JPH0646880A - モノクロ−ナル抗体およびその製造方法 - Google Patents
モノクロ−ナル抗体およびその製造方法Info
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- JPH0646880A JPH0646880A JP4219666A JP21966692A JPH0646880A JP H0646880 A JPH0646880 A JP H0646880A JP 4219666 A JP4219666 A JP 4219666A JP 21966692 A JP21966692 A JP 21966692A JP H0646880 A JPH0646880 A JP H0646880A
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- monoclonal antibody
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- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】疾病との関連が考えられる糖脂質誘導体を特異
的に認識するモノクローナル抗体を得る。 【構成】式（Ｆ４ａ） Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→６（Ｇａｌβ１→
３）ＧａｌＮＡｃα１→１Ｃｅｒ
（Ｆ４ａ） で示される糖脂質誘導体を特異的に認識するモノクロー
ナル抗体、その製造法、ハイブリドーマ、医薬品組成
物。
的に認識するモノクローナル抗体を得る。 【構成】式（Ｆ４ａ） Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→６（Ｇａｌβ１→
３）ＧａｌＮＡｃα１→１Ｃｅｒ
（Ｆ４ａ） で示される糖脂質誘導体を特異的に認識するモノクロー
ナル抗体、その製造法、ハイブリドーマ、医薬品組成
物。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は糖脂質誘導体を認識する
モノクローナル抗体、その製造方法、該モノクローナル
抗体を産生するハイブリドーマ、および医薬品組成物に
関するものである。
モノクローナル抗体、その製造方法、該モノクローナル
抗体を産生するハイブリドーマ、および医薬品組成物に
関するものである。
【０００２】
【従来の技術】細胞表面の糖鎖は、細胞が癌化するとそ
の構造が変化することが知られており、癌関連抗原とし
て注目されている（Ｓ．Ｈａｋｏｍｏｒｉら、Ｊ．Ｎａ
ｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．７１，ｐ２３１，１９
８３年参照）。従って、細胞が癌化することにより特異
的に出現する糖鎖抗原のうち、血清中に分泌されるもの
を主に認識する抗体は血清診断に用いられ、癌組織を主
に認識する抗体は、治療用抗体として期待されている。
の構造が変化することが知られており、癌関連抗原とし
て注目されている（Ｓ．Ｈａｋｏｍｏｒｉら、Ｊ．Ｎａ
ｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．７１，ｐ２３１，１９
８３年参照）。従って、細胞が癌化することにより特異
的に出現する糖鎖抗原のうち、血清中に分泌されるもの
を主に認識する抗体は血清診断に用いられ、癌組織を主
に認識する抗体は、治療用抗体として期待されている。
【０００３】前者の例として、大腸癌に出現するＣＡ１
９−９抗原を認識する抗体（Ｋｏｐｒｏｗｓｋｉらｓｃ
ｉｅｎｃｅ，２１２，ｐ５３，１９８１年参照），後者
の例として、すい臓癌を特異的に認識する抗体Ｎｄ２
（Ｈｏら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５１，ｐ３７２，１
９９１年参照）が例示される。
９−９抗原を認識する抗体（Ｋｏｐｒｏｗｓｋｉらｓｃ
ｉｅｎｃｅ，２１２，ｐ５３，１９８１年参照），後者
の例として、すい臓癌を特異的に認識する抗体Ｎｄ２
（Ｈｏら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５１，ｐ３７２，１
９９１年参照）が例示される。
【０００４】この様な糖鎖抗原のうち、ムチン型糖蛋白
質糖鎖は、糖脂質の糖鎖には見られないユニークな構造
を持っていることが知られており、癌関連抗原として有
用である。代表的なムチン型糖蛋白質糖鎖としてＴ抗原
（ＲａｈｍａｎらＪ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１２９，
ｐ２０２１，１９８２年参照）、Ｔｎ抗原（Ｈｉｒｏｈ
ａｓｈｉらＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．
Ｕ．Ｓ．Ａ．，８２，ｐ７０３９，１９８５年参照）、
ｓｉａｌｙｌ Ｔｎ抗原（ＮｕｔｉらＩｎｔ．Ｊ． Ｃ
ａｎｃｅｒ，２９，ｐ５３９，１９８２年参照）が例示
される。
質糖鎖は、糖脂質の糖鎖には見られないユニークな構造
を持っていることが知られており、癌関連抗原として有
用である。代表的なムチン型糖蛋白質糖鎖としてＴ抗原
（ＲａｈｍａｎらＪ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１２９，
ｐ２０２１，１９８２年参照）、Ｔｎ抗原（Ｈｉｒｏｈ
ａｓｈｉらＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．
Ｕ．Ｓ．Ａ．，８２，ｐ７０３９，１９８５年参照）、
ｓｉａｌｙｌ Ｔｎ抗原（ＮｕｔｉらＩｎｔ．Ｊ． Ｃ
ａｎｃｅｒ，２９，ｐ５３９，１９８２年参照）が例示
される。
【０００５】これまではいずれも癌細胞そのもの、また
は癌細胞から抽出した種々のムチン型糖蛋白質の混合物
の粗精製標品をマウス等に免疫しているので、目的とす
るムチン型糖蛋白質の糖鎖部分に対する抗体を作製する
のが非常に困難である。また、作製した抗体が認識する
抗原の構造を特定するのが難しい。
は癌細胞から抽出した種々のムチン型糖蛋白質の混合物
の粗精製標品をマウス等に免疫しているので、目的とす
るムチン型糖蛋白質の糖鎖部分に対する抗体を作製する
のが非常に困難である。また、作製した抗体が認識する
抗原の構造を特定するのが難しい。
【０００６】一方、本発明者らはムチン型糖蛋白質の糖
鎖部分とセラミドが結合した糖脂質を合成し、これをマ
ウス等に免疫し、ムチン型糖蛋白質の糖鎖部分を認識す
る抗体を作製した（特開平３−２８０８９４）。しかし
ながら、癌などの疾病と関連のあるムチン型糖蛋白質に
はまだ多くの種類があり、それらに対するモノクローナ
ル抗体を用いた研究が必要とされている。
鎖部分とセラミドが結合した糖脂質を合成し、これをマ
ウス等に免疫し、ムチン型糖蛋白質の糖鎖部分を認識す
る抗体を作製した（特開平３−２８０８９４）。しかし
ながら、癌などの疾病と関連のあるムチン型糖蛋白質に
はまだ多くの種類があり、それらに対するモノクローナ
ル抗体を用いた研究が必要とされている。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】癌関連ムチン型糖鎖の
一種としてその存在が考えられる式（Ｆ４ａ´） Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→６（Ｇａｌβ１→３）ＧａｌＮＡｃ （Ｆ４ａ´） を特異的に認識する抗体は報告されておらず、本発明
は、その様な糖鎖に反応性を有するモノクローナル抗体
を提供することを目的とする。
一種としてその存在が考えられる式（Ｆ４ａ´） Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→６（Ｇａｌβ１→３）ＧａｌＮＡｃ （Ｆ４ａ´） を特異的に認識する抗体は報告されておらず、本発明
は、その様な糖鎖に反応性を有するモノクローナル抗体
を提供することを目的とする。
【０００８】
【課題を解決するための手段】以上のような状態に鑑み
て本発明者らは鋭意研究を行った結果、本発明に到達し
た。即ち本発明は、式（Ｆ４ａ） Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→６（Ｇａｌβ１→３）ＧａｌＮＡｃα１ →１Ｃｅｒ （Ｆ４ａ） で表わされる糖脂質誘導体を認識するモノクローナル抗
体である。また本発明は、該モノクロ−ナル抗体を産生
するハイブリド−マである。さらに本発明は該ハイブリ
ド−マを培養し、培養上清よりモノクローナル抗体を回
収することを特徴とする、モノクロ−ナル抗体の製造方
法である。一方、本発明は該モノクロ−ナル抗体を有効
成分として含有することを特徴とする、医薬品組成物で
ある。以下本発明を詳細に説明する。
て本発明者らは鋭意研究を行った結果、本発明に到達し
た。即ち本発明は、式（Ｆ４ａ） Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→６（Ｇａｌβ１→３）ＧａｌＮＡｃα１ →１Ｃｅｒ （Ｆ４ａ） で表わされる糖脂質誘導体を認識するモノクローナル抗
体である。また本発明は、該モノクロ−ナル抗体を産生
するハイブリド−マである。さらに本発明は該ハイブリ
ド−マを培養し、培養上清よりモノクローナル抗体を回
収することを特徴とする、モノクロ−ナル抗体の製造方
法である。一方、本発明は該モノクロ−ナル抗体を有効
成分として含有することを特徴とする、医薬品組成物で
ある。以下本発明を詳細に説明する。
【０００９】本発明のモノクローナル抗体は、式（Ｆ４
ａ） Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→６（Ｇａｌβ１→３）ＧａｌＮＡｃα１ →１Ｃｅｒ （Ｆ４ａ） で表される糖脂質誘導体を認識する。式（１）の糖脂質
誘導体は、本発明者らによる特願平３−１６７５００に
記載の方法に従い、合成することができる。本発明の抗
体は、式（１）の糖鎖だけでなく、該糖鎖の一部が欠
失、付加、あるいは置換したものをさらに認識してもよ
い。
ａ） Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→６（Ｇａｌβ１→３）ＧａｌＮＡｃα１ →１Ｃｅｒ （Ｆ４ａ） で表される糖脂質誘導体を認識する。式（１）の糖脂質
誘導体は、本発明者らによる特願平３−１６７５００に
記載の方法に従い、合成することができる。本発明の抗
体は、式（１）の糖鎖だけでなく、該糖鎖の一部が欠
失、付加、あるいは置換したものをさらに認識してもよ
い。
【００１０】本発明のモノクローナル抗体は、ケーラー
（Ｋｏｈｌｅｒ Ｇ．）らの方法（Ｎａｔｕｒｅ ２５
６，４９５−４９７（１９７５））に従い、該糖脂質を
動物に投与して免疫し、脾臓細胞を取り出し、これを樹
立されたミエローマ細胞と融合させて取得したハイブリ
ドーマにより生産させればよい。
（Ｋｏｈｌｅｒ Ｇ．）らの方法（Ｎａｔｕｒｅ ２５
６，４９５−４９７（１９７５））に従い、該糖脂質を
動物に投与して免疫し、脾臓細胞を取り出し、これを樹
立されたミエローマ細胞と融合させて取得したハイブリ
ドーマにより生産させればよい。
【００１１】免疫の際、免疫増強剤（アジュバント）と
して不完全アジュバントまたは完全アジュバントのいず
れも使用でき、例えば油、乳化剤、結核死菌、サルモネ
ラ死菌およびこれらの混合物などが用いられる。免疫用
動物としては、ヒト、ウサギ、マウス、ラットなどほと
んどの動物が使用できるが、好ましくはマウス、より好
ましくはＢＡＬＢ／ｃ系マウスである。マウスの飼育お
よび、脾臓細胞の採取は常法に従う。
して不完全アジュバントまたは完全アジュバントのいず
れも使用でき、例えば油、乳化剤、結核死菌、サルモネ
ラ死菌およびこれらの混合物などが用いられる。免疫用
動物としては、ヒト、ウサギ、マウス、ラットなどほと
んどの動物が使用できるが、好ましくはマウス、より好
ましくはＢＡＬＢ／ｃ系マウスである。マウスの飼育お
よび、脾臓細胞の採取は常法に従う。
【００１２】一方、ミエローマ細胞としては、ヒト、ウ
サギ、マウス、ラット等ほとんどの動物のミエローマ細
胞が使用できるが、好ましくは、ＢＡＬＢ／ｃ系マウス
由来のＳＰ２／０−Ａｇ８が用いられる。細胞融合の際
に用いる融合剤としては、ポリエチレングリコール等が
使用できる。
サギ、マウス、ラット等ほとんどの動物のミエローマ細
胞が使用できるが、好ましくは、ＢＡＬＢ／ｃ系マウス
由来のＳＰ２／０−Ａｇ８が用いられる。細胞融合の際
に用いる融合剤としては、ポリエチレングリコール等が
使用できる。
【００１３】融合細胞（ハイブリドーマ）の選択は、免
疫処置に用いた糖脂質と反応する培養上清を産生する細
胞をスクリ−ニングする。この際、９６穴プレ−トであ
れば１０プレ−ト以上をスクリ−ニングするのが好まし
い。また、少量の抗体しか産生しないクロ−ンを見逃さ
ないように、注意を払う必要がある。次いでハイブリド
−マのクローン化は、限界希釈法、メチルセルロース
法、軟アガロース法などにて行う。
疫処置に用いた糖脂質と反応する培養上清を産生する細
胞をスクリ−ニングする。この際、９６穴プレ−トであ
れば１０プレ−ト以上をスクリ−ニングするのが好まし
い。また、少量の抗体しか産生しないクロ−ンを見逃さ
ないように、注意を払う必要がある。次いでハイブリド
−マのクローン化は、限界希釈法、メチルセルロース
法、軟アガロース法などにて行う。
【００１４】この様にしてクローン化されたハイブリド
ーマを培養し、培養上清からモノクローナル抗体を回収
すればよい。具体的には、ハイブリドーマを通常の動物
細胞の培養と同様にして培養し、培地中に生産された抗
体を回収すればよい。またマウス等にハイブリド−マを
移植し、腹水中にモノクロ−ナル抗体を生産させ、回収
してもよい。回収されたモノクローナル抗体の精製に
は、硫安沈殿、塩析等の通常の方法を用いればよい。
ーマを培養し、培養上清からモノクローナル抗体を回収
すればよい。具体的には、ハイブリドーマを通常の動物
細胞の培養と同様にして培養し、培地中に生産された抗
体を回収すればよい。またマウス等にハイブリド−マを
移植し、腹水中にモノクロ−ナル抗体を生産させ、回収
してもよい。回収されたモノクローナル抗体の精製に
は、硫安沈殿、塩析等の通常の方法を用いればよい。
【００１５】このように樹立される本発明のハイブリド
−マとしては、例えば、ハイブリドーマＦ４α３Ｄ８、
ハイブリドーマＦ４α３Ｆ１０、ハイブリドーマＦ４α
３Ｅ５、ハイブリドーマＦ４α２Ｆ１１、ハイブリドー
マＦ４αＭＳ１、ハイブリドーマＦ４αＭＳ２、ハイブ
リドーマＦ４αＭＳ３、ハイブリドーマＦ４αＭＳ４な
どがあげられる。また、本発明のモノクローナル抗体と
しては、以上述べたハイブリドーマからそれぞれ得られ
るＦ４α３Ｄ８抗体、Ｆ４α３Ｆ１０抗体、Ｆ４α３Ｅ
５抗体、Ｆ４α２Ｆ１１抗体、Ｆ４αＭＳ１抗体、Ｆ４
αＭＳ２抗体、Ｆ４αＭＳ３抗体、Ｆ４αＭＳ４抗体な
どが例示できる。
−マとしては、例えば、ハイブリドーマＦ４α３Ｄ８、
ハイブリドーマＦ４α３Ｆ１０、ハイブリドーマＦ４α
３Ｅ５、ハイブリドーマＦ４α２Ｆ１１、ハイブリドー
マＦ４αＭＳ１、ハイブリドーマＦ４αＭＳ２、ハイブ
リドーマＦ４αＭＳ３、ハイブリドーマＦ４αＭＳ４な
どがあげられる。また、本発明のモノクローナル抗体と
しては、以上述べたハイブリドーマからそれぞれ得られ
るＦ４α３Ｄ８抗体、Ｆ４α３Ｆ１０抗体、Ｆ４α３Ｅ
５抗体、Ｆ４α２Ｆ１１抗体、Ｆ４αＭＳ１抗体、Ｆ４
αＭＳ２抗体、Ｆ４αＭＳ３抗体、Ｆ４αＭＳ４抗体な
どが例示できる。
【００１６】本発明で得られるモノクロ−ナル抗体の性
質については、すでに報告されている種々の方法によっ
て調べればよい。また抗体の性質として、ある種の癌細
胞を特異的に認識するかどうかについては、これらの抗
体を用いて種々の組織を染色することにより調べること
ができる。また、ある種の癌患者の血清中に特異的に存
在しているかどうかについては、これらの抗体を用いて
種々の癌患者の血清を酵素免疫法（ＥＬＩＳＡ）等で測
定することにより調べることができる。
質については、すでに報告されている種々の方法によっ
て調べればよい。また抗体の性質として、ある種の癌細
胞を特異的に認識するかどうかについては、これらの抗
体を用いて種々の組織を染色することにより調べること
ができる。また、ある種の癌患者の血清中に特異的に存
在しているかどうかについては、これらの抗体を用いて
種々の癌患者の血清を酵素免疫法（ＥＬＩＳＡ）等で測
定することにより調べることができる。
【００１７】例えば本発明のモノクロ−ナル抗体のそれ
ぞれの性質については、例えばＦ４α３Ｄ８抗体、Ｆ４
α３Ｆ１０抗体、Ｆ４α３Ｅ５抗体、及びＦ４α２Ｆ１
１抗体は、特にＧａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→６分
枝糖鎖にも特異性を有していることがわかった。また、
Ｆ４αＭＳ１抗体、Ｆ４αＭＳ２抗体、Ｆ４αＭＳ３抗
体は、Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→６（Ｇａｌβ
１→３）ＧａｌＮＡｃという糖鎖構造を特に認識するこ
とが分かった。
ぞれの性質については、例えばＦ４α３Ｄ８抗体、Ｆ４
α３Ｆ１０抗体、Ｆ４α３Ｅ５抗体、及びＦ４α２Ｆ１
１抗体は、特にＧａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→６分
枝糖鎖にも特異性を有していることがわかった。また、
Ｆ４αＭＳ１抗体、Ｆ４αＭＳ２抗体、Ｆ４αＭＳ３抗
体は、Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→６（Ｇａｌβ
１→３）ＧａｌＮＡｃという糖鎖構造を特に認識するこ
とが分かった。
【００１８】本発明のモノクロ−ナル抗体は、それを有
効成分として含有する医薬品組成物として利用すること
ができる。医薬品組成物としては、診断薬、治療薬など
が例示できる。対象疾患は、本発明のモノクロ−ナル抗
体の性質を前記方法で解析することにより決めることが
できる。本発明のモノクローナル抗体は、特に癌の診
断、治療への応用が期待される。
効成分として含有する医薬品組成物として利用すること
ができる。医薬品組成物としては、診断薬、治療薬など
が例示できる。対象疾患は、本発明のモノクロ−ナル抗
体の性質を前記方法で解析することにより決めることが
できる。本発明のモノクローナル抗体は、特に癌の診
断、治療への応用が期待される。
【００１９】
【実施例】以下に本発明をさらに詳細に説明するために
実施例を記載するが、本発明はこれら実施例にのみ限定
されるものではない。
実施例を記載するが、本発明はこれら実施例にのみ限定
されるものではない。
【００２０】実施例１ ムチン型糖脂質の調製 式（Ｆ１ａ），（Ｆ１ｂ） Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→６ＧａｌＮＡｃα１→１Ｃｅｒ （Ｆ１ａ） Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→６ＧａｌＮＡｃβ１→１Ｃｅｒ （Ｆ１ｂ） で表される糖脂質は、特開平３−２５１５９４記載の方
法によって得た。
法によって得た。
【００２１】 式（Ｆ３ａ），（Ｆ３ｂ） Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→３ＧａｌＮＡｃα１→１Ｃｅｒ （Ｆ３ａ） Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→３ＧａｌＮＡｃβ１→１Ｃｅｒ （Ｆ３ｂ） で表される糖脂質は、特開平３−２７５６９４記載の方
法によって得た。
法によって得た。
【００２２】 式（Ｆ３６ａ），（Ｆ３６ｂ） Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→６（Ｇａｌβ１ →４ＧｌｃＮＡｃβ１→３）ＧａｌＮＡｃα１→１Ｃｅｒ （Ｆ３６ａ） Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→６（Ｇａｌβ１ →４ＧｌｃＮＡｃβ１→３）ＧａｌＮＡｃβ１→１Ｃｅｒ （Ｆ３６ｂ） で表される糖脂質は、特願平３−４８６２７記載の方法
によって得た。
によって得た。
【００２３】 式（Ｆ２ａ），（Ｆ２ｂ） Ｇａｌβ１→３ＧａｌＮＡｃα１→１Ｃｅｒ （Ｆ２ａ） Ｇａｌβ１→３ＧａｌＮＡｃβ１→１Ｃｅｒ （Ｆ２ｂ） で表される糖脂質は、特開平３−２７９３９４記載の方
法によって得た。
法によって得た。
【００２４】 式（Ｆ４ａ），（Ｆ４ｂ） Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→６（Ｇａｌβ１ →３）ＧａｌＮＡｃα１→１Ｃｅｒ （Ｆ４ａ） Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→６（Ｇａｌβ１ →３）ＧａｌＮＡｃβ１→１Ｃｅｒ （Ｆ４ｂ） で表される糖脂質は、特願平３−１６７５００記載の方
法によって得た。 モノクローナル抗体作製手順 で得た式（Ｆ４ａ）の糖脂質をＳａｌｍｏｎｅｌｌａ
Ｍｉｎｎｅｓｏｔａの死菌に吸着させ、ＢＡＬＢ／ｃ
マウスの反復腹腔内免疫処置に用いた。免疫処置プロト
コルは第０日８μｇ、第７日１６μｇ、第１４日２３μ
ｇ、最終二次免疫第２８日２３μｇであった。３日後、
脾臓細胞を回収し、融合剤としてポリエチレングリコー
ルを用いてマウス骨髄腫ＳＰ２／０−Ａｇ８と融合させ
た。詳細な手順は、ケーラー（Ｋｏｈｌｅｒ，Ｇ．）ほ
か、ネイチャー（Nature) 、２５６、４５９−４９７、
１９７５年に従った。
法によって得た。 モノクローナル抗体作製手順 で得た式（Ｆ４ａ）の糖脂質をＳａｌｍｏｎｅｌｌａ
Ｍｉｎｎｅｓｏｔａの死菌に吸着させ、ＢＡＬＢ／ｃ
マウスの反復腹腔内免疫処置に用いた。免疫処置プロト
コルは第０日８μｇ、第７日１６μｇ、第１４日２３μ
ｇ、最終二次免疫第２８日２３μｇであった。３日後、
脾臓細胞を回収し、融合剤としてポリエチレングリコー
ルを用いてマウス骨髄腫ＳＰ２／０−Ａｇ８と融合させ
た。詳細な手順は、ケーラー（Ｋｏｈｌｅｒ，Ｇ．）ほ
か、ネイチャー（Nature) 、２５６、４５９−４９７、
１９７５年に従った。
【００２５】式（Ｆ４ａ）の糖脂質を、スクリーニング
時の培養上清の固相酵素免疫検定における抗原として用
いた。９６穴プレートを１０プレートスクリーニング
し、限界希釈法によりクローニングして、式（Ｆ４ａ）
の糖脂質と反応性の８つのクローン、即ちハイブリドー
マＦ４α３Ｄ８、Ｆ４α３Ｆ１０、Ｆ４α３Ｅ５、Ｆ４
α２Ｆ１１、Ｆ４αＭＳ１、Ｆ４αＭＳ２、Ｆ４αＭＳ
３、Ｆ４αＭＳ４を選択した。これらのクローンはすべ
て、ＩｇＭ抗体を分泌していた。
時の培養上清の固相酵素免疫検定における抗原として用
いた。９６穴プレートを１０プレートスクリーニング
し、限界希釈法によりクローニングして、式（Ｆ４ａ）
の糖脂質と反応性の８つのクローン、即ちハイブリドー
マＦ４α３Ｄ８、Ｆ４α３Ｆ１０、Ｆ４α３Ｅ５、Ｆ４
α２Ｆ１１、Ｆ４αＭＳ１、Ｆ４αＭＳ２、Ｆ４αＭＳ
３、Ｆ４αＭＳ４を選択した。これらのクローンはすべ
て、ＩｇＭ抗体を分泌していた。
【００２６】これらのハイブリドーマをマウスに移植
し、腹水中に産生されたモノクローナル抗体を回収し、
硫安沈殿、塩析などにより精製した。 モノクローナル抗体と種々の糖脂質との反応性の評価 で得られた８種のモノクロ−ナル抗体と種々の糖脂質
との反応性を評価するため、固相酵素免疫検定を行っ
た。
し、腹水中に産生されたモノクローナル抗体を回収し、
硫安沈殿、塩析などにより精製した。 モノクローナル抗体と種々の糖脂質との反応性の評価 で得られた８種のモノクロ−ナル抗体と種々の糖脂質
との反応性を評価するため、固相酵素免疫検定を行っ
た。
【００２７】固相酵素免疫検定は９６穴プレ−トに式
（Ｆ１ａ），（Ｆ１ｂ），（Ｆ３ａ），（Ｆ３ｂ），
（Ｆ３６ａ），（Ｆ３６ｂ），（Ｆ２ａ），（Ｆ２
ｂ），（Ｆ４ａ），（Ｆ４ｂ）の糖脂質抗原を固定化
し、希釈倍率１〜３−６の濃度ので得た８種の抗体を
反応させた後、未反応の抗体を除去し、ペルオキシダー
ゼ結合ヤギ抗マウスＩｇＧ（重鎖および軽鎖結合性）お
よび抗マウスＩｇＭ（μ鎖結合性）を用いて、ハコモリ
ほか（Ｈａｋｏｍｏｒｉ，Ｓ．ａｎｄ Ｋａｎｎａｇ
ｉ，Ｒ．）により「実験免疫学ハンドブック（Ｈａｎｄ
ｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕ
ｎｏｌｏｇｙ）１巻」、ウェアほかブラックエル・サイ
エンティフィック・パブリッシング社（Ｂｌａｃｋｗｅ
ｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂ．Ｉｎｃ．Ｂｏｓ
ｔｏｎ），１９８６年に記載された標準法により行っ
た。またカンナギほか（Ｋａｎｎａｇｉ．Ｒ，）、ジャ
ーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ．Ｂ
ｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）２５８，８９３４−８９４２，１
９８３年に記載の方法も参照した。
（Ｆ１ａ），（Ｆ１ｂ），（Ｆ３ａ），（Ｆ３ｂ），
（Ｆ３６ａ），（Ｆ３６ｂ），（Ｆ２ａ），（Ｆ２
ｂ），（Ｆ４ａ），（Ｆ４ｂ）の糖脂質抗原を固定化
し、希釈倍率１〜３−６の濃度ので得た８種の抗体を
反応させた後、未反応の抗体を除去し、ペルオキシダー
ゼ結合ヤギ抗マウスＩｇＧ（重鎖および軽鎖結合性）お
よび抗マウスＩｇＭ（μ鎖結合性）を用いて、ハコモリ
ほか（Ｈａｋｏｍｏｒｉ，Ｓ．ａｎｄ Ｋａｎｎａｇ
ｉ，Ｒ．）により「実験免疫学ハンドブック（Ｈａｎｄ
ｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕ
ｎｏｌｏｇｙ）１巻」、ウェアほかブラックエル・サイ
エンティフィック・パブリッシング社（Ｂｌａｃｋｗｅ
ｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂ．Ｉｎｃ．Ｂｏｓ
ｔｏｎ），１９８６年に記載された標準法により行っ
た。またカンナギほか（Ｋａｎｎａｇｉ．Ｒ，）、ジャ
ーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ．Ｂ
ｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）２５８，８９３４−８９４２，１
９８３年に記載の方法も参照した。
【００２８】各抗体の各種糖脂質との反応性の結果を図
１〜図１６に示す。図中、横軸は希釈倍率、縦軸は吸光
度を表す。図から明らかなように、Ｆ４α３Ｄ８抗体、
Ｆ４α３Ｆ１０抗体、Ｆ４α３Ｅ５抗体、Ｆ４α２Ｆ１
１、Ｆ４αＭＳ１抗体、Ｆ４αＭＳ２抗体、Ｆ４αＭＳ
３抗体、およびＦ４αＭＳ４抗体は、免疫原である式
（Ｆ４ａ）の糖脂質を認識することが分かった。この
内、Ｆ４α３Ｄ８抗体、Ｆ４α３Ｆ１０抗体、Ｆ４α３
Ｅ５抗体、及びＦ４α２Ｆ１１抗体は、特にＧａｌβ１
→４ＧｌｃＮＡｃβ１→６分枝糖鎖にも特異性を有して
いることがわかった。また、Ｆ４αＭＳ１抗体、Ｆ４α
ＭＳ２抗体、Ｆ４αＭＳ３抗体は、 Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→６（Ｇａｌβ１→
３）ＧａｌＮＡｃ という糖鎖構造を特に認識することが分かった。
１〜図１６に示す。図中、横軸は希釈倍率、縦軸は吸光
度を表す。図から明らかなように、Ｆ４α３Ｄ８抗体、
Ｆ４α３Ｆ１０抗体、Ｆ４α３Ｅ５抗体、Ｆ４α２Ｆ１
１、Ｆ４αＭＳ１抗体、Ｆ４αＭＳ２抗体、Ｆ４αＭＳ
３抗体、およびＦ４αＭＳ４抗体は、免疫原である式
（Ｆ４ａ）の糖脂質を認識することが分かった。この
内、Ｆ４α３Ｄ８抗体、Ｆ４α３Ｆ１０抗体、Ｆ４α３
Ｅ５抗体、及びＦ４α２Ｆ１１抗体は、特にＧａｌβ１
→４ＧｌｃＮＡｃβ１→６分枝糖鎖にも特異性を有して
いることがわかった。また、Ｆ４αＭＳ１抗体、Ｆ４α
ＭＳ２抗体、Ｆ４αＭＳ３抗体は、 Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→６（Ｇａｌβ１→
３）ＧａｌＮＡｃ という糖鎖構造を特に認識することが分かった。
【００２９】
【発明の効果】本発明によるモノクローナル抗体は、式
（Ｆ４ａ） Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→６（Ｇａｌβ１ →３）ＧａｌＮＡｃα１→１Ｃｅｒ （Ｆ４ａ） の糖脂質を認識し、新規の血清診断薬や体内診断薬、治
療薬として期待できる。さらには、個体発生や細胞接着
の研究材料として用いることも期待できる。このような
モノクローナル抗体は式（Ｆ４ａ）の糖脂質を免疫原と
して得た本発明のハイブリドーマを培養することにより
得ることができる。
（Ｆ４ａ） Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→６（Ｇａｌβ１ →３）ＧａｌＮＡｃα１→１Ｃｅｒ （Ｆ４ａ） の糖脂質を認識し、新規の血清診断薬や体内診断薬、治
療薬として期待できる。さらには、個体発生や細胞接着
の研究材料として用いることも期待できる。このような
モノクローナル抗体は式（Ｆ４ａ）の糖脂質を免疫原と
して得た本発明のハイブリドーマを培養することにより
得ることができる。
【図１】実施例により確認された、Ｆ４α２Ｆ１１抗体
の特異性を示す図である。
の特異性を示す図である。
【図２】実施例により確認された、Ｆ４α２Ｆ１１抗体
の特異性を示す図である。
の特異性を示す図である。
【図３】実施例により確認された、Ｆ４α３Ｄ８抗体の
特異性を示す図である。
特異性を示す図である。
【図４】実施例により確認された、Ｆ４α３Ｄ８抗体の
特異性を示す図である。
特異性を示す図である。
【図５】実施例により確認された、Ｆ４α３Ｅ５抗体の
特異性を示す図である。
特異性を示す図である。
【図６】実施例により確認された、Ｆ４α３Ｅ５抗体の
特異性を示す図である。
特異性を示す図である。
【図７】実施例により確認された、Ｆ４α３Ｆ１０抗体
の特異性を示す図である。
の特異性を示す図である。
【図８】実施例により確認された、Ｆ４α３Ｆ１０抗体
の特異性を示す図である。
の特異性を示す図である。
【図９】実施例により確認された、Ｆ４αＭＳ１抗体の
特異性を示す図である。
特異性を示す図である。
【図１０】実施例により確認された、Ｆ４αＭＳ１抗体
の特異性を示す図である。
の特異性を示す図である。
【図１１】実施例により確認された、Ｆ４αＭＳ２抗体
の特異性を示す図である。
の特異性を示す図である。
【図１２】実施例により確認された、Ｆ４αＭＳ２抗体
の特異性を示す図である。
の特異性を示す図である。
【図１３】実施例により確認された、Ｆ４αＭＳ３抗体
の特異性を示す図である。
の特異性を示す図である。
【図１４】実施例により確認された、Ｆ４αＭＳ３抗体
の特異性を示す図である。
の特異性を示す図である。
