JPH0649088A - 新規抗生物質 - Google Patents

新規抗生物質

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JPH0649088A
JPH0649088A JP5161302A JP16130293A JPH0649088A JP H0649088 A JPH0649088 A JP H0649088A JP 5161302 A JP5161302 A JP 5161302A JP 16130293 A JP16130293 A JP 16130293A JP H0649088 A JPH0649088 A JP H0649088A
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Abstract

(57)【要約】 【目的】 抗生物質ＡＡＤ２１６複合体の新規生物活性
成分であるＡＡＤ２１６Ａ、ＡＡＤ２１６ＢおよびＡＡ
Ｄ２１６Ｃ、その製造方法およびそれを用いた各種組成
物を提供する。 【構成】 抗生物質ＡＡＤ２１６複合体の新規生物活性
成分であって、実験式Ｃ81Ｈ82Ｎ8Ｏ30Ｃl4、Ｃ82Ｈ84
Ｎ8Ｏ30Ｃl4またはＣ83Ｈ86Ｎ8Ｏ30Ｃl4を有し、様々な
理化学的性質によって特定される抗生物質およびそれを
含有する各種組成物。これら抗生物質は、キブデロスポ
ランジウム・アリダムＡＴＣＣ３９３２３またはその変
異株を所定条件下で培養することによって得られる抗生
物質ＡＡＤ２１６複合体から分離することによって製造
される。 【効果】 抗菌剤、成長促進剤およびウシ乳腺炎の治療
のような動物の健康のための適用に対して有用な新規抗
生物質が得られる。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、バンコマイシン群の新
規抗生物質と、その製造および回収に関する。さらに本
発明は、新規微生物、キブデロスポランジウム・アリダ
ム（Kibdelosporangium aridum Shearer，gen.nov.，s
p.nov.；ＳＫ＆Ｆ-ＡＡＤ２１６）ＡＴＣＣ３９３２３
にも関する。さらに詳しくは、本発明は、本明細書中で
ＡＡＤ２１６複合体と称する抗生物質に関し、この複合
体は、同化可能な窒素源および炭素源を含有する水性栄
養培地中で、深部好気的条件下にキブデロスポランジウ
ム・アリダムを実質的な量のＡＡＤ２１６複合体が該微
生物により生産されるまで培養することによって製造さ
れ、所望により、この培養液からＡＡＤ２１６複合体を
回収してもよい。
【０００２】さらに、本発明は、ＡＡＤ２１６複合体の
新規生物活性成分であるＡＡＤ２１６Ａ、ＡＡＤ２１６
ＢおよびＡＡＤ２１６Ｃを提供するものであり、これら
はクロマトグラフィー手段によってＡＡＤ２１６複合体
から個々の該抗生物質化合物を単離することにより製造
できる。抗生物質ＡＡＤ２１６複合体およびその主要な
生物活性成分であるＡＡＤ２１６Ａ、ＡＡＤ２１６Ｂお
よびＡＡＤ２１６Ｃは全て抗菌活性を示す。ＡＡＤ２１
６複合体、ＡＡＤ２１６Ａ、ＡＡＤ２１６ＢおよびＡＡ
Ｄ２１６Ｃは、成長促進剤およびウシ乳腺炎の治療のよ
うな動物の健康のための適用に対しても有用である。
【０００３】
【発明の概要】新規抗生物質ＡＡＤ２１６複合体、およ
びその主要な生物活性成分であるＡＡＤ２１６Ａ、ＡＡ
Ｄ２１６およびＡＡＤ２１６Ｃは、新規微生物であるキ
ブデロスポランジウム・アリダム（Kibdelosporangium
aridum Shearer gen.nov.，sp.nov.；ＳＫ＆Ｆ-ＡＡＤ
２１６）の発酵によって生産される。該微生物は、アリ
ゾナ州・カウンティーの砂漠地帯で採取された土壌試料
から単離された。生物学的に純粋な該微生物の培養菌は
アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（Amer
ican Type Culture Collection，Rockville，Marylan
d）に、寄託番号ＡＴＣＣ３９３２３の下に寄託されて
いる。
【０００４】ＡＡＤ２１６複合体とは、キブデロスポラ
ンジウム・アリダムの発酵によって産生される各抗生物
質の混合物を意味する。抗生物質の発酵による生産に精
通している者ならば容易に理解できるように、ＡＡＤ２
１６複合体中の該個々もしくは各要素抗生物質の割合お
よびそれらの存在は、発酵工程の条件によって変動す
る。ＡＡＤ２１６複合体は、発酵ブロス全体を濾過する
ことにより清澄化し、粗ＡＡＤ２１６複合体を０〜１０
℃にて、pH３で塩酸を用いて沈澱させることにより、発
酵培地より回収できる。次いで、沈澱をpH約６〜８に調
節して水に溶解し、樹脂カラムに適用して水性メタノー
ルで溶出する。得られた溶出液を凍結乾燥してＡＡＤ２
１６複合体を得、これをクロマトグラフィーに付すと、
高濃度ＡＡＤ２１６複合体が得られる。高濃度ＡＡＤ２
１６複合体は、典型的にはＡＡＤ２１６Ａ、ＡＡＤ２１
６ＢおよびＡＡＤ２１６Ｃの混合物を４０〜８５重量％
含有する。
【０００５】高濃度ＡＡＤ２１６複合体は、分析用ＨＰ
ＬＣによれば、pH約６において、２９重量％のＡＡＤ２
１６Ａ、１０重量％のＡＡＤ２１６Ｂおよび１０重量％
のＡＡＤ２１６Ｃを含有し、以下の特性を有する： （ａ）３００〜３５０℃で分解する淡黄白色の固体であ
る； （ｂ）およその元素組成は、Ｃ５３.２２％、Ｈ６.１４
％、Ｎ３.７３％および灰分０.２８％である； （ｃ）臭化カリウム中での赤外スペクトルは、以下の波
数においてピークを示す：３４００、２９２０、１６６
０、１６００、１５１０、１４６０、１４３０、１３９
０、１３２０、１２４０、１１５０、１０６０および１
０２０cm-1； （ｄ）アセトニトリル：水（１：１）中での紫外スペク
トルの吸収極大値は、中性および酸性条件下で２８０nm
においてＥ(１％)＝４３.９、塩基性条件下で３０１nm
においてＥ(１％)＝５６.８を示す； （ｅ）過ヨウ素酸塩により陽性反応、ニンヒドリンによ
り陰性反応である；そして （ｆ）水、メタノール、ジメチルスルホキシドおよびジ
メチルホルムアミドに可溶性であり、エタノール、アセ
トニトリル、アセトン、ジエチルエーテルおよび脂肪族
炭化水素に不溶性である。
【０００６】純粋な個々の抗生物質成分ＡＡＤ２１６
Ａ、ＡＡＤ２１６ＢおよびＡＡＤ２１６Ｃは、分取用高
速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて、ＡＡ
Ｄ２１６複合体から分離することができる。典型的に
は、ＡＡＤ２１６複合体を、pH６の０.１Ｎリン酸塩緩
衝液中で、２０〜２８％のアセトニトリルを用いた段階
的勾配溶出によるクロマトグラフィーに付す。分析用Ｈ
ＰＬＣにより判定した適当な分画を合わせ、樹脂カラム
上で脱塩し、凍結乾燥すると、所望の純粋な個々の抗生
物質成分、ＡＡＤ２１６Ａ、ＡＡＤ２１６ＢおよびＡＡ
Ｄ２１６Ｃが得られる。
【０００７】抗生物質ＡＡＤ２１６Ａは、pH約６におい
て、以下の特性を有する： （ａ）３００〜３５０℃で分解する淡黄白色固体であ
る； （ｂ）実験式Ｃ81Ｈ82Ｎ8Ｏ30Ｃl4を有する； （ｃ）水分含量が１０.８０％の場合、およその元素組
成は、Ｃ４８.２０％、Ｈ５.０１％、Ｎ５.２１％、Ｃl
６.４３％であり、硫黄または有機リンを含まない； （ｄ）臭化カリウム中での赤外吸収スペクトルは、以下
の波数においてピークを示す：３４００、２９２０、１
６６０、１６００、１５１０、１４６０、１４３０、１
３９０、１３２０、１３００、１２４０、１１５０、１
０６０および１０２０cm-1； （ｅ）Ｍ＋Ｈによる高速原子衝撃（ＦＡＢ）マススペク
トルは１７８７（主原子団）である； （ｆ）アセトニトリル：水（１：１）中での紫外スペク
トルの吸収極大値は、中性および酸性条件下で２８０nm
においてＥ(１％)＝５１、塩基性で３０１nmにおいてＥ
(１％)＝７３を示す； （ｇ）ＣＤ3ＯＤ：Ｄ2Ｏ（１：９）中、９０.５６MHz、
pH８.５における炭素磁気共鳴スペクトルは、標準とし
てのＴＭＳと比較して以下の化学シフト値（ppm）を示
す：１７７.７、１７７.５、１７５.５、１７４.６、１
７１.５、１７０.８、１７０.４、１７０.２、１６９.
１、１６１.８、１５８.６、１５７.９、１５５.１、１
５５.０、１５２.５、１５１.９、１５１.６、１５０.
７、１４６.０、１４４.３、１４１.７、１３８.８、１
３８.３、１３６.０、１３４.６、１３４.５、１３３.
７、１３０.８、１２９.８、１２９.４、１２８.９、１
２８.６、１２７.４、１２７.０、１２６.２、１２５.
６、１２５.１、１２２.７、１２２.３、１２０.９、１
１９.６、１１８.３、１１６.４、１１０.５、１０９.
６、１０８.３、１０４.２、１０３.３、１０３.１、１
００.７、９８.１、７８.４、７４.４、７３.９、７３.
３、７２.０、７１.６、７１.３、７０.７、６７.３、
６５.６、６３.６、６２.３、６１.６、６０.２、５６.
８、５６.３、５５.８、５４.９、３７.２、３２.７、
３２.２、２９.８、２９.６、２９.５、２６.２、２３.
