JP2572937B2 - 新規菌株 - Google Patents

新規菌株

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JP2572937B2
JP2572937B2 JP5265554A JP26555493A JP2572937B2 JP 2572937 B2 JP2572937 B2 JP 2572937B2 JP 5265554 A JP5265554 A JP 5265554A JP 26555493 A JP26555493 A JP 26555493A JP 2572937 B2 JP2572937 B2 JP 2572937B2
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acid
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ジヨバンニ・カツサニ
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Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】本発明は、任意に抗生物質Ａ４０９２６複
合体（Complex）およびその因子、抗生物質Ａ４０９２
６因子Ａ、抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ、抗生物質Ａ４
０９２６因子Ｂ0、抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡおよ
び抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＢと命名する新規な抗生
物質、新規な菌株アクチノマヅラ・エスピー（Actinoma
dura sp.）ＡＴＣＣ３９７２７、またはその抗生物質Ａ
４０９２６生産性突然変異体もしくは変異型（varian
t）を培養することによるこれらの抗生物質を生産する
方法、およびこれらの抗生物質に感受性の微生物を含む
感染症の処置におけるこれらの新規な抗生物質の使用に
関する。
【０００２】本発明の抗生物質は、アシル−Ｄ−アラニ
ル−Ｄ−アラニンへの結合能力を有する抗生物質のバイ
コマイシンのクラスに属するグリコペプチド物質であ
る。
【０００３】抗生物質Ａ４０９２６複合体およびその因
子、抗生物質Ａ４０９２６因子Ａ、因子Ｂ、因子Ｂ0、
因子ＰＡおよび因子ＰＢは、それ自体既知の技術に従い
塩類を形成することができる。
【０００４】本明細書において、表現「抗生物質Ａ４０
９２６」それ自体は、抗生物質Ａ４０９２６複合体、抗
生物質Ａ４０９２６因子Ａ、抗生物質Ａ４０９２６因子
Ｂ、抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ0、抗生物質Ａ４０９
２６因子ＰＡ、抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＢ、それら
の塩またはそれらの任意の混合物から選択される化合物
を表わす。表現「抗生物質Ａ４０９２６複合体」、「抗
生物質Ａ４０９２６因子ＰＡ」、「抗生物質Ａ４０９２
６因子ＰＢ」、「抗生物質Ａ４０９２６因子Ａ」、「抗
生物質Ａ４０９２６因子Ｂ」、「抗生物質Ａ４０９２６
因子Ｂ0」は、生物学的性質を用いて取扱うとき、対応
する製薬学的に許容されうる塩類をまた包含する。
【０００５】抗生物質Ａ４０９２６は、土の試料から単
離されかつ国際的に認められているコレクシヨンである
アメリカン・タイプ・カルチヤー・コレクシヨン（Amer
icanType Culture Collection（ＡＴＣＣ）−１２３０
１ Parklawn Drive，Rockville，Maryland，Ｕ.Ｓ.Ａ．
２０８５２）にブタペスト条約の規定に従い１９８４年
６月８日に受託された、アクチノマヅラ（Actinomadur
a）菌株を培養することにより生産される。この菌株に
は受入れ番号ＡＴＣＣ３９７２７が付与されている。
【０００６】この生産性菌株は、最初ストレプトマイセ
ス（Streptomyces）属に属すると考えられ、そして始め
ストレプトマイセス・エスピー（Streptomyces sp.）Ａ
４０９２６と名付けられ、そしてそれ自体ＡＴＣＣ３９
７２７の受入れ番号でＡＴＣＣに受託された。ことによ
く知られた組成について、さらに研究した結果、新規な
菌株はアクチノマヅラ（Actinomadura）属に属するとい
う結論にわれわれは達した。したがつて、最初ストレプ
トマイセス・エスピー（Streptomyces sp.）ＡＴＣＣ３
９７２７として受託された菌株はアクチノマヅラ・エス
ピー（Actinomadura sp.）ＡＴＣＣ３９７２７と改名さ
れた。
【０００７】抗生物質Ａ４０９２６複合体、Ａ４０９２
６因子Ａ、因子Ｂ、因子Ｂ0、因子ＰＡまたは因子ＰＢ
の生産は、それを生産することのできるアクチノマヅラ
・エスピー（Actinomadura sp.）、すなわち、アクチノ
マヅラ・エスピー（Actinomadura sp.）ＡＴＣＣ３９７
２７、またはその抗生物質Ａ４０９２６生産性突然変異
体もしくは変異型を、好気的条件下に炭素、窒素および
無機塩類の同化源を含有する水性栄養培地中で培養する
ことによつて達成される。醗酵技術において通常使用さ
れている栄養培地の多くを使用することができるが、あ
る種の培地は好ましい。好ましい炭素源は、グルコー
ス、マンノース、ガラクトース、でんぷん、コーンミー
ルなどである。好ましい窒素源は、アンモニア、大豆粉
末、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、トリプトン、ア
ミノ酸類などである。培養基中に混入することができる
無機塩類には、ナトリウム、カリウム、鉄、亜鉛、コバ
ルト、マグネシウム、カルシウムおよびアンモニウムの
イオン、塩素イオン、炭酸イオン、硫酸イオン、リン酸
イオン、硝酸イオンなどのイオンを生成することができ
る慣用の可溶性塩類が存在する。
【０００８】通常、抗生物質生産性菌株は、振盪フラス
コ内で予備培養され、次いでこの培養物を使用して実質
的の量の抗生物質を生産するためのびん醗酵器に接種す
る。予備培養に使用される培地はより大きい規模の醗酵
に使用されるものと同一であることができるが、他の培
地を使用することもできる。抗生物質Ａ４０９２６生産
性菌株は、２０〜４０℃、好ましくは２４〜３５℃の温
度において生育させることができる。醗酵の間、抗生物
質の生産はブロス（broth）または菌糸体の抽出物を抗
生物質活性について、例えば、バイオアツセイまたはＴ
ＬＣまたはＨＰＬＣ手順により監視することができる。
【０００９】抗生物質Ａ４０９２６に感受性の微生物、
例えば、バシルス・スブチリス（Bacillus subtilis）
およびストレプトマイセス・アウレウス（Streptomyces
aureus）を試験微生物として使用することができる。
バイオアツセイは寒天板上の寒天拡散法により便利に実
施される。抗生物質活性の最大の生産は、醗酵の第２日
目〜第５日目に起こる。
【００１０】抗生物質Ａ４０９２６は、菌株アクチノマ
ヅラ・エスピー（Actinomadura sp.）ＡＴＣＣ３９７２
７、またはその抗生物質Ａ４０９２６生産性突然変異体
もしくは変異型を培養することにより生産され、そして
培養ブロス中に主として存在する。
【００１１】アクチノマヅラ・エスピー（Actinomadura
sp.）ＡＴＣＣ３９７２７の特性を、次の節において説
明する：巨視的および微視的検査 栄養菌糸体は、波状および分岐した菌糸（直径約０.８
μｍ）から構成され、ある培地上で、表Ｉに星印で識別
するように、数日の生長後に、棒様要素に分解する傾向
があるが、一方グルロース−アスパラギン培地上で、そ
れは球状要素に分解する。
【００１２】この菌株の特性は、ある培地上で栄養菌糸
体の赤茶褐色である。
【００１３】気中菌糸体はわずかの培地に存在するだけ
である；とくに、表Ｉに記載するもののうちで、それは
オートミール寒天およびソイル寒天（soil agar）中に
のみ存在する。これらの培地上で、気中菌糸体は白−グ
レイであり、そして約１０〜２０の胞子のがぎおよび短
いらせんで配置された芽胞柄を形成する。
【００１４】胞子は円筒形であり、そして０.８×１.２
μｍの平均大きさを有する。
【００１５】生育特性の決定 培養特性の検査のために、アクチノマヅラ・エスピー
（Actinomadura sp.）ＡＴＣＣ３９７２７は、シヤーリ
ング（Shirling）およびゴツトリーブ（Gottolieb）
［シヤーリング Ｅ.Ｇ．およびゴツトリーブ Ｄ.，１９
６６−ストレプトマイセス種の特性づけ法（Method for
characterization of Streptomyces species）−イン
ターナシヨナル・ジヤーナル・オブ・システミツク・バ
クテリオロジー（Int．J．Syst．Bacteriol），１６，
３１３−３４０］により示唆される種々の標準上でワク
スマン（Waksman）［ワクスマン，Ｓ.Ａ．１９６１−ア
クチノマイセテス（Actinomycetes）−ウイリアムス・
アンド・ウイルキンス・カンパニー・バルチモア（Will
iams and Wilkins Co．Bltimore）；Vol．２，３２８−
３３４］が推奨するいくつかの培地を添加して、培養し
た。
【００１６】入の決定は、必要なときはいつでも、マエ
ルズ（Maerz）およびパウル（Paul）［マエルズ Ａ．お
よびＭ．レア・パウル，１９５０−色の辞書（A Dictio
nary of Color）−第２版 マクグロー−ヒル・ブツク・
カンパニー・インコーポレーテツド、ニユーヨーク］の
方法により実施した。
【００１７】有機体の種々の炭素源を利用する能力は、
シヤーリングおよびゴツトリーブが記載する方法により
研究した。
【００１８】表Ｉにおける読みは、２８℃において２週
のインキユベーシヨン後に実施した。
【００１９】
【表１】 表 Ｉ 菌株アクチノマヅラ・エスピー（Actinomadura sp.）ＡＴＣＣ ３９７２７の培養特性 ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 栄 養 培 地 特 性 ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 培地 No.２ 豊富な生長、外皮のある表面、８／Ｌ／８、 (酵母エキス−麦芽寒天) 微量の琥珀色−ピンク色の可溶性顔料 培地 No.３ 豊富な生長、平滑な表面、５５／Ｅ／４、気 (オートミール寒天) 中菌糸体、非常に不十分なグレイ、可溶性顔 料、バイオレツト、５５／Ｈ／４ 培地 No.４ 中程度の生長、平滑な薄い表面、クリーム色、 (無機塩類−でんぷん寒天) １０／Ｄ／２ 培地 No.５ 中程度の生長、平滑な薄い表面、クリーム色、 (無機塩類−でんぷん寒天) １０／Ｄ／２ 培地 No.６* 中程度の生長、わずかに外皮のある表面、琥 (ペプトン−酵母エキス鉄寒天) 珀色、１２／Ｄ／９ 培地 No.７ 豊富な生長、平滑な薄い表面、琥珀色−褐色、 (トリプシン寒天) １３／Ｋ／１２ オートミール寒天* 豊富な生長、平滑な表面、赤茶褐色、８／Ｌ ／７、気中菌糸体、中程度の淡黄色−グレイ、 ４４／Ｂ／２ ヒツキイ(Hickey)およびトレ 豊富な生長、しわのある表面、琥珀色−褐色、 スナー(Trensner)の寒天* １３／Ｋ／１２ ツアペツク グルコース寒天 中程度の生長、平滑な表面、淡色−黄色、９ ／Ｉ／３ グルコース アスパラギン寒天* 不十分な生長、クリーム状表面、麦わら色− 黄色、９／Ｅ／１ 栄養寒天 豊富な生長、しわのある表面、淡色−オレン ジ、１１／Ｃ／７ ジヤガイモ寒天* 豊富な生長、しわのある表面、赤茶褐色、８ ／Ｌ／９ ベネツト(Bennet)の寒天* 豊富な生長、外皮のある表面、赤茶褐色、８ ／Ｌ／８、可溶性顔料、深い琥珀色 ばら色 リンゴ酸カルシウム寒天 中程度の生長、平滑な表面、アプリコツト色、 １０／Ｂ／３ スキムミルクの寒天 豊富な生長、わずかにしわのある表面、オレ ンジ色、９／Ｂ／３ ツアペツクのスクロース寒天 豊富な生長、平滑な表面、アプリコツト色、 １０／Ｂ／６ 卵アルボミン寒天* 豊富な生長、平滑な表面、ばら色、５２／Ｂ ／３、微量の可溶性顔料、ばら色、５２／Ｂ ／３ サブロー(Sabouraud)寒天 生長なし ソイル(soil)寒天 不十分な生長、無色、白−グレイの気中菌糸 体 デキストローストリプトン寒 中程度の生長、平滑な薄い表面、淡色−黄色、 天* １０／Ｇ／２ ジヤガイモのプラグ(plug) 豊富な生長、オレンジ−褐色、微量の白−グ レイの気中菌糸体
【００２０】
【表２】生理学的特性 表 ＩＩ 生理学的特性 ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 試 験 結 果 ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ でんぷんの加水分解 陰性 Ｈ2Ｓの生成 培地 No.６について陰性酢酸鉛の ストリツプで陽性 トリプシンの反応 陽性 カゼインの加水分解 陽性 リンゴ酸カルシウムの加水分解 陰性 ゼラチノの液化 陽性 凝固 陰性 ／ リトマスミルク ＼ ペプトン化 陽性 セルロースの分解 陰性 硝酸塩の還元 陽性炭素源の利用
【００２１】
【表３】表 ＩＩＩ 炭素の利用 ━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 炭素源 生 長 ━━━━━━━━━━━━━━━━━━ アラビノース ＋ キシロース ＋ マンノース ＋ フルクトース ＋ ラフイノース ＋ ラムノース ＋ グルコース ＋ ラクトース ＋ ガラクトース ＋ イノシトール − スクロース ＋ セルロース − サリシン ＋ マンニトール ＋ リボース − ━━━━━━━━━━━━━━━━━━ ＋＝生長 −＝生長せず化学的分類学の特性 細胞壁の分析 ：細胞壁中に存在するアミノ酸類の分析
