SE436894B - Sett att samtidigt bestemma transaminaser (got och gpt) med kinetisk uv-metod - Google Patents
Sett att samtidigt bestemma transaminaser (got och gpt) med kinetisk uv-metodInfo
- Publication number
- SE436894B SE436894B SE8005122A SE8005122A SE436894B SE 436894 B SE436894 B SE 436894B SE 8005122 A SE8005122 A SE 8005122A SE 8005122 A SE8005122 A SE 8005122A SE 436894 B SE436894 B SE 436894B
- Authority
- SE
- Sweden
- Prior art keywords
- acid
- gpt
- alanine
- substrates
- activities
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/48—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving transferase
- C12Q1/52—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving transferase involving transaminase
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/81—Packaged device or kit
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
80051224) över hela världen användes två metoder: 1) Den kolorímetriska metoden, baserad på omsättningen mellan oxalättiksyra och 2,U-dinitrofenylhydrazin. Denna omsättning är inte kinetisk, men efter en förutbestämd ínkuberingstíd bestämmes den bildade mängden ketosyra genom mätning av extinktionen vid 536 nm från den bildade fenylhydrazonen. Denna metod har, även om den modifierats under flera är, fortfarande nackdelar när det gäller prover från människor med gulsot. 2) Den kinetiska UV-metoden anses allmänt vara referensmetoden på grund av dess stora exakthet och specificítet.
Oxalättiksyran, som bildas vid transamineringsreaktionen, bestäm- mes genom en enzymatisk reaktion, kopplad med maleinsyradehydro- genas (MDH) genom mätning av oxidationen av NADH (nikotinamid- -adenin-dinukleotíd i reducerad form) vid BUO nm. ?ÛOH>~ çOOH C112 + MDH cH2 + NAD* à = Q + NÅDH + H ---å H-¿“ÛH OOH ¿O0H oxalättiksyra '> maleinsvra De modifieringar, som först utförts med denna metod av Karmen tillät att reaktionen kunde optimeras som en funktion av substrat- koncentrationen och bestämningstemperaturerna och att svårigheter- na på grund av den icke linjära kinetiska fasen kunde övervinnas.
Liknande betraktelse kan även göras för GPT när det gäller kolorimetriswztest, under det att den kinetiska UV-metoden, som infördes av Henley och Pollard, är baserad på bestämningen av pyrodruvsyra, som bildas under transamineringsreaktionen med en enzymatisk reaktionskoppling med mjölksyradehydrogenas (LDH), varvid återoxídationen av NADH mätes vid BÄO nm.
CH ' CH | 3 e i 3 _ ç = o + NADH-H* LDH; H-o-oH + NAD* tooH <_g-- cooH pyrodruvsyra mjölksyra' 80051 22 - 0 Även för den kinetiska UV-metoden tillät de modifieringar, som införts och beskrivits i litteraturen, att reaktionen kunde optimeras som en funktion av substratkoncentrationerna och be- stämningstemperaturerna.
Bestämningen av de GOT- och GPT-aktiviteter, som föreligger i serumet eller i andra biologiska prover, utföres med de ovan nämnda kolorimetriska eller UV-kínetiska metoderna. Dessa medför alltid att analysatorn måste utföra tvâ olika analyser för de två transaminaserna. Detta beror på den.tekniska omöjligheten att koppla de ovan två nämnda UV-kinetiska enzymerna i endast en be- stämning på grund av tvärinhiberingsfenomen.
Syftet med föreliggande uppfinning är ett nytt förfarande, som tillåter att med en enda analys med UV-kinetik spektrofotometriskt bestämma summan av de två transaminasaktiviteterna, och förfaran- det utgör sålunda den första kartläggande analysen mellan normala och patologiska värden för sådana enzymatiska aktiviteter. Dess- utom tillåter den nya metoden enligt analysatorns fordringar _ genom enkel modifiering av den ordning med vilken reaktanterna och substraten satsas i reaktionsblandningen, att aktiviteten av de två transaminaserna exakt kan bestämmas i enheter per liter i plasma- eller serumprovet, så att tidsbesparing sker i förhållan- de till de metoder, som vanligen användes i laboratorier.