０および１４.５； （ｈ）比旋光度は[α]D 25＝−６６°（Ｃ＝０.３、Ｈ2
Ｏ中）である； （ｉ）過ヨウ素酸塩により陽性反応、ニンヒドリンによ
り陰性反応を示す； （ｊ）水、メタノール、ジメチルスルホキシド、ジメチ
ルホルムアミドに可溶性であり、エタノール、アセトニ
トリル、アセトン、ジエチルエーテルおよび脂肪族炭化
水素に不溶性である；そして （ｋ）アセトニトリル：水（３：７）中でのpKa値は以
下の通りである：３.０、４.９、７.４、８.４、１０.
０および１０.３；ただし、１０.３以上のpKa値は測定
していない。
【０００８】抗生物質ＡＡＤ２１６Ｂは、pH約６におい
て、以下の特性を有する： （ａ）３００〜３５０℃で分解する淡黄白色固体であ
る； （ｂ）実験式Ｃ82Ｈ84Ｏ30Ｃl4を有する； （ｃ）水分含量が１０.８％の場合、およその元素組成
は、Ｃ４９.６７％、Ｈ５.０７％、Ｎ５.１９％、Ｃl
６.７０％であり、硫黄または有機リンを含まない； （ｄ）臭化カリウム中での赤外吸収スペクトルは、以下
の波数においてピークを示す：３４００、２９２０、１
６６０、１６００、１５１０、１４６０、１４３０、１
３９０、１３００、１２４０、１１５０、１０６０およ
び１０２０cm-1； （ｅ）Ｍ＋Ｈによる高速原子衝撃（ＦＡＢ）マススペク
トルは１８０１（主原子団）である； （ｆ）アセトニトリル：水（１：１）中での紫外スペク
トルの吸収極大値は、中性および酸性条件下で２８０nm
においてＥ(１％)＝５５、塩基性条件下で３０１nmにお
いてＥ(１％)＝７２.５を示す； （ｇ）ＣＤ3ＯＤ：Ｄ2Ｏ（１：９）中、９０.５６MHz、
pH８.５における炭素磁気共鳴スペクトルは、標準とし
てのＴＭＳと比較して以下の化学シフト値（ppm）を示
す：１７７.９、１７７.４、１７５.６、１７４.４、１
７１.６、１７０.９、１７０.５、１７０.４、１６９.
３、１６２.４、１５８.７、１５８.１、１５５.２、１
５５.０、１５２.６、１５１.３、１５０.７、１４６.
０、１４４.３、１４１.３、１３８.８、１３８.３、１
３６.１、１３４.７、１３３.６、１３０.７、１２９.
９、１２９.８、１２９.４、１２９.０、１２８.７、１
２７.７、１２７.５、１２７.０、１２６.３、１２５.
７、１２４.７、１２２.８、１２２.３、１２０.９、１
１９.９、１１９.６、１１８.４、１１６.７、１１０.
５、１０９.６、１０８.５、１０４.２、１０３.３、１
０３.１、１００.６、９８.１、７８.５、７４.４、７
３.９、７３.４、７２.１、７１.７、７１.２、７０.
８、６７.３、６５.５、６３.７、６２.３、６１.６、
６０.３、５６.８、５６.２、５５.９、５５.０、３９.
６、３７.３、３２.７、３０.２、３０.０、２９.７、
２８.４、２７.８、２６.３および２３.３; （ｈ）比旋光度は[α]D 25＝−５９°(Ｃ＝１.０、Ｈ2Ｏ
中)である； （ｉ）過ヨウ素酸塩により陽性反応、ニンヒドリンによ
り陰性反応を示す； （ｊ）水、メタノール、ジメチルスルホキシド、ジメチ
ルホルムアミドに可溶性であり、エタノール、アセトニ
トリル、アセトン、ジエチルエーテル、および脂肪族炭
化水素に不溶性である；そして、 （ｋ）アセトニトリル：水（３：７）中でのpKa値は以
下の通りである：３.０、４.５、７.５、８.５および
９.７；ただし、９.７以上のpKa値は測定していない。
【０００９】抗生物質ＡＡＤ２１６Ｃは、pH約６におい
て、以下の特性を有する： （ａ）３００〜３５０℃で分解する淡黄白色固体であ
る； （ｂ）実験式Ｃ83Ｈ86Ｎ8Ｏ30Ｃl4を有する。 （ｃ）水分含量が８.２％の場合、およその元素組成
は、Ｃ４７.８９％、Ｈ５.０９％、Ｎ４.９５％、Ｃl
６.３９％、灰分３.６９％であり、硫黄または有機リン
を含まない； （ｄ）臭化カリウム中での赤外吸収スペクトルは、以下
の波数においてピークを示す：３４００、２９２０、１
６６０、１６００、１５０５、１４３０、１３９０、１
２９５、１２４０、１１５０、１０６０および１０２０
ｃｍ-1； （ｅ）Ｍ＋Ｈによる高速原子衝撃（ＦＡＢ）マススペク
トルは１８１５（主原子団）である； （ｆ）アセトニトリル：水（１：１）中での紫外スペク
トルの吸収極大値は、中性および酸性条件下で２８０nm
においてＥ(１％)＝５１、塩基性条件下で３０１nmにお
いてＥ(１％)＝７５を示す； （ｇ）ＣＤ3ＯＤ：Ｄ2Ｏ（１：９）中、９０.５６MHz、
pH８.５における炭素磁気共鳴スペクトルは、ＴＭＳを
内部標準として以下の化学シフト値（ppm）を示す：１
７７.９、１７７.２、１７５.７、１７３.６、１７１.
５、１７０.８、１７０.６、１７０.２、１６９.３、１
５８.６、１５７.８、１５５.２、１５４.９、１５２.
７、１５１.９、１５０.９、１４６.０、１４４.３、１
４１.３、１３８.８、１３８.４、１３６.０、１３４.
９、１３４.７、１３３.８、１３０.８、１２９.９、１
２９.８、１２９.３、１２９.１、１２７.７、１２７.
５、１２７.０、１２６.４、１２５.３、１２２.７、１
２１.０、１１９.７、１１８.３、１１６.１、１１０.
４、１０９.６、１０８.１、１０４.１、１０３.２、１
０１.５、９８.０、７８.６、７４.６、７３.９、７３.
４、７２.１、７１.７、７１.３、７０.３、６７.３、
６５.１、６３.７、６２.５、６１.６、６０.３、５６.
８、５６.３、５５.３、５４.９、３９.７、３７.４、
３２.６、３２.３、３０.５、３０.４、３０.２、２９.
９、２８.６、２８.１、２６.４、２３.４および２２.
０； （ｈ）比旋光度は[α]D 25＝−５０.６（Ｃ＝０.６、Ｈ2
Ｏ中）である； （ｉ）過ヨウ素酸塩により陽性反応、ニンヒドリンによ
り陰性反応を示す； （ｊ）水、メタノール、ジメチルスルホキシド、ジメチ
ルホルムアミドに可溶性であり、エタノール、アセトニ
トリル、アセトン、ジエチルエーテルおよび脂肪族炭化
水素に不溶性である；そして （ｋ）アセトニトリル：水（３：７）中でのpKa値は以
下の通りである：３.０、４.２、７.２、８.２、９.９
および１０.３；ただし、１０.３以上のpKa値は測定し
ていない。
【００１０】ＡＡＤ２１６複合体およびその主たる生物
活性成分であるＡＡＤ２１６Ａ、ＡＡＤ２１６Ｂおよび
ＡＡＤ２１６Ｃの新規性は、バンコマイシン/リストセ
チン群の既知の抗生物質と比較することにより確認され
た。すなわち、以下の表１に示すごとく、ＡＡＤ２１６
Ａ、ＡＡＤ２１６ＢおよびＡＡＤ２１６Ｃについて、バ
チルス・ズブチルス（B．subtilis）に対する活性を調
べる薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ、アビセル）によ
って得たRf値を既知の抗生物質と比較した。
【００１１】
【表１】
【００１２】加えて、以下の表２に示すように、逆相高
速液体クロマトグラフィーにおけるＡＡＤ２１６Ａ、Ａ
ＡＤ２１６ＢおよびＡＡＤ２１６Ｃの保持時間を既知の
抗生物質と比較すると、両者は相異なることがわかっ
た。
【００１３】
【表２】
【００１４】ＡＡＤ２１６Ａ、ＡＡＤ２１６ＢおよびＡ
ＡＤ２１６Ｃを個別に６Ｎ塩酸中で還流下に１８時間完
全に加水分解したところ、標準アミノ酸分析で検出可能
な通常のアミノ酸を生成しなかった。この加水分解産物
中には、高速液体クロマトグラフィーおよびＦＡＢマス
スペクトルにより、標品試料と比較してバンコマイシン
群の抗生物質に共通するアクチノイデイン酸の存在が確
認できた。さらに、ＡＡＤ２１６Ａ、ＡＡＤ２１６Ｂお
よびＡＡＤ２１６Ｃを１Ｎ塩酸中、還流下に４時間個別
に加水分解すると、マンノースが生成したが、リストサ
ミン、グルコサミンまたはバンコサミンは生成しなかっ
た。
【００１５】微生物 キブデロスポランジウム・アリダム（Kibdelosporangiu
m aridum ＳＫ＆Ｆ-ＡＡＤ-２１６）ＡＴＣＣ３９３２
３の保存培養を、馬鈴薯-人参またはオートミール寒天
の薄層上で維持した。形態学的観察を水寒天、薄い馬鈴
薯-人参寒天、オートミール寒天および土壌抽出物寒天
の平板上で行なった。生化学的および生理学的試験用の
接種物は、増殖培養の入った凍結乾燥バイアルの内容物
を、グルコース-酵母エキスブロスを入れたフラスコに
加え、これをロータリー・シェーカー上、２８℃、２５
０RPMで３〜６日間保持することにより調製する。この
培養物を遠心分離して収集し、滅菌蒸留水で３回洗浄す
る。生化学的および生理学的試験のためのインキュベー
ション温度は２８℃である。平板培地についての結果の
読み取りは２１日目まで種々の時点で行なった。試験管
培地の多くは２８日までの種々の時点で読み取りを行な
った。しかしながら、尿素、アラントインおよび馬尿酸
塩の分解についての試験、ならびに硝酸塩の還元につい
ての試験は、６週間の間読み取りを行なった。