は、ベツカー（Becker）ら、「全細胞加水分解物のペー
パークロマトグラフイーによるノカルジアとストレプト
マイセスとの間の急速分別（Rapid differentiation be
tween Nocardia and Sterptomyces by paper chromatog
raphy of whole cell hydrolysates）」，アプライド・
マイクロバイオロジー（Appl．Micrbiol.）１２，４２
１−４２３（１９６４）の論文中に記載されている方法
により実施した。全細胞の分析は、メソ−ジアミノピメ
リン酸の存在を明らかにした。カワモトら［Ｉ.カワモ
ト、Ｔ.オカおよびＴ.ナラ，「マイクロモノスポラ・オ
リボアステロスポラ、マイクロモノスポラ・サガミエン
シスおよび関連する有機体の細胞壁の組成（Cell-wall
compositionof Micromonospora olivoasterospora，Mic
romonospora sagamiensis，and related organis
m）」，ジヤーナル・オブ・バクテリオロジー（J．of B
acteriology）１４６，５２７−５３４，１９８１）］
の方法により得られた、純粋な細胞壁の分析は、グリシ
ンの不存在を示した。
【００２２】糖の分析： 糖分の分析は、Ｍ．Ｐ．レヘバリアー（Ｌｅｃｈｅｖａ
ｌｉｅｒ），「臨床的に重要な好気的アクチノミセテス
の同定（Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆａｅｒｏ
ｂｉｃａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ ｏｆ ｃｌｉｎｉ
ｃａｌ ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ）」、ジヤーナル・オブ
・ラボラトリー・アンド・クリニカル・メデイシン
（Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．）７１，９３４−９
４４（１９６８）の方法により、Ｊ．Ｌ．スタネク（Ｓ
ｔａｎｅｃｋ）およびＧ．Ｄ．ロバーツ（Ｒｏｂｅｒｔ
ｓ），「薄層クロマトグラフイーによる好気的アクチノ
ミセテスの同定に対する簡素化されたアプローチ（Ｓｉ
ｍｐｌｉｆｉｅｄ ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ ｉｄｅｎ
ｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａｅｒｏｂｉｃ ａｃｔ
ｉｎｏｍｉｃｅｔｅｓ ｂｙ ｔｈｉｎ−ｌａｙｅｒ
ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）」，２８，２２６−２
３１（１９７４）に記載される薄層クロマトグラフイー
のセルロースシートを利用して、次の溶媒系を用いて実
施した：酢酸エチル−ピリジン−水（１００：３５：２
５、容量による）。得られた結果は主にグルコース及び
リボースの存在を示したが、より少量のガラクトース、
マンノースおよびマズロース（３−Ｏ−メチル−Ｄ−ガ
ラクトース）も検出された。
【００２３】ミコリン酸（mycolic acid）類：ミコリン
酸類の存在を検出するアツセイは、ミンニキン（Minnik
in）ら［Ｄ.Ｅ.ミンニキン、Ｌ.アルシヤマオニイ（Als
hamaony）およびＭ.グツドフエロー（Goodfellow），
「全有機体のメタノール分解物の薄層クロマトグラフイ
ーによるマイコバクテリウム、ノカルジアおよび関連す
るタクソンの分別（Differentiation of Mycobacteriu
m，Nocardia and related taxa by thin layer chromat
ography analysis of whole organism methanolysis me
thanolysates）」，ジヤーナル・オブ・ジエネラル・マ
イクロバイオロジー（Journal of General Microbiolog
y），８８，２００−２０４，１９７５］の方法に従い
実施した。
【００２４】このアツセイの結果は陰性であつた：ミコ
リン酸類は発見されなかつた。
【００２５】菌株の同定：この菌株は、メソ−ジアミノ
ピメリン酸およびマズロースの存在、ペプトドグリカン
中のグリシンの欠乏、ミコリン酸類の欠乏および適度に
長い胞子鎖をもつ気中菌糸体の形成のために、アクチノ
ミセテス（Actinomycetes）のアクチノマヅラ（Actinom
adura）属に帰属される。
【００２６】他の微生物を使用するときのように、抗生
物質Ａ４０９２６生産性菌株の特性は変更される。例え
ば、菌株の人工的変異型および突然変異体は種々の既知
突然変異原、例えば、紫外線、Ｘ線、高周波、放射線、
および化学物質、例えば、亜硝酸、Ｎ−メチル−Ｎ′−
ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン、および多くの他のも
ので処理することにより得ることができる。アクチノマ
ヅラ（Actinomadura）属の種に属しかつ抗生物質Ａ４０
９２６を生産するすべての自然および人工の突然変異原
は、菌株アクチノマヅラ・エスピー（Actinomadura s
p.）ＡＴＣＣ３９７２７と同等であると見なされ、そし
て本発明の範囲内に入ると考えられる。
【００２７】抗生物質生産性有機体の醗酵ブロスからの
本発明の抗生物質の回収は、それ自体既知の技術に従つ
て実施され、そしてこれらの技術は、溶媒による抽出、
非溶媒の添加または溶液のｐＨの変化による沈殿、分配
クロマトグラフイー、逆相クロマトグラフイー、イオン
変換クロマトグラフイー、親和性クロマトグラフイーな
どを包含する。
【００２８】好ましい手順は、固定化Ｄ−アラニル−Ｄ
−アラニンを使用するクロマトグラフイー、引き続く逆
相カラムクロマトグラフイーを包含する。
【００２９】本発明の回収法に適する固定化されたＤ−
アラニル−Ｄ−アラニンマトリツクスは、欧州特許出願
第８３１１２５５５号に開示されている。この方法に好
ましいマトリツクスは、調節された孔をもつ架橋された
ポリイデキストランを結合されたＤ−アラニル−Ｄ−ア
ラニンである。
【００３０】醗酵ブロスは、濾過後または予備的精製手
順後、親和性クロマトグラフイーに直接かけられる。予
備的精製手順は、醗酵塊全体を塩基性とし、好ましくは
ｐＨ８.５〜１０.５にして菌糸体へ吸着された抗生物質
を可溶化し、次いで濾過することを包含する。この透明
濾液をｐＨ２.５〜４.５にし、再び濾過助剤の存在下に
濾過する。濾液を廃棄し、一方回収された濾過ケーキを
水に懸濁させ、塩基性とし、好ましくはｐＨ８〜９と
し、そして濾過する。濾過ケーキを再び同一手順に付
し、一方抗生物質Ａ４０９２６を含有する濾液をプール
する。
【００３１】次いで、これらの濾液または濾過した醗酵
ブロスを、カラムまたはバツチ式で、固定化されたＤ−
アラニル−Ｄ−アラニンを使用する親和性クロマトグラ
フイーにかける。
【００３２】親和性マトリツクスへの抗生物質の結合
は、好ましくは、ｐＨ約７.０〜８.０において行ない、
そしてその溶離はより塩基性のｐＨ値（好ましくは９.
０〜１０.５）において水性塩基により実施する。この
水性塩基は、必要に応じて、下に定義するような極性有
機溶媒、例えば、極性水混和性溶媒の存在下に、アンモ
ニア、アルカリもしくはアルカリ金属水酸化物または塩
基性緩衝液であることができる。
【００３３】カラムを、必要に応じて、塩類、尿素およ
び／または水混和性溶媒を含有する水性緩衝液ｐＨ４〜
８で洗浄することにより不純物を除去した後、抗生物質
Ａ４０９２６を上の溶離混合物で溶離する。次いで、抗
生物質は、好ましくは、水と最小共沸混合物を形成する
ことのできる有機溶媒との共沸蒸留により、プールした
抗生物質含有分画から水を除去し、次いで非溶媒を添加
して所望生産物を沈殿させることによつて回収する。
【００３４】水と最小共沸混合物を形成することのでき
る有機溶媒の代表的例は、ｎ−ブタノール、ベンゼン、
トルエン、ブチルエーテル、四塩化炭素、クロロホル
ム、シクロヘキサン、２,５−ジエメチルフラン、ヘキ
サンおよびｍ−キシレンである。好ましく溶媒はｎ−ブ
タノールである。
【００３５】非溶媒の例は、石油エーテル、低級アルキ
ルエーテル、例えば、エチルエーテル、プロピルエーテ
ルおよびブチルエーテル、および低級アルキルケトン、
例えば、アセトンである。
【００３６】あるいは、プールした抗生物質含有分画
を、好ましくは上に定義した有機溶媒との共沸蒸留によ
り、小さい体積に濃縮し、そして得られる水溶液を凍結
乾燥する。
【００３７】溶離において使用する水性塩基が非揮発性
であるとき、それを中和し、濃縮物を脱塩した後、沈殿
または凍結乾燥を実施することが必要であろう。
【００３８】便利な脱塩法は、抗生物質含有水溶液をシ
ラン化シリカゲルのカラムに適用し、蒸留水で洗浄し、
そして極性水混和性溶媒と水との混合物で溶離すること
を含む。
【００３９】極性水混和性溶媒の代表例は、水溶性アル
コール（例えば、メタノール、エタノール、イソプロパ
ノール、ｎ−ブタノール）、アセトン、アセトニトリ
ル、低級アルキルアルカノエート（例えば、酢酸エチ
ル）、テトラヒドロフラン、ジオキサンおよびジメチル
ホルムアミドおよびそれらの混合物である。好ましい極
性水混和性溶媒はアセトニトリルである。
【００４０】あるいは、脱塩は抗生物質含有溶液を上に
定義した親和性カラムに適用し、蒸留水で洗浄し、そし
て親和性クロマトグラフイーの溶離について前述した揮
発性水性塩基で溶離することにより実施することができ
る。そのようにして得られる生産物は、抗生物質Ａ４０
９２６複合体である。必要に応じて、それをさらに精製
するか、あるいはその因子Ａ、Ｂ、Ｂ0、ＰＡおよびＰ
Ｂの分離にかけることができる。
【００４１】純粋な抗生物質Ａ４０９２６複合体を得る
ための便利な手順は、上のようにして得られる複合体を
親和性クロマトグラフイーのカラムによりさらに精製す
ることにより代表される。上と同一の静止相（固定化さ
れたＤ−アラニル−Ｄ−アラニン）が一般に使用され、
そして所望の抗生物質は前述の固定化されたＤ−アラニ
ル−Ｄ−アラニンを使用する親和性クロマトグラフイー
手順に従うことにより溶離される。好ましい固定化され
たＤ−アラニル−Ｄ−アラニンはセフアロース（Sephar
ose）−ε−アミノカプロイル−Ｄ−アラニル−Ｄ−ア
ラニンであり、好ましい平衡化混合物はｐＨ７〜８に調
節した２モルのＮａＣｌを含有する０.１６％（ｗ／
ｖ）のアンモニアであり、好ましい洗浄溶液はｐＨ８〜
９.５に調節した２モルのＮａＣｌを含有する０.１６％
（ｗ／ｖ）のアンモニアであり、好ましい溶離混合物は
ｐＨ１０.５〜１２に調節した２モルのＮａＣｌを含有
する０.１６％（ｗ／ｖ）のアンモニアであり、および
最も好ましい混合物はｐＨ１１.５に調節した混合物で
ある。
【００４２】抗生物質Ａ４０９２６因子、すなわち、抗
生物質Ａ４０９２６因子Ａ、抗生物質Ａ４０９２６因子
Ｂ、抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ0、抗生物質Ａ４０９
２６因子ＰＡおよび抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＢは、
抗生物質Ａ４０９２６複合体の溶液からカラムクロマト
グラフイーにより、好ましくは逆相クロマトグラフイー
により単離される。逆相カラムクロマトグラフイーの場
合において好ましい静止相はシラン化シリカゲルであ
る。しかしながら、すぐれた結果は、また、多官能化ポ
リスチレンおよびアクリル樹脂、例えば、商品名、アン
バーライト（Amberlite）ＸＡＤ−２、ＸＡＤ−４、Ｘ
ＡＤ−７およびＸＡＤ−８（ローム・アンド・ハース
Ｙ）またはジアイオン（Diaion）ＨＰ２０（ミツビシ）
のカラムクロマトグラフイーを使用して得ることができ
る。逆相精製工程を静止相としてシラン化シリカゲルに
より達成する場合において、カラムは好ましくは緩衝化
水溶液でｐＨ４〜９、好ましくは５.５〜６.５において
予備平衡化し、次いで同一緩衝化溶液中において極性水
混和性溶媒の直線勾配で溶離する。極性水混和性溶媒の
代表例は、水溶性アルコール（例えば、メタノール、エ
タノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール）、アセ
トン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、ジオキサ
ンおよびジメチルホルムアミドおよびそれらの混合物で
ある。好ましい水混和性溶媒はアセトニトリルである。
【００４３】溶離された分画をその抗生物質含量につい
て、感受性微生物についての通常のバイオアツセイ、例
えば、紙デイスクまたは寒天−拡散アツセイによりアツ
セイする。感受性微生物の例は、バシルス・スブチリス
（Bacillus subtilis）およびストレプトマイセス・ア
ウレウス（S. aureus）である。
【００４４】クロマトグラフイーは、また、ＴＬＣまた
はＨＰＬＣ技術により便利に監視される。
【００４５】好ましいＨＰＬＣ技術は、好ましくは５μ
ｍの直径を有するＣ−１８アルキル基で官能化されたシ
ラン化シリカゲルの多孔質および球形のカラム［例え
ば、５μｍのウルトラスフエアー（UltrasphereR）ＯＤ
Ｓ アルテツクス（Altex）；ベツクマン・カンパニ
ー］、Ｃ−１８アルキル基で官能化されたシリカゲルで
ある予備カラム［例えば、ＲＰ １８ ブラウンリー・ラ
ブス（Brownlee Labs）］および水性緩衝化溶液中の極
性水混和性溶媒、例えば、前述のうちの一種の直線勾配
混合物である溶離剤を使用する逆相ＨＰＬＣにより代表
される。
