガロ
ウイルス、エプスタイン−バーウイルス、ヒトヘルペス
ウイルス６型のようなヘルペスウイルス；ポックスウイ
ルス；ピコルナウイルス；オルソミクソウイルス；パラ
ミクソウイルス；コロナウイルス；ラプドウイルス；ト
ガウイルス；ブンヤウイルス；アレナウイルス；風疹ウ
イルス；アルボウイルス；レオウイルス；肝炎；レトロ
ウイルス；腫瘍ウイルス等。
前に、捕獲試薬にポリクローナル抗体を使用することが
できると述べたが、この発明の好ましい態様は、上述の
ように、捕獲試薬にモノクローナル抗体を用いる。モノ
クローナル抗体はまた、検出用抗体に好ましく使用され
る。この発明のモノクローナル抗体を調製する方法は公
知であり、多種の刊行物に引用されている。それらのう
ち以下のものは参考として組み込まれている。Kohlerお
よびMilstein、Nature、256:495−497（1975）、Pereir
aら、Infection and Immunity、29巻、No.2、724−732
頁（1980年８月）、B.MishellおよびS.Schiigi編、Sele
cted methods in cellular immunology、W.H.Freeman C
o.、San Francisco（1980）におけるOiら、Immunoglobu
lin producing hybrid cell lines、351−371頁、およ
びGalfreら、Preparation of Monoclonal Antibodies:S
trategiesおよびProcedures、Methods in Enzymology 7
3、１−46頁（1981）。ここでこれらの技術をさらに説
明することはしない。検定において使用する特定の試薬
の感度により、最良の捕獲抗体はポリクローナルまたは
モノクローナルのいずれかである。
透過性膜への結合は、直接であろうと間接であろうと、
共有結合であろうと非共有結合であろうと、公知の技術
を使用して達成することができる。好ましい態様におい
て、捕獲試薬は共有結合的に透過性膜に結合し、洗浄に
より、または次の試薬を添加した際に試薬が失われるの
を避ける。
この発明によると、検出に使用されるモノクローナル抗
体は、通常の技術を用いて標識される。受容体システム
または特異的結合対の一要素を標識として使用すること
ができる。
特異的結合対は、免疫タイプのものでも非免疫タイプの
ものでもよい。免疫特異的結合対の例には、抗原−抗体
システムまたはハプテン／抗−ハプテンシステムであ
る。フルオレセイン／抗−フルオレセイン、ジニトロフ
ェニル／抗−ジニトロフェニル、ビオチン／抗−ビオチ
ン、ペプチド／抗−ペプチド等に言及することができ
る。特異的結合対の抗体要素は、当業者には普通の慣例
法によって調製することができる。そのような方法に
は、特異的結合対の抗原要素、または合成ペプチドのよ
うな合成もしくは遺伝的に処理し得る抗原の一部で動物
を免疫することが含まれる。特異的結合対の抗原要素に
免疫原性でない、すなわちハプテンである場合には、そ
れの担体タンパク質に共有結合させて免疫原性にするこ
とができる。
非免疫結合対には、２つの成分が互いに自然親和性を共
有し、かつ抗体ではない系が含まれる。典型的な非免疫
対は、ビオチン−ストレプトアビジン、内因性因子−ビ
タミンB12、葉酸−葉酸塩結合タンパク質等である。
標識モノクローナル抗体と特異的結合対の一要素とを共
有結合させるために種々の方法が利用される。方法は、
特異的結合対の要素の性質、所望の結合の型、および抗
体の様々な結合化学に対する耐性を基にして選択され
る。例えば、ビオチンは、市販の活性誘導体を利用する
ことによりモノクローナル抗体に共有結合させることが
できる。これらのいくつかは、タンパク質のアミノ基に
結合するビオチン−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド；カ
ルボジイミドによって含水炭素部分、アルデヒドおよび
カルボキシル基に結合するビオチンヒドラジド；および
スルフヒドリル基に結合するビオチンマレイミドおよび
ヨードアセチルビオチンである。
フルオロセインが使用される場合には、フルオレセイン
イソチオシアネートを用いてタンパク質アミン基に結合
させることができる。ジニトロフェニル基が使用される
場合には、2,4−ジニトロベンゼンスルホネートまたは
2,4−ジニトロフルオロベンゼンを用いてタンパク質ア
ミン基に結合させることができる。モノクローナル抗体
と特異的結合対とを結合させるために利用し得る他の標
準的な結合方法には、カルボジイミド結合、ホモ二官能
性架橋（homobifunctional crosslinking）、およびヘ
テロ二官能性架橋（heterobifunctional crosslinkin
g）が含まれる。カルボジイミド結合は、ある物質のカ
ルボキシル基を他の物質のアミン基に結合させる効果的
な方法である。カルボジイミド結合は、市販の試薬、１
−エチル−３−（３−ジメチル−アミノプロピル）−カ
ルボジイミド（EDAC）を使用することにより容易にな
る。
二官能価のイミドエステルを含むホモ二官能性架橋剤
は、市販品を利用することができ、ある物質のアミン基
