JPH01144998A - 歯周病原性菌検査薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は歯周病原性菌検査薬、さらに詳しくは、歯周病
巣から採取した検体中の歯周病原性菌である、トレボネ
ーマ・デンティコーラ（Ｔ　ｒｅｅｐｏｎｅｍａｄｅｎ
ｔｉｃｏｌａ）を特異的に、かつ、簡便、迅速に検出で
きる検査薬に関する。

従来ｐ退」ｉおよ■腓獄へ 近年、歯周疾患に関する細菌学的研究が進み、歯周疾患
病巣部に多くのスピロヘータが検出され、種々の臨床的
指標と高い相関性を示すことが判明している。また、嫌
気性のダラム陰性桿菌が計要な歯周疾患の原因菌である
ことも判明しており、その中でも特に、バクテロイデス
・ジンジバリス（Ｂ　ａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ　　ｇｉｎ
ｇｉｖａｌｉｓ）などの黒色色素産生バクテロイデス（
Ｂｌａｃｋ−ｐｉｇｍｅｎｔｅｄ　　Ｂａｃｔｅｒｏｉ
ｄｅｓ）が注目され、その病原性について多数の報告が
なされている。

そこで、口腔内におけるこれらの原因菌の存在を検知し
、歯周疾Ｗの罹但や進行を診断あるいは予測し、歯周疾
患の治療、予防に、臨床的に応用オろ試みがなされてい
る。

しかしながら、細菌学的方法によるこれらの原因菌の検
知には、暗視野顕微鏡の使用、嫌気性菌の取扱という高
度な技術、特殊な設備等を必要とし、操作が煩雑で、培
養や結果の判断にも長い時間や熟練を要するという欠点
があり、臨床的に実用化するには困難な点が多い。また
、免疫学的な面から、これらの原因菌に対する液性免疫
である血中の抗体価を測定したり、細胞性免疫であるり
、　　ンパ球幼若化反応を測定し、原因菌の存在を検知
する試みもなされているが、検体試料の調整に煩雑な操
作を必要とする問題があり、やはり、実用化はなかなか
困難である。

このような事情にかんがみ、本発明者らは、臨床的に実
用化できる歯周疾患原因菌の検知を可能とすべく、鋭意
研究を重ねた。その結果、トレボネーマ・デンティコー
ラが非常に特異的なペプチダーゼ様酵素活性を有し、あ
る種の基質を用い、これにキレート剤を添加することに
より、この酵素活性を特異的に、かつ、簡便、迅速に検
出できることを見出した。

これまで、口腔内のスピロヘータやバクテロイデス・ジ
ンジバリスがトリプシン様酵素やフィブリン分解酵素を
産生ずることは知られているが［ジャーナル・オブ・ク
リニカル・マイクロバイオロジー（Ｊｏｕｒｎａｌ　　
ｏｆ　　Ｃ１１ｎｉｃａｌ　　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇ
ｙ）。

９７〜１０２．１９８２年１月；マイクロパイオス・レ
ターズ（Ｍｉｃｒｏｂｉｏｓ　　Ｌｅｔｔｅｒｓ）、　
　２５．　１５７〜１６０．１９８４年；ジャーナル・
オブ・ペリオドンタル・リサーチ（Ｊ　ｏｕｒｎａｌ　
　ｏｒＰｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ　　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ）
、　　２１　、　１００　、　１９８６年］、臨床症状
との相関性や検出の特異性の点で、これらの酵素を指標
とすることは困難である。

問題点を解決するための手段 本発明は、検体中のペプチダーゼ様酵素活性を測定する
ことにより、歯周病原性菌を検出するための検査薬であ
って、 式：　　Ｘ−Ａｒｇ−Ｙ　　　　　　　　［１］［式中
、Ａｒｇはアルギニン残基、Ｘはフェニル骨格を持つア
ミノ酸保護基、Ｙはアルギニン残基のＣ末端に結合する
発色基を意味するコ で示される化合物を該酵素の基質とし、これにキレート
剤を添加してなることを特徴とする歯周病原性菌検査薬
を提供するものである。

本発明の検査薬を用いれば、唾液、歯垢、歯肉溝浸出液
などのような検体を、好ましくは、ｐＨ６，０〜９．０
の条件下、式［１］の基質と反応させ、その氷解活性の
強弱を発色反応により測定することにより、簡便かつ迅
速に、歯周病原性菌を検出することができる。