Det är känt att GOT kan katalysera transaminering inte endast av dess naturliga substrat (glutaminsyra och asparaginsyra) utan även av andra aminosyror. Bland dessa transamineras även cystein- sulfinsyra aktivt i närvaro av 4-ketoglutarsyra under bildning av ß-sulfinylpyrodruvsyra, som, eftersom den är instabil i vat- tenlösning, snabbt hydrolyseras till pyrodruvsyra och sulfit enligt följande reaktionsschema: u àoos122-o Ä çH2-SOZH ?OOH . GH2-SOZH ÉOOH iGOT _ ?HNH2 + CH2 - ; É - 0 + H2 coon _ H2 (__-r- ooH oHZ i = o i _ :Hung i ooH i ooH cysteinsulfin- -ketoglutarsyra -sulfinylpyrof glutaminsyra syra :druvsyra H O H5 C = O + HESO OOH' pyrodruvsyra 3 Även i frånvaro av'dFketoglutarsyra kan GOT interagera med cysteinsulfinsyra och katalysera en aëy-elimineringsreaktion en- ligt följande schema: CH2~SO2H fH2 ÉHNHQ GOT É-NH2 * + HZSO > a 3 OOH OOH + H20 FH3 C = O + NH5 OOH cysteinsulfínsyra d-aminoakrylsyra pyrodruvsyra Även i detta fall är reaktionens slutprodukt pyrodruvsyra, och aktiviteten av GOT kan bestämmas med spektrofotometrisk kinetik vid BMG nm genom mätning av âteroxidationen av NADH i närvaro av mjölksyradehydrogenas, samma enzym, som användes för bestämning av GPT-aktiviteten.
Användningen av cysteinsulfinsyran som substrat för GOT tillåter sålunda användning av endast ett avslöjande enzym, mjölksyra- dehydrogenas (LDH), vid den kopplade bestämningen av de två transaminaserna enligt följande schema: aous122-o 5 “EHB _ CHNHQ +a(-xo COOH GPT alanin H - H = O + A LDH - - + 3 NDH H än NAD* -> Y ?H2SO2H GOT COOH COOH iza-NHE / cooH +J\KG cysteinsulfinsyra pyrodruvsyra mjölksyra Minskningen av extinktionen vid EMO nm utgör ett mått på mängden producerad pyrodruvsyra, och som en följd härav på de båda trans- aminasernas aktiviteter. Det är viktigt att notera att den sam- tidiga bestämningen av transaminaser är möjlig under dessa betingflser tack vare frånvaron av tvärinhibering mellan de an- vända substraten. De speciella kinetíska egenskaperna hos reak- tionen mellan GOT och cysteinsulfinsyra medger två olika tillämp- ningar av systemet såsom framgår av följande exempel.
Exempel 1 Sätt att bestämma de absoluta aktiviteterna hos GOT och GPT Till en reaktionsblandning om 2,5 ml innehållande L-alanin (200 mM), Ä-ketoglutarsyra (2 mM),ß-NADH (0,2H mM) och 5,6 enheter mjölksyradehydrogenas i tris-HCl-buffert (80 mM), pH 8,5 sattes 0,5 ml plasma eller serum, varefter extinktionsminskningen mättes vid BÄO nm (eller någon annan våglängd, t.ex. BBÄ eller 365 nm beroende på det använda instrumentet). Minskningen står i direkt relation till mängden omvandlad alanin till pyrodruvsyra, orsakat av GPT.
Efter några minuters omsättning tillsättes 0,1 ml av en cysteín- sulfinsyralösning så att slutkoncentrationen i blandningen är 66 mM. Ökningen ÄÄE/min beror i detta fall på omvandlingsbland- ningen av cysteinsulfinsyra till pyrodruvsyra, orsakat av GOT.