【００１６】キブデロスポランジウム・アリダム（K．a
ridum）を接種した栄養寒天平板上に重層としてＢＢＬ
感受性ディスクを置くことにより、抗生物質に対するキ
ブデロスポランジウム・アリダムの感受性を調べた。２
８℃で１週間インキュベーションした後、阻止帯の直径
を測定した。
【００１７】形態学 キブデロスポランジウム・アリダムは、菌糸体を形成す
る線状生物であって、この菌糸体は（１）寒天を貫通
し、寒天の表面に緊密な層を形成する基底菌糸体および
（２）分生胞子および/または胞子曩様構造体の鎖状体
を有する気生菌糸体とに区別される。気生菌糸体または
基底菌糸体には、運動性要素は見出せなかった。キブデ
ロスポランジウム・アリダムは多くの培地で特徴のある
結晶を寒天中に産生する。
【００１８】基底菌糸体：キブデロスポランジウム・ア
リダムは、よく発達した基底菌糸体を産生し、これは置
換なしの無糸分裂を受けうる。長く分枝した菌糸は、隔
膜を有し、直径約０.４μm〜１.０μmである。基底菌糸
体上には、共通した柄から放射状に伸びた、隔膜を有す
る二又に分枝した菌糸からなる特殊な構造が存在する。
【００１９】気生菌糸体：キブデロスポランジウム・ア
リダムの気生菌糸体は、桿状で平滑な壁を持つ胞子の鎖
を生成し、この長さは不規則（０.４μm×０.８μm〜
２.８μm）である。この胞子鎖は通常極めて長く、鎖１
本当り５０個以上の胞子を有するが、１０個またはそれ
以下の胞子を有する短い鎖もまた少数ではあるが普通に
存在する。胞子鎖は先端または短い側枝上に生成しう
る。
【００２０】キブデロスポランジウム・アリダムの気生
菌糸体は、ほとんどの培地において胞子曩様構造体をも
生成する。これらは先端に、または短い側枝上に生成し
うる。胞子曩様構造体および胞子鎖は同一の気生菌糸に
生成しうる。成熟時にはこれらの胞子曩様構造体はおよ
その直径が９μm〜２２μmの球形となり、明瞭な壁によ
って囲まれた、無定形のマトリックス中に包埋された、
有隔分枝菌糸から構成される。寒天上にのせると、これ
ら胞子曩様構造体は直接１本またはそれ以上の発芽管を
生成して発芽する。
【００２１】化学的分類 ベッカーらの方法[Becker et al.，Appl. Microbiol.，
12，421〜23(1964)]により分析したキブデロスポランジ
ウム・アリダムの精製細胞壁調製物は、２,６−ジアミ
ノピメリン酸のメソ異性体、アラニン、グルタミン酸、
グルコサミンおよびムラミン酸ならびにガラクトースお
よびごく微量のアラビノースを含有していた。レケバリ
アーの方法［Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒ，M.P.，J. Lab.
Clin. Med.，71，934〜44(1968)]により分析した全細胞
加水分解物は、ガラクトース、グルコース、マンノー
ス、リボース、ラムノースおよびアラビノースを含有
し、痕跡量のマデュロースもまた存在することがあっ
た。レケバリアーらの方法[Lechevalier，et al.，Can.
J. Microbiol.，19，965〜72(1973)]により脂質パター
ンについて分析した細胞抽出物には、どのタイプのミコ
ール酸も存在しなかった。存在したリン脂質は、ホスフ
ァチジルエタノールアミン、ホスファチジルメチルエタ
ノールアミン、ジホスファチジルグリセロール、ホスフ
ァチジルイノシトールおよびホスファチジルイノシトー
ルマンノサイドであった。このようにキブデロスポラン
ジウム・アリダムは、全細胞の糖パターンとして痕跡量
のマデュロースを伴うＡ型[Lechevalier，et al.，Int.
J. Syst. Bacteriol.，20，435〜43(1970)]およびリン
脂質パターンとしてホスファチジルメチルエタノールア
ミンを伴うＰＩＩ型 [Lechevalier，et al.，Biochem.
System. Ecol.，5，249〜60(1977)]であるＩＶ型の細胞
壁を有する。
【００２２】生理学的および生化学的特性 キブデロスポランジウム・アリダムは、グラム陽性であ
り、耐酸性ではない。嫌気性条件下では発育しない。発
育に適した温度範囲は１５℃〜４２℃であり、４５℃に
おいてもわずかに発育する。１０℃での発育は一様でな
く、５０℃では発育しない。硫化水素を生産する。ミル
クをペプトン化する。ゼラチンを加水分解および液化す
る。硝酸塩を亜硝酸塩に還元しない。メラニン色素を産
生する。カゼイン、Ｌ-チロシン、ヒポキサンチン、グ
アニン、エラスチンおよびテストステロンを加水分解す
るが、アデニン、キサンチンおよびセルロース（アビセ
ル）は加水分解しない。カタラーゼおよびホスファター
ゼを生産する。尿素、エスクリンおよび馬尿酸を分解す
る：アラントイン分解試験は弱陽性である。８％ＮaＣl
中では発育せず、５％〜７％のＮaＣl中での発育は一様
でない。リゾチームブロス中では発育しない。Ｌ-アラ
ビノース、Ｄ-セロビオース、デキストリン、デスキト
ロース、Ｄ-フルクトース、グリセロール、グリコーゲ
ン、Ｄ-ガラクトース、i-イノシトール、ラクトース、
Ｄ-マンニトール、Ｄ-マンノース、α-メチル-Ｄ-グル
コシド、α-メチル-Ｄ-マンノシド、メリビオース、Ｄ-
メレジトース、ラフイノース、ラムノース、Ｄ-リボー
ス、シュークロース、トレハロース、Ｄ-キシロースお
よびマルトースから酸を生成する。ズルシトール、i-エ
リスリトール、イヌリン、Ｄ-ソルビトールまたはＬ-ソ
ルボースからは酸を生成しない。クエン酸塩、マレイン
酸塩、コハク酸塩、シュウ酸塩、乳酸塩、酢酸塩、ピル
ビン酸塩、プロピオン酸塩およびギ酸塩を利用し、安息
香酸塩および酒石酸塩は利用しない。
【００２３】抗生物質感受性 拡散法によれば、キブデロスポランジウム・アリダムは
ゲンタマイシン（１０μg）、トブラマイシン（１０μ
g）、ストレプトマイシン（１０μg）、バンコマイシン
（３０μg）、ペニシリン（１０単位）、バシトラシン
（２単位）、リンコマイシン（２μg）、クリンダマイ
シン（２μg）およびセファロチン（３０μg）を含浸さ
せたディスクに対し耐性であった。クロルテトラサイク
リン（５μg）は１８mmの阻止帯を形成し、テトラサイ
クリン（５μg）は１１〜１２mm、リファンピン（５μ
g）は１１〜１５mm、ノボビオシン（５μg）は２７〜２
８mmの阻止帯を形成した。全ての阻止帯には少なくとも
数個の耐性コロニーが存在した。
【００２４】種々の培地上のキブデロスポランジウム・
アリダムの特徴 培養は全て密閉ペトリ皿缶中、２８℃でインキュベート
し、２１日目まで時々観察を行なった。培養物の色は、
ＩＳＣＣ-ＮＢＳ Centroid Color Charts または the D
ictionary of Color[Maerz，A．および M.R. Paul 2n
d．ed．New York：McGraw Hill Book Co.，Inc.(1950)]
のいずれかの色彩チップと比較して判定した。 酵母エキス-麦芽エキス寒天−発育優秀；栄養増殖形、
灰味がかった黄茶色；気生菌糸体、無しまたは極めて
稀、白、胞子鎖および胞子曩様構造体の存在；黄茶色の
可溶性色素；寒天中に特有の結晶の存在。 オートミール寒天−発育良好；栄養増殖形、灰白色ない
し黄茶色；気生菌糸体、稀、白、多数の胞子鎖および胞
子曩様体の存在；可溶性色素無し；寒天中に特有の結晶
の存在。 グリセロール-アスパラギン寒天−発育相当ないし良
好；栄養増殖形、淡黄茶色;気生菌糸体、稀ないし中程
度、白、少数の胞子鎖および存在したとしても極めてわ
ずかの胞子曩様構造体の存在；淡灰味がかった黄茶色の
可溶性色素；寒天中に特有の結晶の存在。 無機塩デンプン寒天−発育良好;栄養増殖形、灰白色な
いし黄茶色；気生菌糸体、稀、白、胞子鎖および胞子曩
様構造体の存在；可溶性色素無し；寒天中に特有の結晶
の存在。 ツアペック−シュークロース寒天−発育良好；栄養増殖
形、灰白色ないし黄茶色；気生菌糸体、稀、白、胞子鎖
および胞子曩様構造体の存在；淡灰味がかった黄色ない
し淡黄茶色の可溶性色素の存在；寒天中に特有の結晶の
存在。ベネット寒天−発育良好ないし優秀；栄養増殖
形、灰味がかった黄茶色；気生菌糸体、無しないし稀、
白、胞子鎖および胞子曩様構造体の存在；黄茶色の可溶
性色素；寒天中に結晶は見出せず。 栄養寒天−発育相当ないし良好；栄養増殖形、黄茶色；
気生菌糸体、稀ないし中程度、白、胞子鎖および胞子曩
様構造体はほとんど存在せず；黄茶色の可溶性色素；寒
天中に特有の結晶が種々の程度に存在。 薄い馬鈴薯-人参寒天−発育相当、比較的扁平；栄養増
殖形、灰白色ないし黄茶色；気生菌糸体、稀ないし中程
度、白、多数の胞子鎖および胞子曩様構造体の存在；可
溶性色素無し；寒天中に結晶は見出せず。 ペプトン-酵母エキス・鉄寒天−発育良好；栄養増殖
形、青銅茶色（Maerz ＆Paul 16C9）；気生菌糸体、な
