JPH0675069B2 - 歯周病検出用の唾液診断試験 - Google Patents

歯周病検出用の唾液診断試験

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JPH0675069B2
JPH0675069B2 JP61101274A JP10127486A JPH0675069B2 JP H0675069 B2 JPH0675069 B2 JP H0675069B2 JP 61101274 A JP61101274 A JP 61101274A JP 10127486 A JP10127486 A JP 10127486A JP H0675069 B2 JPH0675069 B2 JP H0675069B2
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Description

【発明の詳細な説明】 ［発明の属する技術分野］ 本発明は歯周病を検出するための診断試験に関する。
［先行技術及び問題点］ 歯周炎、口内炎、歯肉炎等のような歯周病は、通常、局
所刺激による口腔組織の炎症性変化を特徴とする口内の
炎症症状である。破壊的な炎症過程は細菌、食物かす、
口内白血球、及び歯と歯根膜周辺の上皮付着部の間の相
互作用によるものであり、その結果として骨（歯根周囲
の支持骨）の吸収と上皮付着部から上の部分（歯肉表面
と上皮付着部のみとの間）を含めたヒトの歯を直接取巻
く組織（歯肉）に炎症が起こる。このような炎症症状の
早期検出は適切な歯科治療に非常に重要である。本発明
により、体が炎症部位において増加量の多形核（PMN）
球のような白血球をつくり、これが炎症性歯周病症状の
良好な目印になるパーオキシダーゼ酵素を含有するとい
う知られた事実を活用して、このような検出を行なって
いる。炎症症状があると、PMN白血球の数が増えると共
にペルオキシダーゼ活性も高まる。
1984年２月27日出願された「歯周病を検出するための唾
液診断試験」と題する我々の先行係属中の合衆国特許出
願番号第584,013号において、フェノール自体が色素原
溶液中のカップリング剤を構成する場合の唾液過酸化酵
素試験が記述されている。しかし、このフェノールの物
理的性状のため、このような色素原溶液は、本発明の色
素原溶液が凍結乾燥されるようには凍結乾燥できない。
従って、本発明は先行出願に対して改良をなすものであ
る。
［問題点を解決する手段］ 本発明は歯周病による炎症の存在を検出するための簡単
な唾液試験を提供している。これは、無色の水素供与体
（すなわち色素原）を酸化して、比色的に測定可能な着
色生成物に変えるペルオキシダーゼの知られた化学的能
力を利用したものである。このペルオキシダーゼ試験法
は迅速で信頼性があり、唾液試料中におけるペルオキシ
ダーゼの存在とこのような疾病の存在との間に強力な正
の相関関係をもっている。
ペルオキシダーゼ活性の測定は、本発明で、カップリン
グ剤としてのフェノール成分をも含有する緩衝剤水溶液
中において、基質としての過酸化水素と色素原としての
４−アミノアンチピリンとの試薬混合物によって達成さ
れる。このフェノール成分は、（ｉ）２−ヒドロキシ−
3,5−ジクロロベンゼンスルホン酸ナトリウム、（ii）
ｐ−ヒドロキシ安息香酸、（iii）ｐ−メトキシフェノ
ール、又は（iv）2,6−ジクロロフェノールからなる群
から選ばれる一員である。４−アミノアンチピリンは唾
液試料からのペルオキシダーゼの存在下に過酸化水素に
よって酸化され、生ずる発色の強さは酵素濃度に、また
従って歯周の炎症程度に比例している。
便宜上、次の記号が各フェノール成分に対して使用され
る。
（ｉ）２−ヒドロキシ−3,5−ジクロロベンゼンスルホ
ン酸ナトリウム（好適） HDCBS （ii）ｐ−ヒドロキシ安息香酸 pHBA （iii）ｐ−メトキシフェノール pMP （iv）2,6−ジクロロフェノール dCP 反応は、計量した色素原溶液及び基質溶液を計量した唾
