JPH06502645A - 金属イオン錯体化のためのポリアザ大環式化合物 - Google Patents

金属イオン錯体化のためのポリアザ大環式化合物

Info

Publication number
JPH06502645A
JPH06502645A JP4501073A JP50107392A JPH06502645A JP H06502645 A JPH06502645 A JP H06502645A JP 4501073 A JP4501073 A JP 4501073A JP 50107392 A JP50107392 A JP 50107392A JP H06502645 A JPH06502645 A JP H06502645A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
group
alkyl group
notpme
compound
compound according
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
JP4501073A
Other languages
English (en)
Other versions
JP3334717B2 (ja
Inventor
シェリー，エイ・ディーン
ラザル，イシュトヴァン
ラマザミィ，ラヴィチャンドラン
ブルーヒェル，エルノ
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
University of Texas System
Original Assignee
University of Texas System
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from US06/662,075 external-priority patent/US4639365A/en
Application filed by University of Texas System filed Critical University of Texas System
Publication of JPH06502645A publication Critical patent/JPH06502645A/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP3334717B2 publication Critical patent/JP3334717B2/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Fee Related legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/6524—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having four or more nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/06—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/0474—Organic compounds complexes or complex-forming compounds, i.e. wherein a radioactive metal (e.g. 111In3+) is complexed or chelated by, e.g. a N2S2, N3S, NS3, N4 chelating group
    • A61K51/0482—Organic compounds complexes or complex-forming compounds, i.e. wherein a radioactive metal (e.g. 111In3+) is complexed or chelated by, e.g. a N2S2, N3S, NS3, N4 chelating group chelates from cyclic ligands, e.g. DOTA
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/0489—Phosphates or phosphonates, e.g. bone-seeking phosphonates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D255/00—Heterocyclic compounds containing rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D249/00 - C07D253/00
    • C07D255/02—Heterocyclic compounds containing rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D249/00 - C07D253/00 not condensed with other rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D257/00—Heterocyclic compounds containing rings having four nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D257/02—Heterocyclic compounds containing rings having four nitrogen atoms as the only ring hetero atoms not condensed with other rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/6515—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2123/00—Preparations for testing in vivo

