JPH0666725A - 標識色素とその前駆体、その合成方法および標識色素を用いたメタンフェタミンの検出方法 - Google Patents
標識色素とその前駆体、その合成方法および標識色素を用いたメタンフェタミンの検出方法Info
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- JPH0666725A JPH0666725A JP4221202A JP22120292A JPH0666725A JP H0666725 A JPH0666725 A JP H0666725A JP 4221202 A JP4221202 A JP 4221202A JP 22120292 A JP22120292 A JP 22120292A JP H0666725 A JPH0666725 A JP H0666725A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 メタンフェタミンを高感度で検出できる標識
色素、その合成方法、その前駆体、及び、メタンフェタ
ミンの高感度の検出方法を提供する。 【構成】 化７で示される標識色素と抗メタンフェタミ
ン抗体との混合燐酸緩衝溶液を調整し、励起波長600nm
で660nm の蛍光強度を測定する。次に、この溶液にメタ
ンフェタミンの燐酸緩衝溶液を加え同様に蛍光強度を測
定し、蛍光強度の変化率を求める。 【化７】
色素、その合成方法、その前駆体、及び、メタンフェタ
ミンの高感度の検出方法を提供する。 【構成】 化７で示される標識色素と抗メタンフェタミ
ン抗体との混合燐酸緩衝溶液を調整し、励起波長600nm
で660nm の蛍光強度を測定する。次に、この溶液にメタ
ンフェタミンの燐酸緩衝溶液を加え同様に蛍光強度を測
定し、蛍光強度の変化率を求める。 【化７】
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、覚醒剤の有効成分であ
るメタンフェタミン（以下ＭＡと略称する。）の免疫的
検出に有用な標識色素、すなわちペンタメチンシアニン
誘導体（以下ＡＢＭＡ−ＩＣ５と略称する。）とその合
成方法、その合成上必要不可欠な前駆体（中間体）、す
なわちトリメチルインドレニウム塩（以下ＡＢＭＡ−Ｔ
ＭＩと略称する。）ならびにアミノブチルメタンフェタ
ミンのハロゲン化アセチル誘導体（以下ＸＡｃＡＢＭＡ
と略称する。）、およびＡＢＭＡ−ＩＣ５を用いたＭＡ
の検出方法に関するものである。
るメタンフェタミン（以下ＭＡと略称する。）の免疫的
検出に有用な標識色素、すなわちペンタメチンシアニン
誘導体（以下ＡＢＭＡ−ＩＣ５と略称する。）とその合
成方法、その合成上必要不可欠な前駆体（中間体）、す
なわちトリメチルインドレニウム塩（以下ＡＢＭＡ−Ｔ
ＭＩと略称する。）ならびにアミノブチルメタンフェタ
ミンのハロゲン化アセチル誘導体（以下ＸＡｃＡＢＭＡ
と略称する。）、およびＡＢＭＡ−ＩＣ５を用いたＭＡ
の検出方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】ＭＡと蛍光物質とを化学的に結合した標
識色素として、特開平３−２２３６７３号公報に記載さ
れているように、ＭＡにダンシル基を結合した化合物が
提案されている。
識色素として、特開平３−２２３６７３号公報に記載さ
れているように、ＭＡにダンシル基を結合した化合物が
提案されている。
【０００３】ダンシル化したＭＡ（以下ＤＮＳ−ＭＡと
略称する。）は330nm の励起で525nm の蛍光を発し、抗
ＭＡ抗体と結合することにより、その蛍光強度が変化す
ることが知られている。
略称する。）は330nm の励起で525nm の蛍光を発し、抗
ＭＡ抗体と結合することにより、その蛍光強度が変化す
ることが知られている。
【０００４】あらかじめ抗ＭＡ抗体にＤＮＳ−ＭＡを結
合させておき、そこにＭＡを加えると、ＭＡが抗体と結
合するのにともなってＤＮＳ−ＭＡが抗体から脱離し、
525nm の蛍光強度が変化する。
合させておき、そこにＭＡを加えると、ＭＡが抗体と結
合するのにともなってＤＮＳ−ＭＡが抗体から脱離し、
525nm の蛍光強度が変化する。
【０００５】その強度変化を測定することによって、Ｍ
Ａを検出することができる。
Ａを検出することができる。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、525nm
付近の蛍光を持つ物質は天然に多く存在するため、これ
らの不純物が混入した場合、上述のＤＮＳ−ＭＡを用い
た測定方法では、ＭＡの検出が困難であった。
付近の蛍光を持つ物質は天然に多く存在するため、これ
らの不純物が混入した場合、上述のＤＮＳ−ＭＡを用い
た測定方法では、ＭＡの検出が困難であった。
【０００７】したがって、混合物中のＭＡを高感度で検
出するには、不純物の影響を受けにくい長波長領域に蛍
光を持つ標識色素を用いる事が好ましい。本発明は、測