し；暗茶色味がかった黒色色素；寒天中に結晶は見出せ
ず。 デンプン-カゼイン硝酸塩寒天−発育良好；栄養菌糸
体、灰白色ないし黄茶色；気生菌糸体、稀、白、胞子鎖
および胞子曩様構造体の存在；淡黄茶色の可溶性色素が
種々の程度に存在；寒天中に特有の結晶の存在。 酵母エキス-グルコース寒天−発育良好ないし優秀；栄
養増殖形、暗黄茶色ないし灰味がかった黄茶色；気生菌
糸体、見えず、４００倍においてまばらな胞子鎖が存在
するが胞子曩様構造体は存在せず；暗黄茶色の可溶性色
素；寒天中に特有の結晶の存在。
【００２５】キブデロスポランジウム・アリダムの特徴
をバージエのマニュアル（Berger'sManual of Determin
ative Bacteriology，the Approved List of Bacterial
Names）およびその他の最近の分類学文献に掲げられて
いる放線菌の記載と比較すると、キブデロスポランジウ
ム・アリダムはかって記載された放線菌の種とは大変異
なっており、かつて記載された放線菌のいずれの属にも
入れることができない。放線菌の他の属に存在する胞子
曩は真正胞子小胞であり、成熟時には不動胞子または遊
走子を含有し、これらは最後に胞子曩壁の破裂または溶
解によって放出される。広範な観察と巧みな操作にもか
かわらず、キブデロスポランジウム・アリダムの胞子曩
様構造体からの胞子の放出は全く認められなかった。寒
天上にのせると、キブデロスポランジウム・アリダムの
胞子曩様構造体は、１本またはそれ以上の発芽管を胞子
曩様構造体から直接産生することによって発芽する。
【００２６】ＡＴＣＣ３９３２３株を、ここに新しい属
キブデロスポランジウム・アリダム（Kibdelos：ギリシ
ャ語、形容詞、誤りの、あいまいな；Spora：ギリシャ
語、名詞、種；angium：ギリシャ語、名詞、容器：よ
り）の１つの種として記載する；これを特定する形容語
アリダム（aridus：ラテン語、形容詞、乾いた、乾燥し
た）は、該培養体が単離された砂漠の土壌を意味する。
【００２７】ＡＡＤ２１６複合体の調製 ＡＡＤ２１６複合体は、ＡＴＣＣ３９３２３の特性を有
するキブデロスポランジウムの１菌株、または公知の方
法によって得られるその活性変異株もしくは誘導体を、
深部好気的条件下に水性栄養培地中で培養することによ
って製造できる。この生物は、同化可能な炭素源、例え
ば同化可能な炭水化物を含有する栄養培地中で発育す
る。適当な炭素源の例としてシュークロース、ラクトー
ス、マルトース、マンノース、フルクトース、グルコー
スおよび可溶性デンプンが挙げられる。栄養培地はさら
に、フィッシュ・ミール、ペプトン、大豆粉、ピーナッ
ツミール、綿実ミールまたはコーン・スティープ・リカ
ーのような同化可能な窒素源をも含有する。栄養無機塩
類もまた培地に配合することができる。このような塩類
には、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウ
ム、リン酸塩、硫酸塩、塩化物、臭化物、硝酸塩、炭酸
塩などのイオンを供給し得る通常の塩類のいずれもが包
含される。
【００２８】ＡＡＤ２１６複合体の産生は、この生物の
十分な発育を促進する温度、例えば１５〜４２℃で行な
うことができ、約２５〜２８℃の温度で好都合に行なわ
れる。
【００２９】培地は普通中性であるが、正確なpHは、使
用する個々の培地により５.０および９.０の間で変わり
得る。
【００３０】発酵は、エルレンマイヤーフラスコ中で、
または種々の容量の実験室用もしくは工業用ファーメン
ター中で行なうことができる。タンク発酵を行なう場
合、この微生物の栄養細胞を含む少量の培地を接種する
ことにより栄養ブロス中で栄養増殖形接種物を調製する
ことが望ましい。このようにして接種物を得た後、これ
を無菌的に抗生物質の大規模生産用の発酵タンクに移
す。栄養増殖形接種物に使用する培地は、大規模発酵用
のものと同じにすることもできるが、また、別の培地を
使うこともできる。
【００３１】深部好気的培養法の慣例に従って、滅菌空
気を培地中に通気する。撹拌は、発酵工業において一般
に知られている撹拌器によって維持することができる。
【００３２】一般に、当該複合体の至適産生は、撹拌ジ
ャーファーメンターまたはタンクファーメンター中、イ
ンキュベーション時間約１４４〜１８６時間後に達成さ
れる。発酵過程は分析用ＨＰＬＣにより追跡することが
できる。
【００３３】このようにして生産したＡＡＤ２１６複合
体は、新規な生物活性成分または個々の抗微生物要素Ａ
ＡＤ２１６Ａ、ＡＡＤ２１６ＢおよびＡＡＤ２１６Ｃを
含み、これらは前記のように単離することができる。
【００３４】生物学的活性データ ＡＡＤ２１６複合体、高濃度ＡＡＤ２１６複合体、ＡＡ
Ｄ２１６Ａ、ＡＡＤ２１６Ｂ、ＡＡＤ２１６Ｃおよびバ
ンコマイシンのインビトロにおける最小阻止濃度（ＭＩ
Ｃ）を、多くの微生物について、標準微量滴定検定法を
用いて測定した。結果を以下の表３〜７に示す。
【００３５】
【表３】
【００３６】
【表４】
【００３７】
【表５】
【００３８】
【表６】
【００３９】
【表７】
【００４０】ＬＤ50が４６.８のスタフィロコッカス・
アウレウス（Staph．aureus）ＨＨ１２７をマウスに腹
腔内皮下感染させ、感染の１および５時間後に各抗生物
質による処置を行なうことにより、ＡＡＤ２１６Ａ、Ａ
ＡＤ２１６Ｂ、ＡＡＤ２１６Ｃおよびバンコマイシンの
インビボ活性をＥＤ50として測定した。ＥＤ50は以下の
通りであった：ＡＡＤ２１６Ａ、５.０mg/kg；ＡＡＤ２
１６Ｂ、５.０mg/kg；ＡＡＤ２１６Ｃ、７.５mg/kg；バ
ンコマイシン、１.７６mg/kg。
【００４１】ＡＡＤ２１６複合体およびその主生物活性
要素であるＡＡＤ２１６Ａ、ＡＡＤ２１６ＢおよびＡＡ
Ｄ２１６Ｃならびにこれらの混合物を含む本発明の抗生
物質は、抗菌活性を示す。本発明はまた、前記抗生物質
化合物の少なくとも１種および薬学的に許容できる担体
を含有する医薬組成物も包含する。この組成物は、さら
に他の抗菌剤を含有してもよい。該組成物は所望の投与
経路に適したいかなる剤型とすることもできる。このよ
うな組成物の例としては、錠剤、カプセル剤、丸剤、散
剤および顆粒剤のごとき経口投与用固体組成物；溶液、
懸濁液、シロップおよびエリキシルのごとき経口投与用
液体組成物；滅菌溶液、懸濁液または乳液のごとき非経
口投与用製剤が挙げられる。
【００４２】抗菌剤としての使用に当たり、本組成物は
該活性成分の濃度が処置されるべき個々の微生物に対す
る最小阻止濃度より大となるように投与する。
【００４３】ＡＡＤ２１６複合体およびその構成成分で
あるＡＡＤ２１６Ａ、ＡＡＤ２１６ＢおよびＡＡＤ２１
６Ｃの活性を、最小阻止濃度（ＭＩＣ）を測定する常套
の寒天希釈法を用いて、総計５８個のウシ乳腺炎単離菌
に対しインビトロで測定した。ＡＡＤ２１６複合体、Ａ
ＡＤ２１６Ａ、ＡＡＤ２１６ＢおよびＡＡＤ２１６Ｃの
ＭＩＣは、各々、０.２５〜＞１２８μg/ml、０.１３〜
＞１２８μg/ml、０.０６〜＞１２８μg/mlおよび０.０
６〜＞１２８μg/mlの範囲であった。これに比べ、バン
コマイシンは同じ微生物について０.２５〜＞１２８μg
/mlの範囲のＭＩＣを有する。
【００４４】成長促進活性 ブタおよび家禽のような単胃動物への利用法を予測する
ためにブタのインビトロモデルにおいて、肉牛、乳牛お
よびヒツジ生産への利用性を予測するために反すう胃
（ルーメン）のインビトロモデルを用い、また、ひな鳥
の成長モデルにおいてインビトロでＡＡＤ２１６複合体
およびその構成成分であるＡＡＤ２１６Ａ、ＡＡＤ２１
６ＢおよびＡＡＤ２１６Ｃの成長促進活性を測定した。
【００４５】ブタのインビトロモデル ヨークシャー雄ブタを外科的に処置して回盲接合部より
１５cmの箇所に回腸カニューレを入れるか、または虫垂
と盲腸の起点部分との中間に盲腸カニューレを入れる。
動物を１日４回摂飼させ、３０kgの動物においては体重
の４.５％、１００kgの動物においては体重の２.５％に
摂飼料を制限する。このブタの生長飼料組成は以下の通
りである：
【００４６】 w/w％ １bs/トン 中挽き殻付コーン ７０.６０ １４１２ 大豆ミール、４４％ ２２.００ ４４０ 乾燥アルファルファミール、１７％ ４.５０ ９０ プロピオン酸カルシウム ０.１５ ３ ビタミン/ミネラルプレミックス ２.７５ ５５
【００４７】カニューレを通しての物質のサンプリング
は、最初の朝の摂餌後１５０〜１８０分に始め、必要な
物質の量によりそれ以後３０〜１２０分間適宜続ける。
この試料は５℃以下にならない砕氷中に保持し、絶えず
二酸化炭素を通気する。採取した物質を濾過する。この
濾液が被験および対照試料のインキュベーション用の接
種物となる。通気した接種物２.２５mlを各々栄養溶液
０.７５mlおよび被験化合物０.５mgの入った１０本の通
