JPH0646957B2 - インタ−ロイキン−２の製造方法 - Google Patents
インタ−ロイキン−２の製造方法Info
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- JPH0646957B2 JPH0646957B2 JP60048698A JP4869885A JPH0646957B2 JP H0646957 B2 JPH0646957 B2 JP H0646957B2 JP 60048698 A JP60048698 A JP 60048698A JP 4869885 A JP4869885 A JP 4869885A JP H0646957 B2 JPH0646957 B2 JP H0646957B2
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- culture
- medium
- cells
- vol
- strain
- Prior art date
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- Expired - Lifetime
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Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/54—Interleukins [IL]
- C07K14/55—IL-2
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
Description
【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明はインターロイキン−２の製造方法に関する。
従来の技術 インターロイキン−２〔以下ＩＬ−２と略称する。なお
ＩＬ−２は、Ｔ細胞増殖因子（TCGF）とも呼ばれる。〕
は、レクチンやアロ抗原等で刺激されたＴ細胞によって
産生されるリンホカインである〔サイエンス，第１９３
巻，１００７頁（１９７６）；〕 ＩＬ−２を利用して、これまでにキラーＴ細胞やヘルパ
ーＴ細胞、さらにはナチュラルキラー細胞などのクロー
ンが多数得られている〔たとえば、ネイチャー，第２６
８巻，１５４頁（１９７７）〕：このようなＴ細胞やナ
チュラルキラー細胞のクローン化という直接的用途のほ
かに、ＩＬ−２を用いてある特殊な抗原、たとえば腫瘍
抗原を認識し破壊する抗原特異的なキラーＴ細胞をイン
ビトロで選択的に増殖させることができる。このように
して増殖させた腫瘍特異的キラーＴ細胞を動物に移入し
て腫瘍の増殖を抑制阻止することが可能である〔ザ・ジ
ャーナル・オブ・イムノロジー，第１２５巻，１９０４
頁（１９８０）〕。
ＩＬ−２は、Ｔ細胞増殖因子（TCGF）とも呼ばれる。〕
は、レクチンやアロ抗原等で刺激されたＴ細胞によって
産生されるリンホカインである〔サイエンス，第１９３
巻，１００７頁（１９７６）；〕 ＩＬ−２を利用して、これまでにキラーＴ細胞やヘルパ
ーＴ細胞、さらにはナチュラルキラー細胞などのクロー
ンが多数得られている〔たとえば、ネイチャー，第２６
８巻，１５４頁（１９７７）〕：このようなＴ細胞やナ
チュラルキラー細胞のクローン化という直接的用途のほ
かに、ＩＬ−２を用いてある特殊な抗原、たとえば腫瘍
抗原を認識し破壊する抗原特異的なキラーＴ細胞をイン
ビトロで選択的に増殖させることができる。このように
して増殖させた腫瘍特異的キラーＴ細胞を動物に移入し
て腫瘍の増殖を抑制阻止することが可能である〔ザ・ジ
ャーナル・オブ・イムノロジー，第１２５巻，１９０４
頁（１９８０）〕。
これらの実験事実はＩＬ−２が抗腫瘍剤として用いられ
る可能性を示すものである。ＩＬ−２はまた、胸腺機能
を欠如しているヌードマウスのヘルパーＴ細胞機能を回
復させること（ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・イム
ノロジー，第１０巻，７１９頁（１９８０）〕や、同種
細胞に対するキラーＴ細胞の誘導を回復させること〔ネ
イチャー，第２８４巻，２７８頁（１９８０）〕が知ら
れており、免疫機能低下疾患への応用も期待できる。
る可能性を示すものである。ＩＬ−２はまた、胸腺機能
を欠如しているヌードマウスのヘルパーＴ細胞機能を回
復させること（ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・イム
ノロジー，第１０巻，７１９頁（１９８０）〕や、同種
細胞に対するキラーＴ細胞の誘導を回復させること〔ネ
イチャー，第２８４巻，２７８頁（１９８０）〕が知ら
れており、免疫機能低下疾患への応用も期待できる。
ヒトＩＬ−２をヒトＴ細胞から得ることができるが、極
めて限られた量である。しかし近年遺伝子組換え技術の
進歩によって、ヒトＩＬ−２遺伝子を組入れた発現ベク
ターを持つ大腸菌などの培養物から生物学的に活性な蛋
白質として取得できる途が開けた〔ネイチャー，第３０
２巻，３０５頁（１９８３）；ヌクレイツク・アシッズ
・リサーチ，第１１巻，４３０７頁（１９８３）〕。
めて限られた量である。しかし近年遺伝子組換え技術の
進歩によって、ヒトＩＬ−２遺伝子を組入れた発現ベク
ターを持つ大腸菌などの培養物から生物学的に活性な蛋
白質として取得できる途が開けた〔ネイチャー，第３０
２巻，３０５頁（１９８３）；ヌクレイツク・アシッズ
・リサーチ，第１１巻，４３０７頁（１９８３）〕。
発明が解決しようとする問題点 これまでに報告された遺伝子組換え技術によるヒトＩＬ
−２の生産性は低く、工業的なヒトＩＬ−２蛋白質の製
造法としては、必ずしも十分なものとはいえない。
−２の生産性は低く、工業的なヒトＩＬ−２蛋白質の製
造法としては、必ずしも十分なものとはいえない。
この様な状況に鑑み、本発明者らは、ＩＬ−２生産能を
有する大腸菌の培養法について、種々検討を重ねた結
果、従来大腸菌は中性乃至微アルカリ性を好むとされ、
大腸菌を使用する酵素はpH６．５〜７．５付近の中性域
で行われて来た〔遺伝子組換え実用化技術第４巻１５１
〜１６４頁（１９８３）〕が、意外にもpH ４，８〜６
の酸性条件下で培養することによって、ＩＬ−２の生産
量が著しく向上することを見出し、これに基づいてさら
に研究した結果、本発明を完成した。
有する大腸菌の培養法について、種々検討を重ねた結
果、従来大腸菌は中性乃至微アルカリ性を好むとされ、
大腸菌を使用する酵素はpH６．５〜７．５付近の中性域
で行われて来た〔遺伝子組換え実用化技術第４巻１５１
〜１６４頁（１９８３）〕が、意外にもpH ４，８〜６
の酸性条件下で培養することによって、ＩＬ−２の生産
量が著しく向上することを見出し、これに基づいてさら
に研究した結果、本発明を完成した。
問題点を解決するための手段 本発明はインターロイキン−２遺伝子およびその上流に
トリプトファンプロモーターを有する発現プラスミドを
保持する大腸菌の培養によりインターロイキン−２を製
造する方法において、当該大腸菌をpH ４．８〜６．０
に調整した培地に接種し、当該pHを維持しつつ生育させ
ることを特徴とするインターロイキン−２の製造方法を
提供するものである。
トリプトファンプロモーターを有する発現プラスミドを
保持する大腸菌の培養によりインターロイキン−２を製
造する方法において、当該大腸菌をpH ４．８〜６．０
に調整した培地に接種し、当該pHを維持しつつ生育させ
ることを特徴とするインターロイキン−２の製造方法を
提供するものである。
ＩＬ−２遺伝子としては哺乳動物由来のものが挙げら
れ、とりわけ第１図においてNo.１〜１３３のアミノ酸
配列で示されるヒトＩＬ−２をコードする遺伝子が好ま
しい。一例としては、例えば第２図のコドンNo.１〜１
３３で示される塩基配列が挙げられる。
れ、とりわけ第１図においてNo.１〜１３３のアミノ酸
配列で示されるヒトＩＬ−２をコードする遺伝子が好ま
しい。一例としては、例えば第２図のコドンNo.１〜１
３３で示される塩基配列が挙げられる。
上記遺伝子（ＤＮＡ）およびプロモーターは、通常ベク
ターに組込まれ発現プラスミドとして使用されるが、該
ベクターとしてのプラスミドとして、例えばColＥ１由
来のpBR３２２〔ジーン，第２巻，９５頁（１９７
７）〕が最もよく利用されるが、その他のプラスミドで
あっても、大腸菌内で複製保持されるものであれば、い
ずれも用いることができる。その例としては、pBR３１
３〔ジーン，第２巻，７５頁（１９７７）〕，pBR324，
pBR３２５〔ジーン，第４巻，１２１頁（１９７
８）〕，pBR３２７，pBR３２８〔ジーン，第９巻，２８
７頁（１９８０）〕，pKY２２８９〔ジーン，第３巻，
１頁（１９７８）〕，pKY２７００〔生化学，第５２
巻，７７０頁（１９８０）〕，pACYC１７７およびpACYC
１８４〔ジャーナル・オブ・バクテリオロジー，第１３
４巻，１１４１頁（１９７８）〕，pRK２４８，pRK６４
６，pDF４１〔メソッズ・イン・エンジーモロジー，第
６８巻，２６８頁（１９７９）〕などが挙げられる。
ターに組込まれ発現プラスミドとして使用されるが、該
ベクターとしてのプラスミドとして、例えばColＥ１由
来のpBR３２２〔ジーン，第２巻，９５頁（１９７
７）〕が最もよく利用されるが、その他のプラスミドで
あっても、大腸菌内で複製保持されるものであれば、い
ずれも用いることができる。その例としては、pBR３１
３〔ジーン，第２巻，７５頁（１９７７）〕，pBR324，
pBR３２５〔ジーン，第４巻，１２１頁（１９７
８）〕，pBR３２７，pBR３２８〔ジーン，第９巻，２８
７頁（１９８０）〕，pKY２２８９〔ジーン，第３巻，
１頁（１９７８）〕，pKY２７００〔生化学，第５２
巻，７７０頁（１９８０）〕，pACYC１７７およびpACYC
１８４〔ジャーナル・オブ・バクテリオロジー，第１３
４巻，１１４１頁（１９７８）〕，pRK２４８，pRK６４
６，pDF４１〔メソッズ・イン・エンジーモロジー，第
６８巻，２６８頁（１９７９）〕などが挙げられる。
また、バクテリオファージ、たとえばλファージを使用
したλgt系のλgt・λＣ〔プロシージング オブ ナシ
ヨナル アカデミー オブ サイエンスＵＳＡ，第７１
巻，４５７９頁（１９７４）〕。λgt・λＢ〔同誌第７
２巻，３４１６頁（１９７５）〕，λDam〔ジーン，第
１巻，２５５頁（１９７７）〕やシヤロンベクター〔サ
イエンス，第１９６巻，１６１頁（１９７７）；ジャー
ナル・オブ・ビーロロジー，第２９巻，５５５頁（１９
７９）〕，繊維状ファージを使用したベクターなども発
現ベクターとして使用可能である。
したλgt系のλgt・λＣ〔プロシージング オブ ナシ
ヨナル アカデミー オブ サイエンスＵＳＡ，第７１
巻，４５７９頁（１９７４）〕。λgt・λＢ〔同誌第７
２巻，３４１６頁（１９７５）〕，λDam〔ジーン，第
１巻，２５５頁（１９７７）〕やシヤロンベクター〔サ
イエンス，第１９６巻，１６１頁（１９７７）；ジャー
ナル・オブ・ビーロロジー，第２９巻，５５５頁（１９
７９）〕，繊維状ファージを使用したベクターなども発
現ベクターとして使用可能である。
上記発現プラスミドの構築は、公知の方法に従って行な
えばよい〔ネイチャー，第３０２巻，３０５頁（１９８
３），ヌクレイツク・アシッズ・リサーチ，第１１巻４
３０７頁（１９８３）〕。
えばよい〔ネイチャー，第３０２巻，３０５頁（１９８
３），ヌクレイツク・アシッズ・リサーチ，第１１巻４
３０７頁（１９８３）〕。
ヒトＩＬ−２遺伝子を組入れた発現プラスミドを導入す
る宿主菌としては、大腸菌（Escherichiacoli＝Ｅ．col
i）が用いられるが、なかでも大腸菌Ｋ−１２株由来の
ものが、取扱い、安全性の面から特に好ましい。該大腸
菌Ｋ−１２株由来のものとしては、たとえば、大腸菌Ｐ
Ｒ１３株，Ｃ−４株，２９４株，ＤＨ１株，Ｗ３１１０
株，Ｃ６００株などが有利に用いられる。
る宿主菌としては、大腸菌（Escherichiacoli＝Ｅ．col
i）が用いられるが、なかでも大腸菌Ｋ−１２株由来の
ものが、取扱い、安全性の面から特に好ましい。該大腸
菌Ｋ−１２株由来のものとしては、たとえば、大腸菌Ｐ
Ｒ１３株，Ｃ−４株，２９４株，ＤＨ１株，Ｗ３１１０
株，Ｃ６００株などが有利に用いられる。
大腸菌Ｃ−４株はＫ−１２株由来の、大腸菌ＰＲ１３株
〔ジャーナル オブ バクテリオロジー，第９７巻，１
５２２頁（１９６９）〕を親株として単離された株で以
下の菌学的性質を有する。
〔ジャーナル オブ バクテリオロジー，第９７巻，１
５２２頁（１９６９）〕を親株として単離された株で以
下の菌学的性質を有する。
Ｃ−４株の菌学的性質 ａ）顕微鏡的観察 １）形態；通常の大腸菌Ｋ−１２株と同様で、０．５〜
１．０×２〜５μの桿菌で、単独又は２連で存在し、多
形性は認められない。
１．０×２〜５μの桿菌で、単独又は２連で存在し、多
形性は認められない。
２）運動性；有り ３）鞭毛；周毛 ４）グラム染色；陰性 ５）胞子；形成せず ６）抗酸性；非抗酸性 ｂ）各種培地における生育状態 １）肉汁寒天平板培養 集落は小さく平坦で円形。半透明で光沢有り。
２）肉汁寒天斜面培養 生育は中程度で平坦、半透明でやや光沢有り。
３）肉汁液体培養 生育は中程度で、全体に懸濁して生育。
４）肉汁ゼラチン穿刺培養 全体に拡散して生育し、ゼラチンを液化しない。
５）リトマスミルク 凝固又はベプトン化しない。pHも変化しない。
ｃ）生理学的性質 １）硝酸塩の還元：陽性 ２）脱窒反応：陰性 ３）ＭＲテスト陽性 ４）ＶＰテスト：陰性 ５）インドールの生成；陽性 ６）硫化水素の生成；陰性 ７）デンプンの加水分解；陰性 ８）クエン酸の利用；陰性 ９）無機窒素源の利用 ｉ）硝酸ナトリウム：陽性 ii）硫酸アンモニウム；陽性 １０）色素の生成；水溶性色素の産生は認められない。
１１）ウレアーゼ；陰性 １２）オキシダーゼ；陰性 １３）カタラーゼ；陰性 １４）生育の範囲 ｉ）pH；pH４．５〜１０．０で生育 ii）温度；１８℃〜４７℃ １５）酸素に対する態度；通性嫌気性 １６）Ｏ−Ｆテスト；＋ １７） 本株（エシエリヒア コリ Ｃ−４）は、昭和６０年２
月１６日から通商産業省工業技術院微生物工業技術研究
所（ＦＲＩ）に、ＦＥＲＭ−Ｐ８１０１として寄託さ
れ、該寄託はブダペスト条約に基づく寄託に切換えられ
て受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−９６６として同研究（ＦＲ
Ｉ）に保管されている。また該微生物は、財団法人発酵
研究所（ＩＦＯ）にＩＦＯ−１４４２１として寄託され
ている。
月１６日から通商産業省工業技術院微生物工業技術研究
所（ＦＲＩ）に、ＦＥＲＭ−Ｐ８１０１として寄託さ
れ、該寄託はブダペスト条約に基づく寄託に切換えられ
て受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−９６６として同研究（ＦＲ
Ｉ）に保管されている。また該微生物は、財団法人発酵
研究所（ＩＦＯ）にＩＦＯ−１４４２１として寄託され
ている。
２９４株は公知菌株であり〔（プロシーデイング・オブ
・ナシヨナル・アカデミー・オブ・サイエンス・ＵＳＡ
第７３巻，４１７４頁（１９７６）〕、又財団法人発
酵研究所にＩＦＯ−１４１７１として寄託もされてい
る。
・ナシヨナル・アカデミー・オブ・サイエンス・ＵＳＡ
第７３巻，４１７４頁（１９７６）〕、又財団法人発
酵研究所にＩＦＯ−１４１７１として寄託もされてい
る。
Ｗ３１１０，Ｃ６００株も公知菌株であり、ＡＴＣＣカ
タログ・オブ・ストレインズＩ巻第１５版１９８２年に
夫々ＡＴＣＣ ２７３２５，ＡＴＣＣ ２３７２４とし
て掲載されている株が上げられる。
タログ・オブ・ストレインズＩ巻第１５版１９８２年に
夫々ＡＴＣＣ ２７３２５，ＡＴＣＣ ２３７２４とし
て掲載されている株が上げられる。
ＤＨ１株は ネイチャー 第２１７巻，１１１０頁（１
９６８）に記載されている。
９６８）に記載されている。
ＩＬ−２生産能を有する大腸菌は、宿主大腸菌を発現プ
ラスミドで形質転換することにより製造でき、形質転換
は、例えばジャーナル・オブ・モレキユラー・バイオロ
ジー，第５３巻，１５９頁（１９７０），メソッズ・イ
ン・エンジモロジー，第６８巻，２５３頁（１９７
９），ジーン，第３巻，２７９頁（１９７８）などに記
載されている手段によって行うことができる。
ラスミドで形質転換することにより製造でき、形質転換
は、例えばジャーナル・オブ・モレキユラー・バイオロ
ジー，第５３巻，１５９頁（１９７０），メソッズ・イ
ン・エンジモロジー，第６８巻，２５３頁（１９７
９），ジーン，第３巻，２７９頁（１９７８）などに記
載されている手段によって行うことができる。
ＩＬ−２生産能を有する大腸菌は、pH４．８〜６．０に
調整した培地に接種し、当該pH範囲を維持しつつ生育さ
せることにより培養する。上記pH５．０〜５．８、とり
わけpH５．５付近に調整することが好ましい。
調整した培地に接種し、当該pH範囲を維持しつつ生育さ
せることにより培養する。上記pH５．０〜５．８、とり
わけpH５．５付近に調整することが好ましい。
なお生育が十分達成された後は、上記pH領域外、例えば
より酸性側で培養してもよい。
より酸性側で培養してもよい。
pH調整は培地を作製し滅菌する前または後に無機塩基ま
たは鉱酸を用いて行い、大腸菌を接種後生育中、さらに
所定のpH領域を維持するためにpH調整を行う。通常培養
によりpHは低下するので塩基性物質、例えばアンモニ
ア，水酸化ナトリウム，炭酸ナトリウムなど無機塩基を
添加することにより行うが、所望により硫酸などの鉱酸
を添加することもできる。とりわけアンモニア水が好ま
しく、アンモニアを用いる場合は、培地の窒素源ともな
りうる。
たは鉱酸を用いて行い、大腸菌を接種後生育中、さらに
所定のpH領域を維持するためにpH調整を行う。通常培養
によりpHは低下するので塩基性物質、例えばアンモニ
ア，水酸化ナトリウム，炭酸ナトリウムなど無機塩基を
添加することにより行うが、所望により硫酸などの鉱酸
を添加することもできる。とりわけアンモニア水が好ま
しく、アンモニアを用いる場合は、培地の窒素源ともな
りうる。
培地として、たとえばグルコース，カザミノ酸を含むＭ
９培地やＭ−Ｏ３培地〔第２表にそれぞれの培地組成を
示す〕などが挙げられる。しかし培地はこれらに限定さ
れるものではなく、大腸菌が充分生育し、ＩＬ−２が生
産される培地であれば、いずれも適用できる。またたと
えばtrpプロモーターを使用した組換え体では、プロモ
ーターを効率よく働かせるために、例えば３−β−イン
ドリルアクリル酸のような薬剤を加えることも出来る。
又培養中必要に応じて、グルコースやカザ ミノ酸などの成分を追加することも可能である。さらに
組換え大腸菌を選択的に増殖させるために、プラスミド
中に保持されている薬剤耐性等の遺伝子に応じて、耐性
を示す薬剤（テトラサイクリンなど）を添加してもよ
い。
９培地やＭ−Ｏ３培地〔第２表にそれぞれの培地組成を
示す〕などが挙げられる。しかし培地はこれらに限定さ
れるものではなく、大腸菌が充分生育し、ＩＬ−２が生
産される培地であれば、いずれも適用できる。またたと
えばtrpプロモーターを使用した組換え体では、プロモ
ーターを効率よく働かせるために、例えば３−β−イン
ドリルアクリル酸のような薬剤を加えることも出来る。
又培養中必要に応じて、グルコースやカザ ミノ酸などの成分を追加することも可能である。さらに
組換え大腸菌を選択的に増殖させるために、プラスミド
中に保持されている薬剤耐性等の遺伝子に応じて、耐性
を示す薬剤（テトラサイクリンなど）を添加してもよ
い。
培養温度は通常１５〜４５℃であるが、生育開始時から
その半ばまで３７℃付近に保ち、増殖するにつれ温度を
下げ２０〜３０℃に保つことにより生産性が著しく向上
する。
その半ばまで３７℃付近に保ち、増殖するにつれ温度を
下げ２０〜３０℃に保つことにより生産性が著しく向上
する。
培養は、通常、通気撹拌培養によって行われる。培地中
の酸素濃度を飽和酸素濃度の約５％(V／V)以上になるよ
うに保ちつつ培養を行なうと、目的とするＩＬ−２の生
産量が増大されるので有利である。このために、培養途
中に純酸素を空気と混合して通気することも効果的であ
る。
の酸素濃度を飽和酸素濃度の約５％(V／V)以上になるよ
うに保ちつつ培養を行なうと、目的とするＩＬ−２の生
産量が増大されるので有利である。このために、培養途
中に純酸素を空気と混合して通気することも効果的であ
る。
かくして生成されるＩＬ−２の測定にはＩＬ−２依存性
細胞株を用いることができるが、ヒトＩＬ−２はヒト以
外にラットおよびマウスなどのＩＬ−２依存性細胞の増
殖をも促進することが知られている〔イムノロジカル・
レビュー，第５１巻，２５７頁（１９８０）〕ので、Ｉ
Ｌ−２依存性ヒト細胞株のみならずラットまたはマウス
のＩＬ−２依存性細胞株を用いることもできる〔ジャー
ナル・オブ・イムノロジー，第１３０巻，９８１頁およ
び９８８頁（１９８３）〕。
細胞株を用いることができるが、ヒトＩＬ−２はヒト以
外にラットおよびマウスなどのＩＬ−２依存性細胞の増
殖をも促進することが知られている〔イムノロジカル・
レビュー，第５１巻，２５７頁（１９８０）〕ので、Ｉ
Ｌ−２依存性ヒト細胞株のみならずラットまたはマウス
のＩＬ−２依存性細胞株を用いることもできる〔ジャー
ナル・オブ・イムノロジー，第１３０巻，９８１頁およ
び９８８頁（１９８３）〕。
特にマウスのＩＬ−２依存性細胞株は、長期間安定に継
代維持されるので再現性の高い測定結果が得られる。
代維持されるので再現性の高い測定結果が得られる。
本明細書においてＩＬ−２の生産量は、ＩＬ−２依存性
マウス細胞を用いて放射性チミジンの取込みを指標とす
る方法〔バイオケミカル・バイオフイジカル・リサーチ
・コミユニケイシヨンズ，第１０９巻，３６３頁（１９
８２）〕によって測定した。
マウス細胞を用いて放射性チミジンの取込みを指標とす
る方法〔バイオケミカル・バイオフイジカル・リサーチ
・コミユニケイシヨンズ，第１０９巻，３６３頁（１９
８２）〕によって測定した。
本発明で製造されるＩＬ−２を培養菌体から抽出するに
際しては、培養後、公知の方法で菌体を集め、菌体を塩
酸グアニジンなどの蛋白質変性剤を含む緩衝液に懸濁
し、冷所で撹拌したのち、遠心分離によりＩＬ−２を含
む上澄液を得る方法、あるいは緩衝液に懸濁し、超音波
処理，リゾチームおよび（または）凍結融解によって菌
体を破壊したのち、遠心分離によりＩＬ−２を含む上澄
液を得る方法などが適宜用い得る。
際しては、培養後、公知の方法で菌体を集め、菌体を塩
酸グアニジンなどの蛋白質変性剤を含む緩衝液に懸濁
し、冷所で撹拌したのち、遠心分離によりＩＬ−２を含
む上澄液を得る方法、あるいは緩衝液に懸濁し、超音波
処理，リゾチームおよび（または）凍結融解によって菌
体を破壊したのち、遠心分離によりＩＬ−２を含む上澄
液を得る方法などが適宜用い得る。
上記上澄液からＩＬ−２を分離，精製するには、自体公
知の分離，精製法を適切に組み合わせて行うことができ
る。これらの公知の分離，精製法としては、塩析や溶媒
沈殿法などの溶解度を利用する方法，透析法，限界過
法，ゲル過法およびＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル
電気泳動法などの主として分子量の差を利用する方法，
イオン交換クロマトグラフィーなどの荷電の差を利用す
る方法，アフィニティークロマトグラフィーなどの特異
的親和性を利用する方法，逆相高速液体クロマトグラフ
ィーなどの疎水性の差を利用する方法，等電点電気泳動
法などの等電点の差を利用する方法などが挙げられる。
特に、ヒトＩＬ−２蛋白質は高い疎水性を有しているの
で、疎水性カラムクロマトグラフィーとりわけ逆相系カ
ラムを用いる高速液体クロマトグラフィーは該蛋白質の
精製に極めて有効である。
知の分離，精製法を適切に組み合わせて行うことができ
る。これらの公知の分離，精製法としては、塩析や溶媒
沈殿法などの溶解度を利用する方法，透析法，限界過
法，ゲル過法およびＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル
電気泳動法などの主として分子量の差を利用する方法，
イオン交換クロマトグラフィーなどの荷電の差を利用す
る方法，アフィニティークロマトグラフィーなどの特異
的親和性を利用する方法，逆相高速液体クロマトグラフ
ィーなどの疎水性の差を利用する方法，等電点電気泳動
法などの等電点の差を利用する方法などが挙げられる。
特に、ヒトＩＬ−２蛋白質は高い疎水性を有しているの
で、疎水性カラムクロマトグラフィーとりわけ逆相系カ
ラムを用いる高速液体クロマトグラフィーは該蛋白質の
精製に極めて有効である。
かくして精製されるＩＬ−２蛋白質は、たとえば腫瘍抗
原を認識し、破壊する抗原特異的なキラーＴ細胞や抗原
感作の経験の有無と無関係に腫瘍を殺す能力をもつとこ
ろのナチュラルキラー細胞をインビトロで選択的に増殖
させることができ、またこのキラーＴ細胞を生体へ移入
する際に、本発明のヒトＩＬ−２を同時に接種すること
により、その抗腫瘍効果を増大させることから、温血動
物（例、マウス，ラット，ウサギ，犬，ネコ，ブタ，ウ
マ，ヒツジ，ウシ，ヒトなど）の腫瘍の予防，治療や免
疫機能低下疾患の治療のために用いることができる。
原を認識し、破壊する抗原特異的なキラーＴ細胞や抗原
感作の経験の有無と無関係に腫瘍を殺す能力をもつとこ
ろのナチュラルキラー細胞をインビトロで選択的に増殖
させることができ、またこのキラーＴ細胞を生体へ移入
する際に、本発明のヒトＩＬ−２を同時に接種すること
により、その抗腫瘍効果を増大させることから、温血動
物（例、マウス，ラット，ウサギ，犬，ネコ，ブタ，ウ
マ，ヒツジ，ウシ，ヒトなど）の腫瘍の予防，治療や免
疫機能低下疾患の治療のために用いることができる。
上記ＩＬ−２蛋白質を腫瘍の予防，治療剤として用いる
には、当該蛋白質を自体公知の担体と混合希釈して、た
とえば注射剤，カプセル剤などとして非経口的にまたは
経口的に投与することができる。さらに、前述したよう
にインビトロで増殖させたキラーＴ細胞やナチュラルキ
ラー細胞と共にまたは単独で使用することができる。
には、当該蛋白質を自体公知の担体と混合希釈して、た
とえば注射剤，カプセル剤などとして非経口的にまたは
経口的に投与することができる。さらに、前述したよう
にインビトロで増殖させたキラーＴ細胞やナチュラルキ
ラー細胞と共にまたは単独で使用することができる。
また上記ＩＬ−２蛋白質は、公知の天然から分離された
ヒト−２と実質的に同じ生物活性を有するのでこれと同
様に使用することができ、細胞のＩＬ−２受容体との解
離定数がきわめて小さいことから、極く小量の投与で良
い。
ヒト−２と実質的に同じ生物活性を有するのでこれと同
様に使用することができ、細胞のＩＬ−２受容体との解
離定数がきわめて小さいことから、極く小量の投与で良
い。
作用および実施例 以下に実施例および参考列を挙げて本発明を更に具体的
に説明する。
に説明する。
なお実施例中、代表的な形質転換体については通商産業
省工業技術院微生物工業技術研究所（ＦＲＩ）および財
団法人発酵研究所（ＩＦＯ）にそれぞれ下表に示す寄託
番号で寄託されている。
省工業技術院微生物工業技術研究所（ＦＲＩ）および財
団法人発酵研究所（ＩＦＯ）にそれぞれ下表に示す寄託
番号で寄託されている。
なお、上記微生物エシェリヒア コリＣ−４／ｐＴＦ４
は、１９８５年２月１６日からＦＲＩにＦＥＲＭ Ｐ−
８１０２として寄託され、該寄託はブダペスト条約に基
づく寄託に切換えられて受託番号ＦＥＲＭ ＢＦ−９６
７としてＦＲＩに保管されている。
は、１９８５年２月１６日からＦＲＩにＦＥＲＭ Ｐ−
８１０２として寄託され、該寄託はブダペスト条約に基
づく寄託に切換えられて受託番号ＦＥＲＭ ＢＦ−９６
７としてＦＲＩに保管されている。
実施例１ ヒトＩＬ−２構造遺伝子を含有する発現プラスミドpTF
４をＥ．coliＤＥ１／pTF ４（ＦＥＲＭ ＢＰ−６２
８）〔特開昭６０−１１５５２８号公報〕からBirnboi
m,H.C.らの方法〔ヌクレイック・アシッズ・リサーチ
第７巻，１５１３頁（１９７９）〕に記載された方法で
単離し、該プラスミドでＥ．coli ＰＲ １３（前出）
をCohem,S.N.らの方法〔プロシーディングス・オブ・ザ
・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンス，ＵＳ
Ａ，第６９巻２１１０頁（１９７２年）〕により形質転
換し、得られた形質転換体を、それぞれ２００ml容三角
フラスコ内のバクト・トリプトン（デイフコ・ラボラト
リーズ，アメリカ）１％，バクト・イーストエキス（同
上）０．５％，食塩０．５％およびテトラサイクリン塩
酸塩５mg／を含む培地５０ml（pH７．０）に接種し、
３７℃で一夜培養した。一方修正Ｍ−９培地にビタミン
Ｂ１塩酸塩を１mg／添加した培地３０ml宛を含むくぼ
みつき200ml三角フラスコに上記種培養液を各々接種
し、３７℃で４時間，３０℃で４時間，２５℃で１０時
間培養を続け、ＩＬ−２生産性の特にすぐれたＥ．coli
Ｃ−４／pTF ４株を選択した。
４をＥ．coliＤＥ１／pTF ４（ＦＥＲＭ ＢＰ−６２
８）〔特開昭６０−１１５５２８号公報〕からBirnboi
m,H.C.らの方法〔ヌクレイック・アシッズ・リサーチ
第７巻，１５１３頁（１９７９）〕に記載された方法で
単離し、該プラスミドでＥ．coli ＰＲ １３（前出）
をCohem,S.N.らの方法〔プロシーディングス・オブ・ザ
・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンス，ＵＳ
Ａ，第６９巻２１１０頁（１９７２年）〕により形質転
換し、得られた形質転換体を、それぞれ２００ml容三角
フラスコ内のバクト・トリプトン（デイフコ・ラボラト
リーズ，アメリカ）１％，バクト・イーストエキス（同
上）０．５％，食塩０．５％およびテトラサイクリン塩
酸塩５mg／を含む培地５０ml（pH７．０）に接種し、
３７℃で一夜培養した。一方修正Ｍ−９培地にビタミン
Ｂ１塩酸塩を１mg／添加した培地３０ml宛を含むくぼ
みつき200ml三角フラスコに上記種培養液を各々接種
し、３７℃で４時間，３０℃で４時間，２５℃で１０時
間培養を続け、ＩＬ−２生産性の特にすぐれたＥ．coli
Ｃ−４／pTF ４株を選択した。
かくして得たＥ．coliＣ−４／pTF ４を２５０ml容三角
フラスコ内のバクト−トリプトン（デイフコ・ラボラト
リーズ，アメリカ）１％，バクト・イーストエキス（同
上）０．５％，食塩０．５％およびテトラサイクリン塩
酸塩５mg／を含む培地５０ml（pH７．０）に接種し、
３７℃で一夜培養した。一方Ｍ−Ｏ３培地にビタミンＢ
１塩酸塩を１mg／添加した培地２．５宛を５容ジ
ャーフアーメンター８基に夫々仕込み滅菌後培地のpHを
夫々７．５，７．０，６．５，６．０，５．５，５．
０，４．８，４．５にアンモニア水または５Ｎ硫酸にて
調整した。これに種培養液１２５ml宛を接種し、アンモ
ニア水または５Ｎ硫酸にて上記所定のpHに調整しつつ、
通気量２．５／分，撹拌１３００rpm，３７℃で培養
した。培養途中グルコースが０．５％以下になった時、
１％グルコースと１％カザミノ酸を添加して１５時間培
養を続け第３表の結果を得た。即ちpH４．８〜６．０の
範囲で通常培養されるpH７．０に比べ生産性が２〜５倍
に増大した。
フラスコ内のバクト−トリプトン（デイフコ・ラボラト
リーズ，アメリカ）１％，バクト・イーストエキス（同
上）０．５％，食塩０．５％およびテトラサイクリン塩
酸塩５mg／を含む培地５０ml（pH７．０）に接種し、
３７℃で一夜培養した。一方Ｍ−Ｏ３培地にビタミンＢ
１塩酸塩を１mg／添加した培地２．５宛を５容ジ
ャーフアーメンター８基に夫々仕込み滅菌後培地のpHを
夫々７．５，７．０，６．５，６．０，５．５，５．
０，４．８，４．５にアンモニア水または５Ｎ硫酸にて
調整した。これに種培養液１２５ml宛を接種し、アンモ
ニア水または５Ｎ硫酸にて上記所定のpHに調整しつつ、
通気量２．５／分，撹拌１３００rpm，３７℃で培養
した。培養途中グルコースが０．５％以下になった時、
１％グルコースと１％カザミノ酸を添加して１５時間培
養を続け第３表の結果を得た。即ちpH４．８〜６．０の
範囲で通常培養されるpH７．０に比べ生産性が２〜５倍
に増大した。
実施例２ 実施例１と全く同様にpHの異なる８種類の培地を用意
し、培養温度のみを変えて２４時間通気撹拌培養した。
すなわち実施例２では３７℃で培養を開始し、生育が５
００クレット単位に達した時点で培養温度を３０℃に、
更に１０００クレット単位に達した時点で２５℃に下
げ、全体で２４時間培養を続け、第４表の結果を得た。
pH７．０，３７℃一定で培養した場合に比べpH４．８〜
６の範囲で生産性が ３〜７．５倍増大した。
し、培養温度のみを変えて２４時間通気撹拌培養した。
すなわち実施例２では３７℃で培養を開始し、生育が５
００クレット単位に達した時点で培養温度を３０℃に、
更に１０００クレット単位に達した時点で２５℃に下
げ、全体で２４時間培養を続け、第４表の結果を得た。
pH７．０，３７℃一定で培養した場合に比べpH４．８〜
６の範囲で生産性が ３〜７．５倍増大した。
実施例３ ヒトＩＬ−２構造遺伝子を組入れた発現プラスミドpTF
４（前出）でＥ．coli２９４株，ＤＥ１株，Ｗ３１１０
株，Ｃ６００株夫々を実施例１に記載の方法で形質転換
して得た形質転換体を、実施例１と同じ種培養培地に接
種し、３７℃で一夜培養した。一方Ｍ−９培地にビタミ
ンＢ１塩酸塩を１mg／添加した培地２．５宛を５
容ジヤーフアーメンター８基に仕込み、培地のpHを４基
は５．５に他の４基は６．５に調整した。夫々の形質転
換体の種菌１２５ml宛をpH５．５とpH６．５の両培地に
接種し、実施例２と同じ条件で培養し、第５表の結果を
得た。
４（前出）でＥ．coli２９４株，ＤＥ１株，Ｗ３１１０
株，Ｃ６００株夫々を実施例１に記載の方法で形質転換
して得た形質転換体を、実施例１と同じ種培養培地に接
種し、３７℃で一夜培養した。一方Ｍ−９培地にビタミ
ンＢ１塩酸塩を１mg／添加した培地２．５宛を５
容ジヤーフアーメンター８基に仕込み、培地のpHを４基
は５．５に他の４基は６．５に調整した。夫々の形質転
換体の種菌１２５ml宛をpH５．５とpH６．５の両培地に
接種し、実施例２と同じ条件で培養し、第５表の結果を
得た。
いずれの形質転換体に於てもpH５．５の方が２倍以上の
生産性を示した。
生産性を示した。
実施例４ 実施例１と全く同様にpHの異なる８種類の培地を用意
し、実施例２と同様な培養温度条件で培養をおこない、
５Ｎ NaOH 水溶液および５Ｎ H2SO4にて、所定のpH
に調整しつつ、２４時間培養を続け、第６表の結果を得
た。pH７．０で培養した場合に比べpH４．８〜６の範囲
で生産性が５〜７倍に増大した。
し、実施例２と同様な培養温度条件で培養をおこない、
５Ｎ NaOH 水溶液および５Ｎ H2SO4にて、所定のpH
に調整しつつ、２４時間培養を続け、第６表の結果を得
た。pH７．０で培養した場合に比べpH４．８〜６の範囲
で生産性が５〜７倍に増大した。
実施例５ 実施例２で得られたpH５．５および７．０の培養液をそ
れぞれ遠心分離して菌体を集め−８０℃で凍結した。夫
々の凍結菌体１２ｇ宛を７Ｍ塩酸グアニジン，０．１Ｍ
Tris・HClを含む抽出液（pH７．０）１００mlに均一に
懸濁し、４℃で１時間撹拌した。この溶菌液を２８，０
００×ｇで２０分間遠心分離して上澄液を得た。この上
清を０．０１ＭTris・HCl緩衝液（pH８．５）に対して
透析後１９．０００×ｇで１０分間遠心分離して透析上
清を得た。この透析上清を０．０１Ｍ Tris−HCl緩衝
液（pH８．５）で平衡化したＤＥ５２（ＤＥＡＥ−セル
ロース，ワットマン社製，イギリス）カラム（５０ml
容）に通して蛋白を吸着させ、NaCl濃度直線勾配（０〜
０．１５ＭNaCl，１）を作成してＩＬ−２を溶出させ
た。活性画分をＹＭ−５メンブラン（アミコン社製，ア
メリカ）を用いて約５mlに濃縮し、０．１ＭTris・HCl
（pH8.0）−１ＭNaCl緩衝液で平衡化したセファクリル
Ｓ−２００（ファルマシア社製，スエーデン）カラム
（５００ml容）を用いてゲル過を行った。活性画分を
ＹＭ−５メンプランで２．５mlに濃縮した。得られた濃
縮液をウルトラポアＲＰＳＣ（アルテックス社製，アメ
リカ）カラムに吸着させ、トリフルオロ酢酸−アセトニ
トリル系を溶出溶媒とする高速液体クロマトグラフィー
を行った。
れぞれ遠心分離して菌体を集め−８０℃で凍結した。夫
々の凍結菌体１２ｇ宛を７Ｍ塩酸グアニジン，０．１Ｍ
Tris・HClを含む抽出液（pH７．０）１００mlに均一に
懸濁し、４℃で１時間撹拌した。この溶菌液を２８，０
００×ｇで２０分間遠心分離して上澄液を得た。この上
清を０．０１ＭTris・HCl緩衝液（pH８．５）に対して
透析後１９．０００×ｇで１０分間遠心分離して透析上
清を得た。この透析上清を０．０１Ｍ Tris−HCl緩衝
液（pH８．５）で平衡化したＤＥ５２（ＤＥＡＥ−セル
ロース，ワットマン社製，イギリス）カラム（５０ml
容）に通して蛋白を吸着させ、NaCl濃度直線勾配（０〜
０．１５ＭNaCl，１）を作成してＩＬ−２を溶出させ
た。活性画分をＹＭ−５メンブラン（アミコン社製，ア
メリカ）を用いて約５mlに濃縮し、０．１ＭTris・HCl
（pH8.0）−１ＭNaCl緩衝液で平衡化したセファクリル
Ｓ−２００（ファルマシア社製，スエーデン）カラム
（５００ml容）を用いてゲル過を行った。活性画分を
ＹＭ−５メンプランで２．５mlに濃縮した。得られた濃
