JPH0698016B2 - マリトオリゴ糖―配糖体化合物の製造方法 - Google Patents
マリトオリゴ糖―配糖体化合物の製造方法Info
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- JPH0698016B2 JPH0698016B2 JP2747187A JP2747187A JPH0698016B2 JP H0698016 B2 JPH0698016 B2 JP H0698016B2 JP 2747187 A JP2747187 A JP 2747187A JP 2747187 A JP2747187 A JP 2747187A JP H0698016 B2 JPH0698016 B2 JP H0698016B2
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Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、マルトオリゴ糖−配糖体化合物（以下、本明
細書中ではマルトオリゴ糖誘導体という。）の新規な製
造方法に関する。更に詳しくは、高収率で高純度のマル
トオリゴ糖誘導体の製造方法に関する。
細書中ではマルトオリゴ糖誘導体という。）の新規な製
造方法に関する。更に詳しくは、高収率で高純度のマル
トオリゴ糖誘導体の製造方法に関する。
〔従来の技術〕 従来、α、β−核置換フェニルマルトオリゴ糖等のマル
トオリゴ糖誘導体の製造方法としては、化学的合成法及
び酵素法が知られている。
トオリゴ糖誘導体の製造方法としては、化学的合成法及
び酵素法が知られている。
化学的合成法は、以下のようにして行われる〔特開昭54
−25893号〕。マルトペンタオース、マルトヘキサオー
ス等のマルトオリゴ糖を、アセチル化して水酸基を保護
した後、アセチル化マルトオリゴ糖の末端をハロゲン化
する。次いで得られたハロゲン化アセチルマルトオリゴ
糖にα、β−核置換フェノールをピリジン等の溶媒の存
在下に作用させるとα、β−核置換フェニルマルトオリ
ゴシドのアセチル化物が得られる。得られたアセチル化
物を脱アセチル化して目的とするα、β−核置換フェニ
ルマルトオリゴシドを得る。
−25893号〕。マルトペンタオース、マルトヘキサオー
ス等のマルトオリゴ糖を、アセチル化して水酸基を保護
した後、アセチル化マルトオリゴ糖の末端をハロゲン化
する。次いで得られたハロゲン化アセチルマルトオリゴ
糖にα、β−核置換フェノールをピリジン等の溶媒の存
在下に作用させるとα、β−核置換フェニルマルトオリ
ゴシドのアセチル化物が得られる。得られたアセチル化
物を脱アセチル化して目的とするα、β−核置換フェニ
ルマルトオリゴシドを得る。
酵素法は、以下のように行われる〔Carbohydrate Resea
rch 61（1978）,359〜368〕。α−シクロキストリンと
α、β−核置換フェニルグルコキシドにサイクロデキス
トリングリコシルトランスフェラーゼ等の転移酵素を作
用させると、α、β−核置換フェニルマルトオリゴシド
の混合物が生成する。次いで得られた混合物をカラムク
ロマトグラフィーにより分画して、目的とするα、β−
核置換フェニルマルトオリゴシド、例えば４−ニトロフ
ェニル−α−Ｄ−マルトヘプタオシドを得る。
rch 61（1978）,359〜368〕。α−シクロキストリンと
α、β−核置換フェニルグルコキシドにサイクロデキス
トリングリコシルトランスフェラーゼ等の転移酵素を作
用させると、α、β−核置換フェニルマルトオリゴシド
の混合物が生成する。次いで得られた混合物をカラムク
ロマトグラフィーにより分画して、目的とするα、β−
核置換フェニルマルトオリゴシド、例えば４−ニトロフ
ェニル−α−Ｄ−マルトヘプタオシドを得る。
しかるにこれらの方法のうち化学的合成法は、工程が多
く煩雑で、収率も低く又α、β体を自由に調製し得ない
という欠点がある。
く煩雑で、収率も低く又α、β体を自由に調製し得ない
という欠点がある。
又、酵素法は、反応工程は簡便であるが、重合度の接近
する同族体を多く生成する。そのため、グルコースの重
合度の異なったものの混合物となり、高純度品を得るた
めにはクロマトグラフィーによる分画が必要であった。
また収率も低いという欠点もあった。
する同族体を多く生成する。そのため、グルコースの重
合度の異なったものの混合物となり、高純度品を得るた
めにはクロマトグラフィーによる分画が必要であった。
また収率も低いという欠点もあった。
ところでマルトオリゴ糖誘導体は、従来、ヒト体液中の
α−アミラーゼ活性測定用基質、各種生理活性物質、天
然低カロリー甘味料、色素等として利用されている。例
