JPH06296711A - トリクロロエチレンの生物分解方法及び微生物による有機塩素化合物の生物分解方法 - Google Patents
トリクロロエチレンの生物分解方法及び微生物による有機塩素化合物の生物分解方法Info
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 トリクロロエチレン（ＴＣＥ）を含む有機塩
素化合物の生物分解に有用な微生物の取得方法及び該微
生物を用いた有機塩素化合物の生物分解方法を提供する
こと。 【構成】 タカサゴシロアリの腸からＴＣＥの分解能に
よるスクリーニングによって、ＴＣＥ分解能を有するシ
ュードモナス・セパシアＫＫ０１株が単離された。該単
離株を用いて土壌や廃液等に含まれるＴＣＥの生物分解
処理が可能となる。また、有機塩素化合物の分解能を有
する微生物に対して所定の条件を満たす量で該分解能の
誘導物質を用いることで単位菌体あたりの分解活性を高
めることができる。
素化合物の生物分解に有用な微生物の取得方法及び該微
生物を用いた有機塩素化合物の生物分解方法を提供する
こと。 【構成】 タカサゴシロアリの腸からＴＣＥの分解能に
よるスクリーニングによって、ＴＣＥ分解能を有するシ
ュードモナス・セパシアＫＫ０１株が単離された。該単
離株を用いて土壌や廃液等に含まれるＴＣＥの生物分解
処理が可能となる。また、有機塩素化合物の分解能を有
する微生物に対して所定の条件を満たす量で該分解能の
誘導物質を用いることで単位菌体あたりの分解活性を高
めることができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、シロアリ腸内由来の微
生物を用いたクロロエチレン系化合物の生物分解方法、
特にトリクロロエチレン（ＴＣＥ）を含む排水や廃液の
浄化に有用な生物分解方法、及び該微生物を利用した土
壌修復方法、更に、ＴＣＥの生物分解に有用な微生物の
取得方法に関する。
生物を用いたクロロエチレン系化合物の生物分解方法、
特にトリクロロエチレン（ＴＣＥ）を含む排水や廃液の
浄化に有用な生物分解方法、及び該微生物を利用した土
壌修復方法、更に、ＴＣＥの生物分解に有用な微生物の
取得方法に関する。
【０００２】また、本発明は、誘導物質により有機塩素
化合物の分解活性が誘導される微生物を用いた生物分解
方法に関する。
化合物の分解活性が誘導される微生物を用いた生物分解
方法に関する。
【０００３】
【従来の技術】近年、各種環境調査において、有害で分
解されにくい芳香族化学物質が検出されるなど、これら
による環境汚染がクローズアップされてきており、生体
系に与えるその影響が懸念されている。
解されにくい芳香族化学物質が検出されるなど、これら
による環境汚染がクローズアップされてきており、生体
系に与えるその影響が懸念されている。
【０００４】従って、これら難分解性化学物質による汚
染を防止していくためには、これらの物質を環境に移行
させない技術の開発が急務となっており、例えば、排水
や廃液中の難分解性有害物質を効果的に除去する技術の
確立が強く望まれている。また、難分解性の有害物質に
よる土壌汚染は、土地の再利用を妨げるばかりでなく、
汚染物質の地下水への流れ込みによる一層の汚染の拡大
を引き起こすので大きな社会問題となっている。従っ
て、これら難分解性化学物質による汚染の拡大を防止し
ていくとともに、汚染された環境を再生していく技術の
確立が強く望まれている。
染を防止していくためには、これらの物質を環境に移行
させない技術の開発が急務となっており、例えば、排水
や廃液中の難分解性有害物質を効果的に除去する技術の
確立が強く望まれている。また、難分解性の有害物質に
よる土壌汚染は、土地の再利用を妨げるばかりでなく、
汚染物質の地下水への流れ込みによる一層の汚染の拡大
を引き起こすので大きな社会問題となっている。従っ
て、これら難分解性化学物質による汚染の拡大を防止し
ていくとともに、汚染された環境を再生していく技術の
確立が強く望まれている。
【０００５】特に、ＴＣＥは、ＩＣ産業、ドライクリー
ニングなどで用いられている有機塩素系化合物であり、
発癌性を有しているといわれ、これによる地下水汚染や
土壌汚染の問題を含めＴＣＥによる環境汚染は大きな社
会問題となってきている。従って、環境中に含まれるＴ
ＣＥの除去、分解、あるいはＴＣＥを含む排水や廃液の
浄化、及び土壌汚染の修復は環境保全の視点から重要な
課題となってきている。
ニングなどで用いられている有機塩素系化合物であり、
発癌性を有しているといわれ、これによる地下水汚染や
土壌汚染の問題を含めＴＣＥによる環境汚染は大きな社
会問題となってきている。従って、環境中に含まれるＴ
ＣＥの除去、分解、あるいはＴＣＥを含む排水や廃液の
浄化、及び土壌汚染の修復は環境保全の視点から重要な
課題となってきている。
【０００６】ＴＣＥの除去処理や分解処理には、活性炭
を用いた吸着処理、光や熱による分解処理等があるが、
コストや操作性の面から微生物を用いた生分解処理が注
目され始めている。
を用いた吸着処理、光や熱による分解処理等があるが、
コストや操作性の面から微生物を用いた生分解処理が注
目され始めている。
【０００７】土壌中で微生物の機能を利用して土壌中の
汚染物質を分解、無公害化する技術があり、この技術
は、微生物により土壌の修復を行うことからバイオレメ
ディーションと呼ばれており、例えば半導体製造工場跡
地、金属加工工場の汚染土壌、化学プラント跡地などの
汚染土壌の修復への利用が期待されている。
汚染物質を分解、無公害化する技術があり、この技術
は、微生物により土壌の修復を行うことからバイオレメ
ディーションと呼ばれており、例えば半導体製造工場跡
地、金属加工工場の汚染土壌、化学プラント跡地などの
汚染土壌の修復への利用が期待されている。
【０００８】しかし、ＴＣＥの分解能を有する微生物で
単離された報告は少ない。例えば、ＴＣＥ分解能を有す
る微生物としては、Welchia alkenophila sero 5 （US
P 4877736, ATCC53570 ）、Welchia alkenophila sero
33 （USP 4877736, ATCC53571）、Methylosinus tricho
sprium OB3b （Whittenbury R, J. Gen. Microbiol.6
1: 205-218 (1970) 、Acinetobacter sp. G4 (Nelson M
JK et al, Appl. Eviron. Microbiol. Aug.: 383-384
(1986); Folsom BR et al, Appl. Environ. Microbiol.
May: 1279-1285 (1990); USP 4925802 、ATCC53617 、
この菌は始めPseudomonas cepacia と分類されていた
が、Acinetobacter sp. に変更された）Methylomonas s
p. MM2 （Henry SM et al, Appl. Environ. Microbiol.
Jan.:236-244 (1991)）、Alcaligenes denitrificans
ssp. xylosoxidsans JE75 （Ewers Jet al, Arch. Micr
obiol. 154: 410-413 (1990)）、Alcaligenes eutrophu
s JMP134 （Harker AR & Kim Y, Appl. Environ. Micro
biol. Apr.: 1179-1181(1990) ）、Pseudomonas putida
F1 （Gibson DT et al, Biochem. 7: 2653-2662 (196
8); wackett LP & Gibson DT, Appl. Environ. Microbi
ol July: 1703-1708 (1988) ）、Mycobacterium vaccse
JOB5 （Beam HW & Perry JJ, J. Gen. Microbiol. 8
2: 163-169 (1974); Wackett LP et al, Appl. Enviro
n. Microbiol. Nov.: 2960-2964 (1989), ATCC29678
）、Nitrosomonas europaea （Arciero D etal, Bioch
em. Biophys. Res. Comm. 159: 640-643 (1989)）、Pse
udomonas fluoescens PFL12 （Vandenbergh PA & Kunka
BS, Appl. Environ. Microbiol. Oct.: 2578-2579 (19
88)）、Lactobacillus fuctivorans RE （Kunkee, In
t. J. Syst. Bact. 30: 313-314 (1980); J. Appl. Bac
t. 34: 541-545 (1971)）、Lactobacillus vaginalis s
p. nov. （Embley TM et al, Int. J. Syst. Bacterio
l. 39: 368-370 (1989), ATCC49540）、Methylosinus t
richosprium （特開平2ー92274 号公報、特開昭3-292970
号公報）などがあるにすぎない。
単離された報告は少ない。例えば、ＴＣＥ分解能を有す
る微生物としては、Welchia alkenophila sero 5 （US
P 4877736, ATCC53570 ）、Welchia alkenophila sero
33 （USP 4877736, ATCC53571）、Methylosinus tricho
sprium OB3b （Whittenbury R, J. Gen. Microbiol.6
1: 205-218 (1970) 、Acinetobacter sp. G4 (Nelson M
JK et al, Appl. Eviron. Microbiol. Aug.: 383-384
(1986); Folsom BR et al, Appl. Environ. Microbiol.
May: 1279-1285 (1990); USP 4925802 、ATCC53617 、
この菌は始めPseudomonas cepacia と分類されていた
が、Acinetobacter sp. に変更された）Methylomonas s
p. MM2 （Henry SM et al, Appl. Environ. Microbiol.
