JPH06289014A

JPH06289014A - フェノチアジン系色源体安定化液体組成物

Info

Publication number: JPH06289014A
Application number: JP7164493A
Authority: JP
Inventors: Hiroyuki Oda; 洋之小田; Junko Yoneda; 淳子米田; Kenji Hasegawa; 健二長谷川
Original assignee: Sunstar Inc
Current assignee: Sunstar Inc
Priority date: 1993-03-30
Filing date: 1993-03-30
Publication date: 1994-10-18

Abstract

(57)【要約】【目的】フェノチアジン系色源体を安定に配合した液
体組成物を提供する。【構成】フェノチアジン系色源体と、特定のアルコー
ル系溶媒とを配合してなる、常温で液体のフェノチアジ
ン系色源体安定化組成物。【効果】臨床検査等における操作を簡便にし、試薬の
調製が容易となる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、臨床診断薬等の基質と
して用いられるフェノチアジン系色源体の変性を抑制
し、長期間着色を防止するフェノチアジン系色源体を安
定化した液体の組成物に関する。また、本発明は、特
に、該組成物を用いる歯周疾患検査にも関する。

【０００２】

【従来の技術および課題】フェノチアジン環を有する色
源体は公知の化合物で、例えば、特開昭５７−２２９２
９７号にその合成法が開示されており、その分子吸光係
数が高いところから、臨床診断等における酵素反応を定
量するための色源体として使用されている（例えば、特
開平２−４９９号）。

【０００３】一般に、これら色源体は、水溶液中では非
常に不安定であり、また、固体であっても空気中の水分
や光により自動酸化を受けて着色を起こし長期の保存に
は適さず、定量の精度をおとす原因となっている。この
ため、これらの色源体を使用する臨床診断用等の酵素反
応定量キットのような商品の場合、安定化のためと、使
用に際しての再溶解性とを考慮して、これらの色源体を
凍結乾燥し、絶乾状態で提供されている。

【０００４】しかし、このような凍結乾燥処理や乾燥状
態を保持することは、製造コストを引き上げるため、こ
れら色源体を使用するうえで問題となっており、また、
使用に際しても簡単な、溶液状態で長期保存に適する技
術・製品の開発が望まれている。

【０００５】

【課題を解決するための手段】発明者らは、フェノチア
ジン系色源体の溶液中での安定性を改善するため種々検
討した結果、特定のアルコール系溶媒が特異的にフェノ
チアジン系色源体を安定化することを見いだし、本発明
を完成するに至った。

【０００６】すなわち、本発明は、フェノチアジン環を
有する色源体を含有する組成物と、その安定化剤とし
て、１−プロパノール、２−プロパノール、t−ブタノ
ール、エチレングリコール、プロピレングリコール、t
−ブタノールとt−ペンタノールとの混合物および２−
プロパノールとt−ペンタノールとの混合物から選ばれ
るアルコール系溶剤とを配合した、常温で液体であるこ
とを特徴とするフェノチアジン系色源体安定化液体組成
物を提供するものである。

【０００７】また、本発明は、このような組成物を、他
の必要な材料ないしは組成物と組み合わせてなる歯周疾
患検査用キットも提供するものである。

【０００８】本願発明の組成物は臨床検査等の酵素反応
の定量に用いるものであるが、このような酵素反応は、
通常、水溶液中で行なわれる。このため、本願発明によ
れば、水に混合溶解する液体状態で安定に色源体を提供
することができ、定量操作において実験手法が簡便に行
なえる長所がある。特に、フェノチアジン系色源体のよ
うに微量を添加する試薬においては、固体を正確に計量
することは面倒であるが、液体状態ならば手軽に計量で
きる。かくして、本安定化組成物は、常温（１５〜２５
℃）では、通常、溶液状態である。以下、本発明を詳細
に説明する。

【０００９】本発明においては、フェノチアジン系色源
体の安定化剤に、１−プロパノール、２−プロパノー
ル、t−ブタノール、エチレングリコール、プロピレン
グリコール、t−ブタノールとt−ペンタノールとの混合
物、好ましくはｔ−ブタノール：ｔ−ペンタノールの容
量比が１：１〜１０：１の混合物および２−プロパノー
ルとt−ペンタノールとの混合物、好ましくは２−プロ
パノール：ｔ−ペンタノールの容量比が１：１〜１０：
１の混合物から選ばれるアルコール系溶剤を添加する。
特に、ｔ−ブタノールが経済的である。安定化剤の量
は、通常、組成物に対して２％以上であるが、色源体の
量、最終の酵素反応液中の濃度、必要とする保存期間等
により適宜変えられ、特にこの範囲に限定されるもので
はない。しかし、目的とする酵素反応に対する影響を考
慮すれば、添加量は少ない方が望ましい。