定対象物質中に含まれているＭＡを高感度で検出でき、
長波長領域に蛍光を持つペンタメチンシアニン誘導体か
らなる標識色素ならびにその合成方法を提供すること、
また、前記ペンタメチンシアニン誘導体の合成に用いる
前駆体として、ＭＡ分子と結合したトリメチルインドレ
ニウム塩、更には、前記トリメチルインドレニウム塩の
合成に用いる前駆体として、アミノブチルメタンフェタ
ミンのハロゲン化アセチル誘導体を提供すること、およ
び、前記ペンタメチンシアニン誘導体からなる標識色素
を用いた高感度のＭＡの検出方法を提供することを目的
とする。
出するには、不純物の影響を受けにくい長波長領域に蛍
光を持つ標識色素を用いる事が好ましい。本発明は、測
定対象物質中に含まれているＭＡを高感度で検出でき、
長波長領域に蛍光を持つペンタメチンシアニン誘導体か
らなる標識色素ならびにその合成方法を提供すること、
また、前記ペンタメチンシアニン誘導体の合成に用いる
前駆体として、ＭＡ分子と結合したトリメチルインドレ
ニウム塩、更には、前記トリメチルインドレニウム塩の
合成に用いる前駆体として、アミノブチルメタンフェタ
ミンのハロゲン化アセチル誘導体を提供すること、およ
び、前記ペンタメチンシアニン誘導体からなる標識色素
を用いた高感度のＭＡの検出方法を提供することを目的
とする。
【０００８】
【課題を解決するための手段】上記課題を解決するため
に、本発明は次の構成を有する。 （１）下記式（化４）で示されるペンタメチンシアニン
誘導体からなる標識色素。
に、本発明は次の構成を有する。 （１）下記式（化４）で示されるペンタメチンシアニン
誘導体からなる標識色素。
【０００９】
【化４】
【００１０】但し、ＸはＣｌ、Ｂｒ、ＩまたはＣＨ3 Ｃ
ＯＯのいずれかを示す。 （２）下記式（化５）で示されるトリメチルインドレニ
ウム塩。
ＯＯのいずれかを示す。 （２）下記式（化５）で示されるトリメチルインドレニ
ウム塩。
【００１１】
【化５】
【００１２】但し、ＸはＣｌ、ＢｒまたはＩのいずれか
を示す。 （３）下記式（化６）で示されるアミノブチルメタンフ
ェタミンのハロゲン化アセチル誘導体。
を示す。 （３）下記式（化６）で示されるアミノブチルメタンフ
ェタミンのハロゲン化アセチル誘導体。
【００１３】
【化６】
【００１４】但し、ＸはＣｌ、ＢｒまたはＩのいずれか
を示す。 （４）前記（２）項に記載のトリメチルインドレニウム
塩と、テトラメトキシプロパンとを有機溶媒に溶解し、
加熱、濃縮した後、酢酸を加えて再び加熱、濃縮するこ
とを特徴とする前記（１）項に記載のペンタメチンシア
ニン誘導体の合成方法。
を示す。 （４）前記（２）項に記載のトリメチルインドレニウム
塩と、テトラメトキシプロパンとを有機溶媒に溶解し、
加熱、濃縮した後、酢酸を加えて再び加熱、濃縮するこ
とを特徴とする前記（１）項に記載のペンタメチンシア
ニン誘導体の合成方法。
【００１５】（５）前記（１）項に記載のペンタメチン
シアニン誘導体と抗メタンフェタミン抗体とを含む緩衝
溶液の蛍光強度と、その緩衝溶液に測定対象物質を加え
た時の蛍光強度との強度変化を測定することを特徴とす
る測定対象物質中に含まれるメタンフェタミンの検出方
法。
シアニン誘導体と抗メタンフェタミン抗体とを含む緩衝
溶液の蛍光強度と、その緩衝溶液に測定対象物質を加え
た時の蛍光強度との強度変化を測定することを特徴とす
る測定対象物質中に含まれるメタンフェタミンの検出方
法。
【００１６】（６）蛍光強度が、波長が600nm から700n
m の蛍光の蛍光強度である前記（５）項に記載のメタン
フェタミンの検出方法。
m の蛍光の蛍光強度である前記（５）項に記載のメタン
フェタミンの検出方法。
【００１７】
【作用】本発明の前記（１）の化学式（化４）で示され
るペンタメチンシアニン誘導体からなる標識色素ＡＢＭ
Ａ−ＩＣ５は、長波長領域（600nm 〜700nm ）に蛍光を
持つ。そして、ＡＢＭＡ−ＩＣ５は２個のＭＡ分子と結
合しているため、抗ＭＡ抗体に対してアフィニティーを
有するが、その値はＭＡの場合ほど高くない。
るペンタメチンシアニン誘導体からなる標識色素ＡＢＭ
Ａ−ＩＣ５は、長波長領域（600nm 〜700nm ）に蛍光を
持つ。そして、ＡＢＭＡ−ＩＣ５は２個のＭＡ分子と結
合しているため、抗ＭＡ抗体に対してアフィニティーを
有するが、その値はＭＡの場合ほど高くない。
【００１８】したがって、ＭＡが存在しない場合には、
ＡＢＭＡ−ＩＣ５は抗ＭＡ抗体と結合して蛍光強度が変
化するが、そこにＭＡが加わると、抗体と結合していた
ＡＢＭＡ−ＩＣ５がアフィニティーの高いＭＡと置換
し、置換した量に応じて蛍光強度が初期の蛍光強度に近
づく。この蛍光強度変化を測定することによってＭＡを
検出できるが、本発明のＡＢＭＡ−ＩＣ５からなる標識
色素は、長波長領域（600 〜700nm)に蛍光を持つ標識色
素であるので、不純物の影響を受けにくく高感度でＭＡ
を検出することが容易な標識色素を提供できる。