気試験管に入れる。被験化合物の試験管と共に４本のブ
ランク対照試験管を、撹拌しながら３７℃で５時間イン
キュベートする。インキュベートしないさらに４本の不
活化試験管を含める。
【００４８】この試験管をそれぞれメタリン酸の２５％
溶液０.６０mlで処理し、次いで分析するまで−４℃で
保存する。試料を融解し２０,０００rpmで２５分間遠心
分離する。上澄液をデカンテーションし、ガスクロマト
グラフィーおよび自動分析の試料とする。この結果をコ
ンピューターに入力し、ブランク対照値を１００％とし
て結果を算出する。バージニアマイシンおよびバンゴマ
イシンを正の対照として使用する。
【００４９】
【表８】
【００５０】
【表９】
【００５１】反すう胃インビトロモデル 反すう胃インビトロモデルの実験方法はブタのインビト
ロモデルと同様な、ただし、以下の改変を施したもので
ある。
【００５２】(１)４００kgの去勢ウシを外科的に処置し
て反すう胃にカニューレを入れる。
【００５３】(２)動物は１日１回以下の飼料を与える： 仕上飼料 w/w％ 綿実外皮 ４４.０ 粉砕コーン ２２.０ アルファルファ干し草１" ２０.０ ペレット補足剤＊ １０.０ 液体糖蜜 ４.０ １００.０
【００５４】 ＊ペレット補足剤 w/w％ 大豆油ミール（５０％蛋白） ５０.０ 中挽きコーン ３２.５ Ｄ/リン酸カルシウム ６.５０ 通常塩 ２.５０ 粉砕石灰石（Thomasville） ３.５０ 尿素 ２.５０ ビタミンＡおよびＤ2プレミックス** ２.５０ １００.０
【００５５】 **ビタミンＡおよびＤ2プレミックス w/w％ ビタミンＡ（３０,０００IU/gm） ５.８７ ビタミンＤ2（１６,０００,０００IU/1b） ０.５０ 細かく挽いたコーン ９３.６３ １００.００
【００５６】(３)ＶＦＡ産生は産生された総ＶＦＡに対
するプロピオネートの産生割合(％)として記載する。
【００５７】(４)カニューレからの試料採取は、摂餌の
１２０分後に行なう。
【００５８】
【表１０】
【００５９】
【表１１】
【００６０】ひな鳥の成長試験 生後１日のブロイラーひな鳥を、体重、健康、および性
別によって選別し、温度８０°Ｆ、湿度４０％の環境に
調節した部屋に入れる。ひな鳥は自由に摂餌させる。水
は自由に与える。ライ麦またはコーン基礎飼料を順化期
間（１および２日間)の間与え、次いで、３〜１７日の
間試験または対照条件の下に本化合物を混合する。試験
または対照群用に各々８個（６４羽のひな鳥）または１
６個（１２８羽のひな鳥）のおりを使用する。
【００６１】 ライ麦基礎飼料 飼料の成分 w/w％ １bs/トン 粉砕ライ麦（細かく挽いたもの） ５４.４ １０８８ 大豆ミール（４９％蛋白） ２７ ５４０ ミートおよびボーン・ミール（５０％蛋白） １０ ２００ 乾燥アルファルファミール １.２５ ２５ 脂肪、動物性 ４ ８０ 乾燥ホエイ（または乳糖） １ ２０ 粉砕石灰石 ０.６７ １３.４ リン酸二カルシウム ０.５０ １０ ヨウ素化塩 ０.２３ ４.６ ビタミンプレミックス ０.１７５ ＊ 微量のミネラルプレミックス ０.２５ ５ ＤＬメチオニン(９８％) ０.４５ ９ 塩化コリン（５０％水溶液） ０.１５０** ＊ビタミンプレミックスは、試験化合物を加える際に飼
料に添加する。８７.５gのビタミンプレミックス/４９,
９１２.５gのライ麦基礎飼料 **コリンは５０％水溶液として加えるため、飼料中の割
合(％)は２倍となる。
【００６２】
【表１２】
【００６３】本発明の飼料組成物は、ＡＡＤ２１６複合
体、ＡＡＤ２１６Ａ、ＡＡＤ２１６Ｂ、ＡＡＤ２１６Ｃ
またはこれらの混合物より成る群から選ばれる動物の成
長速度および飼料効率を改善に有効な、かつ動物が飼料
の摂取を減ずるほど毒性または有害ではない量の活性成
分を補足した、肉および乳生産用動物の通常飼料からな
る。公知のごとく、該活性成分の量は、成分の価格、動
物の種および大きさ、活性化合物の相対的活性または基
礎飼料として用いる飼料の型により変わる。
【００６４】ブタおよび家禽用の代表的な飼料は以下の
通りである：
【００６５】体重４０〜１００ポンドのブタの成長のた
めのブタ用飼料は以下の処方により調製する： コーン、粉砕 ７８.１５％ 大豆油ミール、４４％ １７.０％ 肉くず、５０％ ３.０％ かき殻香料 ０.４％ ボーン・ミール ０.５％ 酸化亜鉛 ０.０１％ ビタミンＡ、Ｂ、Ｂ12およびＤ補足剤 適 宜
【００６６】ブロイラー用ひな鳥飼料は以下の処方を用
いて調製する。 黄色コーン・ミール ６７.３５％ 大豆油ミール ２４.００％ メンハーデン・フィッシュ・ミール ６.００％ 蒸したボーン・ミール １.００％ 粉砕石灰石 １.００％ ヨウ素化塩 ０.３４％ ２５％塩化コリン ０.１３％ ビタミンＢ12 ０.１０％ 硫酸マンガン ０.０２％ ビタミンミックス ０.０６％
【００６７】離乳から肥育または仕上飼料までのブタの
飼料に補足することができる。ブタは約２lb/日（２５l
bのブタ）から９lb/日（１５０lbのブタ）摂飼する。ほ
とんどの飼料は、豆類の貯蔵飼料、小麦のぬか、エンバ
ク、大麦、糖蜜または蛋白補足剤を添加したコーン基剤
からなる。
【００６８】家禽用飼料は、開始飼料、ブロイラー飼料
および産卵用飼料からなる。これらの飼料は、通常、粉
砕コーン、コーン・ミールまたは大豆ミールを基礎とす
る。ブロイラー飼料は、しばしば添加脂肪、蛋白質およ
びビタミンのような高エネルギー補足剤を含む。七面鳥
用飼料も同様であるが、これは開始飼料および発育飼料
のみから成る。ニワトリまたはキジは、０.０３〜０.３
lbs/日の飼料を摂取し、七面鳥はその２倍を摂取する。
見積摂飼量は、肉生産動物の体重および年令に依存す
る。
【００６９】ＡＡＤ２１６複合体、ＡＡＤ２１６Ａ、Ａ
ＡＤ２１６Ｂ、ＡＡＤ２１６Ｃまたはこれらの混合物よ
り成る群から選ばれる活性成分を、このような飼料と均
一に混合して補強飼料を得、次いで、これを通例のごと
く、大抵は、自由に摂取させる。これを行なうには、都
合よくは、本発明の補足生長促進剤のプレミックスを、
所望により、駆虫剤、窒素源または抗生物質、例えばバ
ージニアマイシンもしくはオキシテトラサイクリンのよ
うなこの分野で知られた他の添加剤と合し、または合せ
ずして調製し、飼料配合業者または飼育業者に販売す
る。ＡＡＤ２１６複合体、ＡＡＤ２１６Ａ、ＡＡＤ２１
６Ｂ、ＡＡＤ２１６Ｃまたはこれらの混合物からなる群
から選ばれる活性成分のプレミックス中の濃度は、普通
５〜７５重量％、または完全な飼料中の濃度の１００〜
２０００倍である。プレミックスの形態は液体でも、固
体でもよい。プレミックスの担体としては、コーン油、
棉実油、糖蜜またはディスティラーズ・ソリュブルが液
体のプレミックス調製物に使われる。シュークロース、
乳糖、コーン・ミール、粉砕コーン、小麦粉、炭酸カル
シウムまたは大豆ミールが固体のプレミックス調製物の
基剤としてしばしば用いられる。次いで、このプレミッ
クス組成物は目的とする動物に与える全飼料と均一に混
合される。このようなプレミックス組成物も本明細書で
用いる「飼料組成物」なる語に包含される。
【００７０】ＡＡＤ２１６複合体、ＡＡＤ２１６Ａ、Ａ
ＡＤ２１６Ｂ、ＡＡＤ２１６Ｃまたはこれらの混合物よ
り成る群から選ばれる活性成分の完成飼料中の濃度は、
非毒性であって活性な量であり、例えば、活性成分が全
飼料の約１〜１０００重量ppm、または約２〜１１５g/t
の範囲から選ばれる。有利には、該活性成分の非毒性量
は１０〜５０ppmの範囲から選ばれる。
【００７１】本発明方法は、単胃または反すう胃の、肉
または乳生産動物、特に肉牛および乳牛、ヒツジ、ブタ
ならびに家禽に対し、ＡＡＤ２１６複合体、ＡＡＤ２１
６Ａ、ＡＡＤ２１６Ｂ、ＡＡＤ２１６Ｃまたはこれらの
混合物より成る群から選ばれる活性成分の成長促進有効
かつ非毒性量を与えることからなる。その他の単胃動物
で、消化管が盲腸または盲腸に似た室での発酵によって
特徴付けられるのは、ウサギおよびウマである。
【００７２】前記の補足飼料は公知の方法により動物に
与えられる。牧場、囲いまたは飼育棚で自由に摂餌させ
るのが、動物の成長および乳分泌率を増し、給餌作業の
効率を高めるのに最も簡便である。
【００７３】
【実施例】以下に実施例を挙げて本発明をさらに詳しく
説明するが、本発明はこれらに限定されるものではな
い。
【００７４】以下の実施例で使われる栄養培地は、下記
の組成を有する。発酵の収量は分析用ＨＰＬＣにより標
品定量試料と比較して得た。
【００７５】本実験を通じて培地１３(Ｈ)をＳＫ＆Ｆ-
ＡＡＤ２１６種菌の増殖に使用した。培地１３(Ｈ)の構
成成分は以下の通りである：デンプン、１５g/リット
ル；シュークロース、５g/リットル；デキストロース、
５g/リットル；ＨＹ-大豆、７.５g/リットル；コーン・
スティープ・リカー、５g/リットル；Ｋ2ＨＰＯ4、１.