と他の物質のアミン基との結合に使用される。ヘテロ二
官能性架橋剤は、２つの異なる官能基を有する試薬であ
る。最もありふれた市販のヘテロ二官能性架橋剤は、１
つの官能基としてアミン反応性Ｎ−ヒドロキシ−スクシ
ンイミドエステルを、第２の官能基としてスルフヒドリ
ル反応基を有している。最もありふれたスルフヒドリル
反応基は、マレイミド、ピリジルジスルフィドおよび反
応性ハロゲンである。官能基の１つは、照射により種々
の基と反応する光活性アリールニトレンであってもよ
い。この発明による好ましい方式は、Ｎ−ヒドロキシス
クシンイミドエステルによってモノクローナル抗体をビ
オチンと結合させることである。
シグナル検出を容易にするために、モノクローナル抗体
または特異的結合対の要素のいずれかをレポーティング
システムの成分で標識する。レポーティングシステムと
いう用語は、選択されたレポーターおよびこのレポータ
ーをモノクローナル抗体もしくは特異的結合対の成分と
架橋させる手段を指す。したがって、レポーターはモノ
クローナル抗体もしくは特異的結合対の要素と、直接も
しくは間接的に、共有結合的もしくは非共有結合的に結
合することができる。レポーターは、放射性同位体、酵
素、蛍光体、磁性体、化学発光物質または電気化学物質
であり得る。通常使用されている２つの放射性同位体
は、125Iおよび3Hである。標準的な放射性同位体標識手
順には、クロルアミンＴ、ラクトペルオキシダーゼおよ
び125Iに対するBolton−Hunter法ならびに3Hに対する還
元メチル化が含まれる。
酵素もまた、免疫検定のレポーターとして使用される。
これらには、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホ
スファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコースオキ
シダーゼ、ルシフェラーゼ、β−ラクタマーゼ、ウレア
ーゼおよびリゾチームが含まれる。酵素を用いた標識
は、前に特異的結合対でのモノクローナル抗体の標識の
ために述べたように、ジアルデヒド、カルボジイミド結
合、ホモ二官能性結合剤を用いることにより容易にな
る。選択された標識方法は、酵素に有効な官能基および
標識される物質、ならびに結合条件に対する両者の耐性
に依存する。この発明において用いられる標識方法は、
EngvallおよびPearlmann、Immunochemistry 8、871（19
71）、AvrameasおよびTernynck、Immunochemistry 8、1
175（1971）、Ishikawaら、J.Immunoassay 4（３）:209
−327（1983）およびJablonski、Anal.Biochem.148:199
（1985）によって記述されたものを含む、現在用いられ
ている通常の方法の１つであり得る。標識は、スペーサ
ーまたは特異的結合対の別の要素を用いるような間接法
によってなされてもよい。この例は、非標識ストレプト
アビジンおよびビオチニル化酵素、非標識ストレプトア
ビジンおよび連続的もしくは同時に添加されたビオチニ
ル化酵素を用いたビオチニル化抗体の検出である。酵素
活性の検出は、普通に知られた方法によって、色素産生
の、蛍光発生の、磁性の、化学発光のまたは電気化学的
な変化を測定することにより、容易にすることができ
る。
レポーターは現存する蛍光体、磁性体、または化学発光
物質であり得る。加えて、レポーターは電気化学的手段
によって検出することができる。これらのレポーターを
用いた標識の方法のいくつかは上述されている。好まし
い態様においては、レポーターとして酵素、アルカリホ
スファターゼが使用され、基質に５−ブロモ−４−クロ
ロインドキシルホスフェイト（以下、BCIP）および22′
−ジ−（ｐ−ニトロフェニル）−55′−ジフェニル−3
3′−（33′−ジメトキシ−４−４′−ジフェニレン）
−ジテトラゾリウムクロリド（以下、NBT）が使用され
る。
この発明において有用なモノクローナル抗体は、他の免
疫グロブリンクラスと同様にIgGタイプであり得る。
さらに、これらのモノクローナル抗体は、標的に依存す
る多数の抗原性決定基に対するものでもよい。説明とし
ては、ヌクレオカプシドタンパク、糖タンパクまたはウ
イルスエンベロープに関連する抗原性決定基に言及する
ことができる。
ウイルス検出に対する好ましい態様においては、この発
明はまた、採取および移送システム、特に、この発明の
免疫検定による試験のための試料を移送するシステムを
用いる。
採取システムにはウイルスを採取する適切な手段が利用
され、移送システムには緩衝界面活性剤溶液を有するチ
ューブが利用される。試料を採取した後、検体は緩衝界
面活性剤に浸漬される。直接浸漬すると試料中のウイル
スが溶解し、それにより抗原が試験を受け易くなり、か
つ移送の間安定になる。この溶液は、試料中のタンパク
質の互いの、もしくは接触する表面への非免疫性結合を
最小にするキャリアタンパクも含む。
以下の界面活性剤は、この発明の範囲内にあるものとし
て言及することができ、制限するものとして解釈される
ものではない。ポリオキシエチレンエーテルおよびアル
キルフェノキシポリエトキシ化合物のような非イオン性
