JPH06253898A - Ｌ−カルニチン、アセチルカルニチンの高感度測定法 - Google Patents
Ｌ−カルニチン、アセチルカルニチンの高感度測定法Info
- Publication number
- JPH06253898A JPH06253898A JP6945693A JP6945693A JPH06253898A JP H06253898 A JPH06253898 A JP H06253898A JP 6945693 A JP6945693 A JP 6945693A JP 6945693 A JP6945693 A JP 6945693A JP H06253898 A JPH06253898 A JP H06253898A
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- JP
- Japan
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- carnitine
- amount
- acetylcarnitine
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 従来法より１０〜１００程度測定感度を向上
せしめた、Ｌ−カルニチンまたはアセチルカルニチンの
新規な測定法を提供する。 【構成】 消費（または生成）アセチルＣｏＡ量を下記
式で表わされるアシルＣｏＡサイクリング法により測定
し、消費（または生成）アセチルＣｏＡ量から試料中の
Ｌ−カルニチン量（またはアセチルカルニチン量）を定
量する。 【式１】
せしめた、Ｌ−カルニチンまたはアセチルカルニチンの
新規な測定法を提供する。 【構成】 消費（または生成）アセチルＣｏＡ量を下記
式で表わされるアシルＣｏＡサイクリング法により測定
し、消費（または生成）アセチルＣｏＡ量から試料中の
Ｌ−カルニチン量（またはアセチルカルニチン量）を定
量する。 【式１】
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、アシルＣｏＡサイクリ
ング法を用いたＬ−カルニチンまたはアセチルカルニチ
ンの高感度測定法に関するものである。
ング法を用いたＬ−カルニチンまたはアセチルカルニチ
ンの高感度測定法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】Ｌ−カルニチンはビタミンＢT とも称さ
れ、脂肪酸のミトコンドリア膜の通過などの脂肪酸代謝
に重要な働きをしている物質である。しかし、透析患者
においては、Ｌ−カルニチンの欠乏がしばしば観察さ
れ、これは腎臓でのＬ−カルニチンの合成が制限される
ためであるとされている。Ｌ−カルニチンが欠乏すると
脂肪酸代謝などに異常を起こすことから、血中、尿中な
どのＬ−カルニチンの測定はこれらの代謝異常をモニタ
リングする意味で重要である。また、上述の脂肪酸代謝
以外にも、Ｌ−カルニチンの測定は筋傷害、糖尿病など
の診断、副こう丸の機能検査、輸精管の閉塞部位同定な
どに有用であるとされている。
れ、脂肪酸のミトコンドリア膜の通過などの脂肪酸代謝
に重要な働きをしている物質である。しかし、透析患者
においては、Ｌ−カルニチンの欠乏がしばしば観察さ
れ、これは腎臓でのＬ−カルニチンの合成が制限される
ためであるとされている。Ｌ−カルニチンが欠乏すると
脂肪酸代謝などに異常を起こすことから、血中、尿中な
どのＬ−カルニチンの測定はこれらの代謝異常をモニタ
リングする意味で重要である。また、上述の脂肪酸代謝
以外にも、Ｌ−カルニチンの測定は筋傷害、糖尿病など
の診断、副こう丸の機能検査、輸精管の閉塞部位同定な
どに有用であるとされている。
【０００３】従来、Ｌ−カルニチンの測定としては、ア
セチルＣｏＡの存在下、Ｌ−カルニチンにカルニチンア