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Radiology & Medical Imaging (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Laminated Bodies (AREA)
  • Macromolecular Compounds Obtained By Forming Nitrogen-Containing Linkages In General (AREA)
  • Polymers With Sulfur, Phosphorus Or Metals In The Main Chain (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の名称 金属イオン錯体化のためのポリアザ大環式化合物本出願は、１９８９年５月２５ 日に出願された米国特許出願第ｏ７／３５７１９３号および１９８８年１２月２ ８日に出願された米国特許出願第０７／２９１０５３号（これらは本明細書中に 参照することにより含まれているものとする）の部分継続出願である。出願番号 第０７／２９１０５３号は、１９８７年１月２７日出願の第００７７２９号の部 分継続出願であるが、後者は、現在米国特許第４６３９３６５号となった、１９ ８４年１０月１８日出願の米国特許出願第６６２０７５号からの部分継続出願で ある。
本発明は、特定の生物学的イオンと相対的な特異性をもって結合する、リンを含 有する一連の新規な大環式キレートに関する。これらキレート化合物（キレータ −）の３１ｐ共鳴は、金属イオンがキレートの空洞を占有するとき、ＮＭＲスペ クトルの新しい位置にシフトし、結合キレートのＮＭＲ化学シフトは各金属イオ ンについて異なる。この特性は、例えばＭ　ｇ　２　＋、Ｃａ２◆およびＺｎ２ ÷を含む特定の生物学的陽イオンの細胞内濃度を、３１Ｐ−ＮＭＲでモニターす るのに有用であろう。細胞内陽イオン濃度測定のために市販されている蛍光性キ レータ−がいくつかあり、さらにＮＭＲ用の１個または２個のフッ素を含むキレ ータ−もある。
蛍光性キレータ−はヒトを対象とする研究には利用できないであろうし、１９Ｆ キレータ−も、本発明の３１ｐキレータ−のように臨床的に利用することはでき そうにもない。また、このキレータ−のあるものは、Ｇｄ３＋と結合したとき、 安全で効果的な磁気共鳴画像化用造影剤となるという特性をもつ。
非常に多くの生物系は、種々の反応の調節に反磁性陽イオン（Ｃａ　２＋、Ｍ　 ｇ　２＋およびＺ　ｎ　２＋）を必要とする。種々の細胞における細胞内メツセ ンジャーイオンとしてのＣａ２＋の役割は、よく理解されている［１］。
Ｍ　ｇ　２＋は、実質的にすべての生物反応で必要とされるコファクターで、さ らに極めてさまざまな生物反応を緩衝する上で広範囲の役割を果たしているかも しれない［２］。Ｚｎ２＋は、いくつかの酵素の活性部位にきわめて強固に結合 しており、その役割は化学結合の分極に深く関与し、結合の加水分解、酸化−還 元または官能基転移反応を補助するようである。しかし、遊離Ｚｎ２＋は、脳細 胞のようないくつかの細胞ではより広範な役割を果たし、その場合、貯蔵顆粒と してニューロンに貯蔵され、電気生理的活性化時に動員されることが分かってい る［３］。
細胞機能における二価陽イオンの役割評価は、細胞および潅流臓器の遊離陽イオ ン濃度の直接的測定方法が利用できるか否かによって制限を受ける。二価陽イオ ンの測定について現在利用できる方法には、平衡反応［４］、イオン選択微小電 極［５，６］および金属色素性染料（これを細胞内にマイクロインジェクトし［ ７］、または細胞外に注入後細胞を溶解する［８．９コ）を用いる零位測定が含 まれる。実質的にはこれらの方法はすべて、性質的に侵入性で、分析前にサンプ ルを破壊することが必要である。これに比べ、ＮＭＲは、潅流器官および無傷の 細胞の細胞内遊離二価陽イオン濃度の測定における非侵襲的手段として顕著な利 点をもつ。
最近、細胞および潅流器官の細胞内遊離Ｃａ２＋［１０，１１］およびＭ　ｇ　 ２本［１２，１３］を、１９ｐのＮＭＲで測定するために、フッ化キレータ−が 効果的に用いられている。これらのキレータ−は、分離細胞系で相応に作動して いるが、しかし潅流器官で用いるときは、検出線の意外なブロードニングが問題 となっている［１３．１４］。このシステムのまた別の問題は、これらの化合物 の合成経路によってキレート構造が制限され、したがってキレートの設計により 組み込むことができる金属−イオン選択性が制限されることである。本発明のい くつかの局面は、生物系における細胞内遊離陽イオンを検出する３１Ｐ−ＮＭＲ のインジケーターとして、一連のトリアザおよびテトラアザ大環式ホスフォネー トモノエステルおよびアルキルホスフィネートの合成および開発を含む。
本発明はまた、生体のＮＭＲ画像化（ときにＭＨＩ（磁気共鳴画像化：　ｍａｇ ｎｅｔｉｃ　ｒｅｓｏｎａｎｃｅ　ｉｍａｇｉｎｇ）と呼、ｄ）にも関する。よ り具体的には、本発明はそのような生体におけるＮＭＲコントラストを増強する ために用いることかできる薬剤に関する。
核磁気共鳴（ＮＭＲ）は、何年間も化学分析の手段として用いられてきた。ＮＭ Ｒは一種の高周波分光学で、印加磁場に対して並列的（パラレル）または反並列 的（アンチパラレル）にスピンする電気的にチャージされた原子核間の微小なエ ネルギーの相違に基づくものである。高周波エネルギーがサンプルにかけられた とき、これらスピン原子核は、そのスピン状態を変化させ、さらにそのようにす ることによって、高周波エネルギーのいくらかを吸収する。同じ分子内のわずか に異なる化学環境下にある核は、わずかに相違するエネルギーでスピン状態を変 化させ、これによって、特徴的な吸収または共鳴を生じ、これが分子構造の同定 に役立つ。
より最近では、ＮＭＲは生体検査に用いられている。
コンピューター断層写真法（ＣＡＴ　ｓｃａｎｎｉｎｇ）のような他の方法が、 過去にはこの目的に用いられ、また現在でも用いられている。しかし、ＮＭＲは イオン化のための放射線照射を行わないので、ＣＡＴよりも安全であると考えら れている。したがって、ＮＭＲ法は、人体の横断像の有利な作成方法である。
ＮＭＲスキャンで得られる画像の質は、２つの特性に依存する。すなわち、種々 の組織のプロトン密度およびプロトン緩和速度の相違である。組織のプロトン密 度は、容易に変化させることはできない。プロトン緩和速度は、常磁性緩和剤（ より具体的には”コントラスト剤′として知られる）を添加することによって調 整することができる。コントラスト剤は、磁気的に同様であるが組織学的に異な る組織間のＮＭＲ画像のコントラストを高めることができる。
ガドリニウムは大きな磁気モーメントをもち、磁性核を効果的に緩和させるので 、ガドリニウがコントラスト剤として調べられてきている。ガドリニウムの強力 な常磁性特性は、その７個の不対電子の結果である。
コントラスト剤としてのガドリニウムの欠点は、動物に対する毒性である。この 問題の１つの可能な救済方法は、生体を通過する化合物にガドリニウムを取り込 ませ、ガドリニウムの毒性イオンを遊離させることなく排泄させるものである。
残念ながら、ガドリニウムのような希土類元素は有機分子と安定な共有結合を形 成せず、そのような分子はインビボで分解され、毒性イオンを遊離させる。
ガドリニウム使用に固有の毒性問題を回避する有効なコントラスト剤が必要で、 さらに、ガドリニウムまたは別の常磁性金属を含むか否かにかかわらず、新規で より良いコントラスト剤が要望されている。
本発明は、新規なポリアザ大環式化合物またはその塩およびその使用に関する。
この化合物は次の式をもつ。
Ｘは２．３またはｐ２（ｓ）とｑ　３　（ｓ）　（ここでｐ＋ｑ＝ｙ）のある組 み合わせで； ｙは３または４で； Ｒ（ＣＨ２）、Ｐ　（＝Ｏ）ＯＲＩＲ２；Ｒ１はＲ３またはＯＲ３゜ Ｒ３はアルキル基、シクロアルキル基またはアリール基；Ｒ２はＨｌ　アルキル 基または０＝ＣＲ４；Ｒ４はアルキル基、シクロアルキル基またはアリール基（ Ｒ３およびＲ４は同一分子内で同じでも異なっていてもよ＜）： ２は１から３である。
好ましいアルキル基はＣ１Ｈ１゜２１（ここでｎは１〜２０）で、好ましいシク ロアルキル基はＣ、、Ｈ２ｍ−１（ここでｍは１〜２０）で、好ましいアリール 基はフェニル基である。
重要な１実施例では、本化合物は、次の式を有するポリアザ大環式化合物−金属 錯体の金属複合体であってもよい。
Ｘは２．３またはｐ２（ｓ）とｑ３（ｓ）（−：でｐ＋ｑ＝ｙ）のある組み合わ せで； ｙは３または４で； Ｒ（ＣＨ２）よＰ（＝Ｏ）ＯＲＩＲ２；Ｒ１はＲ３またはＯＲ３゜ Ｒ３はアルキル基、シクロアルキル基またはアリール基；Ｒ２はＨｌ　アルキル 基または０＝ＣＲ４゜Ｚは１から３； ｒは２または３で： Ｍｅは金属イオンである。
ｙの文字は、トリアザ大環式またはテトラアザ大環式化合物であることを示す。
Ｘは好ましくは２であるが、３も多くの条件下で可能であ墨。Ｘについての、ｐ ２（ｓ）とｑ　３（ｓ）の組み合わせは、もちろん容易につくることができるが 、Ｉ）＋Ｑの合計はポリアザマクロ環のユニット数であるｙでなければならない 。
該化合物またはその金属錯体の好ましい実施例では、ｙは３であって、ｐが１で ｑは２であるか、またはｐは２でｑが１である。
該化合物またはその金属錯体の別の好ましい実施例では、ｙは４であって、ｐは １でｑは３、またはｐは２でｑも２、またはｐか３でｑは１で、２は最も好まし くは１である。ｎは好ましくは２である。
より好ましい実施例では、Ｘは２で、ｙは４で、２は１で、　Ｒ１はＲ３である 。
また別の好ましい実施例では、Ｘは２で、ｙは３で、Ｚは１で、Ｒ１はＯＲ’で 、　ｎは２である。
Ｍｅ”Ｉｔ、好ましくはＣａ”、Ｍｇ＋２、Ｚｎ”またはＧｄ”３である。他の 特有の二価または三価金属イオン、特に常磁性ランタニドもそのように錯体とす ることができる。
本発明は、１つまたは２つ以上の二価金属イオンの細胞内濃度の算定方法を含む 。該方法は、下記の化学式を有するポリアザ大環式化合物またはその塩の細胞内 局在化を促進させる条件下で細胞を処理し、Ｘは２．３またはｐ２（ｓ）とｑ３ （ｓ）のある組み合わせ（ここでｐ＋ｑ＝ｙ）で； ｙは３または４で； Ｒは　（ＣＨ２）、Ｐ　（＝Ｏ）ＯＲ’Ｒ２で；Ｒ１はＲ３またはＯＲ３で； Ｒ３はアルキル基、シクロアルキル基またはアリール基；Ｒ２はＨｌ　アルキル 基または０＝ＣＲ’で；Ｒ４はアルキル基、シクロアルキル基またはアリール基 。
２は１から３である）、 そして、二価金属イオン細胞内濃度に比例する３１ｐ・ＮＭＲスペクトルのシフ トを測定することからなる。
１実施例では、細胞は本発明の化合物の酸無水物形（すなわち、Ｒ２は０＝ＣＲ ４）のもので処理され、細胞内に入り、そこで酸に加水分解され（すなわち、Ｒ ２はＨ）、さらに細胞内金属イオンと錯体をつくる。現在そのような測定に最も なじみ易い金属は、カルシウム、マグネシウムまたは亜鉛で、マグネシウムが好 ましい。
重要な１応用面では、本発明は、被験者の磁気共鳴画像の増強方法を含む。この 方法は、被験者にポリアザ大環式化合物−金属錯体を投与し、該被験者の磁気共 鳴画像を得ることを含むが、この化合物−金属錯体は、次の式を有する： Ｘは２．３、またはｐ２（ｓ）とｑ３（ｓ）のある組み合わせ（ここでｐ＋ｑ＝ ｙ）で； ｙは３または４で； Ｒは（ＣＨ２）、Ｐ　（＝Ｏ）ＯＲＩＲ２で；ＲＩ４＊Ｒ３＊たはＯＲ３で； Ｒ３はアルキル基、シクロアルキル基またはアリール基；Ｒ２はＨｌ　アルキル 基または０＝ＣＲ４で；Ｒ４はアルキル基、シクロアルキル基またはアリール基 ；２は１から３で； Ｍｅは常磁性金属（好ましくはガドリニウム）である。