界面活性剤；アルキル／アリールスルホネート／スルフ
ェートのようなイオン性界面活性剤；両性イオン界面活
性剤；オクチルグルコピラノシドおよびドデシルマルト
シドのような胆汁塩およびその誘導体。
典型的なキャリアタンパクには、血清、アルブミン、ゼ
ラチンおよびカゼインが含まれる。
検定システムに適合し得るいかなる緩衝剤も発明の実施
に使用することができる。
最も好ましい態様においては、緩衝剤はリン酸緩衝生理
食塩水、界面活性剤はNONIDET P−40（NP40）およびキ
ャリアタンパクはウシ血清アルブミンである。
以下の実施例は発明を説明するためのものであり、これ
らに制限されるものではない。
例 １ モノクローナル抗体の調製 55307として同定される捕獲モノクローナル抗体および5
5306として同定される検出用モノクローナル抗体を、In
fection and Immunity、Vol.29、No.2、724−732頁（19
80年８月）に記載されたL.Pereiraらの方法、およびB.M
ishell and S.Schiigi編、Selected Methods in Cellul
ar Immunology、W.H.Freeman Co.,San FranciscoのImmu
noglobulin Producing Hibrid Cell Lines、351−371頁
に記載されたOiらの方法に従って調製した。
55306および55307の両者は、HSV−１またはHSV−２のい
ずれかからの糖タンパクgDと反応する。エピトープの特
異性は、非標識抗体を固相抗原に対するビオチン標識抗
体と競合させることにより決定される。非標識抗体が標
識抗体の結合を阻害しない場合には、これらの抗体は異
なるエピトープに対するものであることが決定される。
抗体55306および55307は、HSV 1および２抗原gDの異な
るエピトープに対する特異性を有することが見出され
た。
モノクローナル抗体は、40％飽和硫酸アンモニウムを用
いた塩分画およびSephacryl S−300（Pharmacia,Inc.,P
iscataway.NJ）でのゲルろ過によって腹水から生成され
る。
抗体ビオチニル化 抗体55306溶液を0.1M NaHCO3緩衝液、pH8.4に対して透
析し、1ml当り1mgの濃度に調節した。ジメチルスルホキ
シド0.1mlに50倍モル過剰のビオチン−Ｎ−ヒドロキシ
スクシンイミドエステル（Sigma Chemical Co.（St.Lou
is,MO）およびCalbiochem（San Diego,CA）を含む様々
な源から市販品を購入）の溶液を添加して室温で２時間
反応させ、2Mトリス（ヒドロキシメチル）アミノ−メタ
ン（以下、トリス−HCl緩衝液という）、pH8.0、0.1ml
を添加した。15分後、リン酸緩衝生理食塩水（PBS）、p
H7.4、中の１％ウシ血清アルブミン（Sigma）1mlを添加
し、この溶液をPBSに対して透析した。ビチオン化抗体
は４℃で保存した。
検定試薬、材料および装置 検定材料 透過性膜として使用するために、上述の化学的に活性化
された膜（Cat.No.IASD00005）をMillipore Corparotio
n（Bedford,MA）ら購入した。
第２図に示す外形５を有する、塩化亜鉛処理吸収剤プラ
グは、Pore Technology Limited（Somerville,MA）によ
って以下のように製造された。多孔質ポリエチレンプラ
グを200mM塩化亜鉛および0.3％トリトンＸ−100を含有
するイソプロパノールで飽和した。50％塩化亜鉛水溶液
は、Mineral Research Inc.（Harrisburg,NC）から購入
した。この塩化亜鉛水溶液を、0.3％トリトンＸ−100を
含有するイソプロパノールのガロン当り206g溶解した。
プラグを、酵素−阻害剤含有溶液で飽和し、その後除去
して使用の前に乾燥させた。
10倍濃縮PBS（Cat.No.310−4200）をGIBCO（Grand Isla
nd,NY）から購入し、蒸留水で1/10に希釈した。
HIPURE液体ゼラチン（45％ w/v）をNorland Products,I
nc.（695 Joyce Kilmer Avenue,New Brunswick,NJ）か
ら得た。以下、これをゼラチンという。
ストレプトアビジンおよびアルカリホスファターゼをSc
ripps Labortories（San Diego,CA）から購入し、ここ
に参考として組み込まれているE.Engvall and P.Perlma
nn,Immunochemistry 8,871（1971）に記述された一工程
グルタルアルデヒド法を用いて結合させた。
酵素検定の基質は、トリス−HCl緩衝液中のBCIP/NBTで
あった。これらの試薬は、Kirkegaard and Perry、Gait
hersburg,MDのような企業から購入した。
捕獲および検出用モノクローナル抗体を上述のように調
製して精製し、検出用抗体を上述のようにビオチニル化
した。
標準抗原調製品はUT 0329841 HVS−１であった。陰性抗
原はUT 041185であった。両者はViral Antigens,Inc.
