JPH0622769A - フェノール性化合物の生物分解方法およびそれに用い得る新規菌株、ならびにフェノール性化合物分解能を有する微生物の取得方法。 - Google Patents
フェノール性化合物の生物分解方法およびそれに用い得る新規菌株、ならびにフェノール性化合物分解能を有する微生物の取得方法。Info
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- JPH0622769A JPH0622769A JP10318092A JP10318092A JPH0622769A JP H0622769 A JPH0622769 A JP H0622769A JP 10318092 A JP10318092 A JP 10318092A JP 10318092 A JP10318092 A JP 10318092A JP H0622769 A JPH0622769 A JP H0622769A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 フェノール性化合物の生物分解方法に用いる
のに好適なフェノール化合物分解能を有する微生物及び
該微生物を用いたフェノール性化合物の生物分解方法を
提供すること。 【構成】 タカサゴシロアリの腸からフェノールまたは
クレゾールを唯一の炭素源とする培地でのスクリーニン
グによって、フェノール分解能に加えて、クレゾール分
解能を有するシュードモナス・セパシアＫＫ０１株が単
離された。該単離株を用いて廃液等に含まれるフェノー
ルやクレゾールの生物分解処理が可能となる。
のに好適なフェノール化合物分解能を有する微生物及び
該微生物を用いたフェノール性化合物の生物分解方法を
提供すること。 【構成】 タカサゴシロアリの腸からフェノールまたは
クレゾールを唯一の炭素源とする培地でのスクリーニン
グによって、フェノール分解能に加えて、クレゾール分
解能を有するシュードモナス・セパシアＫＫ０１株が単
離された。該単離株を用いて廃液等に含まれるフェノー
ルやクレゾールの生物分解処理が可能となる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、シロアリ腸内由来微生
物を利用したフェノール性化合物の分解方法、該分解方
法に用い得るフェノール性化合物分解能を有する微生物
のシロアリからの取得方法およびシロアリ腸内由来のフ
ェノール性化合物分解能を有する新規菌株に関する。
物を利用したフェノール性化合物の分解方法、該分解方
法に用い得るフェノール性化合物分解能を有する微生物
のシロアリからの取得方法およびシロアリ腸内由来のフ
ェノール性化合物分解能を有する新規菌株に関する。
【０００２】
【従来の技術】近年、各種環境調査において、有害で分
解され難い芳香族化学物質が検出されるなど、これらに
よる環境汚染がクローズアップされてきており、生体系
に与えるその影響が懸念されている。従って、これら難
分解性化学物質による汚染を防止していくためには、こ
れらの物質を環境に移行させない技術の開発が急務とな
っており、例えば、排水中の難分解性有害物質を効果的
に除去する技術の確立が強く望まれている。
解され難い芳香族化学物質が検出されるなど、これらに
よる環境汚染がクローズアップされてきており、生体系
に与えるその影響が懸念されている。従って、これら難
分解性化学物質による汚染を防止していくためには、こ
れらの物質を環境に移行させない技術の開発が急務とな
っており、例えば、排水中の難分解性有害物質を効果的
に除去する技術の確立が強く望まれている。
【０００３】このような難溶解性物質として、例えばフ
ェノール、クレゾール等のフェノール性化合物が挙げら
れる。
ェノール、クレゾール等のフェノール性化合物が挙げら
れる。
【０００４】各種廃液に含まれているフェノールの分解
には、光、熱及びオゾン等を利用した化学的分解方法を
用いることができるが、処理コストや処理操作の操作性
等の面から微生物分解が注目されている。フェノール分
解能を有する微生物としては、シュードモナス（Pseudo
monas ）属、ノカルジア（Nocardia）属、バシルス（Ba
cillus）属、アシネトバクター （Acinetobacter ）
属、オーレオバシディウム（Aureobasidium ）属及びフ
サリウム（Fusarium）属等の真菌、トリコスポロン（Tr
icosporon ）属及びカンジダ（Candida ）属等の酵母が
知られている。これらの状況は「微生物による有機化合
物の変換」（学会出版センター）に詳しい。シュードモ
ナス属に属する細菌としては、特にシュードモナス・プ
チダ（Ps.putida）やシュードモナス・ポーシモビリス
（Ps. paucimobilis）を挙げることができる。
には、光、熱及びオゾン等を利用した化学的分解方法を
用いることができるが、処理コストや処理操作の操作性
等の面から微生物分解が注目されている。フェノール分
解能を有する微生物としては、シュードモナス（Pseudo
monas ）属、ノカルジア（Nocardia）属、バシルス（Ba
cillus）属、アシネトバクター （Acinetobacter ）
属、オーレオバシディウム（Aureobasidium ）属及びフ
サリウム（Fusarium）属等の真菌、トリコスポロン（Tr
icosporon ）属及びカンジダ（Candida ）属等の酵母が
知られている。これらの状況は「微生物による有機化合
物の変換」（学会出版センター）に詳しい。シュードモ
ナス属に属する細菌としては、特にシュードモナス・プ
チダ（Ps.putida）やシュードモナス・ポーシモビリス
（Ps. paucimobilis）を挙げることができる。
【０００５】クレゾールは、石炭ガス化工場廃液、ガソ
リンで汚染された地下水、石油精製工場廃液等に含まれ
ており、その分解・浄化が環境保全の視点から重要な課
題となってきている。クレゾールの分解にも、光、熱及
びオゾン等を利用した化学的分解方法が利用できるが、
処理コストや処理操作の操作性等の面からここでも微生
物分解が注目されている。しかしながら、クレゾール分
解能を有する微生物で単離された例は皆無に近く、クレ
ゾール耐性株としてもシュードモナスＱＴ３１株（Ｃ．
マスキューら、バイオテクノロジー・レターズ、第９
巻、第９号、６５５〜６６０頁、１９８７年）などシュ
ードモナス属に属する細菌等がわずかに報告されるにと
どまっている。