Jan.:236-244 (1991)）、Alcaligenes denitrificans
ssp. xylosoxidsans JE75 （Ewers Jet al, Arch. Micr
obiol. 154: 410-413 (1990)）、Alcaligenes eutrophu
s JMP134 （Harker AR & Kim Y, Appl. Environ. Micro
biol. Apr.: 1179-1181(1990) ）、Pseudomonas putida
F1 （Gibson DT et al, Biochem. 7: 2653-2662 (196
8); wackett LP & Gibson DT, Appl. Environ. Microbi
ol July: 1703-1708 (1988) ）、Mycobacterium vaccse
JOB5 （Beam HW & Perry JJ, J. Gen. Microbiol. 8
2: 163-169 (1974); Wackett LP et al, Appl. Enviro
n. Microbiol. Nov.: 2960-2964 (1989), ATCC29678
）、Nitrosomonas europaea （Arciero D etal, Bioch
em. Biophys. Res. Comm. 159: 640-643 (1989)）、Pse
udomonas fluoescens PFL12 （Vandenbergh PA & Kunka
BS, Appl. Environ. Microbiol. Oct.: 2578-2579 (19
88)）、Lactobacillus fuctivorans RE （Kunkee, In
t. J. Syst. Bact. 30: 313-314 (1980); J. Appl. Bac
t. 34: 541-545 (1971)）、Lactobacillus vaginalis s
p. nov. （Embley TM et al, Int. J. Syst. Bacterio
l. 39: 368-370 (1989), ATCC49540）、Methylosinus t
richosprium （特開平2ー92274 号公報、特開昭3-292970
号公報）などがあるにすぎない。
【０００９】その上、微生物を用いたＴＣＥの分解方法
に用いる場合の実用上の諸条件を満たし、なおかつ十分
な分解能を持つという観点で眺めてみると現在既知の菌
種の範囲では十分なものは見当たらない。
に用いる場合の実用上の諸条件を満たし、なおかつ十分
な分解能を持つという観点で眺めてみると現在既知の菌
種の範囲では十分なものは見当たらない。
【００１０】また、特に、土壌中で用いる場合には、土
壌中という特殊な環境中での処理であるということを考
慮する必要があり、用いる微生物には、十分なＴＣＥの
分解活性を有するだけでなく、かつ土壌中でもその活性
を有効に発揮できることが要求されるが、従来公知の菌
においてはこれらの点が十分であるとはいえない。
壌中という特殊な環境中での処理であるということを考
慮する必要があり、用いる微生物には、十分なＴＣＥの
分解活性を有するだけでなく、かつ土壌中でもその活性
を有効に発揮できることが要求されるが、従来公知の菌
においてはこれらの点が十分であるとはいえない。
【００１１】そこで、実用上要求される特性を満足する
菌種の獲得が強く要望されているのが現状である。
菌種の獲得が強く要望されているのが現状である。
【００１２】このような菌種としては、十分なＴＣＥ分
解能を有することは無論であるが、既知菌種と生育条件
等が異なり、その応用範囲が拡大できるもの、あるいは
その利用形態が豊富となるもの、特に土壌という特殊環
境でも有効に利用できるものが好ましい。そのような付
加的要件としては、例えば薬剤耐性、糖の利用性等を挙
げることができる。
解能を有することは無論であるが、既知菌種と生育条件
等が異なり、その応用範囲が拡大できるもの、あるいは
その利用形態が豊富となるもの、特に土壌という特殊環
境でも有効に利用できるものが好ましい。そのような付
加的要件としては、例えば薬剤耐性、糖の利用性等を挙
げることができる。
【００１３】例えば、ＴＣＥを含む廃液の処理を想定し
た場合、用いる微生物は、ＴＣＥの分解能もさることな
がら、廃液中でダメージを受け難く、廃液という劣悪な
環境下でも生育できることが要求される。すなわち、多
くの抗生物質に対して耐性を有し、かつ各種の糖に対し
て資化能力を持ち合わせている方が劣悪環境下において
も良好に生育する可能性が高い。
た場合、用いる微生物は、ＴＣＥの分解能もさることな
がら、廃液中でダメージを受け難く、廃液という劣悪な
環境下でも生育できることが要求される。すなわち、多
くの抗生物質に対して耐性を有し、かつ各種の糖に対し
て資化能力を持ち合わせている方が劣悪環境下において
も良好に生育する可能性が高い。
【００１４】このようにＴＣＥ分解能を有し、かつ従来
既知の菌種よりも実用上有利な特性を有する菌種が強く
求められている。
既知の菌種よりも実用上有利な特性を有する菌種が強く
求められている。
【００１５】更に、ＴＣＥだけでなく、テトラクロロエ
チレン（ＰＣＥ）、ジクロロエチレン（ＤＣＥ）等の有
機塩素化合物の生物分解において、汚染土壌等の環境
中、すなわち開放系で、生物分解処理を行う場合、汚染
サイト、例えば土壌中では、原虫による捕食や他の土着
菌による影響などにより、投与した生物分解を行わせる
微生物の密度は著しく低く抑えられてしまい、必要処理
能力に見合うようにその密度を上げることは極めて困難
な場合が多い。係る密度を上げるために、土壌中に空気
を送る、栄養素溶液を圧送するなどの方法が挙げられる
が、いずれの方法も多大なエネルギーを必要とするにも
拘らず、それだけでは単位体積当りの菌数を効果的に増
やすことができず、その処理能力は全体として低いレベ
ルに留まっている状況である。
チレン（ＰＣＥ）、ジクロロエチレン（ＤＣＥ）等の有
機塩素化合物の生物分解において、汚染土壌等の環境
中、すなわち開放系で、生物分解処理を行う場合、汚染
サイト、例えば土壌中では、原虫による捕食や他の土着
菌による影響などにより、投与した生物分解を行わせる
微生物の密度は著しく低く抑えられてしまい、必要処理
能力に見合うようにその密度を上げることは極めて困難
な場合が多い。係る密度を上げるために、土壌中に空気
を送る、栄養素溶液を圧送するなどの方法が挙げられる
が、いずれの方法も多大なエネルギーを必要とするにも
拘らず、それだけでは単位体積当りの菌数を効果的に増
やすことができず、その処理能力は全体として低いレベ
ルに留まっている状況である。
【００１６】開放系と同様に、反応器内などでの処理、
すなわち閉鎖系での処理においても、菌の密度を維持す
るには、栄養素の供給、エアレーションなど多大なエネ
ルギーを必要とすることには変わりない。
すなわち閉鎖系での処理においても、菌の密度を維持す
るには、栄養素の供給、エアレーションなど多大なエネ
ルギーを必要とすることには変わりない。
【００１７】また、有機塩素化合物を分解する微生物
は、微生物が係る物質を分解し得る酵素を発現させるこ
とによって有機塩素化合物を分解するが、この酵素を発
現させるために、誘導物質を必要とする。この時、この
誘導物質の量が多いと微生物の分解活性が上がること
が、わずかトリプトファンの例についてのみ知られてい
るが（ＷＯ９０／０６９０１）、具体的にこの誘導物質
の量に着目した従来例は全くない。
は、微生物が係る物質を分解し得る酵素を発現させるこ
とによって有機塩素化合物を分解するが、この酵素を発
現させるために、誘導物質を必要とする。この時、この
誘導物質の量が多いと微生物の分解活性が上がること
が、わずかトリプトファンの例についてのみ知られてい
るが（ＷＯ９０／０６９０１）、具体的にこの誘導物質
の量に着目した従来例は全くない。
【００１８】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、微生
物を利用したＴＣＥの分解方法及び係る微生物を利用し
た土壌修復方法を提供することにある。また、ＴＣＥの
分解に有用な微生物の取得方法を提供することである。
物を利用したＴＣＥの分解方法及び係る微生物を利用し
た土壌修復方法を提供することにある。また、ＴＣＥの
分解に有用な微生物の取得方法を提供することである。
【００１９】更に、本発明の目的は、有機塩素化合物を
分解する微生物の単位菌体あたりの分解活性を高めるこ
とであり、それにより、菌数の増加が期待できない土壌
中等の開放系でも十分な分解処理能力が得られる有機塩
素化合物の生物分解法を提供すること、及び、閉鎖系に
おいても、低い菌数でも、十分な分解処理能力が得ら
れ、菌数の増加や維持にかかるエネルギーやコストを低
減できる有機塩素化合物の生分解法を提供することであ
る。
分解する微生物の単位菌体あたりの分解活性を高めるこ
とであり、それにより、菌数の増加が期待できない土壌
中等の開放系でも十分な分解処理能力が得られる有機塩
素化合物の生物分解法を提供すること、及び、閉鎖系に
おいても、低い菌数でも、十分な分解処理能力が得ら
れ、菌数の増加や維持にかかるエネルギーやコストを低
減できる有機塩素化合物の生分解法を提供することであ
る。
【００２０】
【発明が解決しようとする課題】上記の目的は以下の本
発明によって達成される。
発明によって達成される。
【００２１】すなわち、本発明のトリクロロエチレンの
生物分解方法は、トリクロロエチエンを含む水性媒体
を、トリクロロエチレンの分解能を有するシロアリ腸内
由来の微生物と接触させて、トリクロロエチレンを分解
する過程を含むことを特徴とする。