セチルトランスフェラーゼを作用させ、生成したＣｏＡ
ＳＨを直接測定する方法、あるいは上記反応により生成
したＣｏＡＳＨをさらに下記に示すような一連の反応に
付し、最終反応のＮＡＤＨ変化量を測定することにより
Ｌ−カルニチンを定量する方法などが報告されている。
セチルＣｏＡの存在下、Ｌ−カルニチンにカルニチンア
セチルトランスフェラーゼを作用させ、生成したＣｏＡ
ＳＨを直接測定する方法、あるいは上記反応により生成
したＣｏＡＳＨをさらに下記に示すような一連の反応に
付し、最終反応のＮＡＤＨ変化量を測定することにより
Ｌ−カルニチンを定量する方法などが報告されている。
【式５】
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、上記従
来法はせいぜい２〜５μｇ／ｍｌ濃度のＬ−カルニチン
までしか測定することができず、このような測定感度で
は到底実用に供しうるものではない。したがって、本発
明の目的は、さらに測定感度を向上せしめ、０．０４〜
０．５μｇ／ｍｌ濃度のＬ−カルニチンまたはアセチル
カルニチンを測定できる新規な方法を提供することにあ
る。
来法はせいぜい２〜５μｇ／ｍｌ濃度のＬ−カルニチン
までしか測定することができず、このような測定感度で
は到底実用に供しうるものではない。したがって、本発
明の目的は、さらに測定感度を向上せしめ、０．０４〜
０．５μｇ／ｍｌ濃度のＬ−カルニチンまたはアセチル
カルニチンを測定できる新規な方法を提供することにあ
る。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者は上記目的を達
成すべく鋭意検討した結果、Ｌ−カルニチンまたはアセ
チルカルニチンの測定にアシルＣｏＡサイクリング法が
応用できることを見いだし、本発明を完成させた。
成すべく鋭意検討した結果、Ｌ−カルニチンまたはアセ
チルカルニチンの測定にアシルＣｏＡサイクリング法が
応用できることを見いだし、本発明を完成させた。
【０００６】したがって、本発明は、試料中のＬ−カル
ニチン量を酵素的に測定する方法であって、下記式
（１）で表わされる酵素反応により消費されたアセチル
ＣｏＡ量を下記式（２）で表わされるアシルＣｏＡサイ
クリング法により測定し、消費アセチルＣｏＡ量から試
料中のＬ−カルニチン量を定量することを特徴とする、
Ｌ−カルニチンの測定法に関するものである。
ニチン量を酵素的に測定する方法であって、下記式
（１）で表わされる酵素反応により消費されたアセチル
ＣｏＡ量を下記式（２）で表わされるアシルＣｏＡサイ
クリング法により測定し、消費アセチルＣｏＡ量から試
料中のＬ−カルニチン量を定量することを特徴とする、
Ｌ−カルニチンの測定法に関するものである。
【０００７】
【式６】
【式７】
【０００８】また、本発明は、試料中のアセチルカルニ
チン量を酵素的に測定する方法であって、下記式（３）
で表わされる酵素反応により生成したアセチルＣｏＡ量
を下記式（２）で表わされるアシルＣｏＡサイクリング
法により測定し、生成アセチルＣｏＡ量から試料中のア
セチルカルニチン量を定量することを特徴とする、アセ
チルカルニチンの測定法に関するものである。
チン量を酵素的に測定する方法であって、下記式（３）
で表わされる酵素反応により生成したアセチルＣｏＡ量
を下記式（２）で表わされるアシルＣｏＡサイクリング
法により測定し、生成アセチルＣｏＡ量から試料中のア
セチルカルニチン量を定量することを特徴とする、アセ
チルカルニチンの測定法に関するものである。
【０００９】
【式８】
【式９】
【００１０】以下、本発明について詳述する。 １．Ｌ−カルニチンの測定 測定対象のＬ−カルニチンを含有する試料は、Ｌ−カル
ニチンを含有するものであれば特に限定されるものでは
なく、たとえば、尿、血液、体液などの生体試料などを