縮液をウルトラポアＲＰＳＣ（アルテックス社製，アメ
リカ）カラムに吸着させ、トリフルオロ酢酸−アセトニ
トリル系を溶出溶媒とする高速液体クロマトグラフィー
を行った。
カラム，ウルトラポアＲＰＳＣ（４．６×75mm）；カラ
ム温度，３０℃；溶出溶媒Ａ，０．１％トリフルオロ酢
酸−９９．９％水；溶出溶媒Ｂ，０．１％トリフルオロ
酢酸−９９．９％アセトニトリル；溶出プログラム，０
分（６８％Ａ＋３２％Ｂ）−25分（５５％Ａ＋４５％
Ｂ）−３５分（４５％Ａ＋５５％Ｂ）−４５分（３０％
Ａ＋７０％Ｂ）−48（１００％Ｂ）；溶出速度，０．８
ml／min；検出波長，２３０nm。本条件下で保持時間約
３９分の活性画分を集め、凍結乾燥に付し、ヒトＩＬ−
２蛋白質の白色粉末を得た。
ム温度，３０℃；溶出溶媒Ａ，０．１％トリフルオロ酢
酸−９９．９％水；溶出溶媒Ｂ，０．１％トリフルオロ
酢酸−９９．９％アセトニトリル；溶出プログラム，０
分（６８％Ａ＋３２％Ｂ）−25分（５５％Ａ＋４５％
Ｂ）−３５分（４５％Ａ＋５５％Ｂ）−４５分（３０％
Ａ＋７０％Ｂ）−48（１００％Ｂ）；溶出速度，０．８
ml／min；検出波長，２３０nm。本条件下で保持時間約
３９分の活性画分を集め、凍結乾燥に付し、ヒトＩＬ−
２蛋白質の白色粉末を得た。
pH７．０培養菌体からの収量は５．２mgであるのに対
し、pH５．５培養菌体からの収量は１２．７mgであっ
た。両者とも蛋白質の純度は９９％（デンシトメトリ−
による）でその蛋白化学的性質は全く同一であることが
確認された。
し、pH５．５培養菌体からの収量は１２．７mgであっ
た。両者とも蛋白質の純度は９９％（デンシトメトリ−
による）でその蛋白化学的性質は全く同一であることが
確認された。
参考例 実施例１で得られたエシエリヒア コリＣ−４／pTF−
４株から臭化エチジュウムを用いてBouanchaudらの方法
〔ジャーナル・オブ・ゼネラル・ミクロバイオロジー，
第５４巻，４１７頁（１９６８）〕によってプラスミド
のキュアリング（Curing）を行ないエシエリヒア コリ
Ｃ−４株を得た。
４株から臭化エチジュウムを用いてBouanchaudらの方法
〔ジャーナル・オブ・ゼネラル・ミクロバイオロジー，
第５４巻，４１７頁（１９６８）〕によってプラスミド
のキュアリング（Curing）を行ないエシエリヒア コリ
Ｃ−４株を得た。
効 果 ＩＬ−２生産能を有する大腸菌をpH４．８〜6.０に調整
した培地に接種し、当該pHを維持しつつ生育させること
により、ＩＬ−２の生産量が著しく向上する。
した培地に接種し、当該pHを維持しつつ生育させること
により、ＩＬ−２の生産量が著しく向上する。
第１図はヒトＩＬ−２のアミノ酸配列（図中、ＸはMet
または水素を表わす）を示す。 第２図はヒトＩＬ−２遺伝子のＤＮＡ配列の一例を示
す。
または水素を表わす）を示す。 第２図はヒトＩＬ−２遺伝子のＤＮＡ配列の一例を示
す。
Claims (1)
- 【請求項１】インターロイキン−２遺伝子およびその上
流にトリプトファンプロモーターを有する発現プラスミ
ドを保持する大腸菌の培養によりインターロイキン−２
を製造する方法において、当該大腸菌をｐＨ４．８〜
６．０に調整した培地に接種し、当該ｐＨを維持しつつ
生育させることを特徴とするインターロイキン−２の製
造方法。
Priority Applications (8)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60048698A JPH0646957B2 (ja) | 1985-03-11 | 1985-03-11 | インタ−ロイキン−２の製造方法 |
| IL78074A IL78074A0 (en) | 1985-03-11 | 1986-03-07 | Production of interleukin-2 |
| DK104986A DK104986A (da) | 1985-03-11 | 1986-03-07 | Fremgangsmaade til fremstilling af interleukin-2 |
| EP86301626A EP0194818A3 (en) | 1985-03-11 | 1986-03-07 | Production of interleukin-2 |
| CN86101353A CN1006903B (zh) | 1985-03-11 | 1986-03-10 | 白细胞介素-2的生产方法 |
| KR1019860001667A KR930002737B1 (ko) | 1985-03-11 | 1986-03-10 | 인터로이킨-2의 제조방법 |
| ES552846A ES8705041A1 (es) | 1985-03-11 | 1986-03-10 | Un metodo para producir interleuquina-2 |
| US07/302,064 US4935356A (en) | 1985-03-11 | 1989-01-24 | Production of interleukin-2 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60048698A JPH0646957B2 (ja) | 1985-03-11 | 1985-03-11 | インタ−ロイキン−２の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61205497A JPS61205497A (ja) | 1986-09-11 |
| JPH0646957B2 true JPH0646957B2 (ja) | 1994-06-22 |
Family
ID=12810526
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60048698A Expired - Lifetime JPH0646957B2 (ja) | 1985-03-11 | 1985-03-11 | インタ−ロイキン−２の製造方法 |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4935356A (ja) |
| EP (1) | EP0194818A3 (ja) |
| JP (1) | JPH0646957B2 (ja) |
| KR (1) | KR930002737B1 (ja) |
| CN (1) | CN1006903B (ja) |
| DK (1) | DK104986A (ja) |
| ES (1) | ES8705041A1 (ja) |
| IL (1) | IL78074A0 (ja) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3712985A1 (de) * | 1987-04-16 | 1988-11-03 | Hoechst Ag | Bifunktionelle proteine |
| SU1703693A1 (ru) * | 1987-02-09 | 1992-01-07 | Всесоюзный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов | Рекомбинантна плазмидна ДНК @ - @ 2-19, кодирующа синтез интерлейкина-2 человека, способ ее конструировани @ штамм бактерий ЕSснеRIснIа coLI - продуцент интерлейкина-2 человека |
| WO1991005052A1 (en) * | 1989-09-28 | 1991-04-18 | Leningradsky Gosudarstvenny Universitet | Method for obtaining a polypeptide with human-interleukin-2 activity, secreted by yeast cells, saccharomyces cerevisiae |
| WO1991005051A1 (en) * | 1989-09-28 | 1991-04-18 | Leningradsky Gosudarstvenny Universitet | Method of obtaining human-interleukin-2 polypeptide in yeast cells |
| JP6363326B2 (ja) * | 2013-03-11 | 2018-07-25 | 株式会社コーセー | 酵母・細菌共通培養方法およびこれに用いる酵母・細菌共通培養培地 |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS49126882A (ja) * | 1973-04-19 | 1974-12-04 | ||
| JPS5685289A (en) * | 1979-12-13 | 1981-07-11 | Ajinomoto Co Inc | Preparation of l-valine by fermentation |
| US4357422A (en) * | 1980-08-14 | 1982-11-02 | Massachusetts Institute Of Technology | Method of enhancing interferon production |
| CA1341562C (en) * | 1982-03-31 | 2007-11-27 | Tadatsugu Taniguchi | Gene coded for interleukin-2 polypeptide, recombinant dna carrying the said gene, a living cell line possessing the recombinant dna, and method for producing interleukin-2 using the said cell |
| JPS59140898A (ja) * | 1982-12-27 | 1984-08-13 | Japan Found Cancer | インタ−ロイキン−２の製造法 |
| DE3377363D1 (en) * | 1982-03-31 | 1988-08-18 | Ajinomoto Kk | Gene coding for interleukin-2 polypeptide, recombinant dna carrying said gene, cell lines possessing the recombinant dna,and method for producing interleukin-2 using said cells |
| US4499188A (en) * | 1982-05-05 | 1985-02-12 | Cetus Corporation | Bacterial production of heterologous polypeptides under the control of a repressible promoter-operator |
| JPS60115528A (ja) * | 1983-11-28 | 1985-06-22 | Takeda Chem Ind Ltd | ヒトインタ―ロイキン―２蛋白質を含有する抗腫瘍用または免疫機能低下疾患治療用組成物 |
| US4569790A (en) * | 1984-03-28 | 1986-02-11 | Cetus Corporation | Process for recovering microbially produced interleukin-2 and purified recombinant interleukin-2 compositions |
-
1985
- 1985-03-11 JP JP60048698A patent/JPH0646957B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1986
- 1986-03-07 IL IL78074A patent/IL78074A0/xx unknown
- 1986-03-07 EP EP86301626A patent/EP0194818A3/en not_active Withdrawn
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