図１は、模式的＋、：　Ｎ　ＯＴ　Ｐ　Ｍ　Ｅ　（コ、：　テＲＬｔ　ＣＨ２Ｃ Ｈ８でＲ１はＨである）の構造を示している。
図２は、２ｍＭのＮＯＴＰＭＥの電位差滴定曲線（ａ）、並びに、等量のＣａ２ ＋（ｂ）、Ｍ　ｇ　２◆（ｃ）およびＺｎ”（ｄ）の存在下で得られた電位差滴 定曲線を示している。
図３は、添加（総）マグネシウムの関数として５ｍＭのＮＯＴＰＭＥの３ｔｐの ＮＭＲスペクトルを示している。一番下から一番上までのＭｇ２＋濃度は、それ ぞれ０５．１．５．３ｍＭである。サンプルの成分およびスペクトルのパラメー ターは方法のセクションに記載されている。
図４は、２．０５ｍＭのＺｎＣ１２（Ａ）および３８゜５ｍＭのＣａＣｌ２（Ｂ ）の存在下での、５ｍＭのＮＯＴＰＭＥの３１ｐのＮＭＲスペクトルを示してい る。サンプル組成およびスペクトルパラメーターは、方法のセクションに示され ている。
図５は、５ｍＭのＮＯＴＰＭＥ（ａ）、Ｃａ（Ｎ。
ＴＰＭＥ）−（ｂ）、　Ｚｎ　（ＮＯＴＰＭＥ）−（ｃ）、Ｍｇ　（ＮＯＴＰＭ Ｅ）−（ｄ）の”Ｐ−ＮＭＲの化学シフトがｐＨ依存性であることを示している 。
図６は、正常赤血球（ＲＢＣ）（ａ）　およびＮＯＴＰＭＥ添加ＲＢＣ（ｂ）の ３ＩＰ−ＮＭＲスペクトルを示している。
図７は、ＤＯＴＥＰの構造を模式的に表している。
図８は、ＤＯＴＥＰおよびＤｏＴＥＰ−カルシウム錯体の３ＩＰ−ＮＭＲスペク トルを示している。
図９は、０１ＮのＨＣｌ中でのガドリニウム−Ｄ。
ＴＡおよびガドリニウム−ＤＯＴＥＰ錯体の分解速度を示している。
図１０は、１．５．９−トリアザシクロドデカン化合物を模式的に示している。
図１１は、１．４，８．１２−テトラシクロペンタデカン化合物を模式的に示し ている。
図１２は、１，４，８．１１−テトラアザシクロテトラデカンを模式的に示して いる。
実施例１ トリアザ　環　合 １．４．７−トリアザシクロノナンーＮ　、Ｎ　’、Ｎ　”−１−リス（メチレ ンホスフォネートモノエチルエステル）（ＮＯＴ　Ｐ　Ｍ　Ｅ　：　１，４．７ −ｔｒｉａｚａｃｙｃｌｏｎｏｎａｎｅ−Ｎ、Ｎ’、Ｎ−−ｔｒｉｓ（ｍｅｔｈ ｙｌｅｎｅｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ　ｍｏｎｏｅｔｈｙｌｅｓｔｅｒ））を合成 し、性状を調べ、さらに、細胞内Ｍ　ｇ　２＋およびＺｎ２＋イオンの３ＩＰ− ＮＭＲインジケーターとして使用するために分析した。金属イオンの存在下で、 このキレートの３１Ｐ−ＮＭＲスペクトルは、遊離キレート、Ｍｇ　（Ｎ。
ＴＰＭＥ）−１Ｚ　ｎ　（Ｎ　ＯＴ　Ｐ　Ｍ　Ｅ　）−１およびＣａ（ＮＯＴＰ ＭＥ）−の特徴的な共鳴を示した。Ｃａ２＋およびＭ　ｇ　２＋とのＮＯＴＰＭ Ｅ錯体の安定性定数は、電位差滴定法およびＮＭＲにより、さらにＺｎ２＋との 錯体のそれは、電位差滴定法により得た。このキレートは、生理的ｐＨ値でＣａ ２＋よりもＭ　ｇ　２＋に対して１０倍強い親和性を有する。Ｚｎ２＋に対する 親和性が非常に高いので、正確な結合定数はＮＭＲでは決定できなかった。Ｍ　 ｇ　２＋の存在下でＮＯＴＰＭＥは容易に赤血球に付加される。遊離キレートお よびその金属錯体の３１ｐ化学シフトは、生物系で認められる典型的な三価リン 含有代謝物よりはるかに下方域であり、したがって、細胞内陽イオン濃度および 細胞のエネルギー現象を同時にモニターすることを可能にする。
■ １．４．７−１−リアザシクロノナン、バラポルムアルデヒド、亜リン酸ジエチ ルおよび活性化炭素ダルコ（Ｄａｒｃｏ）　Ｇ　−６０は、アルドリッチケミカ ルカンパニー　（Ａｌｄｒｉｃｈ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ）がら購 入した。ＭｇＳＯ４はマリツクロット（Ｍａｌｌｉｃｋｒｏｄｔ）がら、水酸化 ナトリウムおよびベンゼンはジエイ・ティ・ベーカ−（Ｊ、ＴＢａｋｅｒ）から 、さらにジエチルエーテルはフィッシャーサイエンティッフィック（Ｆｉｓｈｅ ｒ　５ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）がら購入した。すべての化学薬品は高純度であり、 さらに精製することなく使用した。ＺｎＣ１２、ＣｄＣｌ２、ＭｇＣ＋２および ＣａＣＩ２溶液は、キレート滴定でスタンダード化した。
１．４．７−トリアザシクロノナン（１，９１ｇ、１４７１ｍｍｏｌ）および亜 リン酸ジエチル（７０１８ｇ１１６．９４ｍｍｏｌ、１５％過剰）を１２５ｍ１ のベンゼンに溶かし、還流で加熱した。無水バラホルムアルデヒド（１，７２７ ｇ、３０％過剰）を少量ずつ上記の還流混合物に添加し、その間蒸留によってベ ンゼン−水共沸混合物を除去した。バラホルムアルデヒドの添加が完了した後、 溶液全体を３０分間沸騰させ、さらに蒸発させて、黄色の粘稠な油を得た。この 油を１５０ｍ１の無水ジエチルエーテルに溶かし、無水ＭｇＳＯ４で一晩乾燥さ せた。生じた白色沈殿とともにＭｇＳＯ４を濾過して除去した。濾液を活性化炭 素で脱色し濾過した。濾液を真空中で蒸発させ、粘稠な油の１．４゜７−トリア ザシクロノナンーＮ　、Ｎ　’、Ｎ”−トリス（メチレンホスフォネートジエチ ルエステル）（Ｎ　ＯＴ　ｐ　Ｄ　Ｅ　）を得た。純粋なＮ０ＴＰＤＥが９６％ の収量（９，２１ｇ、１４．１７ｍｍｏ　Ｉ）で得られ、さらに精製することな （ＮＯＴＰＭＥ　（構造は図１に示す）の合成に用いた。ＣＤＣ１３中のＮ０Ｔ ＰＤＥのＩＨ−ＮＭＲのデータ（７ＭＳゼロで）は、次の通りである：δ（ｐｐ ｍ）：１．３３　（ｔ、１８Ｈ，ＣＨ３）、２．９７（ｓ。
１２Ｈ，Ｎ　ＣＨ２）、３．００　（ｄ、６Ｈ，Ｐ−ＣＨ２）、４．１３　（１ ）、１２Ｈ，０−ＣＨ２）。
９．２０　ｇのＮ０ＴＰＤＥ　（１４，１５ｍｍｏ　ｌ）を２５０ｇのＮａＯＨ （９ｍｌのＨ２Ｏ中）と混合し、２時間後、透明な溶液が得られるまで（およそ ５分）反応混合物全体を沸騰させた。この溶液を室温まで冷やし、さらに−晩装 置した。気孔度等級が粗のフィルターディスク付き加圧フィルター漏斗を用いて 、粘稠な母液から生成結晶を濾過して分離した。この結晶を無水冷エタノールで １度、無水エタノール／ジエチルエーテル（１：　１）混合物で３度、最後にジ エチルエーテルで洗浄した。ＮａＮａ３Ｎ０ＴＰの結晶を、乾燥窒素流中で２５ ℃２時間乾燥させた。微量の８２０およびエタノールを、５時間５０℃でＮＯＴ ＰＭＥの真空乾燥（１０ｍ　ｍ　Ｈｇ　）で除去した。このようにして得た純粋 なＮＯＴＰＭＥは白色結晶で、非常に吸湿性で、水に易溶性、クロロホルムには 相応に溶けた。純粋なＮＯＴＰＭＥの収量は、４０８％（３，２４ｇ、５．７７ ｍｍｏ＋）であった。
ＩＨ−ＮＭＲ（Ｄ２０．ＨＤＯ（７）ピークを、基準点として、４．９０ｐｐｍ に設定した）、δ（ｐｐｍ）：１２３　（ｔ、９Ｈ，−ＣＨ５）、２．５４（ｓ 、ブロード。
６Ｈ，Ｐ−ＣＨ２）、２．７９（ｓ、ブロード、１２Ｈ。
Ｎ−ＣＨ２）、３．９１　（ｐ、６Ｈ，０−ＣＨ２）。
祖址又皇１ １Ｈ−ＮＭＲデータは、ＪＥＯＬ／ＦＸ−２００／ＮＭＲスペクトロメーターに より、室温作動で、１０ｍｍプローブを用いて得た。ＮＯＴＰＭＥおよびその錯 体溶液の実験は、ジェネラルエレクトリック／ＧＮ−５００／ＮＭＲスペクトロ メーターで行った。１０ｍｍブロードバンドプローブは　３１ｐ検出については ２０２．４ＭＨｚに合わせた。ＮＯＴＰＭＥおよびその錯体のシフトは、外部ス タンダードとして８５％のＨ３ＰＯ４を用いて測定した。プローブの温度は±０ ．５℃まで正確であった。
ＮＭＲによるＫＩｌ＋測定に用いられたＮＯＴＰＭＨのサンプルは、トリスを基 剤としてｐ　Ｈ７，４で緩衝化した１１５ｍＭのＫＣＩ、２０ｍＭのＮａＣ１お よび１０ｍＭのＨＥＰＥＳから成る。Ｍ　ｇ　”、Ｃａ２÷またはＺｎ２＋の濃 度を変えながら（典型的には０．５から１０ｍＭ）サンプルに加え、生じた３１ Ｐ−ＮＭＲのスペクトルを得た。共鳴領域はＧＥのコンピュータソフトを用いて ピークを統合してめた。
１血蓋１１Ｊｌ 電位差滴定測定は、コーニング・イオン分析計（Ｃ。
ｒｎｉｎｇ　Ｉｏｎ　Ａｎａｌｙｚｅｒ）モデル２５０およびメトローム・ドー シマット（Ｍｅｔｒｏｈｍ　Ｄｏｒｓｉｍａｔ）自動ビユレット（ブリンクマン インスツルメント社、（Ｂｒｉｎｋｍａｎ　Ｉｎｓｔｒｕｍｅｌｔｓ））を用い て２５℃で行った。水素イオン濃度は、アービングら（Ｉｒｖｉｎｇら、　［１ ５］）が提唱した方法によって測定ｐＨ値からめた。ＮａＮａ３Ｎ０ＴＰは０． １Ｍの塩化臼メチルアンモニウムに溶かし、ｐＨはＨＣＩで低ｐ　Ｈ値に調整し 、０．０９８ＭのＫＯＨで測定した。
Ｋ　ＯＨはフタル酸水素カリウムで電位差滴定測定してスタンダード化し、窒素 雰囲気下で保存した。水素イオン活性係数およびにユは、これら同一の塩類溶液 で別々に決定した。Ｚｎ　（ＮＯＴＰＭＥ）、Ｍｇ　（ＮＯＴＰＭＥ）およびＣ ａ　（ＮＯＴＰＭＥ）の安定定数は、１：１の比で金属およびリガンドを含む溶 液の電位差滴定測定でめた。ＣＯ２を排除するために、すべての測定でサンプル はシクロヘキサン層で覆った。
プロトン化定数（Ｋ８１Ｌ）および安定定数（ＫＭＬおよびに□Ｌ）は、次の等 式によって定義される。
ＫＨＩＬ＝　［ＨＩＬ］　／　（［Ｈｌ−ＩＬ］　［Ｈ”］　）（１）ＫＭＬ＝ 　［Ｍ　Ｌコ　／　（［Ｍコ　［Ｌ］　）　（２）Ｋ□Ｌ＝　［ＭＨＬ］　／　 （［ＭＬ］　［Ｈ”］　）　（３）プロトン化および安定定数は、ＩＢＭのＰＣ で単一非線形アルゴリズム［１６］にかけて得た電位差滴定データからめた。
ＮＯＴＰＭＨの２、血球・加 新鮮な全血をヘパリン処理管に入れ、３０００ｇで６分遠心し、白血球層を除去 した。その後赤血球を、５ｍＭのリン酸緩衝食塩水（ｐＨ７，４）で３度洗浄し た。５０％へマドクリットの赤血球を、１２０ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＭｇＣ ｌ２．１０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７，４）、１０ｍＭのグルコースおよび１０ 　ｍ　ＭのＮＯＴＰＭＥを含む付加用媒体に懸濁し、３７℃で１２時間インキュ ベートした。付加工程中に赤血球の溶解は認められなかった。赤血球を遠心し、 上清を捨てた。等張媒体に懸濁する前に、赤血球をリン酸緩衝食塩水（ｐＨ７， ４）で２度洗浄した。
ｆ見上ｌ１１１ ０．１Ｍの塩化臼メチルアンモニウム中で２５℃のＮＯＴＰＭＥの代表的な電位 差滴定測定曲線は図２に示されている。これらのデータから３つのプロトン化定 数（ｐＫ、＝１１．８．　ｐＨ２＝３．６５．　ｐＫ、＝１．４）が得られた。
ＮＯＴＰＭＨの３ＩＰ−ＮＭＲスペクトルもまたｐＨの関数としてめ（データは 記載されていない）、これらのデータから得られたプロトン化定数は、電位差滴 定によって得られたものと全般的に一致した。三価リンのシフトはポリアザ環の 窒素のプロトン化に非常に鋭敏で、これは元のホスフォネートＮ○ＴＰで観察さ れたもの［１７コと同様である。最初の２つのプロトン化（ｌｏｇＫ＝１１．８ ．　３．６５）は、低周波数への３１ｐのシフトを生じ、これは２つの環の窒素 におけるプロトン化と一致する［１７］。このことは、Ｎ０ＴＰ対ＮＯＴＰＭＥ におけるの最初の窒素のプロトン化は全く同様（それぞれ１ｏｇＫ、＝１２゜１ 対１１．８）であるが、一方、第二の窒素プロトン化は劇的に相違する（１ｏｇ Ｋ２＝９．４対３．６５）ことを示している。ｐＨ２のこれらの相違は、プロト ン化窒素と内部水素結合を形成することについて、ホスフオネート対ホスフォネ ートモノエステル側鎖の能力の差を反映しているのかもしれない。このことは、 ＮＯＴＰＭＥのホスフォネートエステルの酸素（プロトン化定数は１．４より小 ）よりＮ０ＴＰのホスフォネート酸素（プロトン化定数は６．０および７．５） の塩基度はきわめて高いことと一致するであろう。ＮＯＴＰＭＥの３ＩＰ−ＮＭ Ｒスペクトルは、全ｐＨ領域にわたって単一の共鳴を示し、これは全プロトン化 種間の迅速な交換を示している。