基質として用いる式［１コの化合物は公知であるか、少
なくとも、公知のペプチド合成法によって容易に製造で
きるものであり、式［１コのＸ基で示されるアミノ基保
護基はペプチド合成に用いられる公知のアミノ基保護基
のうちでフェニル骨格を持つものであればいずれのもの
でもよく、例えば、ベンゾイル基、カルボベンゾキシ基
、ｐ−トルエンスルホニル基、ｐ−メトキシベンゾイル
オキシカルボニル基などが挙げられる。

Ｙ基の発色基は、発色による酵素活性の測定（紫外部、
可視部、赤外部の吸収、蛍光の測定によるものを包含す
る）に用いられるものいずれでもよく、例えば、β−ナ
フチルアミン、４−メトキシ−２−ナフチルアミン、ｐ
−ニトロアニリン、ｐ−ニトロフェノール、７−アミノ
−４−メトキシクマリン、５−アミノイソフタル酸ジメ
チルエステル、７−アミノ−４−トリフルオロメチルク
マリンなどから由来する基が挙げられる。特に、適当な
発色試薬により、肉眼的に判定可能な発色を示ずβ−ナ
フチルアミン、４−メトキシ−２−ナフチルアミン、ｐ
−ニトロアニリン、ｐ−ニトロフェノール由来の基が好
ましい。

添加剤として用いるキレート剤としては、キレート作用
を有するものであればいずれのものでもよいが、好まし
くは、エチレンジアミン四酢酸（以下、ＥＤＴＡという
）、エチレングリコールビス（β−アミノエチルエーテ
ル）−Ｎ、Ｎ、Ｎ、Ｎ−四酢酸（以下、ＥＧＴＡという
）などが挙げられる。

本発明の検査薬は、式［１］の化合物が検体由来のベプ
ヂダーゼ様酵素の基質として反応できる形態のものであ
ればいずれでもよく、もっとも基本的には、式［＋］の
化合物の水溶液にキレート剤を添加したものでよく、好
ましくは、測定時、ｐ　Ｈ６，０〜９．０となるように
緩衝剤を含有させる。

用いる緩衝剤は通常用いられるものいずれでもよく、例
えば、トリス塩酸緩衝剤、リン酸緩衝剤、ホウ酸緩衝剤
、ベロナール緩衝剤、Ｉ（Ｅ　Ｐ　Ｅ　Ｓ緩衝剤などを
用いることができる。該水溶液は、式［１］の化合物、
キレート剤および、所望により、緩衝剤を蒸留水に溶解
するような公知の方法で製造することができ、要すれば
、さらに、防腐剤、抗生物質などの他の添加物を適宜配
合することができる。

式［＋］の化合物の最終濃度　１００ｎＭ＝Ｉ　Ｏ’Ｏ
ｍＭの範囲、キレート剤の最終濃度２ｍＭ〜２００ｍＭ
、また、緩衝剤は最終濃度１ｍＭ〜ＩＭの範囲で使用す
ることが好ましく、前記の水溶液は、これらの濃度の式
［１コの化合物、キレート剤、および所望により緩衝剤
を含有し、そのまま直接、検査に供することのできる形
態にすることができ、あるいは、使用時、適宜蒸留水で
所望の濃度に希釈する濃厚液の形態とすることもできる
。

本発明の検査薬には、これらの水溶液の形態のらのを、
さらに、公知の方法により乾燥粉末化、顆粒化したもの
のごとき固形の形態のらの、粉末成分を混合した粉末、
その顆粒化物のごとき固形の形態のもの、あるいは、液
状の形態のものをろ紙、ペーパーディスク、スポンジ、
高分子物などの担体に含浸させるものら包含される。