えば、ヒト体液中のα−アミラーゼ活性測定用基質とし
てマルトオリゴ糖誘導体を用いると、測定が簡便で、か
つ自動分析計による分析に対する適応性が良いという利
点を有している。ところが、該測定用基質としては、高
純度のマルトオリゴ糖誘導体が必要とされる。しかるに
前記従来法では、高純度のマルトオリゴ糖誘導体の調製
は容易ではなかった。
α−アミラーゼ活性測定用基質、各種生理活性物質、天
然低カロリー甘味料、色素等として利用されている。例
えば、ヒト体液中のα−アミラーゼ活性測定用基質とし
てマルトオリゴ糖誘導体を用いると、測定が簡便で、か
つ自動分析計による分析に対する適応性が良いという利
点を有している。ところが、該測定用基質としては、高
純度のマルトオリゴ糖誘導体が必要とされる。しかるに
前記従来法では、高純度のマルトオリゴ糖誘導体の調製
は容易ではなかった。
そこで本発明は、高純度のマルトオリゴ糖誘導体を高収
率で製造できるマルトオリゴ糖誘導体の製造方法を提供
することを目的とする。
率で製造できるマルトオリゴ糖誘導体の製造方法を提供
することを目的とする。
本発明は、親水性有機溶媒と水との混合溶媒中で、マル
トオリゴ糖、又はアミラーゼの作用によってマルトオリ
ゴ糖に変換される物質と糖部非還元末端がグルコースで
ある配糖体化合物（以下、本明細書中ではｏ−グルコシ
ル誘導体という。）との混合物に、アミラーゼを作用さ
せることを特徴とするマルトオリゴ糖−配糖体化合物
（マルトオリゴ糖誘導体）の製造方法に関する。
トオリゴ糖、又はアミラーゼの作用によってマルトオリ
ゴ糖に変換される物質と糖部非還元末端がグルコースで
ある配糖体化合物（以下、本明細書中ではｏ−グルコシ
ル誘導体という。）との混合物に、アミラーゼを作用さ
せることを特徴とするマルトオリゴ糖−配糖体化合物
（マルトオリゴ糖誘導体）の製造方法に関する。
以下本発明について説明する。
本発明において用いられる「マルトオリゴ糖」とは、グ
ルコースの重合度２〜７のマルトオリゴ糖である。マル
トオリゴ糖の例として、マルトース、マルトトリオー
ス、マルトテトラオース、マルトペンタオース、マルト
ヘキサオース、マルトヘプタオース等を挙げることがで
きる。これらのマルトオリゴ糖は単独又は混合物であっ
てもよく、マルトオリゴ糖源としてマルトオリゴ糖を主
成分とする澱粉分解物を用いることもできる。又、本発
明においては、マルトオリゴ糖の他にアミラーゼの作用
によってマルトオリゴ糖に変換される物質を用いること
ができる。アミラーゼの作用によってマルトオリゴ糖に
変換される物質としては、例えばアミラーゼによって重
合度２〜７のマルトオリゴ糖を主成分として生成し得る
澱粉分解物を挙げることができる。
ルコースの重合度２〜７のマルトオリゴ糖である。マル
トオリゴ糖の例として、マルトース、マルトトリオー
ス、マルトテトラオース、マルトペンタオース、マルト
ヘキサオース、マルトヘプタオース等を挙げることがで
きる。これらのマルトオリゴ糖は単独又は混合物であっ
てもよく、マルトオリゴ糖源としてマルトオリゴ糖を主
成分とする澱粉分解物を用いることもできる。又、本発
明においては、マルトオリゴ糖の他にアミラーゼの作用
によってマルトオリゴ糖に変換される物質を用いること
ができる。アミラーゼの作用によってマルトオリゴ糖に
変換される物質としては、例えばアミラーゼによって重
合度２〜７のマルトオリゴ糖を主成分として生成し得る
澱粉分解物を挙げることができる。
例えば、α−アミラーゼ活性測定用基質として有用な
α、β−核置換フェニールマルトオリゴシドを調製する
際に用いるｏ−グルコシル誘導体としては、４−ニトロ
フェニルα−Ｄ−グルコシド、４−ニトロフェニルβ−
Ｄ−グルコシド、２−クロロ−４−ニトロフェニルα−
Ｄ−グルコシド、２−クロロ−４−ニトロフェニル−β
−Ｄ−グルコシド、2,4−ジクロロフェニル−β−Ｄ−
グルコシド、2,6−ジクロロ４−ニトロフェニルβ−Ｄ
−グルコシド等を挙げることができる。
α、β−核置換フェニールマルトオリゴシドを調製する
際に用いるｏ−グルコシル誘導体としては、４−ニトロ
フェニルα−Ｄ−グルコシド、４−ニトロフェニルβ−
Ｄ−グルコシド、２−クロロ−４−ニトロフェニルα−
Ｄ−グルコシド、２−クロロ−４−ニトロフェニル−β
−Ｄ−グルコシド、2,4−ジクロロフェニル−β−Ｄ−
グルコシド、2,6−ジクロロ４−ニトロフェニルβ−Ｄ
−グルコシド等を挙げることができる。
更に、生理活性を有するｏ−グルコシル誘導体の例とし
ては、アルブチン、コニフェリン、サリシン等のフェノ
ール配糖体、センノシドＡ、Ｂ等のアントラセン配糖
体、ステビオシド、ベルベナリン等のテルペン配糖体、
ゲンチオピクリン等の苦味配糖体、ジギトニン等のステ