１生孔１１ 図２はまた、１当量のＭｇ”、Ｃａ２＋およびＺ　ｎ　”の存在下でのＮＯＴＰ ＭＥの電位差滴定データを示している。これらのデータから得られる、Ｍｇ　（ ＮＯＴＰＭＥ）、Ｃａ　（ＮＯＴＰＭＥ）およびＺｎ　（ＮＯＴＰＭＥ）の安定 定数を、表１にまとめた。
表」。
ＮＯＴＰＭＥのＣａ２＋、Ｍ　ｇ　２＋およびＺｎ２＋との錯体の安定定数 金属イオン　ＫＤ　ＫＤ　ｌｏｇＫＭＬ２５℃　３７℃ Ｃａ２＋　５０ｍＭ　４７．６２ｍＭ　５．１Ｍｇ”　５．７７ｍＭ　４．６６ ｍＭ　６．３Ｚｎ”　１０−”Ｍ　’　−−−１５，４に、値はＮＭＲデータよ り得られ、　ｌ　ｏｇＫ値は２５℃の電位差滴定により決定された。ａ　Ｋ　、 は、ｐＨ７，４のリガンドｐＫ値およびプロトン濃度を考慮するごとによって、 熱力学値（ＩｏｇＫＭＬ＝１５．４）から概算した。
Ｚｎ２＋は、Ｍ　ｇ　２＋またはＣａ２＋のどちらと比較しても、ＮＯＴＰＭＥ とともにはるかに安定な錯体を形成する。これは、よりイオン性の強い種である Ｍ　ｇ　２＋およびＣａ２＋よりも強力なＭ　ｅ　”　−Ｎ結合を形成するＺｎ ２＋の傾向を強く反映するものである。Ｍｇ　（ＮＯＴＰＭＥ）およびＣａ　（ ＮＯＴＰＭＥ）とも、それぞれの対応するＮ０ＴＰ錯体よりも不安定であり［１ ８〕、このことはまた、ホスフォネートエステル側鎖リガンドのより強い酸性特 性を反映するものである。しかし、ＮＯＴＰＭＥは、Ｎ０ＴＰと同じように、Ｃ ａ”より小さいＭｇ　２÷イオンとより安定な錯体を形成する。これは、両方の 場合とも、トリアザシクロノナンのマクロ環のサイズ選択性を反映している。
図３は、添加Ｍ　ｇ　２＋の関数として、５ｍＭのＮＯＴＰＭＥを含む溶液の３ ＩＰ−ＮＭＲスペクトルを示している。このスペクトルは、Ｍ　ｇ　２＋結合Ｎ ＯＴＰＭＥが未結合ＮＯＴＰＭＥとゆっくり交換されることを示している。図４ は、２．０５ｍＭのＺｎ２＋および３８．５ｍＭのＣａｚ＋の存在下での、５ｍ ＭのＮＯＴＰＭＥの”Ｐ−ＮＭＲスペクトルを示している。電位差滴定法でめた 安定定数から予期されたように、Ｍ　ｇ　２−を含む同等な溶液よりも、この溶 液にはより多くのＺｎ（ＮＯＴＰＭＥ）か存在する。興味深いことには、Ｍｇ２ ÷およびＺｎ２＋結合ＮＯＴＰＭＥの化学シフトは全く異なり、実際両金属イオ ンを含む混合物で、Ｚｎ（ＮＯＴＰＭＥ）およびＭｇ　（ＮＯＴＰＭＥ）の特徴 的な共鳴を得ることができる。予期されたように、Ｃａ２＋はきわめて弱く結合 し、Ｃａ　（ＮＯＴＰＭＥ）−の特徴的な共鳴は、３２ｍＭのＣａ２＋が添加さ れて初めて見えるようになる。Ｃａ　（ＮＯＴＰＭＥ）−（２２１ｐｐｍ）の化 学シフトは、またＭｇ　（ＮＯＴＰＭＥ）−（２３，５ｐｐｍ）およびＺｎ　（ ＮＯＴＰＭＥ）−（２３，１ｐｐｍ）のそれとは異なっている。　これは、おそ ら＜Ｍｇ’＋またはＺｎ２＋に対してＣａ”−のサイズか大きく、シクロノナン のくぼみに適合することができないことによるものであろう。
金属結合および未結合ＮＯＴＰＭＨに対応する共鳴領域は、積分およびそれらの 濃度見積によって得られた。Ｍｇ２＋およびＣａ２＋錯体についてＮＭＲによっ て２５℃で得られたに０値は、それぞれ５．’１７ｍＭおよび５０ｍＭである。
これに較べて、他の者［１２コによって報告されたフッ素化キレータ−１ＭＦ− ＡＰＴＲＡは、Ｍ　ｇ　２＋については１ｍＭ、Ｃａ２＋については１２μＭの Ｋｏを有する。
表１はまた、３７℃でのＮＭＲで得られた、Ｍｇ（ＮＯＴＰＭＥ）−およびＣａ 　（ＮＯＴＰＭＥ）−についてのＫ。を示している。明らかに、３７℃における Ｍｇ（ＮＯＴＰＭＥ）−およびＣａ（ＮＯＴＰＭＥ）−間の安定性の差異の規模 は同じである。これは、Ｃａ”よりもＭ　ｇ　２＋に対するＮＯＴＰＭＥの生理 的な温度におけるより強い親和性を、再確認させるものである。
ＮＭＲデータからＺｎ（ＮＯＴＰＭＥ）−のに、値を得ることはできなかった。
これは、測定しようとしたＺｎ２＋が、実質的にすべての測定可能な条件下で、 完全にＮＯＴＰＭＨに結合したからである。
図５は、６から１０の間のｐＨの関数として、Ｃａ２＋、Ｍ　ｇ　２＋およびＺ ｎ２＋のＮＯＴＰＭＥ錯体の３１ｐ。
ＮＭＲの化学シフトを示している。１：１の金属イオンおよびリガンドを含む溶 液では、Ｚｎ　（ＮＯＴＰＭＥ）−の特徴的な共鳴は、このｐＨの全領域で認め ることができるが、Ｍｇ　（ＮＯＴＰＭＥ）−のそれは、ｐＨ６，４より上での み検出可能である。一方、Ｃａ　（Ｎ。
ＴＰＭＥ）−の特徴的共鳴は、ｐＨが７．８以上でのみ認められる。これらの違 いは、生理的ｐＨ（およそ７４）では、Ｃａ２＋よりＭ　ｇ　２＋に対してＮＯ ＴＰＭＥの選択性が大きいことを明瞭に示している。このように、金属が結合し たものの化学シフトはすべて、この範囲を越えるｐＨに実質的に依存しない。
ヒト・、血球　の細胞内遊　Ｍ２◆濃　の゛定図６は、ＲＢＣ中の細胞内遊離Ｍ 　ｇ　２　＋を検出するためのＮＯＴＰＭＥの一応用例を示している。ＮＯＴＰ ＭＥ付加ＲＢＣ（図６ｂ）は、ＮＯＴＰＭＥ含有付加用媒体中で３７℃で、ＲＢ Ｃを５　ｍ　ＭのＭｇＣｌ２の存在下で１２時間インキュベートすることによっ て調製した。ＲＢＣへのＮＯＴＰＭＥの付加は付加用媒体中にＭｇＣｌ２が存在 しないときには認められなかった。
コントロールＲＢＣは、図６ａに示した。
インビトロ実験の場合のように、ＲＢＣ中のＭ　ｇ　２　＋未結合および結合Ｎ ＯＴＰＭＥに対応する２つの共鳴が観察された。ＲＢＣ中の細胞内遊離Ｍ　ｇ　 ２＋濃度は、以下の等式を用いて概算した。
［Ｍｇ２＋コ＝　Ｋう［ＭｇＮＯＴＰＭＥ］／［ＮＯＴＰＭＥ］この例で得られ た細胞内遊離Ｍ　ｇ　２＋濃度は、１７１ｍＭであった。ＲＢＣ中の細胞内遊離 Ｍｇ　２＋量は、通常は０．２−０．３ｍＭの範囲［１２，１９，２０］である ので、この実験で観察された高濃度の細胞内遊離Ｍｇ２＋は、ＮＯＴＰＭＥ錯体 としてＭ　ｇ　２＋の輸送の結果に違いない。二価陽イオン運搬体Ａ２３１８７ の添加に際して、細胞内遊離〜１ｇ２＋濃度の増加（１，９０ｍＭに増加）が認 められた（データは示さず）。これらの結果は、ＮＯＴＰＭＥは、無傷の細胞に おいて遊離Ｍｇ２＋量のわずかな変化を容易に検出することができることを示し ている。
ＮＯＴＰＭＥの錯体形成特性は、トリアザ環の形状およびサイズについての要求 の他に、第一次プロトン化定数のきわめて高い値によって強く影響を受ける。
ＮＯＴＰＭＥのＺｎ”、Ｃａ２＋およびＭｇ”錯体を通常の電位差滴定法によっ て調べることができたという事実は、該錯体が溶液中で比較的急速に形成される ことを示している。表１から分かるように、Ｚｎ”＋は、Ｍ　ｇ　２＋またはＣ ａ２＋のいずれの場合よりも、ＮＯＴＰＭＥとより安定な錯体を形成する。同様 なこの傾向は、これら同じイオンを用いて三酢酸トリアザシクロノナンキレート （ＮＯＴＡ）について観察された。報告されたＺｎ　（ＮＯＴＡ）、Ｍｇ　（Ｎ ＯＴＡ）およびＣａ（ＮＯＴＡ）についてのｌｏｇＫ値は、それぞれ１８３．９ ．６９および８．９２である［２１コ。したがって、カルボキシレートキレート は、これら３つのすべての金属イオンとより安定な錯体を形成するが、これはお そらく、ホスフォネート酸素リガンドよりもきわめて強いカルボキシレート酸素 り゛ガントの塩基度によるものである。親のホスフォネート、Ｎ０ＴＰは、Ｚｎ ”、Ｍ　ｇ　２＋およびＣａ２◆との金属錯体化力について同じ傾向を示すが、 この場合、生じた錯体の安定定数は、ＮＯＴＰＭＥまたはＮ０ＴＡとの場合の対 応する値よりも、すべて数オーダー大きくなっている。報告されたＺｎ　（ＮＯ ＴＰ）　４−１Ｍｇ　（ＮＯＴＰ）４−およびＣａ　（ＮＯＴＰ）’−のｌｏｇ Ｋ値は、それぞれ２４９．１１０．６．４である［１８コ。Ｎ０ＴＰの窒素およ びホスフォネート酸素は、ＮＯＴＰＭＨのものよりきわめて塩基性か強いので、 これらの金属イオンにより生じる安定定数は、すべて大きくなる。しかし、Ｚ　 ｎ　”＞　＞　Ｍ　ｇ　”＞　ＣＢ　”の傾向はそのままである。
ＮＯＴＰＭＥは、フッ素化キレータ−（例えばＢＡｌ）　Ｔ　ＡおよびＡＰＴＲ Ａ）と比べて、生物系における細胞内Ｍｇ２″の測定について、いくつかの利点 をもっている。これらには、　（ａ）合成の容易さ、　（ｂ）　Ｃａ２（よりも Ｍ　ｇ　２・に対するより強い親和性、　（Ｃ）結合および未結合リガント共鳴 に対する交換による顕著な影響がないこと、さらに（ｄ）このキレートの３つの 磁気的に同等な３１ｐ核は生物組織にとって有利なＮＭＲ核を提供し得ること（ それにより細胞エネルギーが同時に測定できるかもしれない）が含まれる。生理 的ｐＨでＮＯＴＰＭＥが示す、Ｃａ２÷よりもＭｇ：！÷に対する顕著な選択性 は、Ｃａ”十の干渉を心配することなく、生物系てＭｇ２４′をモニターするた めに大きな利点を有する。ＮＯＴＰＭＥおよびそのマグネシウム錯体の共鳴は、 組織中のリン含有代謝物とオーバーラツプしないということは、特に強調すべき ことである。
したかって、ＮＯＴＰＭＥは、種々の生理的現象進行時の代謝産物の変化と同様 、細胞内遊離マグネシウムの変化を測定するために融通の利く方法を提供する。
生理的ｐＨにおけるＫ　ｏ　Ｍ　ｇ　（Ｎ　ＯＴ　Ｐ　Ｍ　Ｅ　）−が、多くの 生物系において細胞内Ｍ　ｇ　２　’の測定に必要な範囲にあるということは偶 然であるが、ホスフォネート酸素のアルキル置換基を変えることによって、また はホスフォネート基をトリアザ環結合させている炭素にアルキル鎖を加えること によって、Ｍ　ｇ　２＋に対するＮ。
ＴＰＭＥの親和性を細かく調整することか可能であることを証明できるかもしれ ない。
実施例２ テトラアザ大環式化合物 ＤＯＴＥＰ合成 図７に示したＤＯＴＥ　Ｐは以下のように調製した。
２ｍｌのシクロロエチルホスフィンをゆっくりと氷と混合し、対応するエチルホ スフィン酸を生成する。
室温まで温め、３９０ｍｇの１．４．７．１０−テトラアザシクロドデカンテト ラヒドロクロリド（シクレン四塩酸）　（Ｐａｒｒｉｓｈ　Ｃｈｅｍ、　Ｃｏ、 、オグデン、ユタ）を加え、混合物を窒素雰囲気下で沸騰するまで加熱した。６ ＭのＨＣＩの１０ｍ１に溶かした１５７ｍｇのパラホルムアルデヒドを含む溶液 を、０．５ｍｌ／時の速度で加え、その間混合物を還流し続けた。この最終混合 物をさらに４時間還流し、その後室温まで冷やした。この溶液を粘稠な油となる まで真空下で濃縮し、６ｍｌの水に再溶解し、ＤＯＷｅＸの５０Ｗｘ４（水素形 ）陽イオン交換カラム（ベッドボリュームが７．５ｍ１）に乗せた。カラムを中 性となるまで水で洗浄し、生成物を６０ｍ１の０．６６ＭＨＣｌで溶出した。Ｄ ＯＴＥＰ含有分画を集め、蒸発させて無水エタノールに再溶解し、白色固形物と なるまで蒸発させた。この固形物を無水エーテルに分散させ、濾過し、窒素下で 予備乾燥し、さらに６０〜７０℃で真空下で乾燥させて、白色の非常に吸湿性の 固形物（３６０ｍｇ、収量４４％）を得た。この固形物を封入アンプルで保存し た。元素分析および電位差滴定により、この固形物はＤＯＴＥＰ二塩酸であるこ とが示された。