さらに、本発明の検査薬には、式［１］の化合物および
キレート剤を含有する試薬と、緩衝剤、発色試薬などの
他の試薬を組合わせてなるキットら包含されろ。

発色試薬は、式［１］の化合物におけるＹ基に応じて適
宜選択でき、Ｙがβ−ナフヂルアミン、４−メトキシ−
２−ナフチルアミン、ｐ−ニトロアニリン、ｐ−ニトロ
フェノール由来の基の場合、例えば、ファーストガーネ
ットＧＢＣやファーストブルーＢＢあるいはこれらのジ
アゾニウム塩や塩化亜鉛との塩のごとき塩などを、水、
エタノール、酢酸緩衝液、２−メトキシエタノールある
いはこれらのｌ見合溶液などに０．０１〜５重里％の濃
度で溶解した溶液や、０．５〜５Ｍの水酸化ナトリウム
、水酸化カリウム、酢酸などの水溶液が用いられる。こ
れらの溶液またはその濃厚液、さらには固形化物を式［
１］の化合物およびキ１ノート〜ｊを含有する試薬と組
合わせてキットとして用いることができる。

本発明の検査薬を用いて検査を行なうには、ま４′、検
体を採取中ろ。検体の採取は公知の方法で行なってもよ
く、例えば、歯肉１１４浸出液や唾液はろ紙、キャピラ
リー、ペーパーポイントなどで（呆取でき、歯垢は綿棒
、キュレット、スケラーなどで採取できる。

ついで、式［１］の化合物濃度１１００ｎ〜！００ｍＭ
およびキレート剤の４度２ｍＭ〜２００ｍＭを含有する
本発明の検査薬と検体を、例えば、試験管、マイクロタ
イタープレート、セル、バイアル瓶、プラスチック・キ
ュベツトなどの中で接触させ、好ましくは、ｐｔｒ　６
　、０〜９．０で氷解反応を行なわせる。この反応は、
通常２５〜４５°Ｃでおこなわれ、反応時間は検体や反
応温度により異なるが、３７℃で１５分〜７２時間程度
の反応が好ましい。

反応終了後、必要であれば、発色試薬を添加し、発色の
有無・強弱を肉眼あるいは分光光度計や蛍光光度計で判
定し、これにより、検体中のペプチダーゼ様酵素活性の
有無・強弱を判断し、歯周疾患の罹患や進行を診断ある
いは予測する。

実験お凝冴又１［ っき゛に、実験および好ましい実施例を挙げて本発明を
さらに詳しく説明する。

実験！ 各種口腔内嫌気性細菌のペプチダーゼ様酵素活性 口腔内の嫌気性細菌であるトレボネーマ・デンテイコー
′７（Ｔｒｃｐｏｎｅｍａ　　ｄｅｎｔｉｃｏｌａ）４
株、バクテロイデス・ノンシバリス５株、バクテロイデ
ス・インターミーディアス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ　
ｉｎｔｃｒｍｃｄｉｕｓ）３株、バクテロイデス・コー
ホリス（Ｂ　ａｃｔｅｒｏｉｄｅｓｃｏｒｐｏｒｉｓ）
　２株、バクテロイデス・メラニノジェニカス（ｂａｃ
ｔｅｒｏｉｄｅｓ　　ｍｅｌａｎｉｎｏｇｅｎｉｃｕｓ
）３株、バクテロイデス・デンティコーラ（Ｂ　ａｃｔ
ｅｒｏｉｄｅｓｄｅｎｔ　１ｃｏｌａ）　２　ｎ、アク
ナノマイセス・イスラエリ−（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ
　　１ｓｒａｅｌｌｉ）２株、アクチノバチルス・アク
チノマイセテＬコミタンス（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌ
ｕｓ　ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｍｃｏｍｉｔａｎｓ）
４株およびフシバクテリウム・ヌクレータム（Ｆ　ｕｓ
ｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　　ｎｕｃｌｅａｔｕｍ）　３株
のペプチダーゼ様酵素気質に対する水解活性をつぎのと
おり測定した。

トレボネーマ属の細菌はＴＹＧＶＳ培地を用い、３７℃
で７日間、他の細菌はプレイン・ハート・インフュージ
ョン・ブロスを用い、３７℃で４８〜７２時間嫌気的に
培養し、培養液を希釈して、各々、６６０ｎｍにおける
吸光度が１．０の細菌懸濁液を調製した。