ＡＢＭＡ−ＩＣ５は抗ＭＡ抗体と結合して蛍光強度が変
化するが、そこにＭＡが加わると、抗体と結合していた
ＡＢＭＡ−ＩＣ５がアフィニティーの高いＭＡと置換
し、置換した量に応じて蛍光強度が初期の蛍光強度に近
づく。この蛍光強度変化を測定することによってＭＡを
検出できるが、本発明のＡＢＭＡ−ＩＣ５からなる標識
色素は、長波長領域（600 〜700nm)に蛍光を持つ標識色
素であるので、不純物の影響を受けにくく高感度でＭＡ
を検出することが容易な標識色素を提供できる。
【００１９】また、前記化学式（化５）で示されるトリ
メチルインドレニウム塩（ＡＢＭＡ−ＴＭＩ）は、活性
メチル基をもった４級インモニウム塩であるので、本発
明の標識色素であるＡＢＭＡ−ＩＣ５を合成するのに有
用な前駆体（中間体）を提供できる。また、ＡＢＭＡ−
ＩＣ５の様なペンタメチンシアニン誘導体のみならず、
トリメチンシアニン誘導体やメロシアニン誘導体等、種
々の蛍光波長を持つ化合物を作製することが可能とな
る。
メチルインドレニウム塩（ＡＢＭＡ−ＴＭＩ）は、活性
メチル基をもった４級インモニウム塩であるので、本発
明の標識色素であるＡＢＭＡ−ＩＣ５を合成するのに有
用な前駆体（中間体）を提供できる。また、ＡＢＭＡ−
ＩＣ５の様なペンタメチンシアニン誘導体のみならず、
トリメチンシアニン誘導体やメロシアニン誘導体等、種
々の蛍光波長を持つ化合物を作製することが可能とな
る。
【００２０】また、前記化学式（化６）で示されるアミ
ノブチルメタンフェタミンのハロゲン化アセチル誘導体
（ＸＡｃＡＢＭＡ）は、脱離基として有用なハロゲンを
有しているため、反応性に富んでいる。すなわちトリメ
チルインドレニンと結合可能な官能基を有しており、ト
リメチルインドレニンと容易に反応し、４級インモニウ
ム塩を高収率で得ることができる。よって、前記化学式
（化５）で示されるトリメチルインドレニウム塩（ＡＢ
ＭＡ−ＴＭＩ）を合成するのに有用な前駆体（中間体）
を提供できる。また、ＸＡｃＡＢＭＡはトリメチルイン
ドレニンのみならず、オキサゾ−ルあるいはチアゾ−ル
と反応して、ＡＢＭＡ−ＴＭＩの類似物の合成にも適用
できる。
ノブチルメタンフェタミンのハロゲン化アセチル誘導体
（ＸＡｃＡＢＭＡ）は、脱離基として有用なハロゲンを
有しているため、反応性に富んでいる。すなわちトリメ
チルインドレニンと結合可能な官能基を有しており、ト
リメチルインドレニンと容易に反応し、４級インモニウ
ム塩を高収率で得ることができる。よって、前記化学式
（化５）で示されるトリメチルインドレニウム塩（ＡＢ
ＭＡ−ＴＭＩ）を合成するのに有用な前駆体（中間体）
を提供できる。また、ＸＡｃＡＢＭＡはトリメチルイン
ドレニンのみならず、オキサゾ−ルあるいはチアゾ−ル
と反応して、ＡＢＭＡ−ＴＭＩの類似物の合成にも適用
できる。
【００２１】また、本発明の標識色素であるＡＢＭＡ−
ＩＣ５は、前記化学式（化５）で示されるトリメチルイ
ンドレニウム塩（ＡＢＭＡ−ＴＭＩ）と、テトラメトキ
シプロパンとを有機溶媒に溶解し、加熱、濃縮した後、
酢酸を加えて再び加熱、濃縮することにより容易に合成
することができ、ＡＢＭＡ−ＩＣ５の新規な合成方法を
提供できる。
ＩＣ５は、前記化学式（化５）で示されるトリメチルイ
ンドレニウム塩（ＡＢＭＡ−ＴＭＩ）と、テトラメトキ
シプロパンとを有機溶媒に溶解し、加熱、濃縮した後、
酢酸を加えて再び加熱、濃縮することにより容易に合成
することができ、ＡＢＭＡ−ＩＣ５の新規な合成方法を
提供できる。
【００２２】また、本発明のメタンフェタミンの検出方
法は、標識色素であるＡＢＭＡ−ＩＣ５と抗メタンフェ
タミン抗体とを含む緩衝溶液の蛍光強度と、その緩衝溶
液に測定対象物質を加えた時の蛍光強度との強度変化を
測定することを特徴とする。前述の如く標識色素ＡＢＭ
Ａ−ＩＣ５は、長波長領域に蛍光を持つ。そして、ＡＢ
ＭＡ−ＩＣ５は２個のＭＡ分子と結合しているため、抗
ＭＡ抗体に対してアフィニティーを有するが、その値は
ＭＡの場合ほど高くない。
法は、標識色素であるＡＢＭＡ−ＩＣ５と抗メタンフェ
タミン抗体とを含む緩衝溶液の蛍光強度と、その緩衝溶
液に測定対象物質を加えた時の蛍光強度との強度変化を
測定することを特徴とする。前述の如く標識色素ＡＢＭ
Ａ−ＩＣ５は、長波長領域に蛍光を持つ。そして、ＡＢ
ＭＡ−ＩＣ５は２個のＭＡ分子と結合しているため、抗
ＭＡ抗体に対してアフィニティーを有するが、その値は
ＭＡの場合ほど高くない。
【００２３】したがって、ＭＡが存在しない場合には、
ＡＢＭＡ−ＩＣ５は抗ＭＡ抗体と結合して蛍光強度が変
化するが、そこにＭＡが加わると、抗体と結合していた
ＡＢＭＡ−ＩＣ５がアフィニティーの高いＭＡと置換
し、置換した量に応じて蛍光強度が初期の蛍光強度に近
づく。この蛍光強度変化を測定することによってＭＡを
検出できるが、本発明のＡＢＭＡ−ＩＣ５からなる標識
色素は、長波長領域に蛍光を持つ標識色素であるので、
不純物の影響を受けにくく高感度でＭＡを検出すること
