JP2653615B2 - 標識色素とその前駆体化合物及び標識色素の製造方法並びに標識色素の使用方法 - Google Patents
標識色素とその前駆体化合物及び標識色素の製造方法並びに標識色素の使用方法Info
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- JP2653615B2 JP2653615B2 JP30521992A JP30521992A JP2653615B2 JP 2653615 B2 JP2653615 B2 JP 2653615B2 JP 30521992 A JP30521992 A JP 30521992A JP 30521992 A JP30521992 A JP 30521992A JP 2653615 B2 JP2653615 B2 JP 2653615B2
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、免疫測定法やその他の
生化学実験に有用な標識色素とその前駆体化合物及び標
識色素の製造方法並びに標識色素の使用方法に関する。
さらに詳しくは、色素標識法に好適なペンタメチンシア
ニン系標識色素とその合成上必要な前駆体、すなわちト
リメチルインドレニウム塩、アセチル誘導体（以下、Ａ
ｃ−ＩＣ５と略称する。）、ヒドロキシ誘導体（以下、
ＯＨ−ＩＣ５と略称する。）とメタンスルホネ−ト誘導
体（以下、Ｍｓ−ＩＣ５と略称する。）およびこれらの
合成法を提供するものである。さらにこの色素を用い
て、メタンフェタミンを免疫法により検出する検出方法
も提供する。
生化学実験に有用な標識色素とその前駆体化合物及び標
識色素の製造方法並びに標識色素の使用方法に関する。
さらに詳しくは、色素標識法に好適なペンタメチンシア
ニン系標識色素とその合成上必要な前駆体、すなわちト
リメチルインドレニウム塩、アセチル誘導体（以下、Ａ
ｃ−ＩＣ５と略称する。）、ヒドロキシ誘導体（以下、
ＯＨ−ＩＣ５と略称する。）とメタンスルホネ−ト誘導
体（以下、Ｍｓ−ＩＣ５と略称する。）およびこれらの
合成法を提供するものである。さらにこの色素を用い
て、メタンフェタミンを免疫法により検出する検出方法
も提供する。
【０００２】
【従来の技術】従来技術の一例として、メタンフェタミ
ン（ＭＡ）を検出対象とした場合について述べる。ＭＡ
と蛍光物質とを化学的に結合した標識色素として、特開
平３−２２３６７３号公報に記載しているように、ＭＡ
にダンシル基を結合した化合物が提案されている。ダン
シル化したＭＡ（以下ＤＮＳ−ＭＡ）は330nm の励起で
525nm の蛍光を発し、抗ＭＡ抗体と結合することによ
り、その蛍光強度が変化することが知られている。あら
かじめ抗ＭＡ抗体にＤＮＳ−ＭＡを結合させておき、そ
こにＭＡを加えると、ＭＡが抗体と結合するのにともな
ってＤＮＳ−ＭＡが抗体から脱離し、525nm の蛍光強度
が変化する。その強度変化を測定することによって、Ｍ
Ａを高感度で検出することができる。
ン（ＭＡ）を検出対象とした場合について述べる。ＭＡ
と蛍光物質とを化学的に結合した標識色素として、特開
平３−２２３６７３号公報に記載しているように、ＭＡ
にダンシル基を結合した化合物が提案されている。ダン
シル化したＭＡ（以下ＤＮＳ−ＭＡ）は330nm の励起で
525nm の蛍光を発し、抗ＭＡ抗体と結合することによ
り、その蛍光強度が変化することが知られている。あら
かじめ抗ＭＡ抗体にＤＮＳ−ＭＡを結合させておき、そ
こにＭＡを加えると、ＭＡが抗体と結合するのにともな
ってＤＮＳ−ＭＡが抗体から脱離し、525nm の蛍光強度
が変化する。その強度変化を測定することによって、Ｍ
Ａを高感度で検出することができる。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、525nm
付近の蛍光を持つ物質は天然に多く存在するため、これ
らの不純物が混入した場合、上述のＤＮＳ−ＭＡを用い
た測定方法では、ＭＡの検出が困難であった。したがっ
て、混合物中のＭＡを高感度で検出するには、不純物の
影響を受けにくい長波長領域に蛍光を持つ標識色素の開
発が要請されていた。
付近の蛍光を持つ物質は天然に多く存在するため、これ
らの不純物が混入した場合、上述のＤＮＳ−ＭＡを用い
た測定方法では、ＭＡの検出が困難であった。したがっ
て、混合物中のＭＡを高感度で検出するには、不純物の
影響を受けにくい長波長領域に蛍光を持つ標識色素の開
発が要請されていた。
【０００４】本発明は、前記従来の問題を解決するた
め、測定対象物質中に含まれているＭＡを高感度で検出
でき、長波長領域に蛍光を持つペンタメチンシアニン系
標識色素とその前駆体化合物及び標識色素の製造方法並
びに標識色素の使用方法を提供することを目的とする。
め、測定対象物質中に含まれているＭＡを高感度で検出
でき、長波長領域に蛍光を持つペンタメチンシアニン系
標識色素とその前駆体化合物及び標識色素の製造方法並