ロイド配糖体、シラレンＡ、ラナタグリコシドＡ等の強
心配糖体、各種ジベレリングルコシド、ピレノシノール
グルコシド等のリグナン配糖体等が挙げられる。但し、
本発明で用いられるｏ−グルコシル誘導体は上記化合物
に限定されるものではなく、糖部の非還元末端がグルコ
ースである化合物であればよい。尚、本発明では、ｏ−
グルコシル誘導体は、α体、β体のいずれを用いてもよ
く、α体を用いればα−マルトオリゴシドが得られ、β
体を用いればβ−マルトオリゴシドが得られる。
ては、アルブチン、コニフェリン、サリシン等のフェノ
ール配糖体、センノシドＡ、Ｂ等のアントラセン配糖
体、ステビオシド、ベルベナリン等のテルペン配糖体、
ゲンチオピクリン等の苦味配糖体、ジギトニン等のステ
ロイド配糖体、シラレンＡ、ラナタグリコシドＡ等の強
心配糖体、各種ジベレリングルコシド、ピレノシノール
グルコシド等のリグナン配糖体等が挙げられる。但し、
本発明で用いられるｏ−グルコシル誘導体は上記化合物
に限定されるものではなく、糖部の非還元末端がグルコ
ースである化合物であればよい。尚、本発明では、ｏ−
グルコシル誘導体は、α体、β体のいずれを用いてもよ
く、α体を用いればα−マルトオリゴシドが得られ、β
体を用いればβ−マルトオリゴシドが得られる。
本発明で用いるアミラーゼとしては澱粉を加水分解する
酵素であれば何れを用いてもよい。但し、効率よく目的
とするマルトオリゴ糖誘導体を生成させるためにはグル
コアミラーゼまたはマルトオリゴ糖生成アミラーゼが好
ましい。例えばグルコアミラーゼ、マルトトリオース生
成アミラーゼ、マルトペンタオース生成アミラーゼ、マ
ルトヘキサオース生成アミラーゼ等が特に好ましい。マ
ルトース生成アミラーゼとしては、大豆、麦芽等の植物
起源のβ−アミラーゼ以外に、バチルス・ポリミキサ
〔Bacillus polymyxa,J.Robyt and D.French,Arch.Bioc
hem Biophys 104,338（1964）〕、バチルス・セレウス
〔Bacillus cereus,Y.Takasaki,Agric.Biol.Chem.,40,1
515−1523（1976）〕、シュードモナス属菌〔Pseudomon
assp.S.Shinke et al.,J.Ferment.Technol.53,693−698
（1975）〕、ストレプトミセス・ヒグロスコピカス〔St
repotomyces higroscopicus,Y.Hidaka et al.,Starke.2
6,413（1974）〕、ストレプトミセス・プレコックス〔S
trepotomyces praecox,若生勝男ら、澱粉化学、25,155
（1978）〕等の微生物起源のマルトース生成アミラーゼ
がある。
酵素であれば何れを用いてもよい。但し、効率よく目的
とするマルトオリゴ糖誘導体を生成させるためにはグル
コアミラーゼまたはマルトオリゴ糖生成アミラーゼが好
ましい。例えばグルコアミラーゼ、マルトトリオース生
成アミラーゼ、マルトペンタオース生成アミラーゼ、マ
ルトヘキサオース生成アミラーゼ等が特に好ましい。マ
ルトース生成アミラーゼとしては、大豆、麦芽等の植物
起源のβ−アミラーゼ以外に、バチルス・ポリミキサ
〔Bacillus polymyxa,J.Robyt and D.French,Arch.Bioc
hem Biophys 104,338（1964）〕、バチルス・セレウス
〔Bacillus cereus,Y.Takasaki,Agric.Biol.Chem.,40,1
515−1523（1976）〕、シュードモナス属菌〔Pseudomon
assp.S.Shinke et al.,J.Ferment.Technol.53,693−698
（1975）〕、ストレプトミセス・ヒグロスコピカス〔St
repotomyces higroscopicus,Y.Hidaka et al.,Starke.2
6,413（1974）〕、ストレプトミセス・プレコックス〔S
trepotomyces praecox,若生勝男ら、澱粉化学、25,155
（1978）〕等の微生物起源のマルトース生成アミラーゼ
がある。
また、マルトトリオース以上のグルコース重合度を有す
るオリゴ糖を生成するアミラーゼとしては次のものが知
られている。
るオリゴ糖を生成するアミラーゼとしては次のものが知
られている。
マルトトリオース生成アミラーゼ〔若生勝男ら：澱粉化
学、26、175（1979）、ストレプトミセス・グリセウス
（Strepotmyces griseus）起源のもの；高崎義幸：昭和
58年度日本濃芸化学大会要旨集、P169（1983）、バチル
ス（Bacillus）属起源のもの〕 マルトテトラオース生成アミラーゼ〔J.F.Robyt and R.