リンで汚染された地下水、石油精製工場廃液等に含まれ
ており、その分解・浄化が環境保全の視点から重要な課
題となってきている。クレゾールの分解にも、光、熱及
びオゾン等を利用した化学的分解方法が利用できるが、
処理コストや処理操作の操作性等の面からここでも微生
物分解が注目されている。しかしながら、クレゾール分
解能を有する微生物で単離された例は皆無に近く、クレ
ゾール耐性株としてもシュードモナスＱＴ３１株（Ｃ．
マスキューら、バイオテクノロジー・レターズ、第９
巻、第９号、６５５〜６６０頁、１９８７年）などシュ
ードモナス属に属する細菌等がわずかに報告されるにと
どまっている。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】フェノール性化合物の
分解能を有する微生物としては上記のものが知られてい
るが、微生物を用いたフェノール性化合物の分解方法に
用いる場合の実用上の諸条件を満たし、なおかつ十分な
分解能を持つという観点で眺めてみると現在既知の菌種
の範囲では十分なものは見当たらない。従って、実用上
要求される特性を満足する菌種の獲得が必要となってい
る。
分解能を有する微生物としては上記のものが知られてい
るが、微生物を用いたフェノール性化合物の分解方法に
用いる場合の実用上の諸条件を満たし、なおかつ十分な
分解能を持つという観点で眺めてみると現在既知の菌種
の範囲では十分なものは見当たらない。従って、実用上
要求される特性を満足する菌種の獲得が必要となってい
る。
【０００７】このような菌種としては、十分なフェノー
ル性化合物の分解能を有することは無論であるが、既知
菌種と生育条件等が異なり、その応用範囲が拡大できる
もの、あるいはその利用形態が豊富となるものが挙げら
れる。そのような付加的要件としては、例えば薬剤耐
性、糖の利用性等を挙げることができる。
ル性化合物の分解能を有することは無論であるが、既知
菌種と生育条件等が異なり、その応用範囲が拡大できる
もの、あるいはその利用形態が豊富となるものが挙げら
れる。そのような付加的要件としては、例えば薬剤耐
性、糖の利用性等を挙げることができる。
【０００８】フェノールやクレゾールを含む廃液の処理
を想定した場合、用いる微生物は、フェノール性化合物
の分解能もさることながら、廃液中でダメージを受け難
く、廃液という劣悪な環境下でも生育できることが要求
され、これらの要求性能の指標として、例えば薬剤耐
性、糖の利用性が利用できる。すなわち、多くの抗生物
質に対して耐性を有し、かつ各種の糖に対して資化能力
を持ち合わせている方が劣悪環境下においても良好に生
育する可能性が高い。
を想定した場合、用いる微生物は、フェノール性化合物
の分解能もさることながら、廃液中でダメージを受け難
く、廃液という劣悪な環境下でも生育できることが要求
され、これらの要求性能の指標として、例えば薬剤耐
性、糖の利用性が利用できる。すなわち、多くの抗生物
質に対して耐性を有し、かつ各種の糖に対して資化能力
を持ち合わせている方が劣悪環境下においても良好に生
育する可能性が高い。
【０００９】このようにフェノール性化合物の分解能を
有し、かつ従来既知の菌種よりも実用上有利な特性を有
する菌種が強く求められている。
有し、かつ従来既知の菌種よりも実用上有利な特性を有
する菌種が強く求められている。
【００１０】本発明の目的は、実用性の高い微生物を利
用したフェノール性化合物の分解方法を提供することに
ある。本発明の他の目的は、フェノール化合物の分解に
有用な微生物の取得方法を提供することにある。本発明
の他の目的は、フェノール性化合物の分解能を有し、か
つ従来既知の菌種よりも実用上有利な特性を有する新規
菌株を提供することにある。
用したフェノール性化合物の分解方法を提供することに
ある。本発明の他の目的は、フェノール化合物の分解に
有用な微生物の取得方法を提供することにある。本発明
の他の目的は、フェノール性化合物の分解能を有し、か
つ従来既知の菌種よりも実用上有利な特性を有する新規
菌株を提供することにある。
【００１１】
【課題を解決するための手段】本発明のフェノール性化
合物の分解方法は、フェノール性化合物を含む水性液体
を、フェノール性化合物の分解能を有するシロアリ腸内
由来の微生物と接触させて、該フェノール性化合物を分
解する過程を有することを特徴とする。
合物の分解方法は、フェノール性化合物を含む水性液体
を、フェノール性化合物の分解能を有するシロアリ腸内
由来の微生物と接触させて、該フェノール性化合物を分
解する過程を有することを特徴とする。
【００１２】本発明の分解方法に用いるシロアリ腸内に
由来する微生物は、例えば、シロアリ表面を滅菌的に洗
浄し、腸を摘出して適当な溶液中でこれをすりつぶし、
得られた腸破砕物を含む混合物の一部を、分解しようと
するフェノール化合物を唯一の炭素源とする培地に加え
て培養し、生育してくる株を単離することによって得る
ことができる。シロアリとしては、各種シロアリを用い
ることができ、テングシロアリ属（Nasutiterminae）の
もの、例えばタカサゴシロアリ（Nasutitermestakasago
ensis）、Nasutitermes ephratae、 Nasutitermes exit
iosus 、Nasutitermes nigriceps等が好ましい。なかで
も、タカサゴシロアリが特に好ましい。
由来する微生物は、例えば、シロアリ表面を滅菌的に洗
浄し、腸を摘出して適当な溶液中でこれをすりつぶし、
得られた腸破砕物を含む混合物の一部を、分解しようと
するフェノール化合物を唯一の炭素源とする培地に加え
て培養し、生育してくる株を単離することによって得る
ことができる。シロアリとしては、各種シロアリを用い
ることができ、テングシロアリ属（Nasutiterminae）の
もの、例えばタカサゴシロアリ（Nasutitermestakasago
ensis）、Nasutitermes ephratae、 Nasutitermes exit
iosus 、Nasutitermes nigriceps等が好ましい。なかで
も、タカサゴシロアリが特に好ましい。
【００１３】フェノール性化合物分解能を有する微生物
のスクリーニング用の培地としては、唯一の炭素源とし
てのフェノール性化合物に、必要に応じて各種窒素源、
無機塩類、生育因子などを更に加えたものが利用でき
る。例えば、シュードモナス属の細菌の場合は、窒素源
として酵母エキストラクト、ペプトンなどを単独で、ま