が可能なメタンフェタミンの検出方法を提供できる。
ＡＢＭＡ−ＩＣ５は抗ＭＡ抗体と結合して蛍光強度が変
化するが、そこにＭＡが加わると、抗体と結合していた
ＡＢＭＡ−ＩＣ５がアフィニティーの高いＭＡと置換
し、置換した量に応じて蛍光強度が初期の蛍光強度に近
づく。この蛍光強度変化を測定することによってＭＡを
検出できるが、本発明のＡＢＭＡ−ＩＣ５からなる標識
色素は、長波長領域に蛍光を持つ標識色素であるので、
不純物の影響を受けにくく高感度でＭＡを検出すること
が可能なメタンフェタミンの検出方法を提供できる。
【００２４】また、前記検出方法として、蛍光強度が、
波長が600nm から700nm の蛍光の蛍光強度を測定するこ
とにより、525nm 付近の蛍光を持つ物質は天然に多く存
在するが、これらの不純物が混入した場合でも、不純物
の影響を受けにくく、またこの波長範囲は比較的蛍光強
度が強く、高感度のＭＡの検出方法を提供することがで
きる。
波長が600nm から700nm の蛍光の蛍光強度を測定するこ
とにより、525nm 付近の蛍光を持つ物質は天然に多く存
在するが、これらの不純物が混入した場合でも、不純物
の影響を受けにくく、またこの波長範囲は比較的蛍光強
度が強く、高感度のＭＡの検出方法を提供することがで
きる。
【００２５】
【実施例】本発明の標識色素は、高感度でＭＡの免疫的
測定を行うため、ＭＡの類似体であるアミノブチルメタ
ンフェタミン（以下ＡＢＭＡと略称する。）と蛍光物質
とを結合させた標識色素、すなわちＡＢＭＡ−ＩＣ５か
らなる。
測定を行うため、ＭＡの類似体であるアミノブチルメタ
ンフェタミン（以下ＡＢＭＡと略称する。）と蛍光物質
とを結合させた標識色素、すなわちＡＢＭＡ−ＩＣ５か
らなる。
【００２６】本発明に供される蛍光物質は、長波長領域
に蛍光を持つペンタメチンシアニンが好ましく用いられ
る。また、本発明のＡＢＭＡ−ＴＭＩは、トリメチルイ
ンドレニンとＸＡｃＡＢＭＡとを反応させて合成したイ
ンモニウム塩で、ＡＢＭＡ−ＩＣ５を合成する際の前駆
体である。
に蛍光を持つペンタメチンシアニンが好ましく用いられ
る。また、本発明のＡＢＭＡ−ＴＭＩは、トリメチルイ
ンドレニンとＸＡｃＡＢＭＡとを反応させて合成したイ
ンモニウム塩で、ＡＢＭＡ−ＩＣ５を合成する際の前駆
体である。
【００２７】トリメチルインドレニンは、他の含窒素ヘ
テロ環化合物よりもハロゲン化物との反応性がよいため
ＸＡｃＡＢＭＡとを反応させる場合の好ましい原料とな
る。さらに、本発明のＸＡｃＡＢＭＡは、ＡＢＭＡ−Ｔ
ＭＩ等のような、ＭＡの分子構造を含む４級インモニウ
ム塩を合成するために、ＡＢＭＡにハロゲン化アセチル
基を導入した化合物である。
テロ環化合物よりもハロゲン化物との反応性がよいため
ＸＡｃＡＢＭＡとを反応させる場合の好ましい原料とな
る。さらに、本発明のＸＡｃＡＢＭＡは、ＡＢＭＡ−Ｔ
ＭＩ等のような、ＭＡの分子構造を含む４級インモニウ
ム塩を合成するために、ＡＢＭＡにハロゲン化アセチル
基を導入した化合物である。
【００２８】ハロゲン化アセチル基は、カルボニル基の
α位にハロゲンがあるため、プロピオニル基やブチリル
基よりもトリメチルインドレニンとの反応性がよいの
で、ＸＡｃＡＢＭＡは前記化学式（化５）で示されるト
リメチルインドレニウム塩（ＡＢＭＡ−ＴＭＩ）を合成
するのに有用な前駆体となる。
α位にハロゲンがあるため、プロピオニル基やブチリル
基よりもトリメチルインドレニンとの反応性がよいの
で、ＸＡｃＡＢＭＡは前記化学式（化５）で示されるト
リメチルインドレニウム塩（ＡＢＭＡ−ＴＭＩ）を合成
するのに有用な前駆体となる。
【００２９】ハロゲンは、良好な脱離基である塩素、臭
素、ヨウ素であるのが好ましい。前記（化６）で示され
るＸＡｃＡＢＭＡは、例えば、０．０１〜３ｍｏｌ／ｌ
のＡＢＭＡの有機溶媒、例えばベンゼン溶液中に、約
０．５〜１等量の塩化ブロモアセチルを加え、およそ０
〜５℃で約３０〜６０分撹拌した後、生じた沈殿を瀘過
して除き、ベンゼン層は濃縮した後精製し、沈殿はその
アルカリ溶液をクロロホルムなどで抽出した後精製する
ことによって得ることができる。
素、ヨウ素であるのが好ましい。前記（化６）で示され
るＸＡｃＡＢＭＡは、例えば、０．０１〜３ｍｏｌ／ｌ
のＡＢＭＡの有機溶媒、例えばベンゼン溶液中に、約
０．５〜１等量の塩化ブロモアセチルを加え、およそ０
〜５℃で約３０〜６０分撹拌した後、生じた沈殿を瀘過
して除き、ベンゼン層は濃縮した後精製し、沈殿はその
アルカリ溶液をクロロホルムなどで抽出した後精製する
ことによって得ることができる。
【００３０】また、前記化学式（化５）で示されるトリ
メチルインドレニウム塩（ＡＢＭＡ−ＴＭＩ）を合成す
るには、例えば、ＸＡｃＡＢＭＡと、約０．５〜２等量
モルのトリメチルインドレニンとを混合し、およそ１０
０〜１６０℃で約１〜５時間加熱することによって得る
ことができる。
メチルインドレニウム塩（ＡＢＭＡ−ＴＭＩ）を合成す
