JP2023106021A - L-アスパラギンの測定方法、及びそのためのキット - Google Patents
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Abstract
【解決手段】下記A液及びB液を含有する、試料中のL-アスパラギンを測定するためのキットを提供する:(A液)アスパラギン酸トランスアミナーゼ(GOT)、グルタミナーゼ、L-グルタミン酸オキシダーゼ、カタラーゼ、アスコルビン酸オキシダーゼ、及びα-ケトグルタル酸を含む液;
(B液)アスパラギナーゼ、ペルオキシダーゼ、及びカタラーゼ失活剤を含む液;ただし、A液及びB液は、いずれか一方がカプラー化合物を含み、他方が新トリンダー試薬を含む。
【選択図】図1
Description
[1] 下記A液及びB液を含有する、試料中のL-アスパラギンを測定するためのキット:
(A液)アスパラギン酸トランスアミナーゼ、グルタミナーゼ、L-グルタミン酸オキシダーゼ、カタラーゼ、アスコルビン酸オキシダーゼ、及びα-ケトグルタル酸を含む液;
(B液)アスパラギナーゼ、ペルオキシダーゼ、及びカタラーゼ失活剤を含む液;
ただし、A液及びB液は、いずれか一方がカプラー化合物を含み、他方が新トリンダー試薬を含む。
[2] A液がさらにアスコルビン酸オキシダーゼを含む、1に記載のキット。
[3] A液がカプラー化合物を含み、B液が新トリンダー試薬を含み、A液がさらにピリドキサールリン酸を含む、1又は2に記載のキット。
[4] カプラー化合物が、4-アミノアンチピリンである、1~3のいずれか1項に記載のキット。
[5] 新トリンダー試薬が、N-エチル-N-(2-ヒドロキシ-3-スルホプロピル)-3-メチルアニリン・ナトリウム塩(TOOS)、又はN-エチル-N-スルホプロピルアニリン(ALPS)である、1~4のいずれか1項に記載のキット。
[6] L-アスパラギン標準溶液をさらに含む、1~5のいずれか1項に記載のキット。
[7] 生じた色素の量を測定するためのLED光源を用いた装置を含む、1~6のいずれか1項に記載のキット。
[8] 下記工程1及び工程2を含む、L-アスパラギン酸、L-グルタミン、L-グルタミン酸、アスコルビン酸、及びエリソルビン酸からなる群より選択されるいずれかを含んでいてもよい試料中の、L-アスパラギンを測定する方法:
(工程1)容器内で、L-アスパラギン酸にアスパラギン酸トランスアミナーゼ及びα-ケトグルタル酸を作用させてL-グルタミン酸を生成させ、L-グルタミンにグルタミナーゼを作用させてL-グルタミン酸を生成させ、L-グルタミン酸にグルタミン酸オキシダーゼを作用させてα-ケトグルタル酸を生成させるとともに生成された過酸化水素にカタラーゼを作用させて分解し、アスコルビン酸又はエリソルビン酸にアスコルビン酸オキシダーゼを作用させてアスコルビン酸又はエリソルビン酸を分解する工程;
(工程2)(工程1)に続いて同じ容器内で行われる工程であって、該カタラーゼに、カタラーゼ失活剤を作用させてカタラーゼを失活させ、かつL-アスパラギンにアスパラギナーゼ、アスパラギン酸トランスアミナーゼ、α-ケトグルタル酸、L-グルタミン酸オキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、カプラー化合物及び新トリンダー試薬を作用させて色素を形成させる工程。
[9] 工程1及び工程2が、25~40℃で行われる、8に記載の方法。
本発明は、下記A液及びB液を含有する、試料中のL-アスパラギンを測定するためのキットを提供する:
(A液)アスパラギン酸トランスアミナーゼ、グルタミナーゼ、L-グルタミン酸オキシダーゼ、カタラーゼ、及びα-ケトグルタル酸を含む液
(B液)アスパラギナーゼ、ペルオキシダーゼ、及びカタラーゼ失活剤を含む液
ただし、A液及びB液は、いずれか一方がカプラー化合物を含み、他方が新トリンダー試薬を含む。好ましい態様の一つは、A液がカプラー化合物を含み、B液が新トリンダー試薬を含む。これにより溶液の安定性がより良くなる。
本発明には、酵素として、公知の、アスパラギン酸トランスアミナーゼ、グルタミナーゼ、L-グルタミン酸オキシダーゼ、カタラーゼ、アスパラギナーセ、ペルオキシダーゼ、及びアスコルビン酸オキシダーゼを使用することができる。