【００４６】好ましくは、この溶液はｐＨ５〜７に調節
される。最も好ましい溶離剤は、溶離剤Ａ中の溶離剤Ｂ
の５〜６０％の直線勾配により代表され、ここで溶媒Ａ
はアセトニトリル／水性緩衝液の、ｐＨ５〜７、１０：
９０、の混合物であり、そして溶媒Ｂはアセトニトリル
／水性緩衝液の、ｐＨ５〜７、７０：３０、の混合物で
ある。この分野において知られているように、多くの物
質を内部標準として使用することができる。非常に便利
なものは、この場合において、このＨＰＬＣ系において
本発明の化合物に近接した保持時間を有するテイコプラ
ニンＡ2成分２［グルポ・レペチツト（Gruppo Lepeti
t）Ｓ.ｐ.Ａ.）］である。この標準物質は、既知であ
り、そして英国出願（ＧＢ−Ａ）２１２１４０１号に記
載されている。
【００４７】同様な抗生物質含量を有する分画を、プー
ルし、および前述のような脱塩して、本質的に純粋な抗
生物質Ａ４０９２６因子Ａ、因子Ｂ、因子Ｂ0、因子Ｐ
Ａ、および因子ＰＢを得る。
【００４８】本質的に純粋な抗生物質Ａ４０９２６因子
Ａおよび抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ、抗生物質Ａ４０
９２６因子Ｂ0、抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡおよび
抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＢは、それらを含有する分
画から、既知の技術により、例えば、凍結乾燥、非溶媒
による沈殿または水溶液のｐＨの変化による沈殿により
得られる。
【００４９】便利な手順は、水を共沸混合物を形成する
ことのできる溶媒を添加し、水を共沸蒸留により除去
し、次いで前述したような非溶媒の添加後得られた沈殿
を濾過することを含む。
【００５０】抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡおよびＰＢ
は、少なくともある醗酵条件下に、抗生物質Ａ４０９２
６生産性微生物の主要な抗生物質の生産物である。抗生
物質Ａ４０９２６因子ＡおよびＢは、それぞれ抗生物質
Ａ４０９２６因子ＰＡおよび因子ＰＢの主な転化生産物
（trasformation product）であり、そしてしばしば醗
酵ブロス中にすでに存在する。
【００５１】塩基性条件下に、抗生物質Ａ４０９２６因
子ＰＡは抗生物質Ａ４０９２６因子Ａに転化することが
でき、そして抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＢは抗生物質
Ａ４０９２６因子Ｂに転化することができるという事実
が発見された。例えば、抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡ
および抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＢは、０.５〜１０
％の水性アンモニアまたは他の親核性塩基、例えば、有
機アミンで室温において８〜２４時間処理することによ
り、それぞれ抗生物質Ａ４０９２６因子Ａおよび抗生物
質Ａ４０９２６因子Ｂに転化される。結局、醗酵ブロ
ス、または抗生物質Ａ４０９２６含有抽出物またはその
濃縮物をある時間塩基性条件下に（例えば、親核塩基の
水溶液、＞ｐＨ９、一夜）放置すると、抗生物質Ａ４０
９２６因子Ａおよび抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂに富ん
だ抗生物質Ａ４０９２６複合体が得られるであろう。醗
酵ブロス、抽出物またはその濃縮物を塩基性環境に暴露
する時間が短いと、抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡおよ
び抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＢに富んだ抗生物質Ａ４
０９２６複合体が得られる。
【００５２】因子Ａおよび因子Ｂに富んだ抗生物質Ａ４
０９２６複合体を得るために好ましい手順は、それゆ
え、抗生物質Ａ４０９２６複合体（主として抗生物質Ａ
４０９２６因子ＰＡおよびＰＢを含有する）を室温にお
いて８〜１２時間水性親核塩基、例えば、水性アンモニ
ア、中に放置し、次いで所望の抗生物質の複合体を前述
のようにして単離することを含む。
【００５３】抗生物質Ａ４０９２６含有溶液の例は、醗
酵ブロス、抽出および親和性クロマトグラフイー溶離分
画である。
【００５４】純粋な抗生物質Ａ４０９２６は、粗製複合
体を親和性クロマトグラフイーにより前述のようにして
さらに精製することによつて得ることができる。
【００５５】そのようにして得られる生産物は、その純
粋な因子から誘導されうる生物学的および物理化学的性
質を有し、実施例において抗生物質Ａ４０９２６複合体
ＡＢと呼ぶことにする。
【００５６】因子ＰＡおよびＰＢ中に抗生物質Ａ４０９
２６複合体調製物を濃縮するために好ましい手順は、親
和性クロマトグラフイー溶離分画を酸、好ましくは鉱
酸、例えば、硫酸または塩酸で急速に中和することを含
む。
【００５７】この複合体から純粋な抗生物質Ａ４０９２
６因子ＰＡおよびＰＢを単離することは、上に報告した
手順のうちの１つに従い達成することができる。
【００５８】好ましい手順は、中圧（５〜５０バール）
または高圧（１００〜２００バール）下の、好ましくは
テンレスのカラム中の、逆相液体クロマトグラフイーを
含む。固体相は２〜１８個、最も好ましくはＣ１８）の
炭化水素相またはフエニル基でシラン化されたシリカゲ
ルであることができ、そして溶離剤は上に定義した極性
水混和性溶媒と樹脂と適合性のｐＨ（好ましくはｐＨ４
〜８）の水性緩衝液との混合物である。
【００５９】溶離は通常のように監視し、均質な抗生物
質含量を有する分画をプールし、次いで前述のように処
理して、下に報告する特性を有する純粋な成分を単離す
る。高性能のＨＰＬＣにより、抗生物質Ａ４０９２６因
子Ｂは実際には因子Ｂ0および因子Ｂ1と命名される２種
類の因子の混合物であることが示された。抗生物質Ａ４
０９２６因子Ｂのほぼ９０％を占める抗生物質Ａ４０９
２６因子Ｂ0は、因子Ｂの物理化学的特性の点Ｄにおい
て後述する系においてテイコプラニンＡ2成分２に関し
て１.２２のＲｔを有する因子であり、一方抗生物質Ａ
４０９２６因子Ｂのほぼ１０％を占める因子Ｂ1は同一
系において１.２７のＲｔを有する因子である。
【００６０】純粋な抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ0は、
抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂを、例えば、その単離に使
用して逆相クロマトグラフイー手順を反復することによ
りさらに精製して得られる。抗生物質Ａ４０９２６因子
Ｂ0の物理化学的および生物学的性質は抗生物質Ａ４０
９２６因子Ｂのそれらと実質的に同一であるが、ただし
上の引用したものに類似する系におけるＨＰＬＣ分析に
おいて、それは１つのみのピーク（記載するＨＰＬＣ系
においてテイコプラニンＡ2成分２に関してＲｔ １.２
２）をもつ。
【００６１】本明細書における抗生物質Ａ４０９２６因
子Ｂと抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ0との間の上に概説
した類似性のため、抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂの生物
学的性質についての言及は、抗生物質Ａ４０９２６因子
Ｂの主要成分（約９０％）でありかつ主としてその生物
学的性質に寄与する抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ0をも
言及するものとして理解されたい。
【００６２】したがつて、本発明の抗生物質は醗酵ブロ
スから単離することができ、あるいは官能化されたポリ
スチレン、アクリルまたはポリデキストランのマトリツ
クスを包含する強いまたは弱いアニオン樹脂によりさら
に精製することができる。弱アニオン交換樹脂の例は、
次の商品名で販売されているものである：ドウウエクス
（Dowex）またはＷＧＲ（ダウ・ケミカル）、アンバー
ライトＩＲＡ−７３（ローム・アンド・ハース）、ＤＥ
ＡＥ−セフアデクス（Sepahdex）（フアーマシア）。本
発明に従い使用することのできる強アニオン交換樹脂の
例は、次の商品名で販売されているものを包含する：ド
ウウエクスＭＳＡ−１、ＳＢＲ、ＳＢＲ−Ｐ（ダウ・ケ
ミカル）、アンバーライトＩＲ−９０４（ローム・アン
ド・ハース）およびＱＡＥ−セフアデクス（フアーマシ
ア）。
【００６３】これらの樹脂からの本発明の抗生物質の溶
離は、水または水と有機水混和性溶媒、例えば、低級ア
ルコール（例えば、（Ｃ1〜Ｃ4）アルカノール）または
低級アルキルケトン（例えば、アセトン）との混合物中
の、電解質、例えば、ナトリウムまたはカリウムのハド
ロクロライドの水溶液の直接勾配により実施される。前
述のように、本発明の抗生物質は、酸性および塩基性の
官能性を有し、そして従来法に従い塩類を形成すること
ができる。本発明の化合物の代表的なかつ適当な付加塩
類は、有機酸および無機酸との標準の反応によつて形成
される塩類を包含する。有機酸および無機酸の例は、次
の通りである：塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、酢
酸、トリフルオロ酢酸、トリクロロ酢酸、コハク酸、ク
エン酸、アスコルビン酸、乳酸、マレイ酸、フマル酸、
パルミチン酸、コール酸、パモン酸、ムチン酸、グルタ
ミン酸、シヨウノウ酸、グルタル酸、グリコール酸、フ
タル酸、酒石酸、ラウリン酸、ステアリン酸、サリチル
酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ソルビン
酸、ピクリン酸、安息香酸、桂皮酸などの酸。
【００６４】これらの塩基の代表例は、次の通りであ
る：アルカリ金属またはアルカリ土類金属の水酸化物、
例えば、ナトリウム、カリウム、およびカルシウムの水
酸化物；アンモニアおよび有機アミン、脂肪族、脂環族
または芳香族のアミン、例えば、メチルアミン、ジメチ
ルアミン、トリメチルアミン、およびピコリン。
【００６５】本発明の遊離アミノ化合物または塩でない
化合物の対応する付加塩への転化、およびその逆、すな
わち、本発明の化合物の付加塩の塩ではないまたは遊離
アミノの形態への転化は、通常の技術の範囲内であり、
そして本発明の範囲に包含される。
【００６６】例えば、本発明の化合物は、塩でない形態
において水性溶媒中に溶解し、そしてわずかにモル過剰
量の選択された酸または塩基を添加することにより、対
応する酸または塩基の付加塩に転化することができる。
次いで、得られる溶液または懸濁液を凍結乾燥して所望
の塩を回収する。
【００６７】最終の塩が塩でない形態で可溶性の溶媒中
に不溶性である場合、化学的量論量またはわずかにモル
過剰量の選択された酸または塩基の添加後、塩でない形
態の有機溶液から濾過により回収される。塩でない形態
は水性溶媒中に溶解した対応する酸または塩基の塩から
調製することができ、次いでこれを中和して塩でない形
態を遊離させる。中和に引き続いて、脱塩が必要である
とき、普通の脱塩手順を用いることができる。例えば、
シラン化シリカゲル、官能化されていないポリスチレ
ン、アクリルおよび調節された孔のポリデキストランの
樹脂（例えば、セフアデクス２０）または活性炭を用い
るカラムクロマトグラフイーを便利に使用することがで
きる。所望塩を水溶液で溶離した後、所望の生産物を水
と極性または非極性の有機溶媒との混合物の直線勾配ま
たは段階的勾配、例えば、アセトニトリル／水の５０：
５０から１００％のアセトニトリルにより溶離する。
【００６８】この分野において知られているように、製
薬学的に許容されうる酸（塩基）または製薬学的に許容
されない酸（塩基）との塩形成を便利な精製技術として
使用することができる。形成および単離後、抗生物質Ａ
４０９２６を対応する塩でない形態または製薬学的に許
容されうる塩に転化することができる。
【００６９】ある場合において、本発明の化合物の塩基
付加塩は水および親水性溶媒中に一層可溶性である。
【００７０】抗生物質Ａ４０９２６因子Ａの物理化学的
特性 Ａ） 添付図面の第１図に示され、かつ次の吸収極大を
示す紫外線吸収スペクトル： ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ λｍａｘ(ｎｍ) ａ） ０.１Ｎ ＨＣｌ ２８１ ｂ） リン酸塩緩衝液 ｐＨ７.３８ ２８１ ３００（肩） ｃ） ０.１Ｎ 水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウム ３００ ｄ） メタノール ２８２ ｅ） リン酸塩緩衝液 ｐＨ９.０ ２８２ ９.０ ３００（肩） ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ Ｂ） 添付図面の第２図に示され、かつ次の吸収極大を
示す赤外線吸収スペクトル（ｃｍ-1）：３７００−３１
００、３１００−２８００（nujol）；１６５５；１６
２０−１５６０；１５１０；１４８０−１４１０（nujo
l）；１３７５（nujol）；１３２０−１２５０；１２５
０−１１９０；１１００−９５０；８４５；８１０；７
２０（nujol）、 Ｃ） 添付図面の第３図に示されかつＤＭＳＯ ｄ6（ヘ
キサデユ−テロジメチルスルホキシド）中で記録した２
７０ＭＨｚにおける次の群の信号（ｐｐｍ）を示す1Ｈ
−ＮＭＲスペクトル、内部標準としてＴＭＳ（０.００
ｐｐｍ）を使用、（δ＝ｐｐｍ）：δ０.８６（ｔ，６
Ｈ）；１.２１（約１１Ｈ）；１.４３（２Ｈ）；２.０
１（２Ｈ）；２.３１−２.３４）（３Ｈ）；４−６.２
（約１６Ｈ）；６.２−８（約２３Ｈ）；８.４４、９.