してのＣｕ」」二ｊノ」二 図９に示した３１ｐスペクトルか、生理的ｐＨの水溶液中に約１ｍＭのＣａ”お よび３ｍＭのＤＯＴＥＰを含む溶液で得られた。ＤＯＴＥＰの結合および未結合 形の３１ｐ共鳴は明瞭な化学シフトを示し、通常組織に認められる代謝産物３１ ｐ共鳴とはいずれもオーバーラツプしない。このことは、ＤＯＴＥＰが適切な加 水分解性エステルを生成することによって細胞に付加されるとき、細胞に補足さ れたＤＯＴＥＰは、次の単純な関係を用いて［Ｃａ　”］　ｔ−０゜の直接測定 を可能にするであろうということを示している ［Ｃａ２＋コｊｒｅｅ　＝　Ｋ、”　［Ｃａ（ＤＯＴＥＰ）］／［ＤＯＴＥＰ］ ｆ、−−ここで、ｐＨ７，４でに、、＝１１μＭ０上記でｐ　Ｈ７，４のＫ。値 は、３１Ｐ　−ＮＭＲ（既知量の［Ｃａ”］　ｔｏｔａｌおよび［Ｄ　ＯＴ　Ｅ 　Ｐ　］　ｔｏ−＆＋を含む溶液のｐＨの関数として結合および未結合積分値を 測定）、および電位差滴定により決定された。このＫ。値は、ＤＯＴＥＰが、約 １〜５０μＭの範囲にわたって［Ｃａ　”］　ｔｒｅ、を測定するために有用で あることを示ＤＯＴＥＰはまた、Ｇｄ３＋と安定な錯体を形成する（ｌｏｇＫは １６にほぼ等しい）。生じた錯体は好ましい水プロトン緩和性を有しくＲ＝　５ ．１　ｓ−’ｍＭ−’）、さらに図１０のデータに示したように、この錯体はＧ ｄ　（ＤＯＴＡ）と同じ多くの動力学的利点をもつ。この実験では、Ｇｄ　（Ｄ ＯＴＥＰ）−およびＧｄ　（ＤＯＴＡ）−を０．１ＭのＨＣＩに溶かし、遊離Ｇ ｄ３＋および遊離リガンドにそれらを分解した後、水緩和測定を行った。提示し たように、２つの錯体の強酸中の分解半減期は、Ｇｄ　（ＤＯＴＡ）−について は約１１０時間、Ｇｄ　（ＤＯＴＥＰ）−については３０時間であった。このこ とは、ｐＨ７，４の両錯体の分解速度は、これより数オーダーの規模で大きくな り（およそ１０６時間）、したがってヒトに使用するについて安全であることを 示している。
及Ｕ ＮＯＴＰＭＥ−ＡＣの合成 ［ＮＯＴＰＭＥ−ＡＣ＝１．４．７−　）リアザシクロノナン−Ｎ　、Ｎ　’、 Ｎ”−トリス（メチレンホスフォネートモノエチルエステル酢酸無水物：　１． ４．７−ｔｒｉａｚａｃｙｃｌ。
ｎｏｎａｎｅ−Ｎ、Ｎ’、Ｎ”−ｔｒｉｓ（ｍｅｔｈｙｌｅｎｅｐｈｏｓｐｈｏ ｎａｔｅ　ｍｏｎｏｅｔｈｙｌｅｓｔｅｒ　ａｃｅｔｉｃ　ａｃｉｄ　ａｎｈｙ ｄｒｉｄｅ）］ＮＯＴＰＭＥ　トリナトリウム塩（１７８，６３ｍｇ。
０．３１８ｍｍｏ　ｌ）を４．０ｍｌの無水クロ０ホルム（Ｐ２Ｏ，、上で新し く蒸留したもの）に溶かし、１２０μｍの塩化アセチルを加えた。この溶液を密 栓をした容器中で２４時間、室温で攪拌した。続いてこの溶液を乾燥窒素雰囲気 下で、黄色がかった非常に粘稠な油となるまで蒸発させた。無水エーテルをこの 油に加え、ＮＯＴＰＭＥ−ＡＣ（塩化ナトリウム付加物として沈殿）を濾過し、 乾燥窒素下で３５〜４０℃で乾燥させた。　ＮＯＴＰＭＥ−ＡＣ（２３４，２４ ｍｇ、　９２．３％（ＮＯＴＰＭＥ−ＡＣ３ＮａＣｌの代置を基に計算））は、 きわめて吸湿性で、水に鋭敏な粉末である。それは、水、クロロホルムおよびＤ ＭＳＯに容易に溶ける。
’ＨＮＭＲ（ＣＤＣＩ３／ＴＭＳ）：１．３１　（ｔ。
９Ｈ，−ＣＨ５）、２．２４＆２．２１　（２つのｓｇ（ｓ）。
９Ｈ，Ｃ（０）　−ＣＨ５）、３．２９（ｓｇ、　ｖ、ｂｒ、。
１８Ｈ，Ｎ−ＣＨ２−ＣおよびＮ−ＣＨ２−Ｐ）、４１２＆４．３０　（２−） のｍ　（ｓ）、６Ｈ，０−ＣＨ２）。
ＮＯＴＰＭＥ−Ｈの合成 ［ＮＯＴＰＭＥ−Ｂ＝１．４．７−トリアザシクロノナンーＮ　、Ｎ　’、Ｎ” −トリス（メチレンホスフォネートモノエチルエステル安息香酸無水物：　１． ４．７−ｔｒｉａｚａｃｙｃｌｏｎｏｎａｎｅ−Ｎ、Ｎ’、Ｎ”−ｔｒｉｓ（ｍ ｅｔｈｙｌｅｎｅｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ　ｍｏｎ。
ｅｔｈｙｌｅｓｔｅｒ　ｂｅｎｚｏｉｃ　ａｃｉｄ　ａｎｈｙｄｒｉｄｅ）］Ｎ ＯＴＰＭＥ　ト　リ　す　ト　リ　ウ　ム　塩　（１６４，８２ｍｇ。
０．２９４ｍｍｏ　ｌ）および塩化ベンゾイル（１０５μ！、０．８８３ｍｍｏ ｌ）を、４０ｍｌの無水クロロホルム中で２４時間室温で反応させた。この反応 混合物を、ＮＯＴＰＭＥ−ＡＣの合成に用いたのと同様な方法で処理した。生成 物ＮＯＴＰＭＥ−Ｂか塩化ナトリウム付加物として得られた（２０４．３２ｍｇ 、７０７％（ＮＯＴＰＭＥ−Ｂ　３Ｎａ　Ｃｌの代置を基に計算））。
ＮＯＴＰＭＥ−Ｂは極めて吸湿性で、水に鋭敏な粉末である。それは水、クロロ ホルムおよびＤＭＳＯに溶ける。
ＩＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ　３／ＴＭＳ）　：１．２９　（ｔ。
−ＣＨ３）、３．３２　（ｍ、Ｖ、ｂ　ｒ　、、　Ｎ−ＣＨ，−ＣおよびＮ−Ｃ Ｈ２−Ｐ）、４，１０と４．３５（二つのｍ（ｓ）、ＯＣＨ２）、　７．４９　 （ｍ、Ａｒ−Ｈ）、　８゜０２　（ｄ、　Ａｒ−Ｈ）。
至適合成方法を決定するための最小の努力により、類似のホスフォネートまたは ホスフィン酸無水物を調製するために、種々のハロゲン化アリールを用いること ができることは、当業者が理解するところである。
さらに、容易な脱離基（例えばカルボニル含有アルキル）が、水性媒体中のより 大きな安定性、さらにまた部分的分解による細胞内への通過のため、およびＮＭ Ｒ金属分析における使用のために好ましいであろう。
ＮＯＴＰＭＥ　のハ　・ 用いられるＮＯＴＰＭＥ誘導体は、ベンゾイルおよびアセチル誘導体である。新 鮮全血をヘパリン処理管に取り、３０００ｇで、３分間遠心し、白血球層を除去 した。その後、沈殿赤血球を３度、５ｍＭのリン酸緩衝食塩水（ｐＨ７，４）で 洗浄した。５０％へマドクリットの赤血球をＮＯＴＰＭＥ誘導体含有誘導体含有 付加温体中。付加用媒体は、１３０ｍＭのＮ　ａ　Ｃｌ。
５ｍＭのＮＯＴＰＭＥ誘導体（ベンゾイルまたはアセチル誘導体）、１ｒｒ１Ｍ のアデニン、１０ｍＭのグルコースおよび１０ｍＭのＨＥＰＥＳ　（ｐＨ７，４ ）を含んでいた。上記付加用媒体中の赤血球を、１時間２５℃でインキュベート した。赤血球の溶解は認められなかった。１時間ＮＯＴＰＭＥ誘導体で付加させ た後、この赤血球懸濁液を遠心し、上溝を捨てた。ＮＭＲ測定のために等張食塩 水に懸濁する前に、赤血球を２度、５　ｍ　Ｍのリン酸緩衝食塩水（ｐＨ７，４ ）で洗浄した。
３１Ｐ−ＮＭＲ測定により、これらＮＯＴＰＭＥ誘導体は赤血球内に付加され、 ＮＯＴＰＭＥに加水分解されることが示された。ＮＭＲ測定後、サンプルを遠心 し、ＮＯＴＰＭＥの漏出の有無について上清を分析した。
ＮＯＴＰＭＥの漏出は、ＮＭＲ測定の間中認められなかった。したがって、これ らのＮＯＴＰＭＥ誘導体は赤血球に入り、ＮＯＴＰ−ＭＥに加水分解され、赤血 球内に止まることは明瞭である。
１１Ａ ・ポリアザ　環　Ｎ−アルキルホスフォ　−トポリアザ　環式Ｎ−アルキルホス フィンまたはそれらの　、　の　１１、Ａ 実施例１．２および３の方法は、有機化学合成の分野の業者にとり、適切な安定 ポリアザ大環式化合物のいずれについても容易に応用できる。適切なポリアザ大 環式化合物には、アルドリッチケミカル社（Ａｌｄｒｉｃｈ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ 　Ｃｏ、　ミルウォーキー、ライスコンシン）が市販している、次のトリアザお よびテトラアザ大環式化合物が含まれる。
１．５．９−　トリアザシクロドデカン（図１０参照）、１．４．８．１２−テ トラアザシクロペンタデカン（図１１参照）、 １．４．８．１１−テトラアザシクロテトラデカン（図１２参照）である。
以下の列記は、記載された理由にある関連性の範囲の限りにおいて、引用するこ とにより本明細書の一部２、Ｒ，Ｄ、Ｇｒｕｂｂｓ　＆　Ｍ、Ｅ、Ｍａｇｕｉｒ ｅ、引非匝且と聾」　６：１１３３、Ｇ、Ｃｈａｒｔｏｎ、Ｇ、Ｒｏｖｉｒａ、 Ｙ、Ｂｅｎ−Ａｒ１　＆　Ｖ、Ｌｅｖｉｅｌ。
陰且Ｂｒａｉｎ　Ｒｅｓ、５８：２０２（１９８５）４、Ｄ、Ｖｅｌｏｓｏ、Ｒ ，Ｗ、Ｇｗｙｎｎ、Ｍ、０ｓｋａｒｓｓｏｎ　＆　Ｒ，Ｌ、Ｖｅｅｃｈ。
Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、２４８：４８１１（１９７３）５、Ｊ、Ｒ，Ｌｏｐｅ ｚ、Ｌ、Ａｌａｍｏ、Ｃ，Ｃａｐｕｔｏ　Ｊ、Ｖｅｒｇａｒａ　＆Ｒ，ＤｉＰｏ ｌｏ、Ｂｉｏｃｈｉｍ、Ｂｉｏ　ｈ　ｓ、Ａｃｔａ　８０４：１（１９８４）６ 、Ｃ，Ｈ，Ｆｒｙ、■」Ａ且りれ」　５：３０６（１９８６）７、Ｆ、Ｊ、Ｂｒ １ｎｋｌｅｙ　＆　Ａ、５ｃａｒｐａ、ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔ、５０：８２（１９ ７５）８．　Ｔ、Ｊ、Ｒｉｎｋ、Ｒ，Ｙ、Ｔｓｉｅｎ　＆　Ｔ、Ｐｏｚｚａｎ、 ＪＣｅｌｌ、Ｂｉｏｌ、９５：１８９（１９８２）９、Ｂ、Ｅ、Ｃｏｒｋｅｙ、 Ｊ、Ｄｕｓｚｙｎｓｋｉ、Ｔ、Ｌ、Ｒｉｃｈ、Ｂ１０、Ｇ、Ａ、Ｓｍ１ｔｈ、Ｔ 、Ｒ，Ｈｅ５ｋｅｔｈ、Ｊ、Ｃ，Ｍｅｔｃａｌｆｅ、　ＪＦｅｅｎｅｙ　＆　Ｐ 、Ｇ、Ｍｏｒｒｉｓ、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　５ｃｉ１２、Ｌ 、Ａ、Ｌｅｖｙ、Ｅ、Ｍｕｒｐｈｙ、Ｂ、Ｒａｊｕ　＆　Ｒ，Ｅ、Ｌｏｎｄｏｎ 。
Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒ　２７：４０４１（１９８８）１３、Ｅ、Ｍｕｒｐｈｙ 、Ｃ，Ｓｔｅｅｎｂｅｒｇｅｎ、Ｌ、Ａ、Ｌｅｖｙ、Ｂ、Ｒａｊｕ　＆Ｒ，Ｅ、 Ｌｏｎｄｏｎ、Ｊ、Ｂｉｏ１．Ｃｈｅｍ、２６４：５６２２（１９８９）１４、 Ｅ、Ｍａｒｂａｎ、Ｍ、Ｋｉｔａｋａｚｅ、Ｈ，Ｋｕｓｕｏｋａ、Ｊ、ＫＰｏｔ ｅｒｆｉｅｌｄ、Ｄ、Ｔ、Ｙｕｅ　＆　Ｖ、Ｐ、Ｃｈａｃｋｏ、Ｐｒｏｃ、Ｎａ ｔｌＡｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ　８４：６００５（１９８７）　−１５、Ｈ，Ｍ 、Ｉｒｖｉｎｇ、Ｍ、Ｃ，Ｍｉｌｅｓ　＆　Ｌ、Ｄ、Ｐｅｔｉｔ、Ａｎａｌ、Ｃ ｈｉｍ。
柱ハ井４７５（１９６７） １６、Ｍ、Ｓ、Ｃａｃｅｉ　＆　Ｗ、Ｐ、Ｃａｃｈｅｒｉｓ、　肚す５：３４０ （１９８４）１７、　（ａ）　Ｃ，Ｆ、Ｇ、Ｃ，Ｇｅｒａｌｄｅｓ、　Ａ、Ｄ、 ５ｈｅｒｒｙ　＆　Ｗ、Ｐ。
Ｃａｃｈｅｒｉｓ、Ｉｎｏｒ　、　Ｃｈｅｗ、２８：３３６（１９８９）；（ｂ ）　Ｓ、Ｃｏｒｔｅｓ、　’Ｅ、Ｂｒｕｃｈｅｒ、　Ｃ，Ｆ、Ｇ、Ｃ，Ｇｅｒａ ｌｄｅｓ、　＆Ａ、Ｄ、５ｈｅｒｒｙ　Ｉｎｏ、ｒ　、Ｃｈｅｍ、２９：５（１ ９９０）１８、Ｍ、１．Ｋａｂａｃｈｎｉｋ、Ｔ、Ｙａ、Ｍｅｄｖｅｄ、Ｙｕ、 Ｍ、Ｐｏ１ｉｋａｒｐｏｖ。
Ｂ、に、５ｃｈｅｒｂａｋｏｖ、Ｆ、１．Ｂｅ１ｓｋｉｉ、Ｅ、１．Ｍａｔｒｏ ｓｏｖ　＆Ｍ、Ｐ、Ｐａ５ｅｃｈｎｉｋ　Ｉｚｖ、Ａｋａｄ、Ｎａｕｋ、５ＳＳ ＲＳｅｒ　Ｋｈｉｍ１９、Ｒ，に、Ｇｕｐｔａ、Ｊ、Ｌ、Ｂｅｎｏｖｉｃ　＆　 Ｚ、Ｂ、Ｒｏｓｅ、Ｊ、Ｂｉｏｌす！し起り・６４７．２（１９７８） ２０、Ｐ、Ｗ、Ｆｌａｔｍａｎ　＆　Ｖ、Ｌ、Ｌｅｗ、Ｎａｔｕｒｓ　（Ｌｏｎ ｄｏｎ）　２６７：２１、Ａ、Ｂｅｖｉｌａｃｑｕａ、Ｒ，Ｔ、Ｇｅ１ｂ、　Ｗ 、Ｂ、Ｈｏｂａｒｄ　＆　Ｌ、ＦＺｏｍｐａ　Ｉｎｏｒ　、　Ｃｈｅｍ、２６： ２６９９（１９８７）Ｒ 塩基の容積／ｍ１ ２．３１化学シフト １Ｆｔ）回。０回 Ｈ 補正書の翻訳文提出書 （特許法第１８４条の８） 平成５年５月１９日り