例示することができる。また、本発明方法では、このよ
うな生体試料に、必要に応じて脱脂、除蛋白、希釈、濃
縮などの各種処理などを施したものも試料として使用す
ることができる。また、上記式（１）に関与するアセチ
ルＣｏＡおよびカルニチンアセチルトランスフェラーゼ
は既に市販されており、試薬会社から容易に入手可能で
ある。
ニチンを含有するものであれば特に限定されるものでは
なく、たとえば、尿、血液、体液などの生体試料などを
例示することができる。また、本発明方法では、このよ
うな生体試料に、必要に応じて脱脂、除蛋白、希釈、濃
縮などの各種処理などを施したものも試料として使用す
ることができる。また、上記式（１）に関与するアセチ
ルＣｏＡおよびカルニチンアセチルトランスフェラーゼ
は既に市販されており、試薬会社から容易に入手可能で
ある。
【００１１】反応は、測定対象試料中のＬ−カルニチン
含有予想量の２〜１００倍量のアセチルＣｏＡおよび
０．０１〜１０酵素単位（ユニット）の酵素量の酵素を
用い、ｐＨ７．０〜７．５、反応温度２０〜４０℃の条
件下で２〜３０分程度反応させればよい。また、酵素反
応の前に酵素反応と同じ温度条件下で１０分間程度プレ
インキュベーッションを行ってもかまわない。反応の停
止は、塩酸、硫酸などの酸添加による酵素変性、または
限外ろ過などの物理的な酵素除去により行うことができ
る。
含有予想量の２〜１００倍量のアセチルＣｏＡおよび
０．０１〜１０酵素単位（ユニット）の酵素量の酵素を
用い、ｐＨ７．０〜７．５、反応温度２０〜４０℃の条
件下で２〜３０分程度反応させればよい。また、酵素反
応の前に酵素反応と同じ温度条件下で１０分間程度プレ
インキュベーッションを行ってもかまわない。反応の停
止は、塩酸、硫酸などの酸添加による酵素変性、または
限外ろ過などの物理的な酵素除去により行うことができ
る。
【００１２】本発明方法は、上記式（１）の酵素反応に
より消費されたアセチルＣｏＡ量を上記式（２）のアシ
ルＣｏＡサイクリング法により測定し、消費アセチルＣ
ｏＡ量から試料中のＬ−カルニチン量を定量するもので
ある。アシルＣｏＡサイクリング法は既に本発明者によ
って報告されている公知の方法であり（Biochim. Bioph
ys. Acta.,83,1-7(1985)）、該方法に従って行えばよ
い。このようにして求めた消費アセチルＣｏＡ量から実
施例に示したように試料中のＬ−カルニチン量を測定す
ることができる。
より消費されたアセチルＣｏＡ量を上記式（２）のアシ
ルＣｏＡサイクリング法により測定し、消費アセチルＣ
ｏＡ量から試料中のＬ−カルニチン量を定量するもので
ある。アシルＣｏＡサイクリング法は既に本発明者によ
って報告されている公知の方法であり（Biochim. Bioph
ys. Acta.,83,1-7(1985)）、該方法に従って行えばよ
い。このようにして求めた消費アセチルＣｏＡ量から実
施例に示したように試料中のＬ−カルニチン量を測定す
ることができる。
【００１３】２．アセチルカルニチンの測定 測定対象のアセチルカルニチンを含有する試料は、アセ
チルカルニチンを含有するものであれば特に限定される
ものではなく、たとえば、尿、血液、体液などの生体試
料などを例示することができる。このような生体試料
は、必要に応じて脱脂、除蛋白、希釈処理などを施して
本発明方法に供すればよい。また、上記式（３）に関与
するＣｏＡＳＨおよびカルニチンアセチルトランスフェ
ラーゼは既に市販されており、試薬会社から容易に入手
可能である。
チルカルニチンを含有するものであれば特に限定される
ものではなく、たとえば、尿、血液、体液などの生体試
料などを例示することができる。このような生体試料
は、必要に応じて脱脂、除蛋白、希釈処理などを施して
本発明方法に供すればよい。また、上記式（３）に関与