【００１０】用いるフェノチアジン系色源体は、フェノ
チアジン環を有する公知のものいずれでもよく、例え
ば、式：

【００１１】

【化２】

【００１２】［式中、Ｒ₁ はアルキル基または置換アミ
ノ基（置換基はアルキル基、カルボキシル基、ナフチル
基、置換フェニル基（置換基はハロゲン、アルキル基、
アシルカルボニルアミノ基またはアシルカルボニルアミ
ノアルキル基を示す）、アシルカルボニルアミノアルキ
ル基置換フェニルアルキル）、Ｒ₂ はヒドロキシル基ま
たはジアルキルアミノ基、Ｒ₃ は水素、ニトロ基または
スクシニルアミノ基、およびＸはジアルキルアミノ基を
意味する。ただし、アルキル基の炭素数はいずれも１〜
３、アシル基の炭素数はいずれも１〜３である。］で示
されるフェノチアジン誘導体が挙げられる。

【００１３】これらの色源体の代表的なものには、例え
ば、１０Ｎ−メチルカルバモイル−３,７−ジメチルア
ミノ−１０Ｈ−フェノチアジン、１０Ｎ−カルボキシメ
チルカルバモイル−６−ニトロ−３,７−ジメチルアミ
ノ−１０Ｈ−フェノチアジン、１０Ｎ−カルボキシメチ
ルカルバモイル−６−スクシニルアミド−３,７−ジメ
チルアミノ−１０Ｈ−フェノチアジンまたは１０Ｎ−メ
チルカルバモイル−３−メチルアミノ−７−ヒドロキシ
−１０Ｈ−フェノチアジンが包含される。

【００１４】特に限定するものではないが、これらの色
源体は単独で、あるいは２種以上を組み合わせて、使用
時の希釈倍率にもよるが、実用上から、通常、組成物全
量に基づいて０.０１〜１重量％程度配合される。

【００１５】本発明の組成物は、通常、上記の所望の安
定化剤および色源体を、自体公知の方法により水と合し
てなる溶液組成物であり、用いる水は、例えば、精製水
やリン酸、クエン酸のような緩衝液とすることができ
る。また、必要に応じて、安息香酸ナトリウム等の防腐
剤、非イオン系の界面活性剤等の添加剤を加えてもよ
い。さらに、安定化を向上させるために、還元糖、有機
酸等の添加剤を添加してもよい。

【００１６】本発明の組成物は、臨床診断薬の分野で幅
広く用いることができ、生体中の各種の成分の測定や、
特開平１−１２８７９７号に開示されているようにエン
ハンサーを介在させることにより、生体内の微量酵素を
測定することができる。特に、歯周病原菌由来の酵素を
測定することによる歯周疾患検査キットとすることが可
能である。かかるキットとしては、本発明の組成物と、
歯周病原菌由来の酵素、例えば、ペプチダーゼの基質を
含む組成物を組み合わせたものが挙げられる。この基質
は、歯周病原菌由来の酵素に分解され、酸化酵素のエン
ハンサーを遊離する。従って、使用時に、これらの組成
物を合して、例えば、採取した歯肉縁下プラークと酸化
酵素を添加すれば、本発明により安定化された色源体が
酸化されて、色素を生成し、歯周病原菌の存在の有無を
判定できる。

【００１７】

【実施例】以下、試験例および実施例を挙げて本発明を
さらに詳しく説明する。なお、「％」は特に断らない限
り重量％である。試験例１表１に示す各種溶媒に溶解した色源体、１０Ｎ−カルボ
キシメチルカルバモイル−３,７−ジメチルアミノ−１
０Ｈ−フェノチアジンを試料とし、以下の試験を行っ
た。

【００１８】安定性試験：濃度３μmol／mlとなるよう
に色源体を溶解した溶液10mlを、容量12mlのガラスびん
に入れ、密閉し４℃および３０℃で１週間、放置した。
色源体の変化は、酸化による着色をＯＤ６６６ｎｍで測
定した。溶解直後はいずれも０.１以下であった。酵素反応試験：上記安定性試験に供した１０Ｎ−メチル
カルバモイル−３,７−ジメチルアミノ−１０Ｈ−フェ
ノチアジン（ＭＣＤＰ）溶液５０ulにアスコルビン酸オ
キシダーゼ溶液を添加して一定時間加温し、生成した色
素を吸光度計にて測定した。酵素阻害の小さいジメチル
ホルムアミドを１００％とし、８０％以上の活性を示し
たものを○、８０％以下の活性を示したものを×とし
た。結果を表１に示す。