本発明では、新トリンダー試薬として公知のものを使用することができる。本発明に使用する新トリンダー試薬の例としては、N-エチル-N-(2-ヒドロキシ-3-スルホプロピル)-3-メチルアニリン・ナトリウム塩(TOOS)、N-エチル-N-(2-ヒドロキシ-3-スルホプロピル-3-メトキシアニリン(ADOS)、N-(2-ヒドロキシ-3-スルホプロピル)-3,5ジメトキシアニリン(HDAOS)、N-エチル-N-スルホプロピル-3-メトキシアニリン(ADPS)、N-エチル-N-スルホプロピルアニリン(ALPS)、N-エチル-N-スルホプロピル-3-メチルアニリン(TOPS)、N-エチル-N-(2-ヒドロキシ-3-スルホプロピル)-3,5-ジメチルアニリン(MAOS)、N-エチル-N-スルホプロピル-3,5-ジメトキシアニリン(DAPS)、N-(2-カルボキシエチル)-N-エチル-3,5-ジメトキシアニリン(CEDB)、N-(2-カルボキシエチル)-N-エチル-3-メトキシアニリン(CEMO)、N-エチル-N-(2-ヒドロキシ-3-スルホプロピル)-3,5ジメトキシ-4-フルオロアニリン(FDAOS)、N-エチル-N-スルホプロピル-3,5ジメトキシ-4-フルオロアニリン(FDAPS)を挙げることができる。N-エチル-N-(2-ヒドロキシ-3-スルホプロピル)-3-メチルアニリン・ナトリウム塩(TOOS)、N-エチル-N-(2-ヒドロキシ-3-スルホプロピル-3-メトキシアニリン(ADOS)、N-(2-ヒドロキシ-3-スルホプロピル)-3,5-ジメトキシアニリン(HDAOS)、N-エチル-N-スルホプロピル-3-メトキシアニリン(ADPS)、N-エチル-N-スルホプロピルアニリン(ALPS)、N-エチル-N-スルホプロピル-3-メチルアニリン(TOPS)、N-エチル-N-(2-ヒドロキシ-3-スルホプロピル)-3,5-ジメチルアニリン(MAOS)のいずれかを用いるのが好ましく、N-エチル-N-(2-ヒドロキシ-3-スルホプロピル)-3-メチルアニリン・ナトリウム塩(TOOS)を用いるのがより好ましい。
本発明では、カプラー化合物として公知のものを使用することができる。本発明では、新トリンダー試薬との組み合わせで発色を生じる化合物として任意のものを用いればよく、例として、4-アミノアンチピリン(4-AA)、バニリンジアミンスルホン酸、メチルベンズチアゾリノンヒドラゾン(MBTH)、スルホン化メチルベンズチアゾリノンヒドラゾン(SMBTH)、アミノジフェニルアミン-1-(4-スルホフェニル)-2,3-ジメチル-4-アミノ-5-ピラゾロン(CP2-4)、N-エチル-N-(2-ヒドロキシ-3-スルホプロピル)-m-トルイジン又はその誘導体を挙げることができる。4-アミノアンチピリン(4-AA)を用いるのが好ましい。
本発明のキットに含まれるA液は、酵素の安定化のために、トランスアミナーゼの補酵素であるピリドキサールリン酸をさらに含んでもよい。B液は防腐剤をさらに含んでもよい。防腐剤としては公知のものを使用することができる。例として、アジ化ナトリウム、プロクリン300、プロクリン950、クロラムフェニコールを挙げることができる。
A液の各酵素及びカプラー化合物等の含有量は、アスパラギン酸トランスアミナーゼ0.1~10U/mL、グルタミナーゼ0.05~3U/mL、グルタミン酸オキシダーゼ0.1~2U/mL、カタラーゼ500~2,000U/mL、カプラー化合物0.1~2.0μmol/mLの範囲にあることが好ましく、特にアスパラギン酸トランスアミナーゼ0.5~2U/mL、グルタミナーゼ0.2~1U/mL、グルタミン酸オキシダーゼ0.4~1U/mL、カタラーゼ1000~1,500U/mL、カプラー化合物0.2~1.0μmol/mLの範囲にあることがより好ましい。α-ケトグルタル酸は1~6μmol/mLとすることができ、2~3μmol/mLが好ましい。ピリドキサールリン酸は0.005~0.05μmol/mLとすることができ、0.01~0.02μmol/mLが好ましい。アスコルビン酸オキシダーゼは5~30U/mLとすることができ、10~20U/mLであることが好ましい。