たは組み合わせて用いることができ、無機塩類として
は、リン酸水素第一カリウム、塩化アンモニウム等を利
用することができる。フェノール性化合物の濃度は適宜
選択することができるが、例えば、０．０２〜０．０７
％とすることができる。培養は、分離すべき微生物の種
類に応じた条件で行えば良い。
のスクリーニング用の培地としては、唯一の炭素源とし
てのフェノール性化合物に、必要に応じて各種窒素源、
無機塩類、生育因子などを更に加えたものが利用でき
る。例えば、シュードモナス属の細菌の場合は、窒素源
として酵母エキストラクト、ペプトンなどを単独で、ま
たは組み合わせて用いることができ、無機塩類として
は、リン酸水素第一カリウム、塩化アンモニウム等を利
用することができる。フェノール性化合物の濃度は適宜
選択することができるが、例えば、０．０２〜０．０７
％とすることができる。培養は、分離すべき微生物の種
類に応じた条件で行えば良い。
【００１４】こうして分離された微生物を用いてフェノ
ール性化合物の分解処理を行うことができる。分解処理
にはフェノール性化合物の分解能を有する微生物の１
種、またはその２種以上の混合系を用いることができ
る。混合系を用いる場合には、組成が分かっているも
の、あるいは組成は不明であるがフェノール性化合物の
分解性を示すものが利用できる。従って、上記のスクリ
ーニングにおける培養に複数種の微生物が含まれている
場合でも、それぞれを単離することなくそのまま混合系
として利用できる。単離株しとしては、シュードモナス
・セパシア（Ps. cepacia ）ＫＫ０１株等を利用するこ
とができる。なお、シロアリ腸内から分離したフェノー
ル性化合物の分解能を有する微生物を自然に、または人
工的に変異させた変異体も本発明に用いることができ
る。
ール性化合物の分解処理を行うことができる。分解処理
にはフェノール性化合物の分解能を有する微生物の１
種、またはその２種以上の混合系を用いることができ
る。混合系を用いる場合には、組成が分かっているも
の、あるいは組成は不明であるがフェノール性化合物の
分解性を示すものが利用できる。従って、上記のスクリ
ーニングにおける培養に複数種の微生物が含まれている
場合でも、それぞれを単離することなくそのまま混合系
として利用できる。単離株しとしては、シュードモナス
・セパシア（Ps. cepacia ）ＫＫ０１株等を利用するこ
とができる。なお、シロアリ腸内から分離したフェノー
ル性化合物の分解能を有する微生物を自然に、または人
工的に変異させた変異体も本発明に用いることができ
る。
【００１５】ＫＫ０１株は抗生物質耐性を有し、また後
述の実施例において示されているように、利用できる糖
の範囲が広く、更にフェノール分解能に加えてクレゾー
ルの分解能を有するものであり、フェノール性化合物の
生物分解処理に実用上極めて有用である。
述の実施例において示されているように、利用できる糖
の範囲が広く、更にフェノール分解能に加えてクレゾー
ルの分解能を有するものであり、フェノール性化合物の
生物分解処理に実用上極めて有用である。
【００１６】本発明におけるフェノール性化合物の分解
処理は、廃液などの被処理物中のフェノール性化合物と
上記のシロアリ腸内由来の微生物とを接触させることに
よっておこなうことができる。微生物と被処理物との接
触は、分解すべきフェノール性化合物を含む水性液体中
で該微生物を培養する、あるいは該水性液体を該微生物
の培養系に添加する等の方法によって行うことができ、
バッチ法、半連続法、連続法等種々の方式を用いて実施
できる。該微生物は、非固定状態で、あるいは適当な担
体に固定化して用いることができる。廃液等の非処理物
は、必要に応じて各種前処理を行ってもよい。例えば、
フェノール性化合物の濃度、ｐＨ、各種栄養物質の補充
等を行っても良い。フェノール性化合物の分解処理領域
内での濃度は、例えば酵母エキストラクト等の他の栄養
物質の存在下で、０．２％程度以下に調整するとよい。
処理は、廃液などの被処理物中のフェノール性化合物と
上記のシロアリ腸内由来の微生物とを接触させることに
よっておこなうことができる。微生物と被処理物との接
触は、分解すべきフェノール性化合物を含む水性液体中
で該微生物を培養する、あるいは該水性液体を該微生物
の培養系に添加する等の方法によって行うことができ、
バッチ法、半連続法、連続法等種々の方式を用いて実施
できる。該微生物は、非固定状態で、あるいは適当な担
体に固定化して用いることができる。廃液等の非処理物
は、必要に応じて各種前処理を行ってもよい。例えば、
フェノール性化合物の濃度、ｐＨ、各種栄養物質の補充
等を行っても良い。フェノール性化合物の分解処理領域
内での濃度は、例えば酵母エキストラクト等の他の栄養
物質の存在下で、０．２％程度以下に調整するとよい。
【００１７】
【実施例】以下実施例により本発明を更に詳細に説明す
る。なお、各実施例で用いたＭ９培地は下記の組成を有
するものである。 Ｍ９培地組成（１リットル中）； ＮａＨＰＯ4 ６．２ｇ ＫＨ2 ＰＯ4 ３．０ｇ ＮａＣｌ ０．５ｇ ＮＨ4 Ｃｌ １．０ｇ （ｐＨ７．０） 実施例１ （フェノールによるスクリーニング）タカサゴシロアリ
のハタラキシロアリを１０匹シャーレにとり、エチルア
ルコール（９５％）をこれに注ぎシロアリ表面を殺菌し
た。次に、０．０５％のフェノールを含有するＭ９培地
でシロアリを２回洗い、その表面からエチルアルコール
を除去した。洗浄後、シロアリの腸をピンセットで摘み
出し、それを０．０５％のフェノールを含有するＭ９培
地中ですり潰し、腸破砕物を含む液状混合物を得た。こ
の混合物の一部を、０．０５％フェノール及び０．０５
％酵母エキストラクトを含有するＭ９培地に接種し、３
０℃で好気条件下で培養した。培地中のフェノール量の
変化を経日的に求めた。培地中のフェノール量の変化
は、培地の一部をサンプリングし、０．２２μｍのフィ
ルターに通し、得られた濾液のフェノール濃度を分光光
度計を用いて２７０ｎｍ近傍の光吸収で測定し、フェノ
ールの残存率の変化として表した。得られた結果を図１
に示す。図１の結果からシロアリ腸内にフェノール資化
性の微生物が存在することがわかった。
る。なお、各実施例で用いたＭ９培地は下記の組成を有
するものである。 Ｍ９培地組成（１リットル中）； ＮａＨＰＯ4 ６．２ｇ ＫＨ2 ＰＯ4 ３．０ｇ ＮａＣｌ ０．５ｇ ＮＨ4 Ｃｌ １．０ｇ （ｐＨ７．０） 実施例１ （フェノールによるスクリーニング）タカサゴシロアリ
のハタラキシロアリを１０匹シャーレにとり、エチルア