Genom dessa omvandlingskoefficíenter är det möjligt att från det observerade ¿§E/min före och efter tillsatsen av cysteinsulfin- syra beräkna de exakta värdena av de enzymatiska enheter av GOT och GPT, som föreligger i serumet, med ett enda bestämningsför- farande. I 860511224) i Exempel 2 Utvärderingsmetod för bestämning av normala och patologiska vär- den på aktiviteterna av GOT och GPT i plasma eller serum Till en reaktionsblandning av 2,5 ml innehållande L-alanin (200 mM) , :Å-ketoglutarsyra (2- mM) , ß -NADH- (0,2¿¿ mM) ,' 'cysteinsulfin- syra (7mM) och 5,6 enheter mjölksyradehydrogenas i Tris-HCl- buffert (50 mM) pH 8,5, sättes 0,5 ml serum eller plasma och extinktíonsminskningen mätes vid BUO nm (eller vid andra våg- längder, t.ex. 33ü eller 365 nm beroende på det använda instru- mentet). I detta fall står extinktionsminskningen i direkt rela- tion till omvandlad mängd av både alanin och cysteinsulfin till pyrodruvsyra, orsakat av GPT respektive GOT, och man erhåller ett mått på summan av de två enzymatiska aktiviteterna.
Analysens kinetiska egenskaper tillåter bestämning av ett gräns- värde för A E/min mellan normala och patologiska värden.
Genom lämpliga omvandlingskoefficienter är det möjligt, när det gäller normala prover, att exakt beräkna de aktuella enzymenheter- na för både GOT och GPT, under det att när det gäller patologiska prover detta förfarande har ett fel på ca 10-15%.
Claims (4)
1. Kinetisk UV-metod för santidig bestämning av glutanin-oxal- syra-transaninas (GOT) och glutamin-pyrodruvsyra-transalinas (GPT) i. ett enda prov av serul el-ler plasla. I I: ä n n e - t e c k n a d av att såson de specifika aninosyrasubstraten för ovan nämnda transaminaser användes L-cysteinsulfinsyra resp. L-alanin. och de vid de båda transaninasaktiviteterna bildade produkterna påvisas vid onsâttning med njölksyrade- hydrogenas på i sig känt sätt.
2. Sätt enligt krav l. k ä n n e t e c k n a t av att de totala GOT- och GPT-transaninasaktiviteterna bestämnes genom mätning av det totala AE/Iin. varvid de två alinosyra- substraten är närvarande från början i reaktionsniljön.
3. Sätt enligt krav 1. k ä n n e t e c k n a t av att AE/lin först nätes i närvaro av L-alanín son ett substrat och därefter mätes ökningen av AE/lin efter tillsatsen av cysteinsulfinsyra. vilken senare ökning av' AE/min är ett lätt på GOT-transaminasaktiviteten.
4. Diagnosutrustning för bestänning av nornala eller pato- logiska värden av glutanin-oxalsyra-transaminas (GOT) och glutanin-pyrodruvsyra-transalinas (GPT) i ett enda prov av serun eller plasla. varvid lan sâson de specifika aninosyra- substraten för ovan nännda transalinaser använder L-cystein- sulfinsyra resp. L-alanin. och påvisar de vid de båda trans- aninasaktiviteterna bildade produkterna vid omsättning med mjölksyradehydrogenas på i sig känt sätt. k ä n n e t e c - n a d av att den såsom komponent innehåller de för GOT och GPT specifika substraten cysteinsulfinsyra resp. L-alanin.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
IT49789/79A IT1162349B (it) | 1979-07-17 | 1979-07-17 | Metodo per la determinazione delle transaminasi e relativo kit diagnostico |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SE8005122L SE8005122L (sv) | 1981-01-18 |