（Memphis,Tennessee）から購入した。
標準抗原調製品および陰性標準は、下記のように、試料
希釈液中に希釈した。
検定溶液 PBSを10倍希釈液として購入し、上述のように、蒸留水
で1/10に希釈した。
標準抗原希釈液は、0.05％ウシ血清アルブミン（BS
A）、0.7％Nonidet P−40、および0.1％アジドを含有す
るPBS、pH7.4であった。この溶液をポアサイズ0.22μｍ
の膜を通してろ過した。
検出用抗体希釈液は、４％加熱正常ウサギ血清（GIBC
O）、0.85％NaClおよび0.1％アジドを含有する0.2Mヘペ
ス緩衝液、pH7.5であった。この溶液は、使用前に50℃
で一晩加熱し、ポアサイズ0.22μｍのフィルタを通して
ろ過した。
結合体希釈液は、１％ BSA、0.05％トゥイーン20、およ
び0.1％アジドを含有するPBS、pH7.4であった。この溶
液は0.22μ膜を通してろ過した。
基質緩衝液は、Kirkegaard and Perryから購入した。こ
の溶液は0.22μ膜を通してろ過した。
洗浄緩衝液は、0.05％トゥイーン20を添加した基質緩衝
液であった。
停止溶液は1.0N HClであった。
上述の55306として同定されるビオチニル化検出用抗体
を、上述の検出用抗体希釈液中に1/40に希釈した。標準
抗原調製品および陰性抗原調製品を上述の標準抗原希釈
液で希釈した。ストレプトビオチン−アルカリホスファ
ターゼ結合体を結合体希釈液中に1/500に希釈し、基質
を、基質緩衝液にBCIP 1mlおよびNBT 1mlを添加するこ
とにより、使用直前に調製した。
装置の作成 透過性膜を、上述の55307として同定される捕獲モノク
ローナル抗体２μでスポットした。この捕獲試薬は、
スポッティングの前に、2mg/mlの濃度に希釈された。
膜を約５ないし30分間乾燥させた後、加湿チャンバ内に
おいて約37℃で、PBS中の５％ゼラチンを用いて一晩ブ
ロックした。ブローキング溶液は膜を通して注意深く吸
引し、膜は使用前に乾燥させた。
約３−4mmの径を有する捕獲抗体スポットの下の領域に
おける、約100×約300μｍの５個の孔は、繊維状多孔質
ポリテトラフルオロエチレン膜に形成された。最良の結
果は、30ゲージの針を用いて捕獲抗体スポットの下の領
域に５個の孔を形成することにより得られた。４個の孔
が、中央の第５の孔の周りに対称的に配置された対称配
置が最適に作用した。
装置は、上述の通りに組み立てられた。
検定手順 ポリエチレンチューブ中で、抗原0.2mlを、検出用抗体
希釈液に希釈した検出用抗体0.2mlと混合し、室温で１
−10分間インキュベートして抗原をビオチニル化検出用
抗体と反応させた。標準抗原以外の試料を検定する場合
には、上述のように、次に特定の物質の除去が必要とな
ることもあることに注意しなければならない。
インキュベーション後、混合物を検定装置に入れた。タ
ブを押し下げて、孔を通した良好な試薬の流動が始まる
ことを確実にした。約５分以内に、試料液体は装置に吸
収された。さらに５分間（試料添加から10分間）室温で
インキュベーションを続け、抗原−ビオチニル化抗体を
捕獲試薬と結合させた。次に、室温で10分間インキュベ
ートした結合体0.2mlを添加して、ストレプトアビジン
−アルカリホスファターゼ結合体をビオチニル化ビオチ
ニル化検出用抗体と結合させた。その後、洗浄緩衝液0.
4mlを添加した。洗浄緩衝液が十分に吸収されたとき
に、基質0.2mlを装置に添加し、室温でイキュベートし
て色を発現させた。10分後、停止溶液0.2mlを添加し
た。
膜は、結果を記録するために保存する前に、取り外し、
水で洗浄し、かつ乾燥させることができる。乾燥膜は、
光から保護されたならば、数か月間安定である。

Claims (9)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】被検物質の含有が疑われるサンプル中にお
    いて、該被検物質の存在もしくは不存在を検出し、また
    は定量するために、 （ａ）該被検物質の捕獲試薬が付着された透過性膜と、 （ｂ）中間層と、 （ｃ）吸収材層 とを具備し、且つ層（ｂ）が層（ａ）および（ｃ）と直
    接連通した構造を有する膜ベースの検定装置において、 該層（ｂ）が実質的に不透水性の膜であり、該膜はこれ
    を貫通する少なくとも一つの孔を有することと、 該孔は該捕獲試薬の直下にあることと、 該孔の全面積は、該捕獲試薬によってカバーされた面積
    よりも小さいこととを特徴とする改良された検定装置。
  2. 【請求項２】前記層（ｂ）が約１〜約７の孔を有する請
    求の範囲第１項に記載の検定装置。
  3. 【請求項３】前記孔が、約25μｍ×約1000μｍである請
    求の範囲第２項に記載の検定装置。
  4. 【請求項４】前記孔が、前記捕獲試薬下の面積の約0.4
    ％〜約10％を占める請求の範囲第２項に記載の検定装
    置。
  5. 【請求項５】前記層（ａ）が微孔質膜、予め化学的に活
    性化された表面を有する膜、および化学的に活性化され
    た親水性微孔質膜からなる群から選択される請求の範囲
    第１項に記載の検定装置。
  6. 【請求項６】前記層（ｂ）が、繊維性−多孔質ポリテト
    ラフルオロエチレン膜である請求の範囲第１項に記載の
    検定装置。
  7. 【請求項７】バックグラウンド発色を低減するために、
    前記吸収材層が酵素阻害剤を含有する溶液で飽和され
    る、請求の範囲第１項に記載の検定装置。
  8. 【請求項８】（ａ）被検物質の捕獲試薬が付着された透
    過性膜と、 （ｂ）中間層と、 （ｃ）吸収材層 とを具備し、且つ層（ｂ）が層（ａ）および（ｃ）と直
    接連通した構造を有する膜ベースの検定装置を用い、検
    定に使用されるサンプル、検出試薬および他の試薬が該
    層（ａ）に添加され、該層（ａ）上の捕獲試薬に結合し
    た物質を検出して行われる、被検物質の含有が疑われる
    サンプル中の該被検物質の存在もしくは不存在を検出し
    または定量するための膜ベースの免疫検定方法におい
    て、 該層（ｂ）が実質的に不透水性の膜であり、該膜はこれ
    を貫通する少なくとも一つの孔を有することと、 該孔は該捕獲試薬の直下にあることと、 該孔の全面積は、該捕獲試薬によってカバーされた面積
    よりも小さいこととを特徴とする免疫検定方法。
  9. 【請求項９】検出または定量されるべき物質がポリペプ
    チド、タンパク、多糖類、核酸、血液凝固因子、ホルモ
    ン、バクテリア及びウイルスからなる群から選択される
    請求の範囲第８項に記載の免疫検定方法。
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Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010021372A1 (ja) 2008-08-22 2010-02-25 デンカ生研株式会社 対照表示部を備えたメンブレンアッセイによる試験装置
WO2013005269A1 (ja) * 2011-07-05 2013-01-10 パナソニック株式会社 アルブミンを自己組織化膜上に固定する方法
WO2013008280A1 (ja) * 2011-07-08 2013-01-17 パナソニック株式会社 タンパク質を自己組織化膜上に固定する方法
US8785143B2 (en) 2010-08-30 2014-07-22 Panasonic Healthcare Co., Ltd. Method for immobilizing streptavidin on a self-assembled monolayer