するＣｏＡＳＨおよびカルニチンアセチルトランスフェ
ラーゼは既に市販されており、試薬会社から容易に入手
可能である。
【００１４】反応は、測定対象試料中のアセチルカルニ
チン含有予想量の２〜１００倍量のＣｏＡＳＨおよび
０．０１〜１０酵素単位（ユニット）の酵素量の酵素を
用い、ｐＨ７．０〜７．５、反応温度２０〜４０℃の条
件下で２〜３０分程度反応させればよい。また、酵素反
応の前に酵素反応と同じ温度条件下で１０分間程度プレ
インキュベーッションを行ってもかまわない。反応の停
止は、塩酸、硫酸などの酸添加による酵素変性、または
限外ろ過などの物理的な酵素除去により行うことができ
る。
チン含有予想量の２〜１００倍量のＣｏＡＳＨおよび
０．０１〜１０酵素単位（ユニット）の酵素量の酵素を
用い、ｐＨ７．０〜７．５、反応温度２０〜４０℃の条
件下で２〜３０分程度反応させればよい。また、酵素反
応の前に酵素反応と同じ温度条件下で１０分間程度プレ
インキュベーッションを行ってもかまわない。反応の停
止は、塩酸、硫酸などの酸添加による酵素変性、または
限外ろ過などの物理的な酵素除去により行うことができ
る。
【００１５】本発明方法は、上記式（３）の酵素反応に
より生成したアセチルＣｏＡ量を上記式（２）のアシル
ＣｏＡサイクリング法により測定し、生成アセチルＣｏ
Ａ量から試料中のアセチルカルニチン量を定量するもの
である。アシルＣｏＡサイクリング法は、上述したよう
に既に本発明者によって報告されている既知の方法であ
り（Biochim. Biophys. Acta.,83,1-7(1985)）、該方法
に従って行えばよい。このようにして求めた生成アセチ
ルＣｏＡ量から実施例に示したように試料中のアセチル
カルニチン量を測定することができる。
より生成したアセチルＣｏＡ量を上記式（２）のアシル
ＣｏＡサイクリング法により測定し、生成アセチルＣｏ
Ａ量から試料中のアセチルカルニチン量を定量するもの
である。アシルＣｏＡサイクリング法は、上述したよう
に既に本発明者によって報告されている既知の方法であ
り（Biochim. Biophys. Acta.,83,1-7(1985)）、該方法
に従って行えばよい。このようにして求めた生成アセチ
ルＣｏＡ量から実施例に示したように試料中のアセチル
カルニチン量を測定することができる。
【００１６】
【発明の効果】本発明方法は、Ｌ−カルニチンまたはア
セチルカルニチンの測定にアシルＣｏＡサイクリング法
を応用したものであり、このような方法を採用すること
により、従来法の１０〜１００倍の感度で目的物質を測
定することが可能である。具体的には、Ｌ−カルニチン
は０．０４〜０．４μｇ／ｍｌ（０．２５〜２．５０ｎ
ｍｏｌ／ｍｌ）の範囲で、アセチルカルニチンは０．０
５〜０．２５μｇ／ｍｌ（０．２〜１．２ｎｍｏｌ／ｍ
ｌ）の範囲で安定に測定することが可能となったのであ
る。
セチルカルニチンの測定にアシルＣｏＡサイクリング法
を応用したものであり、このような方法を採用すること
により、従来法の１０〜１００倍の感度で目的物質を測
定することが可能である。具体的には、Ｌ−カルニチン
は０．０４〜０．４μｇ／ｍｌ（０．２５〜２．５０ｎ
ｍｏｌ／ｍｌ）の範囲で、アセチルカルニチンは０．０
５〜０．２５μｇ／ｍｌ（０．２〜１．２ｎｍｏｌ／ｍ
ｌ）の範囲で安定に測定することが可能となったのであ
る。
【００１７】
【実施例】以下、実施例を示し、本発明を具体的に説明
する。 実施例１：Ｌ−カルニチンの測定 既知の濃度のＬ−カルニチンを含む下記反応組成１を用
意し、カルニチンアセチルトランスフェラーゼ添加前に
３０℃、１０分間プレインキュベーションし、酵素を添
加して３０℃で３０分間インキュベーションした。反応
後、限外ろ過膜（モルカットＩＩ）を用いて酵素を除去
した後、得られたろ液をサンプルとし、下記反応組成２