生物分解方法は、トリクロロエチエンを含む水性媒体
を、トリクロロエチレンの分解能を有するシロアリ腸内
由来の微生物と接触させて、トリクロロエチレンを分解
する過程を含むことを特徴とする。
【００２２】また、本発明のトリクロロエチレン分解能
を有する微生物の取得方法は、シロアリ体内から分離し
た微生物を、トリクロロエチレンを唯一の炭素源として
含む培地で培養し、生育した微生物を回収する過程を有
することを特徴とする。
を有する微生物の取得方法は、シロアリ体内から分離し
た微生物を、トリクロロエチレンを唯一の炭素源として
含む培地で培養し、生育した微生物を回収する過程を有
することを特徴とする。
【００２３】更に、本発明の土壌修復方法は、土壌中
で、シロアリ腸内由来のトリクロロエチレン分解能を有
する微生物とトリクロロエチレンを接触させることによ
りトリクロロエチレンを分解させて土壌を修復すること
を特徴とする。
で、シロアリ腸内由来のトリクロロエチレン分解能を有
する微生物とトリクロロエチレンを接触させることによ
りトリクロロエチレンを分解させて土壌を修復すること
を特徴とする。
【００２４】また、本発明の有機塩素化合物の生物分解
方法は、誘導物質によりその分解活性が誘導される微生
物を、誘導物質存在下で有機塩素化合物に接触させて、
前記有機塩素化合物を分解する生物分解方法であって、
加える前記誘導物質の量が、下記式：
方法は、誘導物質によりその分解活性が誘導される微生
物を、誘導物質存在下で有機塩素化合物に接触させて、
前記有機塩素化合物を分解する生物分解方法であって、
加える前記誘導物質の量が、下記式：
【００２５】
【数２】 （上記式は、前記誘導物質の存在下で、前記微生物のバ
ッチ培養を行い、前記微生物の増殖曲線がｙ＝ｆ（ｔ）
（ｙ：光学濃度（Ｏ．Ｄ．）により求められた菌数、
ｔ：培養時間）で近似された時における菌数と培養時間
の関係を示すものであり、Ｔは菌数ｙが最大となるとき
の培養時間を示す）で表われる関係を損なわない量であ
ることを特徴とする。
ッチ培養を行い、前記微生物の増殖曲線がｙ＝ｆ（ｔ）
（ｙ：光学濃度（Ｏ．Ｄ．）により求められた菌数、
ｔ：培養時間）で近似された時における菌数と培養時間
の関係を示すものであり、Ｔは菌数ｙが最大となるとき
の培養時間を示す）で表われる関係を損なわない量であ
ることを特徴とする。
【００２６】本発明は大きく２つに分かれており、１つ
目は、シロアリ腸内由来の微生物を用いたＴＣＥの分解
方法及び土壌修復方法、更に係る微生物の取得方法に関
するものである。
目は、シロアリ腸内由来の微生物を用いたＴＣＥの分解
方法及び土壌修復方法、更に係る微生物の取得方法に関
するものである。
【００２７】２つ目は、ＴＣＥのみならず有機塩素化合
物を分解する際に、係る有機塩素化合物を分解する微生
物の分解活性を高める生物分解方法に関するものであ
る。
物を分解する際に、係る有機塩素化合物を分解する微生
物の分解活性を高める生物分解方法に関するものであ
る。
【００２８】まず、１つ目の発明について詳述する。
【００２９】上述のように、本発明のＴＣＥの生物分解
方法は、トリクロロエチエンを含む水性媒体を、トリク
ロロエチレンの分解能を有するシロアリ腸内由来の微生
物と接触させて、トリクロロエチレンを分解する過程を
含むことを特徴とする。
方法は、トリクロロエチエンを含む水性媒体を、トリク
ロロエチレンの分解能を有するシロアリ腸内由来の微生
物と接触させて、トリクロロエチレンを分解する過程を
含むことを特徴とする。
【００３０】また、本発明の土壌修復方法は、土壌中
で、シロアリ腸内由来のトリクロロエチレン分解能を有
する微生物と、トリクロロエチレンを接触させることに
よりトリクロロエチレンを分解させて土壌を修復するこ
とを特徴とする。
で、シロアリ腸内由来のトリクロロエチレン分解能を有
する微生物と、トリクロロエチレンを接触させることに
よりトリクロロエチレンを分解させて土壌を修復するこ
とを特徴とする。
【００３１】本発明の方法に用いるシロアリ腸内に由来
する微生物は、例えば、シロアリ表面を滅菌的に洗浄
し、腸を摘出して適当な溶液中でこれをすりつぶし、得
られた腸破砕物を含む混合物の一部を、ＴＣＥの分解能
でスクリーニングした株を単離することによって得るこ
とができる。シロアリとしては、各種シロアリを用いる
ことができ、テングシロアリ属（Nasutiterminae）のも
の、例えばタカサゴシロアリ（Nasutitermes takasagoe
nsis）、Nasutitermes ephratae 、 Nasutitermes exit
iosus 、Nasutitermes nigriceps等が好ましい。なか
でも、タカサゴシロアリが特に好ましい。
する微生物は、例えば、シロアリ表面を滅菌的に洗浄
し、腸を摘出して適当な溶液中でこれをすりつぶし、得
られた腸破砕物を含む混合物の一部を、ＴＣＥの分解能
でスクリーニングした株を単離することによって得るこ
とができる。シロアリとしては、各種シロアリを用いる
ことができ、テングシロアリ属（Nasutiterminae）のも
の、例えばタカサゴシロアリ（Nasutitermes takasagoe
nsis）、Nasutitermes ephratae 、 Nasutitermes exit
iosus 、Nasutitermes nigriceps等が好ましい。なか
でも、タカサゴシロアリが特に好ましい。
【００３２】ＴＣＥの分解能を有する微生物のスクリー
ニング用の培地としては、ＴＣＥのほかに、必要に応じ
て各種炭素源、窒素源、無機塩類、生育因子などを更に
加えたものが利用できる。例えば、シュードモナス属の
細菌の場合は、窒素源として酵母エキストラクト、ペプ
トンなどを単独で、または組み合わせて用いることがで
き、無機塩類としては、リン酸水素第一カリウム、塩化
アンモニウム等を利用することができる。ＴＣＥの濃度
は適宜選択することができるが、例えば、１〜５００ｐ
ｐｍとすることができる。培養は、分離すべき微生物の
種類に応じた条件で行えば良い。ＴＣＥのみでは生育で
きないものを分離する場合には、その生育に必要な炭素
源等を含む培地で単離株を調製し、その中からＴＣＥ分
解能を有するものを選択すればよい。
ニング用の培地としては、ＴＣＥのほかに、必要に応じ
て各種炭素源、窒素源、無機塩類、生育因子などを更に
加えたものが利用できる。例えば、シュードモナス属の
細菌の場合は、窒素源として酵母エキストラクト、ペプ
トンなどを単独で、または組み合わせて用いることがで
き、無機塩類としては、リン酸水素第一カリウム、塩化
アンモニウム等を利用することができる。ＴＣＥの濃度
は適宜選択することができるが、例えば、１〜５００ｐ
ｐｍとすることができる。培養は、分離すべき微生物の
種類に応じた条件で行えば良い。ＴＣＥのみでは生育で
きないものを分離する場合には、その生育に必要な炭素
源等を含む培地で単離株を調製し、その中からＴＣＥ分
解能を有するものを選択すればよい。
【００３３】こうして分離された微生物を用いてＴＣＥ
の分解処理を行うことができる。分解処理にはＴＣＥの
分解能を有する微生物の１種、またはその２種以上の混
合系を用いることができる。混合系を用いる場合には、
組成が分かっているもの、あるいは組成は不明であるが
ＴＣＥの分解性を示すものが利用できる。従って、上記
のスクリーニングにおける培養に複数種の微生物が含ま
れている場合でも、それぞれを単離することなくそのま
ま混合系として利用できる。単離株しとしては、シュー
ドモナス・セパシア（Ps. cepacia ）ＫＫ０１株等を利
用することができる。なお、シロアリ腸内から分離した
ＴＣＥの分解能を有する微生物を自然に、または人工的
に変異させた変異体も本発明に用いることができる。
の分解処理を行うことができる。分解処理にはＴＣＥの
分解能を有する微生物の１種、またはその２種以上の混
合系を用いることができる。混合系を用いる場合には、
組成が分かっているもの、あるいは組成は不明であるが
ＴＣＥの分解性を示すものが利用できる。従って、上記
のスクリーニングにおける培養に複数種の微生物が含ま
れている場合でも、それぞれを単離することなくそのま
ま混合系として利用できる。単離株しとしては、シュー
ドモナス・セパシア（Ps. cepacia ）ＫＫ０１株等を利
用することができる。なお、シロアリ腸内から分離した
ＴＣＥの分解能を有する微生物を自然に、または人工的
に変異させた変異体も本発明に用いることができる。
【００３４】ＫＫ０１株は、フェノール性化合物単独で
も生育してフェノール性化合物を分解でき、また抗生物
質耐性を有し、更に後述の実施例において示されている
ように利用できる糖の範囲が広く、その上ＴＣＥの分解
能を有するという特長がある。
も生育してフェノール性化合物を分解でき、また抗生物
質耐性を有し、更に後述の実施例において示されている
ように利用できる糖の範囲が広く、その上ＴＣＥの分解
能を有するという特長がある。
【００３５】本発明におけるＴＣＥの分解処理は、廃液
などの被処理物中のＴＣＥと上記のシロアリ腸内由来の
微生物とを接触させることによっておこなうことができ
る。微生物と被処理物との接触は、分解すべきＴＣＥを
含む水性液体中で該微生物を培養する、あるいは該水性
液体を該微生物の培養系に添加する等の方法によって行
うことができ、バッチ法、半連続法、連続法等種々の方
式を用いて実施できる。該微生物は、非固定状態で、あ
るいは適当な担体に固定化して用いることができる。廃
液等の非処理物は、必要に応じて各種前処理を行っても
よい。例えば、ＴＣＥの濃度、ｐＨ、各種栄養物質の補
充等を行っても良い。ＴＣＥの分解処理領域内での濃度
は、例えば酵母エキストラクト等の他の栄養物質の存在