US8871457B2 (en) 2010-10-19 2014-10-28 Panasonic Healthcare Co., Ltd Method for immobilizing glucose oxidase on a self-assembled monolayer
US8980645B2 (en) 2010-01-25 2015-03-17 Panasonic Healthcare Holdings Co., Ltd. Method for immobilizing protein A on a self-assembled monolayer

Families Citing this family (63)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6407209B1 (en) 1986-04-15 2002-06-18 Novartis Ag Interferon-induced human protein in pure form, monoclonal antibodies thereto and test kits containing these antibodies
US5466585A (en) * 1986-04-15 1995-11-14 Ciba-Geigy Corporation Interferon-induced human protein in pure form, monoclonal antibodies thereto, and test kits containing these antibodies
US5137804A (en) * 1988-05-10 1992-08-11 E. I. Du Pont De Nemours And Company Assay device and immunoassay
US5374524A (en) * 1988-05-10 1994-12-20 E. I. Du Pont De Nemours And Company Solution sandwich hybridization, capture and detection of amplified nucleic acids
CA2023850A1 (en) * 1989-09-28 1991-03-29 Randal A. Hoke Stabilizing reagent for membrane immunoassay
KR910014706A (ko) * 1990-01-10 1991-08-31 원본미기재 세척이 필요없는 개량된 이뮤노어세이(immunoassay)장치
US5998220A (en) 1991-05-29 1999-12-07 Beckman Coulter, Inc. Opposable-element assay devices, kits, and methods employing them
US6168956B1 (en) 1991-05-29 2001-01-02 Beckman Coulter, Inc. Multiple component chromatographic assay device
US5468648A (en) 1991-05-29 1995-11-21 Smithkline Diagnostics, Inc. Interrupted-flow assay device
US5869345A (en) 1991-05-29 1999-02-09 Smithkline Diagnostics, Inc. Opposable-element assay device employing conductive barrier
US5607863A (en) 1991-05-29 1997-03-04 Smithkline Diagnostics, Inc. Barrier-controlled assay device
US5877028A (en) 1991-05-29 1999-03-02 Smithkline Diagnostics, Inc. Immunochromatographic assay device
US6962795B1 (en) * 1992-05-11 2005-11-08 Dendreon Corporation Neutrophil inhibitors
JPH07509059A (ja) * 1992-07-02 1995-10-05 クイデル　コーポレイション 色素複合体化された酵素接合体を用いてのイムノアッセイ
US5518882A (en) * 1993-12-21 1996-05-21 Biotex Laboratories, Inc. Immunological methods of component selection and recovery
US5811524A (en) * 1995-06-07 1998-09-22 Idec Pharmaceuticals Corporation Neutralizing high affinity human monoclonal antibodies specific to RSV F-protein and methods for their manufacture and therapeutic use thereof
US5879951A (en) 1997-01-29 1999-03-09 Smithkline Diagnostics, Inc. Opposable-element assay device employing unidirectional flow
US5939252A (en) 1997-05-09 1999-08-17 Lennon; Donald J. Detachable-element assay device
US6284194B1 (en) 1998-03-11 2001-09-04 Albert E. Chu Analytical assay device and methods using surfactant treated membranes to increase assay sensitivity
US6255050B1 (en) 1998-05-22 2001-07-03 Lorne Park Research, Inc. Dynamic hybridization system
US6780617B2 (en) 2000-12-29 2004-08-24 Chen & Chen, Llc Sample processing device and method
US7799521B2 (en) * 1998-06-24 2010-09-21 Chen & Chen, Llc Thermal cycling
RU2001126123A (ru) * 1999-02-26 2004-02-20 Фертилити Акустикс Инк. (Us) Полоска для проведения анализов, имеющая жидкостную ячейку, и способ проведения анализов образца
CA2398466A1 (en) * 2000-01-27 2001-08-02 Medimmune, Inc. Ultra high affinity neutralizing antibodies
EP2341074A1 (en) * 2000-03-01 2011-07-06 MedImmune, LLC Antibodies binding to the f protein of a respiratory syncytial virus (rsv)
CA2399202A1 (en) * 2000-03-09 2001-09-13 Heska Corporation Use of recombinant antigens to determine the immune status of an animal
US6676904B1 (en) * 2000-07-12 2004-01-13 Us Gov Sec Navy Nanoporous membrane immunosensor