５g/リットル；ＮaＣl、０.５g/リットル；ＣaＣＯ3、
１.５g/リットル；およびミネラル「Ｓ」、５ml/リット
ル；pH７.０。
【００７６】ミネラル「Ｓ」は以下のような組成を有す
る：ＺnＳＯ4・７Ｈ2Ｏ、２.８g/リットル；Ｆe(ＮＨ4)
2ＨＣ6Ｈ5Ｏ7、２.７g/リットル；ＣuＳＯ4・５Ｈ2Ｏ、
０.１２５g/リットル；ＭnＳＯ4・Ｈ2Ｏ、１.０g/リッ
トル；ＣoＣl2・６Ｈ2Ｏ、０.１g/リットル；Ｎa2Ｂ4Ｏ
7・Ｈ2Ｏ、０.０９g/リットル；およびＮa2ＭoＯ4・２
Ｈ2Ｏ、０.０５g/リットル。
【００７７】培地Ｖ-２の構成成分は以下の通りであ
る：大豆粉、１５g/リットル；ビート糖蜜、１０g/リッ
トル；グルコース、１０g/リットル；Estrasan４（メチ
ルオレエート）、１０g/リットル；およびＮaＣl、０.
３g/リットル、pH７.２。
【００７８】実施例１ 第１種菌段階 キブデロスポランジウム・アリダムの斜面培養の全部
を、滅菌水１０mlに懸濁し、培地１３Ｈ５００mlを入れ
た４リットルのアスピレーター瓶に無菌的に接種する。
ロータリーシェーカー上２５０rpmで３日間２８℃でイ
ンキュベートした後、成熟した培養物を実施例２の１４
リットルのガラス容器のファーメンターへの接種に使用
し、第２種菌段階を作る。
【００７９】実施例２ 第２種菌段階 滅菌した培地１３Ｈ１０リットルを入れた１４リットル
容のガラス容器ファーメンター（New Brunswick Model
19）に、実施例１の栄養培養５００mlを無菌的に接種す
る。この容器を以下の条件により操作する： 撹拌：４００rpm、０〜７２時間 通気：０.４v/v/m＊、０〜７２時間 温度：２８℃ ＊v/v/m−培地１容量当り、１分間当りの空気の容量 得られた栄養培養５リットルを次に実施例３の７５リッ
トル容ファーメンターに接種し、第３種菌段階を作る。
【００８０】実施例３ 第３種菌段階 ７５リットル容のファーメンター（Chemapec）を実施例
２と同様の方法で作動させる。実施例２で得た栄養培養
５リットルを、培地１３Ｈ５０リットルを入れた７５リ
ットル容のファーメンターへの接種に使用する。発酵装
置は以下のごとく動かした。 撹拌：２５０rpm、０〜７２時間 通気：０.４v/v/m、０〜７２時間 温度：２８℃ 得られた栄養培養のうち５０リットルを、引き続き所望
のＡＡＤ２１６複合体を生産するため実施例４の７５０
リットル容ファーメンターに接種するのに使用する。
【００８１】実施例４ ＡＡＤ２１６複合体の産生 ７５０リットル容のファーメンター（ＡＢＥＣ）を実施
例３と同様の方法で操作する。実施例３の栄養培養５０
リットルを、培地Ｖ-２ ６００リットルを入れた７５０
リットル容のファーメンターに無菌的に接種するのに使
用する。ファーメンターは以下のように作動させる： 撹拌：１２０rpm、０〜１６８時間 通気：０.３v/v/m、０〜１６８時間 温度：２６℃ この発酵ブロスは、以下のような個々の抗生物質成分で
構成されるＡＡＤ２１６複合体を含有していた：ＡＡＤ
２１６Ａ＝５０μg/ml；ＡＡＤ２１６Ｂ＝６０.８μg/m
l；およびＡＡＤ２１６Ｃ＝４３.５μg/ml。
【００８２】実施例５ ＡＡＤ２１６複合体の生産 実施例４と同様の方法で４５０リットル容ファーメンタ
ー（Chemapec）を操作する。実施例３にしたがって製造
した栄養培養（第３種菌段階）３０リットルを、培地Ｖ
-２ ３００リットルを入れた４５０リットル容ファーメ
ンターに無菌的に接種するのに使用する。ファーメンタ
ーは以下のように作動させる： 撹拌：１２０rpm、０〜１６８時間 通気：０.４〜０.５v/v/m 温度：２６℃。 この発酵ブロスは、以下のような個々の抗生物質成分で
構成されるＡＡＤ２１６複合体を含有していた：ＡＡＤ
２１６Ａ＝４６.２μg/ml；ＡＡＤ２１６Ｂ＝７５μg/m
l；およびＡＡＤ２１６Ｃ＝４８μg/ml。
【００８３】実施例６ ＡＡＤ２１６複合体の分離 実施例４で得た発酵ブロスの全量（６００リットル）
を、濾過助剤（Hyflo Supercel、Johns-Man-ville Prod
ucts Corp.）を使用し、回転ドラム濾過（Komline-Sand
erson、Laboratoty Scale Model）によりブロスのその
ままのpH（pH７.７〜８.２）にて清澄化させる。ブロス
の濾液（４２０リットル）を、冷浴（メタノール/ドラ
イアイス）中に入れたバット中、１００リットル容のバ
ッチ処理により４℃に冷却する。次いで、撹拌しつつpH
が３.０となるまで濃塩酸を徐々に加えることにより、
この冷却したブロス濾液を沈澱させる。得られた沈澱
を、前記のように濾過助剤を用いて回転真空濾過によっ
て回収する。濾過助剤-生成物の沈澱ケーキを脱イオン
水（５５リットル）と混合し、pH７.０で１０分間抽出
する。かくして得られた水性抽出液をホワットマン＃４
濾紙で濾過して濾過助剤を除く。得られた濾液を流速
０.５容量/時のＸＡＤ-７樹脂カラム（８.５×１１０c
m）２本に適用する。８容量の脱イオン水（pH７.０）で
洗浄後、所望のＡＡＤ２１６複合体を水性メタノール
（５０〜１００％）で溶出することにより回収する。所
望のＡＡＤ２１６複合体を含有するメタノール性溶出液
を上昇薄膜エバポレーター（rising film evaporator）
を用いて３５℃で濃縮する。得られた水性濃縮液をビル
チス（Virtis）の棚板凍結乾燥器上で凍結乾燥し、ＡＡ
Ｄ２１６複合体を８５.１g得た。
【００８４】このＡＡＤ２１６複合体を、Whatman Part
isilR Prep 40 ODS-3（１kg）上、Jobin Yvon Chromato
spac-Prep100（１５〜３３％アセトニトリル-０.１Ｍ p
H３.２のリン酸緩衝液の段階勾配）によりクロマトグラ
フィーに付すと、高濃度ＡＡＤ２１６複合体が得られ、
これは分析用ＨＰＬＣによれば、ＡＡＤ２１６Ａ１.８
８g、ＡＡＤ２１６Ｂ２.６g、およびＡＡＤ２１６Ｃ２.