Claims (29)

    【特許請求の範囲】
  1. １．次の式を有するポリアザ大環式化合物またはその塩。 ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、 ｘは２、３、またはｐ２（ｓ）とｑ３（ｓ）のある組み合わせ（ここでｐ＋ｑ＝ ｙ）； ｙは３または４で； Ｒは（ＣＨ２）ｚＰ（＝０）Ｒ１Ｒ２で；Ｒ１はＲ３またはＯＲ３（ここでＲ３ はアルキル基、シクロアルキル基またはアリール基）で； Ｒ２はＨ、アルキル基またはＯ＝ＣＲ４（ここでＲ４はアルキル基、シクロアル キル基またはアリール基）で；ｚは１から３である。
  2. ２．次の式を有するポリアザ大環式化合物−金属錯体。 ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、 ｘは２、３、またはｐ２（ｓ）とｑ３（ｓ）のある組み合わせ（ここでｐ＋ｑ＝ ｙ）で； ｙは３または４で； Ｒは（ＣＨ２）ｚＰ（＝０）Ｒ１Ｒ２で；Ｒ１はＲ３またはＯＲ３（ここでＲ３ はアルキル基、シクロアルキル基またはアリール基）で； Ｒ２はＨ、アルキル基またはＯ＝ＣＲ４（ここでＲ４はアルキル基、シクロアル キル基またはアリール基）で；ｚは１から３で； ｒは２または３で； Ｍｅは金属イオンである。
  3. ３．ｙが３である、請求項１または２に記載の化合物。
  4. ４．ｙが４である、請求項１または２に記載の化合物。
  5. ５．ｙが３で、ｘが２である、請求項１または２に記載の化合物。
  6. ６．ｙが４で、ｘが２である、請求項１または２に記載の化合物。
  7. ７．ｙが３で、ｐが１で、ｑが２であるか、または、ｐが２で、ｑが１である、 請求項１または２に記載の化合物。
  8. ８．ｙが４で、ｐが１で、ｑが３であるか、ｐが２で、ｑが２であるか、または ｐが３で、ｑが１である、請求項１または２に記載の化合物。
  9. ９．ｚが１である、請求項１または２に記載の化合物。
  10. １０．Ｒ１がＲ２である、請求項１または２に記載の化合物。
  11. １１．Ｒ１がＯＲ２である、請求項１または２に記載の化合物。
  12. １２．ｎが２である、請求項１または２に記載の化合物。
  13. １３．ｘが２で、ｙが４で、ｚが１で、さらにＲ１がＲ２である、請求項１また は２に記載の化合物。
  14. １４．ｘが２で、ｙが４で、ｚが１で、Ｒ１がＲ２で、さらにｎが２である、請 求項１または２に記載の化合物。
  15. １５．ｘが２で、ｙが３で、ｚが１で、Ｒ１がＯＲ２で、さらにｎが２である、 請求項１または２に記載の化合物。
  16. １６．Ｍｅ＋１がＣａ＋２、Ｍｇ＋２、Ｚｎ＋２またはＧｄ＋３である、請求項 ２に記載の錯体。
  17. １７．次の式を有する化合物またはその塩。 ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、 ＲはＣｎＨ１＋２ｎで； Ｒ′はＨ、アルキル基またはＯ＝ＣＲ４（ここでＲ４はアルキル基、シクロアル キル基またはアリール基）である。
  18. １８．ｎが１ないし２０である、請求項１７に記載の化合物。
  19. １９．次の式を有する化合物またはその塩。 ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、 Ｒ１はＣｎＨ１＋２ｎで； Ｒ２はＨ、アルキル基またはＯ＝ＣＲ４（ここでＲ４はアルキル基、シクロアル キル基またはアリール基）である。
  20. ２０．ｎが１ないし２０である、請求項１９に記載の化合物。
  21. ２１．次の式を有する化合物またはその塩。 ▲数式、化学式、表等があります▼
  22. ２２．二価金属イオンの細胞内濃度を算定する方法であって、該方法が、下記の 式を有するポリアザ大環式化合物またはその塩の細胞内局在化を促進する条件下 で細胞を処理することと、３１Ｐ・ＮＭＲスペクトルにおける変化を測定するこ ととからなる、該変化が細胞内二価金属濃度に比例するものである、該細胞内濃 度の算定方法。 ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、 ｘは２、３、またはｐ２（ｓ）とｑ３（ｓ）のある組み合わせ（ここでｐ＋ｑ＝ ｙ）で； ｙは３または４で； Ｒは（ＣＨ２）ｚＰ（＝０）Ｒ１Ｒ２で；Ｒ１はＲ３またはＯＲ３（ここでＲ３ はアルキル基、シクロアルキル基またはアリール基）で； Ｒ２はＨ、アルキル基または０＝ＣＲ４（ここでＲ４はアルキル基、シクロアル キル基またはアリール基）で；ｚは１から３である。
  23. ２３．該金属がカルシウム、マグネシウムまたは亜鉛である、請求項２２に記載 の方法。
  24. ２４．該金属がマグネシウムである、請求項２２に記載の方法。
  25. ２５．ｘが２で、ｙが３で、ｚが１で、Ｒ１がＯＲ２で、さらにｎが２である、 請求項２２に記載の方法。
  26. ２６．ｘが２で、ｙが４で、ｚが１で、Ｒ１がＲ２で、さらにｎが２である、請 求項２２に記載の方法。
  27. ２７．被験者の磁気共鳴画像を増強する方法であって、該方法が、被験者に下記 の式を有するポリアザ大環式化合物−金属錯体を投与することと、該被験者の磁 気共鳴画像を得ることとからなる、該磁気共鳴画像増強方法。 ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、 ｘは２、３、またはｐ２（ｓ）とｑ３（ｓ）のある組み合わせ（ここでｐ＋ｑ＝ ｙ）で； ｙは３または４で； Ｒは（ＣＨ２）ｚＰ（＝Ｏ）Ｒ１Ｒ２で；Ｒ１はＲ３またはＯＲ３（ここでＲ３ はアルキル基、シクロアルキル基またはアリール基）で； Ｒ２はＨ、アルキル基またはＯ＝ＣＲ４（ここでＲ４はアルキル基、シクロアル キル基またはアリール基）で；ｚは１から３で； Ｍｅは常磁性金属で； ｒは２または３である。
  28. ２８．該金属がランタニドである、請求項２７に記載の方法。
  29. ２９．該金属がガドリニウムであり、ｒが３である、請求項２７に記載の方法。
JP50107392A 1984-10-18 1991-11-12 金属イオン錯体化のためのポリアザ大環式化合物 Expired - Fee Related JP3334717B2 (ja)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US06/662,075 US4639365A (en) 1984-10-18 1984-10-18 Gadolinium chelates as NMR contrast agents
US615,615 1990-11-19
US07/615,619 US5342606A (en) 1984-10-18 1990-11-19 Polyazamacrocyclic compounds for complexation of metal ions
PCT/US1991/008438 WO1992008725A1 (en) 1984-10-18 1991-11-12 Polyazamacrocyclic compounds for complexation of metal ions