SE436894B true SE436894B (sv) | 1985-01-28 |
Family
ID=11271566
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SE8005122A SE436894B (sv) | 1979-07-17 | 1980-07-11 | Sett att samtidigt bestemma transaminaser (got och gpt) med kinetisk uv-metod |
Country Status (16)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4329425A (sv) |
JP (1) | JPS5935600B2 (sv) |
AR (1) | AR224900A1 (sv) |
AT (1) | AT369034B (sv) |
AU (1) | AU528558B2 (sv) |
BE (1) | BE884323A (sv) |
CA (1) | CA1144459A (sv) |
CH (1) | CH647600A5 (sv) |
DE (1) | DE3026854C2 (sv) |
ES (1) | ES493473A0 (sv) |
FR (1) | FR2461952A1 (sv) |
IL (1) | IL60504A (sv) |
IT (1) | IT1162349B (sv) |
NL (1) | NL8004080A (sv) |
SE (1) | SE436894B (sv) |
ZA (1) | ZA804096B (sv) |
Families Citing this family (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
IT1171257B (it) * | 1981-05-28 | 1987-06-10 | Biodata Spa | Metodo per la determinazione della attivita' degli isoenzimi citoplasmatico e mitocondriale della glutammico ossalacetico transaminasi nel siero o plasma umano |
DE3221730A1 (de) * | 1982-06-09 | 1983-12-15 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren und analytische mittel zur aktivitaetsbestimmung von glutamat-oxalacetat-transaminase |
DE3330246A1 (de) * | 1983-08-22 | 1985-03-14 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren und reagenz zur bestimmung von transaminasen |
US4547460A (en) * | 1984-04-16 | 1985-10-15 | Eastman Kodak Company | Multizone analytical element and method for analyte determination |
US5834226A (en) * | 1991-01-31 | 1998-11-10 | Xytronyx, Inc. | One-step test for aspartate aminotransferase |
JPH05900U (ja) * | 1991-06-19 | 1993-01-08 | 株式会社新来島どつく | 折り畳み式梯子 |
JPH0693713A (ja) * | 1992-09-14 | 1994-04-05 | Kashiwabara Token Kogyo Kk | 円筒タンクの外壁面作業用足場 |
KR100318552B1 (ko) * | 1998-12-24 | 2002-09-05 | 한국과학기술연구원 | 간질환관련표식물질의검출용스트립 |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3206376A (en) * | 1964-05-22 | 1965-09-14 | Warner Lambert Pharmaceutical | Method of determining glutamic-oxalacetic transaminase |
US3746625A (en) * | 1966-12-12 | 1973-07-17 | H Bergmeyer | Stabilized coenzyme test compositions |
BE786291A (fr) * | 1971-07-20 | 1973-01-15 | Technicon Instr | Compositions de diagnostic pour determination de la glutamate-oxalate-transaminase (got) et de la glutamate-pyruvate-transaminase (gpt) |
JPS5631957B2 (sv) * | 1973-10-09 | 1981-07-24 | ||
US4241179A (en) * | 1978-08-14 | 1980-12-23 | Coulter Electronics, Inc. | Method for determining a transaminase in a biological fluid and reagent combination for use in the method |
-
1979
- 1979-07-17 IT IT49789/79A patent/IT1162349B/it active
-
1980
- 1980-07-04 IL IL60504A patent/IL60504A/xx not_active IP Right Cessation
- 1980-07-07 CA CA000355611A patent/CA1144459A/en not_active Expired
- 1980-07-08 ZA ZA00804096A patent/ZA804096B/xx unknown
- 1980-07-10 US US06/168,286 patent/US4329425A/en not_active Expired - Lifetime
- 1980-07-11 SE SE8005122A patent/SE436894B/sv not_active IP Right Cessation
- 1980-07-15 AU AU60407/80A patent/AU528558B2/en not_active Ceased
- 1980-07-15 AR AR281764A patent/AR224900A1/es active
- 1980-07-15 BE BE0/201416A patent/BE884323A/fr unknown
- 1980-07-16 AT AT0370280A patent/AT369034B/de not_active IP Right Cessation