ルコール（９５％）をこれに注ぎシロアリ表面を殺菌し
た。次に、０．０５％のフェノールを含有するＭ９培地
でシロアリを２回洗い、その表面からエチルアルコール
を除去した。洗浄後、シロアリの腸をピンセットで摘み
出し、それを０．０５％のフェノールを含有するＭ９培
地中ですり潰し、腸破砕物を含む液状混合物を得た。こ
の混合物の一部を、０．０５％フェノール及び０．０５
％酵母エキストラクトを含有するＭ９培地に接種し、３
０℃で好気条件下で培養した。培地中のフェノール量の
変化を経日的に求めた。培地中のフェノール量の変化
は、培地の一部をサンプリングし、０．２２μｍのフィ
ルターに通し、得られた濾液のフェノール濃度を分光光
度計を用いて２７０ｎｍ近傍の光吸収で測定し、フェノ
ールの残存率の変化として表した。得られた結果を図１
に示す。図１の結果からシロアリ腸内にフェノール資化
性の微生物が存在することがわかった。
【００１８】実施例２ （ｏ−クレゾールによるスクリーニング）タカサゴシロ
アリのハタラキシロアリを１０匹シャーレにとり、エチ
ルアルコール（９５％）をこれに注ぎシロアリ表面を殺
菌した。次に、０．０２％のｏ−クレゾールを含有する
Ｍ９培地でシロアリを２回洗い、その表面からエチルア
ルコールを除去した。洗浄後、シロアリの腸をピンセッ
トで摘み出し、それを．０．０２％のｏ−クレゾールを
含有するＭ９培地中で摘出した腸をすり潰し、腸破砕物
を含む液状混合物を得た。この混合物の一部を、０．０
２％のｏ−クレゾール及び０．０５％酵母エキストラク
トを含有するＭ９培地に接種し、３０℃で好気条件下で
１０日間培養した。培養前後での培地中のｏ−クレゾー
ル量の変化を、接種前の培地と培養後の培地の紫外部吸
収スペクトルを測定することによって求めた。なお、培
養後の培地は、０．２２μフィルターに通し、得られた
濾液の紫外部吸収スペクトルを測定した。得られた結果
を図２に示す。図２の結果からシロアリ腸内にｏ−クレ
ゾール資化性の微生物が存在することがわかった。
アリのハタラキシロアリを１０匹シャーレにとり、エチ
ルアルコール（９５％）をこれに注ぎシロアリ表面を殺
菌した。次に、０．０２％のｏ−クレゾールを含有する
Ｍ９培地でシロアリを２回洗い、その表面からエチルア
ルコールを除去した。洗浄後、シロアリの腸をピンセッ
トで摘み出し、それを．０．０２％のｏ−クレゾールを
含有するＭ９培地中で摘出した腸をすり潰し、腸破砕物
を含む液状混合物を得た。この混合物の一部を、０．０
２％のｏ−クレゾール及び０．０５％酵母エキストラク
トを含有するＭ９培地に接種し、３０℃で好気条件下で
１０日間培養した。培養前後での培地中のｏ−クレゾー
ル量の変化を、接種前の培地と培養後の培地の紫外部吸
収スペクトルを測定することによって求めた。なお、培
養後の培地は、０．２２μフィルターに通し、得られた
濾液の紫外部吸収スペクトルを測定した。得られた結果
を図２に示す。図２の結果からシロアリ腸内にｏ−クレ
ゾール資化性の微生物が存在することがわかった。
【００１９】実施例３ （ｍ−クレゾールによるスクリーニング）ｏ−クレゾー
ルの代わりにｍ−クレゾールを用いる以外は実施例２と
同様の操作を行ったところ、図３に示すように培地中の
ｍ−クレゾールの減少が認められ、シロアリ腸内にｍ−
クレゾール資化性の微生物が存在することがわかった。
ルの代わりにｍ−クレゾールを用いる以外は実施例２と
同様の操作を行ったところ、図３に示すように培地中の
ｍ−クレゾールの減少が認められ、シロアリ腸内にｍ−
クレゾール資化性の微生物が存在することがわかった。
【００２０】実施例４ （ｐ−クレゾールによるスクリーニング）ｏ−クレゾー
ルの代わりにｐ−クレゾールを用いる以外は実施例２と
同様の操作を行ったところ、図４に示すように培地中の
ｐ−クレゾールの減少が認められ、シロアリ腸内にｐ−
クレゾール資化性の微生物が存在することがわかった。
ルの代わりにｐ−クレゾールを用いる以外は実施例２と
同様の操作を行ったところ、図４に示すように培地中の
ｐ−クレゾールの減少が認められ、シロアリ腸内にｐ−
クレゾール資化性の微生物が存在することがわかった。
【００２１】実施例５ （フェノールを用いた単離株の取得）実施例１のＭ９培
地（０．０５％フェノール及び０．０５％酵母エキスト
ラクトを更に含有する）での培養により得られた培地
（増殖菌体を含む）を、フェノール含有Ｍ９寒天培地
（０．０５％フェノール及び１．２％寒天を含む）の表
面に塗布し、３０℃で２日間培養した。寒天培地上に良
好に生育してきたコロニーを単離株として得た。単離株
の１つについてその菌学的性質を調べたところ下記の結
果が得られ、この単離株はシュードモナス・セパシアに
属するものであるとの結論に至った。 Ａ．形態的性状 （１）グラム染色：陰性 （２）菌の大きさ及び形：長さ１．０〜２．０μｍ、幅
０．５μｍ前後の桿菌 （３）運動性：あり Ｂ．各種培地における生育状況
地（０．０５％フェノール及び０．０５％酵母エキスト
ラクトを更に含有する）での培養により得られた培地
（増殖菌体を含む）を、フェノール含有Ｍ９寒天培地
（０．０５％フェノール及び１．２％寒天を含む）の表
面に塗布し、３０℃で２日間培養した。寒天培地上に良
好に生育してきたコロニーを単離株として得た。単離株
の１つについてその菌学的性質を調べたところ下記の結
果が得られ、この単離株はシュードモナス・セパシアに
属するものであるとの結論に至った。 Ａ．形態的性状 （１）グラム染色：陰性 （２）菌の大きさ及び形：長さ１．０〜２．０μｍ、幅
０．５μｍ前後の桿菌 （３）運動性：あり Ｂ．各種培地における生育状況
【００２２】
【表１】 Ｃ．生理的性質 （１）好気性、嫌気性の区別：偏性好気性 （２）糖の分解様式： 酸化型 （３）オキシダーゼの生成： ＋ （４）硝酸銀の還元： ＋ （５）硫化水素の生成： − （６）インドールの生成： − （７）ウレアーゼの生成： − （８）ゼラチンの液化： − （９）アルギニンの加水分解：− （１０）リジンの脱炭酸： ＋ （１１）オルニチンの脱炭酸：− （１２）クエン酸の利用： ＋ （１３）メチルカルビノールアセチル反応（ＶＰ反
応）：− （１４）トリプトファンデアミナーゼの検出：− （１５）ＯＮＰＧ： − （１６）炭水化物類の利用性： ブドウ糖： ＋ 果糖： ＋ 麦芽糖： ＋ ガラクトース：＋ キシロース： ＋ マンニット： ± 白糖： − 乳糖： ＋ エスクリン： − イノシット： − ソルビット： − ラムノース： − メリビオース：− アミグダリン：− Ｌ−（＋）−アラビノース：＋ このＫＫ０１株を０．０５％フェノール及び０．０５％