下で、１０ｐｐｍ程度以下に調整するとよい。
などの被処理物中のＴＣＥと上記のシロアリ腸内由来の
微生物とを接触させることによっておこなうことができ
る。微生物と被処理物との接触は、分解すべきＴＣＥを
含む水性液体中で該微生物を培養する、あるいは該水性
液体を該微生物の培養系に添加する等の方法によって行
うことができ、バッチ法、半連続法、連続法等種々の方
式を用いて実施できる。該微生物は、非固定状態で、あ
るいは適当な担体に固定化して用いることができる。廃
液等の非処理物は、必要に応じて各種前処理を行っても
よい。例えば、ＴＣＥの濃度、ｐＨ、各種栄養物質の補
充等を行っても良い。ＴＣＥの分解処理領域内での濃度
は、例えば酵母エキストラクト等の他の栄養物質の存在
下で、１０ｐｐｍ程度以下に調整するとよい。
【００３６】本発明の土壌修復方法は、土壌中でＴＣＥ
の分解能を有する微生物をＴＣＥと接触させることによ
り行うことができる。微生物の土壌への散布は、直接土
壌中に微生物を導入する、担体に微生物を付着させてか
らこれを土壌に導入するなどの方法により行うことがで
きる。土壌への散布量は、土壌の汚染濃度、栄養状態、
温度、酸素濃度などの微生物の土壌中での生残因子を考
慮し決定することができる。
の分解能を有する微生物をＴＣＥと接触させることによ
り行うことができる。微生物の土壌への散布は、直接土
壌中に微生物を導入する、担体に微生物を付着させてか
らこれを土壌に導入するなどの方法により行うことがで
きる。土壌への散布量は、土壌の汚染濃度、栄養状態、
温度、酸素濃度などの微生物の土壌中での生残因子を考
慮し決定することができる。
【００３７】次に、２つ目の発明について詳述する。
【００３８】本発明者らは、有機塩素化合物を分解する
微生物の分解活性を高める方法について、分解時に加え
る誘導物質の量に着目し、鋭意検討した結果、分解活性
を高める誘導物質の量と、誘導物質存在下での微生物の
バッチ培養時における初期の増殖曲線の形、即ち、その
増殖特性の間に相関関係があることを見出した。即ち、
分解活性を高めるためには、誘導物質の量は、上記曲線
が下記式を満足するところまでの量としなければならな
いことを見出し、本発明とした。
微生物の分解活性を高める方法について、分解時に加え
る誘導物質の量に着目し、鋭意検討した結果、分解活性
を高める誘導物質の量と、誘導物質存在下での微生物の
バッチ培養時における初期の増殖曲線の形、即ち、その
増殖特性の間に相関関係があることを見出した。即ち、
分解活性を高めるためには、誘導物質の量は、上記曲線
が下記式を満足するところまでの量としなければならな
いことを見出し、本発明とした。
【００３９】この関係の理由は、現在のところ解明でき
ていないが、多くの菌種や条件において、係る関係が確
認された。また、閉鎖系バッチリアクターのみならず、
開放系の連続リアクター、更には、土壌等へのヘテロな
複雑な系においても係る関係が適用できることが確認さ
れた。
ていないが、多くの菌種や条件において、係る関係が確
認された。また、閉鎖系バッチリアクターのみならず、
開放系の連続リアクター、更には、土壌等へのヘテロな
複雑な系においても係る関係が適用できることが確認さ
れた。
【００４０】係る本発明の方法に用いる微生物として
は、有機塩素化合物の分解活性が誘導物質によって誘導
され、かつ誘導物質に対する分解活性をも持ち合わせた
ものであれば制限なく利用できる。このような微生物と
しては、未同定の微生物、単離されていない混合系の微
生物、共生系の微生物群、単離、同定された微生物等が
利用できる。同定されている微生物としては、Ｐｓｅｕ
ｄｏｍｏｍａｓ属、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｏｒ属、Ｍ
ｅｔｈｙｌｏｃｙｓｔｉｓ属、Ｍｅｔｈｙｌｏｓｉｎｕ
ｓ属に属する細菌等で上記の性質を持つものが利用で
き、例えば、メタン共存下中でＴＣＥを分解するＭｅｔ
ｈｙｌｏｓｉｎｕｓ ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｉｕｍ Ｏ
Ｂ３ｂ、フェノールを誘導物質とするＰｓｅｕｄｏｍｏ
ｎａｓ ｃｅｐａｃｉａ ＫＫ０１株（ＦＥＲＭ ＢＰ
−４２３５）等を挙げることができる。
は、有機塩素化合物の分解活性が誘導物質によって誘導
され、かつ誘導物質に対する分解活性をも持ち合わせた
ものであれば制限なく利用できる。このような微生物と
しては、未同定の微生物、単離されていない混合系の微
生物、共生系の微生物群、単離、同定された微生物等が
利用できる。同定されている微生物としては、Ｐｓｅｕ
ｄｏｍｏｍａｓ属、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｏｒ属、Ｍ
ｅｔｈｙｌｏｃｙｓｔｉｓ属、Ｍｅｔｈｙｌｏｓｉｎｕ
ｓ属に属する細菌等で上記の性質を持つものが利用で
き、例えば、メタン共存下中でＴＣＥを分解するＭｅｔ
ｈｙｌｏｓｉｎｕｓ ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｉｕｍ Ｏ
Ｂ３ｂ、フェノールを誘導物質とするＰｓｅｕｄｏｍｏ
ｎａｓ ｃｅｐａｃｉａ ＫＫ０１株（ＦＥＲＭ ＢＰ
−４２３５）等を挙げることができる。
【００４１】分解処理される有機塩素化合物としては、
ＴＣＥ、ＤＣＥ等の塩化エチレンなどをあげることがで
きる。
ＴＣＥ、ＤＣＥ等の塩化エチレンなどをあげることがで
きる。
【００４２】誘導物質は、用いる微生物の種類に応じて
選択され、例えば、メタンやフェノール、トルエン、ｏ
−、ｍ−またはｐ−クレゾール等の芳香族化合物が利用
される。
選択され、例えば、メタンやフェノール、トルエン、ｏ
−、ｍ−またはｐ−クレゾール等の芳香族化合物が利用
される。
【００４３】本発明の方法は、廃水処理や土壌処理等、
閉鎖系及び開放系のいずれの場合にも適用できる。な
お、微生物を担体等に固定して用いたり、生育を促進す
る各種の方法を併用しても良い。
閉鎖系及び開放系のいずれの場合にも適用できる。な
お、微生物を担体等に固定して用いたり、生育を促進す
る各種の方法を併用しても良い。
【００４４】
【実施例】以下実施例により本発明を更に詳細に説明す
る。なお、各実施例で用いたＭ９培地は下記の組成を有
するものである。 Ｍ９培地組成（１リットル中）； Ｎａ2ＨＰＯ4 ６．２ｇ ＫＨ2ＰＯ4 ３．０ｇ ＮａＣｌ ０．５ｇ ＮＨ4Ｃｌ １．０ｇ （ｐＨ７．０） 実施例１（シロアリ腸内由来の微生物によるＴＣＥの分
解及びシロアリ体内からのＴＣＥ分解能を持つ微生物の
取得方法） タカサゴシロアリのハタラキシロアリを１０匹シャーレ
にとり、エチルアルコール（９５％）をこれに注ぎシロ
アリ表面を殺菌した。次に、０．６ｐｐｍのＴＣＥを含
むＭ９培地でシロアリを２回洗い、その表面からエチル
アルコールを除去した。洗浄後、シロアリの腸をピンセ
ットで摘み出し、それを０．６ｐｐｍのＴＣＥを含有す
るＭ９培地中ですり潰し、腸破砕物を含む液状混合物を
得た。次に、この混合物の一部を、３ｐｐｍのＴＣＥ、
１０ｐｐｍのフェノール及び０．０５％酵母エキストラ
クトを含有するＭ９培地に接種し、３０℃で好気条件下
で培養した。所定の培養日数経過時に培地をサンプリン
グして濾過し、濾液中のＴＣＥの量を常法により求め、
その結果から培養日数に応じたＴＣＥの残存率を算出し
た。得られた結果を図１に示す。なお、培養開始時のＴ
ＣＥの量を残存率１００％とした。この結果から、シロ
アリ腸内からＴＣＥ分解能を有する微生物が得られるこ
とがわかった。
る。なお、各実施例で用いたＭ９培地は下記の組成を有
するものである。 Ｍ９培地組成（１リットル中）； Ｎａ2ＨＰＯ4 ６．２ｇ ＫＨ2ＰＯ4 ３．０ｇ ＮａＣｌ ０．５ｇ ＮＨ4Ｃｌ １．０ｇ （ｐＨ７．０） 実施例１（シロアリ腸内由来の微生物によるＴＣＥの分
解及びシロアリ体内からのＴＣＥ分解能を持つ微生物の
取得方法） タカサゴシロアリのハタラキシロアリを１０匹シャーレ
にとり、エチルアルコール（９５％）をこれに注ぎシロ
アリ表面を殺菌した。次に、０．６ｐｐｍのＴＣＥを含
むＭ９培地でシロアリを２回洗い、その表面からエチル
アルコールを除去した。洗浄後、シロアリの腸をピンセ
ットで摘み出し、それを０．６ｐｐｍのＴＣＥを含有す
るＭ９培地中ですり潰し、腸破砕物を含む液状混合物を
得た。次に、この混合物の一部を、３ｐｐｍのＴＣＥ、
１０ｐｐｍのフェノール及び０．０５％酵母エキストラ
クトを含有するＭ９培地に接種し、３０℃で好気条件下
で培養した。所定の培養日数経過時に培地をサンプリン
グして濾過し、濾液中のＴＣＥの量を常法により求め、
その結果から培養日数に応じたＴＣＥの残存率を算出し
た。得られた結果を図１に示す。なお、培養開始時のＴ
ＣＥの量を残存率１００％とした。この結果から、シロ
アリ腸内からＴＣＥ分解能を有する微生物が得られるこ
とがわかった。
【００４５】実施例２（ＴＣＥ分解能を有する単離菌株
の取得及びＴＣＥの分解） 実施例１のＭ９培地（３ｐｐｍのＴＣＥ、１０ｐｐｍの
フェノール及び０．０５％酵母エキストラクトを更に含
有する）での培養により得られた培地（増殖菌体を含
む）を、更にＴＣＥ含有Ｍ９寒天培地（３ｐｐｍＴＣ
Ｅ、５０ｐｐｍフェノール及び１．２％寒天を含む）の
表面に塗布し、３０℃で２日間培養した。いくつかのコ
ロニーが寒天培地上に形成されたので、各々のコロニー
を０．６ｐｐｍＴＣＥ、１０ｐｐｍフェノール及び０．
０５％酵母エキストラクトを含むＭ９培地（５ｍｌ）に
接種し、３０℃で２日間培養した。
の取得及びＴＣＥの分解） 実施例１のＭ９培地（３ｐｐｍのＴＣＥ、１０ｐｐｍの
フェノール及び０．０５％酵母エキストラクトを更に含