るには、例えば、ＸＡｃＡＢＭＡと、約０．５〜２等量
モルのトリメチルインドレニンとを混合し、およそ１０
０〜１６０℃で約１〜５時間加熱することによって得る
ことができる。
【００３１】また、本発明の標識色素であるＡＢＭＡ−
ＩＣ５を合成するには、例えば、約０．０１〜１ｍｏｌ
／ｌの前記化学式（化５）で示されるトリメチルインド
レニウム塩（ＡＢＭＡ−ＴＭＩ）の塩基性の有機溶媒溶
液、例えば、ピリジン溶液に、前記トリメチルインドレ
ニウム塩（ＡＢＭＡ−ＴＭＩ）の約０．５〜２等量モル
に相当するテトラメトキシプロパンを加え、通常は常圧
でおよそ１１０〜１５０℃に加熱、濃縮し、反応溶液の
体積がおよそ１／５〜１／２０程度になったところで、
最初の濃度（約０．０１〜１ｍｏｌ／ｌ）と同じになる
ように酢酸を加え、再び例えば常圧で約１１０〜１５０
℃に加熱、濃縮することによって得ることができる。
ＩＣ５を合成するには、例えば、約０．０１〜１ｍｏｌ
／ｌの前記化学式（化５）で示されるトリメチルインド
レニウム塩（ＡＢＭＡ−ＴＭＩ）の塩基性の有機溶媒溶
液、例えば、ピリジン溶液に、前記トリメチルインドレ
ニウム塩（ＡＢＭＡ−ＴＭＩ）の約０．５〜２等量モル
に相当するテトラメトキシプロパンを加え、通常は常圧
でおよそ１１０〜１５０℃に加熱、濃縮し、反応溶液の
体積がおよそ１／５〜１／２０程度になったところで、
最初の濃度（約０．０１〜１ｍｏｌ／ｌ）と同じになる
ように酢酸を加え、再び例えば常圧で約１１０〜１５０
℃に加熱、濃縮することによって得ることができる。
【００３２】本発明の標識色素であるＡＢＭＡ−ＩＣ５
を用いた、測定対象物質中に含まれるメタンフェタミン
の検出方法はＡＢＭＡ−ＩＣ５の蛍光強度変化を測定す
るものであるため、測定する蛍光の波長は強度の強い60
0nm から700nm で行うのが好ましく、なかでも、660nm
の蛍光は最も強いので好ましい。また、この様な長波長
を用いて測定を行うことは、前述したように、不純物が
混入されていても、その影響が少なく、高感度でメタン
フェタミンの検出ができるので好ましい。
を用いた、測定対象物質中に含まれるメタンフェタミン
の検出方法はＡＢＭＡ−ＩＣ５の蛍光強度変化を測定す
るものであるため、測定する蛍光の波長は強度の強い60
0nm から700nm で行うのが好ましく、なかでも、660nm
の蛍光は最も強いので好ましい。また、この様な長波長
を用いて測定を行うことは、前述したように、不純物が
混入されていても、その影響が少なく、高感度でメタン
フェタミンの検出ができるので好ましい。
【００３３】以下具体的実施例を挙げて、本発明をさら
に詳しく説明する。なお、ハロゲンは臭素の例、蛍光の
測定波長は660nm の例である。 実施例１ ＢｒＡｃＡＢＭＡの合成 化６（但し、ＸはＢｒ）の構造を持つＢｒＡｃＡＢＭＡ
を以下に示す方法で合成した。
に詳しく説明する。なお、ハロゲンは臭素の例、蛍光の
測定波長は660nm の例である。 実施例１ ＢｒＡｃＡＢＭＡの合成 化６（但し、ＸはＢｒ）の構造を持つＢｒＡｃＡＢＭＡ
を以下に示す方法で合成した。
【００３４】９g(40.91mmol)のＡＢＭＡを40mlの乾燥ベ
ンゼンに溶解し、５℃で撹拌しながら3.22g(20.45mmol)
の塩化ブロモアセチルを滴下した。５℃で１時間撹拌し
た後、生じた白色沈澱を濾過して除き、沈澱はベンゼン
でよく洗浄した。
ンゼンに溶解し、５℃で撹拌しながら3.22g(20.45mmol)
の塩化ブロモアセチルを滴下した。５℃で１時間撹拌し
た後、生じた白色沈澱を濾過して除き、沈澱はベンゼン
でよく洗浄した。
【００３５】濾液は、減圧下で濃縮した後、シリカゲル
薄層クロマトグラフィー（以下ＴＬＣと略す、展開溶
媒：メタノ−ル）を用いて精製し、564mg のブロモアセ
チルＡＢＭＡを得た。
薄層クロマトグラフィー（以下ＴＬＣと略す、展開溶
媒：メタノ−ル）を用いて精製し、564mg のブロモアセ
チルＡＢＭＡを得た。
【００３６】一方、沈澱は100ml の１Ｎ塩酸に溶解し、
撹拌しながら10Ｎの水酸化ナトリウム水溶液を加えて、
アルカリ性にした。クロロホルムで３回抽出した後、無
水硫酸ナトリウムで乾燥した。
撹拌しながら10Ｎの水酸化ナトリウム水溶液を加えて、
アルカリ性にした。クロロホルムで３回抽出した後、無
水硫酸ナトリウムで乾燥した。
【００３７】減圧下でクロロホルムを留去した後、ＴＬ
Ｃ（展開溶媒：メタノ−ル）を用いて精製し、500mg の
ＢｒＡｃＡＢＭＡを得た。以下に得られたＢｒＡｃＡＢ
ＭＡの1 Ｈ- ＮＭＲの特徴的なピークのケミカルシフト
を示す。
Ｃ（展開溶媒：メタノ−ル）を用いて精製し、500mg の
ＢｒＡｃＡＢＭＡを得た。以下に得られたＢｒＡｃＡＢ
ＭＡの1 Ｈ- ＮＭＲの特徴的なピークのケミカルシフト
を示す。
【００３８】1 Ｈ- ＮＭＲ( ＣＤＣｌ3 ) ：δ(ppm) ＝
０．９３（３Ｈ，ｄ，Ｃ−ＣＨ3 ）、２．３０（３Ｈ，
Ｓ，Ｎ−ＣＨ3 ）、４．０２（２Ｈ、Ｓ，ＣＯ−ＣＨ2