からなるアシルＣｏＡサイクリング法に供し、３０℃、
２０分間インキュベートした。反応後、酢酸キナーゼ
（１ユニット）を添加し、３０℃、２０分間インキュベ
ートした後、中和済みのヒドロキシルアミン２００μｌ
を添加し、３０℃、２０分間インキュベートした。反応
後、鉄試薬（Biochim. Biophys. Acta., 4, 301(195
0)）６００μｌを添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を
測定した。得られた吸光度から消費アセチルＣｏＡ量を
求め、消費アセチルＣｏＡ量とＬ−カルニチン量の関係
を示す検量線を作成した。その結果を図１に示す。図１
から明らかなように、消費アセチルＣｏＡ量とＬ−カル
ニチン量の関係を示す検量線は良好な直線性を示し、
０．０４〜０．４μｇ／ｍｌの濃度範囲で測定可能であ
る。
する。 実施例１：Ｌ−カルニチンの測定 既知の濃度のＬ−カルニチンを含む下記反応組成１を用
意し、カルニチンアセチルトランスフェラーゼ添加前に
３０℃、１０分間プレインキュベーションし、酵素を添
加して３０℃で３０分間インキュベーションした。反応
後、限外ろ過膜（モルカットＩＩ）を用いて酵素を除去
した後、得られたろ液をサンプルとし、下記反応組成２
からなるアシルＣｏＡサイクリング法に供し、３０℃、
２０分間インキュベートした。反応後、酢酸キナーゼ
（１ユニット）を添加し、３０℃、２０分間インキュベ
ートした後、中和済みのヒドロキシルアミン２００μｌ
を添加し、３０℃、２０分間インキュベートした。反応
後、鉄試薬（Biochim. Biophys. Acta., 4, 301(195
0)）６００μｌを添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を
測定した。得られた吸光度から消費アセチルＣｏＡ量を
求め、消費アセチルＣｏＡ量とＬ−カルニチン量の関係
を示す検量線を作成した。その結果を図１に示す。図１
から明らかなように、消費アセチルＣｏＡ量とＬ−カル
ニチン量の関係を示す検量線は良好な直線性を示し、
０．０４〜０．４μｇ／ｍｌの濃度範囲で測定可能であ
る。
【００１８】 反応組成１； Ｌ−カルニチン ０．３〜２．５ｎｍｏｌ アセチルＣｏＡ ２５ｎｍｏｌ ５０ｍＭトリスー塩酸緩衝液（ｐＨ７．２） ２５μｍｏｌ カルニチンアセチルトランスフェラーゼ ２μｌ（０．５４ユニット） ＥＤＴＡ ２５０ｎｍｏｌ 純粋 適当量（最終容量１ｍｌ）
【００１９】 反応組成２； サンプル（アセチルＣｏＡとして） ５〜８０ｐｍｏｌ マロン酸 ２５０μｍｏｌ ５０ｍＭトリスー塩酸緩衝液（ｐＨ７．２） ２５μｍｏｌ マロン酸脱炭酸酵素 ５μｌ（１ユニット） ＡＴＰ ４μｍｏｌ 純粋 適当量（最終容量１ｍｌ）
【００２０】実施例２：アセチルカルニチンの測定 既知の濃度のアセチルカルニチンを含む下記反応組成３
を用意し、カルニチンアセチルトランスフェラーゼ添加
前に３０℃、１０分間プレインキュベーションし、酵素
を添加して３０℃で３０分間インキュベーションした。
反応後、限外ろ過膜（モルカットＩＩ）を用いて酵素を
除去した後、得られたろ液をサンプルとし、以下実施例
１と同様に処理して生成アセチルＣｏＡ量とアセチルカ
ルニチン量の関係を示す検量線を作成した。その結果を
図２に示す。図２から明らかなように、生成アセチルＣ
ｏＡ量とアセチルカルニチン量の関係を示す検量線は良
好な直線性を示し、０．０５〜０．２５μｇ／ｍｌの濃
度範囲で測定可能である。
を用意し、カルニチンアセチルトランスフェラーゼ添加
前に３０℃、１０分間プレインキュベーションし、酵素
を添加して３０℃で３０分間インキュベーションした。
反応後、限外ろ過膜（モルカットＩＩ）を用いて酵素を
除去した後、得られたろ液をサンプルとし、以下実施例
１と同様に処理して生成アセチルＣｏＡ量とアセチルカ