J.Ackerman:Arch.Biochem.Biophys.,145,105（1971）、
シュードモナス・ストッツェリ（Pseudomonas stutzer
i）起源のももの〕 マルトペンタオース生成アミラーゼ〔N.Saito:Arch.Bio
chem.Biophms.155,290（1973）、バチルス・リケニホル
ミス（Bacillus licheniformis）起源のもの；小林ら；
昭和58年度日本澱粉学会大会要旨集、P301（1983）；吉
儀ら；昭和59年度日本農芸化学大会要旨集、P584（198
4）〕 マルトヘキサオース生成アミラーゼ〔K.Kainumaら:FEBS
Lett.,26.281（1972）、エアロバクター・エアロゲネ
ス（Aerobacter aerogenes）起源のもの;J.F.kennedy a
nd C.A.White:Starke,31,93（1979）；谷口ら：澱粉化
学、29,107（1982）;Y.Takasaki:Agric.Biol.Chem.,47,
2193（1983）〕 本発明は、前記マルトオリゴ糖等及びｏ−グルコシル誘
導体に、親水性有機溶媒と水との混合溶媒中でアミラー
ゼを作用させる。
学、26、175（1979）、ストレプトミセス・グリセウス
（Strepotmyces griseus）起源のもの；高崎義幸：昭和
58年度日本濃芸化学大会要旨集、P169（1983）、バチル
ス（Bacillus）属起源のもの〕 マルトテトラオース生成アミラーゼ〔J.F.Robyt and R.
J.Ackerman:Arch.Biochem.Biophys.,145,105（1971）、
シュードモナス・ストッツェリ（Pseudomonas stutzer
i）起源のももの〕 マルトペンタオース生成アミラーゼ〔N.Saito:Arch.Bio
chem.Biophms.155,290（1973）、バチルス・リケニホル
ミス（Bacillus licheniformis）起源のもの；小林ら；
昭和58年度日本澱粉学会大会要旨集、P301（1983）；吉
儀ら；昭和59年度日本農芸化学大会要旨集、P584（198
4）〕 マルトヘキサオース生成アミラーゼ〔K.Kainumaら:FEBS
Lett.,26.281（1972）、エアロバクター・エアロゲネ
ス（Aerobacter aerogenes）起源のもの;J.F.kennedy a
nd C.A.White:Starke,31,93（1979）；谷口ら：澱粉化
学、29,107（1982）;Y.Takasaki:Agric.Biol.Chem.,47,
2193（1983）〕 本発明は、前記マルトオリゴ糖等及びｏ−グルコシル誘
導体に、親水性有機溶媒と水との混合溶媒中でアミラー
ゼを作用させる。
本発明において、親水性有機溶媒としては特に限定はな
く、水混和性の有機溶媒であることが特に好ましい。親
水性有機溶媒の例としては、メタノール、エタノール、
ｎ−プロパノール、イソプロパノール、アセトン、ジオ
キサン、ホルムアミド、ジメチルホルムアミド、ジメチ
ルスルホキサイド、エチレングリコール、プロピレング
リコール、等が挙げられる。特にアルコール系の溶媒が
好ましい。
く、水混和性の有機溶媒であることが特に好ましい。親
水性有機溶媒の例としては、メタノール、エタノール、
ｎ−プロパノール、イソプロパノール、アセトン、ジオ
キサン、ホルムアミド、ジメチルホルムアミド、ジメチ
ルスルホキサイド、エチレングリコール、プロピレング
リコール、等が挙げられる。特にアルコール系の溶媒が
好ましい。
これらの親水性有機溶媒は単独で使用してもよく、また
２種以上を混合して使用してもよい。
２種以上を混合して使用してもよい。
水との混合溶媒における親水性有機溶媒の含有率は、溶
媒の種類、基質の種類等によっても変わるが、約20〜80
％、好ましくは約30〜70％が適当である。
媒の種類、基質の種類等によっても変わるが、約20〜80
％、好ましくは約30〜70％が適当である。
以下に本発明の反応条件について説明する。
マルトオリゴ糖等とｏ−グルコシル誘導体の反応時のモ
ル比は特に限定されることはなく、反応溶媒に対する溶