液と混合することによって行われる。反応は過酸化水素
基質と唾液との接触によって開始されるため、混合順序
はまず色素原と基質溶液を混合し、この混合物に唾液を
加えるか、又はその代わりに色素原溶液と唾液を混合し
てから基質溶液を加えるようにする。
検定の終点は明らかに使用の特定検定条件に依存してい
る。例えば、色素原及び／又は基質濃度を最適濃度まで
高めると、発色が強まる。すなわち、反応によって生ず
る色を観察する時間が短縮されよう。このため、都合の
よい時期に検定の終点が観察できるように、色素原と基
質の濃度を所定のパラメータの範囲内で調整するのが有
利である。このような任意の調整はわかりやすいもので
あり、検定実施者がこれにある程度慣れると実行は容易
である。
色素原及び基質が最少限度の濃度であると、例えば１時
間を越える長い検定時間が必要であるが下に示す最大濃
度範囲までの好ましい濃度を使用すると、色の強さを観
察するのに室温（20-26℃）で約２分ないし約60分、及
び好ましくは約３分ないし約30分で適当な検定が行なえ
ることが一般的にわかった。反応速度を早めるために、
約45℃までのやや高めの温度（すなわちペルオキシダー
ゼ酵素の不活性化温度より下の温度）も使用できる。
発色がないことは正常状態、すなわち唾液中にPMN白血
球がないことを示し、このことが歯周病にかかっていな
いことを示す。しかし、発色は歯周病の存在と相互に関
係し、色の強さは疾病の程度と相互に関係がある。各フ
ェノール成分に好都合な1-4の採点方式は次のとおりで
ある。
色素原溶液は４−アミノアンチピリン色素原と、フェノ
ール性カップリング剤、及び反応条件に対して約4-9、
好ましくは6.8±0.05の望ましいpHを得るための適当な
緩衝剤、好ましくは慣用のアルカリ金属（ナトリウム又
はカリウム）燐酸塩緩衝剤からなる。
ヒドロペルオキシド基質溶液は、過酸化水素の希水溶液
である。
概して本発明方法は、唾液の単位容量当り約2-15単位容
量の色素原溶液と約0.1-2単位容量の基質溶液を利用す
る。しかし、最適有効量は色素原及び／又は基質の濃度
と、試験に使用される特定検定技術によって変わりう
る。下になおも詳しく記述されているように、このよう
な技術は試験管やフィルターパッド材料、磁器製水溜
め、分光光度計等を包含する。上記の好ましい色素原及
び基質溶液の場合、例えば試験管又は磁器製水溜めを使
用する時は、単位容量の唾液当りそれぞれ約２単位容量
の基質及び色素原溶液が好ましく、フィルターパッド材
料（例えばディスク）を使用する時は単位容量の唾液当
り約２単位容量の色素原溶液と１単位容量の基質溶液が
好ましく、また分光光度計機器を使用する時は単位容量
の唾液当り約15単位容量の色素原溶液と0.1単位容量の
基質溶液が好ましいことを我々は発見した。
一貫して信頼性のある発色を得るためには、pHと過酸化
物濃度を調整しなければならない。緩衝剤として例えば
燐酸塩（好適）、フタル酸塩、くえん酸塩、トリス、ホ
ウ酸塩、こはく酸塩等の緩衝剤をあげることができる。
それらのpH値と容量は反応混合物が約4.0ないし約9.0、
及び好ましくは約6.8のpH値をもつように選ばれる。色
素原溶液と過酸化物基質溶液を混合する時、基質溶液中
の過酸化水素のモル当り約1.1×10-4モルないし約189モ
ルの４−アミノアンチピリンと、約2.5×10-3ないし約
8.57×102モルのHDCBS、約5.93×10-3モルないし約2.14
×104モルのpHBA、又は約3.13×10-4ないし約2.39×102
モルのpMB又は約3.77×10-4ないし約1.39×103モルのdC
Pをそれぞれ色素原溶液中に使用するのが有利である。
これらの反応体の各々に対する当量比は、基質溶液中の
過酸化水素のモル当り色素原溶液中約7.5×10-3ないし
約1.9×10-2モルの４−アミノアンチピリン及び、約0.1
5ないし約0.36モルのHDCBS、又は約0.88モルないし約2.