８gを含有していた。
【００８５】実施例７ ＡＡＤ２１６Ａ、ＡＡＤ２１６
ＢおよびＡＡＤ２１６Ｃの分離 分析用ＨＰＬＣにより、ＡＡＤ２１６Ａ０.４２g、ＡＡ
Ｄ２１６Ｂ１.３９g、およびＡＡＤ２１６Ｃ０.０８gを
含有していた実施例６で分離した高濃度ＡＡＤ２１６複
合体の試料（３８g、非脱塩）を、０.１Ｍ、pH６のリン
酸緩衝液中の１５％アセトニトリル１リットルに溶解
し、pHを６.３に調節する。この溶液を、Whatman Parti
silR 40（ODS-3）（５０cm×４.８cm）のカラムを付け
たWaters Prep 500R ＨＰＬＣに流速２００ml/分で適用
する。次いで、以下の勾配を使用してカラムを溶出す
る：
【００８６】(１)極性物質（ＵＶ検出器２１０nmにて）
が溶出するまでは２０％水性アセトニトリルおよび緩衝
液； (２)ＡＡＤ２１６Ａが溶出するまでは２４％アセトニト
リル緩衝液； (３)ＡＡＤ２１６Ｂが溶出するまでは２６％アセトニト
リル緩衝液； (４)ＡＡＤ２１６Ｃが溶出するまでは２８％アセトニト
リル緩衝液；および (５)５０％水性アセトニトリル。
【００８７】ＨＰＬＣカラムより溶出させた適当な分画
を引き続き下記のごとく脱塩し、純粋な個々の抗生物質
を得る：ＡＡＤ２１６Ａ、０.２５g；ＡＡＤ２１６Ｂ、
１.０５g；およびＡＡＤ２１６Ｃ、０.０６g。
【００８８】脱塩方法は、ＨＰＬＣからの適当な分画を
プールし、減圧でアセトニトリルを除去する工程を含
む。得られた水性試料をＸＡＤ-７樹脂カラムにのせ、
流出液の電導度が２５マイクロＭＨＯより小さくなるま
で脱イオン水で溶出する。次いでカラムを水性アセトニ
トリル（４０〜６０％）で溶出し、溶離液を凍結乾燥し
て所望の生成物を得る。
【００８９】実施例８ 高濃度ＡＡＤ２１６複合体の分
離 ＡＡＤ２１６Ａ０.６９g、ＡＡＤ２１６Ｂ０.２３g、Ａ
ＡＤ２１６Ｃ０.２１g（ＨＰＬＣ分析）を含む実施例６
のＸＡＤ-７の方法により分離しＡＡＤ２１６複合体の
試料１０gを、１７.５％のアセトニトリルおよび０.１
Ｍ、pH６のリン酸緩衝液に溶解する。pHを６.３に調節
し、この溶液をWhatman PartisilR Prep40（ODS-3）を
充填した５０cm×４.８cmのカラムを装着したWaters Pr
ep 500R高速液体クロマトグラフィーにかける。カラム
は、極性物質を除くため２０％アセトニトリル緩衝液で
溶出し、次いで２８％アセトニトリル緩衝液で溶出する
と、高濃度ＡＡＤ２１６複合体がアセトニトリル-緩衝
液中に得られる。溶出液中のアセトニトリルを減圧除去
し、得られた水性溶液をＸＡＤ-７樹脂カラムに適用
し、溶出液の電導度が２５マイクロＭＨＯより小さくな
るまで脱イオン水で洗浄する。
【００９０】次にカラムを水性アセトニトリル（４０〜
６０％）で溶出し、溶出液を凍結乾燥すると、ＡＡＤ２
１６Ａ０.５９g、ＡＡＤ２１６Ｂ０.２０g、およびＡＡ
Ｄ２１６Ｃ０.２０gを含有する高濃度ＡＡＤ２１６複合
体が得られる。
【００９１】実施例９ 分離の別法 別法として、回収量を最大とするため、ＸＡＤ-７での
精製後のＡＡＤ２１６複合体を実施例７の方法を用いて
クロマトグラフィーに付すと、ＡＡＤ２１６Ａ、ＡＡＤ
２１６Ｂ、およびＡＡＤ２１６Ｃが比較的純粋な状態で
得られる。
【００９２】４回の個々の工程より得たＡＡＤ２１６Ａ
（分析用ＨＰＬＣによれば３.９g、２.６gおよび２.２g
のＡＡＤ２１６Ａを含有）を合わせ、再度同じＨＰＬＣ
において、２２％アセトニトリルおよび０.１Ｍ、pH６
のリン酸緩衝液により同じように溶出させるクロマトグ
ラフィーに付すと、脱塩後に中程の溶出液から高度に精
製された状態のＡＡＤ２１６Ａ４.６gが得られる。他の
分画はさらに精製するために再使用する。
【００９３】同じ個々の工程より得たＡＡＤ２１６Ｂ
（分析用ＨＰＬＣによれば２.５g、３.７g、３.７gおよ
び１.４gを含有）を合わせ、再度同じＨＰＬＣにおい
て、２６％アセトニトリルおよび０.１Ｍ、pH６のリン
酸緩衝液により溶出させるクロマトグラフィーに付す
と、脱塩後に中程の溶出液から高度に精製された状態の
ＡＡＤ２１６Ｂ２.７gが得られる。他の分画はさらに精
製するために再使用する。
【００９４】実施例１０ 高濃度ＡＡＤ２１６複合体の
別途分離 実施例６の方法にしたがって分離した。およそ７２０mg
のＡＡＤ２１６Ａ、ＡＡＤ２１６ＢおよびＡＡＤ２１６
Ｃを含有するＡＡＤ２１６複合体を水（２００ml）に溶
解し、濾過する。この濾液を０.０２Ｍ、pH７.０のリン
酸ナトリウム緩衝液中の親和クロマトグラフィー吸着剤
Affi-GelR 10-Dala-Dala（Dala-Dala ６３３mg）７０ml
と混和し[方法の概略については、Cuatrecasas等、Bioc
hemistry，Vol.11，No.12，pp.2291-2298（1972）を参
照のこと]、おだやかに１/２時間撹拌する。この混合物
をカラムに注ぎ、水層を溶出する。カラムを０.０２Ｍ
pH７.０リン酸緩衝液（２×２５０ml）；０.５Ｍ ＮＨ4
ＯＡc、pH７.８（２×２５０ml）；Ｈ2Ｏ（２５０m
l）；０.１Ｍ pH７.８ＮＨ4ＯＡc（２５０ml）；Ｈ2Ｏ
（２５０ml）；４０％水性アセトニトリル（７０ml）；
４０％水性アセトニトリル（１４００ml；および０.４
Ｍ ＮaＨＣＯ3中の３０％アセトニトリル（２×２５０m
l）で洗浄する。４０％アセトニトリル１４００mlの分
画を凍結乾燥すると、ＡＡＤ２１６Ａ２２４mg、ＡＡＤ
２１６Ｂ１３３mgおよびＡＡＤ２１６Ｃ１５８mgを含有
する高濃度ＡＡＤ２１６複合体６０７mgが得られた。
【００９５】
【発明の効果】本発明によれば、抗生物質ＡＡＤ２１６
複合体の新規生物活性成分であるＡＡＤ２１６Ａ、ＡＡ
Ｄ２１６ＢおよびＡＡＤ２１６Ｃが得られる。これら活
性成分は、全て抗菌活性を示し、抗菌剤、成長促進剤お
よびウシ乳腺炎の治療のような動物の健康のための適用
に対して有用である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 // Ａ６１Ｋ 35/74 ＡＤＺ Ｆ 7431−4Ｃ ＡＥＥ ＡＦＦ (Ｃ１２Ｐ 1/06 Ｃ１２Ｒ 1:01） 7804−4Ｂ (72)発明者 デイビッド・ジョン・ニューマン アメリカ合衆国ペンシルベニア州19087、 ウェイン、クレストウッド・ロード675番 (72)発明者 マーシャ・キャスリン・シャーラー アメリカ合衆国ペンシルベニア州19428、 コンショホッケン、アーデン・ロード380 番 (72)発明者 ロバート・デイビッド・シトリン アメリカ合衆国ペンシルベニア州19462、 プリモス・ミーティング、シーラ・ロード 2076番 (72)発明者 ジョセフ・ロナルド・バレンタ アメリカ合衆国ペンシルベニア州19087、 ストラフォード、オールド・イーグル・ス クール・ロード427番

Claims (16)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 pH約６において、以下の特性： （ａ）３００〜３５０℃で分解する淡黄白色固体であ
    る； （ｂ）実験式Ｃ81Ｈ82Ｎ8Ｏ30Ｃl4を有する； （ｃ）水分が１０.８０％の場合、およその元素組成
    は、Ｃ４８.２０％、Ｈ５.０１％、Ｎ５.２０％、Ｃl
    ６.４３％であり、Ｓまたは有機リンを含まない； （ｄ）臭化カリウム中での赤外吸収スペクトルは、以下
    の波数においてピークを示す：３４００、２９２０、１
    ６６０、１６００、１５１０、１４６０、１４３０、１
    ３９０、１３２０、１３００、１２４０、１１５０、１
    ０６０および１０２０cm-1； （ｅ）Ｍ＋Ｈによる高速原子衝撃（ＦＡＢ）マススペク
    トルは１７８７（主原子団）である； （ｆ）アセトニトリル：水（１：１）中での紫外スペク
    トルの吸収極大値は、中性および酸性条件下で２８０nm
    においてＥ(１％)＝５１、塩基性条件下で３０１nmにお
    いてＥ(１％)＝７３を示す； （ｇ）ＣＤ3ＯＤ：Ｄ2Ｏ（１：９）中、９０.５６MHz、
    pH８.５における炭素磁気共鳴スペクトルは、標準とし
    てのＴＭＳと比較して以下の化学シフト値（ppm）を示
    す：１７７.７、１７７.５、１７５.５、１７４.６、１
    ７１.５、１７０.８、１７０.４、１７０.２、１６９.
    １、１６１.８、１５８.６、１５７.９、１５５.１、１
    ５５.０、１５２.５、１５１.９、１５１.６、１５０.
    ７、１４６.０、１４４.３、１４１.７、１３８.８、１
    ３８.３、１３６.０、１３４.６、１３４.５、１３３.
    ７、１３０.８、１２９.８、１２９.４、１２８.９、１
    ２８.６、１２７.４、１２７.０、１２６.２、１２５.
    ６、１２５.１、１２２.７、１２２.３、１２０.９、１
    １９.６、１１８.３、１１６.４、１１０.５、１０９.
    ６、１０８.３、１０４.２、１０３.３、１０３.１、１
    ００.７、９８.１、７８.４、７４.４、７３.９、７３.
    ３、７２.０、７１.６、７１.３、７０.７、６７.３、
    ６５.６、６３.６、６２.３、６１.６、６０.２、５６.
    ８、５６.３、５５.８、５４.９、３７.２、３２.７、
    ３２.２、２９.８、２９.６、２９.５、２６.２、２３.
    ０および１４.５； （ｈ）比旋光度は[α]25＝−６６°（Ｃ＝０.３、Ｈ2Ｏ
    中）である； （ｉ）過ヨウ素酸塩により陽性反応、ニンヒドリンによ
    り陰性反応を示す； （ｊ）水、メタノール、ジメチルスルホキシドに可溶性
    であり、エタノール、アセトニトリル、アセトン、ジエ
    チルエーテルおよび脂肪族炭化水素に不溶性である；そ
    して （ｋ）アセトニトリル：水（３：７）中でのpKa値は、
    以下の通りである：３.０、４.９、７.４、８.４、１
    ０.０および１０.３；ただし、１０.３以上のpKa値は測
    定していない；を有することを特徴とするＡＡＤ２１６
    Ａ抗生物質。
  2. 【請求項２】 pH約６において、以下の特性： （ａ）３００〜３５０℃で分解する淡黄白色固体であ
    る； （ｂ）実験式Ｃ82Ｈ84Ｎ8Ｏ30Ｃl4を有する； （ｃ）水分が１０.８％の場合、およその元素組成は、
    Ｃ４９.６７％、Ｈ５.０７％、Ｎ５.１９％、Ｃl６.７
    ０％であり、Ｓまたは有機リンを含まない； （ｄ）臭化カリウム中での赤外吸収スペクトルは、以下
    の波数においてピークを示す：３４００、２９２０、１
    ６６０、１６００、１５１０、１４６０、１４３０、１
    ３９０、１３００、１２４０、１１５０、１０６０およ
    び１０２０cm-1； （ｅ）Ｍ＋Ｈによる高速原子衝撃（ＦＡＢ）マススペク
    トルは１８０１（主原子団）である； （ｆ）アセトニトリル：水（１：１）中での紫外スペク
    トルの吸収極大値は、中性および酸性条件下で２８０nm
    においてＥ(１％)＝５５、塩基性条件下で３０１nmにお
    いてＥ(１％)＝７２.５を示す； （ｇ）ＣＤ3ＯＤ：Ｄ2Ｏ（１：９）中、９０.５６MHz、
    pH８.５における炭素磁気共鳴スペクトルは、標準とし
    てのＴＭＳと比較して以下の化学シフト値（ppm）を示
    す：１７７.９、１７７.４、１７５.６、１７４.４、１
    ７１.６、１７０.９、１７０.５、１７０.４、１６９.