−Ｂｒ）。
０．９３（３Ｈ，ｄ，Ｃ−ＣＨ3 ）、２．３０（３Ｈ，
Ｓ，Ｎ−ＣＨ3 ）、４．０２（２Ｈ、Ｓ，ＣＯ−ＣＨ2
−Ｂｒ）。
【００３９】また、ＴＬＣを用いた精製の際に、6.18g
の原料（ＡＢＭＡ）を回収した。なお、本実施例ではハ
ロゲンは臭素であったが、塩素、ヨウ素の場合でも同様
であった。
の原料（ＡＢＭＡ）を回収した。なお、本実施例ではハ
ロゲンは臭素であったが、塩素、ヨウ素の場合でも同様
であった。
【００４０】実施例２ ＡＢＭＡ−ＴＭＩの合成 化５（但し、ＸはＢｒ）の構造を持つＡＢＭＡ−ＴＭＩ
を以下に示す方法で合成した。
を以下に示す方法で合成した。
【００４１】500mg(1.47mmol) のＢｒＡｃＡＢＭＡと28
0mg(1.76mmol) のトリメチルインドレニンとを窒素気流
下、130 ℃で３時間撹拌した。反応混合物を約１mlのメ
タノ−ルに溶解し、これを400ml のジエチルエ−テル中
に滴下した。
0mg(1.76mmol) のトリメチルインドレニンとを窒素気流
下、130 ℃で３時間撹拌した。反応混合物を約１mlのメ
タノ−ルに溶解し、これを400ml のジエチルエ−テル中
に滴下した。
【００４２】生じた沈澱を濾別し、ジエチルエ−テルで
よく洗浄して、443mg のＡＢＭＡ−ＴＭＩを得た。以下
に得られたＡＢＭＡ−ＴＭＩの1 Ｈ- ＮＭＲの特徴的な
ピークのケミカルシフトを示す。
よく洗浄して、443mg のＡＢＭＡ−ＴＭＩを得た。以下
に得られたＡＢＭＡ−ＴＭＩの1 Ｈ- ＮＭＲの特徴的な
ピークのケミカルシフトを示す。
【００４３】1 Ｈ- ＮＭＲ( ＣＤＣｌ3 ) ：δ(ppm) ＝
１．５０（３Ｈ，Ｓ，Ｎ＝Ｃ−ＣＨ 3 ）、１．５５（３
Ｈ，ｄ，Ｃ−ＣＨ3 ）、１．６１（６Ｈ，Ｓ，ＣＭ
ｅ2 ）、２．９３（３Ｈ，Ｓ，Ｎ−ＣＨ3 ）、３．２０
（２Ｈ、Ｓ，ＣＯ−ＣＨ2 −Ｎ+）。
１．５０（３Ｈ，Ｓ，Ｎ＝Ｃ−ＣＨ 3 ）、１．５５（３
Ｈ，ｄ，Ｃ−ＣＨ3 ）、１．６１（６Ｈ，Ｓ，ＣＭ
ｅ2 ）、２．９３（３Ｈ，Ｓ，Ｎ−ＣＨ3 ）、３．２０
（２Ｈ、Ｓ，ＣＯ−ＣＨ2 −Ｎ+）。
【００４４】実施例３ ＡＢＭＡ−ＩＣ５の合成 化４（但し、ＸはＢｒ）の構造を持つＡＢＭＡ−ＩＣ５
を以下に示す方法で合成した。
を以下に示す方法で合成した。
【００４５】300mg(0.60mmol) のＡＢＭＡ−ＴＭＩと99
mg（0.60mmol) のテトラメトキシプロパンとを５mlの乾
燥ピリジンに溶解し、50mlの二口フラスコに入れ、冷却
管を付けないで、バス温130 ℃で30分間にわたって加熱
濃縮した。
mg（0.60mmol) のテトラメトキシプロパンとを５mlの乾
燥ピリジンに溶解し、50mlの二口フラスコに入れ、冷却
管を付けないで、バス温130 ℃で30分間にわたって加熱
濃縮した。
【００４６】ピリジンが0.5ml 程度になったところで５
mlの酢酸を加え、再び30分間にわたって加熱濃縮した。
反応溶液が0.5ml 程度になり、青く呈色したところで室
温に戻し、５mlのベンゼンに溶解した。
mlの酢酸を加え、再び30分間にわたって加熱濃縮した。
反応溶液が0.5ml 程度になり、青く呈色したところで室
温に戻し、５mlのベンゼンに溶解した。
【００４７】ベンゼン溶液を250ml のジエチルエ−テル
中に滴下し、生じた固体を濾別した。これを中圧液体ク
ロマトグラフィー（ローバーカラムＮＨ2 タイプ、展開
溶媒：メタノ−ル／アセトニトリル＝１／５）を用いて
精製し、20mgのＡＢＭＡ−ＩＣ５を得た。以下に得られ
たＡＢＭＡ−ＩＣ５の1 Ｈ- ＮＭＲの特徴的なピークの
ケミカルシフトを示す。
中に滴下し、生じた固体を濾別した。これを中圧液体ク
ロマトグラフィー（ローバーカラムＮＨ2 タイプ、展開
溶媒：メタノ−ル／アセトニトリル＝１／５）を用いて
精製し、20mgのＡＢＭＡ−ＩＣ５を得た。以下に得られ
たＡＢＭＡ−ＩＣ５の1 Ｈ- ＮＭＲの特徴的なピークの
ケミカルシフトを示す。
【００４８】1 Ｈ- ＮＭＲ( ＣＤＣｌ3 ) ：δ(ppm) ＝
１．２５（６Ｈ，ｄ，２Ｃ−ＣＨ3）、１．６５（１２
Ｈ，Ｓ，２ＣＭｅ2 ）、２．９５（６Ｈ，Ｓ，２Ｎ−Ｍ
ｅ）、３．１２（４Ｈ，Ｓ，２ＣＯ−ＣＨ2 −Ｎ）。
１．２５（６Ｈ，ｄ，２Ｃ−ＣＨ3）、１．６５（１２
Ｈ，Ｓ，２ＣＭｅ2 ）、２．９５（６Ｈ，Ｓ，２Ｎ−Ｍ
ｅ）、３．１２（４Ｈ，Ｓ，２ＣＯ−ＣＨ2 −Ｎ）。
【００４９】 実施例４ ＡＢＭＡ−ＩＣ５の蛍光強度変化の測定 ＡＢＭＡ−ＩＣ５（2.95×10-7Ｍ）と抗ＭＡ抗体（4.97
×10-7Ｍ）との混合ＰＢＳ溶液（燐酸緩衝液）を調整
し、この溶液1740μl をとり、25℃で１分間撹拌した
後、励起波長600nm で660nm の蛍光強度を測定した。そ
の蛍光強度は57.74であった。
×10-7Ｍ）との混合ＰＢＳ溶液（燐酸緩衝液）を調整
し、この溶液1740μl をとり、25℃で１分間撹拌した
後、励起波長600nm で660nm の蛍光強度を測定した。そ