ルニチン量の関係を示す検量線を作成した。その結果を
図２に示す。図２から明らかなように、生成アセチルＣ
ｏＡ量とアセチルカルニチン量の関係を示す検量線は良
好な直線性を示し、０．０５〜０．２５μｇ／ｍｌの濃
度範囲で測定可能である。
【００２１】 反応組成３； アセチルカルニチン ０．２〜１．２ｎｍｏｌ ＣｏＡＳＨ ２０ｎｍｏｌ ５０ｍＭトリスー塩酸緩衝液（ｐＨ７．２） ２５μｍｏｌ カルニチンアセチルトランスフェラーゼ １μｌ（０．２７ユニット） ＥＤＴＡ ２５０ｎｍｏｌ 純粋 適当量（最終容量１ｍｌ）
【００２２】実施例３：ｐＨの影響 各ｐＨの緩衝液（ｐＨ５．３〜９．０）に２．５ｎｍｏ
ｌのアセチルＣｏＡを添加し、３０℃、４０分間インキ
ュベートした。その結果を図３に示す。図３から明らか
なように、アセチルＣｏＡは中性付近で安定であること
が確認された。次に、実施例１及び２におけるトリスー
塩酸緩衝液の代わりに各ｐＨ（６．２〜９．０）の緩衝
液を用い、実施例１においてはＬ−カルニチンを１ｎｍ
ｏｌ、アセチルＣｏＡを２．５ｎｍｏｌを使用し、実施
例２においてはアセチルカルニチンを１ｎｍｏｌ使用す
る以外は各実施例と同様に処理し、それぞれの測定にお
けるｐＨの影響を調べた。その結果を図４及び５に示
す。図４及び５から明らかなように、本発明方法は中性
付近、好ましくはｐＨ７．０〜７．５の範囲が適当であ
ることが確認できた。
ｌのアセチルＣｏＡを添加し、３０℃、４０分間インキ
ュベートした。その結果を図３に示す。図３から明らか
なように、アセチルＣｏＡは中性付近で安定であること
が確認された。次に、実施例１及び２におけるトリスー
塩酸緩衝液の代わりに各ｐＨ（６．２〜９．０）の緩衝
液を用い、実施例１においてはＬ−カルニチンを１ｎｍ
ｏｌ、アセチルＣｏＡを２．５ｎｍｏｌを使用し、実施
例２においてはアセチルカルニチンを１ｎｍｏｌ使用す
る以外は各実施例と同様に処理し、それぞれの測定にお
けるｐＨの影響を調べた。その結果を図４及び５に示
す。図４及び５から明らかなように、本発明方法は中性
付近、好ましくはｐＨ７．０〜７．５の範囲が適当であ
ることが確認できた。
【００２３】実施例４：反応時間の影響 Ｌ−カルニチンの測定においてはＬ−カルニチンを１ｎ
ｍｏｌ、アセチルＣｏＡを２．５ｎｍｏｌを使用し、ア
セチルカルニチンの測定においてはアセチルカルニチン
を１．２ｎｍｏｌを使用し、反応時間を０〜６０分間に
する以外は各実施例と同様に処理し、それぞれの測定に
おける反応時間の影響を調べた。その結果を図６及び７
に示す。図６及び７から明らかなように、本発明方法で
は反応時間として１０分以上が適当であることが確認で
きた。
ｍｏｌ、アセチルＣｏＡを２．５ｎｍｏｌを使用し、ア
セチルカルニチンの測定においてはアセチルカルニチン
を１．２ｎｍｏｌを使用し、反応時間を０〜６０分間に
する以外は各実施例と同様に処理し、それぞれの測定に
おける反応時間の影響を調べた。その結果を図６及び７
に示す。図６及び７から明らかなように、本発明方法で
は反応時間として１０分以上が適当であることが確認で
きた。
【００２４】実施例５：酵素量の影響 Ｌ−カルニチンの測定においてはＬ−カルニチンを１ｎ
ｍｏｌ、アセチルＣｏＡを２．５ｎｍｏｌを使用し、ア
セチルカルニチンの測定においてはアセチルカルニチン
を０．８ｎｍｏｌを使用し、酵素量として０〜６μｌ使
用する以外は各実施例と同様に処理し、それぞれの測定
における酵素量の影響を調べた。なお、１μｌの酵素量
は０．２７ユニットに相当する。その結果を図８及び９
に示す。図８及び９から明らかなように、本発明方法で
は１ユニット以下の酵素量で十分であることが確認でき
た。
ｍｏｌ、アセチルＣｏＡを２．５ｎｍｏｌを使用し、ア
セチルカルニチンの測定においてはアセチルカルニチン