びに標識色素の使用方法を提供することを目的とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】前記目的を達成するた
め、本発明の標識色素は、前記式（化１）で示されるペ
ンタメチンシアニン誘導体からなる（ただし、Ｘは陰イ
オンを示す。）。
め、本発明の標識色素は、前記式（化１）で示されるペ
ンタメチンシアニン誘導体からなる（ただし、Ｘは陰イ
オンを示す。）。
【０００６】次に本発明の標識色素の前駆体化合物は、
前記式（化１）で示されるペンタメチンシアニン誘導体
からなる標識色素の前駆体化合物であって、前記式（化
２）で示されるトリメチルインドレニウム塩、前記式
（化３）で示されるアセチル誘導体、前記式（化４）で
示されるヒドロキシ誘導体、及び前記式（化５）で示さ
れるメタンスルホネート誘導体から選ばれる少なくとも
一つの化合物であることを特徴とする（ただし、Ｘは陰
イオンを示す。）。
前記式（化１）で示されるペンタメチンシアニン誘導体
からなる標識色素の前駆体化合物であって、前記式（化
２）で示されるトリメチルインドレニウム塩、前記式
（化３）で示されるアセチル誘導体、前記式（化４）で
示されるヒドロキシ誘導体、及び前記式（化５）で示さ
れるメタンスルホネート誘導体から選ばれる少なくとも
一つの化合物であることを特徴とする（ただし、Ｘは陰
イオンを示す。）。
【０００７】次に本発明の標識色素の製造方法は、前記
式（化５）で示されるメタンスルホネート誘導体を有機
溶媒に溶解し、不活性ガス存在下でメタンフェタミンを
加えて加熱し、前記式（化１）で示されるペンタメチン
シアニン誘導体を合成するという構成を備えたものであ
る。
式（化５）で示されるメタンスルホネート誘導体を有機
溶媒に溶解し、不活性ガス存在下でメタンフェタミンを
加えて加熱し、前記式（化１）で示されるペンタメチン
シアニン誘導体を合成するという構成を備えたものであ
る。
【０００８】次に本発明の標識色素の使用方法は、前記
式（化１）で示されるペンタメチンシアニン誘導体と抗
メタンフェタミン抗体とを含む緩衝溶液の蛍光強度と、
その緩衝溶液に測定対象物質を加えた時の蛍光強度との
強度変化を測定し、測定対象物質中に含まれるメタンフ
ェタミンの検出するという構成を備えたものである。
式（化１）で示されるペンタメチンシアニン誘導体と抗
メタンフェタミン抗体とを含む緩衝溶液の蛍光強度と、
その緩衝溶液に測定対象物質を加えた時の蛍光強度との
強度変化を測定し、測定対象物質中に含まれるメタンフ
ェタミンの検出するという構成を備えたものである。
【０００９】前記標識色素の使用方法においては、蛍光
強度が、波長が600nm から700nm の蛍光の蛍光強度であ
ることが好ましい。
強度が、波長が600nm から700nm の蛍光の蛍光強度であ
ることが好ましい。
【００１０】
【作用】本発明の前記式（化１）で示されるＭＡ−ＩＣ
５は、長波長領域（600nm 〜700nm ）に蛍光を持つ。そ
して、ＭＡ−ＩＣ５は２個のＭＡ分子と結合しているた
め、抗ＭＡ抗体に対してアフィニティ−を有するが、そ
の値はＭＡの場合ほど高くない。したがって、ＭＡが存
在しない場合には、ＭＡ−ＩＣ５は抗ＭＡ抗体と結合し
て蛍光強度が変化するが、そこにＭＡが加わると、抗体
と結合していたＭＡ−ＩＣ５がアフィニティ−の高いＭ
Ａと置換し、置換した量に応じて蛍光強度が初期の蛍光
強度に近づく。この蛍光強度変化を測定することによっ
てＭＡを検出できるが、本発明のＭＡ−ＩＣ５からなる
標識色素は、長波長領域（600 〜700nm ）に蛍光をもつ
標識色素であるので、不純物の影響を受けにくく高感度
でＭＡを検出することが容易な標識色素を提供できる。
５は、長波長領域（600nm 〜700nm ）に蛍光を持つ。そ
して、ＭＡ−ＩＣ５は２個のＭＡ分子と結合しているた
め、抗ＭＡ抗体に対してアフィニティ−を有するが、そ
の値はＭＡの場合ほど高くない。したがって、ＭＡが存
在しない場合には、ＭＡ−ＩＣ５は抗ＭＡ抗体と結合し
て蛍光強度が変化するが、そこにＭＡが加わると、抗体
と結合していたＭＡ−ＩＣ５がアフィニティ−の高いＭ
Ａと置換し、置換した量に応じて蛍光強度が初期の蛍光
強度に近づく。この蛍光強度変化を測定することによっ
てＭＡを検出できるが、本発明のＭＡ−ＩＣ５からなる
標識色素は、長波長領域（600 〜700nm ）に蛍光をもつ
標識色素であるので、不純物の影響を受けにくく高感度
でＭＡを検出することが容易な標識色素を提供できる。
【００１１】また、前記化学式（化５）で示されるＭｓ
−ＩＣ５は、脱離基としてすぐれているメタンスルホニ
ル基を持っているので、本発明の標識色素であるＭＡ−
ＩＣ５を合成するのに有用な前駆体（中間体）を提供で
きる。また、ＭＡ−ＩＣ５のようなペンタメチンシアニ
ン誘導体のみならず、トリメチンシアニン誘導体やメロ
シアニン誘導体等、種々の蛍光波長を持つ化合物を作製
することが可能となる。
−ＩＣ５は、脱離基としてすぐれているメタンスルホニ