解度、反応速度、収率、経済性等を考慮して適宜決定す
ればよい。マルトオリゴ糖、又はアミラーゼの作用によ
ってマルトオリゴ糖に変換される物質とｏ−グルコシル
誘導体のモル比は通常約1:1から約1:5の範囲が好まし
い。
ル比は特に限定されることはなく、反応溶媒に対する溶
解度、反応速度、収率、経済性等を考慮して適宜決定す
ればよい。マルトオリゴ糖、又はアミラーゼの作用によ
ってマルトオリゴ糖に変換される物質とｏ−グルコシル
誘導体のモル比は通常約1:1から約1:5の範囲が好まし
い。
又、マルトオリゴ糖、又はアミラーゼの作用によってマ
ルトオリゴ糖に変換される物質とｏ−グルコシル誘導体
の混合溶媒中における合計濃度は、モル比と同様溶媒に
対する溶解度、反応速度、収率等を考慮して決定すれば
よいが、通常10〜60％、好ましくは20〜50％が適当であ
る。
ルトオリゴ糖に変換される物質とｏ−グルコシル誘導体
の混合溶媒中における合計濃度は、モル比と同様溶媒に
対する溶解度、反応速度、収率等を考慮して決定すれば
よいが、通常10〜60％、好ましくは20〜50％が適当であ
る。
反応温度は、約20〜60℃の範囲の通常アミラーゼの至適
温度附近で行えばよい。使用する酵素の種類、反応の速
度、収率等を考慮して選定することができる。反応pH
は、使用する酵素の至適pH附近、通常約４〜８の範囲が
適当である。
温度附近で行えばよい。使用する酵素の種類、反応の速
度、収率等を考慮して選定することができる。反応pH
は、使用する酵素の至適pH附近、通常約４〜８の範囲が
適当である。
反応時間は、反応温度、酵素の使用量によって異るが、
通常約２時間〜120時間、好ましくは約12時間〜48時間
の範囲が適当である。
通常約２時間〜120時間、好ましくは約12時間〜48時間
の範囲が適当である。
反応は、可溶性酵素を用いるバッチ式、あるいは固定化
酵素を用いる連続式の何れの反応形式を用いても行うこ
とができる。反応終了後PHを酸性又はアルカリ性にする
か、加熱して酵素反応を停止した後、カラムクロマトグ
ラフィー、溶媒抽出等によって分画を行い、目的とする
マルトオリゴ糖誘導体を得ることができる。
酵素を用いる連続式の何れの反応形式を用いても行うこ
とができる。反応終了後PHを酸性又はアルカリ性にする
か、加熱して酵素反応を停止した後、カラムクロマトグ
ラフィー、溶媒抽出等によって分画を行い、目的とする
マルトオリゴ糖誘導体を得ることができる。
また分画の際に未反応のｏ−グルコシル誘導体画分を回
収し、繰り返し再使用することも出来、これによりｏ−
グルコシル誘導体よりのマルトオリゴ糖誘導体の収率を
高めることが出来る。
収し、繰り返し再使用することも出来、これによりｏ−
グルコシル誘導体よりのマルトオリゴ糖誘導体の収率を
高めることが出来る。
本発明の主反応は次式の如く表すことができる。
ここにおいてＧｍ、Ｇｎはそれぞれグルコースの重合度
がｍ、ｎであるマルトオリゴ糖を表し、G1−Ｒはｏ−グ
ルコシル誘導体でＲはアグリコン部を表す。ｏ−グルコ
シル誘導体の糖部の糖の重合度は１以上でもよいが、こ
こでは非還元末端のグルコースのみをG1で表すものとす
る。ｍ、ｎはそれぞれ整数でｎ＜ｍ≦2n、ｎ＝１〜６の
関係を有する。
がｍ、ｎであるマルトオリゴ糖を表し、G1−Ｒはｏ−グ
ルコシル誘導体でＲはアグリコン部を表す。ｏ−グルコ
シル誘導体の糖部の糖の重合度は１以上でもよいが、こ
こでは非還元末端のグルコースのみをG1で表すものとす
る。ｍ、ｎはそれぞれ整数でｎ＜ｍ≦2n、ｎ＝１〜６の
関係を有する。
上記反応を水溶液中で行うと加水分解反応が速やかに進
行してＧｎ及びＧｍ−ｎが主生成物となり、転移反応に
よるマルトオリゴシド誘導体（Gn+1−Ｒ）の生成は少な
くマルトオリゴ糖誘導体を上記の反応により生成させ採
取することは極めて困難である。
行してＧｎ及びＧｍ−ｎが主生成物となり、転移反応に
よるマルトオリゴシド誘導体（Gn+1−Ｒ）の生成は少な
くマルトオリゴ糖誘導体を上記の反応により生成させ採
取することは極めて困難である。
しかるに本発明のように親水性有機溶媒と水との混合溶
媒中で反応を行うと、加水分解反応が抑制され、ｏ−グ