US6855493B2 (en) 2000-11-28 2005-02-15 Medimmune, Inc. Methods of administering/dosing anti-RSV antibodies for prophylaxis and treatment
US7179900B2 (en) * 2000-11-28 2007-02-20 Medimmune, Inc. Methods of administering/dosing anti-RSV antibodies for prophylaxis and treatment
SE0102921D0 (sv) * 2001-08-30 2001-08-30 Astrazeneca Ab Pharmaceutically useful compounds
US6689272B2 (en) 2001-04-17 2004-02-10 Nova Biomedical Corporation Acetate detecting sensor
EP1414571B1 (en) 2001-05-31 2010-03-31 Pall Corporation Well for processing and filtering a fluid
JP4264348B2 (ja) * 2001-08-20 2009-05-13 プロテオム システムズ リミテッド 診断検査方法および装置
CA2460192C (en) 2001-09-11 2011-04-19 Iquum, Inc. Sample vessels
DE60219207T2 (de) * 2001-12-12 2008-01-24 Proteome Systems Intellectual Property Pty. Ltd., North Ryde Diagnostisches testverfahren
US7132100B2 (en) 2002-06-14 2006-11-07 Medimmune, Inc. Stabilized liquid anti-RSV antibody formulations
AU2004220626B2 (en) 2003-02-05 2010-07-29 Iquum Inc. Sample processing tubule
US20040259182A1 (en) * 2003-06-17 2004-12-23 Brooks Edwards Arrays for chemiluminescent assays, methods of making the arrays and methods of detecting chemiluminescent emissions on solid supports
US20050026151A1 (en) * 2003-07-17 2005-02-03 Voyta John C. Simultaneous generation of multiple chemiluminescent signals on solid supports
US20050019778A1 (en) * 2003-07-17 2005-01-27 Voyta John C. Sequential generation of multiple chemiluminescent signals on solid supports
JP3600231B1 (ja) 2003-09-30 2004-12-15 森永製菓株式会社 イムノアッセイ
AU2005297830A1 (en) * 2004-10-29 2006-05-04 Itoham Foods Inc. Reaction vessel
JP2008518936A (ja) * 2004-10-29 2008-06-05 メディミューン，インコーポレーテッド Ｒｓｖ感染症および関連状態を予防および治療する方法
EP1815250A4 (en) * 2004-11-01 2008-06-25 Internat Bio Therapeutic Res I DISPOSABLE IMMUNODIAGNOSTIC TESTING SYSTEM
US8475735B2 (en) 2004-11-01 2013-07-02 Uma Mahesh Babu Disposable immunodiagnostic test system
US7387890B2 (en) 2004-12-16 2008-06-17 Chembio Diagnostic Systems, Inc. Immunoassay devices and use thereof
US7189522B2 (en) 2005-03-11 2007-03-13 Chembio Diagnostic Systems, Inc. Dual path immunoassay device
WO2006098804A2 (en) * 2005-03-11 2006-09-21 Chembio Diagnostic Systems, Inc. Dual path immunoassay device
US7785865B2 (en) * 2005-06-28 2010-08-31 Zbx Corporation Membrane array and analytical device
EP1997830A1 (en) 2007-06-01 2008-12-03 AIMM Therapeutics B.V. RSV specific binding molecules and means for producing them
US20110117673A1 (en) * 2008-07-16 2011-05-19 Johnson Brandon T Methods and systems to collect and prepare samples, to implement, initiate and perform assays, and to control and manage fluid flow
US8021873B2 (en) 2008-07-16 2011-09-20 Boston Microfluidics Portable, point-of-care, user-initiated fluidic assay methods and systems
US20100022916A1 (en) 2008-07-24 2010-01-28 Javanbakhsh Esfandiari Method and Apparatus for Collecting and Preparing Biological Samples for Testing
US8568726B2 (en) 2009-10-06 2013-10-29 Medimmune Limited RSV specific binding molecule
US8956859B1 (en) 2010-08-13 2015-02-17 Aviex Technologies Llc Compositions and methods for determining successful immunization by one or more vaccines
US8603835B2 (en) 2011-02-10 2013-12-10 Chembio Diagnostic Systems, Inc. Reduced step dual path immunoassay device and method
CN104583226B (zh) * 2012-07-25 2018-05-04 生物辐射实验室股份有限公司 通过图案化转移片材的试剂靶向递送
MX2020009616A (es) 2014-04-02 2022-01-19 Chembio Diagnostic Systems Inc Inmunoensayo que utiliza un conjugado de captura.