を０．８ｎｍｏｌを使用し、酵素量として０〜６μｌ使
用する以外は各実施例と同様に処理し、それぞれの測定
における酵素量の影響を調べた。なお、１μｌの酵素量
は０．２７ユニットに相当する。その結果を図８及び９
に示す。図８及び９から明らかなように、本発明方法で
は１ユニット以下の酵素量で十分であることが確認でき
た。
【００２５】
【図１】図１は、Ｌ−カルニチン測定における検量線を
示したものである。
示したものである。
【図２】図２は、アセチルカルニチン測定における検量
線を示したものである。
線を示したものである。
【図３】図３は、アセチルＣｏＡのｐＨ安定性を示した
ものである。
ものである。
【図４】図４は、Ｌ−カルニチン測定におけるｐＨの影
響を示したものである。
響を示したものである。
【図５】図５は、アセチルカルニチン測定におけるｐＨ
の影響を示したものである。
の影響を示したものである。
【図６】図６は、Ｌ−カルニチン測定における反応時間
の影響を示したものである。
の影響を示したものである。
【図７】図７は、アセチルカルニチン測定における反応
時間の影響を示したものである。
時間の影響を示したものである。
【図８】図８は、Ｌ−カルニチン測定における酵素量の
影響を示したものである。
影響を示したものである。
【図９】図９は、アセチルカルニチン測定における酵素
量の影響を示したものである。
量の影響を示したものである。
Claims (2)
- 【請求項１】 試料中のＬ−カルニチン量を酵素的に測
定する方法であって、下記式（１）で表わされる酵素反
応により消費されたアセチルＣｏＡ量を下記式（２）で
表わされるアシルＣｏＡサイクリング法により測定し、
消費アセチルＣｏＡ量から試料中のＬ−カルニチン量を
定量することを特徴とする、Ｌ−カルニチンの測定法。 【式１】 【式２】 - 【請求項２】 試料中のアセチルカルニチン量を酵素的
に測定する方法であって、下記式（３）で表わされる酵
素反応により生成したアセチルＣｏＡ量を下記式（２）
で表わされるアシルＣｏＡサイクリング法により測定
し、生成アセチルＣｏＡ量から試料中のアセチルカルニ
チン量を定量することを特徴とする、アセチルカルニチ
ンの測定法。 【式３】 【式４】
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6945693A JPH06253898A (ja) | 1993-03-04 | 1993-03-04 | Ｌ−カルニチン、アセチルカルニチンの高感度測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6945693A JPH06253898A (ja) | 1993-03-04 | 1993-03-04 | Ｌ−カルニチン、アセチルカルニチンの高感度測定法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06253898A true JPH06253898A (ja) | 1994-09-13 |
Family
ID=13403175
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6945693A Pending JPH06253898A (ja) | 1993-03-04 | 1993-03-04 | Ｌ−カルニチン、アセチルカルニチンの高感度測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06253898A (ja) |
-
1993
- 1993-03-04 JP JP6945693A patent/JPH06253898A/ja active Pending
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