JPH0646879A - モノクロ−ナル抗体およびその製法 - Google Patents
モノクロ−ナル抗体およびその製法Info
- Publication number
- JPH0646879A JPH0646879A JP4219665A JP21966592A JPH0646879A JP H0646879 A JPH0646879 A JP H0646879A JP 4219665 A JP4219665 A JP 4219665A JP 21966592 A JP21966592 A JP 21966592A JP H0646879 A JPH0646879 A JP H0646879A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antibody
- monoclonal antibody
- mouse
- sugar chain
- formula
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】疾病との関連が考えられる糖脂質誘導体を特異
的に認識モノクローナル抗体を得る。 【構成】式（Ｆ３ａ） Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→３ＧａｌＮＡｃα１
→１Ｃｅｒ （Ｆ３ａ） で表わされる糖脂質誘導体を認識するモノクローナル抗
体、その製造法、ハイブリドーマ、医薬品組成物。
的に認識モノクローナル抗体を得る。 【構成】式（Ｆ３ａ） Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→３ＧａｌＮＡｃα１
→１Ｃｅｒ （Ｆ３ａ） で表わされる糖脂質誘導体を認識するモノクローナル抗
体、その製造法、ハイブリドーマ、医薬品組成物。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、糖脂質誘導体を認識す
るモノクローナル抗体、その製造法、該モノクローナル
抗体を産生するハイブリドーマ、および該モノクローナ
ル抗体からなる医薬品に関するものである。
るモノクローナル抗体、その製造法、該モノクローナル
抗体を産生するハイブリドーマ、および該モノクローナ
ル抗体からなる医薬品に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】細胞表面の糖鎖は、細胞が癌化するとそ
の構造が変化することが知られており、癌関連抗原とし
て注目されている（Ｓ．Ｈａｋｏｍｏｒｉら、Ｊ．Ｎａ
ｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．７１，ｐ２３１，１９
８３年参照）。従って、細胞が癌化することにより特異
的に出現する糖鎖抗原のうち、血清中に分泌されるもの
を主に認識する抗体は血清診断に用いられ、癌組織を主
に認識する抗体は、治療用抗体として期待されている。
の構造が変化することが知られており、癌関連抗原とし
て注目されている（Ｓ．Ｈａｋｏｍｏｒｉら、Ｊ．Ｎａ
ｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．７１，ｐ２３１，１９
８３年参照）。従って、細胞が癌化することにより特異
的に出現する糖鎖抗原のうち、血清中に分泌されるもの
を主に認識する抗体は血清診断に用いられ、癌組織を主
に認識する抗体は、治療用抗体として期待されている。
【０００３】前者の例として、大腸癌に出現するＣＡ１
９−９抗原を認識する抗体（Ｋｏｐｒｏｗｓｋｉら ｓ
ｃｉｅｎｃｅ，２１２，ｐ５３，１９８１年参照）、後
者の例として、すい臓癌を特異的に認識する抗体Ｎｄ２
（Ｈｏら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５１，ｐ３７２，１
９９１年参照）が例示される。
９−９抗原を認識する抗体（Ｋｏｐｒｏｗｓｋｉら ｓ
ｃｉｅｎｃｅ，２１２，ｐ５３，１９８１年参照）、後
者の例として、すい臓癌を特異的に認識する抗体Ｎｄ２
（Ｈｏら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５１，ｐ３７２，１
９９１年参照）が例示される。
【０００４】この様な糖鎖抗原のうち、ムチン型糖蛋白
質糖鎖は、糖脂質の糖鎖には見られないユニークな構造
を持っていることが知られており、癌関連抗原として有
用である。代表的なムチン型糖蛋白質糖鎖としてＴ抗原
（Ｒａｈｍａｎら Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１２
９，ｐ２０２１，１９８２年参照）、Ｔｎ抗原（Ｈｉｒ
ｏｈａｓｈｉらＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８２，ｐ７０３９，１９８５年参
照）、ｓｉａｌｙｌ Ｔｎ抗原（ＮｕｔｉらＩｎｔ．
Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，２９，ｐ５３９，１９８２年参照）
が例示される。
質糖鎖は、糖脂質の糖鎖には見られないユニークな構造
を持っていることが知られており、癌関連抗原として有
用である。代表的なムチン型糖蛋白質糖鎖としてＴ抗原
（Ｒａｈｍａｎら Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１２
９，ｐ２０２１，１９８２年参照）、Ｔｎ抗原（Ｈｉｒ
ｏｈａｓｈｉらＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８２，ｐ７０３９，１９８５年参
照）、ｓｉａｌｙｌ Ｔｎ抗原（ＮｕｔｉらＩｎｔ．
Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，２９，ｐ５３９，１９８２年参照）
が例示される。
【０００５】これまではいずれも癌細胞そのもの、また
は癌細胞から抽出した種々のムチン型糖蛋白質の混合物
の粗精製標品をマウス等に免疫しているので、目的とす
るムチン型糖蛋白質の糖鎖部分に対する抗体を作製する
のが非常に困難である。また、作製した抗体が認識する
抗原の構造を特定するのが難しい。
は癌細胞から抽出した種々のムチン型糖蛋白質の混合物
の粗精製標品をマウス等に免疫しているので、目的とす
るムチン型糖蛋白質の糖鎖部分に対する抗体を作製する
のが非常に困難である。また、作製した抗体が認識する
抗原の構造を特定するのが難しい。
【０００６】一方、本発明者らはムチン型糖蛋白質の糖
鎖部分とセラミドが結合した糖脂質を合成し、これをマ
ウス等に免疫し、ムチン型糖蛋白質の糖鎖部分を認識す
る抗体を作製した（特開平３−２８０８９４）。しかし
ながら、癌などの疾病と関連のあるムチン型糖蛋白質に
はまだ多くの種類があり、それらに対するモノクローナ
ル抗体を用いた研究が必要とされている。
鎖部分とセラミドが結合した糖脂質を合成し、これをマ
ウス等に免疫し、ムチン型糖蛋白質の糖鎖部分を認識す
る抗体を作製した（特開平３−２８０８９４）。しかし
ながら、癌などの疾病と関連のあるムチン型糖蛋白質に
はまだ多くの種類があり、それらに対するモノクローナ
ル抗体を用いた研究が必要とされている。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】癌関連ムチン型糖鎖の
一種として、その存在が考えられている式（Ｆ３ａ´） Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→３ＧａｌＮＡｃ （Ｆ３ａ´） を特異的に認識する抗体は報告されておらず、本発明
は、その様な糖鎖に反応性を有するモノクローナル抗体
を提供することを目的とする。
一種として、その存在が考えられている式（Ｆ３ａ´） Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→３ＧａｌＮＡｃ （Ｆ３ａ´） を特異的に認識する抗体は報告されておらず、本発明
は、その様な糖鎖に反応性を有するモノクローナル抗体
を提供することを目的とする。
【０００８】
【課題を解決するための手段】以上のような状態に鑑み
て本発明者らは、鋭意研究を行った結果、本発明に到達
した。即ち本発明は、式（Ｆ３ａ） Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→３ＧａｌＮＡｃα１→１Ｃｅｒ （Ｆ３ａ） で表わされる糖脂質誘導体を認識するモノクローナル抗
体である。また本発明は、該モノクロ−ナル抗体を産生
するハイブリド−マである。さらに本発明は該ハイブリ
ド−マを培養し、その培養上清からモノクローナル抗体
を回収することを特徴とする、モノクロ−ナル抗体の製
造方法である。一方、本発明は該モノクロ−ナル抗体を
有効成分として含有することを特徴とする、医薬品組成
物である。以下本発明を詳細に説明する。
て本発明者らは、鋭意研究を行った結果、本発明に到達
した。即ち本発明は、式（Ｆ３ａ） Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→３ＧａｌＮＡｃα１→１Ｃｅｒ （Ｆ３ａ） で表わされる糖脂質誘導体を認識するモノクローナル抗
体である。また本発明は、該モノクロ−ナル抗体を産生
するハイブリド−マである。さらに本発明は該ハイブリ
ド−マを培養し、その培養上清からモノクローナル抗体
を回収することを特徴とする、モノクロ−ナル抗体の製
造方法である。一方、本発明は該モノクロ−ナル抗体を
有効成分として含有することを特徴とする、医薬品組成
物である。以下本発明を詳細に説明する。
【０００９】本発明のモノクローナル抗体は、式（Ｆ３
ａ） Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→３ＧａｌＮＡｃα１→１Ｃｅｒ （Ｆ３ａ） で表される糖鎖を認識する。式（Ｆ３ａ）の糖脂質誘導
体は、本発明者らによる特開平３−２７５６９４に記載
の方法に従い合成することができる。本発明の抗体は、
式（Ｆ３ａ）の糖鎖だけでなく、該糖鎖の一部が欠失、
付加、あるいは置換したものをさらに認識してもよい。
ａ） Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→３ＧａｌＮＡｃα１→１Ｃｅｒ （Ｆ３ａ） で表される糖鎖を認識する。式（Ｆ３ａ）の糖脂質誘導
体は、本発明者らによる特開平３−２７５６９４に記載
の方法に従い合成することができる。本発明の抗体は、
式（Ｆ３ａ）の糖鎖だけでなく、該糖鎖の一部が欠失、
付加、あるいは置換したものをさらに認識してもよい。
【００１０】本発明のモノクローナル抗体は、ケーラー
（Ｋｏｈｌｅｒ Ｇ．）らの方法（Ｎａｔｕｒｅ ２５
６，４９５−４９７（１９７５））に従い、該糖脂質を
動物に投与して免疫し、脾臓細胞を取り出し、これを樹
立されたミエローマ細胞と融合させて取得したハイブリ
ドーマにより生産させればよい。
（Ｋｏｈｌｅｒ Ｇ．）らの方法（Ｎａｔｕｒｅ ２５
６，４９５−４９７（１９７５））に従い、該糖脂質を
動物に投与して免疫し、脾臓細胞を取り出し、これを樹
立されたミエローマ細胞と融合させて取得したハイブリ
ドーマにより生産させればよい。
【００１１】免疫の際、免疫増強剤（アジュバント）と
して不完全アジュバントまたは完全アジュバントのいず
れも使用でき、例えば油、乳化剤、結核死菌、サルモネ
ラ死菌おらびこれらの混合物などが用いられる。免疫用
動物としては、ヒト、ウサギ、マウス、ラットなどほと
んどの動物が使用できるが、好ましくはマウス、より好
ましくはＢＡＬＢ／ｃ系マウスである。マウスの飼育お
よび、脾臓細胞の採取は常法に従う。
して不完全アジュバントまたは完全アジュバントのいず
れも使用でき、例えば油、乳化剤、結核死菌、サルモネ
ラ死菌おらびこれらの混合物などが用いられる。免疫用
動物としては、ヒト、ウサギ、マウス、ラットなどほと
んどの動物が使用できるが、好ましくはマウス、より好
ましくはＢＡＬＢ／ｃ系マウスである。マウスの飼育お
よび、脾臓細胞の採取は常法に従う。
【００１２】一方、ミエローマ細胞としては、ヒト、ウ
サギ、マウス、ラット等ほとんどの動物のミエローマ細
胞が使用できるが、好ましくは、ＢＡＬＢ／ｃ系マウス
由来のＳＰ２／０−Ａｇ８が用いられる。細胞融合の際
に用いる融合剤としては、ポリエチレングリコール等が
使用できる。
サギ、マウス、ラット等ほとんどの動物のミエローマ細
胞が使用できるが、好ましくは、ＢＡＬＢ／ｃ系マウス
由来のＳＰ２／０−Ａｇ８が用いられる。細胞融合の際
に用いる融合剤としては、ポリエチレングリコール等が
使用できる。
【００１３】融合細胞（ハイブリドーマ）の選択は、免
疫処置に用いた糖脂質と反応する培養上清を産生する細
胞をスクリ−ニングする。この際、９６穴プレ−トであ
れば１０プレ−ト以上をスクリ−ニングするのが好まし
い。また、少量の抗体しか産生しないクロ−ンを見逃さ
ないように、注意を払う必要がある。次いでハイブリド
−マのクローン化は、限界希釈法、メチルセルロース
法、軟アガロース法などにて行う。
疫処置に用いた糖脂質と反応する培養上清を産生する細
胞をスクリ−ニングする。この際、９６穴プレ−トであ
れば１０プレ−ト以上をスクリ−ニングするのが好まし
い。また、少量の抗体しか産生しないクロ−ンを見逃さ
ないように、注意を払う必要がある。次いでハイブリド
−マのクローン化は、限界希釈法、メチルセルロース
法、軟アガロース法などにて行う。
【００１４】この様にしてクローン化されたハイブリド
ーマを培養し、培養上清からモノクローナル抗体を回収
すればよい。具体的には、ハイブリドーマを通常の動物
細胞の培養と同様にして培養し、培地中に生産された抗
体を回収すればよい。またマウス等にハイブリド−マを
移植し、腹水中にモノクロ−ナル抗体を生産させ、回収
してもよい。回収されたモノクローナル抗体の精製に
は、硫安沈殿、塩析等の通常の方法を用いればよい。
ーマを培養し、培養上清からモノクローナル抗体を回収
すればよい。具体的には、ハイブリドーマを通常の動物
細胞の培養と同様にして培養し、培地中に生産された抗
体を回収すればよい。またマウス等にハイブリド−マを
移植し、腹水中にモノクロ−ナル抗体を生産させ、回収
してもよい。回収されたモノクローナル抗体の精製に
は、硫安沈殿、塩析等の通常の方法を用いればよい。
【００１５】このように樹立される本発明のハイブリド
ーマとしては、例えば、ハイブリドーマＦ３α２５Ａ
３、Ｆ３α３２８などがあげられる。また、本発明のモ
ノクローナル抗体としては、以上述べたハイブリドーマ
からそれぞれ得られるＦ３α２５Ａ３抗体、Ｆ３α３２
８抗体などがあげられる。
ーマとしては、例えば、ハイブリドーマＦ３α２５Ａ
３、Ｆ３α３２８などがあげられる。また、本発明のモ
ノクローナル抗体としては、以上述べたハイブリドーマ
からそれぞれ得られるＦ３α２５Ａ３抗体、Ｆ３α３２
８抗体などがあげられる。
【００１６】本発明で得られるモノクローナル抗体の性
質については、すでに報告されている種々の方法によっ
て調べればよい。このような性質のひとつである、ある
種の癌細胞を特異的に認識するかどうかについては、こ
れらの抗体を用いて種々の組織を染色することにより調
べることができる。また、ある種の癌患者の血清中に特
異的に存在しているかどうかについては、これらの抗体
を用いて種々の癌患者の血清を酵素免疫法（ＥＬＩＳ
Ａ）等で測定することにより調べることができる。
質については、すでに報告されている種々の方法によっ
て調べればよい。このような性質のひとつである、ある
種の癌細胞を特異的に認識するかどうかについては、こ
れらの抗体を用いて種々の組織を染色することにより調
べることができる。また、ある種の癌患者の血清中に特
異的に存在しているかどうかについては、これらの抗体
を用いて種々の癌患者の血清を酵素免疫法（ＥＬＩＳ
Ａ）等で測定することにより調べることができる。
【００１７】例えば、本発明のモノクローナル抗体の性
質については、Ｆ３α２５Ａ３抗体は、Ｇａｌβ１→４
ＧｌｃＮＡｃβ１→３ＧａｌＮＡｃαという糖鎖構造に
高い特異性を有しており、またＦ３α３２８抗体は、Ｇ
ａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→３ＧａｌＮＡｃという
糖鎖分枝構造にも高い特異性を示した。
質については、Ｆ３α２５Ａ３抗体は、Ｇａｌβ１→４
ＧｌｃＮＡｃβ１→３ＧａｌＮＡｃαという糖鎖構造に
高い特異性を有しており、またＦ３α３２８抗体は、Ｇ
ａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→３ＧａｌＮＡｃという
糖鎖分枝構造にも高い特異性を示した。
【００１８】本発明のモノクロ−ナル抗体は、それを有
効成分として含有する医薬品組成物として利用すること
ができる。医薬品組成物としては、診断薬、治療薬など
が例示できる。対象疾患は、本発明のモノクロ−ナル抗
体の性質を前記方法で解析することにより決めることが
できる。本発明のモノクローナル抗体は特に癌の診断、
治療への応用が期待される。
効成分として含有する医薬品組成物として利用すること
ができる。医薬品組成物としては、診断薬、治療薬など
が例示できる。対象疾患は、本発明のモノクロ−ナル抗
体の性質を前記方法で解析することにより決めることが
できる。本発明のモノクローナル抗体は特に癌の診断、
治療への応用が期待される。
【００１９】
【実施例】以下に本発明をさらに詳細に説明するために
実施例を記載するが、本発明はこれら実施例にのみ限定
されるものではない。
実施例を記載するが、本発明はこれら実施例にのみ限定
されるものではない。
【００２０】実施例 ムチン型糖脂質の調製 式（Ｆ１ａ），（Ｆ１ｂ） Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→６ＧａｌＮＡｃα１→１Ｃｅｒ （Ｆ１ａ） Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→６ＧａｌＮＡｃβ１→１Ｃｅｒ （Ｆ１ｂ） で表される糖脂質は、特開平３−２５１５９４記載の方
法によって得た。
法によって得た。
【００２１】 式（Ｆ３ａ），（Ｆ３ｂ） Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→３ＧａｌＮＡｃα１→１Ｃｅｒ （Ｆ３ａ） Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→３ＧａｌＮＡｃβ１→１Ｃｅｒ （Ｆ３ｂ） で表される糖脂質は、特開平３−２７５６９４記載の方
法によって得た。
法によって得た。
【００２２】 式（Ｆ３６ａ），（Ｆ３６ｂ） Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→６（Ｇａｌβ１ →４ＧｌｃＮＡｃβ１→３）ＧａｌＮＡｃα１→１Ｃｅｒ （Ｆ３６ａ） Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→６（Ｇａｌβ１ →４ＧｌｃＮＡｃβ１→３）ＧａｌＮＡｃβ１→１Ｃｅｒ （Ｆ３６ｂ） で表される糖脂質は、特願平３−４８６２７記載の方法
によって得た。
によって得た。
【００２３】 式（Ｆ２ａ），（Ｆ２ｂ） Ｇａｌβ１→３ＧａｌＮＡｃα１→１Ｃｅｒ （Ｆ２ａ） Ｇａｌβ１→３ＧａｌＮＡｃβ１→１Ｃｅｒ （Ｆ２ｂ） で表される糖脂質は、特開平３−２７９３９４記載の方
法によって得た。
法によって得た。
【００２４】 式（Ｆ４ａ），（Ｆ４ｂ） Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→６（Ｇａｌβ１ →３）ＧａｌＮＡｃα１→１Ｃｅｒ （Ｆ４ａ） Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→６（Ｇａｌβ１ →３）ＧａｌＮＡｃβ１→１Ｃｅｒ （Ｆ４ｂ） で表される糖脂質は、特願平３−１６７５００の方法に
よって得た。 モノクローナル抗体作製手順 で得た式（Ｆ３ａ）の糖脂質をＳａｌｍｏｎｅｌｌａ
Ｍｉｎｎｅｓｏｔａの死菌に吸着させ、ＢＡＬＢ／ｃ
マウスの反復腹腔内免疫処置に用いた。免疫処置プロト
コルは第０日８μｇ、第７日１６μｇ、第１４日２３μ
ｇ、最終二次免疫第２８日２３μｇであった。３日後、
脾臓細胞を回収し、ポリエチレングリコールを融合剤と
してマウス骨髄腫ＳＰ２／０−Ａｇ８と融合させた。詳
細な手順はケーラー（Ｋｏｈｌｅｒ，Ｇ．）ほか、ネイ
チャー（Nature) 、２５６、４５９−４９７、１９７５
年に従った。
よって得た。 モノクローナル抗体作製手順 で得た式（Ｆ３ａ）の糖脂質をＳａｌｍｏｎｅｌｌａ
Ｍｉｎｎｅｓｏｔａの死菌に吸着させ、ＢＡＬＢ／ｃ
マウスの反復腹腔内免疫処置に用いた。免疫処置プロト
コルは第０日８μｇ、第７日１６μｇ、第１４日２３μ
ｇ、最終二次免疫第２８日２３μｇであった。３日後、
脾臓細胞を回収し、ポリエチレングリコールを融合剤と
してマウス骨髄腫ＳＰ２／０−Ａｇ８と融合させた。詳
細な手順はケーラー（Ｋｏｈｌｅｒ，Ｇ．）ほか、ネイ
チャー（Nature) 、２５６、４５９−４９７、１９７５
年に従った。
【００２５】で得た式（Ｆ３ａ）の糖脂質を、スクリ
ーニング時の培養上清の固相酵素免疫検定における抗原
として用いた。９６穴プレートを１０プレートスクリー
ニングし、限界希釈法によりクローニングして、式（Ｆ
３ａ）の糖脂質と反応性の２つのクローン、即ち、ハイ
ブリドーマＦ３α２５Ａ３、およびＦ３α３２８を選択
した。これらのクローンはいずれも、ＩｇＭ抗体を産生
していた。
ーニング時の培養上清の固相酵素免疫検定における抗原
として用いた。９６穴プレートを１０プレートスクリー
ニングし、限界希釈法によりクローニングして、式（Ｆ
３ａ）の糖脂質と反応性の２つのクローン、即ち、ハイ
ブリドーマＦ３α２５Ａ３、およびＦ３α３２８を選択
した。これらのクローンはいずれも、ＩｇＭ抗体を産生
していた。
【００２６】これらのハイブリドーマをマウスに移植
し、腹水に産生されたモノクローナル抗体を回収し、硫
安沈殿、塩析などにより精製した。 モノクローナル抗体と種々の糖脂質との反応性の評価 で得た２種のモノクロ−ナル抗体と種々の糖脂質との
反応性を評価するため、固相酵素免疫検定を行った。
し、腹水に産生されたモノクローナル抗体を回収し、硫
安沈殿、塩析などにより精製した。 モノクローナル抗体と種々の糖脂質との反応性の評価 で得た２種のモノクロ−ナル抗体と種々の糖脂質との
反応性を評価するため、固相酵素免疫検定を行った。
【００２７】固相酵素免疫検定は９６穴プレ−トにで
作製した１０種の糖脂質抗原を固定化し、希釈倍率１〜
３−６の濃度のＦ３α２５Ａ３抗体、Ｆ３α３２８抗体
を反応させた後、未反応の抗体を除去し、ペルオキシダ
ーゼ結合ヤギ抗マウスＩｇＧ（重鎖および軽鎖結合性）
および抗マウスＩｇＭ（μ鎖結合性）を用いて、ハコモ
リほか（Ｈａｋｏｍｏｒｉ，Ｓ．ａｎｄ Ｋａｎｎａｇ
ｉ，Ｒ．）により「実験免疫学ハンドブック（Ｈａｎｄ
ｂｏｏｋ ｏｆ ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＩｍｍｕｎ
ｏｌｏｇｙ）１巻」、ウェアほかブラックエル・サイエ
ンティフィック・パブリッシング社（Ｂｌａｃｋｗｅｌ
ｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂ．Ｉｎｃ．Ｂｏｓｔ
ｏｎ），１９８６年に記載された標準法により行った。
またカンナギほか（Ｋａｎｎａｇｉ．Ｒ，）、ジャーナ
ル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ．Ｂｉｏ
ｌ．Ｃｈｅｍ．）２５８，８９３４−８９４２，１９８
３年に記載の方法も参照した。
作製した１０種の糖脂質抗原を固定化し、希釈倍率１〜
３−６の濃度のＦ３α２５Ａ３抗体、Ｆ３α３２８抗体
を反応させた後、未反応の抗体を除去し、ペルオキシダ
ーゼ結合ヤギ抗マウスＩｇＧ（重鎖および軽鎖結合性）
および抗マウスＩｇＭ（μ鎖結合性）を用いて、ハコモ
リほか（Ｈａｋｏｍｏｒｉ，Ｓ．ａｎｄ Ｋａｎｎａｇ
ｉ，Ｒ．）により「実験免疫学ハンドブック（Ｈａｎｄ
ｂｏｏｋ ｏｆ ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＩｍｍｕｎ
ｏｌｏｇｙ）１巻」、ウェアほかブラックエル・サイエ
ンティフィック・パブリッシング社（Ｂｌａｃｋｗｅｌ
ｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂ．Ｉｎｃ．Ｂｏｓｔ
ｏｎ），１９８６年に記載された標準法により行った。
またカンナギほか（Ｋａｎｎａｇｉ．Ｒ，）、ジャーナ
ル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ．Ｂｉｏ
ｌ．Ｃｈｅｍ．）２５８，８９３４−８９４２，１９８
３年に記載の方法も参照した。
【００２８】各モノクローナル抗体の各種糖脂質との反
応性の結果を図１〜図４に示す。図中、縦軸は吸光度、
横軸は希釈倍率を示す。図から明らかなように、Ｆ３α
２５Ａ３抗体、Ｆ３α３２８抗体は、免疫原である式
（Ｆ３ａ）の抗体を認識することが分かった。Ｆ３α２
５Ａ３抗体は、Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→３Ｇ
ａｌＮＡｃαという糖鎖構造に高い特異性を有している
ことがわかった。また、Ｆ３α３２８抗体は、Ｇａｌβ
１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→３ＧａｌＮＡｃという糖鎖分
枝構造にも高い特異性を示した。
応性の結果を図１〜図４に示す。図中、縦軸は吸光度、
横軸は希釈倍率を示す。図から明らかなように、Ｆ３α
２５Ａ３抗体、Ｆ３α３２８抗体は、免疫原である式
（Ｆ３ａ）の抗体を認識することが分かった。Ｆ３α２
５Ａ３抗体は、Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→３Ｇ
ａｌＮＡｃαという糖鎖構造に高い特異性を有している
ことがわかった。また、Ｆ３α３２８抗体は、Ｇａｌβ
１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→３ＧａｌＮＡｃという糖鎖分
枝構造にも高い特異性を示した。
【００２９】
【発明の効果】本発明によるモノクローナル抗体は式
（Ｆ３ａ） Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→３ＧａｌＮＡｃα１→１Ｃｅｒ （Ｆ３ａ ） の糖脂質を認識し、新規の血清診断薬や体内診断薬、治
療薬として期待できる。さらには、個体発生や細胞接着
の研究材料として用いることも期待できる。このような
モノクローナル抗体は、式（Ｆ３ａ）の糖脂質を免疫原
として得た本発明のハイブリドーマを培養することによ
り得ることができる。
（Ｆ３ａ） Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→３ＧａｌＮＡｃα１→１Ｃｅｒ （Ｆ３ａ ） の糖脂質を認識し、新規の血清診断薬や体内診断薬、治
療薬として期待できる。さらには、個体発生や細胞接着
の研究材料として用いることも期待できる。このような
モノクローナル抗体は、式（Ｆ３ａ）の糖脂質を免疫原
として得た本発明のハイブリドーマを培養することによ
り得ることができる。
【図１】実施例により確認された、Ｆ３α２５Ａ３抗体
の特異性を示す図である。
の特異性を示す図である。
【図２】実施例により確認された、Ｆ３α２５Ａ３抗体
の特異性を示す図である。
の特異性を示す図である。
【図３】実施例により確認された、Ｆ３α３２８抗体の
特異性を示す図である。
特異性を示す図である。
【図４】実施例により確認された、Ｆ３α３２８抗体の
特異性を示す図である。
特異性を示す図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 // Ｃ１２Ｎ 15/06 Ｇ０１Ｎ 33/574 Ｂ 9015−2Ｊ 33/577 Ｂ 9015−2Ｊ (Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:91）
Claims (4)
- 【請求項１】式（Ｆ３ａ） Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→３ＧａｌＮＡｃα１→１Ｃｅｒ （Ｆ３ａ ） で表わされる糖脂質誘導体を認識するモノクローナル抗
体。 - 【請求項２】請求項１に記載のモノクロ−ナル抗体を産
生するハイブリド−マ。 - 【請求項３】請求項２に記載のハイブリド−マを培養
し、その培養上清からモノクローナル抗体を回収するこ
とを特徴とする、モノクロ−ナル抗体の製造方法。 - 【請求項４】請求項１に記載のモノクロ−ナル抗体を有
効成分として含有することを特徴とする、医薬品組成
物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4219665A JPH0646879A (ja) | 1992-07-28 | 1992-07-28 | モノクロ−ナル抗体およびその製法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4219665A JPH0646879A (ja) | 1992-07-28 | 1992-07-28 | モノクロ−ナル抗体およびその製法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0646879A true JPH0646879A (ja) | 1994-02-22 |
Family
ID=16739065