14モルのpHBA、又は約0.019ないし約0.045モルのpMB、
又は約0.038ないし約0.091モルのdCPであるのが好まし
い。色素原溶液を乾燥粉末型に凍結乾燥すると、溶液自
体より容易な貯蔵、長い貯蔵寿命及び取扱いの便宜を提
供するので好ましい。凍結乾燥段階は慣用的な周知の方
法に従って行われる。
本発明方法は、溶液又は凍結乾燥型の色素原用の栓付き
試験管１本、過酸化物溶液用の柔軟な密閉バイアルのよ
うな気密容器又は別の栓付き試験管１本及び唾液試料用
の目盛り付きスポイトを備えた簡便な試験キットの形で
使用できる。試験キットは例えば１回以上の試験に対し
て十分な量の緩衝された色素原及び過酸化物の溶液を包
含しうる。試験実施に当っては、過酸化物溶液を試験管
中の色素原に添加し、続いて予め目盛り付きスポイトで
集めた計量済みの、すなわち試験に十分な量の唾液試料
を加える。試験管に再び栓をし、振蕩してから指定され
た時間の間放置する。色反応が完了した後、キットで提
供されている色指示チャートで、生ずる発色を直ちに比
較して、炎症性歯周病の有無と程度が見て取れるよう
に、試験管を静置させる手段が提供できる。
このように本発明は炎症性歯周病の存在を検出するため
の、以下の別個に含有される成分を含むキットを提供し
ている。
（ａ）過酸化水素溶液、及び （ｂ）４−アミノアンチピリン;2−ヒドロキシ−3,5−
ジクロロベンゼンスルホン酸ナトリウム、ｐ−ヒドロキ
シ安息香酸、ｐ−メトキシフェノ−ル、及び2,6−ジク
ロロフェノールからなる群から選ばれるフェノール成
分；及び凍結乾燥試薬と過酸化水素溶液との接触時に約
4-9のpHを提供するための緩衝剤からなる凍結乾燥試
薬。凍結乾燥試薬の代わりに既に述べた色素原の緩衝水
溶液をキットは包含しうる。
代わりの方法として、磁器水溜めを使うものがあり、こ
れは少量の反応体での検定実施にすぐれた容器であっ
て、検定の着色結果を観察するのに白い背景を提供して
いる。また、適当な吸収材料例えば市販のフィルターパ
ッドを単位試験に都合のよい形、例えばディスク形に切
ったものを使うこともあり、これは全反応体を漏らさず
保持するため、検定の着色結果が容易に識別できる。ま
た慣用の分光光度計機器を使うと試験検定液の「色の読
取り」が自動的に行われる。
［実施例］ 以下の実施例は、本発明を例示する目的で記載されてい
る。
実施例１ 独立した臨床試験を研究歯科医の手で行ない、得られた
臨床結果を本検定から得られた生体外の結果と比較し関
連づけた。各患者を臨床的に検査し、炎症性歯周病の有
無とその程度を測定した。各臨床診断結果を１（正常）
から４（重症）の段階に採点した。計22名の男女患者が
試験に参加した。各患者に口内衛生又は食物摂取を控え
るように求めてから、起床時に約5mlの唾液を集めた。
各患者に唾液回収管に唾をはくように求めた。各唾液試
料を分析し、次の試験管法に従ってペルオキシダーゼの
存在を検出した。
試験管法：室温で試験反応を次のように行なった。
ａ）50μｌの好ましい色素原溶液を試験管内で凍結乾燥
した。
ｂ）110μｌの好ましい基質溶液を凍結乾燥された色素
原に添加した。
ｃ）30μｌの唾液試験試料を添加して反応を開始させ
た。
ｄ）唾液添加の30分後、唾液中のペルオキシダーゼ酵素
の存在による発色の有無と強度を上記の１から４の尺度
で採点した。
22名の患者の各々に対する臨床試験での臨床診断結果と
生体外唾液検定結果とを第１表に示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 昭60−222768（ＪＰ，Ａ) 特開 昭56−155852（ＪＰ，Ａ) 特開 昭59−166865（ＪＰ，Ａ) 特公 昭63−59466（ＪＰ，Ｂ２)

Claims (15)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】歯周病にかかっている疑いのある人からの
    唾液試料を、pH約4-9に緩衝された２−ヒドロキシ−3,5
    −ジクロロベンゼンスルホン酸ナトリウム、ｐ−ヒドロ
    キシ安息香酸、ｐ−メトキシフェノール及び2,6−ジク
    ロロフェノールからなる群から選ばれるフェノール成分
    と４−アミノアンチピリンとの水溶液、及び過酸化水素
    溶液と混合し、上記病気の存在を指示するものとして生
    じる呈色を検出する方法。
  2. 【請求項２】フェノール成分が２−ヒドロキシ−3,5−
    ジクロロベンゼンスルホネートである、特許請求の範囲
    第１項の方法。
  3. 【請求項３】フェノール成分がｐ−ヒドロキシ安息香酸