有する）での培養により得られた培地（増殖菌体を含
む）を、更にＴＣＥ含有Ｍ９寒天培地（３ｐｐｍＴＣ
Ｅ、５０ｐｐｍフェノール及び１．２％寒天を含む）の
表面に塗布し、３０℃で２日間培養した。いくつかのコ
ロニーが寒天培地上に形成されたので、各々のコロニー
を０．６ｐｐｍＴＣＥ、１０ｐｐｍフェノール及び０．
０５％酵母エキストラクトを含むＭ９培地（５ｍｌ）に
接種し、３０℃で２日間培養した。
【００４６】次に、バイアル瓶に３０ｍｌの３ｐｐｍＴ
ＣＥ、１０ｐｐｍフェノール及び０．０５％酵母エキス
トラスクトを含むＭ９培地を入れたものを必要数用意
し、それぞれに先の各コロニーから採取した菌体の各培
養液（０．１ｍｌ）を個々に接種した後、ブチルゴム栓
及びアルミシールで完全密封し、３０℃で培養した。所
定の培養日数経過時にバイアル瓶中のＴＣＥの量をガス
クロマトグラフィーを用いたヘッドスペース法により定
量し、ＴＣＥの分解が生じているものをＴＣＥ分解菌の
単離株とした。
ＣＥ、１０ｐｐｍフェノール及び０．０５％酵母エキス
トラスクトを含むＭ９培地を入れたものを必要数用意
し、それぞれに先の各コロニーから採取した菌体の各培
養液（０．１ｍｌ）を個々に接種した後、ブチルゴム栓
及びアルミシールで完全密封し、３０℃で培養した。所
定の培養日数経過時にバイアル瓶中のＴＣＥの量をガス
クロマトグラフィーを用いたヘッドスペース法により定
量し、ＴＣＥの分解が生じているものをＴＣＥ分解菌の
単離株とした。
【００４７】単離株の１つについてその菌学的性質を調
べたところ下記の結果が得られ、この単離株はフェノー
ル、o-クレゾール、m-クレゾール及びp-クレゾールなど
のフェノール性化合物等の分解能を有する新規菌株とし
て通商産業省工業技術院微生物工業技術研究所に平成４
年３月１１日に寄託され、平成５年３月９日付でブダペ
スト条約に基づく国際寄託に変更されたＫＫ０１株（国
際寄託番号 ＦＥＲＭＢＰ−４２３５）と同一であるこ
とがわかった。 Ａ．形態的性状 （１）グラム染色：陰性 （２）菌の大きさ及び形：長さ１．０〜２．０μｍ、幅
０．５μｍ前後の桿菌 （３）運動性：あり Ｂ．各種培地における生育状況
べたところ下記の結果が得られ、この単離株はフェノー
ル、o-クレゾール、m-クレゾール及びp-クレゾールなど
のフェノール性化合物等の分解能を有する新規菌株とし
て通商産業省工業技術院微生物工業技術研究所に平成４
年３月１１日に寄託され、平成５年３月９日付でブダペ
スト条約に基づく国際寄託に変更されたＫＫ０１株（国
際寄託番号 ＦＥＲＭＢＰ−４２３５）と同一であるこ
とがわかった。 Ａ．形態的性状 （１）グラム染色：陰性 （２）菌の大きさ及び形：長さ１．０〜２．０μｍ、幅
０．５μｍ前後の桿菌 （３）運動性：あり Ｂ．各種培地における生育状況
【００４８】
【表１】 Ｃ．生理的性質 （１）好気性、嫌気性の区別：偏性好気性 （２）糖の分解様式： 酸化型 （３）オキシダーゼの生成： ＋ （４）硝酸銀の還元： ＋ （５）硫化水素の生成： − （６）インドールの生成： − （７）ウレアーゼの生成： − （８）ゼラチンの液化： − （９）アルギニンの加水分解：− （１０）リジンの脱炭酸： ＋ （１１）オルニチンの脱炭酸：− （１２）クエン酸の利用： ＋ （１３）メチルカルビノールアセチル反応（ＶＰ反
応）：− （１４）トリプトファンデアミナーゼの検出：− （１５）ＯＮＰＧ： − （１６）炭水化物類の利用性： ブドウ糖： ＋ 果糖： ＋ 麦芽糖： ＋ ガラクトース：＋ キシロース： ＋ マンニット： ± 白糖： − 乳糖： ＋ エスクリン： − イノシット： − ソルビット： − ラムノース： − メリビオース：− アミグダリン：− Ｌ−（＋）−アラビノース：＋ 次に、このＫＫ０１株を０．６ｐｐｍＴＣＥ、１０ｐｐ
ｍフェノール及び０．０５％酵母エキストラクトを含む
Ｍ９培地（５ｍｌ）に接種し、３０℃で２日間培養し
た。
応）：− （１４）トリプトファンデアミナーゼの検出：− （１５）ＯＮＰＧ： − （１６）炭水化物類の利用性： ブドウ糖： ＋ 果糖： ＋ 麦芽糖： ＋ ガラクトース：＋ キシロース： ＋ マンニット： ± 白糖： − 乳糖： ＋ エスクリン： − イノシット： − ソルビット： − ラムノース： − メリビオース：− アミグダリン：− Ｌ−（＋）−アラビノース：＋ 次に、このＫＫ０１株を０．６ｐｐｍＴＣＥ、１０ｐｐ
ｍフェノール及び０．０５％酵母エキストラクトを含む
Ｍ９培地（５ｍｌ）に接種し、３０℃で２日間培養し
た。
【００４９】次に、バイアル瓶に３０ｍｌの３ｐｐｍＴ
ＣＥ、１０ｐｐｍフェノール及び０．０５％酵母エキス
トラクトを含むＭ９培地を入れ、これに先のＫＫ０１株
の培養液の０．１ｍｌを接種した後、ブチルゴム栓及び
アルミシールで完全密封し、３０℃で培養した。
ＣＥ、１０ｐｐｍフェノール及び０．０５％酵母エキス
トラクトを含むＭ９培地を入れ、これに先のＫＫ０１株
の培養液の０．１ｍｌを接種した後、ブチルゴム栓及び
アルミシールで完全密封し、３０℃で培養した。
【００５０】所定の培養日数経過時にバイアル瓶中のＴ
ＣＥの量をガスクロマトグラフィーを用いたヘッドスペ
ース法により定量し、培養日数に応じたＴＣＥの残存率
を求めた。得られた結果を図２に示す。なお、培養開始
時のＴＣＥの量を残存率１００％とした。
ＣＥの量をガスクロマトグラフィーを用いたヘッドスペ
ース法により定量し、培養日数に応じたＴＣＥの残存率
を求めた。得られた結果を図２に示す。なお、培養開始
時のＴＣＥの量を残存率１００％とした。
【００５１】実施例３（シロアリ腸内細菌による土壌修
復） タカサゴシロアリのハタラキシロアリを１０匹シャーレ
にとり、エチルアルコール（９５％）をこれに注ぎシロ
アリ表面を殺菌した。次に、０．６ｐｐｍのトリクロロ
エチレン（ＴＣＥ）を含むＭ９培地でシロアリを２回洗
い、その表面からエチルアルコールを除去した。洗浄
後、シロアリの腸をピンセットで摘み出し、それを０．
６ｐｐｍのＴＣＥを含有するＭ９培地中ですり潰し、腸
破砕物を含む液状混合物を得た。次に、バイアル瓶に３
０ｍｌの培地（３ｐｐｍのＴＣＥ、１０ｐｐｍのフェノ
ール及び０．０５％の酵母エキストラクトを含むＭ９培
地）を入れ、これに滅菌済土壌を水面まで加え、先に得
た腸破砕物を含む液状混合の一部を接種した後、バイア
ル瓶をブチルゴム栓をし、アルミシールで完全密封して
から３０℃で培養した。所定の培養日数経過時にバイア
ル瓶中のＴＣＥの量をガスクロマトグラフィーを用いた
ヘッドスペース法により定量し、培養日数に応じたＴＣ
Ｅの残存率を求めた。得られた結果を図３に示す。な
お、培養開始時のＴＣＥの量を残存率１００％とした。
復） タカサゴシロアリのハタラキシロアリを１０匹シャーレ
にとり、エチルアルコール（９５％）をこれに注ぎシロ
アリ表面を殺菌した。次に、０．６ｐｐｍのトリクロロ
エチレン（ＴＣＥ）を含むＭ９培地でシロアリを２回洗
い、その表面からエチルアルコールを除去した。洗浄
後、シロアリの腸をピンセットで摘み出し、それを０．
６ｐｐｍのＴＣＥを含有するＭ９培地中ですり潰し、腸
破砕物を含む液状混合物を得た。次に、バイアル瓶に３
０ｍｌの培地（３ｐｐｍのＴＣＥ、１０ｐｐｍのフェノ
ール及び０．０５％の酵母エキストラクトを含むＭ９培
地）を入れ、これに滅菌済土壌を水面まで加え、先に得
た腸破砕物を含む液状混合の一部を接種した後、バイア
ル瓶をブチルゴム栓をし、アルミシールで完全密封して
から３０℃で培養した。所定の培養日数経過時にバイア
ル瓶中のＴＣＥの量をガスクロマトグラフィーを用いた
ヘッドスペース法により定量し、培養日数に応じたＴＣ
Ｅの残存率を求めた。得られた結果を図３に示す。な
お、培養開始時のＴＣＥの量を残存率１００％とした。
【００５２】実施例４ ＫＫ０１株を０．６ｐｐｍＴＣＥ、１０ｐｐｍフェノー
ル及び０．０５％酵母エキストラクトを含むＭ９培地
（５ｍｌ）に接種し、３０℃で２日間培養した。
ル及び０．０５％酵母エキストラクトを含むＭ９培地
（５ｍｌ）に接種し、３０℃で２日間培養した。
【００５３】次に、バイアル瓶に３０ｍｌの３ｐｐｍＴ
ＣＥ、１０ｐｐｍフェノール及び０．０５％酵母エキス
トラクトを含むＭ９培地を入れ、これに滅菌土壌を水面
まで加え、更に先のＫＫ０１株の培養液の０．１ｍｌを
接種した後、ブチルゴム栓及びアルミシールで完全密封
し、３０℃で培養した。
ＣＥ、１０ｐｐｍフェノール及び０．０５％酵母エキス
トラクトを含むＭ９培地を入れ、これに滅菌土壌を水面
まで加え、更に先のＫＫ０１株の培養液の０．１ｍｌを
接種した後、ブチルゴム栓及びアルミシールで完全密封
し、３０℃で培養した。
【００５４】所定の培養日数経過時にバイアル瓶中のＴ
ＣＥの量をガスクロマトグラフィーを用いたヘッドスペ
ース法により定量し、培養日数に応じたＴＣＥの残存率
を求めた。得られた結果を図４に示す。なお、培養開始
時のＴＣＥの量を残存率１００％とした。
ＣＥの量をガスクロマトグラフィーを用いたヘッドスペ
ース法により定量し、培養日数に応じたＴＣＥの残存率
を求めた。得られた結果を図４に示す。なお、培養開始
時のＴＣＥの量を残存率１００％とした。
【００５５】実施例５ ＫＫ０１株を、５ｍｌの培地（Ｍ９培地に、１ｐｐｍＴ
ＣＥ、０．０５％酵母エキス及び所定濃度のフェノール
を添加）に接種し、３０℃で種培養を２日間行った。
ＣＥ、０．０５％酵母エキス及び所定濃度のフェノール
を添加）に接種し、３０℃で種培養を２日間行った。
【００５６】次に、バイアル瓶に１５ｍｌの培地（Ｍ９
培地に、１ｐｐｍＴＣＥ、０．２％グルタミン酸ナトリ
ウム及び所定濃度のフェノールを添加）を入れ、これに
先の種培養の培養液から０．１ｍｌ（菌体を含む）を接
種した後、ブチルゴム栓及びアルミシールで完全密封
し、３０℃で振盪培養した。経時的にバイアル瓶内の気