ルコシル誘導体をアクセプターとし、マルトオリゴ糖等
をドナーとする転移反応が著しく促進される。
媒中で反応を行うと、加水分解反応が抑制され、ｏ−グ
ルコシル誘導体をアクセプターとし、マルトオリゴ糖等
をドナーとする転移反応が著しく促進される。
即ち、本発明によれば親水性有機溶媒と水との混合溶媒
中でマルトオリゴ糖とｏ−グルコシル誘導体にアミラー
ゼを作用させるという極めて簡便な方法で効率よくマル
トオリゴ糖誘導体を製造することが出来る。
中でマルトオリゴ糖とｏ−グルコシル誘導体にアミラー
ゼを作用させるという極めて簡便な方法で効率よくマル
トオリゴ糖誘導体を製造することが出来る。
本発明の製造方法によって、例えばヒト体液中のα−ア
ミラーゼ活性測定用基質として有用なマルトオリゴ糖に
アグリゴンとして発色団が結合したマルトオリゴ糖誘導
体を調製することができる。
ミラーゼ活性測定用基質として有用なマルトオリゴ糖に
アグリゴンとして発色団が結合したマルトオリゴ糖誘導
体を調製することができる。
このようなマルトオリゴ糖誘導体は、α−グルコシダー
ゼおよび／またはβ−グルコシダーゼの存在下にα−ア
ミラーゼを作用させると発色団を遊離するため、ヒト体
液、例えば血清、尿等に含まれるα−アミラーゼ活性の
測定用基質として有用である。
ゼおよび／またはβ−グルコシダーゼの存在下にα−ア
ミラーゼを作用させると発色団を遊離するため、ヒト体
液、例えば血清、尿等に含まれるα−アミラーゼ活性の
測定用基質として有用である。
又、本発明の製造方法によって、例えば生理活性を有す
るｏ−グルコシル誘導体のグルコース残基にマルトオリ
ゴ糖が結合したマルトオリゴ糖配糖体を得ることができ
る。これらの配糖体の糖部にマルトオリゴ糖が結合した
ものは、溶解度、呈味、生理活性、安定性等の物性の改
善が期待される。
るｏ−グルコシル誘導体のグルコース残基にマルトオリ
ゴ糖が結合したマルトオリゴ糖配糖体を得ることができ
る。これらの配糖体の糖部にマルトオリゴ糖が結合した
ものは、溶解度、呈味、生理活性、安定性等の物性の改
善が期待される。
生理活性を有するｏ−グルコシル配等体としては、例え
ば、利尿剤として有用なアルブチン、咳薬として有用な
コニフェリン、鎮痛剤として有用なサリシン等のフェノ
ール配糖体、皮膚薬、眼疾薬として有用なエスクリン等
のクマリン配糖体、下剤として有用なセンノシドＡ、Ｂ
等のアントラセン配糖体、健胃、強壮剤、甘味料として
有用なステヒオシド、凝血剤、子宮収縮剤として有用な
ベルベナリン等のテルペン配糖体、抗マラリヤ剤として
有用なゲンチオピクリン等の苦味配糖体、コレステロー
ル沈澱剤として有用なジギトニン等のステロイド配糖
体、強心作用を有するシラレンＡ、ラナタグリコシドＣ
等の強心配糖体、植物伸長作用を有する各種シベレリン
グルコシドであるジベレリン配糖体、血圧降下作用、強
壮作用を有するピノレシノールジグルコシド等のリグナ
ン配糖体を挙げることができる。
ば、利尿剤として有用なアルブチン、咳薬として有用な
コニフェリン、鎮痛剤として有用なサリシン等のフェノ
ール配糖体、皮膚薬、眼疾薬として有用なエスクリン等
のクマリン配糖体、下剤として有用なセンノシドＡ、Ｂ
等のアントラセン配糖体、健胃、強壮剤、甘味料として
有用なステヒオシド、凝血剤、子宮収縮剤として有用な
ベルベナリン等のテルペン配糖体、抗マラリヤ剤として
有用なゲンチオピクリン等の苦味配糖体、コレステロー
ル沈澱剤として有用なジギトニン等のステロイド配糖
体、強心作用を有するシラレンＡ、ラナタグリコシドＣ
等の強心配糖体、植物伸長作用を有する各種シベレリン
グルコシドであるジベレリン配糖体、血圧降下作用、強
壮作用を有するピノレシノールジグルコシド等のリグナ
ン配糖体を挙げることができる。
以下に実施例を挙げて更に具体的に説明するが、本発明
は以下の実施例に限定されるものではない。
は以下の実施例に限定されるものではない。
実施例１ ４−ニトロフェニル−β−Ｄ−マルトペンタオシドの調
製 マルトペンタオース240mg（0.29mM）と４−ニトロフェ
ニル−β−Ｄ−グルコシド260mg（0.86mM）（モル比1:
3）とを、15mM酢酸バッファー（pH6.0）＋メタノール