- 1980-07-16 NL NL8004080A patent/NL8004080A/nl not_active Application Discontinuation
- 1980-07-16 DE DE3026854A patent/DE3026854C2/de not_active Expired
- 1980-07-16 JP JP55096297A patent/JPS5935600B2/ja not_active Expired
- 1980-07-16 CH CH5459/80A patent/CH647600A5/it not_active IP Right Cessation
- 1980-07-17 FR FR8015815A patent/FR2461952A1/fr active Granted
- 1980-07-17 ES ES493473A patent/ES493473A0/es active Granted
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
SE8005122L (sv) | 1981-01-18 |
ATA370280A (de) | 1982-04-15 |
AU528558B2 (en) | 1983-05-05 |
IT1162349B (it) | 1987-03-25 |
FR2461952A1 (fr) | 1981-02-06 |
IT7949789A0 (it) | 1979-07-17 |
NL8004080A (nl) | 1981-01-20 |
AU6040780A (en) | 1981-01-22 |
JPS5935600B2 (ja) | 1984-08-29 |
DE3026854C2 (de) | 1986-09-18 |
BE884323A (fr) | 1980-11-03 |
ES8106556A1 (es) | 1981-09-01 |
DE3026854A1 (de) | 1981-02-12 |
CA1144459A (en) | 1983-04-12 |
IL60504A0 (en) | 1980-09-16 |
JPS5655200A (en) | 1981-05-15 |
FR2461952B1 (sv) | 1983-08-05 |
ES493473A0 (es) | 1981-09-01 |
ZA804096B (en) | 1981-08-26 |
AT369034B (de) | 1982-11-25 |
CH647600A5 (it) | 1985-01-31 |
AR224900A1 (es) | 1982-01-29 |
US4329425A (en) | 1982-05-11 |
IL60504A (en) | 1983-07-31 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Lippi et al. | A new colorimetric ultramicromethod for serum glutamicoxalacetic and glutamic-pyruvic transaminase determination | |
Paz et al. | The amplefied detection of free and bound methoxatin (PQQ) with nitroblue tetrazolium redox reactions: Insights into the PQQ-locus | |
JPS60259185A (ja) | グリセリンオキシダ−ゼの取得法 | |
CN109613226A (zh) | 一种肌酐测定试剂盒及其应用 | |
SE436894B (sv) | Sett att samtidigt bestemma transaminaser (got och gpt) med kinetisk uv-metod | |
Ishihara et al. | Enzymatic determination of ammonia in blood plasma | |
CN111944872A (zh) | 测定肌酐含量的试剂组合、试剂或试剂盒 | |
US4024021A (en) | Determination of glutamate and glutamic transaminases | |
Kohlbecker et al. | Determination of oxalate in urine using oxalate oxidase: comparison with oxalate decarboxylase | |
Malmstadt et al. | Specific Enzymatic Determination of Some Alpha-Amino Acids by an Automatic Spectrophotometric Reaction Rate Method. | |
CA1203154A (en) | Rapid assaying method for guanase | |
WO2002002802A1 (fr) | Procede de mesure d'homocysteine totale | |
US5618684A (en) | Method of determination of calcium | |
CN106811505B (zh) | 一种稳定性强的单试剂液态血氨(amm)检测试剂 | |
JP2011043396A (ja) | 生体試料中のl−リジンの定量法 | |
GB2057684A (en) | Method and Kit for Determination of Transaminases | |
CN112029820B (zh) | 一种抗羟苯磺酸钙干扰的肌酐含量检测试剂盒及其应用 | |
CN115655848B (zh) | 一种稳定型的谷草转氨酶测定试剂盒 | |
JP3151097B2 (ja) | チラミンの高感度定量方法 | |
US6696266B1 (en) | Method for assaying ammonia using an NAD-based cycling reaction system | |
AU595993B2 (en) | Dicyanoethylaryl derivatives and process for their preparation | |
CN115896236A (zh) | 一种丙氨酸氨基转移酶的检测试剂盒及检测方法 | |
JPH0772157A (ja) | 糖化蛋白の定量方法およびその定量用キット | |
JP2023106021A (ja) | L-アスパラギンの測定方法、及びそのためのキット | |
JP3449649B2 (ja) | 酢酸ナトリウムの定量方法及び定量試薬 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
NAL | Patent in force |
Ref document number: 8005122-0 Format of ref document f/p: F |
|
NUG | Patent has lapsed |
Ref document number: 8005122-0 Format of ref document f/p: F |