相をＯ．１ｍｌ採取し、ガスクロマトグラフィー（島津
製作所製：ガスクロマトグラムＧＣ−９ＡＭ）で分析し
た。
培地に、１ｐｐｍＴＣＥ、０．２％グルタミン酸ナトリ
ウム及び所定濃度のフェノールを添加）を入れ、これに
先の種培養の培養液から０．１ｍｌ（菌体を含む）を接
種した後、ブチルゴム栓及びアルミシールで完全密封
し、３０℃で振盪培養した。経時的にバイアル瓶内の気
相をＯ．１ｍｌ採取し、ガスクロマトグラフィー（島津
製作所製：ガスクロマトグラムＧＣ−９ＡＭ）で分析し
た。
【００５７】また、増殖菌体数は培養液をサンプリング
して、培養液の吸光度（６６０ｎｍ）を分光光度計で測
定することで求めた。
して、培養液の吸光度（６６０ｎｍ）を分光光度計で測
定することで求めた。
【００５８】誘導物質であるフェノールの濃度を、０、
１、１０、１００、５００及び１０００ｐｐｍとした場
合のＴＣＥの残存率（培養開始時のＴＣＥ量を１００％
として求めた）の変化を図５に、菌体数を表わす光学濃
度（Ｏ．Ｄ．）の変化を図６に示す。
１、１０、１００、５００及び１０００ｐｐｍとした場
合のＴＣＥの残存率（培養開始時のＴＣＥ量を１００％
として求めた）の変化を図５に、菌体数を表わす光学濃
度（Ｏ．Ｄ．）の変化を図６に示す。
【００５９】ここで、誘導物質として用いられるフェノ
ールは、活性化させる菌体に対して餌としての資化性
と、それに伴うＴＣＥ分解酵素の発現を促すものである
とともに、一方では、その量が多いと菌増殖阻害を起す
ものでもある。従って、菌体に対して害を及ぼさない範
囲で、しかも菌体のＴＣＥ分解活性をより高めるフェノ
ールの最大量を求めることが必要となる。図６より、フ
ェノール濃度０（無添加）の場合、培養１日目でほぼ菌
数の最大値（Ｏ．Ｄ．＝１．１７；培養２日目）に近い
Ｏ．Ｄ．＝１．１３まで増殖し、３日目以降徐々にＯ．
Ｄ．が減少していくことが示されている。これは、フェ
ノールによって増殖が阻害されていない１つの理想的な
増殖を表わす。しかし、この時はＴＣＥ分解酵素が発現
しないので、ＴＣＥ分解は起らない（図５）。フェノー
ル濃度が１ｐｐｍの場合、１日目のＯ．Ｄ．＝１．１
２、２日目で最大Ｏ．Ｄ．＝１．２１とほとんどフェノ
ール濃度が０の場合と菌体の増殖特性は変わらないが、
ＴＣＥ分解はドラスティックに向上していることがわか
る（図５）。フェノール濃度を１０ｐｐｍ、１００ｐｐ
ｍと増加させた場合、それぞれ、１日目のＯ．Ｄ．＝
０．９６（２日目で最大値Ｏ．Ｄ．＝１．２３）、Ｏ．
Ｄ．＝０．８３（２日目で最大値Ｏ．Ｄ．＝１．１８）
と徐々に１日目の増殖が阻害されはいるが、菌体数の最
大値を与える培養日数とその最大値の値は、フェノール
濃度０〜１００ｐｐｍでおおよそ不変であり、最大値以
降のＯ．Ｄ．の減少についても同様に酷似している。
ールは、活性化させる菌体に対して餌としての資化性
と、それに伴うＴＣＥ分解酵素の発現を促すものである
とともに、一方では、その量が多いと菌増殖阻害を起す
ものでもある。従って、菌体に対して害を及ぼさない範
囲で、しかも菌体のＴＣＥ分解活性をより高めるフェノ
ールの最大量を求めることが必要となる。図６より、フ
ェノール濃度０（無添加）の場合、培養１日目でほぼ菌
数の最大値（Ｏ．Ｄ．＝１．１７；培養２日目）に近い
Ｏ．Ｄ．＝１．１３まで増殖し、３日目以降徐々にＯ．
Ｄ．が減少していくことが示されている。これは、フェ
ノールによって増殖が阻害されていない１つの理想的な
増殖を表わす。しかし、この時はＴＣＥ分解酵素が発現
しないので、ＴＣＥ分解は起らない（図５）。フェノー
ル濃度が１ｐｐｍの場合、１日目のＯ．Ｄ．＝１．１
２、２日目で最大Ｏ．Ｄ．＝１．２１とほとんどフェノ
ール濃度が０の場合と菌体の増殖特性は変わらないが、
ＴＣＥ分解はドラスティックに向上していることがわか
る（図５）。フェノール濃度を１０ｐｐｍ、１００ｐｐ
ｍと増加させた場合、それぞれ、１日目のＯ．Ｄ．＝
０．９６（２日目で最大値Ｏ．Ｄ．＝１．２３）、Ｏ．
Ｄ．＝０．８３（２日目で最大値Ｏ．Ｄ．＝１．１８）
と徐々に１日目の増殖が阻害されはいるが、菌体数の最
大値を与える培養日数とその最大値の値は、フェノール
濃度０〜１００ｐｐｍでおおよそ不変であり、最大値以
降のＯ．Ｄ．の減少についても同様に酷似している。
【００６０】また、図５より、ＴＣＥも良好に分解され
ていることがわかる。特に、１００ｐｐｍの場合，１日
で検出器（ＦＩＤ検出器；水素イオン化検出器）の検出
限界以下までほぼ１００％分解が進んだ。
ていることがわかる。特に、１００ｐｐｍの場合，１日
で検出器（ＦＩＤ検出器；水素イオン化検出器）の検出
限界以下までほぼ１００％分解が進んだ。
【００６１】一方、フェノール濃度が５００ｐｐｍ、１
０００ｐｐｍの時、ＴＣＥの分解はあまり起っていな
い。そして、この時、菌体の増殖は、１日目のＯ．Ｄ．
＝０．０７、Ｏ．Ｄ．＝０．０３と大きな増殖阻害を受
けている。このように、種々の培養増殖曲線とＴＣＥ等
の分解能の相関を検討したところ、培養日数に対して最
大のＯ．Ｄ．値を与える日数まで、即ち、初期の培養曲
線がほぼ凸型で表現される、つまり、前記誘導物質の存
在下で、前記微生物のバッチ培養を行い、前記微生物の
増殖曲線がｙ＝ｆ（ｔ）（ｙ：光学濃度（Ｏ．Ｄ．）に
より求められた菌数、ｔ：培養時間）で近似された時、
下記式
０００ｐｐｍの時、ＴＣＥの分解はあまり起っていな
い。そして、この時、菌体の増殖は、１日目のＯ．Ｄ．
＝０．０７、Ｏ．Ｄ．＝０．０３と大きな増殖阻害を受
けている。このように、種々の培養増殖曲線とＴＣＥ等
の分解能の相関を検討したところ、培養日数に対して最
大のＯ．Ｄ．値を与える日数まで、即ち、初期の培養曲
線がほぼ凸型で表現される、つまり、前記誘導物質の存
在下で、前記微生物のバッチ培養を行い、前記微生物の
増殖曲線がｙ＝ｆ（ｔ）（ｙ：光学濃度（Ｏ．Ｄ．）に
より求められた菌数、ｔ：培養時間）で近似された時、
下記式
【００６２】
【数３】 （Ｔ：菌数ｙが最大となる時の培養時間）を満足する範
囲内に誘導物質の量を設定すれば、菌の活性度を高める
ことができる。特に好ましくは、この範囲内で最大の誘
導物質濃度に設定すれば、菌体当りの活性度を最大に設
定することが可能となる。
囲内に誘導物質の量を設定すれば、菌の活性度を高める
ことができる。特に好ましくは、この範囲内で最大の誘
導物質濃度に設定すれば、菌体当りの活性度を最大に設
定することが可能となる。
【００６３】誘導物質が少量でも含まれていれば、菌体
の分解活性は高められ、生物分解は進行しているものと
思われるが、実際には、誘導物質の濃度が分解すべき有
機塩素化合物の濃度の０．２倍以上、更に、０．５倍以
上が好ましい。また、有機塩素化合物の濃度が５ｐｐｍ
以上と高濃度のときには、１倍以上で用いることが良好
な結果を与える。
の分解活性は高められ、生物分解は進行しているものと
思われるが、実際には、誘導物質の濃度が分解すべき有
機塩素化合物の濃度の０．２倍以上、更に、０．５倍以
上が好ましい。また、有機塩素化合物の濃度が５ｐｐｍ
以上と高濃度のときには、１倍以上で用いることが良好
な結果を与える。
【００６４】実施例６ 分解対象物であるＴＣＥの濃度を５ｐｐｍとした他は実
施例５と同様に実験を行った。ＴＣＥの残存率の変化を
図７に、菌体数を表わすＯ．Ｄ．の変化を図８に示す。
施例５と同様に実験を行った。ＴＣＥの残存率の変化を
図７に、菌体数を表わすＯ．Ｄ．の変化を図８に示す。
【００６５】ＴＣＥ分解については、フェノール濃度１
００ｐｐｍの場合、１日でＦＩＤ検出器の検出限界以下
にまで分解が進み、フェノール濃度１、５及び１０ｐｐ
ｍの場合でも、１日でそれぞれ約６２．９３％及び約９
７％の分解が見られた。これに対し、フェノールを添加
しなかった場合、及びフェノール濃度１０００ｐｐｍの
場合のＴＣＥの分解はほとんどみられなかった。
００ｐｐｍの場合、１日でＦＩＤ検出器の検出限界以下
にまで分解が進み、フェノール濃度１、５及び１０ｐｐ
ｍの場合でも、１日でそれぞれ約６２．９３％及び約９
７％の分解が見られた。これに対し、フェノールを添加
しなかった場合、及びフェノール濃度１０００ｐｐｍの
場合のＴＣＥの分解はほとんどみられなかった。
【００６６】一方、菌体増殖に関しては、フェノール濃
度１００ｐｐｍまでのものは、いずれも初期増殖曲線が
凸型を示しており、培養２日で最大菌数（Ｏ．Ｄ．＝
１．２前後）まで増殖している。フェノール濃度１００
０ｐｐｍのものは、明らかに増殖阻害を受け、最大菌数
に達する日数も１００ｐｐｍまでのものと比べ、１日以
上遅れている。
度１００ｐｐｍまでのものは、いずれも初期増殖曲線が
凸型を示しており、培養２日で最大菌数（Ｏ．Ｄ．＝
１．２前後）まで増殖している。フェノール濃度１００
０ｐｐｍのものは、明らかに増殖阻害を受け、最大菌数
に達する日数も１００ｐｐｍまでのものと比べ、１日以
上遅れている。
【００６７】実施例７ ＴＣＥの濃度を３０ｐｐｍとした以外は実施例５と同様
にして培養を行った。得られた結果を、図９、１０に示
す。
にして培養を行った。得られた結果を、図９、１０に示
す。
【００６８】図９に示したように、ＴＣＥ分解について
はフェノール濃度１００ｐｐｍの場合、１日で約４５％
の分解が見られた。これに対し、フェノール濃度１００
０ｐｐｍの場合、及びフェノール無添加の場合にはＴＣ
Ｅ分解はほとんど進まなかった。
はフェノール濃度１００ｐｐｍの場合、１日で約４５％
の分解が見られた。これに対し、フェノール濃度１００
０ｐｐｍの場合、及びフェノール無添加の場合にはＴＣ
Ｅ分解はほとんど進まなかった。
【００６９】一方、図１０に示したように、増殖は、０
及び１００ｐｐｍのフェノール濃度で同様の過程を示し
た。