酵母エキストラクトを含むＭ９培地（５ｍｌ）中で３０
℃で培養し、所定の日数が経過したところで、菌体を培
地から０．２２μｍのフィルターに通して除去し、得ら
れた濾液のフェノール量を、濾液のフェノール濃度を分
光光度計を用いて２７０ｎｍ近傍の光吸収を測定するこ
とで定量した。培養日数を変化させることで、フェノー
ルの培地からの除去率（残存率）を実施例１と同様に経
日的に求めた。結果を図５に示す。
応）：− （１４）トリプトファンデアミナーゼの検出：− （１５）ＯＮＰＧ： − （１６）炭水化物類の利用性： ブドウ糖： ＋ 果糖： ＋ 麦芽糖： ＋ ガラクトース：＋ キシロース： ＋ マンニット： ± 白糖： − 乳糖： ＋ エスクリン： − イノシット： − ソルビット： − ラムノース： − メリビオース：− アミグダリン：− Ｌ−（＋）−アラビノース：＋ このＫＫ０１株を０．０５％フェノール及び０．０５％
酵母エキストラクトを含むＭ９培地（５ｍｌ）中で３０
℃で培養し、所定の日数が経過したところで、菌体を培
地から０．２２μｍのフィルターに通して除去し、得ら
れた濾液のフェノール量を、濾液のフェノール濃度を分
光光度計を用いて２７０ｎｍ近傍の光吸収を測定するこ
とで定量した。培養日数を変化させることで、フェノー
ルの培地からの除去率（残存率）を実施例１と同様に経
日的に求めた。結果を図５に示す。
【００２３】図５の結果から明らかなように本株は卓越
したフェノール分解能をもあわせ持っている。従来既知
のシュードモナス・セパシアでは、フェノール分解能を
有するものは存在しないことから、この菌株は新菌株で
あると認定し、ＫＫ０１株と命名して、通商産業省工業
技術院微生物工業技術研究所に寄託した（寄託日：平成
４年３月１１日、寄託番号ＦＥＲＭ Ｐ−１２８６
９）。
したフェノール分解能をもあわせ持っている。従来既知
のシュードモナス・セパシアでは、フェノール分解能を
有するものは存在しないことから、この菌株は新菌株で
あると認定し、ＫＫ０１株と命名して、通商産業省工業
技術院微生物工業技術研究所に寄託した（寄託日：平成
４年３月１１日、寄託番号ＦＥＲＭ Ｐ−１２８６
９）。
【００２４】実施例６ （ｏ−クレゾールを用いた単離株の取得）実施例２にお
ける０．０２％ｏ−クレゾール及び０．０５％酵母エキ
ストラクトを含むＭ９培地での培養により得られた培地
（増殖菌体を含む）を、ｏ−クレゾール含有Ｍ９寒天培
地（０．０２％ｏ−クレゾール及び１．２％寒天を含
む）の表面に塗布し、３０℃で５日間培養した。寒天培
地上に良好に生育してきたコロニーを単離株として得
た。単離株の１つについてその菌学的性質を調べたとこ
ろ実施例５で得たＫＫ０１株と同様の結果が得られ、こ
の単離株はＫＫ０１株と同じものと同定した。
ける０．０２％ｏ−クレゾール及び０．０５％酵母エキ
ストラクトを含むＭ９培地での培養により得られた培地
（増殖菌体を含む）を、ｏ−クレゾール含有Ｍ９寒天培
地（０．０２％ｏ−クレゾール及び１．２％寒天を含
む）の表面に塗布し、３０℃で５日間培養した。寒天培
地上に良好に生育してきたコロニーを単離株として得
た。単離株の１つについてその菌学的性質を調べたとこ
ろ実施例５で得たＫＫ０１株と同様の結果が得られ、こ
の単離株はＫＫ０１株と同じものと同定した。
【００２５】実施例７ （ｍ−クレゾールを用いた単離株の取得）実施例３にお
ける０．０２％ｍ−クレゾール及び０．０５％酵母エキ
ストラクトを含むＭ９培地での培養により得られた培地
（増殖菌体を含む）を、ｍ−クレゾール含有Ｍ９寒天培
地（０．０２％ｍ−クレゾール及び１．２％寒天を含
む）の表面に塗布し、３０℃で５日間培養した。寒天培
地上に良好に生育してきたコロニーを単離株として得
た。単離株の１つについてその菌学的性質を調べたとこ
ろ実施例５で得たＫＫ０１株と同様の結果が得られ、こ
の単離株はＫＫ０１株と同じものと同定した。
ける０．０２％ｍ−クレゾール及び０．０５％酵母エキ
ストラクトを含むＭ９培地での培養により得られた培地
（増殖菌体を含む）を、ｍ−クレゾール含有Ｍ９寒天培
地（０．０２％ｍ−クレゾール及び１．２％寒天を含
む）の表面に塗布し、３０℃で５日間培養した。寒天培
地上に良好に生育してきたコロニーを単離株として得
た。単離株の１つについてその菌学的性質を調べたとこ
ろ実施例５で得たＫＫ０１株と同様の結果が得られ、こ
の単離株はＫＫ０１株と同じものと同定した。
【００２６】実施例８ （ｐ−クレゾールを用いた単離株の取得）実施例４にお
ける０．０２％ｐ−クレゾール及び０．０５％酵母エキ
ストラクトを含むＭ９培地での培養により得られた培地
（増殖菌体を含む）を、ｐ−クレゾール含有Ｍ９寒天培
地（０．０２％ｐ−クレゾール及び１．２％寒天を含
む）の表面に塗布し、３０℃で５日間培養した。寒天培
地上に良好に生育してきたコロニーを単離株として得
た。単離株の１つについてその菌学的性質を調べたとこ
ろ実施例５で得たＫＫ０１株と同様の結果が得られ、こ
の単離株はＫＫ０１株と同じものと同定した。
ける０．０２％ｐ−クレゾール及び０．０５％酵母エキ
ストラクトを含むＭ９培地での培養により得られた培地
（増殖菌体を含む）を、ｐ−クレゾール含有Ｍ９寒天培
地（０．０２％ｐ−クレゾール及び１．２％寒天を含
む）の表面に塗布し、３０℃で５日間培養した。寒天培
地上に良好に生育してきたコロニーを単離株として得
た。単離株の１つについてその菌学的性質を調べたとこ
ろ実施例５で得たＫＫ０１株と同様の結果が得られ、こ
の単離株はＫＫ０１株と同じものと同定した。
【００２７】実施例９ （クレゾール除去率の測定）実施例６で得たＫＫ０１株
を、０．０２％ｏ−クレゾール及び０．０５％酵母エキ
ストラクトを含むＭ９培地（５ｍｌ）中で３０℃で７日
間培養し、培養前後での培地中のｏ−クレゾール量の変
化（除去率）を、接種前の培地と培養後の培地の紫外部
吸収スペクトルを測定することによって求めた。なお、
培養後の培地は、０．２２μフィルターに通し、得られ
た濾液の紫外部吸収スペクトルを測定した。結果を図６
に示す。
を、０．０２％ｏ−クレゾール及び０．０５％酵母エキ
ストラクトを含むＭ９培地（５ｍｌ）中で３０℃で７日
間培養し、培養前後での培地中のｏ−クレゾール量の変
化（除去率）を、接種前の培地と培養後の培地の紫外部
吸収スペクトルを測定することによって求めた。なお、
培養後の培地は、０．２２μフィルターに通し、得られ