US20160116466A1 (en) 2014-10-27 2016-04-28 Chembio Diagnostic Systems, Inc. Rapid Screening Assay for Qualitative Detection of Multiple Febrile Illnesses
IL244922A0 (en) 2016-04-05 2016-07-31 Omrix Biopharmaceuticals Ltd Device and method for sample preparation
JPWO2017213129A1 (ja) * 2016-06-06 2019-04-04 株式会社ニコン 流体デバイス
CN113834929A (zh) * 2021-09-27 2021-12-24 山东康华生物医疗科技股份有限公司 一种用于过敏原检测的检测膜条、检测卡以及检测试剂盒
CN115060779B (zh) * 2022-06-27 2023-03-24 上海德琪医药科技有限公司 血液抗肿瘤药物代谢产物浓度检测装置及其监测方法

Family Cites Families (58)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US31006A (en) * 1861-01-01 Feeding mechanism for spoke-machines
NL289920A (ja) * 1951-01-28
US2785057A (en) * 1953-12-08 1957-03-12 Union Central Life Insurance C Device for testing liquids
US3011874A (en) * 1959-03-13 1961-12-05 Marshall E Deutsch Indicator strip and method of testing
NL286850A (ja) * 1961-12-18 1900-01-01
US3249513A (en) * 1963-09-19 1966-05-03 Warner Lambert Pharmaceutical Purification of urease
US3341427A (en) * 1965-01-22 1967-09-12 Warner Lambert Pharmaceutical Diagnostic preparation and process for the detection of acetylmethylcarbinol
US3482943A (en) * 1966-02-14 1969-12-09 Miles Lab Reagent deposition device
US3420205A (en) * 1966-03-23 1969-01-07 Miles Lab Indicating device
US3511608A (en) * 1967-12-14 1970-05-12 Harold P Anderson Multiple layer paper test strip
USRE31006E (en) * 1968-09-24 1982-08-03 Akzona Incorporated Process for the demonstration and determination of reaction components having specific binding affinity for each other
BE754658A (fr) * 1969-08-12 1971-02-10 Merck Patent Gmbh Lamelle indicatrice, se composant d'une matiere capillaire impregnee, absorbante et gainee de feuilles
GB1420916A (en) * 1971-09-08 1976-01-14 Bagshawe K D Performance of chemical or biological reactions
US3663374A (en) * 1970-08-14 1972-05-16 Geomet Method and apparatus for quantitating enzyme activity
NL154599B (nl) * 1970-12-28 1977-09-15 Organon Nv Werkwijze voor het aantonen en bepalen van specifiek bindende eiwitten en hun corresponderende bindbare stoffen, alsmede testverpakking.
US3783105A (en) * 1971-01-27 1974-01-01 Geomet Apparatus for assaying enzyme activity
US3791933A (en) * 1971-02-25 1974-02-12 Geomet Rapid methods for assay of enzyme substrates and metabolites
DE2118455B1 (de) * 1971-04-16 1972-09-21 Boehringer Mannheim Gmbh Teststreifen
IL39323A (en) * 1971-05-14 1975-08-31 Syva Co Highly sensitive assay method employing an enzyme for amplification
US3723064A (en) * 1971-07-26 1973-03-27 L Liotta Method and device for determining the concentration of a material in a liquid
IT1006557B (it) * 1971-09-08 1976-10-20 Bagshawe Kenneth Dawson Cella di reazione particolarmente utile in prove di radioimmunita
US3896217A (en) * 1973-03-19 1975-07-22 Summa Corp Method and apparatus for radioimmunoassay with regeneration of immunoadsorbent
US4092115A (en) * 1974-04-11 1978-05-30 Miles Laboratories, Inc. Method, device and test reagent for detecting free available chlorine in aqueous fluids
US3901657A (en) * 1974-04-29 1975-08-26 Sun Scient Inc Device for testing solutions and body fluids
US4201763A (en) * 1975-10-09 1980-05-06 Bio-Rad Laboratories, Inc. Solid phase immunofluorescent assay method
US4087248A (en) * 1976-07-26 1978-05-02 Miles Laughton E Multiple assay machine and method
US4098876A (en) * 1976-10-26 1978-07-04 Corning Glass Works Reverse sandwich immunoassay
US4200690A (en) * 1976-12-16 1980-04-29 Millipore Corporation Immunoassay with membrane immobilized antibody
US4407943A (en) * 1976-12-16 1983-10-04 Millipore Corporation Immobilized antibody or antigen for immunoassay
IL51354A (en) * 1977-01-28 1979-07-25 Ames Yissum Ltd Assay method for the quantitative determination of a hapten in aqueous solution
IT1105734B (it) * 1977-07-14 1985-11-04 Syva Co Prova di legame di competizione di antienzima omogeneo