及び１００ｐｐｍのフェノール濃度で同様の過程を示し
た。
【００７０】また、１０００ｐｐｍのフェノール濃度の
時の最大菌数及び最大菌数に達する日数は、０及び１０
０ｐｐｍの時と同様であったが、その初期増殖曲線は凸
型を示しておらず、増殖阻害が認められた。
時の最大菌数及び最大菌数に達する日数は、０及び１０
０ｐｐｍの時と同様であったが、その初期増殖曲線は凸
型を示しておらず、増殖阻害が認められた。
【００７１】上述したようにフェノール濃度が１０００
ｐｐｍの時、菌体数も、最大菌体数までの日数も１００
ｐｐｍの時と同じだったにも拘らずＴＣＥの分解はほと
んど進まなかった。このことは、１００ｐｐｍと１００
０ｐｐｍで同程度の菌体数が培養されていても、係る菌
体のＴＣＥ分解能力の活性化は増殖曲線が凸型を示して
いる１００ｐｐｍのほうでしか起っていないことを示し
ている。
ｐｐｍの時、菌体数も、最大菌体数までの日数も１００
ｐｐｍの時と同じだったにも拘らずＴＣＥの分解はほと
んど進まなかった。このことは、１００ｐｐｍと１００
０ｐｐｍで同程度の菌体数が培養されていても、係る菌
体のＴＣＥ分解能力の活性化は増殖曲線が凸型を示して
いる１００ｐｐｍのほうでしか起っていないことを示し
ている。
【００７２】実施例８ 通常、土壌中にはＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属等の芳香族
化合物資化性菌が存在するといわれている。そこで、神
奈川県にて採取した褐色森林土１ｇをフェノール濃度２
００ｐｐｍに調製したＭ９培地１５ｍｌに加え、３０℃
で振盪培養を３日間行った後、その１００μｌを同様の
培地に移して更に３日間３０℃で浸透培養を行った。こ
れを同様の組成（フェノール２００ｐｐｍ含有）の寒天
平板培地上でプレートカウントしたところ、土壌１ｇ当
り１０6 から１０7 個の数種類の菌がカウントされた。
化合物資化性菌が存在するといわれている。そこで、神
奈川県にて採取した褐色森林土１ｇをフェノール濃度２
００ｐｐｍに調製したＭ９培地１５ｍｌに加え、３０℃
で振盪培養を３日間行った後、その１００μｌを同様の
培地に移して更に３日間３０℃で浸透培養を行った。こ
れを同様の組成（フェノール２００ｐｐｍ含有）の寒天
平板培地上でプレートカウントしたところ、土壌１ｇ当
り１０6 から１０7 個の数種類の菌がカウントされた。
【００７３】芳香族化合物資化性菌の存在が確認された
上記土壌１ｇをフェノール濃度を、２００ｐｐｍ、ＴＣ
Ｅ初期濃度を１５ｐｐｍに調製したＭ９培地１５ｍｌに
加え、３０℃、１２０ｒｐｍで７日間振盪培養し、上記
と同様の方法でＴＣＥの分解率を求めたところ、約５０
％のＴＣＥ分解が見られた。すなわち、上記土壌中での
フェノールの存在下でＴＣＥを分解する菌の存在が確認
された。
上記土壌１ｇをフェノール濃度を、２００ｐｐｍ、ＴＣ
Ｅ初期濃度を１５ｐｐｍに調製したＭ９培地１５ｍｌに
加え、３０℃、１２０ｒｐｍで７日間振盪培養し、上記
と同様の方法でＴＣＥの分解率を求めたところ、約５０
％のＴＣＥ分解が見られた。すなわち、上記土壌中での
フェノールの存在下でＴＣＥを分解する菌の存在が確認
された。
【００７４】以上の結果に基づいて、土着の芳香族化合
物資化性菌ＴＣＥ分解菌のＴＣＥ分解に及ぼすフェノー
ル濃度について実験を行った。すなわち、実施例５と同
様にして土壌１ｇ当たりのＴＣＥ分解を測定した。得ら
れた結果を、図１１、１２に示す。
物資化性菌ＴＣＥ分解菌のＴＣＥ分解に及ぼすフェノー
ル濃度について実験を行った。すなわち、実施例５と同
様にして土壌１ｇ当たりのＴＣＥ分解を測定した。得ら
れた結果を、図１１、１２に示す。
【００７５】図１１の結果では、フェノール濃度１００
ｐｐｍの場合に最大の分解が見られ、１日で約７０％の
ＴＣＥ分解が見られた。次いで、フェノール濃度１０ｐ
ｐｍの場合に、１日で約５０％のＴＣＥ分解が見られ
た。また、フェノール濃度１０００ｐｐｍの場合には、
極めてゆっくりとした分解に止まっている。
ｐｐｍの場合に最大の分解が見られ、１日で約７０％の
ＴＣＥ分解が見られた。次いで、フェノール濃度１０ｐ
ｐｍの場合に、１日で約５０％のＴＣＥ分解が見られ
た。また、フェノール濃度１０００ｐｐｍの場合には、
極めてゆっくりとした分解に止まっている。
【００７６】一方、図１２に示したように、増殖に関し
ては、ＫＫＯ１株と同様に、フェノール濃度が０、１０
及び１００ｐｐｍのものは、いずれも初期増殖曲線が凸
型を示している。１０００ｐｐｍのものは、明らかに増
殖阻害を受けている。
ては、ＫＫＯ１株と同様に、フェノール濃度が０、１０
及び１００ｐｐｍのものは、いずれも初期増殖曲線が凸
型を示している。１０００ｐｐｍのものは、明らかに増
殖阻害を受けている。
【００７７】実施例９ ＴＣＥで５ｐｐｍ（ＴＣＥ５ｍｇ／ｋｇ湿潤土）に汚染
された含水率９０％の滅菌された関東ローム層土壌１０
０ｇを入れたバイアル瓶に１５ｍｌの培地（Ｍ９培地に
０．２％グルタミン酸ナトリウム及び所定のフェノール
濃度（０、１、５、１０、１００、５００及び１０００
ｐｐｍ（ｍｇ／ｋｇ湿潤土）を添加）とＫＫ０１株（Ｋ
Ｋ０１の種培養液０．１ｍｌ）を加え均一に混合し、ブ
チルゴム栓及びアルミシールで完全密封し、３０℃で静
置培養した。経時的にバイアル瓶内の気相を０．１ｍｌ
採取し、実施例５と同様にＴＣＥの残留率を求め図１３
に示した。実施例６の培養系のＴＣＥ５ｐｐｍの場合と
ほぼ対応する分解能を土壌系の場合にもフェノール濃度
によって与えられることが判る。従って、実施例６の図
７、８の結果を踏まえて、つまりは、バッチ液培養にお
ける実験で得られる増殖曲線のデータから、実際の土壌
の場合の有効な誘導物質濃度を設定することができる。
された含水率９０％の滅菌された関東ローム層土壌１０
０ｇを入れたバイアル瓶に１５ｍｌの培地（Ｍ９培地に
０．２％グルタミン酸ナトリウム及び所定のフェノール
濃度（０、１、５、１０、１００、５００及び１０００
ｐｐｍ（ｍｇ／ｋｇ湿潤土）を添加）とＫＫ０１株（Ｋ
Ｋ０１の種培養液０．１ｍｌ）を加え均一に混合し、ブ
チルゴム栓及びアルミシールで完全密封し、３０℃で静
置培養した。経時的にバイアル瓶内の気相を０．１ｍｌ
採取し、実施例５と同様にＴＣＥの残留率を求め図１３
に示した。実施例６の培養系のＴＣＥ５ｐｐｍの場合と
ほぼ対応する分解能を土壌系の場合にもフェノール濃度
によって与えられることが判る。従って、実施例６の図
７、８の結果を踏まえて、つまりは、バッチ液培養にお
ける実験で得られる増殖曲線のデータから、実際の土壌
の場合の有効な誘導物質濃度を設定することができる。
【００７８】実施例１０ 分解対象物としてｃｉｓ−１，２−ジクロロエチレン
（ｃｉｓ−ＤＣＥ）を用い、その濃度を１３ｐｐｍとし
て実施例５と同様にして培養を行った。得られた結果を
図１４及び１５に示す。図１４に示したように、フェノ
ール濃度１００ｐｐｍのときに１３ｐｐｍのｃｉｓ−Ｄ
ＣＥが７日間で１ｐｐｍ以下にまで分解された。これに
対し、フェノール濃度１０ｐｐｍのときには７日間で４
ｐｐｍまで、フェノール濃度１０００ｐｐｍのときには
８ｐｐｍまでしか分解が進まなかった。
（ｃｉｓ−ＤＣＥ）を用い、その濃度を１３ｐｐｍとし
て実施例５と同様にして培養を行った。得られた結果を
図１４及び１５に示す。図１４に示したように、フェノ
ール濃度１００ｐｐｍのときに１３ｐｐｍのｃｉｓ−Ｄ
ＣＥが７日間で１ｐｐｍ以下にまで分解された。これに
対し、フェノール濃度１０ｐｐｍのときには７日間で４
ｐｐｍまで、フェノール濃度１０００ｐｐｍのときには
８ｐｐｍまでしか分解が進まなかった。
【００７９】一方、図１５に示したように、初期増殖特
性に関しては、フェノール濃度０、１０、１００ｐｐｍ
のものはいずれも凸型を示し、最大菌数Ｏ．Ｄ．＝１．
２〜１．３が得られ、最大となる培養日数も２日目で一
致している。１０００ｐｐｍのものは、明らかに増殖阻
害を受け、最大菌数のＯ．Ｄ．も０．７程度で３日目以
降に表われている。
性に関しては、フェノール濃度０、１０、１００ｐｐｍ
のものはいずれも凸型を示し、最大菌数Ｏ．Ｄ．＝１．
２〜１．３が得られ、最大となる培養日数も２日目で一
致している。１０００ｐｐｍのものは、明らかに増殖阻
害を受け、最大菌数のＯ．Ｄ．も０．７程度で３日目以
降に表われている。
【００８０】実施例１１ ＴＣＥ分解誘導物質としてフェノールの代わりにｐ−ク
レゾールを用いた以外は実施例５と同様にして培養を行
った。なお、ＴＣＥの濃度は１５ｐｐｍとし、ｐ−クレ
ゾールの濃度を０ｐｐｍ、１０ｐｐｍ、１００ｐｐｍ及
び１０００ｐｐｍと変化させて、ｐ−クレゾール濃度の
影響を調べた。得られた結果を図１６及び１７に示す。
レゾールを用いた以外は実施例５と同様にして培養を行
った。なお、ＴＣＥの濃度は１５ｐｐｍとし、ｐ−クレ
ゾールの濃度を０ｐｐｍ、１０ｐｐｍ、１００ｐｐｍ及
び１０００ｐｐｍと変化させて、ｐ−クレゾール濃度の
影響を調べた。得られた結果を図１６及び１７に示す。
【００８１】図１６に示したように、ｐ−クレゾール１
００ｐｐｍにおいて、ＴＣＥ分解が２日で９８％以上、
ｐ−クレゾール濃度１０ｐｐｍの場合は最大で約６２％
進んだのに対し、ｐ−クレゾール濃度１０００ｐｐｍの
場合は約１４％のＴＣＥ分解にとどまった。
００ｐｐｍにおいて、ＴＣＥ分解が２日で９８％以上、
ｐ−クレゾール濃度１０ｐｐｍの場合は最大で約６２％
進んだのに対し、ｐ−クレゾール濃度１０００ｐｐｍの
場合は約１４％のＴＣＥ分解にとどまった。
【００８２】一方、図１７に示したように、初期増殖特
性に関しては、ｐ−クレゾール濃度０、１０及び１００
ｐｐｍのものはいずれも凸型を示した。１０００ｐｐｍ
のものは明らかに増殖阻害を受けていた。
性に関しては、ｐ−クレゾール濃度０、１０及び１００