た濾液の紫外部吸収スペクトルを測定した。結果を図６
に示す。
【００２８】更に、ｏ−クレゾールの代わりにｍ−クレ
ゾール及びｐ−クレゾールをそれぞれ個々に用いて上記
と同様にしてｍ−クレゾール及びｐ−クレゾールの除去
率を測定した。得られた結果を図７、８に示す。図６〜
８の結果から明らかなように本株はフェノール分解能と
ともにクレゾール分解能をも有するものであり、この性
質は従来既知のシュードモナス・セパシアにはみられな
いものである。
ゾール及びｐ−クレゾールをそれぞれ個々に用いて上記
と同様にしてｍ−クレゾール及びｐ−クレゾールの除去
率を測定した。得られた結果を図７、８に示す。図６〜
８の結果から明らかなように本株はフェノール分解能と
ともにクレゾール分解能をも有するものであり、この性
質は従来既知のシュードモナス・セパシアにはみられな
いものである。
【００２９】なお、ＫＫ０１株の培養は、シュードモナ
ス属の細菌用に通常用いられている培地で行うことがで
き、炭素源としては、フェノール、クレゾール等のフェ
ノール性化合物単独でも十分生育するが、グルコース等
を適宜用いることができる。また、窒素源としては、例
えば酵母エキストラクト、ペプトンなどを単独でまたは
組み合わせて用いることができる。その他必要に応じて
リン酸第一カリウム、塩化アンモニウム等を添加するこ
とができる。培養は好気条件下で行うことができ、液体
培養でも固体培養でもよい。培養温度としては３０℃が
望ましい。
ス属の細菌用に通常用いられている培地で行うことがで
き、炭素源としては、フェノール、クレゾール等のフェ
ノール性化合物単独でも十分生育するが、グルコース等
を適宜用いることができる。また、窒素源としては、例
えば酵母エキストラクト、ペプトンなどを単独でまたは
組み合わせて用いることができる。その他必要に応じて
リン酸第一カリウム、塩化アンモニウム等を添加するこ
とができる。培養は好気条件下で行うことができ、液体
培養でも固体培養でもよい。培養温度としては３０℃が
望ましい。
【００３０】実施例１０ 下記に示す組成の合成排液を人工的につくり、これにＫ
Ｋ０１株を接種し、３０℃で培養を行なった。培地中の
フェノール化合物の量の経時変化を上記各実施例と同様
にして紫外部の吸収スペクトルを測定することで求め
た。 合成排液組成； フェノール・・・・・・・ ２００ｍｇ ｏ−クレゾール・・・ ５０ｍｇ ｍ−クレゾール・・・ ４０ｍｇ ｐ−クレゾール・・・ ５０ｍｇ ＮＨ4 Ｃｌ・・・・・・・ ２００ｍｇ ＫＨ2 ＰＯ4 ・・・・・ ２７２ｍｇ Ｎａ2 ＨＰＯ4 ・・・ ２８４ｍｇ 水・・・・・・・・・・・・・・・ １リットル ｐＨ（７．０） 得られた結果を図９に示す。図９の結果から、ＫＫ０１
株はフェノール及びクレゾールを含む合成排液を分解す
る能力を有することがわかった。
Ｋ０１株を接種し、３０℃で培養を行なった。培地中の
フェノール化合物の量の経時変化を上記各実施例と同様
にして紫外部の吸収スペクトルを測定することで求め
た。 合成排液組成； フェノール・・・・・・・ ２００ｍｇ ｏ−クレゾール・・・ ５０ｍｇ ｍ−クレゾール・・・ ４０ｍｇ ｐ−クレゾール・・・ ５０ｍｇ ＮＨ4 Ｃｌ・・・・・・・ ２００ｍｇ ＫＨ2 ＰＯ4 ・・・・・ ２７２ｍｇ Ｎａ2 ＨＰＯ4 ・・・ ２８４ｍｇ 水・・・・・・・・・・・・・・・ １リットル ｐＨ（７．０） 得られた結果を図９に示す。図９の結果から、ＫＫ０１
株はフェノール及びクレゾールを含む合成排液を分解す
る能力を有することがわかった。
【００３１】
【発明の効果】本発明によりシロアリ腸内からのフェノ
ール性化合物の分解能を有する微生物の取得方法が確立
され、該方法によって廃液等に含まれるフェノール性の
生物分解処理に好適な微生物を取得することができる。
ール性化合物の分解能を有する微生物の取得方法が確立
され、該方法によって廃液等に含まれるフェノール性の
生物分解処理に好適な微生物を取得することができる。
【００３２】また、該取得方法によって得た微生物を用
いることで、フェノール、クレゾール等のフェノール性
化合物を含む廃液等の効率良い生物処理が可能となる。
特に、クレゾール分解能を有する細菌はこれまで報告が
なく、本発明によって廃液等におけるクレゾールの生物
分解が可能となった。
いることで、フェノール、クレゾール等のフェノール性
化合物を含む廃液等の効率良い生物処理が可能となる。
特に、クレゾール分解能を有する細菌はこれまで報告が
なく、本発明によって廃液等におけるクレゾールの生物
分解が可能となった。
【図１】実施例１における培養での培地中のフェノール
残存率の経日的変化を示すグラフである。
残存率の経日的変化を示すグラフである。
【図２】実施例２における培養前後での培養液の紫外部
吸収スペクトルの変化を示すグラフである。
吸収スペクトルの変化を示すグラフである。
【図３】実施例３における培養前後での培養液の紫外部
吸収スペクトルの変化を示すグラフである。
吸収スペクトルの変化を示すグラフである。
【図４】実施例４における培養前後での培養液の紫外部
吸収スペクトルの変化を示すグラフである。
吸収スペクトルの変化を示すグラフである。
【図５】実施例５における培養での培地中のフェノール
残存率の経日的変化を示すグラフである。
残存率の経日的変化を示すグラフである。
【図６】実施例９における培養前後での培養液の紫外部
吸収スペクトルの変化を示すグラフである。
吸収スペクトルの変化を示すグラフである。
【図７】実施例９における培養前後での培養液の紫外部
吸収スペクトルの変化を示すグラフである。
吸収スペクトルの変化を示すグラフである。
【図８】実施例９における培養前後での培養液の紫外部
吸収スペクトルの変化を示すグラフである。
吸収スペクトルの変化を示すグラフである。
【図９】実施例１０における排液中のフェノール化合物
の残存率の経日的変化を示すグラフである。
の残存率の経日的変化を示すグラフである。
Claims (10)
- 【請求項１】 フェノール性化合物を含む水性液体を、
フェノール性化合物の分解能を有するシロアリ腸内由来
の微生物と接触させて、該フェノール性化合物を分解す
る過程を有することを特徴とするフェノール性化合物の
生物分解方法。 - 【請求項２】 シロアリがタカサゴシロアリである請求
項１に記載の分解方法。 - 【請求項３】 微生物が細菌である請求項１または２に
記載の分解方法。 - 【請求項４】 細菌がシュードモナス・セパシアである