種々の発色基を有するペプチダーゼ様酵素の基質化合物
を０．１Ｍトリス塩緩衝液（ｐＨ７，０）に２０ｍＭの
濃度で溶解し、基質溶液を調製した。

この基質溶液１．５Ｊ１１２に、前記の細菌＠蜀液０゜
５ｍＱを加え、３７℃で６０分間反応させた。反応終了
後、β−ナフチルアミン由来の発色基を有する基質には
、発色試薬（１０％ツイーン２０を含有する１Ｍ酢酸緩
衝液（ｐＨ４，２）にジアゾニウム塩ガーネットＧＢＣ
を０　、５　ｔｎｇ／ｍＱの濃度で溶解して調整）　０
　、６　Ｒ（ｌを加え、１５分後に５２５ｎｍにおける
吸光度を分光光度計にて測定した。また、バラニトロア
ニリン由来の発色基を有する基質は、そのままの状態で
４１０ｎｍにおける吸光度を分光光度計にて測定した。

氷解活性は、各細菌のβ−ナフチルアミン遊離量および
パラニトロアニリン遊離量の平均値に基づき、っぎのと
おり表示した。

−二　遊離量〈５ナノモル／ＩＩ（１ ±　；　遊離量５〜＜１０ナノモルｍＱ＋　：　遊離量
ｌＯ〜〈２０ナノモル／靜＋＋：　　遊離量２０〜く４
０ナノモル／ｍ（１＋＋＋：　　遊離［１４０〜く８０
ナノモル／ＨＱ＋＋＋＋：遊離量８０ナノモル／肩Ｑ以
上結果を第１表に示す。第１表中、基質化合物の略号は
つぎのとおりである。

ＢｚＡβＮＡ：ペンゾイルーアルギニンーβ−ナフヂル
アミド ＣｘＡβＮＡ：　Ｎ−カルボベンゾキシ−アルギニン−
β−ナフチルアミド ＢｚＡｐＮＡ：ベンゾイル−アルギニン−ｐ−ニトロア
ニリド ＣｘＡｐＮＡ：　Ｎ−カルボベンゾキシ−ｐ−ニトロア
ニリド ｌ３ＺＡｐＮＰ：ベンゾイル−アルギニン−ｐ−ニトロ
フェノール ＣｚＡｐＮＰ：　Ｎ−カルボベンゾキシ−ｐ−ニトロフ
ェノール 第１表に示すごとく、口腔内嫌気性細菌のうち、歯周疾
患原因菌であるスピロヘータ（トレボネーマ・デンティ
コーラ）およびバクテロイデス・ジンツバリスが特質的
なペプチダーゼ様酵素活性を示し、式［１］で示される
化合物全特Ｗ的に水解する。

実験２ バクテロイデス・ジンジバリスおよびトレボネーマ・デ
ンティコーラのキレート剤存在下での、ベンゾイル−ア
ルギニン−ｐ−ニトロアニリド氷解活性−１ 歯周病原性菌であるトレポネーマ・デンティコ・−９４
株を用い、各種添加剤存在下での、ベンゾイル−アルギ
ニン−ｐ−ニトロアニリド氷解活性を測定した。

ベンゾイル−アルギニン−ｐ−ニトロアニリドをＯ，１
Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７，０）にｌ０ｍＭの濃度で
溶解し、基質溶液を調製した。

添加剤としては、ＩＯ＋ｎＭシスティン塩酸塩、２ｍＭ
ジイソプロピルフルオルリン酸、２０ｍＭＥｌ）’１”
Ａ、１０ｍＭンステイン塩酸塩と２ｍＭジイソプロピル
フルオルリン酸を混合したらのを調製し、基質溶液１．
５ｘＱに対して、添加剤０　、５　ｍＱおよび菌懸測液
０　、５　ｙｔ（ｌを加えた後、３７℃で２４時間反応
させた。該菌＠濁液は、菌数をそれぞれ２．５．５．０
．７．５、ＩＯ，０Ｘ１０’個１５０Ｉｌａ１．：′Ａ
製したものを用いた。

反応終了後、反応液の４１０ｎｍにおける吸光度を分光
光度計にて測定した。

結果を第１図に示す。

第１図に示すごとく、キレート剤を加えることにより、
トレボネーマ・デンティコーラを特異的に検出すること
ができる。

聚狡走 バクテロイデス・ジンジバリスおよびトレボネーマ・デ
ンティコーラの各種添加剤存在下での、ベンゾイル−ア
ルギニン−ｐ−ニトロアニリド氷解活性−２ 実験２と同様の反応系を用いて、添加剤の種類を変えて
、各種添加剤存在下での、ベンゾイル−アルギニン−ｐ
−ニトロアニリド氷解活性を測定した。