２２、９.６６（広い帯；移動性プロトン）２.４−４：
Ｈ2Ｏピークからの干渉、 Ｄ） 次の条件下に逆相ＨＰＬＣで分析したとき、テイ
コプラニンＡ2成分２（Ｒｔ＝２０.３分）に関する１.
１２の保持時間（Ｒｔ）： カ ラ ム：ウルトラスフエアー（Ultrasphere）ＯＤ
Ｓ（５μｍ）アルテツクス（Altex）［ベツクマン（Bec
kman）］４.６ｍｍ（内径）×２５０ｍｍ 予備カラム：ブラウンリー・ラブス（Brownlee Labs）
ＲＰ １８(５μｍ) 溶離剤Ａ： ＣＨ3ＣＮ １０％ ＮａＨ2ＰＯ4・Ｈ2Ｏ（２.５ｇ／ｌ） ９０％ ｐＨ６.０に調節、 溶離剤Ｂ： ＣＨ3ＣＮ ７０％ ＮａＨ2ＰＯ4・Ｈ2Ｏ（２.５ｇ／ｌ） ３０％ ｐＨ６.０に調節、 溶 離 ：溶離剤Ａ中の５％から６０％への溶離剤Ｂ
の直線勾配、４０分、 流 速 ：１.８ｍｌ／分、 ＵＶ検出器：２５４ｎｍ、 内部標準 ：テイコプラニンＡ2成分２［グルポ・レペ
チツト（Gruppo Lepetit）Ｓ.Ｐ.Ａ.］、 同一の条件下に、テストステロン［ルセル・ウクラフ
（Roussel Uclaf）に関する保持時間は０.６０である、 Ｅ） 試料を不活性雰囲気（△ｗ ４.６％）のもとで約
１４０℃において前もつて乾燥した後、元素分析は次の
近似百分率組成（平均）を示す：炭素５５.８２％；水
素５.１７％；窒素６.３１％；塩素（合計）４.２４
％；塩素（イオン性）０.３７％、 空気中で９００℃における無機残留物：１.２％、 Ｆ） 過剰のＨＣｌの添加後にＫＯＨで滴定すると、２
−メトキシエタノール（ＭＣＳ）：水、４：１、中の酸
−塩基滴定のプロフイルは、次のｐｋMCSを有するイオ
ン化作用を示す：４.６、５.６、７.２、９.２、 Ｇ） 次のクロマトグラフイー系における０.２４のＲｆ
および０.７０のテイコプラニンＡ2成分２に関するＲｆ
値： ５％（ｗ／ｖ）の水性Ｎａ2ＳＯ4 ７０ アセトニトリル ３０ シラン化シリカゲル６０Ｆ254メルク（Merck）板（層の
厚さ０.２５ｍｍ)可視化： − ＵＶ光 − パウリ試薬（Pauly Reagent）、すなわち、ジアゾ
化スルフアニル酸［ジヤーナル・オブ・クロマトグラフ
イー（J. Chromatog.）２０，１７１（１９６５）、ツ
アイトシユリフト・フユール・フイジカリツシエ・ヘミ
ー（Z. Physiol. Chem.）２９２，９９（１９５３）］
を使用する黄色 − B. subtilis ＡＴＣＣ ６６３３を使用する最小デ
イビス（Davis）培地上のバイオオートグラフイー、 Ｈ） １７１７にＭ＋Ｈ+ピークを示すＦＡＢ−ＭＳスペ
クトルからデジユーム（desume）した約１７１６の分子
量、抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂの物理化学的特性 Ａ） 添付図面の第４図に示されかつ次の吸収極大を示
す紫外線吸収スペクトル： ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ λｍａｘ(ｎｍ) ａ） ０.１Ｎ ＨＣｌ ２８２ ｂ） リン酸塩緩衝液 ｐＨ７.３８ ２８１ ３００（肩） ｃ） ０.１Ｎ 水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウム ３００ ｄ） リン酸塩緩衝液 ｐＨ９.０ ２８３ ３００（肩） ｅ） メタノール ２８２ ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ Ｂ） 添付図面の第５図に示され、かつ次の吸収極大を
示す赤外線吸収スペクトル（ｃｍ-1）：３７００−３０
８０、３０８０−２７００（nujol）；１７２０−１６
２５；１６２５−１５６０；１５０５；１４６０（nujo
l）；１３７５（nujol）；１２９５；１２３０；１２１
０；１１５０；１１００−１０４０；１０３０；１０１
５；９７０；８９０；８４０；８１０；７２０（nujo
l）、 Ｃ） 添付図面の第６図に示されかつＤＭＳＯ ｄ6（ヘ
キサデユ−テロジメチルスルホキシド）中で記録した２
７０ＭＨｚ 1Ｈ−ＮＭＲにおける次の群の信号（ｐｐ
ｍ）を示す1Ｈ−ＮＭＲスペクトル、内部標準としてＴ
ＭＳ（０.００ｐｐｍ）を使用、（δ＝ｐｐｍ）：δ０.
８５（ｄ、イソプロピルのＣＨ3）；１.１５（約１３
Ｈ）；１.４４（約２Ｈ）；２.０２（２Ｈ）；２.３２
−２.３５（３Ｈ）；４−６.１（約１６Ｈ）；６.１−
８（約２３Ｈ）；８.５２、９.３０、９.６８（広い
帯；移動性プロトン） ２.５−４：Ｈ2Ｏピークからの干渉、 Ｄ） 次の条件下に逆相ＨＰＬＣで分析したとき、テイ
コプラニンＡ2成分２（Ｒｔ＝２０.３分）に関する１.
２２および１.２７の保持時間（Ｒｔ）： カ ラ ム：ウルトラスフエアー（Ultrasphere）ＯＤ
Ｓ（５μｍ）アルテツクス（Altex）［ベツクマン（Bec
kman）］４.６ｍｍ（内径）×２５０ｍｍ 予備カラム：ブラウンリー・ラブス（Brownlee Labs）
ＲＰ １８(５μｍ) 溶離剤Ａ： ＣＨ3ＣＮ １０％ ＮａＨ2ＰＯ4・Ｈ2Ｏ（２.５ｇ／ｌ） ９０％ ｐＨ６.０に調節、 溶離剤Ｂ： ＣＨ3ＣＮ ７０％ ＮａＨ2ＰＯ4・Ｈ2Ｏ（２.５ｇ／ｌ） ３０％ ｐＨ６.０に調節、 溶 離：溶離剤Ａ中の５％から６０％への溶離剤Ｂ
の直線勾配、４０分、 流 速：１.８ｍｌ／分、 ＵＶ検出器：２５４ｎｍ、 内部標準 ：テイコプラニンＡ2成分２［グルポ・レペ
チツト（Gruppo Lepetit）Ｓ.Ｐ.Ａ.］、 Ｅ） 試料を不活性雰囲気（△ｗ ９.６％）のもとで約
１４０℃において前もつて乾燥した後、元素分析は次の
近似百分率組成（平均）を示す：炭素５４.０９％；水
素５.１３％；窒素６.３４％；塩素（合計）４.１２
％；塩素（イオン性）０.３９％、 空気中で９００℃における無機残留物：５％、 Ｆ） 過剰のＨＣｌ（ｐＨ２.７）の添加後にＫＯＨで滴
定すると、２−メトキシエタノール（ＭＣＳ）：水、
４：１、中の酸−塩基滴定のプロフイルは、次のｐｋ
MCSを有するイオン化作用を示す：４.５、５.６、７.
２、９.２、 Ｇ） 次のクロマトグラフイー系における０.２１のＲｆ
および０.５３のテイコプラニンＡ2成分２に関するＲｆ
値： ５％（ｗ／ｖ）の水性Ｎａ2ＳＯ4 ７０ アセトニトリル ３０ シラン化シリカゲル６０Ｆ254メルク（Merck）板（層の
厚さ０.２５ｍｍ)可視化： − ＵＶ光 − パウリ試薬（Pauly Reagent）、すなわち、ジアゾ
化スルフアニル酸［ジヤーナル・オブ・クロマトグラフ
イー（J. Chromatog.）２０，１７１（１９６５）、ツ
アイトシユリフト・フユール・フイジカリツシエ・ヘミ
ー（Z. Physiol. Chem.）２９２，９９（１９５３）］
を使用する黄色 − B. subtilis ＡＴＣＣ ６６３３を使用する最小デ
イビス（Davis）培地上のバイオオートグラフイー、 Ｈ） １７３１にＭ＋Ｈ+ピークを示すＦＡＢ−ＭＳスペ
クトルからデジユーム（desume）した約１７３０の分子
量、抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ0の物理化学的性質 Ａ） 添付図面の第４図に示されかつ次の吸収極大を示
す紫外線吸収スペクトル： ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ λｍａｘ(ｎｍ) ａ） ０.１Ｎ ＨＣｌ ２８２ ｂ） リン酸塩緩衝液 ｐＨ７.３８ ２８１ ３００（肩） ｃ） ０.１Ｎ 水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウム ３００ ｄ） リン酸塩緩衝液 ｐＨ９.０ ２８３ ３００（肩） ｅ） メタノール ２８２ ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ Ｂ） 添付図面の第５図に示され、かつ次の吸収極大を
示す赤外線吸収スペクトル（ｃｍ-1）：３７００−３０
８０、３０８０−２７００（nujol）；１７２０−１６
２５；１６２５−１５６０；１５０５；１４６０（nujo
l）；１３７５（nujol）；１２９５；１２３０；１２１
０；１１５０；１１００−１０４０；１０３０；１０１
５；９７０；８９０；８４０；８１０；７２０（nujo
l）、 Ｃ） 添付図面の第６図に示されかつＤＭＳＯ ｄ6（ヘ
キサデユ−テロジメチルスルホキシド）中で記録した２
７０ＭＨｚ 1Ｈ−ＮＭＲにおける次の群の信号（ｐｐ
ｍ）を示す1Ｈ−ＮＭＲスペクトル、内部標準としてＴ
ＭＳ（０.００ｐｐｍ）を使用、（δ＝ｐｐｍ）：δ０.