【図１５】実施例により確認された、Ｆ４αＭＳ４抗体
の特異性を示す図である。
の特異性を示す図である。
【図１６】実施例により確認された、Ｆ４αＭＳ４抗体
の特異性を示す図である。
の特異性を示す図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 // Ｃ１２Ｎ 15/06 Ｇ０１Ｎ 33/574 Ｂ 9015−2Ｊ 33/577 Ｂ 9015−2Ｊ (Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:91）
Claims (4)
- 【請求項１】式（Ｆ４ａ） Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→６（Ｇａｌβ１→３）ＧａｌＮＡｃα１ →１Ｃｅｒ （Ｆ４ａ） で表わされる糖脂質誘導体を認識するモノクローナル抗
体。 - 【請求項２】請求項１に記載のモノクロ−ナル抗体を産
生するハイブリド−マ。 - 【請求項３】請求項２に記載のハイブリド−マを培養
し、培養上清よりモノクローナル抗体を回収することを
特徴とする、モノクロ−ナル抗体の製造方法。 - 【請求項４】請求項１に記載のモノクロ−ナル抗体を有
効成分として含有することを特徴とする、医薬品組成
物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4219666A JPH0646880A (ja) | 1992-07-28 | 1992-07-28 | モノクロ−ナル抗体およびその製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4219666A JPH0646880A (ja) | 1992-07-28 | 1992-07-28 | モノクロ−ナル抗体およびその製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0646880A true JPH0646880A (ja) | 1994-02-22 |
Family
ID=16739081
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4219666A Pending JPH0646880A (ja) | 1992-07-28 | 1992-07-28 | モノクロ−ナル抗体およびその製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0646880A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002077649A1 (fr) * | 2001-03-27 | 2002-10-03 | Teikoku Hormone Mfg. Co., Ltd. | Procede de diagnostic de cancer du sein |
| JP2006055141A (ja) * | 2004-08-24 | 2006-03-02 | Tokai Univ | 糖鎖構造に特異的な抗体の同定方法 |
| EP2431743A2 (en) | 2005-07-20 | 2012-03-21 | Glykos Finland Oy | Cancer specific glycans and use thereof |
-
1992
- 1992-07-28 JP JP4219666A patent/JPH0646880A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002077649A1 (fr) * | 2001-03-27 | 2002-10-03 | Teikoku Hormone Mfg. Co., Ltd. | Procede de diagnostic de cancer du sein |
| JP2006055141A (ja) * | 2004-08-24 | 2006-03-02 | Tokai Univ | 糖鎖構造に特異的な抗体の同定方法 |
| EP2431743A2 (en) | 2005-07-20 | 2012-03-21 | Glykos Finland Oy | Cancer specific glycans and use thereof |
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