    ３、１６２.４、１５８.７、１５８.１、１５５.２、１
    ５５.０、１５２.６、１５１.３、１５０.７、１４６.
    ０、１４４.３、１４１.３、１３８.８、１３８.３、１
    ３６.１、１３４.７、１３３.６、１３０.７、１２９.
    ９、１２９.８、１２９.４、１２９.０、１２８.７、１
    ２７.７、１２７.５、１２７.０、１２６.３、１２５.
    ７、１２４.７、１２２.８、１２２.３、１２０.９、１
    １９.９、１１９.６、１１８.４、１１６.７、１１０.
    ５、１０９.６、１０８.５、１０４.２、１０３.３、１
    ０３.１、１００.６、９８.１、７８.５、７４.４、７
    ３.９、７３.４、７２.１、７１.７、７１.２、７０.
    ８、６７.３、６５.５、６３.７、６２.３、６１.６、
    ６０.３、５６.８、５６.２、５５.９、５５.０、３９.
    ６、３７.３、３２.７、３０.２、３０.０、２９.７、
    ２８.４、２７.８、２６.３および２３.３； （ｈ）比旋光度は[α]25＝−５９°（Ｃ＝０.１、Ｈ2Ｏ
    中）である； （ｉ）過ヨウ素酸塩により陽性反応、ニンヒドリンによ
    り陰性反応を示す； （ｊ）水、メタノール、ジメチルスルホキシドに可溶性
    であり、エタノール、アセトニトリル、アセトン、ジエ
    チルエーテルおよび脂肪族炭化水素に不溶性である；そ
    して、 （ｋ）アセトニトリル：水（３：７）中でのpKa値は、
    以下の通りである：３.０、４.５、７.５、８.５および
    ９.７；ただし、９.７以上のpKa値は測定していない；
    を有することを特徴とするＡＡＤ２１６Ｂ抗生物質。
  3. 【請求項３】 pH約６において、以下の特性： （ａ）３５０℃まで融点を示さない淡黄白色固体であ
    る； （ｂ）実験式Ｃ83Ｈ86Ｎ8Ｏ30Ｃl4を有する； （ｃ）水分が８.２％の場合、およその元素組成は、Ｃ
    ４７.８９％、Ｈ５.０９％、Ｎ４.９５％、Ｃl６.３９
    ％、灰分３.６９％であり、Ｓまたは有機リンを含まな
    い； （ｄ）臭化カリウム中での赤外吸収スペクトルは、以下
    の波数においてピークを示す：３４００、２９２０、１
    ６６０、１６００、１５０５、１４３０、１３９０、１
    ２９５、１２４０、１１５０、１０６０および１０２０
    cm-1； （ｅ）Ｍ＋Ｈによる高速原子衝撃（ＦＡＢ）マススペク
    トルは１８１５（主原子団）である； （ｆ）アセトニトリル：水（１：１）中での紫外スペク
    トルの吸収極大値は、中性および酸性条件下で２８０nm
    においてＥ(１％)＝５１、塩基性条件下で３０１nmにお
    いてＥ(１％)＝７５を示す； （ｇ）ＣＤ3ＯＤ：Ｄ2Ｏ（１：９）中、９０.５６MHz、
    pH８.５における炭素磁気共鳴スペクトルは、標準とし
    てのＴＭＳと比較して以下の化学シフト値（ppm）を示
    す：１７７.９、１７７.２、１７５.７、１７３.６、１
    ７１.５、１７０.８、１７０.６、１７０.２、１６９.
    ３、１５８.６、１５７.８、１５５.２、１５４.９、１
    ５２.７、１５１.９、１５０.９、１４６.０、１４４.
    ３、１４１.３、１３８.８、１３８.４、１３６.０、１
    ３４.９、１３４.７、１３３.８、１３０.８、１２９.
    ９、１２９.８、１２９.３、１２９.１、１２７.７、１
    ２７.５、１２７.０、１２６.４、１２５.３、１２２.
    ７、１２１.０、１１９.７、１１８.３、１１６.１、１
    １０.４、１０９.６、１０８.１、１０４.１、１０３.
    ２、１０１.５、９８.０、７８.６、７４.６、７３.
    ９、７３.４、７２.１、７１.７、７１.３、７０.３、
    ６７.３、６５.１、６３.７、６２.５、６１.６、６０.
    ３、５６.８、５６.３、５５.３、５４.９、３９.７、
    ３７.４、３２.６、３２.３、３０.５、３０.４、３０.
    ２、２９.９、２８.６、２８.１、２６.４、２３.４お
    よび２２.０； （ｈ）比旋光度は[α]25＝−５０.６（Ｃ＝０.６、Ｈ2
    Ｏ中）である； （ｉ）過ヨウ素酸塩により陽性反応、ニンヒドリンによ
    り陰性反応を示す； （ｊ）水、メタノール、ジメチルスルホキシドに可溶性
    であり、エタノール、アセトニトリル、アセトン、ジエ
    チルエーテルおよび脂肪族炭化水素に不溶性である；そ
    して （ｋ）アセトニトリル：水（３：７）中でのpKa値は、
    以下の通りである：３.０、４.２、７.２、８.２、９.
    ９および１０.３；ただし、１０.３以上のpKa値は測定
    していない；を有することを特徴とするＡＡＤ２１６Ｃ
    抗生物質。
  4. 【請求項４】 キブデロスポランジウム・アリダム（Ki
    bdelosporangium aridum Shearer，gen.nov.，sp.no
    v.）ＡＴＣＣ３９３２３またはその変異株を、同化可能
    な窒素源および炭素源を含有する液体栄養培地中で、深
    部好気的条件下に、実質的な量のＡＡＤ２１６複合体が
    生産されるまで培養し、生産されたＡＡＤ２１６複合体
    からＡＡＤ２１６Ａ抗生物質を分離することを特徴とす
    るＡＡＤ２１６Ａ抗生物質の製造方法。
  5. 【請求項５】 微生物の培養を１５°〜４２℃の温度で
    行なう請求項４記載の方法。
  6. 【請求項６】 微生物の培養を３〜８日間継続する請求
    項４記載の方法。
  7. 【請求項７】 キブデロスポランジウム・アリダム（Ki
    bdelosporangium aridum Shearer，gen.nov.，sp.no
    v.）ＡＴＣＣ３９３２３またはその変異株を、同化可能
    な窒素源および炭素源を含有する液体栄養培地中で、深
    部好気的条件下に、実質的な量のＡＡＤ２１６複合体が
    生産されるまで培養し、生産されたＡＡＤ２１６複合体
    からＡＡＤ２１６Ｂ抗生物質を分離することを特徴とす
    るＡＡＤ２１６Ｂ抗生物質の製造方法。
  8. 【請求項８】 微生物の培養を１５°〜４２℃の温度で
    行なう請求項７記載の方法。
  9. 【請求項９】 微生物の培養を３〜８日間継続する請求
    項７記載の方法。
  10. 【請求項１０】 キブデロスポランジウム・アリダム
    （Kibdelosporangiumaridum Shearer，gen.nov.，sp.no
    v.）ＡＴＣＣ３９３２３またはその変異株を、同化可能
    な窒素源および炭素源を含有する液体栄養培地中で、深
    部好気的条件下に、実質的な量のＡＡＤ２１６複合体が
    生産されるまで培養し、生産されたＡＡＤ２１６複合体
    からＡＡＤ２１６Ｃ抗生物質を分離することを特徴とす
    るＡＡＤ２１６Ｃ抗生物質の製造方法。
  11. 【請求項１１】 微生物の培養を１５°〜４２℃の温度
    で行なう請求項１０記載の方法。
  12. 【請求項１２】 微生物の培養を３〜８日間継続する請
    求項１０記載の方法。
  13. 【請求項１３】 請求項１、２もしくは３のいずれか１
    項記載の抗生物質またはそれらの混合物および薬学的に
    許容できる担体からなる抗菌剤組成物。
  14. 【請求項１４】 請求項１、２もしくは３のいずれか１
    項記載の抗生物質またはそれらの混合物の非毒性量を添
    加した動物用飼料組成物。
  15. 【請求項１５】 プレミックス賦形剤および請求項１、
    ２もしくは３項のいずれか１項記載の抗生物質またはそ
    れらの混合物よりなる動物用飼料プレミックス組成物。
  16. 【請求項１６】 同化可能な窒素源および炭素源を含有
    する液体栄養培地中で培養した場合に、回収可能な量の
    ＡＡＤ２１６Ａ、ＡＡＤ２１６ＢもしくはＡＡＤ２１６
    Ｃ、またはそれらの混合物を生産することのできる生物
    学的に純粋なキブデロスポランジウム・アリダム（Kibd
    elosporangium aridum Shearer，gen.nov.，sp.nov.）
    ＡＴＣＣ３９３２３もしくはその活性変異体または誘導
    体の培養物。
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