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JPH06502645A true JPH06502645A (ja) 1994-03-24
JP3334717B2 JP3334717B2 (ja) 2002-10-15

Family

ID=34922814

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP50107392A Expired - Fee Related JP3334717B2 (ja) 1984-10-18 1991-11-12 金属イオン錯体化のためのポリアザ大環式化合物

Country Status (20)

Country Link
US (1) US5342606A (ja)
JP (1) JP3334717B2 (ja)
CN (2) CN1036717C (ja)
AT (1) ATE144522T1 (ja)
AU (1) AU654987B2 (ja)
CA (1) CA2095615C (ja)
DE (1) DE69122881T2 (ja)
ES (1) ES2093816T3 (ja)
FI (1) FI932231A (ja)
HK (1) HK88897A (ja)
HU (1) HUT64768A (ja)
IE (1) IE914001A1 (ja)
IL (1) IL100073A (ja)
MX (1) MX9102116A (ja)
NO (1) NO307380B1 (ja)
NZ (1) NZ240626A (ja)
PT (1) PT99556B (ja)
SG (1) SG48154A1 (ja)
WO (1) WO1992008725A1 (ja)
ZA (1) ZA919127B (ja)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH10512584A (ja) * 1995-06-26 1998-12-02 コンキャット リミティド 第一遷移系列元素に対してキレート化親和性および選択性のある化合物とその医療および診断への使用
WO2011021390A1 (ja) * 2009-08-20 2011-02-24 富士フイルムＲｉファーマ株式会社 ビスホスホン酸誘導体及びその放射性金属核種標識体

Families Citing this family (66)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5362476A (en) * 1984-10-18 1994-11-08 Board Of Regents, The University Of Texas System Alkyl phosphonate polyazamacrocyclic cheates for MRI
EP0455380B1 (en) * 1990-04-18 1997-01-15 Celltech Therapeutics Limited Tetra-aza macrocycles; processes for their preparation, and their use in magnetic resonance imaging
US5532006A (en) * 1993-04-23 1996-07-02 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Magnetic gels which change volume in response to voltage changes for MRI
US5393892A (en) * 1993-05-07 1995-02-28 Ibc Advanced Technologies, Inc. Processes for removing, separating and concentrating lead, thallium, alkali metals, alkaline earth metals from concentrated matrices using macrocyclic polyether cryptand ligands bonded to inorganic supports
US5554749A (en) * 1994-01-14 1996-09-10 Mallinckrodt Medical, Inc. Functionalized macrocyclic ligands for imaging applications
DE4403039A1 (de) * 1994-01-28 1995-08-03 Schering Ag Oktaazamakrocyclen, deren Metallkomplexe, Verfahren zu deren Herstellung, diese Komplexe enthaltende Mittel sowie deren Verwendung in Diagnostik und Therapie
US5622687A (en) * 1994-11-15 1997-04-22 Molecular Biosystems, Inc. Calixarene conjugates useful as MRI and CT diagnostic imaging agents
ES2094101B1 (es) * 1995-06-13 1997-08-01 Univ Madrid Nac Educacion Complexonas de naturaleza de acidos n-2-(azol-1(2)-il)etiliminodiaceticos, sintesis, estudio analitico y aplicaciones biologicas.
US5834456A (en) * 1996-02-23 1998-11-10 The Dow Chemical Company Polyazamacrocyclofluoromonoalkylphosphonic acids, and their complexes, for use as contrast agents
US6093382A (en) 1998-05-16 2000-07-25 Bracco Research Usa Inc. Metal complexes derivatized with folate for use in diagnostic and therapeutic applications
US6776977B2 (en) 2001-01-09 2004-08-17 Bristol-Myers Squibb Pharma Company Polypodal chelants for metallopharmaceuticals
US20050112066A1 (en) * 2003-11-26 2005-05-26 Concat Lp, A California Limited Partnership Complexes of cyclic polyaza chelators with cations of alkaline earth metals for enhanced biological activity
PL1791565T3 (pl) 2004-09-23 2016-10-31 Modyfikowane cysteiną przeciwciała i koniugaty
US20100111856A1 (en) 2004-09-23 2010-05-06 Herman Gill Zirconium-radiolabeled, cysteine engineered antibody conjugates
MX2008015132A (es) 2006-05-30 2008-12-10 Genentech Inc Anticuerpos e inmunoconjugados y sus usos.
ES2636089T3 (es) 2006-10-27 2017-10-05 Genentech, Inc. Anticuerpos e inmunoconjugados y usos para los mismos
CA2676766A1 (en) 2007-02-09 2008-08-21 Genentech, Inc. Anti-robo4 antibodies and uses therefor
PT2176296E (pt) 2007-07-16 2012-05-14 Genentech Inc Anticorpos e imunoconjugados anti-cd79b e métodos de utilização
JP2010533495A (ja) 2007-07-16 2010-10-28 ジェネンテック， インコーポレイテッド ヒト化ＣＤ７９ｂ抗体およびイムノコンジュゲートならびにそれらの使用
MY157403A (en) 2008-01-31 2016-06-15 Genentech Inc Anti-cd79b antibodies and immunoconjugates and methods of use
JP6132548B2 (ja) 2009-04-01 2017-05-24 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ＦｃＲＨ５抗体および免疫接合体および使用方法
PL2896404T3 (pl) 2009-06-04 2017-12-29 Novartis Ag Sposoby identyfikacji miejsc koniugacji IgG
CA2781682A1 (en) 2009-12-04 2011-06-09 Genentech, Inc. Multispecific antibodies, antibody analogs, compositions, and methods
SG185430A1 (en) 2010-06-03 2012-12-28 Genentech Inc Immuno-pet imaging of antibodies and immunoconjugates and uses therefor
MX336540B (es) 2010-06-08 2016-01-22 Genentech Inc Conjugados y anticuerpos manipulados geneticamente con cisteina.
WO2014006124A1 (en) 2012-07-04 2014-01-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Covalently linked antigen-antibody conjugates
HUE029435T2 (en) 2012-07-04 2017-02-28 Hoffmann La Roche Anti-theophylline antibodies and methods of their application
KR20150030755A (ko) 2012-07-04 2015-03-20 에프. 호프만-라 로슈 아게 항-바이오틴 항체 및 사용 방법
CA2930046A1 (en) 2014-01-03 2015-07-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Covalently linked polypeptide toxin-antibody conjugates
JP6602304B2 (ja) 2014-01-03 2019-11-06 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー 共有結合で連結されたヘリカー−抗ヘリカー抗体コンジュゲートおよびその用途
BR112016013849A2 (pt) 2014-01-03 2017-10-10 Hoffmann La Roche conjugados de anticorpos biespecíficos antihapteno/antirreceptores da barreira hematoencefálica, seus usos, e formulação farmacêutica
EP3191521A2 (en) 2014-09-12 2017-07-19 F. Hoffmann-La Roche AG Cysteine engineered antibodies and conjugates
WO2016096741A1 (en) 2014-12-17 2016-06-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Novel methods for enzyme mediated polypeptide conjugation using sortase
EP3353314A1 (en) 2015-09-25 2018-08-01 H. Hoffnabb-La Roche Ag Transamidation employing sortase a in deep eutectic solvents
WO2017050874A1 (en) 2015-09-25 2017-03-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Process for producing thioesters employing a sortase a
BR112018003594A2 (pt) 2015-09-25 2018-09-25 Hoffmann La Roche cadeia pesada de imunoglobulina recombinante, anticorpos, método de produção de conjugado e conjugados
EP3353291B1 (en) 2015-09-25 2021-06-09 F. Hoffmann-La Roche AG Novel soluble sortase a
JP6727325B2 (ja) 2016-03-30 2020-07-22 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 改善されたソルターゼ
US10072032B2 (en) * 2016-09-19 2018-09-11 Afton Chemical Corporation AminoBisPhosphonate antiwear additives
EP3610040A1 (en) 2017-04-12 2020-02-19 H. Hoffnabb-La Roche Ag A method for sequencing reaction with tagged nucleoside obtained via pictet spengler reaction
WO2019012019A1 (en) 2017-07-13 2019-01-17 F. Hoffmann-La Roche Ag NEW BINDING AGENT AND DOSAGE FOR PIVKA
EP3697813A1 (en) 2017-10-20 2020-08-26 H. Hoffnabb-La Roche Ag Copy protection for antibodies
KR20200090823A (ko) 2017-11-30 2020-07-29 제넨테크, 인크. 항-pd-l1 항체 및 pd-l1 탐지를 위하여 동일한 항체를 이용하는 방법
CN111801351A (zh) 2018-03-14 2020-10-20 豪夫迈·罗氏有限公司 抗体亲和力成熟的方法
WO2019175127A1 (en) 2018-03-14 2019-09-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Novel anti-troponint antibodies
EP3781600A1 (en) 2018-04-18 2021-02-24 F. Hoffmann-La Roche AG Novel anti-thymidine kinase antibodies
CN112639475A (zh) 2018-08-31 2021-04-09 豪夫迈·罗氏有限公司 Dlbcl的预后指数中的胸苷激酶(tk-1)
EP3856786A4 (en) 2018-09-28 2022-07-20 Imaginab, Inc. CONSTRUCTIONS OF CD8 IMAGING AND THEIR METHODS OF USE
CN114144675A (zh) 2019-07-22 2022-03-04 豪夫迈·罗氏有限公司 S100a9作为血液生物标志物用于子宫内膜异位症的非侵入性诊断
EP4004552A1 (en) 2019-07-22 2022-06-01 F. Hoffmann-La Roche AG S100a12 as blood biomarker for the non-invasive diagnosis of endometriosis
CN114144676A (zh) 2019-07-22 2022-03-04 豪夫迈·罗氏有限公司 S100a6作为血液生物标志物用于子宫内膜异位症的非侵入性诊断
EP4004551A1 (en) 2019-07-22 2022-06-01 F. Hoffmann-La Roche AG Substance p as blood biomarker for the non-invasive diagnosis of endometriosis
CN114144673A (zh) 2019-07-22 2022-03-04 豪夫迈·罗氏有限公司 S100a8作为血液生物标志物用于子宫内膜异位症的非侵入性诊断
JP2023502360A (ja) 2019-11-15 2023-01-24 エフ．ホフマン－ラ ロシュ アーゲー 患者試料における質量分析測定のためのβ－ラクタム抗生物質の誘導体化
KR20230092930A (ko) 2020-10-30 2023-06-26 에프. 호프만-라 로슈 아게 담관암종의 표지자로서의 timp1
WO2022090455A1 (en) 2020-11-02 2022-05-05 F. Hoffmann-La Roche Ag Sars-cov-2 nucleocapsid antibodies
WO2022207628A1 (en) 2021-03-30 2022-10-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Scf as blood biomarker for the non-invasive diagnosis of endometriosis
JP2024511867A (ja) 2021-04-01 2024-03-15 エフ． ホフマン－ラ ロシュ アーゲー 子宮内膜症の非侵襲的診断のための血液バイオマーカーとしてのｐｓｐ９４
CN117337394A (zh) 2021-05-17 2024-01-02 豪夫迈·罗氏有限公司 sFRP4作为血液生物标志物用于子宫腺肌病的非侵入性诊断
WO2023072904A1 (en) 2021-10-26 2023-05-04 F. Hoffmann-La Roche Ag Monoclonal antibodies specific for sars-cov-2 rbd
WO2023111168A1 (en) 2021-12-17 2023-06-22 F. Hoffmann-La Roche Ag A novel antibody for detection of amyloid beta 42 (aβ42)
WO2023131594A1 (en) 2022-01-05 2023-07-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Derivatization of compounds in patient samples for therapeutic drug monitoring (tdm)
WO2023247752A1 (en) 2022-06-23 2023-12-28 F. Hoffmann-La Roche Ag Method for diagnosing endometriosis and for classifying the stage of endometriosis
WO2024017983A1 (en) 2022-07-22 2024-01-25 F. Hoffmann-La Roche Ag Meteorin-like protein (metrnl) as (blood) biomarker for the diagnosis of polycystic ovarian syndrome
WO2024017985A1 (en) 2022-07-22 2024-01-25 F. Hoffmann-La Roche Ag Fibroblast growth factor binding protein 1 (fgfbp1) as (blood) biomarker for the diagnosis of polycystic ovarian syndrome
WO2024017982A1 (en) 2022-07-22 2024-01-25 F. Hoffmann-La Roche Ag Leukotriene a4 hydrolase (lta4h) as (blood) biomarker for the diagnosis of polycystic ovarian syndrome