請求項３に記載の分解方法。 - 【請求項５】 フェノール性化合物が、フェノール、ｏ
−クレゾール、ｐ−クレゾール及びｍ−クレゾールから
なる群より選択された１以上である請求項１〜４のいず
れかに記載の分解方法。 - 【請求項６】 シロアリ腸内から分離した微生物を、フ
ェノール性化合物を唯一の炭素源として含む培地で培養
し、生育した微生物を回収する過程を有することを特徴
とするフェノール性化合物分解能を有する微生物の取得
方法。 - 【請求項７】 シロアリがタカサゴシロアリである請求
項６に記載の取得方法。 - 【請求項８】 培地が細菌用である請求項６または７に
記載の取得方法。 - 【請求項９】 フェノール性化合物が、フェノール、ｏ
−クレゾール、ｐ−クレゾール及びｍ−クレゾールから
なる群より選択された１以上である請求項６〜８のいず
れかに記載の分解方法。 - 【請求項１０】 シロアリ腸内由来のフェノール性化合
物分解能を有するシュードモナス・セパシア単離株。
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10318092A JPH0824589B2 (ja) | 1992-04-22 | 1992-04-22 | フェノール性化合物の生物分解方法およびそれに用い得る新規菌株 |
| EP19930106499 EP0567102B1 (en) | 1992-04-22 | 1993-04-21 | Method of biologically decomposing phenol or furan compounds by microorganisms |
| DE1993629043 DE69329043T2 (de) | 1992-04-22 | 1993-04-21 | Verfahren zur biologischen Zersetzung von Phenol- oder Furanverbindungen mit Mikroorganismen |
| AT93106499T ATE194854T1 (de) | 1992-04-22 | 1993-04-21 | Verfahren zur biologischen zersetzung von phenol- oder furanverbindungen mit mikroorganismen |
| US08/810,366 US6096530A (en) | 1992-04-22 | 1997-03-03 | Pseudomonas cepacia strain isolated from termite intestines that degrades trichlorethylene and furan compounds |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10318092A JPH0824589B2 (ja) | 1992-04-22 | 1992-04-22 | フェノール性化合物の生物分解方法およびそれに用い得る新規菌株 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7216420A Division JPH0880188A (ja) | 1995-08-25 | 1995-08-25 | フェノール性化合物分解能を有する微生物の取得方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0622769A true JPH0622769A (ja) | 1994-02-01 |
| JPH0824589B2 JPH0824589B2 (ja) | 1996-03-13 |
Family
ID=14347314
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10318092A Expired - Fee Related JPH0824589B2 (ja) | 1992-04-22 | 1992-04-22 | フェノール性化合物の生物分解方法およびそれに用い得る新規菌株 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0824589B2 (ja) |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5863789A (en) * | 1993-09-30 | 1999-01-26 | Canon Kabushiki Kaisha | Microorganism-holding carrier and method for remediation of soil employing the carrier |
| US5945331A (en) * | 1996-08-01 | 1999-08-31 | Canon Kabushiki Kaisha | Microorganisms, and method for biodegradation of organic compounds and method for environmental remediation |
| US5962305A (en) * | 1996-08-01 | 1999-10-05 | Canon Kabushiki Kaisha | Microbial strain, method for biodegrading organic compounds and method for environmental remediation |
| US6004772A (en) * | 1995-02-28 | 1999-12-21 | Canon Kabushiki Kaisha | Oxygenase expressing microorganism strain JM1 (FERM BP-5352) for degrading organic compounds without an inducer |
| US6319706B1 (en) | 1997-05-15 | 2001-11-20 | Canon Kabushiki Kaisha | Process and apparatus for remedying polluted media |