【００１９】

【表１】

【００２０】表１に示すごとく、安定性試験では４℃で
はメタノール、エタノールを除き、いずれも安定であっ
たが、３０℃では１−プロパノール、２−プロパノー
ル、ｔ−ブタノール、ｔ−ブタノールとｔ−ペンタノー
ルの混合系、２−プロパノールとｔ−ペンタノールの混
合系以外ではいずれも０.１以上であった。また、酵素
反応試験でも、これらの溶媒は阻害がみられなかった。
以上の結果、これら特定のアルコール系溶媒が安定化剤
として適当であると考えられた。

【００２１】試験例２組成物中の至適溶媒濃度を検討するために、ｔ−ブタノ
ールに１０Ｎ−メチルカルバモイル−３,７−ジメチル
アミノ−１０Ｈ−フェノチアジン（ＭＣＤＰ）を溶解
し、精製水を加え、各種のｔ−ブタノール濃度の試料を
作成し、試験例１の通り安定性試験を行った。結果を表
２に示す。

【００２２】

【表２】

【００２３】表２に示すごとく、０.２％では効果がな
く、ＭＣＤＰに対してｔ−ブタノール濃度２〜１００％
で安定化効果が認められた。

【００２４】実施例１これらの成分を常法により混合、溶解し、所望の溶液組
成物を調製した。

【００２５】実施例２これらの成分を常法により混合、溶解し、所望の溶液組
成物を調製した。

【００２６】実施例３これらの成分を常法により混合、溶解し、所望の溶液組
成物を調製した。

【００２７】実施例４Ｎ−カルボベンゾキシ−グリシル−グリシル−アルギニ
ン−３，５−ジブロモ−４−ヒドロキシアニリド３μｍ
ｏｌとＭＣＤＰ１５μｍｏｌをｔ−ブタノール１ｍｌと
精製水４ｍｌからなる混液に溶解した溶液をＡｌ、アス
コルビン酸オキシダーゼ（１００ユニット／ｍｌ）含有
緩衝液をＡ２とし、これらで歯周疾患検査用キットを構
成した。歯周炎患者の歯周ポケットから、ペーパーポイ
ントで歯肉縁下プラークを採取し、Ａ１を５０μｌ、Ａ
２を１ｍｌ加え３７℃で１５分反応させたところ、波長
６６６ｎｍにおける吸光度は０.８５５となり、陽性と
判定された。

【００２８】

【発明の効果】本発明により安定化されたフェノチアジ
ン系色源体は、溶液等の液体状態での変色が抑制でき、
長期間安定に保存することができる。その結果，現在真
空凍結乾燥による安定化の代替として上記液体組成物を
用いれば、臨床検査等における操作を簡便にし、かつ、
用いる試薬の容器の簡素化、生産コストの削減等につな
がる。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】フェノチアジン環を有する色源体と、そ
の安定化剤として、１−プロパノール、２−プロパノー
ル、t−ブタノール、エチレングリコール、プロピレン
グリコール、t−ブタノールとt−ペンタノールとの混合
物および２−プロパノールとt−ペンタノールとの混合
物から選ばれるアルコール系溶媒とを配合してなる、常
温で液体であることを特徴とするフェノチアジン系色源
体安定化液体組成物。
【請求項２】安定化剤が、t−ブタノールである請求
項１記載の組成物。
【請求項３】組成物に対して、安定化剤を２％以上配
合した請求項１記載の組成物。
【請求項４】色源体が、式：【化１】［式中、Ｒ₁ はアルキル基または置換アミノ基（置換基
はアルキル基、カルボキシル基、ナフチル基、置換フェ
ニル基（置換基はハロゲン、アルキル基、アシルカルボ
ニルアミノ基またはアシルカルボニルアミノアルキル基
を示す）、アシルカルボニルアミノアルキル基置換フェ
ニルアルキル）、Ｒ₂ はヒドロキシル基またはジアルキ
ルアミノ基、Ｒ₃ は水素、ニトロ基またはスクシニルア
ミノ基、およびＸはジアルキルアミノ基を意味する。た
だし、アルキル基の炭素数はいずれも１〜３、アシル基
の炭素数はいずれも１〜３である。］で示されるフェノ
チアジン誘導体である請求項１記載の組成物。
【請求項５】色源体が、１０Ｎ−メチルカルバモイル
−３,７−ジメチルアミノ−１０Ｈ−フェノチアジン、
１０Ｎ−カルボキシメチルカルバモイル−６−ニトロ−
３,７−ジメチルアミノ−１０Ｈ−フェノチアジン、１
０Ｎ−カルボキシメチルカルバモイル−６−スクシニル
アミド−３,７−ジメチルアミノ−１０Ｈ−フェノチア
ジンまたは１０Ｎ−メチルカルバモイル−３−メチルア
ミノー７−ヒドロキシ−１０Ｈ−フェノチアジンである
請求項４記載の組成物。
【請求項６】色源体を０.０１〜１重量％配合した請
求項１記載の組成物。
【請求項７】請求項１記載の組成物を組み合わせてな
る歯周疾患検査用キット。