Family Cites Families (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3932451A (en) * 1973-11-27 1976-01-13 E. I. Du Pont De Nemours & Company 1,4,7,10-Tetraazatetracyclo[5.5.1.04,13.010,13 ]tridecane and its conjugate acids
US3930867A (en) * 1974-01-07 1976-01-06 E. I. Du Pont De Nemours And Company Macrocyclic polyamines as sensitizers for silver halide emulsions
US3987128A (en) * 1975-08-22 1976-10-19 E. I. Du Pont De Nemours And Company Tetracyclic tetraamino phosphoranes and method of preparation
US3996276A (en) * 1975-08-22 1976-12-07 E. I. Du Pont De Nemours And Company Bicyclic and tricyclic phosphorous triamides
US4038312A (en) * 1975-08-22 1977-07-26 E. I. Du Pont De Nemours And Company Tricyclic phosphorous triamides
US4085106A (en) * 1976-01-07 1978-04-18 E. I. Du Pont De Nemours And Company Bicyclic and tricyclic trisaminomethanes
GB1529150A (en) * 1977-05-17 1978-10-18 Tabushi I Alkyl substituted cyclic alkyltetramines
US4337154A (en) * 1979-04-04 1982-06-29 Nippon Shokubai Kagaku Kogyo Co., Ltd. Crosslinked composite semipermeable membrane
US4432907A (en) * 1979-09-10 1984-02-21 Analytical Radiation Corporation Diamine acid fluorescent chelates
US4352751A (en) * 1979-09-10 1982-10-05 Analytical Radiation Corporation Species-linked diamine triacetic acids and their chelates
US4647447A (en) * 1981-07-24 1987-03-03 Schering Aktiengesellschaft Diagnostic media
US4957939A (en) * 1981-07-24 1990-09-18 Schering Aktiengesellschaft Sterile pharmaceutical compositions of gadolinium chelates useful enhancing NMR imaging
DE3129906C3 (de) * 1981-07-24 1996-12-19 Schering Ag Paramagnetische Komplexsalze, deren Herstellung und Mittel zur Verwendung bei der NMR-Diagnostik
US4472509A (en) * 1982-06-07 1984-09-18 Gansow Otto A Metal chelate conjugated monoclonal antibodies
US4421671A (en) * 1982-06-18 1983-12-20 General Electric Company Rare-earth-doped yttria-gadolinia ceramic scintillators
SU1081169A1 (ru) * 1982-12-13 1984-03-23 Ордена Ленина институт элементоорганических соединений им.А.Н.Несмеянова @ , @ , @ -Трис(диоксифосфорилметил)-1,4,7-триазациклононан в качестве комплексона дл селективного св зывани катионов магни ,цинка,меди,никел
US4731239A (en) * 1983-01-10 1988-03-15 Gordon Robert T Method for enhancing NMR imaging; and diagnostic use
NL194579C (nl) * 1983-01-21 2002-08-05 Schering Ag Diagnostisch middel.
US4735796A (en) * 1983-12-08 1988-04-05 Gordon Robert T Ferromagnetic, diamagnetic or paramagnetic particles useful in the diagnosis and treatment of disease
CA1317937C (en) * 1984-10-18 1993-05-18 A. Dean Sherry Gadolinium chelates with carboxymethyl derivatives of polyazamacrocycles as nmr contrast agents
US4639365A (en) * 1984-10-18 1987-01-27 The Board Of Regents, The University Of Texas System Gadolinium chelates as NMR contrast agents
GB8903023D0 (en) * 1989-02-10 1989-03-30 Parker David Chemical compounds
GB8914543D0 (en) * 1989-06-23 1989-08-09 Parker David Chemical compounds
EP0455380B1 (en) * 1990-04-18 1997-01-15 Celltech Therapeutics Limited Tetra-aza macrocycles; processes for their preparation, and their use in magnetic resonance imaging

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH10512584A (ja) * 1995-06-26 1998-12-02 コンキャット リミティド 第一遷移系列元素に対してキレート化親和性および選択性のある化合物とその医療および診断への使用
WO2011021390A1 (ja) * 2009-08-20 2011-02-24 富士フイルムＲｉファーマ株式会社 ビスホスホン酸誘導体及びその放射性金属核種標識体
JP5690733B2 (ja) * 2009-08-20 2015-03-25 富士フイルムＲｉファーマ株式会社 ビスホスホン酸誘導体及びその放射性金属核種標識体

Also Published As

Publication number Publication date
AU9077091A (en) 1992-06-11
HUT64768A (en) 1994-02-28
NO931793L (no) 1993-05-18
ZA919127B (en) 1993-05-18
HK88897A (en) 1997-06-27
HU9301431D0 (en) 1993-12-28
AU654987B2 (en) 1994-12-01
CN1066073A (zh) 1992-11-11
ATE144522T1 (de) 1996-11-15
NZ240626A (en) 1994-11-25
IL100073A (en) 1997-11-20
NO931793D0 (no) 1993-05-18
DE69122881D1 (de) 1996-11-28
ES2093816T3 (es) 1997-01-01
PT99556A (pt) 1992-10-30
DE69122881T2 (de) 1997-04-03
IL100073A0 (en) 1992-08-18
CN1193625A (zh) 1998-09-23
CA2095615A1 (en) 1992-05-20
SG48154A1 (en) 1998-04-17
JP3334717B2 (ja) 2002-10-15
PT99556B (pt) 1999-04-30
CA2095615C (en) 2003-07-08
MX9102116A (es) 1992-06-01
NO307380B1 (no) 2000-03-27
WO1992008725A1 (en) 1992-05-29
FI932231A0 (fi) 1993-05-17
FI932231A (fi) 1993-05-17
IE914001A1 (en) 1992-05-20
CN1036717C (zh) 1997-12-17
US5342606A (en) 1994-08-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JPH06502645A (ja) 金属イオン錯体化のためのポリアザ大環式化合物
US5188816A (en) Using polyazamacrocyclic compounds for intracellular measurement of metal ions using MRS
Clough et al. Ligand design strategies to increase stability of gadolinium-based magnetic resonance imaging contrast agents
Hermann et al. Gadolinium (III) complexes as MRI contrast agents: ligand design and properties of the complexes
Kotek et al. Lanthanide (III) complexes of novel mixed carboxylic‐phosphorus acid derivatives of diethylenetriamine: a step towards more efficient MRI contrast agents
Kálmán et al. Mn (II)-based MRI contrast agent candidate for vascular imaging
Garda et al. Complexation of Mn (II) by rigid pyclen diacetates: equilibrium, kinetic, relaxometric, density functional theory, and superoxide dismutase activity studies
Drahoš et al. Mn2+ complexes of 1-oxa-4, 7-diazacyclononane based ligands with acetic, phosphonic and phosphinic acid pendant arms: Stability and relaxation studies
US5380515A (en) MRI image enhancement of bone and related tissue using complexes of paramagnetic cations and polyphosphonated ligands
US5405601A (en) Functionalized tripodal ligands for imaging applications
Lazar et al. Synthesis and complexation properties of a new macrocyclic polyaza polyphosphinate ligand, DOTEP (1, 4, 7, 10-tetraazacyclododecane-1, 4, 7, 10-tetrakis (methyleneethylphosphinate))
Prata et al. Structural and in vivo studies of metal chelates of Ga (III) relevant to biomedical imaging
Kotková et al. Lanthanide (III) Complexes of Phosphorus Acid Analogues of H4DOTA as Model Compounds for the Evaluation of the Second‐Sphere Hydration
Krchová et al. Eu (III) Complex with DO3A-amino-phosphonate Ligand as a Concentration-Independent pH-Responsive Contrast Agent for Magnetic Resonance Spectroscopy (MRS)
Sy et al. 55/52mn2+ complexes with a bispidine-phosphonate ligand: High kinetic inertness for imaging applications
Lattuada et al. Enhanced relaxivity of Gd III-complexes with HP-DO3A-like ligands upon the activation of the intramolecular catalysis of the prototropic exchange
Uzal-Varela et al. Thermodynamic stability of Mn (II) complexes with aminocarboxylate ligands analyzed using structural descriptors
WO1995020353A1 (en) Functionalized aza-bimacrocyclic ligands for imaging applications
Tircsó et al. Comparison of the equilibrium, kinetic and water exchange properties of some metal ion-DOTA and DOTA-bis (amide) complexes
JP2593963B2 (ja) 常磁性カチオン及びポリホスホネートリガンドの錯体を用いての骨及び関連組織のｍｒｉ像増強
Kong et al. DOTP− Manganese and− Nickel Complexes: from a Tetrahedral Network with 12-Membered Rings to an Ionic Phosphonate
Burai et al. Formation and dissociation kinetics of the complexes Gd (DOTP) 5− and Gd (DOTPMB)−
Váradi et al. Physico-Chemical Characterization of a Highly Rigid Gd (III) Complex Formed with a Phenanthroline Derivative Ligand
Svobodová et al. Thermodynamic, kinetic and solid-state study of divalent metal complexes of 1, 4, 8, 11-tetraazacyclotetradecane (cyclam) bearing two trans (1, 8-) methylphosphonic acid pendant arms
EP0558661B1 (en) Polyazamacrocyclic compounds for complexation of metal ions

Legal Events

Date Code Title Description
R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

LAPS Cancellation because of no payment of annual fees