の蛍光強度は57.74であった。
【００５０】次に、この溶液に最終濃度10-2.6ＭのＭＡ
／ＰＢＳ溶液140 μl を加え、励起波長600nm で660nm
の蛍光強度を測定した。蛍光強度は39.62 であった。蛍
光強度の変化率は、次のように計算した。
／ＰＢＳ溶液140 μl を加え、励起波長600nm で660nm
の蛍光強度を測定した。蛍光強度は39.62 であった。蛍
光強度の変化率は、次のように計算した。
【００５１】（１−39.62 ／57.54 ）×100 ＝ 31.1 ％ ＭＡの最終濃度が10-3.6Ｍ、10-4.5Ｍ、10-5.2Ｍ、10
-6.2Ｍ、10-6.9Ｍ、10-7 .3Ｍの場合についてもそれぞれ
上記と同様の方法で蛍光強度を測定し、変化率を計算し
た。
-6.2Ｍ、10-6.9Ｍ、10-7 .3Ｍの場合についてもそれぞれ
上記と同様の方法で蛍光強度を測定し、変化率を計算し
た。
【００５２】変化率はそれぞれ31.0％( 10-3.6Ｍ) 、3
0.1％( 10-4.5Ｍ) 、24.6％( 10-5.2Ｍ) 、10.9％( 10
-6.2Ｍ) 、5.2 ％( 10-6.9Ｍ) 、3.1 ％( 10-7.3Ｍ) で
あった。
0.1％( 10-4.5Ｍ) 、24.6％( 10-5.2Ｍ) 、10.9％( 10
-6.2Ｍ) 、5.2 ％( 10-6.9Ｍ) 、3.1 ％( 10-7.3Ｍ) で
あった。
【００５３】
【発明の効果】本発明の前記化学式（化４）で示される
ペンタメチンシアニン誘導体からなる標識色素ＡＢＭＡ
−ＩＣ５は、不純物の影響を受けにくく、高感度でＭＡ
を検出することができる標識色素を提供できる。
ペンタメチンシアニン誘導体からなる標識色素ＡＢＭＡ
−ＩＣ５は、不純物の影響を受けにくく、高感度でＭＡ
を検出することができる標識色素を提供できる。
【００５４】また、前記化学式（化５）で示されるトリ
メチルインドレニウム塩（ＡＢＭＡ−ＴＭＩ）は、本発
明の標識色素であるＡＢＭＡ−ＩＣ５を合成するのに有
用な前駆体である。
メチルインドレニウム塩（ＡＢＭＡ−ＴＭＩ）は、本発
明の標識色素であるＡＢＭＡ−ＩＣ５を合成するのに有
用な前駆体である。
【００５５】また、前記化学式（化６）で示されるアミ
ノブチルメタンフェタミンのハロゲン化アセチル誘導体
（ＸＡｃＡＢＭＡ）は、トリメチルインドレニンと容易
に反応し、４級インモニウム塩を高収率で得ることがで
き、前記化学式（化５）で示されるトリメチルインドレ
ニウム塩（ＡＢＭＡ−ＴＭＩ）を合成するのに有用な前
駆体となる。
ノブチルメタンフェタミンのハロゲン化アセチル誘導体
（ＸＡｃＡＢＭＡ）は、トリメチルインドレニンと容易
に反応し、４級インモニウム塩を高収率で得ることがで
き、前記化学式（化５）で示されるトリメチルインドレ
ニウム塩（ＡＢＭＡ−ＴＭＩ）を合成するのに有用な前
駆体となる。
【００５６】更に、本発明のＡＢＭＡ−ＩＣ５の新規な
合成方法により、ＡＢＭＡ−ＩＣ５の製造が可能となっ
た。また、本発明の合成方法によれば、ＡＢＭＡ−ＩＣ
５を容易に合成できる方法が提供できる。
合成方法により、ＡＢＭＡ−ＩＣ５の製造が可能となっ
た。また、本発明の合成方法によれば、ＡＢＭＡ−ＩＣ
５を容易に合成できる方法が提供できる。
【００５７】また、本発明のメタンフェタミンの検出方
法は、不純物の影響を受けにくく、高感度でＭＡを検出
することが可能なメタンフェタミンの検出方法を提供で
きる。
法は、不純物の影響を受けにくく、高感度でＭＡを検出
することが可能なメタンフェタミンの検出方法を提供で
きる。
【００５８】また、前記検出方法として、蛍光強度が、
波長が600nm から700nm の蛍光の蛍光強度を測定するこ
とにより、不純物の影響を受けにくく、蛍光強度が強
く、高感度のＭＡの検出方法を提供することができる。
波長が600nm から700nm の蛍光の蛍光強度を測定するこ
とにより、不純物の影響を受けにくく、蛍光強度が強
く、高感度のＭＡの検出方法を提供することができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 宮崎 仁誠 大阪府門真市大字門真1006番地 松下電器 産業株式会社内 (72)発明者 光亦 忠泰 大阪府門真市大字門真1006番地 松下電器 産業株式会社内
Claims (6)
- 【請求項１】 下記式（化１）で示されるペンタメチン
シアニン誘導体からなる標識色素。 【化１】 但し、ＸはＣｌ、Ｂｒ、ＩまたはＣＨ3 ＣＯＯのいずれ
かを示す。 - 【請求項２】 下記式（化２）で示されるトリメチルイ
ンドレニウム塩。 【化２】 但し、ＸはＣｌ、ＢｒまたはＩのいずれかを示す。 - 【請求項３】 下記式（化３）で示されるアミノブチル
メタンフェタミンのハロゲン化アセチル誘導体。 【化３】 但し、ＸはＣｌ、ＢｒまたはＩのいずれかを示す。 - 【請求項４】 請求項２記載のトリメチルインドレニウ
ム塩と、テトラメトキシプロパンとを有機溶媒に溶解