８５（ｄ、イソプロピルのＣＨ3）；１.１５（約１３
Ｈ）；１.４４（約２Ｈ）；２.０２（２Ｈ）；２.３２
−２.３５（３Ｈ）；４−６.１（約１６Ｈ）；６.１−
８（約２３Ｈ）；８.５２、９.３０、９.６８（広い
帯；移動性プロトン）２.５−４：Ｈ2Ｏピークからの干
渉、 Ｄ） 次の条件下に逆相ＨＰＬＣで分析したとき、テイ
コプラニンＡ2成分２（Ｒｔ＝２０.３分）に関する１.
２２の保持時間（Ｒｔ）： カ ラ ム：ウルトラスフエアー（Ultrasphere）ＯＤ
Ｓ（５μｍ）アルテツクス（Altex）［ベツクマン（Bec
kman）］４.６ｍｍ（内径）×２５０ｍｍ 予備カラム：ブラウンリー・ラブス（Brownlee Labs）
ＲＰ １８(５μｍ) 溶離剤Ａ： ＣＨ3ＣＮ １０％ ＮａＨ2ＰＯ4・Ｈ2Ｏ（２.５ｇ／ｌ） ９０％ ｐＨ６.０に調節、 溶離剤Ｂ： ＣＨ3ＣＮ ７０％ ＮａＨ2ＰＯ4・Ｈ2Ｏ（２.５ｇ／ｌ） ３０％ ｐＨ６.０に調節、 溶 離：溶離剤Ａ中の５％から６０％への溶離剤Ｂ
の直線勾配、４０分、 流 速：１.８ｍｌ／分、 ＵＶ検出器：２５４ｎｍ、 内部標準 ：テイコプラニンＡ2成分２［グルポ・レペ
チツト（Gruppo Lepetit）Ｓ.Ｐ.Ａ.］、 Ｅ） 試料を不活性雰囲気（△ｗ ９.６％）のもとで約
１４０℃において前もつて乾燥した後、元素分析は次の
近似百分率組成（平均）を示す：炭素５４.０９％；水
素５.１３％；窒素６.３４％；塩素（合計）４.１２
％；塩素（イオン性）０.３９％、 空気中で９００℃における無機残留物：５％、 Ｆ） 過剰のＨＣｌの添加後にＫＯＨで滴定すると、２
−メトキシエタノール（ＭＣＳ）：水、４：１、中の酸
−塩基滴定のプロフイルは、次のｐｋMCSを有するイオ
ン化作用を示す：４.５、５.６、７.２、９.２、 Ｇ） 次のクロマトグラフイー系における０.２１のＲｆ
および０.５３のテイコプラニンＡ2成分２に関するＲｆ
値： ５％（ｗ／ｖ）の水性Ｎａ2ＳＯ4 ７０ アセトニトリル ３０ シラン化シリカゲル６０Ｆ254メルク（Merck）板（層の
厚さ０.２５ｍｍ)可視化： − ＵＶ光 − パウリ試薬（Pauly Reagent）、すなわち、ジアゾ
化スルフアニル酸［ジヤーナル・オブ・クロマトグラフ
イー（J. Chromatog.）２０，１７１（１９６５）、ツ
アイトシユリフト・フユール・フイジカリツシエ・ヘミ
ー（Z. Physiol. Chem.）２９２，９９（１９５３）］
を使用する黄色 − B. subtilis ＡＴＣＣ ６６３３を使用する最小デ
イビス（Davis）培地上のバイオオートグラフイー、 Ｈ） １７３１にＭ＋Ｈ+ピークを示すＦＡＢ−ＭＳスペ
クトルからデジユーム（desume）した約１７３０の分子
量、抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡの物理化学的特性 Ａ） 添付図面の第７図に示され、かつ次の吸収極大を
示す紫外線吸収スペクトル： ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ λｍａｘ(ｎｍ) ａ） ０.１Ｎ ＨＣｌ ２８２ ｂ） ０.１Ｎ 水酸化カリウム ３００ ｃ） リン酸塩緩衝液 ｐＨ７.３８ ２８２ ３００（肩） ｄ） リン酸塩緩衝液 ｐＨ９.０ ２８３ ３００（肩） ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ Ｂ） 添付図面の第８図に示され、かつ次の吸収極大を
示す赤外線吸収スペクトル（ｃｍ-1）：３７００−３１
００、３０００−２８００（nujol）；１７６０−１６
５５；１６５５；１６２０−１５５０；１５０５；１４
６０（nujol）；１３７５（nujol）；１２６０、１２５
０−９５０；８４５；８０５；７２０（nujol）、 Ｃ） 添付図面の第８図に示されかつＤＭＳＯ Ｄ6（ヘ
キサデユ−テロジメチルスルホキシド）中で記録した２
７０ＭＨｚ 1Ｈ−ＮＭＲにおける次の群の信号（ｐｐ
ｍ）を示す1Ｈ−ＮＭＲスペクトル、内部標準としてＴ
ＭＳ（０.００ｐｐｍ）を使用、（δ＝ｐｐｍ）：０.８
６、ｄ′ｓ（ＣＨ3）；１.１５−１.２２、ｍ（ＣＨ2）
ｎ；１.４１、ｍ（ＣＨ2）；２.０１、ｓ（ＣＨ3）；
２.０１、ｍ（ＣＨ2）；２.２８、ｓ（Ｎ−ＣＨ3）；
４.２６−５.９６、ｂｒ（ペプチドおよび芳香族のＣ
Ｈ）；６.３３−７.７３ｂｒ（芳香族のＣＨおよびペプ
チドのＮＨ）、 ｂｒ＝広い ｄ ＝二重線 ｄｄ＝二重線の二重線 ｍ ＝多重線 ｓ ＝一重線 ｔ ＝三重線 Ｄ） 次の条件下に逆相ＨＰＬＣで分析したとき、テイ
コプラニンＡ2成分２（Ｒｔ＝２０.３分）に関する１.
１５の保持時間（Ｒｔ）： カ ラ ム：ウルトラスフエアー（Ultrasphere）ＯＤ
Ｓ（５μｍ）アルテツクス（Altex）［ベツクマン（Bec
kman）］４.６ｍｍ（内径）×２５０ｍｍ 予備カラム：ブラウンリー・ラブス（Brownlee Labs）
ＲＰ １８(５μｍ) 溶離剤Ａ： ＣＨ3ＣＮ １０％ ＮａＨ2ＰＯ4・Ｈ2Ｏ（２.５ｇ／ｌ） ９０％ ｐＨ６.０に調節、 溶離剤Ｂ： ＣＨ3ＣＮ ７０％ ＮａＨ2ＰＯ4・Ｈ2Ｏ（２.５ｇ／ｌ） ３０％ ｐＨ６.０に調節、 溶 離：溶離剤Ａ中の５％から６０％への溶離剤Ｂ
の直線勾配、４０分、 流 速：１.８ｍｌ／分、 ＵＶ検出器：２５４ｎｍ、 内部標準 ：テイコプラニンＡ2成分２［グルポ・レペ
チツト（Gruppo Lepetit）Ｓ.Ｐ.Ａ.］、 Ｅ） 次のクロマトグラフイー系における０.６２のテイ
コプラニンＡ2成分２に関するＲｆ値： ５％（ｗ／ｖ）の水性Ｎａ2ＳＯ4 ７０ アセトニトリル ３０ シラン化シリカゲル６０Ｆ254メルク（Merck）板（層の
厚さ０.２５ｍｍ)可視化： − ＵＶ光 − パウリ試薬（Pauly Reagent）、すなわち、ジアゾ
化スルフアニル酸［ジヤーナル・オブ・クロマトグラフ
イー（J. Chromatog.）２０，１７１（１９６５）、ツ
アイトシユリフト・フユール・フイジカリツシエ・ヘミ
ー（Z. Physiol. Chem.）２９２，９９（１９５３）］
を使用する黄色 − B. subtilis ＡＴＣＣ ６６３３を使用する最小デ
イビス（Davis）培地上のバイオオートグラフイー、 Ｆ） １７６１に最も強いピークを有するピークの群を
示すＦＡＢ−ＭＳスペクトルからデジユーム（desume）
した約１７５８の分子量。ＦＡＢ−ＭＳ分析の操作条件
は次の通りであつた： 計器：ＦＡＢガンのイオン・テク（Ion Tech）を装備す
るＶＧ Ｍｏｄ ＺＡＢ ＳＥ 条件：ポジテイブ（Positive）ＦＡＢ、Ｘｅ 加速電圧、８ＫＶ マトリツクス：チオグリセロール−グリセロール １／
１（ｖ／ｖ）、抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＢの物理化学的特性 Ａ） 添付図面の第１０図に示され、かつ次の吸収極大
を示す紫外線吸収スペクトル： ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ λｍａｘ（ｎｍ） ａ） ０.１Ｎ ＨＣｌ ２８２ ｂ） ０.１Ｎ 水酸化カリウム ３００ ｃ） リン酸塩緩衝液 ｐＨ７.３８ ２８２ ３００（肩） ｄ） リン酸塩緩衝液 ｐＨ９.０ ２８２ ３００（肩） ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ Ｂ） 添付図面の第１１図に示され、かつ次の吸収極大
を示す赤外線吸収スペクトル（ｃｍ-1）：３７００−３
１００、３０００−２８００（nujol）；１７６０−１
７１０；１６５５；１６２０−１５６０；１６０５；１
４８０−１４２０（nujol）；１３７５（nujol）；１３
２０−１２７０；１２３０−１１９０；１１５０；１１
２０−９２０；８４５；８１０；７２０（nujol）、 Ｃ.１） 添付図面の第１２図に示されかつＤＭＳＯ ｄ6
（ヘキサデユ−テロジメチルスルホキシド）中で記録し
た２７０ＭＨｚにおける次の群の信号（ｐｐｍ）を示す
1Ｈ−ＮＭＲスペクトル、内部標準としてＴＭＳ（０.０
０ｐｐｍ）を使用、（δ＝ｐｐｍ） 多重度；（属性）：０.８４、ｄ（イソプロピルのＣ
Ｈ3）；１.１７、ｍ（ＣＨ2）ｎ；１.４３、ｍ（Ｃ
Ｈ2）、１.９９、ｓ（ＣＨ3）、２.０１、ｍ（Ｃ
Ｈ2）；２.３１、ｓ（Ｎ−ＣＨ3）；２.７９、ｄｄ（Ｃ
−Ｈ）；３.７０、ｍ（Ｃ−Ｈ）；３.７０、ｍ（Ｃ−
Ｈ）：４.０６−６.０２、ｂｒ（ペプチドおよび芳香族
のＣＨ）；６.４５−７.７４、ｂｒ（芳香族のＣＨおよ
びペプチドのＮＨ）；８.１９−９.９９、ｂｒ（ペプチ
ドのＮＨおよびフエノールのＯＨ）、 Ｃ.２） 添付図面の第１３図に示され、かつＤＭＳＯ
ｄ6プラスＣＦ3ＣＯＯＤ中で記録した２７０ＭＨｚにお
ける次の群の信号（ｐｐｍ）を示す1Ｈ−ＮＭＲスペク
トル、内部標準としてＴＭＳ（０.００ｐｐｍ）を使
用、 （δ＝ｐｐｍ）多重度；（属性）：０.８４ｄ（イソプ
ロピルのＣＨ3）；１.１３、ｍ（ＣＨ2）ｎ；１.４０、
ｍ（ＣＨ2）；１.９８、ｓ（ＣＨ3）；２.００、ｍ（Ｃ
Ｈ2）；２.９２、ｄｄ（Ｃ−Ｈ）；３.２９−３.７１、
ｍ（糖のＣ−Ｈ）；４.０７−６.０９、ｓおよびｍ（ペ
プチドおよび芳香族のＣＨ）；６.４５−７.８３、ｓお
よびｍ（芳香族のＣＨおよびペプチドのＮＨ）；８.１
７−１０.３８（ペプチドのＮＨ、フエノールのＯ
Ｈ）、 Ｄ） 次の条件下に逆相ＨＰＬＣで分析したとき、テイ
コプラニンＡ2成分２（Ｒｔ＝２０.３分）に関する１.
２７および１.３２の保持時間（Ｒｔ）： カ ラ ム：ウルトラスフエアー（Ultrasphere）ＯＤ
Ｓ（５μｍ）アルテツクス（Altex）［ベツクマン（Bec
kman）］４.６ｍｍ（内径）×２５０ｍｍ 予備カラム：ブラウンリー・ラブス（Brownlee Labs）
ＲＰ １８(５μｍ) 溶離剤Ａ： ＣＨ3ＣＮ １０％ ＮａＨ2ＰＯ4・Ｈ2Ｏ（２.５ｇ／ｌ） ９０％ ｐＨ６.０に調節、 溶離剤Ｂ： ＣＨ3ＣＮ ７０％ ＮａＨ2ＰＯ4・Ｈ2Ｏ（２.５ｇ／ｌ） ３０％ ｐＨ６.０に調節、 溶 離：溶離剤Ａ中の５％から６０％への溶離剤Ｂ
の直線勾配、４０分、 流 速：１.８ｍｌ／分、 ＵＶ検出器：２５４ｎｍ、 内部標準 ：テイコプラニンＡ2成分２［グルポ・レペ
チツト（Gruppo Lepetit）Ｓ.Ｐ.Ａ.］、 Ｅ） 次のクロマトグラフイー系における０.５３のテイ
コプラニンＡ2成分２に関するＲｆ値： ５％（ｗ／ｖ）の水性Ｎａ2ＳＯ4 ７０ アセトニトリル ３０ シラン化シリカゲル６０Ｆ254メルク（Merck）板（層の
厚さ０.２５ｍｍ)可視化： − ＵＶ光 − パウリ試薬（Pauly Reagent）、すなわち、ジアゾ
化スルフアニル酸［ジヤーナル・オブ・クロマトグラフ
イー（J. Chromatog.）２０，１７１（１９６５）、ツ
アイトシユリフト・フユール・フイジカリツシエ・ヘミ
ー（Z. Physiol. Chem.）２９２，９９（１９５３）］
を使用する黄色 − B. subtilis ＡＴＣＣ ６６３３を使用する最小デ
イビス（Davis）培地上のバイオオートグラフイー、 Ｆ） １７７６に最も強いピークを有するピークの群を
示すＦＡＢ−ＭＳスペクトルからデジユーム（desume）
した約１７７２の分子量。ＦＡＢ−ＭＳ分析の操作条件
は次の通りであつた： 計器：ＦＡＢガンのイオン・テク（Ion Tech）を装備す
るＶＧ Ｍｏｄ ＺＡＢ ＳＥ 条件：ポジテイブ（Positive）ＦＡＢ、Ｘｅ 加速電圧、８ＫＶ マトリツクス：チオグリセロール−グリセロール １／
１（ｖ／ｖ)。
【００７１】本発明の化合物の抗バクテリア活性は、生
体外において異る微生物培養物への標準希釈により立証
することができる。
【００７２】ＭＩＣ（最小阻止濃度）の決定についての
培養基および生長条件は、次の通りであつた：アイソセ
ンチテスト（Isosentitest）ブロス［オキソイド（Oxoi
d）］、２４時間、スタフイロコツキ（Staphylococc
i）、ストレプトマイセス・フアエカリス（Strep. faec
alis）およびグラム陰性バクテリア［エシエリヒア・コ
リ（Escherichia coli）、シユードモナス（Pseudomona
s）、プロテウス（Proteus）］；トツド−ヘウイツト
（Todd-Hewitt）ブロス［デイフコ（Difco）］、２４時
間、他のストレプトコツキ種；ＧＣ基本ブロス（デイフ
コ）＋１％のアイソバイタレツクス（Isovitalex）（Ｂ
ＢＬ）、４８時間、ＣＯ2に富んだ雰囲気、ネイセリア
・ゴノルホエアエ（Neisseria gonorrhoeae）；ＧＢ基
本ブロス（デイフコ）＋１％のアイソバイタレツクス＋
０.００１％のヘミン（hemin）、２４時間、ヘモフイリ
ス・インフルエンザエ（Haemophilus influenzae）；Ａ
Ｃブロス（デイフコ）、２４時間、嫌気的雰囲気、クロ
ストリジウム・ペルフリゲンス（Clostrium perfringen
s）；ウイルキンス−チヤルグレン（Wilkins-Chalgre
n）寒天［Ｔ.Ｄ.ウイルキンスおよびＳ.チヤルグレン、
１９７６，アンチミクロビアル・エイジエント・アンド
・ケモセラピー（Antimicrob. Ag. Chmother.）１０，
９２６参照］、４８時間、嫌気的雰囲気、他の嫌気的有
機体［Ｃ.デイシレ（difficile）、プロピオニバクテリ
ウム・アクネス（Propionibacterium acnes）、バクテ
ロイデス・フラギリス（Bacteroides fragilis）；ＰＰ
ＬＯブロス（デイフコ）＋１０％のウマ血清＋１％のグ
ルコース、４８時間、マイコプラズマ・ガリセプチクム
（Mycoplasma gallisepticum）；酵母窒素基本ブロス
（デイフコ）、２４時間、カンジダ・アルビカンス（Ca
ndida albicans）・C．albicans（３０℃）を除外し
て、インキユベーシヨンは３７℃において実施した。接
種物は次の通りであつた：１％（ｖ／ｖ）の４８時間の
ブロス、M. gallisepticum）；約１０4−１０5コロニー
形成性単位／ｍｌ、他のブロス希釈のＭＩＣ；約１０4
−１０5バクテリア／スポツト（多点接種器を使用して
接種した）、寒天希釈のＭＩＣ（H. influenzae、C. di
fficile、P. acnes、B. fragilis）。
【００７３】
【表４】
【００７４】
【表５】
【００７５】本発明の化合物の抗微生物活性は、また、
Ｒ.パランザ（Pallnza）ら、ジヤーナル・オブ・アンチ
ミクロバイアル・ケモセラピー（J. Antimicrob. Chemo
th.）１１，４１９（１９８３）に本質的に記載されて
いるように実施する生体内実験により確証される。実験
的感染は、マウスにおいてＳ.パイオゲネス（pyogene
s）Ｃ２０３の懸濁液を腹腔内に投与することにより誘
導させた。未処置動物が４８時間以内に敗血症により死
ぬように、接種物を調節した。動物を、注射後、約３０
分以内に試験化合物で皮下的に処置した。スピアマン
（Spearman）およびカーバー（Kareber）の方法［Ｄ.
Ｊ.フイネイ（Finney）「生物学的アツセイにおける統
計学的方法（Statistical Methods in Biological Assa
y）」、グリフイン（Griffin）、５２４ページ、１９５
２］により、ＥＤ50値を各投与における生存百分率に基
づいて１０日目に計算した。上の条件において、ＥＤ50
値は抗生物質Ａ４０９２６因子Ａについて０.４７ｍｇ
／ｋｇ、抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂについて０.３３
ｍｇ／ｋｇ、抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡについて
０.５４ｍｇ／ｋｇおよび抗生物質Ａ４０９２６因子Ｐ
Ｂについて０.３１ｍｇ／ｋｇであつた。
【００７６】マウスにおける概算急性毒性（腹腔内）
を、この分野において知られている方法に従い評価し
た。抗生物質Ａ４０９２６の概算ＬＤ50は、マウスにお
いて皮下に投与したとき、１００ｍｇ／ｋｇより高いこ
とがわかつた。
【００７７】抗生物質Ａ４０９２６複合体およびその因
子Ａ、Ｂ、Ｂ0、ＰＡおよびＰＢは、多くの広く拡散し
た感染の原因であるグラム陽性バクテリアに対して活性
である。通常の治療学的処置に対してこれらの病原体の
抵抗は増加するので、新しい抗生物質の必要性はなお大
きい。
【００７８】すでに述べたように、本発明の抗生物質は
ネイセリア（Neisseria）菌株、例えば、ネイセリア・
ゴノルホエアエ（Neisseria gonorrhoeae）に対してす
ぐれた活性を有し、一方それらは他のグラム陰性バクテ
リアに対して実際的に不活性である。
【００７９】淋病は過去１５〜２０年間絶えず生じてい
ることが知られている。感染の抑制は現在非常に面倒で
ある。なぜなら、感染の全期間にわたつてこの病気の伝
達の回避について必要な注意を払わない感染個体の挙動
に、また、関係して多数の再感染が起こつているからで
ある。他方において、普通に使用されている病原性有機
体の抵抗は増大しつつあるので、抗生物質とより長い処
置との新しい関連が必要となつてくる。したがつて、限
定した投与で、さらには１回の投与でさえ、淋病の感
染、とくにネイセリア・ゴノルホエアエ（Neisseria go
norrhoeae）の感染に有効である新しい抗生物質の必要
が増大しつつある。
【００８０】一般に、抗生物質の処置について、抗生物
質Ａ４０９２６複合体、その因子Ａ、Ｂ、Ｂ0、ＰＡ、
およびＰＢの１種ならびに無毒のそれらの製薬学的に許
容されうる塩類またはそれらの混合物は、局所的にまた
は非経口的のような異る投与の道筋により投与すること
ができる。非経口的投与は、一般に、好ましい投与に道
筋である。
【００８１】注射用組成物は、油または水性ビヒクル中
の懸濁液、溶液、または乳濁液のような形態であること
ができ、そして懸濁剤、可溶化剤および／または分散剤
のような補助剤を含有することができる。あるいは、活
性成分は、供給の時間に、適当なビヒクル、例えば、無
菌の水を添加したとき、再構成のための粉末の形態であ
ることができる。
【００８２】投与の道筋に依存して、これらの化合物は
種々の投与形態に配合することができる。
【００８３】ある場合において、経口的投与のための腸
溶性被覆された投与形態に配合することが可能であり、
これは既知の技術において知られているようにして調製
することができる［例えば、「レミントンの製薬科学
（Remington′s Pharmaceutical Sciences）」，第１５
版，マツク・パブリシング・カンパニー，米国ペンシル
バニア州イーストン，１６１４ページ参照］。これは腸
管内で抗バクテリア剤の吸収がとくに望ましく、かつ胃
を未変化で通過させるとき、ことに有効であろう。
【００８４】活性成分の投与量は、種々の因子、例え
ば、処置すべき患者の大きさおよび状態、投与の道筋お
よび頻度、および含まれる薬剤に依存する。
【００８５】本発明の抗生物質、すなわち、抗生物質Ａ
４０９２６複合体、その因子Ａ、ＰＡ、Ｂ、Ｂ0および
ＰＢ、およびそれらの製薬学的に許容されうる塩類は、
約０.５〜５０ｍｇ／ｋｇ患者体重の活性成分の毎日の
量で、必要に応じての１〜４回／日に分割して投与した
とき一般に有効である。とくに望ましい組成物は、約１
００〜約５,０００ｍｇ／単位を含有する投与単位で調
製されたものである。
【００８６】しかしながら、淋病の単一の投与の処置に
使用するとき、抗生物質Ａ４０９２６複合体、その因子
Ａ、ＰＡ、Ｂ、Ｂ0およびＰＢのより少ない投与量、一
般に０.５〜５０ｍｇ／ｋｇを使用して、延長された時
間にわたつて薬物の有効血液レベルを維持すべきであ
る。
【００８７】さらに、淋病の処置において、持続作用の
非経口的投与の形態は好ましく用いられる。持続作用の
配合物は、この分野において知られているように、異る
機構および方法に基づいて調製することができる。
【００８８】抗生物質Ａ４０９２６複合体、その因子
Ａ、Ｂ、Ｂ0、ＰＡおよびＰＢを含有する持続作用の配
合物を調製する好ましい方法は、水性または油性の媒質
中に懸濁されたこの抗生物質の水不溶性形態の使用を含
む。これらの形態は、すなわち、不溶性塩としてあるい
は遊離酸として、事実、水溶性が低いため、筋肉注射の
とき、非常にゆつくり放出され、こうして抗生物質の持
続された血液レベルを与える。
【００８９】製薬学的組成物の調製筋肉注射のための単位投与形態は 、８％のプロピレング
リコールを含有する無菌懸濁液ＵＳＰの５ｍｌおよび抗
生物質Ａ４０９２６因子Ａの１,０００ｍｇを使用して
調製される。
【００９０】筋肉注射のための単位投与形態は、８％の
プロピレングリコールを含有する無菌懸濁液ＵＳＰの５
ｍｌおよび抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂの５０００ｍｇ
を使用して調製される。
【００９１】筋肉注射のための単位投与形態は、５ｍｌ
の注射用無菌水中に懸濁された抗生物質Ａ４０９２６因
子Ｂナトリウム塩の２,０００ｍｇを用いて調製され
る。
【００９２】さらに、本発明の抗生物質は、偽膜大腸炎
（peudomembranous colitis）の原因であるクロストリ
ジウム・ジフイシル（Clostridium difficile）の生長
を抑制するために有用である。この抗生物質は、偽膜大
腸炎の処置において、製薬学的に許容されうる形態にま
たはされた、抗生物質または製薬学的に許容されうる塩
の有効量を経口的に投与することにより使用することが
できるであろう。このような使用のため、抗生物質はゼ
ラチンカプセル剤または液状懸濁液の形態で投与するこ
とができる。
【００９３】薬物としての活性のほかに、本発明の化合
物は動物の成長促進剤として使用することができる。こ
の目的に、本発明の１種または２種以上の化合物を適当
な飼料中に混入して経口的に投与する。用いる正確な濃
度は、正常な飼料が消費されるとき、生長促進に有効な
量で活性剤を供給するために必要な量である。
【００９４】動物飼料への本発明の活性化合物の添加
は、好ましくは、活性化合物を有効量で含有する適当な
飼料予備混合物を調製し、そしてこの予備混合物を完全
な割合で混入することによつて達成される。あるいは、
活性成分を含有する中間濃厚物または供給補助剤を飼料
中に配合することができる。
【００９５】このような飼料予備混合物および完全定量
を調製しかつ投与できる方法は、参考書に記載されてお
り［例えば、「アプライド・アニマル・ニユートリシヨ
ン（Applied Animal Nutrition）」，Ｗ.Ｈ.フリードマ
ン・アンド・カンパニー（Freedman and Co.），Ｓ.フ
ランシシコ（Francisco），米国，１９６９または「ラ
イブストツク・フイーズ・アンド・フイーデイング（Li
ve stock Feeds and Feeding），Ｏ.アンド・Ｂ.ブツク
ス，米国オレゴン州コバリス，１９７７参照］そしてこ
こに引用によつて加える。
【００９６】次の実施例により、本発明をさらに説明す
る。
【００９７】
【実施例】実施例１ アクチノマズラ・エスピー（Actinomadura sp.）ＡＴＣ
Ｃ３９７２７の醗酵 抗生物質Ａ４０９２６生産性菌株（Actinomadura sp Ａ
ＴＣＣ３９７２７）の培養物を、オートミール寒天傾斜
培地上で２８℃において２〜３週間生長させ、そして
０.５％の肉エキス、０.５％の自動溶解酵母、０.５％
のペプトン、０.３％のカゼイン加水分解物、２％のグ
ルコース、０.１５％のＮａＣｌから構成された１００
ｍｌの培地（滅菌前ｐＨ７.５）を含有する５００ｍｌ
容のエルレンマイヤーフラスコに接種するために使用す
る。このフラスコを２８℃において回転振盪機使用で２
００ｒｐｍで約７２時間インキユベーシヨンし、次いで
この培養物を４ｌの上の培地を含有する醗酵器に移す。
この培養物を、２８℃において約７２時間約２ｌ／分の
空気を流しかつ約９００ｒｐｍで撹拌しながら生長させ
る。次いで、それを使用して同一培地の２００ｌの醗酵
器を接種する。この醗酵器を約２８℃において１００ｌ
／分の空気で通気かつ２５０ｒｐｍで撹拌する。抗生物
質の生産を紙デイスク寒天の拡散法により B. subtilis
を最小培地上の試験有機体として使用して監視する。
最高活性は７２〜９６時間後に得られる。 実施例２ 抗生物質Ａ４０９２６の回収 Ａ） 醗酵ブロスを４℃に冷却し、ｐＨ９.５にしかつ
撹拌する。約１時間後、それを濾過し、濾液をｐＨ約
３.５に水性鉱酸で調節する。この混合物を３０分間４
℃で撹拌し、次いで濾過助剤（Hyflo-Flo MAR）を使用
して濾過する。透明濾液を排出し、濾過ケーキを脱イオ
ン水中に懸濁させ、ｐＨ約８.５に調節し、次いで濾過
する。回収されたケーキを同一手順にかける。プールし
た濾液は抗生物質Ａ４０９２６を含有する。
【００９８】Ｂ） 膨潤したＤ−アラ（Ala）−Ｄ−ア
ラ−ε−アミノカプロイル−セフアロース変性マトリツ
クス（２ｌ）を、実施例１に従つて得られた醗酵ブロス
（それを濾過し、そして透明溶液を約８.５のｐＨにし
た後）に、あるいは上の実施例２Ａに従つて得られたプ
ールした濾液に添加する。室温において一夜撹拌した
後、この樹脂を濾過により回収し、そして５％（ｗ／
ｖ）のＮａＣｌを含有する約２×１０ｌの０.４５ミリ
モルのＨＣｌ−ＴＲＩＳ緩衝液ｐＨ７.５（ＴＲＩＳ＝
２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−１,３−プロパン
ジオール）で洗浄し、次いで蒸留水（４×２０ｌ）で洗
浄する。
【００９９】抗生物質Ａ４０９２６を樹脂から１％（ｗ
／ｖ）のアンモニア水和物（２×２０ｌ）で溶離する。
溶離液を室温において一夜放置し、次いで小さい体積
（約２.５ｌ）に濃縮する。水をｎ−ブタノールとの共
沸蒸留により排除する。石油エーテルを次いで添加し、
３.４ｇの粗製抗生物質Ａ４０９２６複合体を沈殿させ
る。
【０１００】実施例３ 抗生物質Ａ４０９２６複合体ＡＢの精製 上の実施例２の手順に本質的に従つて得られた粗製抗生
物質Ａ４０９２６複合体（７５０ｍｇ；ＨＰＬＣ力価７
０％）を４００ｍｌの水中に溶解し、ｐＨ７.５に調節
し、濾過する。次いで、濾液をＤ−アラ−Ｄ−アラ−ε
−アミノカプロイル−セフアロース（５０ｍｌの膨潤樹
脂；床の高さ＝５ｃｍ）の親和性クロマトグラフイーに
かける。このカラムを、ｐＨ７.５にＨＣｌで調節した
２モルのＮａＣｌを含有する０.１６％（ｗ／ｖ）のア
ンモニアと平衡化し、次の３種類の緩衝液で順次に展開
する： 緩衝液Ａ：ｐＨ７.５にＨＣｌで調節した２モルのＮａ
Ｃｌを含有する０.１６％（ｗ／ｖ）のアンモニア、
（２.６カラムの床体積）； 緩衝液Ｂ：ｐＨ９.５にＨＣｌで調節した２モルのＮａ
Ｃｌを含有する０.１６％（ｗ／ｖ）のアンモニア、
（１６カラムの床体積）； 緩衝液Ｃ：ｐＨ１1.４に調節した１％（ｗ／ｖ）の水性
アンモニア、（２.６カラムの床体積）。
【０１０１】緩衝液Ｃは単一の分画で抗生物質Ａ４０９
２６複合体ＡＢを溶離する。この溶離された分画をｐＨ
７.０に調節し、そして１０ミリモルのＴＲＩＳ−ＨＣ
ｌ ｐＨ７.０で緩衝化した同一の親和性カラムに再適用
する。このカラムを脱塩が完了するまで蒸留水で洗浄す
る。
【０１０２】次いで、抗生物質を２カラム体積の０.３
９％（ｗ／ｖ）の水性アンモニアｐＨ１１.０で溶離す
る。溶離された分画を小さい水性混合物に濃縮し、次い
で凍結乾燥する。純粋な抗生物質Ａ４０９２６複合体Ａ
Ｂ（３７４ｍｇ）が得られる。
【０１０３】実施例４ 抗生物質Ａ４０９２６因子ＡおよびＢの単離 Ａ） 実施例２に従つて得られた抗生物質Ａ４０９２６
複合体（３.３ｇ）または実施例３に従つて得られた抗
生物質Ａ４０９２６複合体ＡＢ（２.３ｇ）を０.５ｌの
水中に懸濁させ、撹拌し、次いで濾過する。透明な濾液
をシラン化シリカゲルのカラム［２００ｇ；床の高さ１
８ｃｍ；シラン化シリカゲル（Silcagel）６０；マーク
・インコーポレーテツド（Merck Inc.）］［これは溶液
Ａ（０.２５％（ｗ／ｖ）のＮａＨ2ＰＯ4・Ｈ2Ｏおよび
０.００１モルの２.５％（ｗ／ｖ）のＮａＣｌを含有
し、ＮａＯＨでｐＨ６.０の調節されている）で予備平
衡化されている］に適用する。このカラムを溶液Ａ中の
０％〜４０％（ｖ／ｖ）のアセトニトリルの直線勾配を
溶離し、合計の体積は約７ｌで約４８時間である。約１
５.５ｍｌの分画を集め、そしてバシルス・スブチリス
（Bcillus subtilis）についてのバイオアツセイにより
アツセイし、そしてＨＰＬＣにより分析する。同様な抗
生物質含量を有する分画をプールする。分画 No.３１０
−３３０およびNo.３４８−３６５は、それぞれＡ４０
９２６因子ＡおよびＡ４０９２６因子Ｂと明らかにされ
た抗生物質を含有した。
【０１０４】Ｂ） 単一のＡ４０９２６因子ＡおよびＢ
を含有するプールした分画を、減圧濃縮してアセトニト
リルを除去し、水（初期の溶液の約２倍の体積）で希釈
し、そして前述の型のシラン化シリカゲルのカラム（膨
潤したマトリツクスの体積：５０ｍｌ；床の高さ：１５
ｃｍ）に適用する。このカラムを脱イオン水で脱塩が完
了するまで脱イオン水で洗浄し、最後にセトニトリル／
水６０：４０（ｖ／ｖ）で展開する。
【０１０５】溶離された分画を減圧濃縮し、そして残留
物を凍結乾燥すると、溶離された分画の最初の群（上の
分画３１０−３３０）から１３４ｍｇの抗生物質Ａ４０
９２６因子Ａが得られ、そして溶離された分画の第２群
（上の分画３４８−３６５）から２０６ｍｇのＡ４０９
２６因子Ｂが得られる。
【０１０６】実施例５ 抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡおよびＰＢの単離 実施例２Ａの手順および実施例２Ｂの手順の第１工程に
本質的に従うことにより、樹脂に結合した抗生物質を１
％（ｗ／ｖ）のアンモニア水和物（２×２０ｌ）で溶離
する。溶離液をｐＨ７.８に硫酸で調節し、そしてｎ−
ブタノールと共沸蒸留することにより小さい体積に減圧
濃縮して水性濃縮物を形成し、次いでこれを紙で濾過す
る。回収された濾液は抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡ、
抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＢおよび少量の抗生物質Ａ
４０９２６因子ＡＢおよび因子Ｂを含有する（ＨＰＬ
Ｃ）。約５０ｍｇ／ｍｌの純粋な抗生物質Ａ４０９２６
複合体（ＨＰＬＣの分析）を含有するこの水性濃縮物の
試料（１０ｍｌ）を５μｍの孔大きさのフイルター［ア
クトデイスク（AcrodiscR）；ゲルマン・サイエンス・
インコーポレーテツド］で濾過し、次いで２０ｇのオク
タデシルシリル逆相シリカゲルを含有するステンレスの
カラム（直径＝２ｃｍ）［リチリソーブ（Lichrisorb）
ＲＰ １８、マーク・インコーポレーテツド；粒子サイ
ズ１０μｍ］に適用する。次いで、シリカゲルをクロマ
トスパク・ボヅルプレプ（ChromatospacModulprep）装
置［ヨウベン・イボン（Yoben Yvon）、フランス］のス
テンレス鋼中に適度の圧力（公称的１４バール）のもと
に詰め、アセトニトリルと１８ミリモルのリン酸塩緩衝
液ｐＨ６.０との２７：７５（ｖ／ｖ）混合物で平衡化
する。この平衡化に使用したのと同一の溶媒混合物を使
用して約１０.５ｍｌ／分の流速で溶離を実施する。溶
離液を Bcillus subtilis についてのバイオアツセイお
よびＨＰＬＣにより監視する。同様な抗生物質を有する
分画をプールし、そして５クロマトグラフイー展開の均
質分画を濃縮して有機溶媒を蒸発させる。得られた溶液
を水性１モルの塩化ナトリウムでもとの体積の２倍に希
釈し、そして水で平衡化したシラン化シリカゲルのカラ
ム（５０ｇ；床の高さ５ｃｍ；シラン化シリカゲル６
０；マーク・インコーポレーテツド）に適用する。
【０１０７】このカラムを脱塩が完結するまで脱イオン
水で洗浄し（水性ＡｇＮＯ3の添加後、溶離液中にＡｇ
Ｃｌの沈殿が形成しない）。次いでアセトニトリル：水
１：１（ｖ／ｖ）で溶離する。同様な抗生物質含量（Ｈ
ＰＬＣの分析）を有する溶離液をプールし、ｎ−ブタオ
ノールとの共沸蒸留により小さい体積に濃縮して水相が
得られ、次いでこれを凍結乾燥する。収量： 抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡ：５５ｍｇ 抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＢ：５１ｍｇ 抗生物質Ａ４０９２６因子Ａ ：３８ｍｇ 抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ0 ：３３ｍｇ実施例６ 抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂを単離する別の方法 実施例２（最後の工程）に従いつくられた２つの調製物
のプールした濃縮物を濾過し、そして濾液を水で予備平
衡化したシラン化シリカゲルのクロマトグラフイーのカ
ラム（４００ｇ；床高さ３０ｃｍ；シリカゲル６０、７
０−２３０メツシユ、マーク・インコーポレーテツド）
に適用する。
【０１０８】このカラムを水（６ｌ）で洗浄し、そして
吸着された抗生物質を次の順序に従いアセトニトリル／
水で溶離する： ２.７ ｌの ５％（ｖ／ｖ）の水中アセトニトリル １.６ ｌの１０％（ｖ／ｖ）の水中アセトニトリル ２.９７ｌの１５％（ｖ／ｖ）の水中アセトニトリル ３.１５ｌの２０％（ｖ／ｖ）の水中アセトニトリル 約１８ｍｌの分画を集める。溶離された分画の活性を、
感受性の微生物、例えば、Bcillus subtilis について
の紙デイスクのバイオアツセイおよびＨＰＬＣによる分
析により試験する。同様な抗生物質含量を有する分画を
プールし（分画４７２−５２６）、減圧濃縮する。ｎ−
ブタノールをこの濃縮物に添加して、水を共沸蒸留的に
除去する。残留するブタノール溶液を順次に小さい体積
に濃縮して抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ（１.４ｇ）を
沈殿される。この生産物を石油エーテルで撹拌下に洗浄
し、そして濾過により（３回）により集める。減圧濃縮
すると、７６０ｍｇの抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂが得
られる。
【０１０９】上のカラムクロマトグラフイーに抗生物質
Ａ４０９２６因子Ｂを再びかけることにより、生産物
（５４０ｍｇ）の抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ0が得ら
れ、これは上の抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂについて報
告した同一の物理化学的特性を有し、ただしそれはただ
１つのピークをＨＰＬＣ分析で示し、すなわち、テイコ
プラニンＡ2成分２に関して１.２２の保持時間をもつピ
ークを示す。
【０１１０】実施例７ 抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡおよび抗生物質Ａ４０９
２６因子ＰＢを、それぞれ抗生物質Ａ４０９２６因子Ａ
および抗生物質Ａ４０９０２６因子Ｂに転化する方法 抗生物質４０９２６因子ＰＡおよび抗生物質Ａ４０９２
６因子ＰＢ（５０ｍｇ）を別々に２.５ｍｌの水性１％
（ｗ／ｖ）のＮＨ4ＯＨ中に溶解し、そして得られた溶
液を約２４時間室温に撹拌しながら保持する。抗生物質