ル基を持っているので、本発明の標識色素であるＭＡ−
ＩＣ５を合成するのに有用な前駆体（中間体）を提供で
きる。また、ＭＡ−ＩＣ５のようなペンタメチンシアニ
ン誘導体のみならず、トリメチンシアニン誘導体やメロ
シアニン誘導体等、種々の蛍光波長を持つ化合物を作製
することが可能となる。
【００１２】また、前記化学式（化４）で示されるＯＨ
−ＩＣ５は、水酸基を有してるため、酸無水物との反応
性に富んでいる。したがって無水メタンスルホン酸と迅
速に反応し、メタンスルホネ−トを高収率で得ることが
できる。よって、前記化学式（化５）で示されるＭｓ−
ＩＣ５を合成するのに有用な前駆体（中間体）を提供で
きる。
−ＩＣ５は、水酸基を有してるため、酸無水物との反応
性に富んでいる。したがって無水メタンスルホン酸と迅
速に反応し、メタンスルホネ−トを高収率で得ることが
できる。よって、前記化学式（化５）で示されるＭｓ−
ＩＣ５を合成するのに有用な前駆体（中間体）を提供で
きる。
【００１３】また、前記化学式（化３）で示されるＡｃ
−ＩＣ５は、水酸基がアセチル基で保護されているた
め、室温空気中で安定である。また、アセチル基はアル
カリで容易に脱保護できるため、ヒドロキシ化合物を高
収率で得ることができる。よって、前記化学式（化４）
で示されるＯＨ−ＩＣ５を合成するのに有用な前駆体
（中間体）を提供できる。
−ＩＣ５は、水酸基がアセチル基で保護されているた
め、室温空気中で安定である。また、アセチル基はアル
カリで容易に脱保護できるため、ヒドロキシ化合物を高
収率で得ることができる。よって、前記化学式（化４）
で示されるＯＨ−ＩＣ５を合成するのに有用な前駆体
（中間体）を提供できる。
【００１４】また、前記化学式（化２）で示されるトリ
メチルインドレニウム塩は、活性メチル基をもった４級
インモニウム塩である。そして、トリメチルインドレニ
ウム塩は、不安定な水酸基がアセチル基で保護されてい
るので、高温条件下での反応においても副反応を起こし
にくい。よって前記化学式（化３）で示されるＡｃ−Ｉ
Ｃ５を合成するのに有用な前駆体（中間体）を提供でき
る。
メチルインドレニウム塩は、活性メチル基をもった４級
インモニウム塩である。そして、トリメチルインドレニ
ウム塩は、不安定な水酸基がアセチル基で保護されてい
るので、高温条件下での反応においても副反応を起こし
にくい。よって前記化学式（化３）で示されるＡｃ−Ｉ
Ｃ５を合成するのに有用な前駆体（中間体）を提供でき
る。
【００１５】また、前記化学式（化５）で示されるＭｓ
−ＩＣ５は、前記化学式（化４）で示されるＯＨ−ＩＣ
５を有機溶媒に溶解し、無水メタンスルホン酸を加えて
撹拌することによって合成することができ、Ｍｓ−ＩＣ
５の新規な合成方法を提供できる。
−ＩＣ５は、前記化学式（化４）で示されるＯＨ−ＩＣ
５を有機溶媒に溶解し、無水メタンスルホン酸を加えて
撹拌することによって合成することができ、Ｍｓ−ＩＣ
５の新規な合成方法を提供できる。
【００１６】また、本発明の標識色素であるＭＡ−ＩＣ
５は、前記化学式（化５）で示されるＭｓ−ＩＣ５を有
機溶媒に溶解し、不活性ガス存在下でメタンフェタミン
を加えて加熱することによって合成することができ、Ｍ
Ａ−ＩＣ５の新規な合成方法を提供できる。
５は、前記化学式（化５）で示されるＭｓ−ＩＣ５を有
機溶媒に溶解し、不活性ガス存在下でメタンフェタミン
を加えて加熱することによって合成することができ、Ｍ
Ａ−ＩＣ５の新規な合成方法を提供できる。
【００１７】また、本発明のメタンフェタミンの検出方
法は、ＭＡ−ＩＣ５と抗メタンフェタミン抗体とを含む
緩衝溶液の蛍光強度と、その緩衝溶液に測定対象物質を
加えた時の蛍光強度との強度変化を測定することを特徴
とする。前述の如く標識色素ＭＡ−ＩＣ５は、長波長領
域（600nm 〜700nm ）に蛍光を持つ。そして、ＭＡ−Ｉ
Ｃ５は２個のＭＡ分子と結合しているため、抗ＭＡ抗体
に対してアフィニティ−を有するが、その値はＭＡの場
合ほど高くない。
法は、ＭＡ−ＩＣ５と抗メタンフェタミン抗体とを含む
緩衝溶液の蛍光強度と、その緩衝溶液に測定対象物質を
加えた時の蛍光強度との強度変化を測定することを特徴
とする。前述の如く標識色素ＭＡ−ＩＣ５は、長波長領
域（600nm 〜700nm ）に蛍光を持つ。そして、ＭＡ−Ｉ
Ｃ５は２個のＭＡ分子と結合しているため、抗ＭＡ抗体
に対してアフィニティ−を有するが、その値はＭＡの場
合ほど高くない。
【００１８】したがって、ＭＡが存在しない場合には、
ＭＡ−ＩＣ５は抗ＭＡ抗体と結合して蛍光強度が変化す
るが、そこにＭＡが加わると、抗体と結合していたＭＡ
−ＩＣ５がアフィニティ−の高いＭＡと置換し、置換し
た量に応じて蛍光強度が初期の蛍光強度に近づく。この
蛍光強度変化を測定することによってＭＡを検出できる
が、本発明のＭＡ−ＩＣ５からなる標識色素は、長波長
領域（600 〜700nm ）に蛍光をもつ標識色素であるの
で、不純物の影響を受けにくく高感度でＭＡを検出する
ことが可能な検出方法を提供できる。
ＭＡ−ＩＣ５は抗ＭＡ抗体と結合して蛍光強度が変化す
るが、そこにＭＡが加わると、抗体と結合していたＭＡ
−ＩＣ５がアフィニティ−の高いＭＡと置換し、置換し
た量に応じて蛍光強度が初期の蛍光強度に近づく。この
蛍光強度変化を測定することによってＭＡを検出できる
が、本発明のＭＡ−ＩＣ５からなる標識色素は、長波長
領域（600 〜700nm ）に蛍光をもつ標識色素であるの
で、不純物の影響を受けにくく高感度でＭＡを検出する
ことが可能な検出方法を提供できる。
【００１９】また、前記検出方法として、波長600 〜70
0nm の蛍光強度を測定することにより、天然に多く存在
する525nm 付近の蛍光を持つ不純物が混入した場合で
も、蛍光強度はその影響を受けにくい。またこの波長範
囲は比較的蛍光強度が強いため、高感度のＭＡの検出方
法を提供することができる。
0nm の蛍光強度を測定することにより、天然に多く存在
する525nm 付近の蛍光を持つ不純物が混入した場合で
も、蛍光強度はその影響を受けにくい。またこの波長範
囲は比較的蛍光強度が強いため、高感度のＭＡの検出方
法を提供することができる。
【００２０】
【実施例】前記化学式（化２）で示されるトリメチルイ
ンドレニウム塩は、例えば、酢酸ブロモプロピルと、約
0.5 〜２等量モルのトリメチルインドレニンとを混合
し、約100 〜160 ℃で約１〜５時間加熱することによっ
て得ることができる。
ンドレニウム塩は、例えば、酢酸ブロモプロピルと、約
0.5 〜２等量モルのトリメチルインドレニンとを混合
し、約100 〜160 ℃で約１〜５時間加熱することによっ
て得ることができる。
【００２１】また、前記化学式（化３）で示されるＡｃ
−ＩＣ５は、例えば、約0.01〜１mol/l の前記化学式
（化２）で示されるトリメチルインドレニウム塩の塩基
性有機溶媒溶液、例えばピリジン溶液に、前記トリメチ
ルインドレニウム塩の約0.5 〜２等量モルに相当するテ
トラメトキシプロパンを加え通常は常圧で約110 〜150
℃に加熱することによって得ることができる。
−ＩＣ５は、例えば、約0.01〜１mol/l の前記化学式
（化２）で示されるトリメチルインドレニウム塩の塩基
性有機溶媒溶液、例えばピリジン溶液に、前記トリメチ
ルインドレニウム塩の約0.5 〜２等量モルに相当するテ
トラメトキシプロパンを加え通常は常圧で約110 〜150
℃に加熱することによって得ることができる。
【００２２】また、前記化学式（化４）で示されるＯＨ
−ＩＣ５は、例えば、約0.01〜１mol/l の前記化学式
（化３）で示されるＡｃ−ＩＣ５のアルカリ性水溶液、
例えば水酸化ナトリウム水溶液を、調整し、通常は常温
常圧で12〜24時間撹拌することによって得ることができ
る。
−ＩＣ５は、例えば、約0.01〜１mol/l の前記化学式
（化３）で示されるＡｃ−ＩＣ５のアルカリ性水溶液、
例えば水酸化ナトリウム水溶液を、調整し、通常は常温
常圧で12〜24時間撹拌することによって得ることができ
る。
【００２３】また、前記化学式（化５）で示されるＭｓ
−ＩＣ５は、例えば、約0.01〜１mol/l の前記化学式
（化４）で示されるＯＨ−ＩＣ５の有機溶媒溶液、例え
ばクロロホルム溶液に、前記ＯＨ−ＩＣ５の２〜20等量
モルに相当する無水メタンスルホン酸を加え、通常は常
温常圧で１〜３日撹拌することによって得ることができ
る。
−ＩＣ５は、例えば、約0.01〜１mol/l の前記化学式
（化４）で示されるＯＨ−ＩＣ５の有機溶媒溶液、例え
ばクロロホルム溶液に、前記ＯＨ−ＩＣ５の２〜20等量
モルに相当する無水メタンスルホン酸を加え、通常は常
温常圧で１〜３日撹拌することによって得ることができ
る。
【００２４】また、前記化学式（化１）で示されるＭＡ
−ＩＣ５を合成するには、例えば、約0.01〜１mol/l の
前記化学式（化５）で示されるＭｓ−ＩＣ５の有機溶媒
溶液、例えばクロロホルム溶液に、前記Ｍｓ−ＩＣ５の
２〜20等量モルに相当するメタンフェタミンを加え、約
50〜80℃で約１〜３日加熱することによって得ることが
できる。
−ＩＣ５を合成するには、例えば、約0.01〜１mol/l の
前記化学式（化５）で示されるＭｓ−ＩＣ５の有機溶媒
溶液、例えばクロロホルム溶液に、前記Ｍｓ−ＩＣ５の
２〜20等量モルに相当するメタンフェタミンを加え、約
50〜80℃で約１〜３日加熱することによって得ることが
できる。
【００２５】本発明の標識色素であるＭＡ−ＩＣ５を用
いた、測定対象物質中に含まれるＭＡの検出方法はＭＡ
−ＩＣ５の蛍光強度変化を測定するものであるため、測
定する蛍光の波長は強度の強い600nm から700nm で行う
のが好ましく、なかでも、660nm の蛍光は最も強いので
好ましい。また、このような長波長を用いて測定を行う
ことは、前述したように、不純物が混入していても、そ
の影響が少なく、高感度でＭＡの検出ができるので好ま
しい。
いた、測定対象物質中に含まれるＭＡの検出方法はＭＡ
−ＩＣ５の蛍光強度変化を測定するものであるため、測
定する蛍光の波長は強度の強い600nm から700nm で行う
のが好ましく、なかでも、660nm の蛍光は最も強いので
好ましい。また、このような長波長を用いて測定を行う
ことは、前述したように、不純物が混入していても、そ
の影響が少なく、高感度でＭＡの検出ができるので好ま
しい。
【００２６】なお前記化学式（化１）のペンタメチンシ
アニンからなる標識色素（ＭＡ−ＩＣ５）の構造式中、
Ｘの陰イオンは望ましくはハロゲン、またはＣｌＯ4 で
ある。また前記化学式（化２）のトルメチルインドレニ
ウム塩の構造式中、Ａｃはアセチル（ＣＨ3 Ｃ＝Ｏ）
基、Ｘの陰イオンは望ましくはハロゲン、またはＣｌＯ
4 である。また前記化学式（化３）のアセチル誘導体
（Ａｃ−ＩＣ５）の構造式中、Ａｃはアセチル（ＣＨ3
Ｃ＝Ｏ）基、Ｘの陰イオンは望ましくはハロゲン、また
はＣｌＯ4 である。また前記化学式（化４）のヒドロキ
シ誘導体（ＯＨ−ＩＣ５）の構造式中、Ｘの陰イオンは
望ましくはハロゲン、またはＣｌＯ4 である。である。
また前記化学式（化５）のメタンスルホニル誘導体（Ｍ
ｓ−ＩＣ５）の構造式中Ｘの陰イオンは望ましくはハロ
ゲン、またはＣｌＯ4 である。
アニンからなる標識色素（ＭＡ−ＩＣ５）の構造式中、
Ｘの陰イオンは望ましくはハロゲン、またはＣｌＯ4 で
ある。また前記化学式（化２）のトルメチルインドレニ
ウム塩の構造式中、Ａｃはアセチル（ＣＨ3 Ｃ＝Ｏ）
基、Ｘの陰イオンは望ましくはハロゲン、またはＣｌＯ
4 である。また前記化学式（化３）のアセチル誘導体
（Ａｃ−ＩＣ５）の構造式中、Ａｃはアセチル（ＣＨ3
Ｃ＝Ｏ）基、Ｘの陰イオンは望ましくはハロゲン、また
はＣｌＯ4 である。また前記化学式（化４）のヒドロキ
シ誘導体（ＯＨ−ＩＣ５）の構造式中、Ｘの陰イオンは
望ましくはハロゲン、またはＣｌＯ4 である。である。
また前記化学式（化５）のメタンスルホニル誘導体（Ｍ
ｓ−ＩＣ５）の構造式中Ｘの陰イオンは望ましくはハロ
ゲン、またはＣｌＯ4 である。
【００２７】以下具体的実施例を挙げて、本発明をさら
に詳しく説明する。なお、蛍光の測定波長は660nm の例
である。 実施例１ （トリメチルインドレニウム塩の合成）（化２）の構造
を持つトリメチルインドレニウム塩を以下に示す方法で
合成した。121 ｇ（765mmol ）のトリメチルインドレニ
ンと180 ｇ（994mmol ）の酢酸ブロモプロピルとを200m
l のベンゼンに溶解し、40時間還流した。反応溶液を濾
過し、得られた固体をベンゼンで２回洗浄した。アセト
ニトリル／ベンゼンから再結晶して、90ｇのトリメチル
インドレニウム塩を得た。以下に 1Ｈ−ＮＭＲの特徴的
なピークのケミカルシフトを示す。 1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ
3 ＯＤ）：δ(ppm)=1.61 (6H,s,CMe2 ) 、1.96(3H,s,OA
c)、4.85 (3H,s,N=CCH3 ) 、7.65-7.91(4H,m,aromatic) 実施例２ （Ａｃ−ＩＣ５の合成）（化３）の構造を持つＡｃ−Ｉ
Ｃ５を以下に示す方法で合成した。30ｇ（88.2mmol）の
トリメチルインドレニウム塩と7.24ｇ（44.1mmol）のテ
トラメトキシプロパンとを100ml のピリジンに溶解し、
窒素気流下で６時間還流した。反応溶液に過塩素酸ナト
リウム水溶液を加え、濾過した後、固体を水で洗浄し
た。減圧下で乾燥して、33.5ｇのＡｃ−ＩＣ５を得た。
以下に 1Ｈ−ＮＭＲの特徴的なピークのケミカルシフト
を示す。 1Ｈ−ＮＭＲ（DMSO-d6 ）：δ(ppm)=1.70 (12
H,s,2CMe2 ) 、1.92(6H,s,2OAc) 、7.23-7.65(8H,m,aro
matic) 実施例３ （ＯＨ−ＩＣ５の合成）（化４）の構造を持つＯＨ−Ｉ
Ｃ５を以下に示す方法で合成した。２g （3.50mmol）の
Ａｃ−ＩＣ５を40mlのエタノールに溶解し、それに６ml
の５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を加えて、室温で20時間
撹拌した。反応溶液を濾過し、濾液に3.5ml の酢酸を加
えた後、減圧下で濃縮した。生じた固体に水を加え、超
音波洗浄器を用いて洗浄した。固体を濾過してとりだ
し、80mlのクロロホルムに溶解した後、無水硫酸ナトリ
ウムを加えて乾燥した。クロロホルムを減圧下で留去し
て、1.75g のＯＨ−ＩＣ５を得た。以下に 1Ｈ−ＮＭＲ
の特徴的なピークのケミカルシフトを示す。 1Ｈ−ＮＭ
Ｒ（DMSO-d6 ）：δ(ppm)=1.70 (12H,s,2CMe2 ) 、3.25
-3.60(2H,bm,2OH)、7.20-7.65(8H,m,aromatic)。
に詳しく説明する。なお、蛍光の測定波長は660nm の例
である。 実施例１ （トリメチルインドレニウム塩の合成）（化２）の構造
を持つトリメチルインドレニウム塩を以下に示す方法で
合成した。121 ｇ（765mmol ）のトリメチルインドレニ
ンと180 ｇ（994mmol ）の酢酸ブロモプロピルとを200m
l のベンゼンに溶解し、40時間還流した。反応溶液を濾
過し、得られた固体をベンゼンで２回洗浄した。アセト
ニトリル／ベンゼンから再結晶して、90ｇのトリメチル
インドレニウム塩を得た。以下に 1Ｈ−ＮＭＲの特徴的
なピークのケミカルシフトを示す。 1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ
3 ＯＤ）：δ(ppm)=1.61 (6H,s,CMe2 ) 、1.96(3H,s,OA
c)、4.85 (3H,s,N=CCH3 ) 、7.65-7.91(4H,m,aromatic) 実施例２ （Ａｃ−ＩＣ５の合成）（化３）の構造を持つＡｃ−Ｉ
Ｃ５を以下に示す方法で合成した。30ｇ（88.2mmol）の
トリメチルインドレニウム塩と7.24ｇ（44.1mmol）のテ
トラメトキシプロパンとを100ml のピリジンに溶解し、
窒素気流下で６時間還流した。反応溶液に過塩素酸ナト
リウム水溶液を加え、濾過した後、固体を水で洗浄し
た。減圧下で乾燥して、33.5ｇのＡｃ−ＩＣ５を得た。
以下に 1Ｈ−ＮＭＲの特徴的なピークのケミカルシフト
を示す。 1Ｈ−ＮＭＲ（DMSO-d6 ）：δ(ppm)=1.70 (12
H,s,2CMe2 ) 、1.92(6H,s,2OAc) 、7.23-7.65(8H,m,aro
matic) 実施例３ （ＯＨ−ＩＣ５の合成）（化４）の構造を持つＯＨ−Ｉ
Ｃ５を以下に示す方法で合成した。２g （3.50mmol）の
Ａｃ−ＩＣ５を40mlのエタノールに溶解し、それに６ml
の５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を加えて、室温で20時間
撹拌した。反応溶液を濾過し、濾液に3.5ml の酢酸を加
えた後、減圧下で濃縮した。生じた固体に水を加え、超
音波洗浄器を用いて洗浄した。固体を濾過してとりだ
し、80mlのクロロホルムに溶解した後、無水硫酸ナトリ
ウムを加えて乾燥した。クロロホルムを減圧下で留去し
て、1.75g のＯＨ−ＩＣ５を得た。以下に 1Ｈ−ＮＭＲ
の特徴的なピークのケミカルシフトを示す。 1Ｈ−ＮＭ
Ｒ（DMSO-d6 ）：δ(ppm)=1.70 (12H,s,2CMe2 ) 、3.25
-3.60(2H,bm,2OH)、7.20-7.65(8H,m,aromatic)。
【００２８】実施例４ （Ｍｓ−ＩＣ５の合成）（化５）の構造を持つＭｓ−Ｉ
Ｃ５を以下に示す方法で合成した。１g （1.7509mmol）
のＯＨ−ＩＣ５と3.05g （17.509mmol, 10eq. ）の無水
メタンスルホン酸を20mlのクロロホルムに溶解し、室温
で24時間撹拌した。反応溶液を水で３回洗浄し、クロロ
ホルム層に無水硫酸ナトリウムを加えて乾燥した。クロ
ロホルムを減圧下で留去して、得られた残査を少量のア
セトンに溶解した。このアセトン溶液を300ml の水の中
に添加した。生じた沈澱を濾過し、水で洗浄した後、減
圧下で乾燥して800mg のＭｓ−ＩＣ５を得た。以下に 1
Ｈ−ＮＭＲの特徴的なピ−クのケミカルシフトを示す。
1Ｈ−ＮＭＲ（DMSO-d6 ）：δ(ppm)=1.78 (12H,s,2CMe
2 ) 、2.99（６Ｈ，ｓ，２０ＳＯ2 ＣＨ3 ）、7.20-7.6
7(8H,m,aromatic)。
Ｃ５を以下に示す方法で合成した。１g （1.7509mmol）
のＯＨ−ＩＣ５と3.05g （17.509mmol, 10eq. ）の無水
メタンスルホン酸を20mlのクロロホルムに溶解し、室温
で24時間撹拌した。反応溶液を水で３回洗浄し、クロロ
ホルム層に無水硫酸ナトリウムを加えて乾燥した。クロ
ロホルムを減圧下で留去して、得られた残査を少量のア
セトンに溶解した。このアセトン溶液を300ml の水の中
に添加した。生じた沈澱を濾過し、水で洗浄した後、減
圧下で乾燥して800mg のＭｓ−ＩＣ５を得た。以下に 1
Ｈ−ＮＭＲの特徴的なピ−クのケミカルシフトを示す。
1Ｈ−ＮＭＲ（DMSO-d6 ）：δ(ppm)=1.78 (12H,s,2CMe
2 ) 、2.99（６Ｈ，ｓ，２０ＳＯ2 ＣＨ3 ）、7.20-7.6
7(8H,m,aromatic)。
【００２９】実施例５ （ＭＡ−ＩＣ５の合成）（化１）の構造を持つＭＡ−Ｉ
Ｃ５を以下に示す方法で合成した。50mg（0.06876mmol
）のＭｓ−ＩＣ５と22.6mg（0.1514mmo l,2.2eq.）の
ＭＡとを５mlのクロロホルムに溶解し、窒素気流下で２
日間還流した。反応溶液を300ml のベンゼン中に滴下
し、生じた沈澱を濾過してとりだした。得られた沈澱を
１mlのメタノ−ルに溶解し、300ml のベンゼン中に滴下
した。生じた固体を濾過し、ベンゼンで洗浄した後、逆
層液体クロマトグラフィー（展開溶媒：メタノール／0.
1 Ｎ塩酸＝３／１）を用いて分離精製して、30mgのＭＡ
−ＩＣ５を得た。以下に 1Ｈ−ＮＭＲの特徴的なピ−ク
のケミカルシフトを示す。 1Ｈ−ＮＭＲ（DMSO-d6 ）：
δ(ppm)=1.25 (6H,d,2C-CH3 ) 、1.75 (12H,s,2CMe2 )
、2.99 (6H,s,2N-CH3 )、7.30-7.65(8H,m, aromatic)
。
Ｃ５を以下に示す方法で合成した。50mg（0.06876mmol
）のＭｓ−ＩＣ５と22.6mg（0.1514mmo l,2.2eq.）の
ＭＡとを５mlのクロロホルムに溶解し、窒素気流下で２
日間還流した。反応溶液を300ml のベンゼン中に滴下
し、生じた沈澱を濾過してとりだした。得られた沈澱を
１mlのメタノ−ルに溶解し、300ml のベンゼン中に滴下
した。生じた固体を濾過し、ベンゼンで洗浄した後、逆
層液体クロマトグラフィー（展開溶媒：メタノール／0.
1 Ｎ塩酸＝３／１）を用いて分離精製して、30mgのＭＡ
−ＩＣ５を得た。以下に 1Ｈ−ＮＭＲの特徴的なピ−ク
のケミカルシフトを示す。 1Ｈ−ＮＭＲ（DMSO-d6 ）：
δ(ppm)=1.25 (6H,d,2C-CH3 ) 、1.75 (12H,s,2CMe2 )
、2.99 (6H,s,2N-CH3 )、7.30-7.65(8H,m, aromatic)
。
【００３０】実施例６ （ＭＡ−ＩＣ５の蛍光強度変化の測定）ＭＡ−ＩＣ５
（8.6 ×10-6M ）と抗ＭＡ抗体（6.1 ×10-6M ）とを、
10-4M のＢＳＡを含むＰＢＳ（リン酸緩衝液）の10Vol.
％エタノ−ル混合溶液で調整し、この溶液2200μl をと
り、25℃で１分間撹拌した後、励起波長600nm で660nm
の蛍光強度を測定した。その蛍光強度は19.5であった。
（8.6 ×10-6M ）と抗ＭＡ抗体（6.1 ×10-6M ）とを、
10-4M のＢＳＡを含むＰＢＳ（リン酸緩衝液）の10Vol.
％エタノ−ル混合溶液で調整し、この溶液2200μl をと
り、25℃で１分間撹拌した後、励起波長600nm で660nm
の蛍光強度を測定した。その蛍光強度は19.5であった。
【００３１】次に、この溶液に最終濃度が2.3 ×10-5M
になるようなＭＡ／ＰＢＳ溶液を100 μl 加え、励起波
長600nm で660nm の蛍光強度を測定した。蛍光強度は1
2.5であった。蛍光強度の変化率は、次のように計算し
た。 （１−12.5／19.5）×100 ＝35.8％ ＭＡの最終濃度が1.6 ×10-5M 、8.9 ×10-6M 、9.2 ×
10-7M 、8.7 ×10-8Mの場合についてもそれぞれ上記と
同様の方法で蛍光強度を測定し、変化率を計算した。変
化率はそれぞれ34.6％（1.6 ×10-5M ）、27.8％（8.9
×10-6M ）、0.6 ％（9.2 ×10-7M ）、2.1 ％（8.7 ×
10-8M ）であった。
になるようなＭＡ／ＰＢＳ溶液を100 μl 加え、励起波
長600nm で660nm の蛍光強度を測定した。蛍光強度は1
2.5であった。蛍光強度の変化率は、次のように計算し
た。 （１−12.5／19.5）×100 ＝35.8％ ＭＡの最終濃度が1.6 ×10-5M 、8.9 ×10-6M 、9.2 ×
10-7M 、8.7 ×10-8Mの場合についてもそれぞれ上記と
同様の方法で蛍光強度を測定し、変化率を計算した。変
化率はそれぞれ34.6％（1.6 ×10-5M ）、27.8％（8.9
×10-6M ）、0.6 ％（9.2 ×10-7M ）、2.1 ％（8.7 ×
10-8M ）であった。
【００３２】以上は対象物がＭＡの場合について説明し
たが、対象物がその他の物質であっても、本発明は一般
的に適用し得る。
たが、対象物がその他の物質であっても、本発明は一般
的に適用し得る。
【００３３】
【発明の効果】以上説明した通り、本発明の前記化学式
（化２）で示されるトリメチルインドレニウム塩は、メ
チン鎖を介してもう１分子のトリメチルインドレニウム
塩と結合し、色素の基本骨格を高収率で作製することが
できる。よって前記化学式（化３）で示されるＡｃ−Ｉ
Ｃ５を合成する際の有用な前駆体となる。また前記化学
式（化３）で示されるＡｃ−ＩＣ５は、アルカリ性水溶
液中で容易に脱保護することができ、前記化学式（化
４）を合成する際の有用な前駆体となる。また前記化学
式（化４）で示されるＯＨ−ＩＣ５は、酸無水物と容易
に反応し、高収率ですぐれた脱離基を導入することがで
きる。よって、前記化学式（化５）で示されるＭｓ−Ｉ
Ｃ５を合成する際の有用な前駆体となる。また前記化学
式（化５）で示されるＭｓ−ＩＣ５は、優れた脱離基で
あるメタンスルホニル基を有しているため、前記化学式
（化１）で示される標識色素ＭＡ−ＩＣ５を合成する際
の有用な前駆体となる。
（化２）で示されるトリメチルインドレニウム塩は、メ
チン鎖を介してもう１分子のトリメチルインドレニウム
塩と結合し、色素の基本骨格を高収率で作製することが
できる。よって前記化学式（化３）で示されるＡｃ−Ｉ
Ｃ５を合成する際の有用な前駆体となる。また前記化学
式（化３）で示されるＡｃ−ＩＣ５は、アルカリ性水溶
液中で容易に脱保護することができ、前記化学式（化
４）を合成する際の有用な前駆体となる。また前記化学
式（化４）で示されるＯＨ−ＩＣ５は、酸無水物と容易
に反応し、高収率ですぐれた脱離基を導入することがで
きる。よって、前記化学式（化５）で示されるＭｓ−Ｉ
Ｃ５を合成する際の有用な前駆体となる。また前記化学
式（化５）で示されるＭｓ−ＩＣ５は、優れた脱離基で
あるメタンスルホニル基を有しているため、前記化学式
（化１）で示される標識色素ＭＡ−ＩＣ５を合成する際
の有用な前駆体となる。
【００３４】また、本発明の前記化学式（化１）で示さ
れるペンタメチンシアニン誘導体からなるＭＡ−ＩＣ５
は、不純物の影響を受けにくく、高感度でＭＡを検出す
ることができる標識色素を提供できる。
れるペンタメチンシアニン誘導体からなるＭＡ−ＩＣ５
は、不純物の影響を受けにくく、高感度でＭＡを検出す
ることができる標識色素を提供できる。
【００３５】また、本発明のＭｓ−ＩＣ５、およびＭＡ
−ＩＣ５の新規な合成方法により、標識色素であるＭＡ
−ＩＣ５の製造が可能となった。また、本発明の合成方
法によれば、ＡＢＭＡ−ＩＣ５を容易に合成できる方法
が提供できる。
−ＩＣ５の新規な合成方法により、標識色素であるＭＡ
−ＩＣ５の製造が可能となった。また、本発明の合成方
法によれば、ＡＢＭＡ−ＩＣ５を容易に合成できる方法
が提供できる。
【００３６】また、本発明のＭＡの検出方法は、不純物
の影響を受けにくく、高感度でのＭＡの検出方法を提供
できる。また、前記検出方法として、波長が600nm から
700nm の蛍光の蛍光強度を測定することにより、不純物
の影響をうけにくく、蛍光強度の強い、ＭＡの検出方法
を提供することができる。
の影響を受けにくく、高感度でのＭＡの検出方法を提供
できる。また、前記検出方法として、波長が600nm から
700nm の蛍光の蛍光強度を測定することにより、不純物
の影響をうけにくく、蛍光強度の強い、ＭＡの検出方法
を提供することができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 湯川 系子 大阪府門真市大字門真1006番地 松下電 器産業株式会社内 (72)発明者 光亦 忠泰 大阪府門真市大字門真1006番地 松下電 器産業株式会社内 (56)参考文献 特開 平６−66725（ＪＰ，Ａ)
Claims (5)
- 【請求項１】 下記式（化１）で示されるペンタメチン
シアニン誘導体からなる標識色素（ただし、Ｘは陰イオ
ンを示す。）。 【化１】 - 【請求項２】 前記式（化１）で示されるペンタメチン
シアニン誘導体からなる標識色素の前駆体化合物であっ
て、下記式（化２）で示されるトリメチルインドレニウ
ム塩、下記式（化３）で示されるアセチル誘導体、下記
式（化４）で示されるヒドロキシ誘導体、及び下記式
（化５）で示されるメタンスルホネート誘導体から選ば
れる少なくとも一つの化合物であることを特徴とする標
識色素の前駆体化合物（ただし、Ｘは陰イオンを示
す。）。 【化２】 【化３】 【化４】 【化５】 - 【請求項３】 前記式（化５）で示されるメタンスルホ
ネート誘導体を有機溶媒に溶解し、不活性ガス存在下で
メタンフェタミンを加えて加熱し、前記式（化１）で示
されるペンタメチンシアニン誘導体を合成する標識色素
の製造方法。 - 【請求項４】 前記式（化１）で示されるペンタメチン
シアニン誘導体と抗メタンフェタミン抗体とを含む緩衝
溶液の蛍光強度と、その緩衝溶液に測定対象物質を加え
た時の蛍光強度との強度変化を測定し、測定対象物質中
に含まれるメタンフェタミンの検出する標識色素の使用
方法。 - 【請求項５】 蛍光強度が、波長が600nm から700nm の
蛍光の蛍光強度である請求項４に記載の標識色素の使用
方法。
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP30521992A JP2653615B2 (ja) | 1992-11-16 | 1992-11-16 | 標識色素とその前駆体化合物及び標識色素の製造方法並びに標識色素の使用方法 |
| US08/102,426 US5378634A (en) | 1992-08-20 | 1993-08-05 | Labelling color for detecting methamphetamine |
| US08/306,936 US5488114A (en) | 1992-08-20 | 1994-09-16 | Labelling color, method of preparing the same and method for detecting methamphetamine with the color |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP30521992A JP2653615B2 (ja) | 1992-11-16 | 1992-11-16 | 標識色素とその前駆体化合物及び標識色素の製造方法並びに標識色素の使用方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06157926A JPH06157926A (ja) | 1994-06-07 |
| JP2653615B2 true JP2653615B2 (ja) | 1997-09-17 |
Family
ID=17942480
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP30521992A Expired - Fee Related JP2653615B2 (ja) | 1992-08-20 | 1992-11-16 | 標識色素とその前駆体化合物及び標識色素の製造方法並びに標識色素の使用方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2653615B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5616502A (en) * | 1995-05-19 | 1997-04-01 | Molecular Probes, Inc. | Non-specific protein staining using merocyanine dyes |
-
1992
- 1992-11-16 JP JP30521992A patent/JP2653615B2/ja not_active Expired - Fee Related
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH06157926A (ja) | 1994-06-07 |
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