し、加熱、濃縮した後、酢酸を加えて再び加熱、濃縮す
ることを特徴とする請求項１記載のペンタメチンシアニ
ン誘導体の合成方法。 - 【請求項５】 請求項１記載のペンタメチンシアニン誘
導体と抗メタンフェタミン抗体とを含む緩衝溶液の蛍光
強度と、その緩衝溶液に測定対象物質を加えた時の蛍光
強度との強度変化を測定することを特徴とする測定対象
物質中に含まれるメタンフェタミンの検出方法。 - 【請求項６】 蛍光強度が、波長が600nm から700nm の
蛍光の蛍光強度である請求項５記載のメタンフェタミン
の検出方法。
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4221202A JP2698730B2 (ja) | 1992-08-20 | 1992-08-20 | 標識色素とその前駆体、その合成方法および標識色素を用いたメタンフェタミンの検出方法 |
| US08/102,426 US5378634A (en) | 1992-08-20 | 1993-08-05 | Labelling color for detecting methamphetamine |
| US08/306,936 US5488114A (en) | 1992-08-20 | 1994-09-16 | Labelling color, method of preparing the same and method for detecting methamphetamine with the color |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4221202A JP2698730B2 (ja) | 1992-08-20 | 1992-08-20 | 標識色素とその前駆体、その合成方法および標識色素を用いたメタンフェタミンの検出方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0666725A true JPH0666725A (ja) | 1994-03-11 |
| JP2698730B2 JP2698730B2 (ja) | 1998-01-19 |
Family
ID=16763074
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4221202A Expired - Fee Related JP2698730B2 (ja) | 1992-08-20 | 1992-08-20 | 標識色素とその前駆体、その合成方法および標識色素を用いたメタンフェタミンの検出方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2698730B2 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008096437A (ja) * | 1995-05-19 | 2008-04-24 | Molecular Probes Inc | メロシアニン染料タンパク質染色 |
| EP2696381A1 (en) | 2012-08-08 | 2014-02-12 | Kabushiki Kaisha Kobe Seiko Sho (Kobe Steel, Ltd.) | Niobium-titanium based superconducting wire |
| CN105548098A (zh) * | 2015-12-03 | 2016-05-04 | 中国科学院上海微系统与信息技术研究所 | 一种检测甲基苯丙胺或/和氯胺酮的荧光探针和检测方法 |
-
1992
- 1992-08-20 JP JP4221202A patent/JP2698730B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008096437A (ja) * | 1995-05-19 | 2008-04-24 | Molecular Probes Inc | メロシアニン染料タンパク質染色 |
| EP2696381A1 (en) | 2012-08-08 | 2014-02-12 | Kabushiki Kaisha Kobe Seiko Sho (Kobe Steel, Ltd.) | Niobium-titanium based superconducting wire |
| CN105548098A (zh) * | 2015-12-03 | 2016-05-04 | 中国科学院上海微系统与信息技术研究所 | 一种检测甲基苯丙胺或/和氯胺酮的荧光探针和检测方法 |
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2698730B2 (ja) | 1998-01-19 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |