JPH0637508B2 - 抗生物質Ａ４０９２６複合体およびその純粋な因子ＰＡ、ＰＢ、Ａ、ＢおよびＢｏ - Google Patents
抗生物質Ａ４０９２６複合体およびその純粋な因子ＰＡ、ＰＢ、Ａ、ＢおよびＢｏInfo
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- JPH0637508B2 JPH0637508B2 JP60226671A JP22667185A JPH0637508B2 JP H0637508 B2 JPH0637508 B2 JP H0637508B2 JP 60226671 A JP60226671 A JP 60226671A JP 22667185 A JP22667185 A JP 22667185A JP H0637508 B2 JPH0637508 B2 JP H0637508B2
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- C07K9/006—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof the peptide sequence being part of a ring structure
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Description
【発明の詳細な説明】 本発明は、任意に抗生物質Ａ４０９２６複合体（ｃｏｍ
ｐｌｅｘ）およびその因子、抗生物質Ａ４０９２６因子
Ａ、抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ、抗生物質Ａ４０９２
６因子Ｂ０、抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡおよび抗生
物質Ａ４０９２６因子ＰＢと命名する新規な抗生物質、
新規な菌株アクチノマヅラ（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒ
ａ）種ＡＴＣＣ３９７２７、またはその抗生物質Ａ４０
９２６生産性突然変異体もしくは変異型を培養すること
によるこれらの抗生物質を生産する方法、およびこれら
の抗生物質に感受性の微生物を含む伝染病の処置におけ
るこれらの新規な抗生物質の使用に関する。
ｐｌｅｘ）およびその因子、抗生物質Ａ４０９２６因子
Ａ、抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ、抗生物質Ａ４０９２
６因子Ｂ０、抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡおよび抗生
物質Ａ４０９２６因子ＰＢと命名する新規な抗生物質、
新規な菌株アクチノマヅラ（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒ
ａ）種ＡＴＣＣ３９７２７、またはその抗生物質Ａ４０
９２６生産性突然変異体もしくは変異型を培養すること
によるこれらの抗生物質を生産する方法、およびこれら
の抗生物質に感受性の微生物を含む伝染病の処置におけ
るこれらの新規な抗生物質の使用に関する。
本発明の抗生物質は、アシル−Ｄ−アラニル−Ｄ−アラ
ニンへの結合能力を有する抗生物質のバイコマイシンの
クラスに属するグリコペプチド物質である。
ニンへの結合能力を有する抗生物質のバイコマイシンの
クラスに属するグリコペプチド物質である。
抗生物質Ａ４０９２６複合体およびその因子、抗生物質
Ａ４０９２６因子Ａ、因子Ｂ、因子Ｂ０、因子ＰＡおよ
び因子ＰＢは、それ自体既知の技術に従い塩類を形成す
ることができる。
Ａ４０９２６因子Ａ、因子Ｂ、因子Ｂ０、因子ＰＡおよ
び因子ＰＢは、それ自体既知の技術に従い塩類を形成す
ることができる。
本明細書において、表現「抗生物質Ａ４０９２６」それ
自体は、抗生物質Ａ４０９２６複合体、抗生物質Ａ４０
９２６因子Ａ、抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ、抗生物質
Ａ４０９２６因子Ｂ０、抗生物質Ａ４０９２６因子Ｐ
Ａ、抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＢ、それらの塩または
そえらの任意の混合物から選択される化合物を表わす。
表現「抗生物質Ａ４０９２６複合体」、「抗生物質Ａ４
０９２６因子ＰＡ」、「抗生物質Ａ４０９２６因子Ｐ
Ｂ」、「抗生物質Ａ４０９２６因子Ａ」、「抗生物質Ａ
４０９２６因子Ｂ」、「抗生物質Ａ４０９２６因子
Ｂ０」は、生物学的性質を用いて取扱うとき、対応する
製薬学的に許容されうる塩類をまた包含する。
自体は、抗生物質Ａ４０９２６複合体、抗生物質Ａ４０
９２６因子Ａ、抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ、抗生物質
Ａ４０９２６因子Ｂ０、抗生物質Ａ４０９２６因子Ｐ
Ａ、抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＢ、それらの塩または
そえらの任意の混合物から選択される化合物を表わす。
表現「抗生物質Ａ４０９２６複合体」、「抗生物質Ａ４
０９２６因子ＰＡ」、「抗生物質Ａ４０９２６因子Ｐ
Ｂ」、「抗生物質Ａ４０９２６因子Ａ」、「抗生物質Ａ
４０９２６因子Ｂ」、「抗生物質Ａ４０９２６因子
Ｂ０」は、生物学的性質を用いて取扱うとき、対応する
製薬学的に許容されうる塩類をまた包含する。
抗生物質Ａ４０９２６は、土の試料から単離されかつ国
際的に認められているコレクションであるアメリカン・
タイプ・カルチャー・コレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ
Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ
（ＡＴＣＣ）−１２３０１ Ｐａｒｋｌａｗｎ Ｄｒｉ
ｖｅ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ，Ｕ．
Ｓ．Ａ．２０８５２）にブダペスト条約の規定に従い１
９８４年６月８日に受託された、アクチノマヅラ（Ａｃ
ｔｉｎｏｍａｄｕｒａ）菌株を培養することにより生産
される。この菌株には受入れ番号ＡＴＣＣ３９７２７が
付与されている。
際的に認められているコレクションであるアメリカン・
タイプ・カルチャー・コレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ
Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ
（ＡＴＣＣ）−１２３０１ Ｐａｒｋｌａｗｎ Ｄｒｉ
ｖｅ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ，Ｕ．
Ｓ．Ａ．２０８５２）にブダペスト条約の規定に従い１
９８４年６月８日に受託された、アクチノマヅラ（Ａｃ
ｔｉｎｏｍａｄｕｒａ）菌株を培養することにより生産
される。この菌株には受入れ番号ＡＴＣＣ３９７２７が
付与されている。
この生産性菌株は、最初ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅ
ｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属すると考えられ、そして始め
ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）種Ａ
４０９２６と名付けられ、そしてそれ自体ＡＴＣＣ３９
７２７の受入れ番号でＡＴＣＣに受託された。ことによ
く知られた組成について、さらに研究した結果、新規な
菌株は属アクチノマヅラ（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ）
に属するという結論にわれわれは達した。したがって、
本来ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）
種ＡＴＣＣ３９７２７として受託された菌株はアクチノ
マヅラ（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ種ＡＴＣＣ３９７２
７と改名された。
ｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属すると考えられ、そして始め
ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）種Ａ
４０９２６と名付けられ、そしてそれ自体ＡＴＣＣ３９
７２７の受入れ番号でＡＴＣＣに受託された。ことによ
く知られた組成について、さらに研究した結果、新規な
菌株は属アクチノマヅラ（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ）
に属するという結論にわれわれは達した。したがって、
本来ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）
種ＡＴＣＣ３９７２７として受託された菌株はアクチノ
マヅラ（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ種ＡＴＣＣ３９７２
７と改名された。
抗生物質抗生物質Ａ４０９２６複合体、Ａ４０９２６因
子Ａ、因子Ｂ、因子Ｂ０、因子ＰＡまたは因子ＰＢの生
産は、それを生産することのできるアクチノマヅラ（Ａ
ｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ）種、すなわち、アクチノマヅ
ラ（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ種ＡＴＣＣ３９７２７、
またはその抗生物質Ａ４０９２６生産性突然変異体もし
くは変異型を、好気的条件下に炭素、窒素および無機塩
類の同化源を含有する水性栄養培地中で培養することに
よって達成される。醗酵技術において通常使用されてい
る栄養培地の多くを使用することができるが、ある種の
培地は好ましい。好ましい炭素源は、グルコース、マン
ノース、ガラクトース、でんぷん、コーンミールなどで
ある。好ましい窒素源は、アンモニア、大豆粉末、ペプ
トン、肉エキス、酵母エキス、トリプトン、アミノ酸類
などである。培養基中に混入することができる無機塩類
には、ナトリウム、カリウム、鉄、亜鉛、コバルト、マ
グネシウム、カルシウムおよびアンモニウムのイオン、
塩素イオン、炭酸イオン、硫酸イオン、リン酸イオン、
硝酸イオンなどのイオンを生成することができる慣用の
可溶性塩類が存在する。
子Ａ、因子Ｂ、因子Ｂ０、因子ＰＡまたは因子ＰＢの生
産は、それを生産することのできるアクチノマヅラ（Ａ
ｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ）種、すなわち、アクチノマヅ
ラ（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ種ＡＴＣＣ３９７２７、
またはその抗生物質Ａ４０９２６生産性突然変異体もし
くは変異型を、好気的条件下に炭素、窒素および無機塩
類の同化源を含有する水性栄養培地中で培養することに
よって達成される。醗酵技術において通常使用されてい
る栄養培地の多くを使用することができるが、ある種の
培地は好ましい。好ましい炭素源は、グルコース、マン
ノース、ガラクトース、でんぷん、コーンミールなどで
ある。好ましい窒素源は、アンモニア、大豆粉末、ペプ
トン、肉エキス、酵母エキス、トリプトン、アミノ酸類
などである。培養基中に混入することができる無機塩類
には、ナトリウム、カリウム、鉄、亜鉛、コバルト、マ
グネシウム、カルシウムおよびアンモニウムのイオン、
塩素イオン、炭酸イオン、硫酸イオン、リン酸イオン、
硝酸イオンなどのイオンを生成することができる慣用の
可溶性塩類が存在する。
通常、抗生物質生産性菌株は、振盪フラスコ内で予備培
養され、次いでこの培養物を使用して実質的の量の抗生
物質を生産するためのびん醗酵器に接種する。予備培養
に使用される培地はより大きい規模の醗酵に使用される
ものと同一であることができるが、他の培地を使用する
こともできる。抗生物質Ａ４０９２６生産性菌株は、２
０〜４０℃、好ましくは２４〜３５℃の温度において生
長させることができる。醗酵の間、抗生物質の生産はブ
ロス（ｂｒｏｔｈ）または菌糸体の抽出物を抗生物質活
性について、例えば、バイオアッセイまたはＴＬＣまた
はＨＰＬＣ手順により監視することができる。
養され、次いでこの培養物を使用して実質的の量の抗生
物質を生産するためのびん醗酵器に接種する。予備培養
に使用される培地はより大きい規模の醗酵に使用される
ものと同一であることができるが、他の培地を使用する
こともできる。抗生物質Ａ４０９２６生産性菌株は、２
０〜４０℃、好ましくは２４〜３５℃の温度において生
長させることができる。醗酵の間、抗生物質の生産はブ
ロス（ｂｒｏｔｈ）または菌糸体の抽出物を抗生物質活
性について、例えば、バイオアッセイまたはＴＬＣまた
はＨＰＬＣ手順により監視することができる。
抗生物質Ａ４０９２６に感受性の微生物、例えばバシル
ス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ）
およびストレプトマイセス・アウレウス（Ｓｔｒｅｐｔ
ｏｍｙｃｅｓ ａｕｒｅｕｓを試験有機体として使用す
ることができる。バイオアッセイは寒天板上の寒天拡散
法により便利に実施される。抗生物質活性の最大の生産
は、醗酵の第２日目〜第５日目に起こる。
ス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ）
およびストレプトマイセス・アウレウス（Ｓｔｒｅｐｔ
ｏｍｙｃｅｓ ａｕｒｅｕｓを試験有機体として使用す
ることができる。バイオアッセイは寒天板上の寒天拡散
法により便利に実施される。抗生物質活性の最大の生産
は、醗酵の第２日目〜第５日目に起こる。
抗生物質Ａ４０９２６は、菌株アクチノマヅラ（Ａｃｔ
ｉｎｏｍａｄｕｒａ）種ＡＴＣＣ３９７２７、またはそ
の抗生物質Ａ４０９２６生産性突然変異体もしくは変異
型を培養することにより生産され、そして培養肉汁中に
主として存在する。アクチノマヅラ（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ） 種ＡＴＣ
Ｃ３９７２７の特性を、次の節において説明する： 巨視的および微視的検査 栄養菌糸体は、波状および分岐した菌糸（直径約０．８
μｍ）から構成され、ある培地上で、表Ｉに星印で識別
するように、数日の生長後に、棒様要素に分解する傾向
があるが、一方グルロース−アスパラギン培地上で、そ
れは球状要素に分解する。
ｉｎｏｍａｄｕｒａ）種ＡＴＣＣ３９７２７、またはそ
の抗生物質Ａ４０９２６生産性突然変異体もしくは変異
型を培養することにより生産され、そして培養肉汁中に
主として存在する。アクチノマヅラ（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ） 種ＡＴＣ
Ｃ３９７２７の特性を、次の節において説明する： 巨視的および微視的検査 栄養菌糸体は、波状および分岐した菌糸（直径約０．８
μｍ）から構成され、ある培地上で、表Ｉに星印で識別
するように、数日の生長後に、棒様要素に分解する傾向
があるが、一方グルロース−アスパラギン培地上で、そ
れは球状要素に分解する。
この菌株の特性は、ある培地上で栄養菌糸体の赤茶褐色
である。
である。
気中菌糸体はわずかの培地に存在するだけである；とく
に、表Ｉに記載するもののうちで、それはオートミール
寒天およびソイル寒天（ｓｏｉｌａｇａｒ）中にのみ存
在する。これらの培地上で、気中菌糸体は白−グレイで
あり、そして約１０〜２０の胞子のがぎおよび短いらせ
んで配置された芽胞柄を形成する。
に、表Ｉに記載するもののうちで、それはオートミール
寒天およびソイル寒天（ｓｏｉｌａｇａｒ）中にのみ存
在する。これらの培地上で、気中菌糸体は白−グレイで
あり、そして約１０〜２０の胞子のがぎおよび短いらせ
んで配置された芽胞柄を形成する。
胞子は円筒形であり、そして０．８×１．２μｍの平均
大きさを有する。
大きさを有する。
生長特性の決定 培養特性の検査のために、アクチノマヅラ（Ａｃｔｉｎ
ｏｍａｄｕｒａ）種ＡＴＣＣ３９７２７は、シャーリン
グ（Ｓｈｉｒｌｉｎｇ）およびゴットリーブ（Ｇｏｔｔ
ｏｌｉｅｂ）［シャーリング Ｅ．Ｇ．およびゴットリ
ーブ Ｄ．，１９６６−ストレプトマイセス種の特性づ
け法（Ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚ
ａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐｅ
ｃｉｅｓ）−インターナショナル・ジャーナル・オブ・
システミック・バクテリオロジー（Ｉｎｔ．Ｊ．Ｓｙｓ
ｔ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ），１６，３１３−３４０］に
より示唆される種々の標準上でワクスマン（Ｗａｋｓｍ
ａｎ）［ワクスマン，Ｓ．Ａ．１９６１−アクチノマイ
セテス（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ）−アイリアムス
・アンド・ウイルキンス・カンパニー・バルチモア（Ｗ
ｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ Ｃｏ．Ｂｌ
ｔｉｍｏｒｅ）；Ｖｏ１．２，３２８−３３４］が推奨
するいくつかの培地を添加して、培養した。
ｏｍａｄｕｒａ）種ＡＴＣＣ３９７２７は、シャーリン
グ（Ｓｈｉｒｌｉｎｇ）およびゴットリーブ（Ｇｏｔｔ
ｏｌｉｅｂ）［シャーリング Ｅ．Ｇ．およびゴットリ
ーブ Ｄ．，１９６６−ストレプトマイセス種の特性づ
け法（Ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚ
ａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐｅ
ｃｉｅｓ）−インターナショナル・ジャーナル・オブ・
システミック・バクテリオロジー（Ｉｎｔ．Ｊ．Ｓｙｓ
ｔ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ），１６，３１３−３４０］に
より示唆される種々の標準上でワクスマン（Ｗａｋｓｍ
ａｎ）［ワクスマン，Ｓ．Ａ．１９６１−アクチノマイ
セテス（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ）−アイリアムス
・アンド・ウイルキンス・カンパニー・バルチモア（Ｗ
ｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ Ｃｏ．Ｂｌ
ｔｉｍｏｒｅ）；Ｖｏ１．２，３２８−３３４］が推奨
するいくつかの培地を添加して、培養した。
入の決定は、必要なときはいつでも、マエルズ（Ｍａｅ
ｒｚ）およびパウル（Ｐａｕｌ）［マエルズ Ａ．およ
びＭ．レア・パウル，１９５０−色の辞書（Ａ Ｄｉｃ
ｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｏｌｏｒ）−第２版 マクグ
ロー−ヒル・ブック・カンパニー・インコーポレーテッ
ド、ニユーヨク］の方法により実施した。
ｒｚ）およびパウル（Ｐａｕｌ）［マエルズ Ａ．およ
びＭ．レア・パウル，１９５０−色の辞書（Ａ Ｄｉｃ
ｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｏｌｏｒ）−第２版 マクグ
ロー−ヒル・ブック・カンパニー・インコーポレーテッ
ド、ニユーヨク］の方法により実施した。
有機体の種々の炭素源を利用する能力は、シヤーリング
およびゴットリーブが記載する方法により研究した。
およびゴットリーブが記載する方法により研究した。
表Ｉにおける読みは、２８℃において２週のインキュベ
ーション後に実施した。
ーション後に実施した。
生理学的特性 炭素源の利用 化学的分類学の特性 細胞壁の分析： 細胞壁中に存在するアミノ酸類の分析は、ベッカー（Ｂ
ｅｃｋｅｒ）ら，「全細胞加水分解物のペーパークロマ
トグラフィーによるノカルジアとストレプトマイセスと
の間の急速分別（Ｒａｐｉｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａ
ｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｎｏｃａｒｄｉａ ａｎｄ
Ｓｔｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｂｙ ｐａｐｅｒ ｃｈｒ
ｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｏｆ ｗｈｏｌｅ ｃｅｌｌ
ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓ）」，アプライド・マイク
ロバイオロジー（Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｂｉｏｌ．）１
２，４２１−４２３（１９６４）の論文中に記載されて
いる方法により実施した。全細胞の分析はメソ−ジアミ
ノピメリン酸の存在を明らかにした。カワモトら［Ｉ．
カワモト、Ｔ．オカおよびＴ．ナラ，「マイクロモノス
ポラ・オリボアステロスポラ、マイクロモノスポラ・サ
ガミエンシスおよび関連する有機体の細胞壁の組成（Ｃ
ｅｌｌ−ｗａｌｌ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｍ
ｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ ｏｌｉｖｏａｓｔｅｒｏ
ｓｐｏｒａ，Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ ｓａｇａ
ｍｉｅｎｓｉｓ，ａｎｄｏ ｒｅｌａｔｅｄ ｏｒｇａ
ｎｉｓｍ）」，ジャーナル・オブ・バクテリオロジー
（Ｊ．ｏｆ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）１４６，５２
７−５３４，１９８１）］の方法により得られた、純粋
な細胞壁の分析は、グリシンの不存在を示した。
ｅｃｋｅｒ）ら，「全細胞加水分解物のペーパークロマ
トグラフィーによるノカルジアとストレプトマイセスと
の間の急速分別（Ｒａｐｉｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａ
ｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｎｏｃａｒｄｉａ ａｎｄ
Ｓｔｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｂｙ ｐａｐｅｒ ｃｈｒ
ｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｏｆ ｗｈｏｌｅ ｃｅｌｌ
ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓ）」，アプライド・マイク
ロバイオロジー（Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｂｉｏｌ．）１
２，４２１−４２３（１９６４）の論文中に記載されて
いる方法により実施した。全細胞の分析はメソ−ジアミ
ノピメリン酸の存在を明らかにした。カワモトら［Ｉ．
カワモト、Ｔ．オカおよびＴ．ナラ，「マイクロモノス
ポラ・オリボアステロスポラ、マイクロモノスポラ・サ
ガミエンシスおよび関連する有機体の細胞壁の組成（Ｃ
ｅｌｌ−ｗａｌｌ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｍ
ｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ ｏｌｉｖｏａｓｔｅｒｏ
ｓｐｏｒａ，Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ ｓａｇａ
ｍｉｅｎｓｉｓ，ａｎｄｏ ｒｅｌａｔｅｄ ｏｒｇａ
ｎｉｓｍ）」，ジャーナル・オブ・バクテリオロジー
（Ｊ．ｏｆ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）１４６，５２
７−５３４，１９８１）］の方法により得られた、純粋
な細胞壁の分析は、グリシンの不存在を示した。
糖の分析： 糖分の分析は、Ｍ．Ｐ．レヘバリアー（Ｌｅｃｈｅｖａ
ｌｉｅｒ），「臨床的に重要な好気的アクチノミセテス
の同定（Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａｅｒ
ｏｂｉｃ ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ ｏｆ ｃｌｉ
ｎｉｃａｌ ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ）」，ジャーナル・
オブ・ラボラトリー・アンド・クリニカル・メディシン
（Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．）７１，９３４−９
４４（１９６８）の方法により、Ｊ．Ｌ．スタネク（Ｓ
ｔａｎｅｃｋ）およびＧ．Ｄ．ロバーツ（Ｒｏｂｅｒｔ
ｓ），「薄層クロマトグラフィーによる好気的アクチノ
ミセテスの同定に対する簡素化されたアプローチ（Ｓｉ
ｍｐｌｉｆｉｅｄ ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ ｉｄｅｎ
ｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａｅｒｏｂｉｃ ａｃｔ
ｉｎｏｍｉｃｅｔｅｓ ｂｙ ｔｈｉｎ−ｌａｙｅｒ
ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）」，２８，２２６−２
３１（１９７４）に記載される薄層クロマトグラフィー
のセルロースシートを使用して、次の溶媒系を用いて実
施した：酢酸エチル−ピリジン−水（１００：３５：２
５、容量による）。得られた結果は主にグルコースの存
在を示したが、より少量のガラクトース、マンノースお
よびマズロース（３−Ｏ−メチル−Ｄ−ガラクトース）
も検出された。ミリコン酸（ｍｙｃｏｌｉｃ ａｃｉｄ）類 ： ミリコン酸類の存在を検出するアッセイは、ミンニキン
（Ｍｉｎｎｉｋｉｎ）ら［Ｄ．Ｅ．ミンニキン，Ｌ．ア
ルシャマオニイ（Ａｌｓｈａｍａｏｎｙ）およびＭ．グ
ッドフェロー（Ｇｏｏｄｆｅｌｌｏｗ），「全有機体の
メタノール分解物の薄層クロマトグラフィーによるマイ
コバクテリウム、ノカルジアおよび関連するタクソンの
分別（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｙｃ
ｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ，Ｎｏｃａｒｄｉａ ａｎｄ ｒ
ｅｌａｔｅｄ ｔａｘａ ｂｙ ｔｈｉｎ ｌａｙｅｒ
ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ａｎａｌｙｓｉｓ
ｏｆ ｗｈｏｌｅ ｏｒｇａｎｉｓｍ ｍｅｔｈａｎｏ
ｌｙｓｉｓ ｍｅｔｈａｎｏｌｙｓａｔｅｓ）」，ジャ
ーナル・オブ・ジェネラル・マイクロバイオロジー（Ｊ
ｏｒｎａｌ ｏｆ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏ
ｌｏｇｙ），８８，２００−２０４，１９７５］の方法
に従い実施した。
ｌｉｅｒ），「臨床的に重要な好気的アクチノミセテス
の同定（Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａｅｒ
ｏｂｉｃ ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ ｏｆ ｃｌｉ
ｎｉｃａｌ ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ）」，ジャーナル・
オブ・ラボラトリー・アンド・クリニカル・メディシン
（Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．）７１，９３４−９
４４（１９６８）の方法により、Ｊ．Ｌ．スタネク（Ｓ
ｔａｎｅｃｋ）およびＧ．Ｄ．ロバーツ（Ｒｏｂｅｒｔ
ｓ），「薄層クロマトグラフィーによる好気的アクチノ
ミセテスの同定に対する簡素化されたアプローチ（Ｓｉ
ｍｐｌｉｆｉｅｄ ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ ｉｄｅｎ
ｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａｅｒｏｂｉｃ ａｃｔ
ｉｎｏｍｉｃｅｔｅｓ ｂｙ ｔｈｉｎ−ｌａｙｅｒ
ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）」，２８，２２６−２
３１（１９７４）に記載される薄層クロマトグラフィー
のセルロースシートを使用して、次の溶媒系を用いて実
施した：酢酸エチル−ピリジン−水（１００：３５：２
５、容量による）。得られた結果は主にグルコースの存
在を示したが、より少量のガラクトース、マンノースお
よびマズロース（３−Ｏ−メチル−Ｄ−ガラクトース）
も検出された。ミリコン酸（ｍｙｃｏｌｉｃ ａｃｉｄ）類 ： ミリコン酸類の存在を検出するアッセイは、ミンニキン
（Ｍｉｎｎｉｋｉｎ）ら［Ｄ．Ｅ．ミンニキン，Ｌ．ア
ルシャマオニイ（Ａｌｓｈａｍａｏｎｙ）およびＭ．グ
ッドフェロー（Ｇｏｏｄｆｅｌｌｏｗ），「全有機体の
メタノール分解物の薄層クロマトグラフィーによるマイ
コバクテリウム、ノカルジアおよび関連するタクソンの
分別（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｙｃ
ｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ，Ｎｏｃａｒｄｉａ ａｎｄ ｒ
ｅｌａｔｅｄ ｔａｘａ ｂｙ ｔｈｉｎ ｌａｙｅｒ
ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ａｎａｌｙｓｉｓ
ｏｆ ｗｈｏｌｅ ｏｒｇａｎｉｓｍ ｍｅｔｈａｎｏ
ｌｙｓｉｓ ｍｅｔｈａｎｏｌｙｓａｔｅｓ）」，ジャ
ーナル・オブ・ジェネラル・マイクロバイオロジー（Ｊ
ｏｒｎａｌ ｏｆ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏ
ｌｏｇｙ），８８，２００−２０４，１９７５］の方法
に従い実施した。
このアッセイの結果は陰性であった：ミコリン酸類は発
見されなかった。
見されなかった。
菌株の同定： この菌株は、メソージアミノピメリン酸およびマズロー
スの存在、ペプトドグリカン中のグリシンの欠乏、ミコ
リン酸類の欠乏および適度に長い胞子鎖をもつ気中菌糸
体の形成のために、アクチノミセテス（Ａｃｔｉｎｏｍ
ｙｃｅｔｅｓ）のアクチノマヅラ（Ａｃｔｉｎｏｍａｄ
ｕｒａ）属に帰属される。
スの存在、ペプトドグリカン中のグリシンの欠乏、ミコ
リン酸類の欠乏および適度に長い胞子鎖をもつ気中菌糸
体の形成のために、アクチノミセテス（Ａｃｔｉｎｏｍ
ｙｃｅｔｅｓ）のアクチノマヅラ（Ａｃｔｉｎｏｍａｄ
ｕｒａ）属に帰属される。
他の微生物を使用するときのように、抗生物質Ａ４０９
２６生産性菌株の特性は変更される。例えば、菌株の人
口的変異型および突然変異体は種々の既知突然変異原、
例えば、紫外線、Ｘ線、高周波、放射線、および化学物
質、例えば、亜硝酸、Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−
ニトロソグアニジン、および多くの他のもので処理する
ことにより得ることができる。アクチノマヅラ（Ａｃｔ
ｉｎｏｍａｄｕｒａ）属の種に属しかつ抗生物質Ａ４０
９２６を生産するすべての自然および人口の突然変異原
は、菌株アクチノマヅラ（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ）
種ＡＴＣＣ３９７２７と同等であると見なされ、そして
本発明の範囲内に入ると考えられる。
２６生産性菌株の特性は変更される。例えば、菌株の人
口的変異型および突然変異体は種々の既知突然変異原、
例えば、紫外線、Ｘ線、高周波、放射線、および化学物
質、例えば、亜硝酸、Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−
ニトロソグアニジン、および多くの他のもので処理する
ことにより得ることができる。アクチノマヅラ（Ａｃｔ
ｉｎｏｍａｄｕｒａ）属の種に属しかつ抗生物質Ａ４０
９２６を生産するすべての自然および人口の突然変異原
は、菌株アクチノマヅラ（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ）
種ＡＴＣＣ３９７２７と同等であると見なされ、そして
本発明の範囲内に入ると考えられる。
抗生物質生産性有機体の醗酵肉汁からの本発明の抗生物
質の回収は、それ自体既知の技術に従って実施され、そ
してこれらの技術は、溶媒による抽出、非溶媒の添加ま
たは溶液のpHの変化による沈殿、分配クロマトグラフィ
ー、逆相クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラ
フィー、親和性クロマトグラフィーなどを包含する。
質の回収は、それ自体既知の技術に従って実施され、そ
してこれらの技術は、溶媒による抽出、非溶媒の添加ま
たは溶液のpHの変化による沈殿、分配クロマトグラフィ
ー、逆相クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラ
フィー、親和性クロマトグラフィーなどを包含する。
好ましい手順は、固定化Ｄ−アラニル−Ｄ−アラニンを
使用するクロマトグラフィー、引き続く逆相カラムクロ
マトグラフィーを包含する。
使用するクロマトグラフィー、引き続く逆相カラムクロ
マトグラフィーを包含する。
本発明の回収法に適する固定化されたＤ−アラニル−Ｄ
−アラニンマトリックスは、欧州特許出願が第８３１１
２５５５号に開示されている。この方法に好ましいマト
リックスは、調節された孔をもつ架橋されたポリイデキ
ストランを結合されたＤ−アラニル−Ｄ−アラニンであ
る。
−アラニンマトリックスは、欧州特許出願が第８３１１
２５５５号に開示されている。この方法に好ましいマト
リックスは、調節された孔をもつ架橋されたポリイデキ
ストランを結合されたＤ−アラニル−Ｄ−アラニンであ
る。
醗酵ブロスは、濾過後または予備的精製手順後、親和性
クロマトグラフィーに直接かけられる。予備的精製手順
は、醗酵塊全体を塩基性とし、好ましくはpH8.５〜１
０．５にして菌糸体へ吸着された抗生物質を可溶化し、
次いで濾過することを包含する。この透明濾液をpH２．
５〜４．５にし、再び濾過助剤の存在下に濾過する。濾
液を廃棄し、一方回収された濾過ケーキを水に懸濁さ
せ、塩基性とし、好ましくはpH８〜９とし、そして濾過
する。濾過ケースを再び同一手順に付し、一方抗生物質
Ａ４０９２６を含有する濾液をプールする。
クロマトグラフィーに直接かけられる。予備的精製手順
は、醗酵塊全体を塩基性とし、好ましくはpH8.５〜１
０．５にして菌糸体へ吸着された抗生物質を可溶化し、
次いで濾過することを包含する。この透明濾液をpH２．
５〜４．５にし、再び濾過助剤の存在下に濾過する。濾
液を廃棄し、一方回収された濾過ケーキを水に懸濁さ
せ、塩基性とし、好ましくはpH８〜９とし、そして濾過
する。濾過ケースを再び同一手順に付し、一方抗生物質
Ａ４０９２６を含有する濾液をプールする。
次いで、これらの濾液または濾過した醗酵ブロスをカラ
ムまたはバッチ式で、固定化されたＤ−アラニル−Ｄ−
アラニンを使用する親和性クロマトグラフィーにかけ
る。
ムまたはバッチ式で、固定化されたＤ−アラニル−Ｄ−
アラニンを使用する親和性クロマトグラフィーにかけ
る。
親和性マトリックスへの抗生物質の結合は、好ましく
は、pH約７．０〜８．０において行ない、そしてその溶
離はより塩基性のpH値（好ましくは９．０〜１０．５）
において水性塩基により実施する。この水性塩基は、必
要に応じて、下に定義するような極性有機溶媒、例え
ば、極性水混和性溶媒の存在下に、アンモニア、アルカ
リもしくはアルカリ金属水酸化物または塩基性緩衝液で
あることができる。
は、pH約７．０〜８．０において行ない、そしてその溶
離はより塩基性のpH値（好ましくは９．０〜１０．５）
において水性塩基により実施する。この水性塩基は、必
要に応じて、下に定義するような極性有機溶媒、例え
ば、極性水混和性溶媒の存在下に、アンモニア、アルカ
リもしくはアルカリ金属水酸化物または塩基性緩衝液で
あることができる。
カラムを、必要に応じて、塩類、尿素および／または水
混和性溶媒を含有する水性緩衝液pH４〜８で洗浄するこ
とにより不純物を除去した後、抗生物質Ａ４０９２６を
上の溶離混合物で溶離する。次いで、抗生物質は、好ま
しくは、水と最小共沸混合物を形成することのできる有
機溶媒との共沸蒸留により、プールした抗生物質含有分
画から水を除去し、次いで非溶媒を添加して所望生産物
を沈殿させることによって回収する。
混和性溶媒を含有する水性緩衝液pH４〜８で洗浄するこ
とにより不純物を除去した後、抗生物質Ａ４０９２６を
上の溶離混合物で溶離する。次いで、抗生物質は、好ま
しくは、水と最小共沸混合物を形成することのできる有
機溶媒との共沸蒸留により、プールした抗生物質含有分
画から水を除去し、次いで非溶媒を添加して所望生産物
を沈殿させることによって回収する。
水と最小共沸混合物を形成することのできる有機溶媒の
代表的例は、ｎ−ブタノール、ベンゼン、トルエン、ブ
チルエーテル、四塩化炭素、クロロホルム、シクロヘキ
サン、２，５−ジエメチルフラン、ヘキサンおよびｍ−
キシレンである。好ましくは溶媒はｎ−ブタノールであ
る。
代表的例は、ｎ−ブタノール、ベンゼン、トルエン、ブ
チルエーテル、四塩化炭素、クロロホルム、シクロヘキ
サン、２，５−ジエメチルフラン、ヘキサンおよびｍ−
キシレンである。好ましくは溶媒はｎ−ブタノールであ
る。
非溶媒の例は、石油エーテル、低級アルキルエーテル、
例えば、エチルエーテル、プロピルエーテルおよびブチ
ルエーエル、および低級アルキルケトン、例えば、アセ
トンである。
例えば、エチルエーテル、プロピルエーテルおよびブチ
ルエーエル、および低級アルキルケトン、例えば、アセ
トンである。
あるいは、プールした抗生物質含有分画を、好ましくは
上に定義した有機溶媒との共沸蒸留により、小さい体積
に濃縮し、そして得られる水溶液を凍結乾燥する。
上に定義した有機溶媒との共沸蒸留により、小さい体積
に濃縮し、そして得られる水溶液を凍結乾燥する。
溶離において使用する水性塩基が非揮発性であるとき、
それを中和し、濃縮物を脱塩した後、沈殿または凍結乾
燥を実施することが必要であろう。
それを中和し、濃縮物を脱塩した後、沈殿または凍結乾
燥を実施することが必要であろう。
便利な脱塩法は、抗生物質含有水溶液をシラン化シリカ
ゲルのカラムに適用し、蒸留水で洗浄し、そして極性水
混和性溶媒と水との混合物で溶離することを含む。
ゲルのカラムに適用し、蒸留水で洗浄し、そして極性水
混和性溶媒と水との混合物で溶離することを含む。
極性水混和性溶媒の代表例は、水溶性アルコール（例え
ば、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ｎ−
ブタノール）、アセトン、アセトニトリル、低級アルキ
ルアルカノエート（例えば、酢酸エチル）、テトラヒド
ロフラン、ジオキサンおよびジメチルホルムアミドおよ
びそのらの混合物である。好ましい極性水混和性溶媒は
アセトニトリルである。
ば、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ｎ−
ブタノール）、アセトン、アセトニトリル、低級アルキ
ルアルカノエート（例えば、酢酸エチル）、テトラヒド
ロフラン、ジオキサンおよびジメチルホルムアミドおよ
びそのらの混合物である。好ましい極性水混和性溶媒は
アセトニトリルである。
あるいは、脱塩は抗生物質含有溶液を上に定義した親和
性カラムに適用し、蒸留水で洗浄し、そして親和性クロ
マトグラフィーの溶離について前述した揮発性水性塩基
で溶離することにより実施することができる。そのよう
にして得られる生産物は、抗生物質Ａ４０９２６複合体
である。必要に応じて、それらをさらに精製するか、あ
るいはその因子Ａ、Ｂ、Ｂ０、ＰＡおよびＰＢの分離に
かけることができる。
性カラムに適用し、蒸留水で洗浄し、そして親和性クロ
マトグラフィーの溶離について前述した揮発性水性塩基
で溶離することにより実施することができる。そのよう
にして得られる生産物は、抗生物質Ａ４０９２６複合体
である。必要に応じて、それらをさらに精製するか、あ
るいはその因子Ａ、Ｂ、Ｂ０、ＰＡおよびＰＢの分離に
かけることができる。
純粋な抗生物質Ａ４０９２６複合体を得るための便利な
手順は、上のようにして得られる複合体を親和性クロマ
トグラフィーのカラムによりさらに精製することにより
代表される。上と同一の静止相（固定化されたＤ−アラ
ニル−Ｄ−アラニン）が一般に使用され、そして所望の
抗生物質は前述の固定化されたＤ−アラニル−Ｄ−アラ
ニンを使用する親和性クロマトグラフィー手順に従うこ
とにより溶離される。好ましい固定化されたＤ−アラニ
ル−Ｄ−アラニンはセファロース（Ｓｅｐｈａｒｏｓ
ｅ）−ε−アミノカプロイル−Ｄ−アラニル−Ｄ−アラ
ニンであり、好ましい平衡化混合物はpH７〜８に調節し
た２モルのＮａＣｌを含有する０．１６％（ｗ／ｖ）の
アンモニアであり、好ましい洗浄溶液はpH８〜９．５に
調節した２モルのＮａＣｌを含有する０．１６％（ｗ／
ｖ）のアンモニアであり、好ましい溶離混合物はpH１
０．５〜１２に調節した２モルのＮａＣｌを含有する
０．１６％（ｗ／ｖ）のアンモニアであり、および最も
好ましい混合物はpH１１．５に調節した混合物である。
手順は、上のようにして得られる複合体を親和性クロマ
トグラフィーのカラムによりさらに精製することにより
代表される。上と同一の静止相（固定化されたＤ−アラ
ニル−Ｄ−アラニン）が一般に使用され、そして所望の
抗生物質は前述の固定化されたＤ−アラニル−Ｄ−アラ
ニンを使用する親和性クロマトグラフィー手順に従うこ
とにより溶離される。好ましい固定化されたＤ−アラニ
ル−Ｄ−アラニンはセファロース（Ｓｅｐｈａｒｏｓ
ｅ）−ε−アミノカプロイル−Ｄ−アラニル−Ｄ−アラ
ニンであり、好ましい平衡化混合物はpH７〜８に調節し
た２モルのＮａＣｌを含有する０．１６％（ｗ／ｖ）の
アンモニアであり、好ましい洗浄溶液はpH８〜９．５に
調節した２モルのＮａＣｌを含有する０．１６％（ｗ／
ｖ）のアンモニアであり、好ましい溶離混合物はpH１
０．５〜１２に調節した２モルのＮａＣｌを含有する
０．１６％（ｗ／ｖ）のアンモニアであり、および最も
好ましい混合物はpH１１．５に調節した混合物である。
抗生物質Ａ４０９２６因子、すなわち、抗生物質Ａ４０
９２６因子Ａ、抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ、抗生物質
Ａ４０９２６因子Ｂ０、抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡ
および抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＢは、抗生物質Ａ４
０９２６複合体の溶液からカラムクロマトグラフィーに
より、好ましくは逆相クロマトグラフィーにより単離さ
れる。逆相カラムクロマトグラフィーの場合において好
ましい静止相はシラン化シリカゲルである。しかしなが
ら、すぐれた結果は、また、費官能化ポリスチレンおよ
びアクリル樹脂、例えば、商品名、アンバーライト（Ａ
ｍｂｅｒｌｉｔｅ）ＸＡＤ−２、ＸＡＤ−４、ＸＡＤ−
７およびＸＡＤ−８（ローム・アンド・ハースＹ）また
はジアイオン（Ｄｉａｉｏｎ）ＨＰ２０（ミツビシ）の
カラムクロマトグラフィーを使用して得ることができ
る。逆相精製工程を静止相としてシラン化シリカゲルよ
り達成する場合において、カラムは好ましくは緩衝化水
溶液でpH４〜９、好ましくは５．５〜６．５において予
備平衡化し、次いで同一緩衝化溶液中において極性水混
和性溶媒の直線勾配で溶離する。極性水混和性溶媒の代
表例は、水溶性アルコール（例えば、メタノール、エタ
ノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール）、アセト
ン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、ジオキサン
およびジメチルホルムアミドおよびそれらの混合物であ
る。好ましい水混和性溶媒はアセトニトリルである。
９２６因子Ａ、抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ、抗生物質
Ａ４０９２６因子Ｂ０、抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡ
および抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＢは、抗生物質Ａ４
０９２６複合体の溶液からカラムクロマトグラフィーに
より、好ましくは逆相クロマトグラフィーにより単離さ
れる。逆相カラムクロマトグラフィーの場合において好
ましい静止相はシラン化シリカゲルである。しかしなが
ら、すぐれた結果は、また、費官能化ポリスチレンおよ
びアクリル樹脂、例えば、商品名、アンバーライト（Ａ
ｍｂｅｒｌｉｔｅ）ＸＡＤ−２、ＸＡＤ−４、ＸＡＤ−
７およびＸＡＤ−８（ローム・アンド・ハースＹ）また
はジアイオン（Ｄｉａｉｏｎ）ＨＰ２０（ミツビシ）の
カラムクロマトグラフィーを使用して得ることができ
る。逆相精製工程を静止相としてシラン化シリカゲルよ
り達成する場合において、カラムは好ましくは緩衝化水
溶液でpH４〜９、好ましくは５．５〜６．５において予
備平衡化し、次いで同一緩衝化溶液中において極性水混
和性溶媒の直線勾配で溶離する。極性水混和性溶媒の代
表例は、水溶性アルコール（例えば、メタノール、エタ
ノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール）、アセト
ン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、ジオキサン
およびジメチルホルムアミドおよびそれらの混合物であ
る。好ましい水混和性溶媒はアセトニトリルである。
溶離された分画をその抗生物質含量について、感受性微
生物についての通常のバイオアッセイ、例えば、紙ディ
スクまたは寒天−拡散アッセイによりアッセイする。感
受性有機体の例は、バシルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌ
ｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）およびストレプトマイセス
・アウレウス（Ｓ． ａｕｒｅｕｓ）である。
生物についての通常のバイオアッセイ、例えば、紙ディ
スクまたは寒天−拡散アッセイによりアッセイする。感
受性有機体の例は、バシルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌ
ｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）およびストレプトマイセス
・アウレウス（Ｓ． ａｕｒｅｕｓ）である。
クロマトグラフィーは、また、ＴＬＣまたはＨＰＬＣ技
術により便利に監視される。
術により便利に監視される。
好ましいＨＰＬＣ技術は、好ましくは５μｍの直径を有
するＣ−１８アルキル基で官能化されたシラン化シリカ
ゲルの多孔質および球形のカラム［例えば、５μｍのウ
ルトラスフェアー（Ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒｅ ）ＯＤＳ
アルテックス（Ａｌｔｅｘ）；ベックマン・カンパニ
ー］、Ｃ−１８アルキル基で官能化されたシリカゲルで
ある予備カラム［例えば、ＰＲ １８ ブラウンリー・
ラブス（Ｂｒｏｗｎｌｅｅ Ｌａｂｓ）］および水性緩
衝化溶液中の極性水混和性溶媒、例えば、前述のうちの
一種の直線勾配混合物である溶離剤を使用する逆相ＨＰ
ＬＣにより代表される。
するＣ−１８アルキル基で官能化されたシラン化シリカ
ゲルの多孔質および球形のカラム［例えば、５μｍのウ
ルトラスフェアー（Ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒｅ ）ＯＤＳ
アルテックス（Ａｌｔｅｘ）；ベックマン・カンパニ
ー］、Ｃ−１８アルキル基で官能化されたシリカゲルで
ある予備カラム［例えば、ＰＲ １８ ブラウンリー・
ラブス（Ｂｒｏｗｎｌｅｅ Ｌａｂｓ）］および水性緩
衝化溶液中の極性水混和性溶媒、例えば、前述のうちの
一種の直線勾配混合物である溶離剤を使用する逆相ＨＰ
ＬＣにより代表される。
好ましくは、この溶液はpH５〜７に調節される。最も好
ましい溶離剤は、溶離剤Ａ中の溶離剤Ｂの５〜６０％の
直線勾配により代表され、ここで溶媒Ａはアセトニトリ
ル／水性緩衝液の、pH５〜７、１０：９０、の混合物で
あり、そして溶媒Ｂはアセトニトリル／水性緩衝液の、
pH５〜７、７０：３０、の混合物である。この分野にお
いて知られているように、多くの物質を内部標準として
使用することができる。非常に便利なものは、この場合
において、このＨＰＣＬ系において本発明の化合物に近
接した保持時間を有するテイコプラニンＡ２成分２［グ
ルッポ・レベチット（Ｇｒｕｐｐｏ Ｌｅｐｅｔｉｔ）
Ｓ．ｐ．Ａ．）］である。この標準物質は、既知であ
り、そして英国出願（ＧＢ−Ａ）２１２１４０１号に記
載されている。
ましい溶離剤は、溶離剤Ａ中の溶離剤Ｂの５〜６０％の
直線勾配により代表され、ここで溶媒Ａはアセトニトリ
ル／水性緩衝液の、pH５〜７、１０：９０、の混合物で
あり、そして溶媒Ｂはアセトニトリル／水性緩衝液の、
pH５〜７、７０：３０、の混合物である。この分野にお
いて知られているように、多くの物質を内部標準として
使用することができる。非常に便利なものは、この場合
において、このＨＰＣＬ系において本発明の化合物に近
接した保持時間を有するテイコプラニンＡ２成分２［グ
ルッポ・レベチット（Ｇｒｕｐｐｏ Ｌｅｐｅｔｉｔ）
Ｓ．ｐ．Ａ．）］である。この標準物質は、既知であ
り、そして英国出願（ＧＢ−Ａ）２１２１４０１号に記
載されている。
同様な抗生物質含量を有する分画を、プールし、および
前述のような脱塩して、本質的に純粋な抗生物質Ａ４０
９２６因子Ａ、因子Ｂ、因子Ｂ０、因子ＰＡ、および因
子ＰＢを得る。
前述のような脱塩して、本質的に純粋な抗生物質Ａ４０
９２６因子Ａ、因子Ｂ、因子Ｂ０、因子ＰＡ、および因
子ＰＢを得る。
本質的に純粋な抗生物質Ａ４０９２６因子Ａおよび抗生
物質Ａ４０９２６因子Ｂ、抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ
０、抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡおよび抗生物質Ａ４
０９２６因子ＰＢは、それらを含有する分画から、既知
の技術により、例えば、凍結乾燥、非溶媒による沈殿ま
たは水溶液のpHの変化による沈殿により得られる。
物質Ａ４０９２６因子Ｂ、抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ
０、抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡおよび抗生物質Ａ４
０９２６因子ＰＢは、それらを含有する分画から、既知
の技術により、例えば、凍結乾燥、非溶媒による沈殿ま
たは水溶液のpHの変化による沈殿により得られる。
便利な手順は、水を共沸混合物を形成することのできる
溶媒を添加し、水を共沸蒸留により除去し、次いで前述
したような非溶媒の添加後得られた沈殿を濾過すること
を含む。
溶媒を添加し、水を共沸蒸留により除去し、次いで前述
したような非溶媒の添加後得られた沈殿を濾過すること
を含む。
抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡおよびＰＢは、少なくと
もある醗酵条件下に、抗生物質Ａ４０９２６生産性微生
物の主要な抗生物質の生産物である。抗生物質Ａ４０９
２６因子ＡおよびＢは、それぞれ抗生物質Ａ４０９２６
因子ＰＡおよび因子ＰＢの主な転化生産物（ｔｒａｓｆ
ｏｒｍａｔｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔ）であり、そしてし
ばしば醗酵肉汁中にすでに存在する。
もある醗酵条件下に、抗生物質Ａ４０９２６生産性微生
物の主要な抗生物質の生産物である。抗生物質Ａ４０９
２６因子ＡおよびＢは、それぞれ抗生物質Ａ４０９２６
因子ＰＡおよび因子ＰＢの主な転化生産物（ｔｒａｓｆ
ｏｒｍａｔｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔ）であり、そしてし
ばしば醗酵肉汁中にすでに存在する。
塩基性条件下に、抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡは抗生
物質Ａ４０９２６因子Ａに転化することができ、そして
個性物質Ａ４０９２６因子ＰＢは抗生物質Ａ４０９２６
因子Ｂに転化することができるという事実が発見され
た。例えば、抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡおよび抗生
物質Ａ４０９２６因子ＰＢは、０．５〜１０％の水性ア
ンモニアまたは他の親核性塩基、例えば、有機アミンで
室温において８〜２４時間処理することにより、それぞ
れ抗生物質Ａ４０９２６因子Ａおよび抗生物質Ａ４０９
２６因子Ｂに転化される。結局、醗酵肉汁、または抗生
物質Ａ４０９２６含有抽出物またはその濃縮物をある時
間塩基性条件下に（例えば、親核塩基の水溶液、＞pH
９、一夜）放置すると、抗生物質Ａ４０９２６因子Ａお
よび抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂに富んだ抗生物質Ａ４
０９２６複合体が得られるであろう。醗酵肉汁、抽出物
またはその濃縮物を塩基性環境に暴露する時間が短い
と、抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡおよび抗生物質Ａ４
０９２６因子ＰＢに富んだ抗生物質Ａ４０９２６複合体
が得られる。
物質Ａ４０９２６因子Ａに転化することができ、そして
個性物質Ａ４０９２６因子ＰＢは抗生物質Ａ４０９２６
因子Ｂに転化することができるという事実が発見され
た。例えば、抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡおよび抗生
物質Ａ４０９２６因子ＰＢは、０．５〜１０％の水性ア
ンモニアまたは他の親核性塩基、例えば、有機アミンで
室温において８〜２４時間処理することにより、それぞ
れ抗生物質Ａ４０９２６因子Ａおよび抗生物質Ａ４０９
２６因子Ｂに転化される。結局、醗酵肉汁、または抗生
物質Ａ４０９２６含有抽出物またはその濃縮物をある時
間塩基性条件下に（例えば、親核塩基の水溶液、＞pH
９、一夜）放置すると、抗生物質Ａ４０９２６因子Ａお
よび抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂに富んだ抗生物質Ａ４
０９２６複合体が得られるであろう。醗酵肉汁、抽出物
またはその濃縮物を塩基性環境に暴露する時間が短い
と、抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡおよび抗生物質Ａ４
０９２６因子ＰＢに富んだ抗生物質Ａ４０９２６複合体
が得られる。
因子Ａおよび因子Ｂに富んだ抗生物質Ａ４０９２６複合
体を得るために好ましい手順は、それゆえ、抗生物質Ａ
４０９２６複合体（主として抗生物質Ａ４０９２６因子
ＰＡおよびＰＢを含有する）を室温において８〜１２時
間水性親核塩基、例えば、水性アンモニア、中に放置
し、次いで所望の抗生物質の複合体を前述のようにして
単離することを含む。
体を得るために好ましい手順は、それゆえ、抗生物質Ａ
４０９２６複合体（主として抗生物質Ａ４０９２６因子
ＰＡおよびＰＢを含有する）を室温において８〜１２時
間水性親核塩基、例えば、水性アンモニア、中に放置
し、次いで所望の抗生物質の複合体を前述のようにして
単離することを含む。
抗生物質Ａ４０９２６含有溶液の例は、醗酵肉汁、抽出
および親和性クロマトグラフィー溶離分画である。
および親和性クロマトグラフィー溶離分画である。
純粋な抗生物質Ａ４０９２６は、粗製複合体を親和性ク
ロマトグラフィーにより前述のようにしてさらに精製す
ることによって得ることができる。
ロマトグラフィーにより前述のようにしてさらに精製す
ることによって得ることができる。
そのようにして得られる生産物は、その純粋な因子から
誘導されうる生物学的および物理化学的性質を有し、実
施例において抗生物質Ａ４０９２６複合体ＡＢと呼ぶこ
とにする。
誘導されうる生物学的および物理化学的性質を有し、実
施例において抗生物質Ａ４０９２６複合体ＡＢと呼ぶこ
とにする。
因子ＰＡおよびＰＢ中に抗生物質Ａ４０９２６複合体調
製物を濃縮するために好ましい手順は、親和性クロマト
グラフィー溶離分画を酸、好ましくは鉱酸、例えば、硫
酸または塩酸で急速に中和することを含む。
製物を濃縮するために好ましい手順は、親和性クロマト
グラフィー溶離分画を酸、好ましくは鉱酸、例えば、硫
酸または塩酸で急速に中和することを含む。
この複合体から純粋な抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡお
よびＰＢを単離することは、上に報告した手順のうちの
１つに従い達成することができる。
よびＰＢを単離することは、上に報告した手順のうちの
１つに従い達成することができる。
好ましい手順は、中圧（５〜５０バール）または高圧
（１００〜２００バール）下の、好ましくはテンレスの
カム中の、逆相液体クロマトグラフィーを含む。固体相
は２〜１８個、最も好ましくはＣ１８）の炭化水素相ま
たはフェニル基でシラン化されたシリカゲルであること
ができ、そして溶離剤は上に定義した極性水混和性溶媒
と樹脂と適合性のpH（好ましくはpH４〜８）の水性緩衝
液との混合物である。
（１００〜２００バール）下の、好ましくはテンレスの
カム中の、逆相液体クロマトグラフィーを含む。固体相
は２〜１８個、最も好ましくはＣ１８）の炭化水素相ま
たはフェニル基でシラン化されたシリカゲルであること
ができ、そして溶離剤は上に定義した極性水混和性溶媒
と樹脂と適合性のpH（好ましくはpH４〜８）の水性緩衝
液との混合物である。
溶離は通常のように監視し、均質な抗生物質含量を有す
る分画をプールし、次いで前述のように処理して、下に
報告する特性を有する純粋な成分を単離する。
る分画をプールし、次いで前述のように処理して、下に
報告する特性を有する純粋な成分を単離する。
高性能のＨＰＬＣにより、抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ
は実際には因子Ｂ０および因子Ｂ１と命名される２種類
の因子の混合物であることが示された。抗生物質Ａ４０
９２６因子Ｂのほぼ９０％を占める抗生物質Ａ４０９２
６因子Ｂ０は、因子Ｂの物理化学的特性の点Ｄにおいて
後述する系においてテイコプラニンＡ２成分２に関して
１．２２のＲｔを有する因子であり、一方抗生物質Ａ４
０９２６因子Ｂのほぼ１０％を占める因子Ｂ１は同一系
において１．２７のＲｔを有する因子である。
は実際には因子Ｂ０および因子Ｂ１と命名される２種類
の因子の混合物であることが示された。抗生物質Ａ４０
９２６因子Ｂのほぼ９０％を占める抗生物質Ａ４０９２
６因子Ｂ０は、因子Ｂの物理化学的特性の点Ｄにおいて
後述する系においてテイコプラニンＡ２成分２に関して
１．２２のＲｔを有する因子であり、一方抗生物質Ａ４
０９２６因子Ｂのほぼ１０％を占める因子Ｂ１は同一系
において１．２７のＲｔを有する因子である。
純粋な抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ０は、抗生物質Ａ４
０９２６因子Ｂを、例えば、その単離に使用して逆相ク
ロマトグラフィー手順を反復することによりさらに精製
して得られる。抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ０の物理化
学的および生物学的性質は抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ
のそれらと実質的に同一であるが、ただし上の引用した
ものに類似する系におけるＨＰＬＣ分析において、それ
は１つのみのピーク（記載するＨＰＬＣ系においてテイ
コプラニンＡ２成分２に関してＲｔ １．２２）をも
つ。
０９２６因子Ｂを、例えば、その単離に使用して逆相ク
ロマトグラフィー手順を反復することによりさらに精製
して得られる。抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ０の物理化
学的および生物学的性質は抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ
のそれらと実質的に同一であるが、ただし上の引用した
ものに類似する系におけるＨＰＬＣ分析において、それ
は１つのみのピーク（記載するＨＰＬＣ系においてテイ
コプラニンＡ２成分２に関してＲｔ １．２２）をも
つ。
本明細書における抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂと抗生物
質Ａ４０９２６因子Ｂ０との間に上に概説した類似性の
ため、抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂの生物学的性質につ
いての言及は、抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂの主要成分
（約９０％）でありかつ主としてその生物学的性質に寄
与する抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ０をも言及するもの
として理解されたい。
質Ａ４０９２６因子Ｂ０との間に上に概説した類似性の
ため、抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂの生物学的性質につ
いての言及は、抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂの主要成分
（約９０％）でありかつ主としてその生物学的性質に寄
与する抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ０をも言及するもの
として理解されたい。
したがって、本発明の抗生物質は醗酵ブロスから単離す
ることができ、あるいは官能化されたポリスチレン、ア
クリルまたはポリデキストランのマトリックスを包含す
る強いまたは弱いアニオン樹脂によりさらに精製するこ
とができる。弱アニオン交換樹脂の例は、次の商品名で
販売されているものである：ドウウェクス（Ｄｏｗｅ
ｘ）またはＷＧＲ（ダウ・ケミカル）、アンバーライト
ＩＲＡ−７３（ローム・アンド・ハース）、ＤＥＡＥ−
セファデクス（Ｓｅｐａｈｄｅｘ）（ファーマシア）。
本発明に従い使用することのできる強アニオン交換樹脂
の例は、次の商品名で販売されているものを包含する：
ドウウェクスＭＳＡ−１、ＳＢＲ、ＳＢＲ−Ｐ（ダウ・
ケミカル）、アンバーライトＩＲ−９０４（ローム・ア
ンド・ハース）およびＱＡＥ−セファデクス（ファーマ
シア）。
ることができ、あるいは官能化されたポリスチレン、ア
クリルまたはポリデキストランのマトリックスを包含す
る強いまたは弱いアニオン樹脂によりさらに精製するこ
とができる。弱アニオン交換樹脂の例は、次の商品名で
販売されているものである：ドウウェクス（Ｄｏｗｅ
ｘ）またはＷＧＲ（ダウ・ケミカル）、アンバーライト
ＩＲＡ−７３（ローム・アンド・ハース）、ＤＥＡＥ−
セファデクス（Ｓｅｐａｈｄｅｘ）（ファーマシア）。
本発明に従い使用することのできる強アニオン交換樹脂
の例は、次の商品名で販売されているものを包含する：
ドウウェクスＭＳＡ−１、ＳＢＲ、ＳＢＲ−Ｐ（ダウ・
ケミカル）、アンバーライトＩＲ−９０４（ローム・ア
ンド・ハース）およびＱＡＥ−セファデクス（ファーマ
シア）。
これらの樹脂からの本発明の抗生物質の溶離は、水また
は水と有機水混和性溶媒、例えば、低級アルコール（例
えば、Ｃ１−Ｃ４）アルカノール）または低級アルキル
ケトン（例えば、アセトン）との混合物中の、電解質、
例えば、ナトリウムまたはカリウムのハドロクロライド
の水溶液の直線勾配により実施される。
は水と有機水混和性溶媒、例えば、低級アルコール（例
えば、Ｃ１−Ｃ４）アルカノール）または低級アルキル
ケトン（例えば、アセトン）との混合物中の、電解質、
例えば、ナトリウムまたはカリウムのハドロクロライド
の水溶液の直線勾配により実施される。
前述のように、本発明の抗生物質は、酸性および塩基性
の官能性を有し、そして従来法に従い塩類を形成するこ
とができる。本発明の化合物の代表的なかつ適当な付加
塩類は、有機酸および無機酸との標準の反応によって形
成される塩類を包含する。有機酸および無機酸の例は、
次の通りである：塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、酢
酸、トリフルオロ酢酸、トリクロロ酢酸、コハク酸、ク
エン酸、アスコルビン酸、乳酸、マレイ酸、フマル酸、
パルミチン酸、コール酸、パモン酸、ムチン酸、グルタ
ミン酸、ショウノウ酸、グルタル酸、グルコール酸、フ
タル酸、酒石酸、ラウリン酸、ステアリン酸、サリチル
酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ソルビン
酸、ピンリン酸、安息香酸、桂皮酸などの酸。
の官能性を有し、そして従来法に従い塩類を形成するこ
とができる。本発明の化合物の代表的なかつ適当な付加
塩類は、有機酸および無機酸との標準の反応によって形
成される塩類を包含する。有機酸および無機酸の例は、
次の通りである：塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、酢
酸、トリフルオロ酢酸、トリクロロ酢酸、コハク酸、ク
エン酸、アスコルビン酸、乳酸、マレイ酸、フマル酸、
パルミチン酸、コール酸、パモン酸、ムチン酸、グルタ
ミン酸、ショウノウ酸、グルタル酸、グルコール酸、フ
タル酸、酒石酸、ラウリン酸、ステアリン酸、サリチル
酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ソルビン
酸、ピンリン酸、安息香酸、桂皮酸などの酸。
これらの塩基の代表例は、次の通りである：アルカリ金
属またはアルカリ土類金属の水酸化物、例えば、ナトリ
ウム、カリウム、およびカルシウムの水酸化物；アンモ
ニアおよび有機アミン、脂肪族、脂環族または芳香族の
アミン、例えば、メチルアミン、ジメチルアミン、トリ
メチルアミン、およびピコリン。
属またはアルカリ土類金属の水酸化物、例えば、ナトリ
ウム、カリウム、およびカルシウムの水酸化物；アンモ
ニアおよび有機アミン、脂肪族、脂環族または芳香族の
アミン、例えば、メチルアミン、ジメチルアミン、トリ
メチルアミン、およびピコリン。
本発明の遊離アミノ化合物または塩でない化合物の対応
する付加塩への転化、およびその逆、すなわち、本発明
の化合物の付加塩の塩ではないまたは遊離アミンの形態
への転化は、通常の技術の範囲内であり、そして本発明
の範囲に包含される。
する付加塩への転化、およびその逆、すなわち、本発明
の化合物の付加塩の塩ではないまたは遊離アミンの形態
への転化は、通常の技術の範囲内であり、そして本発明
の範囲に包含される。
例えば、本発明の化合物は、塩ではい形態において水性
溶媒中に溶解し、そしてわずかにモル過剰量の選択され
た酸または塩化を添加することにより、対応する酸また
は塩基の付加塩に転化することができる。次いで、得ら
れる溶液または懸濁液を凍結乾燥して所望の塩を回収す
る。
溶媒中に溶解し、そしてわずかにモル過剰量の選択され
た酸または塩化を添加することにより、対応する酸また
は塩基の付加塩に転化することができる。次いで、得ら
れる溶液または懸濁液を凍結乾燥して所望の塩を回収す
る。
最終の塩が塩でない形態で可溶性の溶媒中に不溶性であ
る場合、化学的量論量またはわずかにモル過剰量の選択
された酸または塩基の添加後、塩でない形態の有機溶液
から濾過により回収される。塩でない形態は水性溶媒中
に溶解した対応する酸または塩基の塩から調製すること
ができ、次いでこれを中和して塩でない形態を遊離させ
る。中和に引き続いて、脱塩が必要であるとき、普通の
脱塩手順を用いることができる。例えば、シラン化シリ
カゲル、官能化されていないポリスチレン、アクリルお
よび調節された孔のポリデキストランの樹脂（例えば、
セファデクス２０）または活性炭を用いるカラムクロマ
トグラフィーを便利に使用することができる。所望塩を
水溶液で溶離した後、所望の生産物を水と極性または非
極性の有機溶媒との混合物の直線勾配または階段的勾
配、例えば、アセトニトリル／水５０：５０から１００
％のアセトニトリルにより溶離する。
る場合、化学的量論量またはわずかにモル過剰量の選択
された酸または塩基の添加後、塩でない形態の有機溶液
から濾過により回収される。塩でない形態は水性溶媒中
に溶解した対応する酸または塩基の塩から調製すること
ができ、次いでこれを中和して塩でない形態を遊離させ
る。中和に引き続いて、脱塩が必要であるとき、普通の
脱塩手順を用いることができる。例えば、シラン化シリ
カゲル、官能化されていないポリスチレン、アクリルお
よび調節された孔のポリデキストランの樹脂（例えば、
セファデクス２０）または活性炭を用いるカラムクロマ
トグラフィーを便利に使用することができる。所望塩を
水溶液で溶離した後、所望の生産物を水と極性または非
極性の有機溶媒との混合物の直線勾配または階段的勾
配、例えば、アセトニトリル／水５０：５０から１００
％のアセトニトリルにより溶離する。
この分野において知られているように、製薬学的に許容
されうる酸（塩基）または製薬学的に許容されない酸
（塩基）との塩形成を便利な精製技術として使用するこ
とができる。形成および単離後、抗生物質Ａ４０９２６
を対応する塩でない形態または製薬学的に許容されうる
塩に転化することができる。
されうる酸（塩基）または製薬学的に許容されない酸
（塩基）との塩形成を便利な精製技術として使用するこ
とができる。形成および単離後、抗生物質Ａ４０９２６
を対応する塩でない形態または製薬学的に許容されうる
塩に転化することができる。
ある場合において、本発明の化合物の塩基付加塩は水お
よび親水性溶媒中に一層可溶性である。
よび親水性溶媒中に一層可溶性である。
抗生物質Ａ４０９２６因子Ａの物理化学的特性 Ｂ）添付図面の第２図に示され、かつ次の吸収最大を示
す紫外線吸収スペクトル（cm-1）： ３７００−３１００、３１００−２８００（ｎｕｊｏ
ｌ）；１６５５；１６２０−１５６０；１５１０；１４
８０；１４１０（ｎｕｊｏｌ）；１３７５（ｎｕｊｏ
ｌ）；１３２０−１２５０；１２５０−１１９０；１１
００−９５０；８４５；８１０；７２０（ｎｕｊｏ
ｌ）、 Ｃ）添付図面の第３図に示されかつＤＭＳＯｄ６（ヘキ
サデューテロジメチルスルホキシド）中で記録した２７
０MHzにおける信号（ppm）の次の群を示す１Ｈ−ＮＭＲ
スペクトル（内部標準、ＴＭＳ（０．００ppm）、（δ
＝ppm）： δ０．８６（ｔ、６Ｈ）；１．２１（約１１Ｈ）；１．
４３（２Ｈ）；２．０１（２Ｈ）；２．３１−２．３
４）（３Ｈ）；４−６．２（約１６Ｈ）；６．２−８
（約２３Ｈ）；８．４４、９．２２、 ９．６６（広い
帯；移動性プロトン） ２．４−４：Ｈ２Ｏのピークからの干渉、 Ｄ）次の条件下に逆相ＨＰＬＣで分析したとき、テイコ
プラニンＡ２成分２（Ｒｔ＝２０．３分）に関する１．
１２の保持時間（Ｒｔ）： カラム：ウルトラスフェアー（Ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒ
ｅ）ＯＤＳ（５μｍ）アルテックス（Ａｌｔｅｘ）［ベ
ックマン（Ｂｅｃｋｍａｎ）］４．６mm（内径）×２５
０mm 予備カラム：ブラウンリー・ラブス（Ｂｒｏｗｎｌｅｅ
Ｌａｂｓ）ＲＰ １８（５μｍ） 溶離剤Ａ： ＣＨ３ＣＮ １０％ ＮａＨ２ＰＯ４・Ｈ２Ｏ （２．５ｇ／１） ９０％ pH６．０に調節、 溶離剤Ｂ： ＣＨ３ＣＮ ７０％ ＮａＨ２ＰＯ４・Ｈ２Ｏ （２．５ｇ／１） ３０％ pH６．０に調節、 溶離：溶離剤Ａ中の５％から６０％への溶離剤Ｂの直線
勾配、４０分、 流速：１．８ml／分、 ＵＶ検出器：２５４ｎｍ、 内部標準：テイコプラニンＡ２成分２［グルッポ・レペ
チット（Ｇｒｕｐｐｏ Ｌｅｐｅｔｉｔ）Ｓ．Ｐ．
Ａ．］、 同一の条件下に、テストステロン［ルセル・ウクラフ
（Ｒｏｕｓｓｅｌ Ｕｃｌａｆ）に関する保持時間は
０．６０である、 Ｅ）資料を不活性雰囲気（△ｗ ４．６％）のもとで約
１４０℃において前もって乾燥した後、元素分析は次の
近似百分率組成（平均）を示す： 炭素５５．８２％；水素５．１７％；窒素６．３１％；
塩素（合計）４．２４％；塩素（イオン性）０．３７
％、 空気中で９００℃における無機残留物：１．２％、 Ｆ）過剰のＨＣ１の添加後にＫＯＨで滴定すると、２−
メトキシエタノール（ＭＣＳ）：水、４：１、中の酸−
塩基の滴定のプロフィルは、次のｐｋＭＣＳを有するイ
オン化作用を示す：４．６、５．６、７．２、９．２、 Ｇ）次のクロマトグラフィー系における０．２４のＲｆ
および０．７０のテイコプラニンＡ２成分２に関するＲ
ｆ値： ５％（ｗ／ｖ）の水性 Ｎａ２ＳＯ４ ７０ アセトニトリル ３０ シラン化シリカゲル６０Ｆ２５４メルク（Ｍｅｒｃｋ）
板（層の厚さ０．２５mm） 可視化： −ＵＶ光 −パウリ試薬（Ｐａｕｌｙ Ｒｅａｇｅｎｔ）、すなわ
ち、ジアゾ化スルファニル酸［ジャーナル・オブ・クロ
マトグラフィー（Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ．）２０，１
７１（１９６５）、ツアイトシュリフト・フュール・フ
ィジカリッシェ・ヘミー（Ｚ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．）２９２，９９（１９５３）］を使用する黄色 −Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓＡＴＣＣ ６６３３を使用する
最小デイビス（Ｄａｖｉｓ）培地上のバイオオートグラ
フィー、 Ｈ）１７１７にＭ＋Ｈ ピークを示すＦＡＢ−ＭＳスペ
クトルからデジューム（ｄｅｓｕｍｅ）した約１７１６
の分子量、 抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂの物理化学的特性 Ｂ）添付図面の第５図に示され、かつ次の吸収最大を示
す赤外線吸収スペクトル（cm-1）： ３７００−３０８０、３０８０−２７００（ｎｕｊｏ
ｌ）；１７２０−１６２５；１６２５−１５６０；１５
０５；１４６０（ｎｕｊｏｌ）；１３７５（ｎｕｊｏ
ｌ）；１２９５；１２３０；１２１０；１１５０；１１
００−１０４０；１０３０；１０１５；９７０；８９
０；８４０；８１０；７２０（ｎｕｊｏｌ）、 Ｃ）添付図面の第６図に示されかつＤＭＳＯｄ６（ヘキ
サデューテロジメチルスルホキシド）中で記録した２７
０MHz１Ｈ−ＮＭＲにおける信号（ppm）の次の群を示す
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル、内部標準、ＴＭＳ（０．００
ppm）、（δ＝ppm）： δ０．８５（ｄ、イソプロピルのＣＨ３）；１．１５
（約１３Ｈ）；１．４４（約２Ｈ）；２．０２（２
Ｈ）；２．３２−２．３５）（３Ｈ）；４−６．１（約
１６Ｈ）６．１−８（約２３Ｈ）；８．５２、９．３
０、９．６８（広い帯；移動性プロトン） ２，５−４：Ｈ２Ｏのピークから干渉、 Ｄ）次の条件下に逆相ＨＰＬＣで分析したとき、テイコ
プラニンＡ２成分２（Ｒｔ＝２０．３分）に関する１．
２２および１．２７の保持時間（Ｒｔ）： カラム：ウルトラスフェアー（Ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒ
ｅ）ＯＤＳ（５μｍ）アルテックス（Ａｌｔｅｘ）［ベ
ックマン（Ｂｅｃｋｍａｎ）］４．６mm（内径）×２５
０mm 予備カラム：ブラウンリー・ラブス（Ｂｒｏｗｎｌｅｅ
Ｌａｂｓ）ＲＰ １８（５μｍ） 溶離剤Ａ： ＣＨ３ＣＮ １０％ ＮａＨ２ＰＯ４・Ｈ２Ｏ （２．５ｇ／１） ９０％ pH６．０に調節、 溶離剤Ｂ： ＣＨ３ＣＮ ７０％ ＮａＨ２ＰＯ４・Ｈ２Ｏ （２．５ｇ／１） ３０％ pH６．０に調節、 溶離：溶離剤Ａ中の５％から６０％への溶離剤Ｂの直線
勾配、４０分、 流速：１．８ｍ１／分、 ＵＶ検出器：２５４ｎｍ、 内部標準：テイコプラニンＡ２成分２［グルッポ・レペ
チット（Ｇｒｕｐｐｏ Ｌｅｐｅｔｉｔ）Ｓ．Ｐ．
Ａ．］、 Ｅ）試料を不活性雰囲気（Δｗ ９．６％）のもとで約
１４０℃において前もって乾燥した後、元素分析は次の
近似百分率組成（平均）を示す： 炭素５４．０９％；水素５．１３％；窒素６．３４％；
塩素（合計）４．１２％；塩素（イオン性）０．３９
％、 空気中で９００℃における無機残留物：５％、 Ｆ）過剰のＨＣ１（pH２．７）の添加後にＫＯＨで滴定
すると、２−メトキシエタノール（ＭＣＳ）：水、４：
１、中の酸−塩基の滴定のプロフィルは、次のｐｋ
ＭＣＳを有するイオン化作用を示す：４．５、５．６、
７．２、９．２、 Ｇ）次のクロマトグラフィー系における０．２１のＲｆ
および０．５３のテイコプラニンＡ２成分２に関するＲ
ｆ値： ５％（ｗ／ｖ）の水性 Ｎａ２ＳＯ４ ７０ アセトニトリル ３０ シラン化シリカゲル６０Ｆ２５４メルク（Ｍｅｒｃｋ）
板（層の厚さ０．２５mm） 可視化： −ＵＶ光 −パウリ試薬（Ｐａｕｌｙ Ｒｅａｇｅｎｔ）、すなわ
ち、ジアゾ化スルファニル酸［ジャーナル・オブ・クロ
マトグラフィー（Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ．）２０，１
７１（１９６５）、ツアイトシュリフト・フュール・フ
ィジカリッシェ・ヘミー（Ｚ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．）２９２，９９（１９５３）］を使用する黄色 −Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ ＡＴＣＣ ６６３３を使用す
る最小デイビス（Ｄａｖｉｓ）培地上のバイオオートグ
ラフィー、 Ｈ）１７３１にＭ＋Ｈ ピークを示すＦＡＢ−ＭＳスペ
クトルからデジューム（ｄｅｓｕｍｅ）した約１７３０
の分子量、 抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ０の物理化学的性質 Ｂ）添付図面の第５図に示され、かつ次の吸収極大を示
す赤外線吸収スペクトル（cm-1）： ３７００−３０８０、３０８０−２７００（ｎｕｊｏ
ｌ）；１７２０−１６２５；１６２５−１５６０；１５
０５；１４６０（ｎｕｊｏｌ）；１３７５（ｎｕｊｏ
ｌ）；１２９５；１２３０；１２１０；１１５０；１１
００−１０４０；１０３０；１０１５；９７０；８９
０；８４０；８１０；７２０（ｎｕｊｏｌ）、 Ｃ）添付図面の第６図に示されかつＤＭＳＯｄ６（ヘキ
サデューテロジメチルスルホキシド）中で記録した２７
０MHz１Ｈ−ＮＭＲにおける信号（ppm）の次の群を示す
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル、内部標準、ＴＭＳ（０．００
ppm）、（δ＝ppm）： δ０．８５（ｄ、イソプロピルのＣＨ３）；１．１５
（約１３Ｈ）；１．４４（約２Ｈ）；２．０２（２
Ｈ）；２．３２−２．３５）（３Ｈ）；４−６．１（約
１６Ｈ）；６．１−８（約２３Ｈ）；８．５２、９．３
０、９．６８（広い帯；移動性プロトン） ２．５−４：Ｈ２Ｏのピークからの干渉、 Ｄ）次の条件下に逆相ＨＰＬＣで分析したとき、テイコ
プラニンＡ２成分２（Ｒｔ＝２０．３分）に関する１．
２２の保持時間（Ｒｔ）： カラム：ウルトラスフェアー（Ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒ
ｅ）ＯＤＳ（５μｍ）アルテックス（Ａｌｔｅｘ）［ベ
ックマン（Ｂｅｃｋｍａｎ）］４．６mm（内径）×２５
０mm 予備カラム：ブラウンリー・ラブス（Ｂｒｏｗｎｌｅｅ
Ｌａｂｓ）ＲＰ １８（５μｍ） 溶離剤Ａ： ＣＨ３ＣＮ １０％ ＮａＨ２ＰＯ４・Ｈ２Ｏ （２．５ｇ／１） ９０％ pH６．０に調節、 溶離剤Ｂ： ＣＨ３ＣＮ ７０％ ＮａＨ２ＰＯ４・Ｈ２Ｏ （２．５ｇ／１） ３０％ pH６．０に調節、 溶離：溶離剤Ａ中の５％から６０％への溶離剤Ｂの直線
勾配、４０分、 流速：１．８ｍ１／分 ＵＶ検出器：２５４ｎｍ、 内部標準：テイコプラニンＡ２成分２［グルッポ・レペ
チット（Ｇｒｕｐｐｏ Ｌｅｐｅｔｉｔ）Ｓ．Ｐ．
Ａ．］、 Ｅ）試料を不活性雰囲気（Δｗ ９．６％）のもとで約
１４０℃において前もって乾燥した後、元素分析は次の
近似百分率組成（平均）を示す： 炭素５４．０９％；水素５．１３％；窒素６．３４％；
塩素（合計）４．１２％；塩素（イオン性）０．３９
％、 空気中で９００℃における無機残留物：５％、 Ｆ）過剰のＨＣ１の添加後にＫＯＨで滴定すると、２−
メトキシエタノール（ＭＣＳ）：水、４：１、中の酸−
塩基の滴定のプロフィルは、次のｐｋＭＣＳを有するイ
オン化作用を示す：４．５、５．６、７．２、９．２、 Ｇ）次のクロマトグラフィー系における０．２１のＲｆ
および０．５３のテイコプラニンＡ２の成分２に関する
Ｒｆ値： ５％（ｗ／ｖ）の水性 Ｎａ２ＳＯ４ ７０ アセトニトリル ３０ シラン化シリカゲル６５Ｆ２５４メルク（Ｍｅｒｃｋ）
板（層の厚さ０．２５mm） 可視化： −ＵＶ光 −パウリ試薬（Ｐａｕｌｙ Ｒｅａｇｅｎｔ）、すなわ
ち、ジアゾ化スルファニル酸［ジャーナル・オブ・クロ
マトグラフィー（Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ．）２０，１
７１（１９６５）、ツアイトシュリフト・フュール・フ
ィジカリッシェ・ヘミー（Ｚ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．）２９２，９９（１９５３）］を使用する黄色 −Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓＡＴＣＣ ６６３３を使用する
最小デイビス（Ｄａｖｉｓ）培地上のバイオオートグラ
フィー、 Ｈ）１７３１にＭ＋Ｈ ピークを示すＦＡＢ−ＭＳスペ
クトルからデジューム（ｄｅｓｕｍｅ）した約１７３０
の分子量、 抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡの物理化学的特性 Ｂ）添付図面の第８図に示され、かつ次の吸収極大を示
す赤外線吸収スペクトル（cm-1）： ３７００−３１００、３０００−２８００（ｎｕｊｏ
ｌ）；１７６０−１６５５；１６５５；１６２０−１５
５０；１５０５；１４６０（ｎｕｊｏｌ）；１３７５
（ｎｕｊｏｌ）；１２６０、１２５０−９５０；８４
５；８０５；７２０（ｎｕｊｏｌ）、 Ｃ）添付図面の第８図に示されかつＤＭＳＯｄ６（ヘキ
サデューテロジメチルスルホキシド）中で記録した２７
０MHz１Ｈ−ＮＭＲにおける信号（ppm）の次の群を示す
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル、内部標準、ＴＭＳ（０．００
ppm）、（δ＝ppm）： ０．８６、ｄ′ｓ（ＣＨ３）；１．１５−１．２２、ｍ
（ＣＨ２）ｎ；１．４１、ｍ（ＣＨ２）；２．０１、ｓ
（ＣＨ３）；２．０１、ｍ（ＣＨ２）：２．２８、ｓ
（Ｎ−ＣＨ３）；４．２６−５．９６、ｂｒ（ペプチド
および芳香族のＣＨ）；６．３３−７．７３ｂｒ（芳香
族のＣＨおよびペプチドのＮＨ）、 ｂｒ ＝ 広い ｄ ＝ 二重線 ｄｄ ＝ 二重線の二重線 ｍ ＝ 多重線 ｓ ＝ 一重線 ｔ ＝ 三重線 Ｄ）次の条件下に逆相ＨＰＬＣで分析したとき、デイコ
プラニンＡ２成分２（Ｒｔ＝２０．３分）に関する１．
１５の保持時間（Ｒｔ）： カラム：ウルトラスフェアー（Ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒ
ｅ）ＯＤＳ（５μｍ）アルテックス（Ａｌｔｅｘ）［ベ
ックマン（Ｂｅｃｋｍａｎ）］４．６mm（内径）×２５
０mm 予備カラム：ブラウンリー・ラブス（Ｂｒｏｗｎｌｅｅ
Ｌａｂｓ）ＲＰ １８（５μｍ） 溶離剤Ａ： ＣＨ３ＣＮ １０％ ＮａＨ２ＰＯ４・Ｈ２Ｏ （２．５ｇ／１） ９０％ pH６．０に調節、 溶離剤Ｂ： ＣＨ３ＣＮ ７０％ ＮａＨ２ＰＯ４・Ｈ２Ｏ （２．５ｇ／１） ３０％ pH６．０に調節、 溶離：溶離剤Ａ中の５％から６０％への溶離剤Ｂの直線
勾配、４０分、 流速：１．８ｍ１／分、 ＵＶ検出器：２５４ｎｍ、 内部標準：テイコプラニンＡ２成分２［グルッポ・レペ
チット（Ｇｒｕｐｐｏ Ｌｅｐｅｔｉｔ）Ｓ．Ｐ．
Ａ．］、 Ｅ）次のクロマトグラフィー系における０．６２のテイ
コプラニンＡ２成分２に関するＲｆ値： ５％（ｗ／ｖ）の水性 Ｎａ２ＳＯ４ ７０ アセトニトリル ３０ シラン化シリカゲル６０Ｆ２５４メルク（Ｍｅｒｃｋ）
板（層の厚さ０．２５mm） 可視化： −ＵＶ光 −パウリ試薬（Ｐａｕｌｙ Ｒｅａｇｅｎｔ）、すなわ
ち、ジアゾ化スルファニル酸［ジャーナル・オブ・クロ
マトグラフィー（Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ．）２０，１
７１（１９６５）、ツアイトシュリフト・フュール・フ
ィジカリッシェ・ヘミー（Ｚ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．）２９２，９９（１９５３）］を使用する黄色 −Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ ＡＴＣＣ ６６３３を使用す
る最小デイビス（Ｄａｖｉｓ）培地上のバイオオートグ
ラフィー、 Ｆ）１７６１に最も強いピークを有するピークの群を示
すＦＡＢ−ＭＳスペクトルからデジューム（ｄｅｓｕｍ
ｅ）した約１７５８の分子量。ＦＡＢ−ＭＳ分析の操作
条件は、次の通りであった： 計器：ＦＡＢガンのイオン・テク（Ｉｏｎ Ｔｅｃｈ）
を装備するＶＧＭｏｄ ＺＡＢ ＳＥ 条件：ポジティブ（Ｐｏｓｉｔｉｖｅ） ＦＡＢ、Ｘｅ 加速電圧、８KV マトリックス：チオグリセロール−グリセロール１／１
（ｖ／ｖ）、 抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＢの物理化学的特性 Ｂ）添付図面の第１１図に示され、かつ次の吸収最大を
示す赤外線吸収スペクトル（cm-1）： ３７００−３１００、３０００−２８００（ｎｕｊｏ
ｌ）；１７６０−１７１０；１６５５；１６２０−１５
６０；１６０５；１４８０−１４２０（ｎｕｊｏｌ）；
１３７５（ｎｕｊｏｌ）；１３２０−１２７０；１２３
０−１１９０；１１５０；１１２０−９２０；８４５；
８１０；７２０（ｎｕｊｏｌ）、 Ｃ．１）添付図面の第１２図に示されかつＤＭＳＯｄ６
（ヘキサデューテロジメチルスルホキシド）中で記録し
た２７０MHzにおける信号（ppm）の次の群を示す１Ｈ−
ＮＭＲスペクトル、内部標準、ＴＭＳ（０．００pp
m）、（δ＝ppm） 多重度；（属性）： ０．８４、ｄ（イソプロピルのＣＨ３）； １．１７、ｍ（ＣＨ２）ｎ；１．４３、ｍ（ＣＨ２）、
１．９９、ｓ（ＣＨ３）、２．０１、ｍ（ＣＨ２）；
２．３１、ｓ（Ｎ−ＣＨ３）；２．７９、ｄｄ（Ｃ−
Ｈ）；３．７０、ｍ（Ｃ−Ｈ）；３．７０、ｍ（Ｃ−
Ｈ）：４．０６−６．０２、ｂｒ（ペプチドおよび芳香
族のＣＨ）；６．４５−７．７４、ｂｒ（芳香族のＣＨ
およびペプチドのＮＨ）；８．１９−９．９９、ｂｒ
（ペプチドのＮＨおよびフェノールのＯＨ）、 Ｃ．２）添付図面の第１３図に示され、かつＤＭＳＯ
ｄ６プラスＣＦ３ＣＯＯＤ中で記録した２７０MHzにお
ける信号（ppm）の次の群を示す１Ｈ−ＮＭＲスペクト
ル、内部標準、ＴＭＳ（０．００ppm）、（δ＝ppm）多
重度；（属性）： ０．８４、ｄ（イソプロピルのＣＨ３）；１．１３、ｍ
（ＣＨ２）ｎ；１．４０、；ｍ（ＣＨ２）；１．９８、
ｓ（ＣＨ３）；２．００、ｍ（ＣＨ２）；２．９２、ｄ
ｄ（Ｃ−Ｈ）；３．２９−３．７１（糖のＣ−Ｈ）；
４．０７−６．０９、ｓおよびｍ（ペプチドおよび芳香
族のＣＨ）；６．４５−７．８３、ｓおよびｍ（芳香族
のＣＨおよびペプチトのＮＨ）；８．１７−１０．３８
（ペプチトのＮＨ、フェノールのＯＨ）、 Ｄ）次の条件下に逆相ＨＰＬＣで分析したとき、テイコ
プラニンＡ２成分２（Ｒｔ＝２０．３分）に関する１．
２７および１．３２の保持時間（Ｒｔ）： カラム：ウルトラスフェアー（Ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒ
ｅ）ＯＤＳ（５μｍ）アルテックス（Ａｌｔｅｘ）［ベ
ックマン（Ｂｅｃｋｍａｎ）］４．６mm（内径）×２５
０mm 予備カラム：ブラウンリー・ラブス（Ｂｒｏｗｎｌｅｅ
Ｌａｂｓ）ＲＰ １８（５μｍ） 溶離剤Ａ： ＣＨ３ＣＮ １０％ ＮａＨ２ＰＯ４・Ｈ２Ｏ （２．５ｇ／１） ９０％ pH６．０に調節、 溶離剤Ｂ： ＣＨ３ＣＮ ７０％ ＮａＨ２ＰＯ４・Ｈ２Ｏ （２．５ｇ／１） ３０％ pH６．０に調節、 溶離：溶離剤Ａ中の５％から６０％への溶離剤Ｂの直線
勾配、４０分、 流速：１．８ｍ１／分、 ＵＶ検出器：２５４ｎｍ、 内部標準：テイコプラニンＡ２成分２［グルッポ・レペ
チット（Ｇｒｕｐｐｏ Ｌｅｐｅｔｉｔ）Ｓ．Ｐ．
Ａ．］、 Ｅ）次のクロマトグラフィー系における０．５３のテイ
コプラニンＡ２成分２に関するＲｆ値： ５％（ｗ／ｖ）の水性 Ｎａ２ＳＯ４ ７０ アセトニトリル ３０ シラン化シリカゲル６０Ｆ２５４メルク（Ｍｅｒｃｋ）
板（層の厚さ０．２５mm） 可視化： −ＵＶ光 −パウリ試薬（Ｐａｕｌｙ Ｒｅａｇｅｎｔ）、すなわ
ち、ジアゾ化スルファニル酸［ジャーナル・オブ・クロ
マトグラフィー（Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ．）２０，１
７１（１９６５）、ツアイトシュリフト・フュール・フ
ィジカリッシェ・ヘミー（Ｚ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．）２９２，９９（１９５３）］を使用する黄色Ｂ ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ ＡＴＣＣ ６６３３を使用する
最小デイビス（Ｄａｖｉｓ）培地上のバイオオートグラ
フィー、 Ｆ）１７７６に最も強いピークを有するピークの群を示
すＦＡＢ−ＭＳスペクトルからデジューム（ｄｅｓｕｍ
ｅ）した約１７７２の分子量。ＦＡＢ−ＭＳ分析の操作
条件は、次の通りであった： 計器：ＦＡＢガンのイオン・テク（Ｉｏｎ Ｔｅｃｈ）
を装備するＶＧ Ｍｏｄ ＺＡＢ ＳＥ 条件：ポジティブ（Ｐｏｓｉｔｉｖｅ）ＦＡＢ、Ｘｅ 加速電圧、８KV マトリックス：チオグリセロール−グリセロール１／１
（ｖ／ｖ）。
す紫外線吸収スペクトル（cm-1）： ３７００−３１００、３１００−２８００（ｎｕｊｏ
ｌ）；１６５５；１６２０−１５６０；１５１０；１４
８０；１４１０（ｎｕｊｏｌ）；１３７５（ｎｕｊｏ
ｌ）；１３２０−１２５０；１２５０−１１９０；１１
００−９５０；８４５；８１０；７２０（ｎｕｊｏ
ｌ）、 Ｃ）添付図面の第３図に示されかつＤＭＳＯｄ６（ヘキ
サデューテロジメチルスルホキシド）中で記録した２７
０MHzにおける信号（ppm）の次の群を示す１Ｈ−ＮＭＲ
スペクトル（内部標準、ＴＭＳ（０．００ppm）、（δ
＝ppm）： δ０．８６（ｔ、６Ｈ）；１．２１（約１１Ｈ）；１．
４３（２Ｈ）；２．０１（２Ｈ）；２．３１−２．３
４）（３Ｈ）；４−６．２（約１６Ｈ）；６．２−８
（約２３Ｈ）；８．４４、９．２２、 ９．６６（広い
帯；移動性プロトン） ２．４−４：Ｈ２Ｏのピークからの干渉、 Ｄ）次の条件下に逆相ＨＰＬＣで分析したとき、テイコ
プラニンＡ２成分２（Ｒｔ＝２０．３分）に関する１．
１２の保持時間（Ｒｔ）： カラム：ウルトラスフェアー（Ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒ
ｅ）ＯＤＳ（５μｍ）アルテックス（Ａｌｔｅｘ）［ベ
ックマン（Ｂｅｃｋｍａｎ）］４．６mm（内径）×２５
０mm 予備カラム：ブラウンリー・ラブス（Ｂｒｏｗｎｌｅｅ
Ｌａｂｓ）ＲＰ １８（５μｍ） 溶離剤Ａ： ＣＨ３ＣＮ １０％ ＮａＨ２ＰＯ４・Ｈ２Ｏ （２．５ｇ／１） ９０％ pH６．０に調節、 溶離剤Ｂ： ＣＨ３ＣＮ ７０％ ＮａＨ２ＰＯ４・Ｈ２Ｏ （２．５ｇ／１） ３０％ pH６．０に調節、 溶離：溶離剤Ａ中の５％から６０％への溶離剤Ｂの直線
勾配、４０分、 流速：１．８ml／分、 ＵＶ検出器：２５４ｎｍ、 内部標準：テイコプラニンＡ２成分２［グルッポ・レペ
チット（Ｇｒｕｐｐｏ Ｌｅｐｅｔｉｔ）Ｓ．Ｐ．
Ａ．］、 同一の条件下に、テストステロン［ルセル・ウクラフ
（Ｒｏｕｓｓｅｌ Ｕｃｌａｆ）に関する保持時間は
０．６０である、 Ｅ）資料を不活性雰囲気（△ｗ ４．６％）のもとで約
１４０℃において前もって乾燥した後、元素分析は次の
近似百分率組成（平均）を示す： 炭素５５．８２％；水素５．１７％；窒素６．３１％；
塩素（合計）４．２４％；塩素（イオン性）０．３７
％、 空気中で９００℃における無機残留物：１．２％、 Ｆ）過剰のＨＣ１の添加後にＫＯＨで滴定すると、２−
メトキシエタノール（ＭＣＳ）：水、４：１、中の酸−
塩基の滴定のプロフィルは、次のｐｋＭＣＳを有するイ
オン化作用を示す：４．６、５．６、７．２、９．２、 Ｇ）次のクロマトグラフィー系における０．２４のＲｆ
および０．７０のテイコプラニンＡ２成分２に関するＲ
ｆ値： ５％（ｗ／ｖ）の水性 Ｎａ２ＳＯ４ ７０ アセトニトリル ３０ シラン化シリカゲル６０Ｆ２５４メルク（Ｍｅｒｃｋ）
板（層の厚さ０．２５mm） 可視化： −ＵＶ光 −パウリ試薬（Ｐａｕｌｙ Ｒｅａｇｅｎｔ）、すなわ
ち、ジアゾ化スルファニル酸［ジャーナル・オブ・クロ
マトグラフィー（Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ．）２０，１
７１（１９６５）、ツアイトシュリフト・フュール・フ
ィジカリッシェ・ヘミー（Ｚ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．）２９２，９９（１９５３）］を使用する黄色 −Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓＡＴＣＣ ６６３３を使用する
最小デイビス（Ｄａｖｉｓ）培地上のバイオオートグラ
フィー、 Ｈ）１７１７にＭ＋Ｈ ピークを示すＦＡＢ−ＭＳスペ
クトルからデジューム（ｄｅｓｕｍｅ）した約１７１６
の分子量、 抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂの物理化学的特性 Ｂ）添付図面の第５図に示され、かつ次の吸収最大を示
す赤外線吸収スペクトル（cm-1）： ３７００−３０８０、３０８０−２７００（ｎｕｊｏ
ｌ）；１７２０−１６２５；１６２５−１５６０；１５
０５；１４６０（ｎｕｊｏｌ）；１３７５（ｎｕｊｏ
ｌ）；１２９５；１２３０；１２１０；１１５０；１１
００−１０４０；１０３０；１０１５；９７０；８９
０；８４０；８１０；７２０（ｎｕｊｏｌ）、 Ｃ）添付図面の第６図に示されかつＤＭＳＯｄ６（ヘキ
サデューテロジメチルスルホキシド）中で記録した２７
０MHz１Ｈ−ＮＭＲにおける信号（ppm）の次の群を示す
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル、内部標準、ＴＭＳ（０．００
ppm）、（δ＝ppm）： δ０．８５（ｄ、イソプロピルのＣＨ３）；１．１５
（約１３Ｈ）；１．４４（約２Ｈ）；２．０２（２
Ｈ）；２．３２−２．３５）（３Ｈ）；４−６．１（約
１６Ｈ）６．１−８（約２３Ｈ）；８．５２、９．３
０、９．６８（広い帯；移動性プロトン） ２，５−４：Ｈ２Ｏのピークから干渉、 Ｄ）次の条件下に逆相ＨＰＬＣで分析したとき、テイコ
プラニンＡ２成分２（Ｒｔ＝２０．３分）に関する１．
２２および１．２７の保持時間（Ｒｔ）： カラム：ウルトラスフェアー（Ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒ
ｅ）ＯＤＳ（５μｍ）アルテックス（Ａｌｔｅｘ）［ベ
ックマン（Ｂｅｃｋｍａｎ）］４．６mm（内径）×２５
０mm 予備カラム：ブラウンリー・ラブス（Ｂｒｏｗｎｌｅｅ
Ｌａｂｓ）ＲＰ １８（５μｍ） 溶離剤Ａ： ＣＨ３ＣＮ １０％ ＮａＨ２ＰＯ４・Ｈ２Ｏ （２．５ｇ／１） ９０％ pH６．０に調節、 溶離剤Ｂ： ＣＨ３ＣＮ ７０％ ＮａＨ２ＰＯ４・Ｈ２Ｏ （２．５ｇ／１） ３０％ pH６．０に調節、 溶離：溶離剤Ａ中の５％から６０％への溶離剤Ｂの直線
勾配、４０分、 流速：１．８ｍ１／分、 ＵＶ検出器：２５４ｎｍ、 内部標準：テイコプラニンＡ２成分２［グルッポ・レペ
チット（Ｇｒｕｐｐｏ Ｌｅｐｅｔｉｔ）Ｓ．Ｐ．
Ａ．］、 Ｅ）試料を不活性雰囲気（Δｗ ９．６％）のもとで約
１４０℃において前もって乾燥した後、元素分析は次の
近似百分率組成（平均）を示す： 炭素５４．０９％；水素５．１３％；窒素６．３４％；
塩素（合計）４．１２％；塩素（イオン性）０．３９
％、 空気中で９００℃における無機残留物：５％、 Ｆ）過剰のＨＣ１（pH２．７）の添加後にＫＯＨで滴定
すると、２−メトキシエタノール（ＭＣＳ）：水、４：
１、中の酸−塩基の滴定のプロフィルは、次のｐｋ
ＭＣＳを有するイオン化作用を示す：４．５、５．６、
７．２、９．２、 Ｇ）次のクロマトグラフィー系における０．２１のＲｆ
および０．５３のテイコプラニンＡ２成分２に関するＲ
ｆ値： ５％（ｗ／ｖ）の水性 Ｎａ２ＳＯ４ ７０ アセトニトリル ３０ シラン化シリカゲル６０Ｆ２５４メルク（Ｍｅｒｃｋ）
板（層の厚さ０．２５mm） 可視化： −ＵＶ光 −パウリ試薬（Ｐａｕｌｙ Ｒｅａｇｅｎｔ）、すなわ
ち、ジアゾ化スルファニル酸［ジャーナル・オブ・クロ
マトグラフィー（Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ．）２０，１
７１（１９６５）、ツアイトシュリフト・フュール・フ
ィジカリッシェ・ヘミー（Ｚ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．）２９２，９９（１９５３）］を使用する黄色 −Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ ＡＴＣＣ ６６３３を使用す
る最小デイビス（Ｄａｖｉｓ）培地上のバイオオートグ
ラフィー、 Ｈ）１７３１にＭ＋Ｈ ピークを示すＦＡＢ−ＭＳスペ
クトルからデジューム（ｄｅｓｕｍｅ）した約１７３０
の分子量、 抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ０の物理化学的性質 Ｂ）添付図面の第５図に示され、かつ次の吸収極大を示
す赤外線吸収スペクトル（cm-1）： ３７００−３０８０、３０８０−２７００（ｎｕｊｏ
ｌ）；１７２０−１６２５；１６２５−１５６０；１５
０５；１４６０（ｎｕｊｏｌ）；１３７５（ｎｕｊｏ
ｌ）；１２９５；１２３０；１２１０；１１５０；１１
００−１０４０；１０３０；１０１５；９７０；８９
０；８４０；８１０；７２０（ｎｕｊｏｌ）、 Ｃ）添付図面の第６図に示されかつＤＭＳＯｄ６（ヘキ
サデューテロジメチルスルホキシド）中で記録した２７
０MHz１Ｈ−ＮＭＲにおける信号（ppm）の次の群を示す
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル、内部標準、ＴＭＳ（０．００
ppm）、（δ＝ppm）： δ０．８５（ｄ、イソプロピルのＣＨ３）；１．１５
（約１３Ｈ）；１．４４（約２Ｈ）；２．０２（２
Ｈ）；２．３２−２．３５）（３Ｈ）；４−６．１（約
１６Ｈ）；６．１−８（約２３Ｈ）；８．５２、９．３
０、９．６８（広い帯；移動性プロトン） ２．５−４：Ｈ２Ｏのピークからの干渉、 Ｄ）次の条件下に逆相ＨＰＬＣで分析したとき、テイコ
プラニンＡ２成分２（Ｒｔ＝２０．３分）に関する１．
２２の保持時間（Ｒｔ）： カラム：ウルトラスフェアー（Ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒ
ｅ）ＯＤＳ（５μｍ）アルテックス（Ａｌｔｅｘ）［ベ
ックマン（Ｂｅｃｋｍａｎ）］４．６mm（内径）×２５
０mm 予備カラム：ブラウンリー・ラブス（Ｂｒｏｗｎｌｅｅ
Ｌａｂｓ）ＲＰ １８（５μｍ） 溶離剤Ａ： ＣＨ３ＣＮ １０％ ＮａＨ２ＰＯ４・Ｈ２Ｏ （２．５ｇ／１） ９０％ pH６．０に調節、 溶離剤Ｂ： ＣＨ３ＣＮ ７０％ ＮａＨ２ＰＯ４・Ｈ２Ｏ （２．５ｇ／１） ３０％ pH６．０に調節、 溶離：溶離剤Ａ中の５％から６０％への溶離剤Ｂの直線
勾配、４０分、 流速：１．８ｍ１／分 ＵＶ検出器：２５４ｎｍ、 内部標準：テイコプラニンＡ２成分２［グルッポ・レペ
チット（Ｇｒｕｐｐｏ Ｌｅｐｅｔｉｔ）Ｓ．Ｐ．
Ａ．］、 Ｅ）試料を不活性雰囲気（Δｗ ９．６％）のもとで約
１４０℃において前もって乾燥した後、元素分析は次の
近似百分率組成（平均）を示す： 炭素５４．０９％；水素５．１３％；窒素６．３４％；
塩素（合計）４．１２％；塩素（イオン性）０．３９
％、 空気中で９００℃における無機残留物：５％、 Ｆ）過剰のＨＣ１の添加後にＫＯＨで滴定すると、２−
メトキシエタノール（ＭＣＳ）：水、４：１、中の酸−
塩基の滴定のプロフィルは、次のｐｋＭＣＳを有するイ
オン化作用を示す：４．５、５．６、７．２、９．２、 Ｇ）次のクロマトグラフィー系における０．２１のＲｆ
および０．５３のテイコプラニンＡ２の成分２に関する
Ｒｆ値： ５％（ｗ／ｖ）の水性 Ｎａ２ＳＯ４ ７０ アセトニトリル ３０ シラン化シリカゲル６５Ｆ２５４メルク（Ｍｅｒｃｋ）
板（層の厚さ０．２５mm） 可視化： −ＵＶ光 −パウリ試薬（Ｐａｕｌｙ Ｒｅａｇｅｎｔ）、すなわ
ち、ジアゾ化スルファニル酸［ジャーナル・オブ・クロ
マトグラフィー（Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ．）２０，１
７１（１９６５）、ツアイトシュリフト・フュール・フ
ィジカリッシェ・ヘミー（Ｚ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．）２９２，９９（１９５３）］を使用する黄色 −Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓＡＴＣＣ ６６３３を使用する
最小デイビス（Ｄａｖｉｓ）培地上のバイオオートグラ
フィー、 Ｈ）１７３１にＭ＋Ｈ ピークを示すＦＡＢ−ＭＳスペ
クトルからデジューム（ｄｅｓｕｍｅ）した約１７３０
の分子量、 抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡの物理化学的特性 Ｂ）添付図面の第８図に示され、かつ次の吸収極大を示
す赤外線吸収スペクトル（cm-1）： ３７００−３１００、３０００−２８００（ｎｕｊｏ
ｌ）；１７６０−１６５５；１６５５；１６２０−１５
５０；１５０５；１４６０（ｎｕｊｏｌ）；１３７５
（ｎｕｊｏｌ）；１２６０、１２５０−９５０；８４
５；８０５；７２０（ｎｕｊｏｌ）、 Ｃ）添付図面の第８図に示されかつＤＭＳＯｄ６（ヘキ
サデューテロジメチルスルホキシド）中で記録した２７
０MHz１Ｈ−ＮＭＲにおける信号（ppm）の次の群を示す
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル、内部標準、ＴＭＳ（０．００
ppm）、（δ＝ppm）： ０．８６、ｄ′ｓ（ＣＨ３）；１．１５−１．２２、ｍ
（ＣＨ２）ｎ；１．４１、ｍ（ＣＨ２）；２．０１、ｓ
（ＣＨ３）；２．０１、ｍ（ＣＨ２）：２．２８、ｓ
（Ｎ−ＣＨ３）；４．２６−５．９６、ｂｒ（ペプチド
および芳香族のＣＨ）；６．３３−７．７３ｂｒ（芳香
族のＣＨおよびペプチドのＮＨ）、 ｂｒ ＝ 広い ｄ ＝ 二重線 ｄｄ ＝ 二重線の二重線 ｍ ＝ 多重線 ｓ ＝ 一重線 ｔ ＝ 三重線 Ｄ）次の条件下に逆相ＨＰＬＣで分析したとき、デイコ
プラニンＡ２成分２（Ｒｔ＝２０．３分）に関する１．
１５の保持時間（Ｒｔ）： カラム：ウルトラスフェアー（Ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒ
ｅ）ＯＤＳ（５μｍ）アルテックス（Ａｌｔｅｘ）［ベ
ックマン（Ｂｅｃｋｍａｎ）］４．６mm（内径）×２５
０mm 予備カラム：ブラウンリー・ラブス（Ｂｒｏｗｎｌｅｅ
Ｌａｂｓ）ＲＰ １８（５μｍ） 溶離剤Ａ： ＣＨ３ＣＮ １０％ ＮａＨ２ＰＯ４・Ｈ２Ｏ （２．５ｇ／１） ９０％ pH６．０に調節、 溶離剤Ｂ： ＣＨ３ＣＮ ７０％ ＮａＨ２ＰＯ４・Ｈ２Ｏ （２．５ｇ／１） ３０％ pH６．０に調節、 溶離：溶離剤Ａ中の５％から６０％への溶離剤Ｂの直線
勾配、４０分、 流速：１．８ｍ１／分、 ＵＶ検出器：２５４ｎｍ、 内部標準：テイコプラニンＡ２成分２［グルッポ・レペ
チット（Ｇｒｕｐｐｏ Ｌｅｐｅｔｉｔ）Ｓ．Ｐ．
Ａ．］、 Ｅ）次のクロマトグラフィー系における０．６２のテイ
コプラニンＡ２成分２に関するＲｆ値： ５％（ｗ／ｖ）の水性 Ｎａ２ＳＯ４ ７０ アセトニトリル ３０ シラン化シリカゲル６０Ｆ２５４メルク（Ｍｅｒｃｋ）
板（層の厚さ０．２５mm） 可視化： −ＵＶ光 −パウリ試薬（Ｐａｕｌｙ Ｒｅａｇｅｎｔ）、すなわ
ち、ジアゾ化スルファニル酸［ジャーナル・オブ・クロ
マトグラフィー（Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ．）２０，１
７１（１９６５）、ツアイトシュリフト・フュール・フ
ィジカリッシェ・ヘミー（Ｚ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．）２９２，９９（１９５３）］を使用する黄色 −Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ ＡＴＣＣ ６６３３を使用す
る最小デイビス（Ｄａｖｉｓ）培地上のバイオオートグ
ラフィー、 Ｆ）１７６１に最も強いピークを有するピークの群を示
すＦＡＢ−ＭＳスペクトルからデジューム（ｄｅｓｕｍ
ｅ）した約１７５８の分子量。ＦＡＢ−ＭＳ分析の操作
条件は、次の通りであった： 計器：ＦＡＢガンのイオン・テク（Ｉｏｎ Ｔｅｃｈ）
を装備するＶＧＭｏｄ ＺＡＢ ＳＥ 条件：ポジティブ（Ｐｏｓｉｔｉｖｅ） ＦＡＢ、Ｘｅ 加速電圧、８KV マトリックス：チオグリセロール−グリセロール１／１
（ｖ／ｖ）、 抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＢの物理化学的特性 Ｂ）添付図面の第１１図に示され、かつ次の吸収最大を
示す赤外線吸収スペクトル（cm-1）： ３７００−３１００、３０００−２８００（ｎｕｊｏ
ｌ）；１７６０−１７１０；１６５５；１６２０−１５
６０；１６０５；１４８０−１４２０（ｎｕｊｏｌ）；
１３７５（ｎｕｊｏｌ）；１３２０−１２７０；１２３
０−１１９０；１１５０；１１２０−９２０；８４５；
８１０；７２０（ｎｕｊｏｌ）、 Ｃ．１）添付図面の第１２図に示されかつＤＭＳＯｄ６
（ヘキサデューテロジメチルスルホキシド）中で記録し
た２７０MHzにおける信号（ppm）の次の群を示す１Ｈ−
ＮＭＲスペクトル、内部標準、ＴＭＳ（０．００pp
m）、（δ＝ppm） 多重度；（属性）： ０．８４、ｄ（イソプロピルのＣＨ３）； １．１７、ｍ（ＣＨ２）ｎ；１．４３、ｍ（ＣＨ２）、
１．９９、ｓ（ＣＨ３）、２．０１、ｍ（ＣＨ２）；
２．３１、ｓ（Ｎ−ＣＨ３）；２．７９、ｄｄ（Ｃ−
Ｈ）；３．７０、ｍ（Ｃ−Ｈ）；３．７０、ｍ（Ｃ−
Ｈ）：４．０６−６．０２、ｂｒ（ペプチドおよび芳香
族のＣＨ）；６．４５−７．７４、ｂｒ（芳香族のＣＨ
およびペプチドのＮＨ）；８．１９−９．９９、ｂｒ
（ペプチドのＮＨおよびフェノールのＯＨ）、 Ｃ．２）添付図面の第１３図に示され、かつＤＭＳＯ
ｄ６プラスＣＦ３ＣＯＯＤ中で記録した２７０MHzにお
ける信号（ppm）の次の群を示す１Ｈ−ＮＭＲスペクト
ル、内部標準、ＴＭＳ（０．００ppm）、（δ＝ppm）多
重度；（属性）： ０．８４、ｄ（イソプロピルのＣＨ３）；１．１３、ｍ
（ＣＨ２）ｎ；１．４０、；ｍ（ＣＨ２）；１．９８、
ｓ（ＣＨ３）；２．００、ｍ（ＣＨ２）；２．９２、ｄ
ｄ（Ｃ−Ｈ）；３．２９−３．７１（糖のＣ−Ｈ）；
４．０７−６．０９、ｓおよびｍ（ペプチドおよび芳香
族のＣＨ）；６．４５−７．８３、ｓおよびｍ（芳香族
のＣＨおよびペプチトのＮＨ）；８．１７−１０．３８
（ペプチトのＮＨ、フェノールのＯＨ）、 Ｄ）次の条件下に逆相ＨＰＬＣで分析したとき、テイコ
プラニンＡ２成分２（Ｒｔ＝２０．３分）に関する１．
２７および１．３２の保持時間（Ｒｔ）： カラム：ウルトラスフェアー（Ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒ
ｅ）ＯＤＳ（５μｍ）アルテックス（Ａｌｔｅｘ）［ベ
ックマン（Ｂｅｃｋｍａｎ）］４．６mm（内径）×２５
０mm 予備カラム：ブラウンリー・ラブス（Ｂｒｏｗｎｌｅｅ
Ｌａｂｓ）ＲＰ １８（５μｍ） 溶離剤Ａ： ＣＨ３ＣＮ １０％ ＮａＨ２ＰＯ４・Ｈ２Ｏ （２．５ｇ／１） ９０％ pH６．０に調節、 溶離剤Ｂ： ＣＨ３ＣＮ ７０％ ＮａＨ２ＰＯ４・Ｈ２Ｏ （２．５ｇ／１） ３０％ pH６．０に調節、 溶離：溶離剤Ａ中の５％から６０％への溶離剤Ｂの直線
勾配、４０分、 流速：１．８ｍ１／分、 ＵＶ検出器：２５４ｎｍ、 内部標準：テイコプラニンＡ２成分２［グルッポ・レペ
チット（Ｇｒｕｐｐｏ Ｌｅｐｅｔｉｔ）Ｓ．Ｐ．
Ａ．］、 Ｅ）次のクロマトグラフィー系における０．５３のテイ
コプラニンＡ２成分２に関するＲｆ値： ５％（ｗ／ｖ）の水性 Ｎａ２ＳＯ４ ７０ アセトニトリル ３０ シラン化シリカゲル６０Ｆ２５４メルク（Ｍｅｒｃｋ）
板（層の厚さ０．２５mm） 可視化： −ＵＶ光 −パウリ試薬（Ｐａｕｌｙ Ｒｅａｇｅｎｔ）、すなわ
ち、ジアゾ化スルファニル酸［ジャーナル・オブ・クロ
マトグラフィー（Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ．）２０，１
７１（１９６５）、ツアイトシュリフト・フュール・フ
ィジカリッシェ・ヘミー（Ｚ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．）２９２，９９（１９５３）］を使用する黄色Ｂ ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ ＡＴＣＣ ６６３３を使用する
最小デイビス（Ｄａｖｉｓ）培地上のバイオオートグラ
フィー、 Ｆ）１７７６に最も強いピークを有するピークの群を示
すＦＡＢ−ＭＳスペクトルからデジューム（ｄｅｓｕｍ
ｅ）した約１７７２の分子量。ＦＡＢ−ＭＳ分析の操作
条件は、次の通りであった： 計器：ＦＡＢガンのイオン・テク（Ｉｏｎ Ｔｅｃｈ）
を装備するＶＧ Ｍｏｄ ＺＡＢ ＳＥ 条件：ポジティブ（Ｐｏｓｉｔｉｖｅ）ＦＡＢ、Ｘｅ 加速電圧、８KV マトリックス：チオグリセロール−グリセロール１／１
（ｖ／ｖ）。
本発明の化合物の抗バクテリア活性は、生体外において
異る微生物培養物への標準希釈により立証することがで
きる。
異る微生物培養物への標準希釈により立証することがで
きる。
ＭＩＣ（最小阻止濃度）の決定についての培養基および
生長条件は、次の通りであった：アイソセンチテスト
（Ｉｓｏｓｅｎｔｉｔｅｓｔ）肉汁［オキソイド（Ｏｘ
ｏｉｄ）］、２４時間、スタフィロコッキ（Ｓｔａｐｈ
ｙｌｏｃｏｃｃｉ）、ストレプトマイセス・ファエカリ
ス（Ｓｔｒｅｐ． ｆａｅｃａｌｉｓ）およびグラム陰
性バクテリア［エシェリヒア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃ
ｈｉａ ｃｏｌｉ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍ
ｏｎａｓ）、プロレウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）］；トッド
−ヘウィット（Ｔｏｄｄ−Ｈｅｗｉｔｔ）肉汁［ディフ
コ（Ｄｉｆｃｏ）］、２４時間、他のストレプトコッキ
種；ＧＣ基本肉汁（ディフコ）＋１％のアイソバイタレ
ックス（Ｉｓｏｖｉｔａｌｅｘ）（ＢＢＬ）、４８時
間、ＣＯ２に富んだ雰囲気、ネイセリア・ゴノルホエア
エ（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）；
ＧＢ基本肉汁（ディフコ）＋１％のアイソバイタレック
ス＋０．００１％のヘミン（ｈｅｍｉｎ）、２４時間、
ヘモフィリス・インフルエンザエ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌ
ｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）；ＡＣ肉汁（ディフ
コ）、２４時間、嫌気的雰囲気、クロストリジウム・ペ
ルフリゲンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇ
ｅｎｓ）；ウイルキンス−チャルグレン（Ｗｉｌｋｉｎ
ｓ−Ｃｈａｌｇｒｅｎ）寒天［Ｔ．Ｄ．ウイルキンスお
よびＳ．チャルグレン，１９７６，アンチミクロビアル
・エイジェント・アンド・ケモセラピー（Ａｎｔｉｍｉ
ｃｒｏｂ．Ａｇ．Ｃｈｍｏｔｈｅｒ．）１０，９２６参
照］、４８時間、嫌気的雰囲気、他の嫌気的有機体
［Ｃ．ディシレ（ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）、プロピオニバ
クテリウム・アクネス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒ
ｉｕｍ ａｃｎｅｓ）、バクテロイデス・フラギリス
（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｆｒａｇｉｌｉｓ）；ＰＰ
ＬＯ肉汁（ディフコ）＋１０％のウマ血清＋１％のグル
コース、４８時間、マイコプラズマ・ガリセプチクム
（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｇａｌｌｉｓｅｐｔｉｃｕ
ｍ）；酵母窒素基本肉汁（ディフコ）、２４時間、カン
ジダ・アルビカンス）Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎ
ｓ）。Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ（３０℃）を除外して、イ
ンキュベーションは３７℃において実施した。接種物は
次の通りであった：１％（ｖ／ｖ）の４８時間の肉汁、
Ｍ．ｇａｌｌｉｓｅｐｔｉｃｕｍ）；約１０４−１０５
コロニー形成性単位／ｍ１、他の肉汁希釈のＭＩＣ；約
１０４−１０５バクテリア／スポット（多点接種器を使
用て接種した）、寒天希釈のＭＩＣ（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅ
ｎｚａｅ、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｐ．ａｃｎｅｓ、
Ｂ．ｆｒａｇｉｌｉｓ）。
生長条件は、次の通りであった：アイソセンチテスト
（Ｉｓｏｓｅｎｔｉｔｅｓｔ）肉汁［オキソイド（Ｏｘ
ｏｉｄ）］、２４時間、スタフィロコッキ（Ｓｔａｐｈ
ｙｌｏｃｏｃｃｉ）、ストレプトマイセス・ファエカリ
ス（Ｓｔｒｅｐ． ｆａｅｃａｌｉｓ）およびグラム陰
性バクテリア［エシェリヒア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃ
ｈｉａ ｃｏｌｉ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍ
ｏｎａｓ）、プロレウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）］；トッド
−ヘウィット（Ｔｏｄｄ−Ｈｅｗｉｔｔ）肉汁［ディフ
コ（Ｄｉｆｃｏ）］、２４時間、他のストレプトコッキ
種；ＧＣ基本肉汁（ディフコ）＋１％のアイソバイタレ
ックス（Ｉｓｏｖｉｔａｌｅｘ）（ＢＢＬ）、４８時
間、ＣＯ２に富んだ雰囲気、ネイセリア・ゴノルホエア
エ（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）；
ＧＢ基本肉汁（ディフコ）＋１％のアイソバイタレック
ス＋０．００１％のヘミン（ｈｅｍｉｎ）、２４時間、
ヘモフィリス・インフルエンザエ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌ
ｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）；ＡＣ肉汁（ディフ
コ）、２４時間、嫌気的雰囲気、クロストリジウム・ペ
ルフリゲンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇ
ｅｎｓ）；ウイルキンス−チャルグレン（Ｗｉｌｋｉｎ
ｓ−Ｃｈａｌｇｒｅｎ）寒天［Ｔ．Ｄ．ウイルキンスお
よびＳ．チャルグレン，１９７６，アンチミクロビアル
・エイジェント・アンド・ケモセラピー（Ａｎｔｉｍｉ
ｃｒｏｂ．Ａｇ．Ｃｈｍｏｔｈｅｒ．）１０，９２６参
照］、４８時間、嫌気的雰囲気、他の嫌気的有機体
［Ｃ．ディシレ（ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）、プロピオニバ
クテリウム・アクネス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒ
ｉｕｍ ａｃｎｅｓ）、バクテロイデス・フラギリス
（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｆｒａｇｉｌｉｓ）；ＰＰ
ＬＯ肉汁（ディフコ）＋１０％のウマ血清＋１％のグル
コース、４８時間、マイコプラズマ・ガリセプチクム
（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｇａｌｌｉｓｅｐｔｉｃｕ
ｍ）；酵母窒素基本肉汁（ディフコ）、２４時間、カン
ジダ・アルビカンス）Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎ
ｓ）。Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ（３０℃）を除外して、イ
ンキュベーションは３７℃において実施した。接種物は
次の通りであった：１％（ｖ／ｖ）の４８時間の肉汁、
Ｍ．ｇａｌｌｉｓｅｐｔｉｃｕｍ）；約１０４−１０５
コロニー形成性単位／ｍ１、他の肉汁希釈のＭＩＣ；約
１０４−１０５バクテリア／スポット（多点接種器を使
用て接種した）、寒天希釈のＭＩＣ（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅ
ｎｚａｅ、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｐ．ａｃｎｅｓ、
Ｂ．ｆｒａｇｉｌｉｓ）。
本発明の化合物の抗微生物活性は、また、Ｒ．パランザ
（Ｐａｌｌｎｚａ）ら，ジャーナル・オブ・アンチミク
ロバイアル・ケモセラピー（Ｊ．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏ
ｂ．Ｃｈｅｍｏｔｈ．），１１，４１９（１９８３）に
本質的に記載されているように実施する生体内実験によ
り確証される。実験的感染は、マウスにおいてＳ．パイ
オゲネス（ｐｙｏｇｅｎｅｓ）Ｃ２０３の懸濁液を腹腔
内に投与することにより誘導させた。未処置動物が４８
時間胃内に敗血症により死ぬように、接種物を調節し
た。動物を、注射後、約３０分以内に試験化合物で皮下
的に処置した。スピアマン（Ｓｐｅａｒｍａｎ）および
カーバー（Ｋａｒｅｂｅｒ）の方法［Ｄ．Ｊ．フィネイ
（Ｆｉｎｎｅｙ）「生物学的アッセイにおける統計学的
方法（Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ
Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｓｓａｙ）」，グリフィン
（Ｇｒｉｆｆｉｎ），５２４ページ，１９５２］によ
り、ＥＤ５０値を各投与における生存百分率に基づいて
１０日目に計算した。上の条件において、ＥＤ５０値は
抗生物質Ａ４０９２６因子Ａについて０．４７mg／kg、
抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂについて０．３３mg／kg、
抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡについて０．５４mg／kg
および抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＢについて０．３１
mg／kgであった。
（Ｐａｌｌｎｚａ）ら，ジャーナル・オブ・アンチミク
ロバイアル・ケモセラピー（Ｊ．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏ
ｂ．Ｃｈｅｍｏｔｈ．），１１，４１９（１９８３）に
本質的に記載されているように実施する生体内実験によ
り確証される。実験的感染は、マウスにおいてＳ．パイ
オゲネス（ｐｙｏｇｅｎｅｓ）Ｃ２０３の懸濁液を腹腔
内に投与することにより誘導させた。未処置動物が４８
時間胃内に敗血症により死ぬように、接種物を調節し
た。動物を、注射後、約３０分以内に試験化合物で皮下
的に処置した。スピアマン（Ｓｐｅａｒｍａｎ）および
カーバー（Ｋａｒｅｂｅｒ）の方法［Ｄ．Ｊ．フィネイ
（Ｆｉｎｎｅｙ）「生物学的アッセイにおける統計学的
方法（Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ
Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｓｓａｙ）」，グリフィン
（Ｇｒｉｆｆｉｎ），５２４ページ，１９５２］によ
り、ＥＤ５０値を各投与における生存百分率に基づいて
１０日目に計算した。上の条件において、ＥＤ５０値は
抗生物質Ａ４０９２６因子Ａについて０．４７mg／kg、
抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂについて０．３３mg／kg、
抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡについて０．５４mg／kg
および抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＢについて０．３１
mg／kgであった。
マウスにおける概算急性毒性（腹腔内）を、この分野に
おいて知られている方法に従い評価した。抗生物質Ａ４
０９２６の概算ＬＤ５０は、マウスにおいて皮下に投与
したとき、１００mg／kgより高いことがわかった。
おいて知られている方法に従い評価した。抗生物質Ａ４
０９２６の概算ＬＤ５０は、マウスにおいて皮下に投与
したとき、１００mg／kgより高いことがわかった。
抗生物質Ａ４０９２６複合体およびその因子Ａ、Ｂ、Ｂ
０、ＰＡおよびＰＢは、多くの広く拡散した感染の原因
であるグラム陽性バクテリアに対して活性である。通常
の治療学的処置に対してこれらの病原体の抵抗は増加す
るので、新しい抗生物質の必要性はなお大きい。
０、ＰＡおよびＰＢは、多くの広く拡散した感染の原因
であるグラム陽性バクテリアに対して活性である。通常
の治療学的処置に対してこれらの病原体の抵抗は増加す
るので、新しい抗生物質の必要性はなお大きい。
すでに述べたように、本発明の抗生物質はネイセリア
（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）菌株、例えば、ネイセリア・ゴ
ノルホエアエ（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏ
ｅａｅ）に対してすぐれた活性を有し、一方それらは他
のグラム陰性バクテリアに対して実際的に不活性であ
る。
（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）菌株、例えば、ネイセリア・ゴ
ノルホエアエ（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏ
ｅａｅ）に対してすぐれた活性を有し、一方それらは他
のグラム陰性バクテリアに対して実際的に不活性であ
る。
淋病は過去１５〜２０年間絶えずに生じていることが知
られている。感染の抑制は現在非常に面倒である。なぜ
なら、感染の全期間にわたってこの病気の伝達の回避に
ついて必要な注意を払わない感染固体の挙動に、また、
関係して多数の再感染が起こっているからである。他方
において、普通に使用されている病原性有機体の抵抗は
増大しつつあるので、抗生物質とより長居処置との新し
い関連が必要となってくる。したがって、限定した投与
で、さらには１回の投与でさえ、淋病の感染、とくにネ
イセリア・ゴノルホエアエ（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏ
ｎｏｒｒｈｏｅａｅ）の感染に有効である新しい抗生物
質の必要が増大しつつある。
られている。感染の抑制は現在非常に面倒である。なぜ
なら、感染の全期間にわたってこの病気の伝達の回避に
ついて必要な注意を払わない感染固体の挙動に、また、
関係して多数の再感染が起こっているからである。他方
において、普通に使用されている病原性有機体の抵抗は
増大しつつあるので、抗生物質とより長居処置との新し
い関連が必要となってくる。したがって、限定した投与
で、さらには１回の投与でさえ、淋病の感染、とくにネ
イセリア・ゴノルホエアエ（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏ
ｎｏｒｒｈｏｅａｅ）の感染に有効である新しい抗生物
質の必要が増大しつつある。
一般に、抗生物質の処置について、抗生物質Ａ４０９２
６複合体、その因子Ａ、Ｂ、Ｂ０、ＰＡおよびＰＢの１
種ならびに無毒のそれらの製薬学的に許容されうる塩類
またはそれらの混合物は、局所的にまたはひ非経口的の
ような異る投与の道筋により投与することができる。非
経口的投与は、一般に、好ましい投与に道筋である。
６複合体、その因子Ａ、Ｂ、Ｂ０、ＰＡおよびＰＢの１
種ならびに無毒のそれらの製薬学的に許容されうる塩類
またはそれらの混合物は、局所的にまたはひ非経口的の
ような異る投与の道筋により投与することができる。非
経口的投与は、一般に、好ましい投与に道筋である。
注射用組成物は、油または水性ビヒクル中の懸濁液、溶
液、または乳濁液のような形態であることができ、そし
て懸濁剤、可溶化剤および／または分散剤のような補助
剤を含有することができる。あるいは、活性成分は、供
給の時間に、適当ななビヒクル、例えば、無菌の水を添
加したとき、再構成のための粉末の形態であることがで
きる。
液、または乳濁液のような形態であることができ、そし
て懸濁剤、可溶化剤および／または分散剤のような補助
剤を含有することができる。あるいは、活性成分は、供
給の時間に、適当ななビヒクル、例えば、無菌の水を添
加したとき、再構成のための粉末の形態であることがで
きる。
投与の道筋に依存して、これらの化合物は種々の投与形
態に配合することができる。
態に配合することができる。
ある場合において、経口的投与のための腸溶性被覆され
た投与形態に配合することが可能であり、これは既知の
技術において知られているようにして調製することがで
きる［例えば、「レミントンの製薬科学（Ｒｅｍｉｎｇ
ｔｏｎ′ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅ
ｎｃｅｓ）」，第１５版，マック・パブリシング・カン
パニー，米国ペンシルバニア州イーストン，１６１４ペ
ージ参照］。これは腸管内で抗バクテリア剤の吸収がと
くに望ましく、かつ胃を未変化で通過させるとき、こと
に有効であろう。
た投与形態に配合することが可能であり、これは既知の
技術において知られているようにして調製することがで
きる［例えば、「レミントンの製薬科学（Ｒｅｍｉｎｇ
ｔｏｎ′ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅ
ｎｃｅｓ）」，第１５版，マック・パブリシング・カン
パニー，米国ペンシルバニア州イーストン，１６１４ペ
ージ参照］。これは腸管内で抗バクテリア剤の吸収がと
くに望ましく、かつ胃を未変化で通過させるとき、こと
に有効であろう。
活性成分の投与量は、種々の因子、例えば、処置すべき
患者の大きさおよび状態、投与の道筋および頻度、およ
び含まれる薬剤に依存する。
患者の大きさおよび状態、投与の道筋および頻度、およ
び含まれる薬剤に依存する。
本発明の抗生物質、すなわち、抗生物質Ａ４０９２６複
合体、その因子Ａ、ＰＡ、Ｂ、Ｂ０およびＰＢ、および
それらの製薬学的に許容されうる塩類は、約０．５〜５
０mg／kg患者体重の活性成分の毎日の量で、必要に応じ
ての１〜４回／日に分割して投与したとき一般に有効で
ある。とくに望ましい組成物は、約１００〜約５，００
０mg／単位を含有する投与単位で調製されたものであ
る。
合体、その因子Ａ、ＰＡ、Ｂ、Ｂ０およびＰＢ、および
それらの製薬学的に許容されうる塩類は、約０．５〜５
０mg／kg患者体重の活性成分の毎日の量で、必要に応じ
ての１〜４回／日に分割して投与したとき一般に有効で
ある。とくに望ましい組成物は、約１００〜約５，００
０mg／単位を含有する投与単位で調製されたものであ
る。
しかしながら、淋病の単一の投与の処置に使用すると
き、抗生物質Ａ４０９２６複合体、その因子Ａ、ＰＡ、
Ｂ、Ｂ０およびＰＢのより少ない投与量、一般に０．５
〜５０mg／kgを使用して、延長された時間にわたって薬
物の有効血液レベルを維持すべきである。
き、抗生物質Ａ４０９２６複合体、その因子Ａ、ＰＡ、
Ｂ、Ｂ０およびＰＢのより少ない投与量、一般に０．５
〜５０mg／kgを使用して、延長された時間にわたって薬
物の有効血液レベルを維持すべきである。
さらに、淋病の処置において、持続作用の非経口的投与
の形態は好ましく用いられる。持続作用の配合物は、こ
の分野において知られているように、異なる機構および
方法に基づいて調製することができる。
の形態は好ましく用いられる。持続作用の配合物は、こ
の分野において知られているように、異なる機構および
方法に基づいて調製することができる。
抗生物質Ａ４０９２６複合体、その因子Ａ、Ｂ、Ｂ０、
ＰＡおよびＰＢを含有する持続作用の配合物を調製する
好ましい方法は、水性または油性の媒質中に懸濁された
この抗生物質の水不溶性形態の使用を含む。これらの形
態は、すなわち、不溶性塩としてあるいは遊離酸とし
て、事実、水溶性が低いため、筋肉注射のとき、非常に
ゆっくり放出され、これして抗生物質の持続された血液
レベルを与える。
ＰＡおよびＰＢを含有する持続作用の配合物を調製する
好ましい方法は、水性または油性の媒質中に懸濁された
この抗生物質の水不溶性形態の使用を含む。これらの形
態は、すなわち、不溶性塩としてあるいは遊離酸とし
て、事実、水溶性が低いため、筋肉注射のとき、非常に
ゆっくり放出され、これして抗生物質の持続された血液
レベルを与える。
製薬学的組成物の調製 筋肉注射のための単位投与形態は、８％のプロピレング
リコールを含有する無菌懸濁液ＵＳＰの５mlおよび抗生
物質Ａ４０９２６因子Ａの１，０００mgを使用して調製
される。
リコールを含有する無菌懸濁液ＵＳＰの５mlおよび抗生
物質Ａ４０９２６因子Ａの１，０００mgを使用して調製
される。
筋肉注射のための単位投与形態は、８％のプロピレング
リコールを含有する無菌懸濁液ＵＳＰの５mlおよび抗生
物質Ａ４０９２６因子Ｂの５０００mgを使用して調製さ
れる。
リコールを含有する無菌懸濁液ＵＳＰの５mlおよび抗生
物質Ａ４０９２６因子Ｂの５０００mgを使用して調製さ
れる。
筋肉注射のための単位投与形態は、５mlの注射用無菌水
中に懸濁された抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂナトリウム
塩の２，０００mgを用いて調製される。
中に懸濁された抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂナトリウム
塩の２，０００mgを用いて調製される。
さらに、本発明の抗生物質は、偽膜大腸炎（Ｐｅｕｄｏ
ｍｅｍｂｒａｎｕｏｓ ｃｏｌｉｔｉｓ）の原因である
クロストリジウム・ジフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕ
ｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）の生長を抑制するために有用
である。この抗生物質は、偽膜大腸炎の処置において、
製薬学的に許容されうる形態にまたはされた、抗生物質
または製薬学的に許容されうる塩の有効量を経口的に投
与することにより使用することができるであろう。この
ような使用のため、抗生物質はゼラチンカプセル剤また
は液状懸濁液の形態で投与することができる。
ｍｅｍｂｒａｎｕｏｓ ｃｏｌｉｔｉｓ）の原因である
クロストリジウム・ジフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕ
ｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）の生長を抑制するために有用
である。この抗生物質は、偽膜大腸炎の処置において、
製薬学的に許容されうる形態にまたはされた、抗生物質
または製薬学的に許容されうる塩の有効量を経口的に投
与することにより使用することができるであろう。この
ような使用のため、抗生物質はゼラチンカプセル剤また
は液状懸濁液の形態で投与することができる。
薬物としての活性のほかに、本発明の化合物は動物の生
長促進剤として使用することができる。この目的に、本
発明の１種または２種以上の化合物を適当な飼料中に混
入して経口的に投与する。用いる正確な濃度は、正常な
飼料が消費されるとき、生長促進に有効な量で活性剤を
供給するために必要な量である。
長促進剤として使用することができる。この目的に、本
発明の１種または２種以上の化合物を適当な飼料中に混
入して経口的に投与する。用いる正確な濃度は、正常な
飼料が消費されるとき、生長促進に有効な量で活性剤を
供給するために必要な量である。
動物飼料への本発明の活性化合物の添加は、好ましく
は、活性化合物を有効量で含有する適当な飼料予備混合
物を調製し、そしてこの予備混合物を完全な割合で混入
することによって達成される。あるいは、活性成分を含
有する中間濃厚物または供給補錠剤を飼料中に配合する
ことができる。
は、活性化合物を有効量で含有する適当な飼料予備混合
物を調製し、そしてこの予備混合物を完全な割合で混入
することによって達成される。あるいは、活性成分を含
有する中間濃厚物または供給補錠剤を飼料中に配合する
ことができる。
このような飼料予備混合物および完成定量を調製しかつ
投与できる方法は、参考書に記載されており［例えば，
「アプライド・アニマル・ニュートリション（Ａｐｐｌ
ｉｅｄ Ａｎｉｍａｌ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ）」，Ｗ．
Ｈ．フリードマン・アンド・カンパニー（Ｆｒｅｅｄｍ
ａｎ ａｎｄ Ｃｏ．），Ｓ．フランシスコ（Ｆｒａｎ
ｃｉｓｃｏ），米国，１９６９または「ライブストック
・フィーズ・アンド・フィーディング（Ｌｉｖｅｓｔｏ
ｃｋ Ｆｅｅｄｓ ａｎｄ Ｆｅｅｄｉｎｇ），Ｏ・ア
ンド・Ｂ・ブックス，米国オレゴン州コバリス，１９７
７参照］そしてここに引用によって加える。
投与できる方法は、参考書に記載されており［例えば，
「アプライド・アニマル・ニュートリション（Ａｐｐｌ
ｉｅｄ Ａｎｉｍａｌ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ）」，Ｗ．
Ｈ．フリードマン・アンド・カンパニー（Ｆｒｅｅｄｍ
ａｎ ａｎｄ Ｃｏ．），Ｓ．フランシスコ（Ｆｒａｎ
ｃｉｓｃｏ），米国，１９６９または「ライブストック
・フィーズ・アンド・フィーディング（Ｌｉｖｅｓｔｏ
ｃｋ Ｆｅｅｄｓ ａｎｄ Ｆｅｅｄｉｎｇ），Ｏ・ア
ンド・Ｂ・ブックス，米国オレゴン州コバリス，１９７
７参照］そしてここに引用によって加える。
次の実施例により、本発明をさらに説明する。
実施例１ アクチノマヅラ（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ）種ＡＴＣ
Ｃ３９７２７の醗酵 抗生物質Ａ４０９２６生産性菌株（Ａｃｔｉｎｏｍａｄ
ｕｒａ ｓｐ ＡＴＣＣ３９７２７）の培養物を、オー
トミール寒天傾斜培地上で２８℃において２〜３週間生
長させ、そして０．５％の肉エキス、０．５％の自動溶
解酵母、０．５％のペプトン、０．３％のカゼイン加水
分解物、２％のグルコース、０．１５％のＮａＣｌから
構成された１００mlの培地（滅菌前pH７．５）を含有す
る５００ml容のエルレンマイヤーフラスコに接種するた
めに使用する。このフラスコを２８℃において回転振盪
機使用で２００rpmで約７２時間インキュベーション
し、次いでこの培養物を４の上の培地を含有する醗酵
器に移す。この培養物を、２８℃において約７２時間２
／分の空気を流しかつ約９００rpmで攪拌しながら生
長させる。次いで、それを使用して同一培地の２００
の醗酵器を接種する。この醗酵器を２８℃において１０
０ ／分の空気で通気かつ２５０rpmで攪拌する。抗生
物質の生産を紙ディスク寒天の拡散法によりＢ．ｓｕｂ
ｔｉｌｉｓを最小培地上の試験有機体として使用して監
視する。最高活性は７２〜９６時間後に得られる。
Ｃ３９７２７の醗酵 抗生物質Ａ４０９２６生産性菌株（Ａｃｔｉｎｏｍａｄ
ｕｒａ ｓｐ ＡＴＣＣ３９７２７）の培養物を、オー
トミール寒天傾斜培地上で２８℃において２〜３週間生
長させ、そして０．５％の肉エキス、０．５％の自動溶
解酵母、０．５％のペプトン、０．３％のカゼイン加水
分解物、２％のグルコース、０．１５％のＮａＣｌから
構成された１００mlの培地（滅菌前pH７．５）を含有す
る５００ml容のエルレンマイヤーフラスコに接種するた
めに使用する。このフラスコを２８℃において回転振盪
機使用で２００rpmで約７２時間インキュベーション
し、次いでこの培養物を４の上の培地を含有する醗酵
器に移す。この培養物を、２８℃において約７２時間２
／分の空気を流しかつ約９００rpmで攪拌しながら生
長させる。次いで、それを使用して同一培地の２００
の醗酵器を接種する。この醗酵器を２８℃において１０
０ ／分の空気で通気かつ２５０rpmで攪拌する。抗生
物質の生産を紙ディスク寒天の拡散法によりＢ．ｓｕｂ
ｔｉｌｉｓを最小培地上の試験有機体として使用して監
視する。最高活性は７２〜９６時間後に得られる。
実施例２ 抗生物質Ａ４０９２６の回収 Ａ）醗酵肉汁を４℃に冷却し、pH９．５にしかつ攪拌す
る。約１時間後、それを濾過し、濾液をpH約３．５に水
性鉱酸で調節する。この混合物を３０分間４℃で攪拌
し、次いで濾過助剤（Ｈｙｆｌｏ−ＦｌｏＭＡ ）を使
用して濾過する。透明濾液を排出し、濾過ケーキを脱イ
オン水中に懸濁させ、pH約８．５に調節し、次いで濾過
する。回収されたケーキを同一手順にかける。プールし
た濾液は抗生物質Ａ４０９２６を含有する。
る。約１時間後、それを濾過し、濾液をpH約３．５に水
性鉱酸で調節する。この混合物を３０分間４℃で攪拌
し、次いで濾過助剤（Ｈｙｆｌｏ−ＦｌｏＭＡ ）を使
用して濾過する。透明濾液を排出し、濾過ケーキを脱イ
オン水中に懸濁させ、pH約８．５に調節し、次いで濾過
する。回収されたケーキを同一手順にかける。プールし
た濾液は抗生物質Ａ４０９２６を含有する。
Ｂ）膨潤したＤ−アラ（Ａｌａ）−Ｄ−アラ−ε−アミ
ノカプロイル−セファロース変性マトリックス（２）
を、実施例１に従って得られた醗酵肉汁（それを濾過
し、そして透明溶液を約８．５のpHにした後）に、ある
いは上の実施例２Ａに従って得られたプールした濾液に
添加する。室温において一夜攪拌した後、この樹脂を濾
過により回収し、そして５％（w/v）のＮａＣｌを含有
する約２×１０の０．４５ミリモルのＨＣｌ−ＴＲＩ
Ｓ緩衝液pH７．５（ＴＲＩＳ＝２−アミノ−２−ヒドロ
キシメチル−１，３−プロパンジオール）で洗浄し、次
いで蒸留水（４×２０）で洗浄する。
ノカプロイル−セファロース変性マトリックス（２）
を、実施例１に従って得られた醗酵肉汁（それを濾過
し、そして透明溶液を約８．５のpHにした後）に、ある
いは上の実施例２Ａに従って得られたプールした濾液に
添加する。室温において一夜攪拌した後、この樹脂を濾
過により回収し、そして５％（w/v）のＮａＣｌを含有
する約２×１０の０．４５ミリモルのＨＣｌ−ＴＲＩ
Ｓ緩衝液pH７．５（ＴＲＩＳ＝２−アミノ−２−ヒドロ
キシメチル−１，３−プロパンジオール）で洗浄し、次
いで蒸留水（４×２０）で洗浄する。
抗生物質Ａ４０９２６を樹脂から１％（w/v）のアンモ
ニア水和物（２×２０）で溶離する。溶離液を室温に
おいて一夜放置し、次いで小さい体積（約２．５）に
濃縮する。水をｎ−ブタノールとの共沸蒸留により排除
する。石油エーテルを次いで添加し、３．４ｇの粗製抗
生物質Ａ４０９２６複合体を沈殿させる。
ニア水和物（２×２０）で溶離する。溶離液を室温に
おいて一夜放置し、次いで小さい体積（約２．５）に
濃縮する。水をｎ−ブタノールとの共沸蒸留により排除
する。石油エーテルを次いで添加し、３．４ｇの粗製抗
生物質Ａ４０９２６複合体を沈殿させる。
実施例３ 抗生物質Ａ４０９２６複合体ＡＢの精製 上の実施例２の手順に本質的に従って得られた粗製抗生
物質Ａ４０９２６複合体（７５０mg：ＨＰＬＣ力価７０
％）を４００mlの水中に溶解し、pH７．５に調節し、濾
過する。次いで、濾液をＤ−アラ−Ｄ−アラ−ε−アミ
ノカプロイル−セファロース（５０mlの膨潤樹脂；床の
高さ＝５cm）の親和性クロマトグラフィーにかける。こ
のカラムを、pH７．５にＨＣ１で調節した２モルのＮａ
Ｃｌを含有する０．１６％（ｗ／ｖ）のアンモニアの平
衡化し、次の３種類の緩衝液で順次に展開する： 緩衝液Ａ：pH７．５にＨＣ１で調節した２モルのＮａＣ
ｌを含有する０．１６％（ｗ／ｖ）のアンモニア、
（２．６カラムの床体積）； 緩衝液Ｂ：pH９．５にＨＣ１で調節した２モルのＮａＣ
ｌを含有する０．１６％（ｗ／ｖ）のアンモニア、（１
６カラムの床体積）： 緩衝液Ｃ：pH１１．４に調節した１％（ｗ／ｖ）の水性
アンモニア、（２．６カラムの床体積）。
物質Ａ４０９２６複合体（７５０mg：ＨＰＬＣ力価７０
％）を４００mlの水中に溶解し、pH７．５に調節し、濾
過する。次いで、濾液をＤ−アラ−Ｄ−アラ−ε−アミ
ノカプロイル−セファロース（５０mlの膨潤樹脂；床の
高さ＝５cm）の親和性クロマトグラフィーにかける。こ
のカラムを、pH７．５にＨＣ１で調節した２モルのＮａ
Ｃｌを含有する０．１６％（ｗ／ｖ）のアンモニアの平
衡化し、次の３種類の緩衝液で順次に展開する： 緩衝液Ａ：pH７．５にＨＣ１で調節した２モルのＮａＣ
ｌを含有する０．１６％（ｗ／ｖ）のアンモニア、
（２．６カラムの床体積）； 緩衝液Ｂ：pH９．５にＨＣ１で調節した２モルのＮａＣ
ｌを含有する０．１６％（ｗ／ｖ）のアンモニア、（１
６カラムの床体積）： 緩衝液Ｃ：pH１１．４に調節した１％（ｗ／ｖ）の水性
アンモニア、（２．６カラムの床体積）。
緩衝液Ｃは単一の分画で抗生物質Ａ４０９２６複合体Ａ
Ｂを溶離する。この溶離された分画をpH７．０に調節
し、そして１０ミリモルのＴＲＩＳ−ＨＣ１ pH７．０
で緩衝化した同一の親和性カラムに再適用する。このカ
ラムを脱塩が完了するまで蒸留水で洗浄する。
Ｂを溶離する。この溶離された分画をpH７．０に調節
し、そして１０ミリモルのＴＲＩＳ−ＨＣ１ pH７．０
で緩衝化した同一の親和性カラムに再適用する。このカ
ラムを脱塩が完了するまで蒸留水で洗浄する。
次いで、抗生物質を２カラム体積の０．３９％（ｗ／
ｖ）で水性アンモニアpH１１．０で溶離する。溶離され
た分画を小さい水性混合物に濃縮し、次いで凍結乾燥す
る。純粋な抗生物質Ａ４０９２６複合体ＡＢ（３７４m
g）が得られる。
ｖ）で水性アンモニアpH１１．０で溶離する。溶離され
た分画を小さい水性混合物に濃縮し、次いで凍結乾燥す
る。純粋な抗生物質Ａ４０９２６複合体ＡＢ（３７４m
g）が得られる。
実施例４ 抗生物質Ａ４０９２６因子ＡおよびＢの単離 Ａ）実施例２に従って得られた抗生物質Ａ４０９２６複
合体（３．３ｇ）または実施例３に従って得られた抗生
物質Ａ４０９２６複合体ＡＢ（２．３ｇ）を０．５の
水中に懸濁させ、攪拌し、次いで濾過する。透明な濾液
をシラン化シリカゲルのカラム［２００ｇ；床の高さ１
８cm；シラン化シリカゲル（Ｓｉｌｃａｇｅｌ）６０；
マーク・インコーポレーテッド（Ｍｅｒｃｋ Ｉｎ
ｃ．）］［これは溶液Ａ（０．２５％（ｗ／ｖ）のＮａ
Ｈ２ＰＯ４・Ｈ２Ｏおよび０．００１モルの２．５％
（ｗ／ｖ）のＮａＣｌを含有し、ＮａＯＨでpH６．０の
調節されている）で予備平衡化されている］に適用す
る。このカラムを溶液Ａ中の０％〜４０％（ｖ／ｖ）の
アセトニトリルの直線勾配で溶離し、合計の体積は約７
で約４８時間である。約１５．５mlの分画を集め、そ
してバシルス・スブチリス（Ｂｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔ
ｉｌｉｓ）についてのバイオアッセイによりアッセイ
し、そしてＨＰＬＣにより分析する。同様な抗生物質含
量を有する分画をプールする。分画No.３１０−３３０
およびNo.３４８−３６５は、それぞれＡ４０９２６因
子ＡおよびＡ４０９２６因子Ｂと明らかにされた抗生物
質を含有した。
合体（３．３ｇ）または実施例３に従って得られた抗生
物質Ａ４０９２６複合体ＡＢ（２．３ｇ）を０．５の
水中に懸濁させ、攪拌し、次いで濾過する。透明な濾液
をシラン化シリカゲルのカラム［２００ｇ；床の高さ１
８cm；シラン化シリカゲル（Ｓｉｌｃａｇｅｌ）６０；
マーク・インコーポレーテッド（Ｍｅｒｃｋ Ｉｎ
ｃ．）］［これは溶液Ａ（０．２５％（ｗ／ｖ）のＮａ
Ｈ２ＰＯ４・Ｈ２Ｏおよび０．００１モルの２．５％
（ｗ／ｖ）のＮａＣｌを含有し、ＮａＯＨでpH６．０の
調節されている）で予備平衡化されている］に適用す
る。このカラムを溶液Ａ中の０％〜４０％（ｖ／ｖ）の
アセトニトリルの直線勾配で溶離し、合計の体積は約７
で約４８時間である。約１５．５mlの分画を集め、そ
してバシルス・スブチリス（Ｂｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔ
ｉｌｉｓ）についてのバイオアッセイによりアッセイ
し、そしてＨＰＬＣにより分析する。同様な抗生物質含
量を有する分画をプールする。分画No.３１０−３３０
およびNo.３４８−３６５は、それぞれＡ４０９２６因
子ＡおよびＡ４０９２６因子Ｂと明らかにされた抗生物
質を含有した。
Ｂ）単一のＡ４０９２６因子ＡおよびＢを含有するプー
ルした分画を、減圧濃縮してアセトニトリルを除去し、
水（初期の溶液の約２倍の体積）で希釈し、そして前述
の型のシラン化シリカゲルのカラム（膨潤したマトリッ
クスの体積：５０ml；床の高さ：１５cm）に適用する。
このカラムを脱イオン水で脱塩が完了するまで脱イオン
水で洗浄し、最後にセトニトリル／水６０：４０（ｖ／
ｖ）で展開する。
ルした分画を、減圧濃縮してアセトニトリルを除去し、
水（初期の溶液の約２倍の体積）で希釈し、そして前述
の型のシラン化シリカゲルのカラム（膨潤したマトリッ
クスの体積：５０ml；床の高さ：１５cm）に適用する。
このカラムを脱イオン水で脱塩が完了するまで脱イオン
水で洗浄し、最後にセトニトリル／水６０：４０（ｖ／
ｖ）で展開する。
溶離された分画を減圧濃縮し、そして残留物を凍結乾燥
すると、溶離された分画の最初の群（上の分画３１０−
３３０）から１３４mgの抗生物質Ａ４０９２６因子Ａが
得られ、そして溶離された分画の第２群（上の分画３４
８−３６５）から２０６mgのＡ４０９２６因子Ｂが得ら
れる。
すると、溶離された分画の最初の群（上の分画３１０−
３３０）から１３４mgの抗生物質Ａ４０９２６因子Ａが
得られ、そして溶離された分画の第２群（上の分画３４
８−３６５）から２０６mgのＡ４０９２６因子Ｂが得ら
れる。
実施例５ 抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡおよびＰＢの単離 実施例２Ａの手順および実施例２Ｂの手順の第１工程に
本質的に従うことにより、樹脂に結合した抗生物質を１
％（ｗ／ｖ）のアンモニア水和物（２×２０）で溶離
する。溶離液をpH７．８に硫酸で調節し、そしてｎ−ブ
タノールと共沸蒸留することにより小さい体積に減圧濃
縮して水性濃縮物を形成し、次いでこれを紙で濾過す
る。回収された濾液は抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡ、
抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＢおよび少量の抗生物質Ａ
４０９２６因子ＡＢおよび因子Ｂを含有する（ＨＰＬ
Ｃ）。約５０mg／mlの純粋な抗生物質Ａ４０９２６複合
体（ＨＰＬＣの分析）を含有するこの水性濃縮物の試料
（１０ml）を５μｍの孔大きさのフィルター［アクトデ
ィスク（Ａｃｒｏｄｉｓｃ ）；ゲルマン・サイエンス
・インコーポレーテッド］で濾過し、次いで２０ｇのオ
クタデシルシリル逆相シリカゲルを含有するステンレス
のカラム（直径＝２cm）［リチリソーブ（Ｌｉｃｈｒｉ
ｓｏｒｂ）ＲＰ １８、マーク・インコーポレーテッ
ド；粒子サイズ１０μｍ］に適用する。次いで、シリカ
ゲルをクロマトスパク・ボヅルプレプ（Ｃｈｒｏｍａｔ
ｏｓｐａｃ Ｍｏｄｕｌｐｒｅｐ）装置［ヨウベン・イ
ボン（Ｙｏｂｅｎ Ｙｖｏｎ）、フランス］のステンレ
ス鋼中に適度の圧力（公称約１４バール）のもとに詰
め、アセトニトリルと１８ミリモルのリン酸塩緩衝液pH
６．０との２７：７５（ｖ／ｖ）混合物で平衡化する。
この平衡化に使用したのと同一の溶媒混合物を使用して
約１０．５ml／分の流速で溶離を実施する。溶離液をＢ
ｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓについてのバイオアッ
セイおよびＨＰＬＣにより監視する。同様な抗生物質を
有する分画をプールし、そして５クロマトグラフィー展
開の均質分画を濃縮して有機溶媒を蒸発させる。得られ
た溶液を水性１モルの塩化ナトリウムでもとの体積の２
倍に希釈し、そして水で平衡化したシラン化シリガゲの
カラム（５０ｇ；床に高さ５cm；シラン化シリカゲル６
０；マーク・インコーポレーテッド）に適用する。
本質的に従うことにより、樹脂に結合した抗生物質を１
％（ｗ／ｖ）のアンモニア水和物（２×２０）で溶離
する。溶離液をpH７．８に硫酸で調節し、そしてｎ−ブ
タノールと共沸蒸留することにより小さい体積に減圧濃
縮して水性濃縮物を形成し、次いでこれを紙で濾過す
る。回収された濾液は抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡ、
抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＢおよび少量の抗生物質Ａ
４０９２６因子ＡＢおよび因子Ｂを含有する（ＨＰＬ
Ｃ）。約５０mg／mlの純粋な抗生物質Ａ４０９２６複合
体（ＨＰＬＣの分析）を含有するこの水性濃縮物の試料
（１０ml）を５μｍの孔大きさのフィルター［アクトデ
ィスク（Ａｃｒｏｄｉｓｃ ）；ゲルマン・サイエンス
・インコーポレーテッド］で濾過し、次いで２０ｇのオ
クタデシルシリル逆相シリカゲルを含有するステンレス
のカラム（直径＝２cm）［リチリソーブ（Ｌｉｃｈｒｉ
ｓｏｒｂ）ＲＰ １８、マーク・インコーポレーテッ
ド；粒子サイズ１０μｍ］に適用する。次いで、シリカ
ゲルをクロマトスパク・ボヅルプレプ（Ｃｈｒｏｍａｔ
ｏｓｐａｃ Ｍｏｄｕｌｐｒｅｐ）装置［ヨウベン・イ
ボン（Ｙｏｂｅｎ Ｙｖｏｎ）、フランス］のステンレ
ス鋼中に適度の圧力（公称約１４バール）のもとに詰
め、アセトニトリルと１８ミリモルのリン酸塩緩衝液pH
６．０との２７：７５（ｖ／ｖ）混合物で平衡化する。
この平衡化に使用したのと同一の溶媒混合物を使用して
約１０．５ml／分の流速で溶離を実施する。溶離液をＢ
ｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓについてのバイオアッ
セイおよびＨＰＬＣにより監視する。同様な抗生物質を
有する分画をプールし、そして５クロマトグラフィー展
開の均質分画を濃縮して有機溶媒を蒸発させる。得られ
た溶液を水性１モルの塩化ナトリウムでもとの体積の２
倍に希釈し、そして水で平衡化したシラン化シリガゲの
カラム（５０ｇ；床に高さ５cm；シラン化シリカゲル６
０；マーク・インコーポレーテッド）に適用する。
このカラムを脱塩が完結するまで脱イオン水で洗浄し
（水性ＡｇＮＯ３の添加後、溶離液中にＡｇＣｌの沈殿
が形成しない）、次いでアセトニトリル：水１：１（ｖ
／ｖ）で溶離する。同様な抗生物質含量（ＨＰＬＣの分
析）を有する溶離液をプールし、ｎ−ブタオノールとの
共沸蒸留により小さい体積に濃縮して水相が得られ、次
いでこれを凍結乾燥する。収量： 抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡ：５５mg 抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＢ：５１mg 抗生物質Ａ４０９２６因子Ａ ：３８mg 抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ０：３３mg 実施例６ 抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂを単離する別の方法 実施例２（最後の工程）に従いつくられた２つの調製物
のプールした濃縮物を濾過し、そして濾液を水で予備平
衡化したシラン化シリカゲルのクロマトグラフィーのカ
ラム（４００ｇ；床高さ３０cm；シリカゲル６０、７０
−２３０メッシュ、マーク・インコーポレーテッド）に
適用する。
（水性ＡｇＮＯ３の添加後、溶離液中にＡｇＣｌの沈殿
が形成しない）、次いでアセトニトリル：水１：１（ｖ
／ｖ）で溶離する。同様な抗生物質含量（ＨＰＬＣの分
析）を有する溶離液をプールし、ｎ−ブタオノールとの
共沸蒸留により小さい体積に濃縮して水相が得られ、次
いでこれを凍結乾燥する。収量： 抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡ：５５mg 抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＢ：５１mg 抗生物質Ａ４０９２６因子Ａ ：３８mg 抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ０：３３mg 実施例６ 抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂを単離する別の方法 実施例２（最後の工程）に従いつくられた２つの調製物
のプールした濃縮物を濾過し、そして濾液を水で予備平
衡化したシラン化シリカゲルのクロマトグラフィーのカ
ラム（４００ｇ；床高さ３０cm；シリカゲル６０、７０
−２３０メッシュ、マーク・インコーポレーテッド）に
適用する。
このカラムを水（６）で洗浄し、そして吸着された抗
生物質を次の順序に従いアトセニトリル／水で溶離す
る： ２．７ の ５％（ｖ／ｖ）の水中アセトニトリル １．６ の１０％（ｖ／ｖ）の水中アセトニトリル ２．９７の２０％（ｖ／ｖ）の水中アセトニトリル ３．１５の１５％（ｖ／ｖ）の水中アセトニトリル 約１８mlの分画を集める。溶離された分画の活性を、感
受性の微生物、例えば、Ｂｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌ
ｉｓについての紙ディスクのバイオアッセイおよびＨＰ
ＬＣによる分析により試験する。同様な抗生物質含量を
有する分画をプールし（分画４７２−５２６）、減圧濃
縮する。ｎ−ブタノールをこの濃縮物に添加して、水を
共沸蒸留的に除去する。残留するブタノール溶液を順次
に小さい体積に濃縮して抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ
（１．４ｇ）を沈殿させる。この生産物を石油エーテル
で攪拌下に洗浄し、そして濾過により（３回）により集
める。減圧濃縮すると、７６０mgの抗生物質Ａ４０９２
６因子Ｂが得られる。
生物質を次の順序に従いアトセニトリル／水で溶離す
る： ２．７ の ５％（ｖ／ｖ）の水中アセトニトリル １．６ の１０％（ｖ／ｖ）の水中アセトニトリル ２．９７の２０％（ｖ／ｖ）の水中アセトニトリル ３．１５の１５％（ｖ／ｖ）の水中アセトニトリル 約１８mlの分画を集める。溶離された分画の活性を、感
受性の微生物、例えば、Ｂｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌ
ｉｓについての紙ディスクのバイオアッセイおよびＨＰ
ＬＣによる分析により試験する。同様な抗生物質含量を
有する分画をプールし（分画４７２−５２６）、減圧濃
縮する。ｎ−ブタノールをこの濃縮物に添加して、水を
共沸蒸留的に除去する。残留するブタノール溶液を順次
に小さい体積に濃縮して抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ
（１．４ｇ）を沈殿させる。この生産物を石油エーテル
で攪拌下に洗浄し、そして濾過により（３回）により集
める。減圧濃縮すると、７６０mgの抗生物質Ａ４０９２
６因子Ｂが得られる。
上のカラムクロマトグラフィーに抗生物質Ａ４０９２６
因子Ｂを再びかけることにより、生産物（５４０mg）の
抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ０が得られ、これは上の抗
生物質Ａ４０９２６因子Ｂについて報告した同一の物理
化学的特性を有し、ただしそれはただ１つのピークをＨ
ＰＬＣ分析で示し、すなわち、テイコプラニンＡ２成分
２に関して１．２２の保持時間をもつピークを示す。
因子Ｂを再びかけることにより、生産物（５４０mg）の
抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ０が得られ、これは上の抗
生物質Ａ４０９２６因子Ｂについて報告した同一の物理
化学的特性を有し、ただしそれはただ１つのピークをＨ
ＰＬＣ分析で示し、すなわち、テイコプラニンＡ２成分
２に関して１．２２の保持時間をもつピークを示す。
実施例７ 抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡおよび抗生物質Ａ４０９
２６因子ＰＢを、それぞれ抗生物質Ａ４０９２６因子Ａ
および抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂに転化する方法 抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡおよび抗生物質Ａ４０９
２６因子ＰＢ（５０mg）を別々に２．５mlの水性１％
（ｗ／ｖ）のＮＨ４ＯＨ中に溶解し、そして得られた溶
液を約２４時間室温に攪拌しながら保持する。抗生物質
Ａ４０９２６因子Ａははじめ抗生物質Ａ４０９２６因子
ＰＡを含有する溶液から、そして抗生物質Ａ４０９２６
因子Ｂははじめ抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＢ含有する
溶液から、ｎ−ブタノールとの共沸蒸留により水を除去
し、エチレエーテルで沈殿させ、そして沈殿を濾過によ
り集めることにより、それぞれ得られる（収率約７５
％）。
２６因子ＰＢを、それぞれ抗生物質Ａ４０９２６因子Ａ
および抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂに転化する方法 抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡおよび抗生物質Ａ４０９
２６因子ＰＢ（５０mg）を別々に２．５mlの水性１％
（ｗ／ｖ）のＮＨ４ＯＨ中に溶解し、そして得られた溶
液を約２４時間室温に攪拌しながら保持する。抗生物質
Ａ４０９２６因子Ａははじめ抗生物質Ａ４０９２６因子
ＰＡを含有する溶液から、そして抗生物質Ａ４０９２６
因子Ｂははじめ抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＢ含有する
溶液から、ｎ−ブタノールとの共沸蒸留により水を除去
し、エチレエーテルで沈殿させ、そして沈殿を濾過によ
り集めることにより、それぞれ得られる（収率約７５
％）。
Ｄ−アラ−Ｄ−アラ−セファロースの調製 活性化ＣＨ−セファロース（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ）（フ
ァーマシア・ファイン・ケミカルス）（１ｇ）を１ミリ
モルの冷氷塩酸中に１５分間膨潤させ、そして同一溶液
で洗浄する。得られるゲル（約３ml）を０．５モルの塩
化ナトリウムおよび０．１モルの重炭酸ナトリウム緩衝
液pH８中のＤ−アラニル−Ｄ−アラニン（３０mg）の溶
液と混合する。この混合物を室温で反転しながら１時間
回転させる。
ァーマシア・ファイン・ケミカルス）（１ｇ）を１ミリ
モルの冷氷塩酸中に１５分間膨潤させ、そして同一溶液
で洗浄する。得られるゲル（約３ml）を０．５モルの塩
化ナトリウムおよび０．１モルの重炭酸ナトリウム緩衝
液pH８中のＤ−アラニル−Ｄ−アラニン（３０mg）の溶
液と混合する。この混合物を室温で反転しながら１時間
回転させる。
カップリング反応が完了した後、過剰の配位子を緩衝液
で洗浄除去する。デキストラン担体の結合しない活性化
基を１モルのエタノールアミン塩酸塩でpH９で１時間処
理することによおりブロッキング（ｂｌｏｃｋｉｎｇ）
する。次いで、セファロース（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ）−
ε−アミノカプロイル−Ｄ−アラニル−Ｄ−アラニン変
性マトリックスを濾過により分離し、交互に０．５モル
の塩化ナトリウムおよび０．１モルの酢酸ナトリウムpH
４で、そして０．５モルの塩化ナトリウムおよび０．１
モルのトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン緩衝液
pH８で完全に洗浄する（４回）。
で洗浄除去する。デキストラン担体の結合しない活性化
基を１モルのエタノールアミン塩酸塩でpH９で１時間処
理することによおりブロッキング（ｂｌｏｃｋｉｎｇ）
する。次いで、セファロース（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ）−
ε−アミノカプロイル−Ｄ−アラニル−Ｄ−アラニン変
性マトリックスを濾過により分離し、交互に０．５モル
の塩化ナトリウムおよび０．１モルの酢酸ナトリウムpH
４で、そして０．５モルの塩化ナトリウムおよび０．１
モルのトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン緩衝液
pH８で完全に洗浄する（４回）。
第１図は、抗生物質Ａ４０９２６因子ＡのＵＶスベルト
ルである。 第２図は、抗生物質Ａ４０９２６因子ＡのＩＲスペクト
ルである。 第３図は、抗生物質Ａ４０９２６因子Ａの１Ｈ−ＮＭＲ
スペクトルである。 第４図は、抗生物質Ａ４０９２６因子ＢのＵＶスベルト
ルである。 第５図は、抗生物質Ａ４０９２６因子ＢのＩＲスペクト
ルである。 第６図は、抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂの１Ｈ−ＮＭＲ
スペクトルである。 第７図は、抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡのＵＶスベル
トルである。 第８図は、抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡのＩＲスペク
トルである。 第９図は、抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡの１Ｈ−ＮＭ
Ｒスペクトルである。 第１０図は、抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＢのＵＶスベ
ルトルである。 第１１図は、抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＢのＩＲスペ
クトルである。 第１２図は、抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＢの１Ｈ−Ｎ
ＭＲスペクトルである。 第１３図は、抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＢの１Ｈ−Ｎ
ＭＲスペクトルである。
ルである。 第２図は、抗生物質Ａ４０９２６因子ＡのＩＲスペクト
ルである。 第３図は、抗生物質Ａ４０９２６因子Ａの１Ｈ−ＮＭＲ
スペクトルである。 第４図は、抗生物質Ａ４０９２６因子ＢのＵＶスベルト
ルである。 第５図は、抗生物質Ａ４０９２６因子ＢのＩＲスペクト
ルである。 第６図は、抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂの１Ｈ−ＮＭＲ
スペクトルである。 第７図は、抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡのＵＶスベル
トルである。 第８図は、抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡのＩＲスペク
トルである。 第９図は、抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡの１Ｈ−ＮＭ
Ｒスペクトルである。 第１０図は、抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＢのＵＶスベ
ルトルである。 第１１図は、抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＢのＩＲスペ
クトルである。 第１２図は、抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＢの１Ｈ−Ｎ
ＭＲスペクトルである。 第１３図は、抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＢの１Ｈ−Ｎ
ＭＲスペクトルである。
フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:03） (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:03） (72)発明者 アンジエロ・ボルギ イタリー国20124ミラノ・ビアピエルルイ ジダ パレストリナ36 (72)発明者 ベス・ピー・ゴールドスタイン イタリー国20121ミラノ・コルソガリバル デイ46 (72)発明者 ビツトリオ・アリオリ イタリー国コモ・22070カツシナリツツア ルデイ・ビアベルデイ９ (72)発明者 ジヨバンニ・カツサニ イタリー国27100パビア・ビアビツタデイ ーニ ３ (72)発明者 フランチエスコ・パレンテイ イタリー国20125ミラノ・ビアエミリオデ マルキ８
Claims (10)
- 【請求項１】下記に示す理化学的特性を有することを特
徴とする、抗生物質Ａ４０９２６複合体、抗生物質Ａ４
０９２６因子Ａ、抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ、抗生物
質Ａ４０９２６因子Ｂ０、抗生物質Ａ４０９２６因子Ｐ
Ａ、抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＢ、それらの混合物お
よびそれらの付加塩から選ばれる抗生物質： 塩でない形態の抗生物質Ａ４０９２６因子Ａ： Ａ）次の吸収極大を示す紫外線吸収スペクトル： λmax (nm) ａ）0.１Ｎ ＨＣｌ ２８１ ｂ）リン酸塩緩衝液 pH7.３８ ２８１ ３００ （肩） ｃ）0.１Ｎ 水酸化ナトリウム または水酸化カリウム ３００ ｄ）メタノール ２８２ ｅ）リン酸塩緩衝液 pH9.０ ２８２ ３００ （肩） Ｂ）次の吸収極大を示す赤外線吸収スペクトル(cm-1): ３７００−３１００、３１００−２８００（ｎｕｊｏ
ｌ）；１６５５；１６２０−１５６０；１５１０；１４
８０−１４１０（ｎｕｊｏｌ）；１３７５（ｎｕｊｏ
ｌ）；１３２０−１２５０；１２５０−１１９０；１１
００−９５０；８４５；８１０；７２０（ｎｕｊｏ
ｌ）、 Ｃ）ＤＭＳＯ ｄ６（ヘキサデユーテロジメチルスルホ
キシド）中で記録した２７０ＭHzにおける次の群の信号
（ppm）を示す１Ｈ−ＮＭＲスペクトル、内部標準とし
てＴＭＳ（0.00ppm）使用、（δ＝ppm）：δ0.８６
（ｔ，６Ｈ）；1.２１（約１１Ｈ）；1.４３（２Ｈ）；
2.０１（２Ｈ）；2.３１−2.３４（３Ｈ）；４−6.２
（約１６Ｈ）；6.２−８（約２３Ｈ）；8.４４、9.２
２、9.６６（広い帯；移動性プロトン）2.４−４：Ｈ２
Ｏピークからの干渉、 Ｄ）次の条件下に逆相ＨＰＬＣで分析したとき、テイコ
プラニンＡ２成分２（Ｒｔ＝２0.３分）に関する1.１２
の保持時間（Ｒｔ）：カラム：ウルトラスフエアー（Ｕ
ｌｔｒａｓｐｈｅｒｅ）ＯＤＳ（５μｍ）アルテツクス
（Ａｌｔｅｘ）［ベツクマン（Ｂｅｃｋｍａｎ）］4.６
mm（内径）×２５０mm 予備カラム：ブラウンリー・ラブス（Ｂｒｏｗｎｌｅｅ
Ｌａｂｓ）ＲＰ １８（５μｍ） 溶離剤Ａ： ＣＨ３ＣＮ １０％ ＮａＨ２ＰＯ４・Ｈ２Ｏ （2.５ｇ／ｌ） ９０％ pH6.０に調節、 溶離剤Ｂ： ＣＨ３ＣＮ ７０％ ＮａＨ２ＰＯ４・Ｈ２Ｏ （2.５ｇ／ｌ） ３０％ pH6.０に調節、 溶離：溶離剤Ａ中の５％から６０％への溶離剤Ｂの直線
勾配、４０分、 流速：1.８ml／分、 ＵＶ検出器：２５４ｎｍ、 内部標準：テイコプラニンＡ２成分２［グルポ・レペチ
ツト（Ｇｒｕｐｐｏ Ｌｅｐｅｔｉｔ）Ｓ．Ｐ．
Ａ．］、 同一の条件下に、テストステロン［ルセル・ウクラフ
（Ｒｏｕｓｓｅｌ Ｕｃｌａｆ）］に関する保持時間は
0.６０である、 Ｅ）試料を不活性雰囲気（△ｗ 4.６％）のもとで約１
４０℃において前もって乾燥した後、元素分析は次の近
似百分率組成（平均）を示す： 炭素５5.８２％；水素5.１７％；窒素6.３１％；塩素
（合計）4.２４％；塩素（イオン性）0.３７％、 空気中で９００℃における無機残留物：1.２％、 Ｆ）過剰のＨＣｌの添加後にＫＯＨで滴定すると、２−
メトキシエタノール（ＭＣＳ）：水、４：１、中の酸−
塩基滴定のプロフイルは、次のｐｋＭＣＳを有するイオ
ン化作用を示す：4.６、5.６、7.２、9.２、 Ｇ）次のクロマトグラフイー系における0.２４のＲｆお
よび0.７０のテイコプラニンＡ２成分２に関するＲｆ
値： ５％（ｗ／ｖ）の水性Ｎａ２ＳＯ４ ７０ アセトニトリル ３０ シラン化シリカゲル６０Ｆ254メルク（Ｍｅｒｃｋ）板
（層の厚さ0.２５mm） 可視化： −ＵＶ光 −パウリ試薬（Ｐａｕｌｙ Ｒｅａｇｅｎｔ）、すなわ
ち、ジアゾ化スルフアニル酸［ジヤーナル・オブ・クロ
マトグラフイー（J.Chromatog.）２０，１７１（１９６
５）、ツアイトシユリフト・フユール・フイジカリツシ
エ・ヘミー（Ｚ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）２９
２，９９（１９５３）］を使用する黄色 −Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ ＡＴＣＣ ６６３３を使用す
る最小デイビス（Ｄａｖｉｓ）培地上のバイオオートグ
ラフイー、 Ｈ）１７１７にＭ＋Ｈ ピークを示すＦＡＢ−ＭＳスペ
クトルからデジユーム（ｄｅｓｕｍｅ）した約１７１６
の分子量、 塩でない形態の抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ： Ａ）次の吸収極大を示す紫外線吸収スペクトル： λmax (nm) ａ）0.１Ｎ ＨＣｌ ２８２ ｂ）リン酸塩緩衝液 pH7.３８ ２８１ ３００ （肩） ｃ）0.１Ｎ 水酸化ナトリウム または水酸化カリウム ３００ ｄ）リン酸塩緩衝液 pH9.０ ２８３ ３００ （肩） ｅ）メタノール ２８２ Ｂ）次の吸収極大を示す赤外線吸収スペクトル(cm-1)： ３７００−３０８０、３０８０−２７００（ｎｕｊｏ
ｌ）；１７２０−１６２５；１６２５−１５６０；１５
０５；１４６０（ｎｕｊｏｌ）；１３７５（ｎｕｊｏ
ｌ）；１２９５；１２３０；１２１０；１１５０；１１
００−１０４０；１０３０；１０１５；９７０；８９
０；８４０；８１０；７２０（ｎｕｊｏｌ）、 Ｃ）ＤＭＳＯ ｄ６（ヘキサデユーテロジメチルスルホ
キシド）中で記録した２７０ＭHz １Ｈ−ＮＭＲにおけ
る次の群の信号（ppm）を示す１Ｈ−ＮＭＲスペクト
ル、内部標準としてＴＭＳ（0.00ppm）を使用、（δ＝p
pm）： δ0.８５（ｄ、イソプロピルのＣＨ３）；1.１５（約１
３Ｈ）；1.４４（約２Ｈ）；2.０２（２Ｈ）；2.３２−
2.３５（３Ｈ）；４−6.１（約１６Ｈ）；6.１−８（約
２３Ｈ）；8.５２、9.３０、9.６８（広い帯；移動性プ
ロトン） 2.５−４：Ｈ２Ｏピークからの干渉、 Ｄ）次の条件下に逆相ＨＰＬＣで分析したとき、テイコ
プラニンＡ２成分２（Ｒｔ＝２0.３分）に関する1.２２
および1.２７の保持時間（Ｒｔ）： カラム：ウルトラスフエアー（Ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒ
ｅ）ＯＤＳ（５μｍ）アルテツクス（Ａｌｔｅｘ）［ベ
ツクマン（Ｂｅｃｋｍａｎ）］4.６mm（内径）×２５０
mm 予備カラム：ブラウンリー・ラブス（Ｂｒｏｗｎｌｅｅ
Ｌａｂｓ）ＲＰ １８（５μｍ） 溶離剤Ａ： ＣＨ３ＣＮ １０％ ＮａＨ２ＰＯ４・Ｈ２Ｏ （2.５ｇ／ｌ） ９０％ pH6.０に調節、 溶離剤Ｂ： ＣＨ３ＣＮ ７０％ ＮａＨ２ＰＯ４・Ｈ２Ｏ （2.５ｇ／ｌ） ３０％ pH6.０に調節、 溶離：溶離剤Ａ中の５％から６０％への溶離剤Ｂの直線
勾配、４０分、 流速：1.８ml／分、 ＵＶ検出器：２５４ｎｍ、 内部標準：テイコプラニンＡ２成分２［グルポ・レペチ
ツト（Ｇｒｕｐｐｏ Ｌｅｐｅｔｉｔ）Ｓ．Ｐ．
Ａ．］、 Ｅ）試料を不活性雰囲気（△ｗ 9.６％）のもとで約１
４０℃において前もって乾燥した後、元素分析は次の近
似百分率組成（平均）を示す： 炭素５4.０９％；水素5.１３％；窒素6.３４％；塩素
（合計）4.１２％；塩素（イオン性）0.３９％、 空気中で９００℃における無機残留物：５％、 Ｆ）過剰のＨＣｌ（pH2.７）の添加後にＫＯＨで滴定す
ると、２−メトキシエタノール（ＭＣＳ）：水、４：
１、中の酸−塩基滴定のプロフイルは、次のｐｋＭＣＳ
を有するイオン化作用を示す：4.５、5.６、7.２、9.
２、 Ｇ）次のクロマトグラフイー系における0.２１のＲｆお
よび0.５３のテイコプラニンＡ２成分２に関するＲｆ
値： ５％（ｗ／ｖ）の水性Ｎａ２ＳＯ４ ７０ アセトニトリル ３０ シラン化シリカゲル６０Ｆ254メルク（Ｍｅｒｃｋ）板
（層の厚さ0.２５mm） 可視化： −ＵＶ光 −パウリ試薬（Ｐａｕｌｙ Ｒｅａｇｅｎｔ）、すなわ
ち、ジアゾ化スルフアニル酸［ジヤーナル・オブ・クロ
マトグラフイー（Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ．）２０，１
７１（１９６５）、ツアイトシユリフト・フユール・フ
イジカリツシエ・ヘミー（Ｚ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．）２９２，９９（１９５３）］を使用する黄色 −Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ ＡＴＣＣ ６６３３を使用す
る最小デイビス（Ｄａｖｉｓ）培地上のバイオオートグ
ラフイー、 Ｈ）１７３１にＭ＋Ｈ ピークを示すＦＡＢ−ＭＳスペ
クトルからデジユーム（ｄｅｓｕｍｅ）した約１７３０
の分子量、 塩でない形態の抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ０： Ａ）次の吸収極大を示す紫外線吸収スペクトル： λmax (nm) ａ）0.１Ｎ ＨＣｌ ２８２ ｂ）リン酸塩緩衝液 pH7.３８ ２８１ ３００ （肩） ｃ）0.１Ｎ 水酸化ナトリウム または水酸化カリウム ３００ ｄ）リン酸塩緩衝液 pH9.０ ２８３ ３００ （肩） ｅ）メタノール ２８２ Ｂ）次の吸収極大を示す赤外線吸収スペクトル(cm-1)： ３７００−３０８０、３０８０−２７００（ｎｕｊｏ
ｌ）；１７２０−１６２５；１６２５−１５６０；１５
０５；１４６０（ｎｕｊｏｌ）；１３７５（ｎｕｊｏ
ｌ）；１２９５；１２３０；１２１０；１１５０；１１
００−１０４０；１０３０；１０１５；９７０；８９
０；８４０；８１０；７２０（ｎｕｊｏｌ）、 Ｃ）ＤＭＳＯ ｄ６（ヘキサデユーテロジメチルスルホ
キシド）中で記録した２７０ＭHz １Ｈ−ＮＭＲにおけ
る次の群の信号（ppm）を示す１Ｈ−ＮＭＲスペクト
ル、内部標準としてＴＭＳ（0.00ppm）を使用、（δ＝p
pm）： δ0.８５（ｄ、イソプロピルのＣＨ３）；1.１５（約１
３Ｈ）；1.４４（約２Ｈ）；2.０２（２Ｈ）；2.３２−
2.３５（３Ｈ）；４−6.１（約１６Ｈ）；6.１−８（約
２３Ｈ）；8.５２、9.３０、9.６８（広い帯；移動性プ
ロトン） 2.５−４：Ｈ２Ｏピークからの干渉、 Ｄ）次の条件下に逆相ＨＰＬＣで分析したとき、テイコ
プラニンＡ２成分２（Ｒｔ＝２0.３分）に関する1.２２
の保持時間（Ｒｔ）： カラム：ウルトラスフエアー（Ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒ
ｅ）ＯＤＳ（５μｍ）アルテツクス（Ａｌｔｅｘ）［ベ
ツクマン（Ｂｅｃｋｍａｎ）］4.６mm（内径）×２５０
mm 予備カラム：ブラウンリー・ラブス（Ｂｒｏｗｎｌｅｅ
Ｌａｂｓ）ＲＰ １８（５μｍ） 溶離剤Ａ： ＣＨ３ＣＮ １０％ ＮａＨ２ＰＯ４・Ｈ２Ｏ （2.５ｇ／ｌ） ９０％ pH6.０に調節、 溶離剤Ｂ： ＣＨ３ＣＮ ７０％ ＮａＨ２ＰＯ４・Ｈ２Ｏ （2.５ｇ／ｌ） ３０％ pH6.０に調節、 溶離：溶離剤Ａ中の５％から６０％への溶離剤Ｂの直線
勾配、４０分、 流速：1.８ml／分、 ＵＶ検出器：２５４ｎｍ、 内部標準：テイコプラニンＡ２成分２［グルポ・レペチ
ツト（Ｇｒｕｐｐｏ Ｌｅｐｅｔｉｔ）Ｓ．Ｐ．
Ａ．］、 Ｅ）試料を不活性雰囲気（△ｗ 9.６％）のもとで約１
４０℃において前もって乾燥した後、元素分析は次の近
似百分率組成（平均）を示す： 炭素５4.０９％；水素5.１３％；窒素6.３４％；塩素
（合計）4.１２％；塩素（イオン性）0.３９％、 空気中で９００℃における無機残留物：５％、 Ｆ）過剰のＨＣｌの添加後にＫＯＨで滴定すると、２−
メトキシエタノール（ＭＣＳ）：水、４：１、中の酸−
塩基滴定のフロフイルは、次のｐｋＭＣＳを有するイオ
ン化作用を示す：4.５、5.６、7.２、9.２、 Ｇ）次のクロマトグラフイー系における0.２１のＲｆお
よび0.５３のテイコプラニンＡ２成分２に関するＲｆ
値： ５％（ｗ／ｖ）の水性Ｎａ２ＳＯ４ ７０ アセトニトリル ３０ シラン化シリカゲル６０Ｆ254メルク（Ｍｅｒｃｋ）板
（層の厚さ0.２５mm） 可視化： −ＵＶ光 −パウリ試薬（Ｐａｕｌｙ Ｒｅａｇｅｎｔ）、すなわ
ち、ジアゾ化スルフアニル酸［ジヤーナル・オブ・クロ
マトグラフイー（Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ．）２０，１
７１（１９６５）、ツアイトシユリフト・フユール・フ
イジカリツシエ・ヘミー（Ｚ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．）２９２，９９（１９５３）］を使用する黄色 −Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ ＡＴＣＣ ６６３３を使用す
る最小デイビス（Ｄａｖｉｓ）培地上のバイオオートグ
ラフイー、 Ｈ）１７３１にＭ＋Ｈ ピークを示すＦＡＢ−ＭＳスペ
クトルからデジユーム（ｄｅｓｕｍｅ）した約１７３０
の分子量、 塩でない形態の抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡ： Ａ）次の吸収極大を示す紫外線吸収スペクトル： λmax (nm) ａ）0.１Ｎ ＨＣｌ ２８２ ｂ）0.１Ｎ 水酸化カリウム ３００ ｃ）リン酸塩緩衝液 pH7.３８ ２８２ ３００ （肩） ｄ）リン酸塩緩衝液 pH9.０ ２８３ ３００ （肩） Ｂ）次の吸収極大を示す赤外線吸収スペクトル(cm-1)： ３７００−３１００、３０００−２８００（ｎｕｊｏ
ｌ）；１７６０−１６５５；１６５５；１６２０−１５
５０；１５０５；１４６０（ｎｕｊｏｌ）；１３７５
（ｎｕｊｏｌ）；１２６０；１２５０−９５０；８４
５；８０５；７２０（ｎｕｊｏｌ）、 Ｃ）ＤＭＳＯ ｄ６（ヘキサデユーテロジメチルスルホ
キシド）中で記録した２７０ＭHz １Ｈ−ＮＭＲにおけ
る次の群の信号（ｐｐｍ）を示す１Ｈ−ＮＭＲスペクト
ル、内部標準としてＴＭＳ（0.００ｐｐｍ）を使用、
（δ＝ｐｐｍ）： δ0.８６、ｄ′ｓ（ＣＨ３）；1.１５−1.２２、ｍ（Ｃ
Ｈ２）ｎ；1.４１、ｍ（ＣＨ２）；2.０１、ｓ（Ｃ
Ｈ３）；2.０１、ｍ（ＣＨ２）；2.２８、ｓ（Ｎ−ＣＨ
３）；4.２６−5.９６、ｂｒ（ペプチドおよび芳香族の
ＣＨ）；6.３３−7.７３ｂｒ（芳香族のＣＨおよびペプ
チドのＮＨ）、 ｂｒ＝広い ｄ＝二重線 ｄｄ＝二重線の二重線 ｍ＝多重線 ｓ＝一重線 ｔ＝三重線 Ｄ）次の条件下に逆相ＨＰＬＣで分析したとき、テイコ
プラニンＡ２成分２（Ｒｔ＝２0.３分）に関する1.１５
の保持時間（Ｒｔ）： カラム：ウルトラスフエアー（Ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒ
ｅ）ＯＤＳ（５μｍ）アルテツクス（Ａｌｔｅｘ）［ベ
ツクマン（Ｂｅｃｋｍａｎ）］4.６mm（内径）×２５０
mm 予備カラム：ブラウンリー・ラブス（Ｂｒｏｗｎｌｅｅ
Ｌａｂｓ）ＲＰ １８（５μｍ） 溶離剤Ａ： ＣＨ３ＣＮ １０％ ＮａＨ２ＰＯ４・Ｈ２Ｏ （2.５ｇ／ｌ） ９０％ pH6.０に調節、 溶離剤Ｂ： ＣＨ３ＣＮ ７０％ ＮａＨ２ＰＯ４・Ｈ２Ｏ （2.５ｇ／ｌ） ３０％ pH6.０に調節、 溶離：溶離剤Ａ中の５％から６０％への溶離剤Ｂの直線
勾配、４０分、 流速：1.８ml／分、 ＵＶ検出器：２５４ｎｍ、 内部標準：テイコプラニンＡ２成分２［グルポ・レペチ
ツト（Ｇｒｕｐｐｏ Ｌｅｐｅｔｉｔ）Ｓ．Ｐ．
Ａ．］、 Ｅ）次のクロマトグラフイー系における0.６２のテイコ
プラニンＡ２成分２に関するＲｆ値： ５％（ｗ／ｖ）の水性Ｎａ２ＳＯ４ ７０ アセトニトリル ３０ シラン化シリカゲル６０Ｆ254メルク（Ｍｅｒｃｋ）板
（層の厚さ0.２５mm） 可視化： −ＵＶ光 −パウリ試薬（Ｐａｕｌｙ Ｒｅａｇｅｎｔ）、すなわ
ち、ジアゾ化スルフアニル酸［ジヤーナル・オブ・クロ
マトグラフイー（Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ．）２０，１
７１（１９６５）、ツアイトシユリフト・フユール・フ
イジカリツシエ・ヘミー（Ｚ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．）２９２，９９（１９５３）］を使用する黄色 −Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ ＡＴＣＣ ６６３３を使用す
る最小デイビス（Ｄａｖｉｓ）培地上のバイオオートグ
ラフイー、 Ｆ）１７６１に最も強いピークを有するピークの群を示
すＦＡＢ−ＭＳスペクトルからデジユーム（ｄｅｓｕｍ
ｅ）した約１７５８の分子量。ＦＡＢ−ＭＳ分析の操作
条件は次の通りであった： 計器：ＦＡＢガンのイオン・テク（Ｉｏｎ Ｔｅｃｈ）
を装備するＶＧ Ｍｏｄ ＺＡＢ ＳＥ 条件：ポジテイブ（Ｐｏｓｉｔｉｖｅ）ＦＡＢ、Ｘｅ 加速電圧、８ＫＶ マトリツクス：チオグリセロール−グリセロール １／
１（ｖ／ｖ） 塩でない形態の抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＢ： Ａ）次の吸収極大を示す紫外線吸収スペクトル： λmax (nm) ａ）0.１Ｎ ＨＣｌ ２８２ ｂ）0.１Ｎ 水酸化カリウム ３００ ｃ）リン酸塩緩衝液 pH7.３８ ２８２ ３００ （肩） ｄ）リン酸塩緩衝液 pH9.０ ２８２ ３００ （肩） Ｂ）次の吸収極大を示す赤外線吸収スペクトル(cm-1)： ３７００−３１００、３０００−２８００（ｎｕｊｏ
ｌ）；１７６０−１７１０；１６５５；１６２０−１５
６０；１６０５；１４８０−１４２０（ｎｕｊｏｌ）；
１３７５（ｎｕｊｏｌ）；１３２０−１２７０；１２３
０−１１９０；１１５０；１１２０−９２０；８４５；
８１０；７２０（ｎｕｊｏｌ）、 Ｃ．１）ＤＭＳＯ ｄ６（ヘキサデユーテロジメチルス
ルホキシド）中で記録した２７０ＭHzにおける次の群の
信号（ｐｐｍ）を示す１Ｈ−ＮＭＲスペクトル、内部標
準としてＴＭＳ（0.００ｐｐｍ）を使用、（δ＝ｐｐ
ｍ）： 多重度；（属性）： 0.８４、ｄ（イソプロピルのＣＨ３）；1.１７、ｍ（Ｃ
Ｈ２）ｎ；1.４３、ｍ（ＣＨ２）；1.９９、ｓ（Ｃ
Ｈ３）；2.０１、ｍ（ＣＨ２）；2.３１、ｓ（Ｎ−ＣＨ
３）；2.７９、ｄｄ（Ｃ−Ｈ）；3.７０、ｍ（Ｃ−
Ｈ）；3.７０、ｍ（Ｃ−Ｈ）；4.０６−6.０２、ｂｒ
（ペプチドおよび芳香族のＣＨ）；6.４５−7.７４、ｂ
ｒ（芳香族のＣＨおよびペプチドのＮＨ）；8.１９−9.
９９、ｂｒ（ペプチドのＮＨおよびフエノールのＯ
Ｈ）、 Ｃ．２）ＤＭＳＯ ｄ６プラスＣＦ３ＣＯＯＤ中で記録
した２７０ＭHzにおける次の群の信号（ｐｐｍ）を示す
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル、内部標準としてＴＭＳ（0.０
０ｐｐｍ）を使用、（δ＝ｐｐｍ）多重度；（属性）：
0.８４、ｄ（イソプロピルのＣＨ３）；1.１３、ｍ（Ｃ
Ｈ２）ｎ；1.４０、ｍ（ＣＨ２）；1.９８、ｓ（Ｃ
Ｈ３）；2.００、ｍ（ＣＨ２）；2.９２、ｄｄ（Ｃ−
Ｈ）；3.２９−3.７１、ｍ（糖のＣ−Ｈ）；4.０７−6.
０９、ｓおよびｍ（ペプチドおよび芳香族のＣＨ）；6.
４５−7.８３、ｓおよびｍ（芳香族のＣＨおよびペプチ
ドのＮＨ）；8.１７−１0.３８（ペプチドのＮＨ、フエ
ノールのＯＨ）、 Ｄ）次の条件下に逆相ＨＰＬＣで分析したとき、テイコ
プラニンＡ２成分２（Ｒｔ＝２0.３分）に関する1.２７
および1.３２の保持時間（Ｒｔ）： カラム：ウルトラスフエアー（Ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒ
ｅ）ＯＤＳ（５μｍ）アルテツクス（Ａｌｔｅｘ）［ベ
ツクマン（Ｂｅｃｋｍａｎ）］4.６mm（内径）×２５０
mm 予備カラム：ブラウンリー・ラブス（Ｂｒｏｗｎｌｅｅ
Ｌａｂｓ）ＲＰ １８（５μｍ） 溶離剤Ａ： ＣＨ３ＣＮ １０％ ＮａＨ２ＰＯ４・Ｈ２Ｏ （2.５ｇ／ｌ） ９０％ pH6.０に調節、 溶離剤Ｂ： ＣＨ３ＣＮ ７０％ ＮａＨ２ＰＯ４・Ｈ２Ｏ （2.５ｇ／ｌ） ３０％ pH6.０に調節、 溶離：溶離剤Ａ中の５％から６０％への溶離剤Ｂの直線
勾配、４０分、 流速：1.８ml／分、 ＵＶ検出器：２５４ｎｍ、 内部標準：テイコプラニンＡ２成分２［グルポ・レペチ
ツト（Ｇｒｕｐｐｏ Ｌｅｐｅｔｉｔ）Ｓ．Ｐ．
Ａ．］、 Ｅ）次のクロマトグラフイー系における0.５３のテイコ
プラニンＡ２成分２に関するＲｆ値： ５％（ｗ／ｖ）の水性Ｎａ２ＳＯ４ ７０ アセトニトリル ３０ シラン化シリカゲル６０Ｆ254メルク（Ｍｅｒｃｋ）板
（層の厚さ0.２５mm） 可視化： −ＵＶ光 −パウリ試薬（Ｐａｕｌｙ Ｒｅａｇｅｎｔ）、すなわ
ち、ジアゾ化スルフアニル酸［ジヤーナル・オブ・クロ
マトグラフイー（Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ．）２０，１
７１（１９６５）、ツアイトシユリフト・フユール・フ
イジカリツシエ・ヘミー（Ｚ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．）２９２，９９（１９５３）］を使用する黄色 −Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ ＡＴＣＣ ６６３３を使用す
る最小デイビス（Ｄａｖｉｓ）培地上のバイオオートグ
ラフイー、 Ｆ）１７７６に最も強いピークを有するピークの群を示
すＦＡＢ−ＭＳスペクトルからデジユーム（ｄｅｓｕｍ
ｅ）した約１７７２の分子量。ＦＡＢ−ＭＳ分析の操作
条件は次の通りであった： 計器：ＦＡＢガンのイオン・テク（Ｉｏｎ Ｔｅｃｈ）
を装備するＶＧ Ｍｏｄ ＺＡＢ ＳＥ 条件：ポジテイブ（Ｐｏｓｉｔｉｖｅ）ＦＡＢ、Ｘｅ 加速電圧、８ＫＶ マトリツクス：チオグリセロール−グリセロール １／
１（ｖ／ｖ）。 - 【請求項２】菌株アクチノマヅラ・エスピー（Ａｃｔｉ
ｎｏｍａｄｕｒａ ｓｐ．）ＡＴＣＣ３９７２７、また
はその抗生物質Ａ４０９２６生産性突然変異体もしくは
変異型を、液中好気的条件下に炭素、窒素および無機塩
類の同化源の存在下に培養し、抗生物質を醗酵ブロスか
ら回収および単離し、そして、必要に応じて、それを所
望の塩に転化することを特徴とする抗生物質Ａ４０９２
６複合体、抗生物質Ａ４０９２６因子Ａ、抗生物質Ａ４
０９２６因子Ｂ、抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂｏ、抗生
物質Ａ４０９２６因子ＰＡ、抗生物質Ａ４０９２６因子
ＰＢ、それらの混合物およびそれらの付加塩から選ばれ
る抗生物質の製造法。 - 【請求項３】菌株を２０℃〜４０℃の温度において培養
する特許請求の範囲第２項記載の方法。 - 【請求項４】温度が２４℃〜３５℃である特許請求の範
囲第２項記載の方法。 - 【請求項５】濾過した醗酵ブロスを、固定化されたＤ−
アラニル−アラニンを使用する親和性クロマトグラフイ
ーにかけ、次いで分配クロマトグラフイー、逆相クロマ
トグラフイーまたはイオン交換クロマトグラフイーにか
けることにより、抗生物質の回収および単離を実施する
特許請求の範囲第２項記載の方法。 - 【請求項６】抗生物質の回収が、工程： ａ）醗酵ブロスを固定化Ｄ−アラニル−Ｄ−アラニンを
使用する親和性クロマトグラフイーにかけ、 ｂ）プールされた抗生物質含有溶離分画を急速に中和
し、そして ｃ）必要に応じて、シラン化シリカゲルを用いる逆相液
体クロマトグラフイーにより、抗生物質Ａ４０９２６因
子ＰＡ、ＰＢ、Ａ、ＢおよびＢ０を単離すること、 を含む特許請求の範囲第２項記載の方法。 - 【請求項７】ａ）醗酵塊をpH8.５〜１0.５の塩基性に
し、 ｂ）濾過し、 ｃ）透明な濾液をpH2.５〜4.５の酸性にし、 ｄ）濾過し、そして濾液を廃棄し、 ｅ）濾過ケーキを水中に懸濁し、そしてそれをpH８〜９
の塩基性にし、 ｆ）粗製抗生物質Ａ４０９２６複合体を濾過により回収
した後、それを固定化Ｄ−アラニル−Ｄ−アラニンを使
用する親和性クロマトグラフイーにかけ、 ｇ）必要に応じて、分配クロマトグラフイー、逆相クロ
マトグラフイーまたはイオン交換クロマトグラフイーに
より、抗生物質Ａ４０９２６因子Ａおよび因子Ｂを単離
し、そして ｈ）抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ０を必要とするとき、
抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂをさらに親和性クロマトグ
ラフイー手順にかけること、 からなる、抗生物質Ａ４０９２６複合体、抗生物質Ａ４
０９２６因子Ａ、因子Ｂおよび因子Ｂ０から選択される
化合物を製造するための特許請求の範囲第２項記載の方
法。 - 【請求項８】クロマトグラフイーが逆相クロマトグラフ
イーであり、そして静止相がシラン化シリカゲルおよび
非官能化ポリスチレン樹脂から選択される特許請求の範
囲第７項記載の方法。 - 【請求項９】静止相がpH４〜９の緩衝溶液で予備平衡化
されたシラン化シリカゲルであり、そして溶離剤が同一
緩衝溶液中の極性水混和性溶媒の直線勾配混合物である
特許請求の範囲第７項記載の方法。 - 【請求項１０】抗生物質Ａ４０９２６複合体、抗生物質
Ａ４０９２６因子Ａ、抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ、抗
生物質Ａ４０９２６因子Ｂｏ、抗生物質Ａ４０９２６因
子ＰＡ、抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＢ、それらの混合
物およびそれらの付加塩から選ばれる抗生物質を有効成
分として含有することを特徴とする抗菌剤。
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| JP2011157381A (ja) * | 2002-11-18 | 2011-08-18 | Vicuron Pharmaceuticals Inc | 細菌感染の治療のためのダルババンシンの投与方法 |
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