氷解活性は、各細菌のβ−ナフチルアミン遊離量お、Ｊ
−びパラニトロアニリン遊離量の平均値に基づき、つぎ
のとおり表示した。

−・　遊離量く５ナノモル／７Ｚ１２ ±　：　遊離量５〜〈１０ナノモルｍＱ４−　・　遊離
量ｌＯ〜〈２０ナノモル／肩Ｑモ＋。遊離４２０〜〈４
０ナノモル／ＭＱ＋←＋：　遊離量４０〜く８０ナノモ
ル／λＱ結果を第２表に示す。表中の添加剤の略号はつ
ぎのとおりである。

ｎＯ：添加剤無添加 Ｃｙｓ　　　：　システィン塩酸塩 ＤＴＴ　　：　ジヂオスレイトール ＭＥ　　　２−メルカプトエタノール Ｉ）ＦＰ：　ジイソプロピルフルオルリン酸Ｅ　Ｄ　Ｔ
　Ａ　：エチレンジアミン四酢酸ＥＧＴＡ：エチレング
リコールビス（β−アミノエヂルエーテル）−Ｎ、Ｎ、
Ｎ、Ｎ−四酢酸第２表 Ｃｙｓｌｌ、ＤＴＴ、ＭＥ：　　終濃度１０ｍＭＤ　Ｆ
ｌ）　：　　終濃度２ｍＭ ＥＤＴＡ、ＥＧＴＡ：終濃度２０ｍＭ 第２表に示すごとく、キレート剤を用いることにより、
トレボネーマ・デンテイコーラを特異的に検出すること
ができる。

及狂上 臨床所見との相関−■ 臨床所見上、健常であると認められる者１５名および歯
周炎患者２０名から、各々、滅菌スケーラ−により歯肉
縁下歯垢検体を採取し、リンガ−液１．５肩Ｑに分散し
菌懸濁液を調製した。この菌懸濁液５．７μＱをスライ
ドガラス上におき、直径２２ｎ＋＋＋＋のカバーガラス
をのせ、周囲をシールした後、暗視野顕微鏡下で細菌の
形態により、スピロヘーターを選び、その数をＩＯ視野
数えた。また、このリンガ−液０　、５　ｚＱを、実験
２と同様の反応系を用い、同様にして氷解活性を測定し
た。

添加剤しては、ＥＤＴＡを実験２と同様の濃度で用いた
。

結果を第２図および第３図に示す。

第２図および第３図に示すごとく、氷解活性は添加剤を
加えることにより、スピロヘーター量、臨床所見と相関
する。

実施例１ ベンゾイル−アルギニン−ｐ−ニトロアニリドの２０ｍ
Ｍ蒸留水溶液を調製し、基質溶液とした。

０．２Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐｌ−１７、０）を調整
し、緩衝液として用いた。

４０ｍＭＥＤＴＡを含有する蒸留水溶液を調製し、添加
剤溶液とした。

これらを組合わせて、本発明の歯周病原性菌検査薬キッ
トとした。

このキットは、つぎのようにして歯周疾患の診断あるい
は予測に用いることができる。

被検者の歯肉溝にペーパーポイントを３０秒間挿入して
検体を採取する。基質溶液０　、　Ｉ　、！＋１！およ
び緩衝液０　、９　ｙｔ（ｌを混合し、これに検体を添
加剤溶液で懸濁し２０分間放置したものを１ｚ（ｌ加え
、３７℃で一昼夜反応させる。反応終了後、色調を肉眼
観察する。検体を添加しない対照と比較し、褐色の強弱
を判定する。黄色の呈色はトレポネーマ・デンティコー
ラの感染を示す。

実施例２ Ｎ−ベンゾイル−アルギニン−４−メトキシ−２−ナフ
チルアミド５ミリモルを、ペーパーディスク（径０　、
６　ｃｍ）に含浸させて基質試薬を調整した。

０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，２）を調整し、緩衝液
として用いた。

１０％ツイーン２０を含有する１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４
，０）にジアゾニウム塩ガーネットＣＩ’３Ｃを０　、
５　ｍｇ／ｘ（ｌの濃度で溶解し、発色試薬とした。

これらと、実施例１におけると同様に調製した添加剤溶
液を組合せて、本発明の歯周病原性菌検査薬キットとし
た。

このキットは、つぎのようにして歯周疾患の検査あるい
は予測に用いることができる。

緩衝液４００μｇと添加剤溶液４００μＱをバイアル瓶
に入れ、これに被検者から採取した混合唾液１００μｇ
を加え、さら龜基質試薬のペーパーディスクを加え、３
７℃で４時間反応さける。反応終了後、発色試薬を加え
、実施例１と同様に肉眼観察して判定する。赤色の呈色
はトレボネーマ・デンティコーラの感染を意味する。

実施例３ Ｎ−カルボベンゾキシ−アルギニン−β−ナフ　　゛デ
ルアミド５ミリモルをアンプル（内径５ｍｍ、長さ３　
ｃｍ）内で凍結乾燥さ仕て基質試薬とした。

０．０５Ｍトリス−塩酸塩緩衝液（ｐ［１７，５）を調
製し、緩衝液とした。

１０％ツイーン２０を含有する１Ｍ酢酸緩衝液（ｐｔｉ
　４　、２　）にジアゾニウム塩ファーストブルー■３
を１ｍ９／ｍ＆の濃度で溶解し、発色試薬とした。これ
らと実施例１におけろと同様に調製した添加剤溶液を組
合せて、本発明の歯周病原性菌検査薬キットとした。

このキットは、つぎのようにして歯周疾患の検査あるい
は予測に用いることができろ。

被験音の歯肉溝にペーパーストリップを３０秒間挿入し
て検体を採取する。緩衝液１１１（７を基質含有アンプ
ルに入れ基質を溶解させる。これに検体を添加剤溶液で
懸濁し２０分間放置したしのを１ｍＱ加え、３７°Ｃで
一昼夜反応さＵ−る。反応終了後、発色試薬０　、８　
ｍＱを加え、実施例２と同様に肉眼観察して判定する。

実施例４ ベンゾイル−アルギニン−ｐ−ニトロフェノールを０．
０５Ｍリン酸緩衝液（ｐ１１７　、２　）で２００ナノ
モル／ｆｆｃとなるように調整し、これに添加剤として
４００ナノモルＥＧＴＡを加え、その１００μρを円形
ろ紙（径１　ｃｍ）に含浸乾燥さけ、キュヘット（内径
１　ｃｍ）底に挿入したものを、本発明の南周病原性閑
検昂薬キットとした。

このキットは、つぎのようにして歯周疾患の検査あるい
は予測に用いることができる。

被験前から採取した混合唾液１００μＱをキュベツトに
加え、３７℃で４時間反応させる。反応終了後、実施例
１と同様に肉眼観察して判定する。

発明の効果 本発明の検査薬を用いれば、特殊な設備や高度な技術を
必要と仕ずに、簡便かつ迅速に歯周疾患の罹串や進行を
客観的に診断あるいは予測することができ、これにより
、歯周疾廖の治療や予防を適切に行なうことができる。

【図面の簡単な説明】

第１図は、各種添加剤存在下でのベンゾイル−アルギニ
ン−ｐ−ニトロアニリド氷解活性を測定した結果を示す
グラフ、第２図および第３図は、各々、ベンゾイル−ア
ルギニン−ｐ−ニトロアニリド氷解活性とスピロヘータ
ー数の相関を示すグラフである。 特許出願人　サンスター株式会社　はか１名代理人弁理
士青山　葆　はか１名

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）検体中のペプチダーゼ様酵素活性を測定すること
   により、歯周病原性菌を検出するための検査薬であって
   、 式：Ｘ−Ａｒｇ−Ｙ［１］ ［式中、Ａｒｇはアルギニン残基、Ｘはフェニル骨格を
   持つアミノ酸保護基、Ｙはアルギニン残基のＣ末端に結
   合する発色基を意味する］ で示される化合物を該酵素の基質とし、これにキレート
   剤を添加してなることを特徴とする歯周病原性菌検査薬
   。
2. （２）該キレート剤がエチレンジアミン四酢酸またはエ
   チレングリコールビス（β−アミノエチルエーテル）−
   Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ−四酢酸である前記第（１）項の歯周病
   原性菌検査薬。