（1:1）溶液に加え全量1mlとした。
製 マルトペンタオース240mg（0.29mM）と４−ニトロフェ
ニル−β−Ｄ−グルコシド260mg（0.86mM）（モル比1:
3）とを、15mM酢酸バッファー（pH6.0）＋メタノール
（1:1）溶液に加え全量1mlとした。
これに酵素としてシュードモナス スッツェリ（Psendo
monas stutzeri）由来のマルトテトラオース生成アミラ
ーゼ0.2単位（１％可溶性澱粉を基質として１分間に１
μＭのグルコキシド結合を分解する酸素量を１単位とす
る）を加え、30℃で48時間反応を行った。
monas stutzeri）由来のマルトテトラオース生成アミラ
ーゼ0.2単位（１％可溶性澱粉を基質として１分間に１
μＭのグルコキシド結合を分解する酸素量を１単位とす
る）を加え、30℃で48時間反応を行った。
反応終率後0.2Mホウ酸バッファー（PH9.8）を加えて反
応を停止し、濃縮したBio-Gel-p2を用いてゲルろ過カラ
ムクロマトグラフィーにより反応生成物を分画して、４
−ニトロフェニル−β−Ｄ−マルトペンタオシド（純度
99.2％）90mgを得た（収率32.7％）。分画して得られた
生成物が４−ニトロフェニル−β−Ｄ−マルトペンタオ
シドであることは、核磁気共鳴スペクトルにより確認し
た。
応を停止し、濃縮したBio-Gel-p2を用いてゲルろ過カラ
ムクロマトグラフィーにより反応生成物を分画して、４
−ニトロフェニル−β−Ｄ−マルトペンタオシド（純度
99.2％）90mgを得た（収率32.7％）。分画して得られた
生成物が４−ニトロフェニル−β−Ｄ−マルトペンタオ
シドであることは、核磁気共鳴スペクトルにより確認し
た。
実施例２ ４−ニトロフェニル−α−Ｄマルトペンタオシドの調製 マルトペンタオース120mg（0.14mM）と４−ニトロフェ
ニル−α−Ｄ−グルコシド84mg（0.28mM）（モル比1:
2）とを、メタノール−酢酸バッファー（pH6.0）（メタ
ノール50％）に溶解し、全量1mlとした。これにマルト
テトラオース生成アミラーゼ0.2単位を加え30℃で20時
間反応を行った。
ニル−α−Ｄ−グルコシド84mg（0.28mM）（モル比1:
2）とを、メタノール−酢酸バッファー（pH6.0）（メタ
ノール50％）に溶解し、全量1mlとした。これにマルト
テトラオース生成アミラーゼ0.2単位を加え30℃で20時
間反応を行った。
反応終了後実施例１と同様に処理し、18mgの４−ニトロ
フェニル−α−Ｄ−マルトペンタオシド（純度99.5％）
を得た（収率13.1％）。
フェニル−α−Ｄ−マルトペンタオシド（純度99.5％）
を得た（収率13.1％）。
分画して得られた生成物が４−ニトロフェニル−α−Ｄ
−マルトペンタオシドであることは核磁気共鳴スペクト
ルにより確認した。
−マルトペンタオシドであることは核磁気共鳴スペクト
ルにより確認した。
実施例３ ４−ニトロ、２−クロロ−β−Ｄ−マルトヘプタオシド
の調製 マルトヘプタオース600mg（0.52mM）と４−ニトロ−２
−クロロフェニル−β−Ｄ−グルコキシド700mg（2.08m
M）（モル比1:4）とをメタノール−酢酸バッファー（15
mM pH6.0）溶液（メタノール40％）に加え全量を5mlと
した。
の調製 マルトヘプタオース600mg（0.52mM）と４−ニトロ−２
−クロロフェニル−β−Ｄ−グルコキシド700mg（2.08m
M）（モル比1:4）とをメタノール−酢酸バッファー（15
mM pH6.0）溶液（メタノール40％）に加え全量を5mlと
した。
これにアエロバクター アエロゲネス （Aerobacter aerogenes）由来のマルトヘプタオース生
成アミラーゼ0.4単位（１％可溶性澱粉を基質として40
℃において１分間に１μＭのグルコシド結合を切断する
酸素量を１単位とする）を加え、30℃で18時間反応を行
った。
成アミラーゼ0.4単位（１％可溶性澱粉を基質として40
℃において１分間に１μＭのグルコシド結合を切断する
酸素量を１単位とする）を加え、30℃で18時間反応を行
った。
反応終了後実施例１と同様に処理し、120mgの４−ニト