    である、特許請求の範囲第１項の方法。
  4. 【請求項４】フェノール成分がｐ−メトキシフェノール
    である、特許請求の範囲第１項の方法。
  5. 【請求項５】フェノール成分が2,6−ジクロロフェノー
    ルである、特許請求の範囲第１項の方法。
  6. 【請求項６】本質的に次の成分： ％W/V ４−アミノアンチピリジンフェノール成分：0.001-0.15
    g ％W/V ２−ヒドロキシ−3,5−ジクロロベンゼンスルホネート
    0.07-1.0g の場合なら ｐ−ヒドロキシ安息香酸の場合なら 0.10-15.0g ｐ−メトキシフェノールの場合なら 4.1-130.0mg 2,6−ジクロロフェノールの場合なら 6.5-1000.0mg KH2PO4 0.15-12.0g K2HPO4 0.15-13.0g 水 100ml からなる色素原溶液約2-15単位容量と、本質的に次の成
    分： ％V/V 過酸化水素（30％） 0.001-10ml 水（全量で） 100ml からなる基質溶液約0.1-2単位容量を、炎症性歯周病に
    かかった疑いのある人からの唾液試料１単位容量と混合
    し、上記病気の存在を指示するものとして生じる色を検
    出する特許請求の範囲第１項の方法。
  7. 【請求項７】色素原溶液が本質的に次の成分： ％W/V ４−アミノアンチピリン 0.017g ２−ヒドロキシ−3,5−ジクロロベンゼンスルホン酸ナ
    トリウム 0.42g KH2PO4（一塩基性） 5.98g K2HPO4（二塩基性） 6.27g 水（全量で） 100ml からなり、また基質溶液が本質的に次の成分： ％V/V 過酸化水素（30％） 0.55ml 水（全量で） 100ml からなる、特許請求の範囲第６項の方法。
  8. 【請求項８】色素原溶液が本質的に次の成分： ％W/V ４−アミノアンチピリン 0.017g ｐ−ヒドロキシ安息香酸 1.5mg KH2PO4（一塩基性） 5.98g K2HPO4（二塩基性） 6.27g 水（全量で） 100ml からなり、また基質溶液が本質的に次の成分： ％V/V 過酸化水素（30％） 0.55ml 水（全量で） 100ml からなる、特許請求の範囲第６項の方法。
  9. 【請求項９】色素原溶液が本質的に次の成分： ％W/V ４−アミノアンチピリン 0.017g ｐ−メトキシフェノール 25.0g KH2PO4（一塩基性） 5.98g K2HPO4（二塩基性） 6.27g 水（全量で） 100ml からなり、また基質溶液が本質的に次の成分： ％V/V 過酸化水素（30％） 0.55ml 水（全量で） 100ml からなる、特許請求の範囲第６項の方法。
  10. 【請求項１０】色素原溶液が本質的に次の成分： ％W/V ４−アミノアンチピリン 0.017g 2,6−ジクロロフェノール 25.0mg KH2PO4（一塩基性） 5.98g K2HPO4（二塩基性） 6.27g 水（全量で） 100ml からなり、また基質溶液が本質的に次の成分： ％V/V 過酸化水素（30％） 0.55ml 水（全量で） 100ml からなる、特許請求の範囲第６項の方法。
  11. 【請求項１１】以下の別個に述べる成分 ａ）過酸化水素溶液、及び ｂ）本質的に４−アミノアンチピリン;2−ヒドロキシ−
    3,5−ジクロロベンゼンスルホン酸ナトリウム、ｐ−ヒ
    ドロキシ安息香酸、ｐ−メトキシフェノール及び2,6−
    ジクロロフェノールからなる群から選ばれるフェノール
    成分；及び凍結乾燥試薬と過酸化水素溶液との混和時に
    約4-9のpHを提供するための緩衝液からなる凍結乾燥試
    薬、 を含む、炎症性歯周病の存在を検出するためのキット。
  12. 【請求項１２】フェノール成分が２−ヒドロキシ−3,5
    −ジクロロベンゼンスルホネートである、特許請求の範
    囲第11項のキット。
  13. 【請求項１３】フェノール成分がｐ−ヒドロキシ安息香
    酸である、特許請求の範囲第11項のキット。
  14. 【請求項１４】フェノール成分がｐ−メトキシフェノー
    ルである、特許請求の範囲第11項のキット。
  15. 【請求項１５】フェノール成分が2,6−ジクロロフェノ
    ールである、特許請求の範囲第11項のキット。
JP61101274A 1985-05-06 1986-05-02 歯周病検出用の唾液診断試験 Expired - Lifetime JPH0675069B2 (ja)

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