| US6472191B1 (en) | 1998-12-03 | 2002-10-29 | Canon Kabushiki Kaisha | Dna fragment carrying toluene monooxygenase gene, recombinant plasmid, transformed microorganism, method for degrading chlorinated aliphatic hydrocarbon compounds and aromatic compounds, and method for environmental remediation |
| US6864074B2 (en) | 1998-10-30 | 2005-03-08 | Canon Kabushiki Kaisha | Dna fragment carrying toluene monooxygenase gene, recombinant plasmid, transformed microorganism, method for degrading chlorinated aliphatic hydrocarbon compounds and aromatic compounds, and method for environmental remediation |
| JP2007252244A (ja) * | 2006-03-22 | 2007-10-04 | Univ Of Tsukuba | 微生物スクリーニング方法、及び該微生物を用いた環境浄化方法と有用物質生産方法 |
-
1992
- 1992-04-22 JP JP10318092A patent/JPH0824589B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5863789A (en) * | 1993-09-30 | 1999-01-26 | Canon Kabushiki Kaisha | Microorganism-holding carrier and method for remediation of soil employing the carrier |
| US6004772A (en) * | 1995-02-28 | 1999-12-21 | Canon Kabushiki Kaisha | Oxygenase expressing microorganism strain JM1 (FERM BP-5352) for degrading organic compounds without an inducer |
| US5945331A (en) * | 1996-08-01 | 1999-08-31 | Canon Kabushiki Kaisha | Microorganisms, and method for biodegradation of organic compounds and method for environmental remediation |
| US5962305A (en) * | 1996-08-01 | 1999-10-05 | Canon Kabushiki Kaisha | Microbial strain, method for biodegrading organic compounds and method for environmental remediation |
| US6319706B1 (en) | 1997-05-15 | 2001-11-20 | Canon Kabushiki Kaisha | Process and apparatus for remedying polluted media |
| US6864074B2 (en) | 1998-10-30 | 2005-03-08 | Canon Kabushiki Kaisha | Dna fragment carrying toluene monooxygenase gene, recombinant plasmid, transformed microorganism, method for degrading chlorinated aliphatic hydrocarbon compounds and aromatic compounds, and method for environmental remediation |
| US6472191B1 (en) | 1998-12-03 | 2002-10-29 | Canon Kabushiki Kaisha | Dna fragment carrying toluene monooxygenase gene, recombinant plasmid, transformed microorganism, method for degrading chlorinated aliphatic hydrocarbon compounds and aromatic compounds, and method for environmental remediation |
| US6858417B2 (en) | 1998-12-03 | 2005-02-22 | Canon Kabushiki Kaisha | Dna fragment carrying toluene monooxygenase, gene, recombinant plasmid, transformed microorganism, method for degrading chlorinated aliphatic hydrocarbon compounds and aromatic compounds, and method for environmental remediation |
| JP2007252244A (ja) * | 2006-03-22 | 2007-10-04 | Univ Of Tsukuba | 微生物スクリーニング方法、及び該微生物を用いた環境浄化方法と有用物質生産方法 |
| JP4686721B2 (ja) * | 2006-03-22 | 2011-05-25 | 国立大学法人 筑波大学 | 微生物の新規スクリーニング方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0824589B2 (ja) | 1996-03-13 |
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|---|---|---|---|
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