ロ、２−クロロフェニル−β−Ｄ−マルトヘプタオシド
（純度98.9％）を得た（収率15.2％）。
ロ、２−クロロフェニル−β−Ｄ−マルトヘプタオシド
（純度98.9％）を得た（収率15.2％）。
分画して得られた生成物が、４−ニトロ、２−クロロフ
ェニル−β−Ｄ−マルトヘプタオシドであることは、核
磁気共鳴スペクトルにより確認した。
ェニル−β−Ｄ−マルトヘプタオシドであることは、核
磁気共鳴スペクトルにより確認した。
Claims (5)
- 【請求項１】親水性有機溶媒と水との混合溶媒中で、マ
ルトオリゴ糖、又はアミラーゼの作用によってマルトオ
リゴ糖に変換される物質と糖部非還元末端がグルコース
である配糖体との混合物に、アミラーゼを作用させるこ
とを特徴とするマルトオリゴ糖−配糖体化合物の製造方
法。 - 【請求項２】親水性有機溶媒がメタノール、エタノー
ル、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、アセトン、
ジオキサン、ホルムアミド、ジメチルスルホキサイド、
エチレングリコール、プロピレングリコール又はこれら
の混合物である特許請求の範囲第（１）項記載の製造方
法。 - 【請求項３】マルトオリゴ糖が、グルコースの重合度２
〜７のマルトオリゴ糖である特許請求の範囲第（１）項
記載の製造方法。 - 【請求項４】アミラーゼの作用によってマルトオリゴ糖
に変換される物質が、アミラーゼによって重合度２〜７
のマルトオリゴ糖を主成分として生成し得る澱粉分解物
である、特許請求の範囲第（１）項記載の製造方法。 - 【請求項５】アミラーゼがマルトオリゴ糖生成アミラー
ゼ又はグルコアミラーゼである特許請求の範囲第（１）
項記載の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2747187A JPH0698016B2 (ja) | 1987-02-09 | 1987-02-09 | マリトオリゴ糖―配糖体化合物の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2747187A JPH0698016B2 (ja) | 1987-02-09 | 1987-02-09 | マリトオリゴ糖―配糖体化合物の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63196297A JPS63196297A (ja) | 1988-08-15 |
| JPH0698016B2 true JPH0698016B2 (ja) | 1994-12-07 |
Family
ID=12222027
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2747187A Expired - Lifetime JPH0698016B2 (ja) | 1987-02-09 | 1987-02-09 | マリトオリゴ糖―配糖体化合物の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0698016B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH06121693A (ja) * | 1992-08-25 | 1994-05-06 | Akebono Brake Res & Dev Center Ltd | 高重合度オリゴ糖の製造法 |
| CA2490092A1 (en) * | 2002-06-21 | 2003-12-31 | Grain Processing Corporation | Dextrinized, saccharide-derivatized oligosaccharides |
-
1987
- 1987-02-09 JP JP2747187A patent/JPH0698016B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS63196297A (ja) | 1988-08-15 |
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