Ａ４０９２６因子Ａははじめ抗生物質Ａ４０９２６因子
ＰＡを含有する溶液から、そして抗生物質Ａ４０９２６
因子Ｂははじめ抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＢを含有す
る溶液から、ｎ−ブタノールとの共沸蒸留により水を除
去し、エチレルエーテルで沈殿させ、そして沈殿を濾過
により集めることにより、それぞれ得られる（収率約７
５％）。
【０１１１】Ｄ−アラ−Ｄ−アラ−セフアロースの調製 活性化ＣＨ−セフアロース（Sepharose）（フアーマシ
ア・フアイン・ケミカルス）（１ｇ）を１ミリモルの冷
氷塩酸中に１５分間膨潤させ、そして同一溶液で洗浄す
る。得られるゲル（約３ｍｌ）を０.５モルの塩化ナト
リウムおよび０.１モルの重炭酸ナトリウム緩衝液ｐＨ
８中のＤ−アラニル−Ｄ−アラニン（３０ｍｇ）の溶液
と混合する。この混合物を室温で反転しながら１時間回
転させる。カツプリング反応が完了した後、過剰の配位
子を緩衝液で洗浄除去する。デキストラン担体の結合し
ない活性化基を１モルのエタノールアミン塩酸塩でｐＨ
９で１時間処理することによりブロツキング（blockin
g）する。次いで、セフアロース（Sepharose）−ε−ア
ミノカプロイル−Ｄ−アラニル−Ｄ−アラニン変性マト
リツクスを濾過により分離し、交互に０.５モルの塩化
ナトリウムおよび０.１モルの酢酸ナトリウムｐＨ４
で、そして０.５モルの塩化ナトリウムおよび０.１モル
のトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン緩衝液ｐＨ
８で完全に洗浄する（４回）。
【図面の簡単な説明】
【図１】抗生物質Ａ４０９２６因子ＡのＵＶスペクトル
である。
【図２】抗生物質Ａ４０９２６因子ＡのＩＲスペクトル
である。
【図３】抗生物質Ａ４０９２６因子Ａの1Ｈ−ＮＭＲス
ペクトルである。
【図４】抗生物質Ａ４０９２６因子ＢのＵＶスペクトル
である。
【図５】抗生物質Ａ４０９２６因子ＢのＩＲスペクトル
である。
【図６】抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂの1Ｈ−ＮＭＲス
ペクトルである。
【図７】抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡのＵＶスペクト
ルである。
【図８】抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡのＩＲスペクト
ルである。
【図９】抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡの1Ｈ−ＮＭＲ
スペクトルである。
【図１０】抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＢのＵＶスペク
トルである。
【図１１】抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＢのＩＲスペク
トルである。
【図１２】抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＢの1Ｈ−ＮＭ
Ｒスペクトルである。
【図１３】抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＢの1Ｈ−ＮＭ
Ｒスペクトルである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:03） (72)発明者 グラツイア・ベレツタ イタリー国20125ミラノ・ビアベルジラ ーテ12 (72)発明者 アンジエロ・ボルギ イタリー国20124ミラノ・ビアピエルル イジダパレストリナ36 (72)発明者 ベス・ピー・ゴールドスタイン イタリー国20121ミラノ・コルソガリバ ルデイ46 (72)発明者 ビツトリオ・アリオリ イタリー国コモ・22070カツシナリツツ アルデイ・ビアベルデイ９ (72)発明者 ジヨバンニ・カツサニ イタリー国27100パビア・ビアビツタデ イーニ３ (72)発明者 フランチエスコ・パレンテイ イタリー国20125ミラノ・ビアエミリオ デマルキ８

Claims (2)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 細胞壁の糖含量の分析において、主とし
    てグルコースおよびリボースの存在ならびに少量のガラ
    クトース、マンノースおよびマズロースの存在を示し、
    且つ液中好気的条件下で炭素、窒素および無機塩類の同
    化源の存在下に培養したとき、抗生物質Ａ４０９２６複
    合体、抗生物質Ａ４０９２６因子Ａ、抗生物質Ａ４０９
    ２６因子Ｂ、抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ ０ 、抗生物質
    Ａ４０９２６因子ＰＡ、抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＢ
    およびそれらの混合物から選ばれる化合物を生産するこ
    とのできる、菌株アクチノマヅラ・エスピー（Ａｃｔｉ
    ｎｏｍａｄｕｒａ ｓｐ．）ＡＴＣＣ３９７２７。
  2. 【請求項２】 生物学的に純粋な培養物の形態にある請
    求項１に記載の菌株。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110940763A (zh) * 2019-12-19 2020-03-31 东莞市东阳光生物合成药有限公司 分离纯化达巴万星前体a40926的方法

Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB8531846D0 (en) * 1985-12-30 1986-02-05 Lepetit Spa Antibiotic a 40926 mannosyl aglycon
GB8608798D0 (en) * 1986-04-11 1986-05-14 Lepetit Spa Recovery of glycopeptide antibiotics from aqueous solutions
GB8608809D0 (en) * 1986-04-11 1986-05-14 Lepetit Spa Antibiotic
DK363587A (da) * 1986-07-30 1988-01-31 Smithkline Beckman Corp Antibiotika og fremstilling heraf under anvendelseaf actinomadura parvosata
GB8621912D0 (en) * 1986-09-11 1986-10-15 Lepetit Spa Increasing ratio of components of anti-biotic complex
GR871488B (en) * 1986-10-10 1987-11-12 Lepetit Spa New antibiotics
US5135857A (en) * 1987-07-03 1992-08-04 Gruppo Lepetit S.P.A. Process for the preparation of de-mannosyl teicoplanin derivatives
PH27266A (en) * 1989-03-14 1993-05-04 Fujisawa Pharmaceutical Co WS7622, A,B,C and D substances and pharmaceutical composition containing same
JPH06503306A (ja) * 1990-12-05 1994-04-14 グルポ・レペチツト・エス・ピー・エイ テイコプラニン抗生物質の３８−デカルボキシ−３８−ヒドロキシメチル誘導体およびそれらの製造方法
US5606036A (en) * 1991-03-27 1997-02-25 Gruppo Lepetit Spa Antibiotic A 40926 ester derivatives
EP0578644B1 (en) 1991-03-27 1996-12-04 GRUPPO LEPETIT S.p.A. Antibiotic a 40926 ester derivatives
US5750509A (en) * 1991-07-29 1998-05-12 Gruppo Lepetit S.P.A. Amide derivatives of antibiotic A 40926
DK0836619T3 (da) * 1995-07-05 2004-12-06 Aventis Bulk S P A Oprensning af dalbaheptid antibiotika ved hjælp af isoelektrisk fokusering
JP2000508671A (ja) 1996-04-23 2000-07-11 バイオサーチ・イタリア・ソチエタ・ペル・アチオニ 抗生物質ａ４０９２６のアミド誘導体の改善された化学的製造法
EP1413626A1 (en) * 2002-10-23 2004-04-28 Vicuron Pharmaceuticals, Inc. Genes and proteins for the biosynthesis of the glycopeptide antibiotic A40926
US20060074014A1 (en) 2002-11-18 2006-04-06 Vicuron Pharmaceuticals Inc. Dalbavancin compositions for treatment of bacterial infections
CA2506236C (en) 2002-11-18 2018-07-17 Vicuron Pharmaceuticals Inc. Compositions and uses of dalbavancin for treatment of bacterial infections
US7119061B2 (en) 2002-11-18 2006-10-10 Vicuron Pharmaceuticals, Inc. Dalbavancin compositions for treatment of bacterial infections
CN110183519B (zh) * 2019-05-06 2023-04-11 大邦(湖南)生物制药有限公司 一种达巴万星关键中间体a40926的分离纯化方法
CN110156876A (zh) * 2019-05-25 2019-08-23 聊城大学 一种适合工业化生产的高纯度a40926b0制备方法
CA3143024A1 (en) * 2019-06-13 2020-12-17 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for removing undesired components during multistage chromatographic processes

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4195079A (en) * 1979-01-31 1980-03-25 Pfizer Inc. New polycyclic ether antibiotic
CA1183789A (en) * 1981-08-04 1985-03-12 Kiyoshi Isono Antibiotic 76-11, process for the production thereof, anticoccidiosis agent and domestic animals growth accelerator comprising the same as an effective ingredient
US4578271A (en) * 1982-05-24 1986-03-25 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Biologically active WS 6049 substances, a process for the production thereof and their pharmaceutical compositions
GR78648B (ja) * 1982-07-26 1984-09-27 Bristol Myers Co

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110940763A (zh) * 2019-12-19 2020-03-31 东莞市东阳光生物合成药有限公司 分离纯化达巴万星前体a40926的方法
CN110940763B (zh) * 2019-12-19 2022-07-26 宜昌东阳光生化制药有限公司 分离纯化达巴万星前体a40926的方法

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