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4219665A Pending JPH0646879A (ja) | 1992-07-28 | 1992-07-28 | モノクロ−ナル抗体およびその製法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0646879A (ja) |
-
1992
- 1992-07-28 JP JP4219665A patent/JPH0646879A/ja active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA1243969A (en) | Monoclonal antibody to a human carcinoma tumor associated antigen | |
| JP2546570B2 (ja) | ヒト乳癌細胞に対するモノクローナル抗体を生産するハイブリドーマ | |
| JP2589682B2 (ja) | ヒト非▲下−▼小細胞肺癌に関するモノクローナル抗体および抗原 | |
| JP2540179B2 (ja) | 非還元・非酵素的糖鎖形成蛋白に対するモノクロ―ナル抗体 | |
| FR2596062A1 (fr) | Anticorps monoclonaux et antigene du carcinome pulmonaire humain a cellules non petites et de certains autres carcinomes humains | |
| CA1225608A (en) | Monoclonal antibody to cardiac myosin heavy chain | |
| EP0184369B1 (en) | Monoclonal antibody specific for a mammary tumor cell surface antigen | |
| Newman et al. | Combining site specificities of mouse hybridoma antibodies to dextran B1355S. | |
| JPH0646880A (ja) | モノクロ−ナル抗体およびその製造方法 | |
| JPH0646878A (ja) | モノクロ−ナル抗体およびその製造法 | |
| CA1238285A (en) | Monoclonal antibody specific for a mammary tumor cytoplasmis antigen | |
| JPH0646879A (ja) | モノクロ−ナル抗体およびその製法 | |
| EP0428485B1 (en) | Novel antiidiotypic monoclonal antibodies | |
| JPH0570434B2 (ja) | ||
| JPS60208925A (ja) | ガン診断と治療のためのモノクロ−ナル抗体の生産法 | |
| EP0581108A2 (en) | Bispecific antibody reactive with sialyl-Lea antigen and CD3 | |
| CA2141025C (en) | Anti-mucus glycoprotein monoclonal antibody | |
| JP3123056B2 (ja) | 合成糖脂質特異性モノクローナル抗体 | |
| JPH05170667A (ja) | バイスペシフィック抗体 | |
| JPH05176790A (ja) | 脳ミオシンに対するモノクローナル抗体 | |
| JPS6098000A (ja) | 抗ヒト癌モノクロナル抗体 | |
| WO1986004092A1 (en) | Process for preparing human cancer-specific monoclonal antibody | |
| JPH0577398B2 (ja) | ||
| JPH03127996A (ja) | 制癌性物質ｔｆ―３００に対するモノクローナル抗体 | |
| JPH07163392A (ja) | ヒト型モノクローナル抗体、該抗体を産生するハイブリドーマ |