ｐｐｍのものはいずれも凸型を示した。１０００ｐｐｍ
のものは明らかに増殖阻害を受けていた。
【００８３】実施例１２ ＴＣＥ分解菌をＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ Ｐｕｔｉｄａ
ＢＨ株とした以外は実施例５と同様にして実験を行っ
た。ただし、培地はｐＨ７．６に調整したＭ９培地を用
い、ＴＣＥ濃度は５ｐｐｍに調整した。結果を図１８に
示す。
ＢＨ株とした以外は実施例５と同様にして実験を行っ
た。ただし、培地はｐＨ７．６に調整したＭ９培地を用
い、ＴＣＥ濃度は５ｐｐｍに調整した。結果を図１８に
示す。
【００８４】フェノール濃度１００ｐｐｍのものは、初
期増殖曲線は凸型を示し、この時１日で約９５％のＴＣ
Ｅ分解が進んだ。これに対し、フェノール濃度１０００
ｐｐｍのものは、明かに増殖阻害を受け、ＴＣＥもほと
んど分解されていなかった。
期増殖曲線は凸型を示し、この時１日で約９５％のＴＣ
Ｅ分解が進んだ。これに対し、フェノール濃度１０００
ｐｐｍのものは、明かに増殖阻害を受け、ＴＣＥもほと
んど分解されていなかった。
【００８５】
【発明の効果】本発明によりシロアリ腸内からのＴＣＥ
の分解能を有する微生物の取得方法が確立され、該方法
によって廃液等に含まれるＴＣＥの生物分解処理に好適
な微生物を取得することができる。
の分解能を有する微生物の取得方法が確立され、該方法
によって廃液等に含まれるＴＣＥの生物分解処理に好適
な微生物を取得することができる。
【００８６】また、該取得方法によって得た微生物を用
いることで、ＴＣＥを含む廃液等の効率良い生物処理が
可能となる。
いることで、ＴＣＥを含む廃液等の効率良い生物処理が
可能となる。
【００８７】本発明によって土壌中でのＴＣＥ化合物の
微生物の分解による実用性の高い土壌修復方法を提供す
ることができる。
微生物の分解による実用性の高い土壌修復方法を提供す
ることができる。
【００８８】更に、本発明は有機塩素化合物を分解する
微生物の単位菌体当たりの分解活性を高める誘導物質の
濃度を初期の菌増殖特性から判断し、低い菌体数でも分
解活性を高めた効率のよい生分解反応を提供することが
できる。
微生物の単位菌体当たりの分解活性を高める誘導物質の
濃度を初期の菌増殖特性から判断し、低い菌体数でも分
解活性を高めた効率のよい生分解反応を提供することが
できる。
【図１】実施例１でのＴＣＥの残存率の経日的変化を示
す図である。
す図である。
【図２】実施例２でのバイアル瓶内のＴＣＥの残存率の
経日的変化を示す図である。
経日的変化を示す図である。
【図３】実施例３でのバイアル瓶内のＴＣＥの残存率の
経日的変化を示す図である。
経日的変化を示す図である。
【図４】実施例４でのバイアル瓶内のＴＣＥの残存率の
経日的変化を示す図である。
経日的変化を示す図である。
【図５】実施例５でのＴＣＥ分解に対するフェノール濃
度の影響を示す図である。
度の影響を示す図である。
【図６】実施例５でのＫＫ０１株の増殖に対するフェノ
ール濃度の影響を示す図である。
ール濃度の影響を示す図である。
【図７】実施例６でのＴＣＥ分解に対するフェノール濃
度の影響を示す図である。
度の影響を示す図である。
【図８】実施例６でのＫＫ０１株の増殖に対するフェノ
ール濃度の影響を示す図である。
ール濃度の影響を示す図である。
【図９】実施例７でのＴＣＥ分解に対するフェノール濃
度の影響を示す図である。
度の影響を示す図である。
【図１０】実施例７でのＫＫ０１株の増殖に対するフェ
ノール濃度の影響を示す図である。
ノール濃度の影響を示す図である。
【図１１】実施例８でのＴＣＥ分解に対するフェノール
濃度の影響を示す図である。
濃度の影響を示す図である。
【図１２】実施例８での土着菌増殖に対するフェノール
濃度の影響を示す図である。
濃度の影響を示す図である。
【図１３】実施例９でのＴＣＥ分解に対するフェノール
濃度の影響を示す図である。
濃度の影響を示す図である。
【図１４】実施例１０でのｃｉｓ−ＤＣＥに対するフェ
ノール濃度の影響を示す図である。
ノール濃度の影響を示す図である。
【図１５】実施例１０でのＫＫ０１株の増殖に対するフ
ェノール濃度の影響を示す図である。
ェノール濃度の影響を示す図である。
【図１６】実施例１１でのＴＣＥ分解に対するｐ−クレ
ゾール濃度の影響を示す図である。
ゾール濃度の影響を示す図である。
【図１７】実施例１１でのＫＫ０１株の増殖に対するｐ
−クレゾール濃度の影響を示す図である。
−クレゾール濃度の影響を示す図である。
【図１８】実施例１２でのＢＨ１株増殖及びＴＣＥ分解
に対するフェノール濃度の影響を示す図である。
に対するフェノール濃度の影響を示す図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:38） (72)発明者 小松 利行 東京都大田区下丸子３丁目30番２号 キヤ ノン株式会社内
Claims (23)
- 【請求項１】 トリクロロエチエンを含む水性媒体を、
トリクロロエチレンの分解能を有するシロアリ腸内由来
の微生物と接触させて、トリクロロエチレンを分解する
過程を含むことを特徴とするトリクロロエチレンの生物
分解方法。 - 【請求項２】 前記シロアリが、タカサゴシロアリであ
る請求項１に記載の生物分解方法。 - 【請求項３】 前記微生物がシュードモナス・セパシア
である請求項１に記載の生物分解方法。 - 【請求項４】 前記シュードモナス・セパシアがシュー
ドモナス・セパシアＫＫ０１株（ＦＥＲＭ ＢＰ−４２
３５）である請求項３に記載の生物分解方法。 - 【請求項５】 シロアリ体内から分離した微生物を、ト
リクロロエチレンを唯一の炭素源として含む培地で培養
し、生育した微生物を回収する過程を有することを特徴
とするトリクロロエチレン分解能を有する微生物の取得
方法。 - 【請求項６】 シロアリ体内がシロアリ腸内部である請
求項５に記載の微生物の取得方法。 - 【請求項７】 シロアリが、タカサゴシロアリである請
求項５に記載の微生物の取得方法。 - 【請求項８】 培地が細菌用の培地である請求項５に記
載の微生物の取得方法。 - 【請求項９】 土壌中で、シロアリ腸内由来のトリクロ
ロエチレン分解能を有する微生物とトリクロロエチレン
を接触させることによりトリクロロエチレンを分解させ
て土壌を修復することを特徴とする土壌修復法。 - 【請求項１０】 前記シロアリが、タカサゴシロアリで
ある請求項９に記載の土壌修復法。 - 【請求項１１】 前記微生物がシュードモナス・セパシ
アである請求項９に記載の土壌修復法。 - 【請求項１２】 シュードモナス・セパシアが、シュー
ドモナス・セパシアＫＫ０１株（ＦＥＲＭ ＢＰ−４２
３５）である請求項１１に記載の土壌修復法。 - 【請求項１３】 誘導物質によりその分解活性が誘導さ
れる微生物を、誘導物質存在下で有機塩素化合物に接触
させて、前記有機塩素化合物を分解する生物分解方法で
あって、加える前記誘導物質の量が、下記式： 【数１】 （上記式は、前記誘導物質の存在下で、前記微生物のバ
ッチ培養を行い、前記微生物の増殖曲線がｙ＝ｆ（ｔ）
（ｙ：光学濃度（Ｏ．Ｄ．）により求められた菌数、
ｔ：培養時間）で近似された時における菌数と培養時間
の関係を示すものであり、Ｔは菌数ｙが最大となるとき
の培養時間を示す）で表われる関係を損なわない量であ
ることを特徴とする生物分解方法。 - 【請求項１４】 前記有機塩素化合物が塩素化エチレン
である請求項１３に記載の生物分解方法。 - 【請求項１５】 前記塩素化エチレンがトリクロロエチ
レン（ＴＣＥ）またはジクロロエチレン（ＤＣＥ）であ
る請求項１４に記載の生物分解方法。 - 【請求項１６】 前記誘導物質が芳香族化合物である請
求項１３に記載の生物分解方法。 - 【請求項１７】 前記芳香族化合物が、フェノール、ト
ルエン、ｏ−クレゾール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾ
ールのいずれか一つ以上を含む請求項１６に記載の生物
分解方法。 - 【請求項１８】 前記誘導物質の量が前記有機塩素化合
物の量の０．５倍以上である請求項１３に記載の生物分
解方法。 - 【請求項１９】 前記微生物がシロアリ腸内由来の塩素
化エチレン分解能を有する微生物である請求項１３に記
載の生物分解方法。 - 【請求項２０】 前記シロアリがタカサゴシロアリであ
る請求項１９に記載の生物分解方法。 - 【請求項２１】 前記微生物がシュードモナス属である
請求項１９に記載の生物分解方法。 - 【請求項２２】 前記微生物がシュードモナス・セパシ
アである請求項２１に記載の生物分解方法。 - 【請求項２３】 前記シュードモナス・セパシアがシュ
ードモナス・セパシアＫＫ０１株（ＦＥＲＭ ＢＰ−４
２３５）である請求項２２に記載の生物分解方法。
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|---|---|---|---|
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| DE1993620938 DE69320938T2 (de) | 1993-02-18 | 1993-10-19 | Verfahren zum biologischen Abbau von Trichloroethylen und Dichloroethylen und zur Bodensanierung durch Mikroorganismen Pseudomonas cepacia KKO1 (FERM BP-4235) |
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