SE431257B (sv) * 1977-11-03 1984-01-23 Du Pont Sett och anordning for immunanalys med magnetisk metall eller metalloxid som merksubstans
US4233402A (en) * 1978-04-05 1980-11-11 Syva Company Reagents and method employing channeling
US4244940A (en) * 1978-09-05 1981-01-13 Bio-Rad Laboratories, Inc. Single-incubation two-site immunoassay
US4277560A (en) * 1978-10-24 1981-07-07 Technicon Instruments Corporation Enzyme immunoassays using immobilized reagents in a flowing stream
US4246339A (en) * 1978-11-01 1981-01-20 Millipore Corporation Test device
US4258001A (en) * 1978-12-27 1981-03-24 Eastman Kodak Company Element, structure and method for the analysis or transport of liquids
US4361537A (en) * 1979-01-12 1982-11-30 Thyroid Diagnostics, Inc. Test device and method for its use
US4235601A (en) * 1979-01-12 1980-11-25 Thyroid Diagnostics, Inc. Test device and method for its use
US4391904A (en) * 1979-12-26 1983-07-05 Syva Company Test strip kits in immunoassays and compositions therein
US4366241A (en) * 1980-08-07 1982-12-28 Syva Company Concentrating zone method in heterogeneous immunoassays
JPS5818167A (ja) * 1981-07-24 1983-02-02 Fuji Photo Film Co Ltd 分析フイルム及びこれを用いる分析方法
US4652533A (en) * 1983-04-28 1987-03-24 Pandex Laboratories, Inc. Method of solid phase immunoassay incorporating a luminescent label
US4581331A (en) * 1983-09-29 1986-04-08 E. I. Du Pont De Nemours And Company Method for the rapid detection of virus and viral antigens
US4549655A (en) * 1983-12-05 1985-10-29 E. I. Du Pont De Nemours And Company Container for a layered chemical analysis system
US4849505A (en) * 1984-01-30 1989-07-18 Enzo Biochem, Inc. Detectable molecules, method of preparation and use
US4632901A (en) * 1984-05-11 1986-12-30 Hybritech Incorporated Method and apparatus for immunoassays
CA1272127A (en) * 1985-04-04 1990-07-31 Hybritech Incorporated Solid phase system for use in ligand-receptor assays
US4693834A (en) * 1986-05-05 1987-09-15 Murex Corporation Transverse flow diagnostic kit
US4632461A (en) * 1985-09-13 1986-12-30 Randolph Ralph A Dump cart
US4748115A (en) * 1986-01-08 1988-05-31 Abbott Laboratories Substrate formulation in 2-amino-2-methyl-1-propanol buffer for alkaline phosphatase assays
US4788140A (en) * 1986-02-18 1988-11-29 Eastman Kodak Company Analytical element containing photosensitive compound and filter layer and method of use
JPS62267667A (ja) * 1986-05-15 1987-11-20 Konika Corp 免疫学的分析素子
US4828980A (en) * 1987-09-18 1989-05-09 Eastman Kodak Company Membrane structure coated with low pI protein or carbohydrate and methods of making and use
US4912034A (en) * 1987-09-21 1990-03-27 Biogenex Laboratories Immunoassay test device and method
US5006464A (en) * 1987-10-01 1991-04-09 E-Y Laboratories, Inc. Directed flow diagnostic device and method
US4818677A (en) * 1987-12-03 1989-04-04 Monoclonal Antibodies, Inc. Membrane assay using focused sample application
US5137804A (en) * 1988-05-10 1992-08-11 E. I. Du Pont De Nemours And Company Assay device and immunoassay

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010021372A1 (ja) 2008-08-22 2010-02-25 デンカ生研株式会社 対照表示部を備えたメンブレンアッセイによる試験装置
US8980645B2 (en) 2010-01-25 2015-03-17 Panasonic Healthcare Holdings Co., Ltd. Method for immobilizing protein A on a self-assembled monolayer
US8785143B2 (en) 2010-08-30 2014-07-22 Panasonic Healthcare Co., Ltd. Method for immobilizing streptavidin on a self-assembled monolayer
US8871457B2 (en) 2010-10-19 2014-10-28 Panasonic Healthcare Co., Ltd Method for immobilizing glucose oxidase on a self-assembled monolayer
WO2013005269A1 (ja) * 2011-07-05 2013-01-10 パナソニック株式会社 アルブミンを自己組織化膜上に固定する方法
JP5202762B2 (ja) * 2011-07-05 2013-06-05 パナソニック株式会社 アルブミンを自己組織化膜上に固定する方法
WO2013008280A1 (ja) * 2011-07-08 2013-01-17 パナソニック株式会社 タンパク質を自己組織化膜上に固定する方法

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