本発明のキットは、上記A液及びB液のほかに、L-アスパラギン標準溶液を含んでいてもよい。L-アスパラギン標準溶液の濃度は、適宜とすることができるが、測定の際に検量線を作製するために系列希釈するとの観点からは、キットの測定上限前後の濃度であることが好ましい。具体的には、例えば100~200mg/mLとすることができ、100mg/mLにすることが好ましい。
本発明のキットはさらに、A液の採取用スポイト、B液の採取用スポイト、LEDを光源とする生じた色素の量を測定するための比色計、測定のためのプラスティック製セルを含んでいてもよい。
本発明の測定対象となる試料としては、L-アスパラギンを含有することが予想されるものであれば、特に限定されない。具体例として、農産物、酒やビールなどの酒類、食品原料、加工食品、細胞又は微生物等の培養液、血液、体液及び組織抽出物等の生体試料を挙げることができる。
本発明のキットによる試料中のL-アスパラギンを測定する反応は、下記工程1及び工程2を含む:
(工程1)容器内で、L-アスパラギン酸にアスパラギン酸トランスアミナーゼ及びα-ケトグルタル酸を作用させてL-グルタミン酸を生成させ、L-グルタミンにグルタミナーゼを作用させてL-グルタミン酸を生成させ、L-グルタミン酸にグルタミン酸オキシダーゼを作用させてα-ケトグルタル酸を生成させるとともに生成された過酸化水素にカタラーゼを作用させて分解し、アスコルビン酸又はエリソルビン酸にアスコルビン酸オキシダーゼを作用させてアスコルビン酸又はエリソルビン酸を分解する工程;
(工程2)(工程1)に続いて同じ容器内で行われる工程であって、該カタラーゼに、カタラーゼ失活剤を作用させてカタラーゼを失活させ、かつL-アスパラギンにアスパラギナーゼ、アスパラギン酸トランスアミナーゼ、α-ケトグルタル酸、L-グルタミン酸オキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、カプラー化合物及び新トリンダー試薬を作用させて色素を形成させる工程。
本発明においては、A液による工程1では、アスパラギン酸トランスアミナーゼとL-グルタミン酸オキシダーゼとの酵素サイクリング反応とカタラーゼ反応を共役させる。続く同一容器内でのB液による工程2では、カタラーゼ阻害剤の存在下、工程1で実施されたアスパラギン酸トランスアミナーゼとL-グルタミン酸オキシダーゼとの酵素サイクリング反応が再度実施され、これとパーオキシダーゼ及び発色剤による色素形成反応を共役させる。工程1と工程2で、複数の酵素の組み合わせによって、実質的には同時に起きる各酵素による逐次反応を応用したアミノ酸測定方法は、他に類を見ない。
L-アスパラギン測定キットのA液及びB液の組成例を表1に示す。なお、アスパラギナーゼとして、Novozymes社製Aspergillus oryzae由来の酵素液(商品名Acrylaway)を使用した。
本発明の測定キットは、L-アスパラギンから各種酵素反応によって最終的に色素を生成させる。同一容器内での逐次かつ同時反応により、L-アスパラギンから色素形成への転換反応が完全にエンドポイントに到達していることを確認するため、室温における発色のタイムコースを調べた。
L-アスパラギンの濃度が12.5~200mg/Lの各濃度の溶液を供試サンプルとして検量線を作成した。なお、測定は、以下のような手順に従って実施した。まず、1cm角ディスポセルに各濃度のL-アスパラギン溶液を0.05mL入れ、A液を0.5mL添加して室温で10分間反応後、B液を0.5mL添加して、さらに室温で10分間反応させた。反応終了後、吸光度表示タイプのLED比色計で555nmの吸光度を測定した。また、ブランクとして水を検体として吸光度を測定した。検量線はブランクを引いた値で作成した。
既存のアスパラギナーゼはL-グルタミンにも比較的高い反応を示すことが分かっている。A液中に、L-グルタミン分解のためのグルタミナーゼを添加することにより、L-グルタミンに対する反応を除去して、L-アスパラギンだけを特異的に測定できるかどうかを確認した。
SEQ ID NO:2 大腸菌K-12 MG1655株由来 アスパラギン酸トランスアミナーゼをコードする遺伝子の塩基配列(SEQ ID NO:2)
Claims (9)
- 下記A液及びB液を含有する、試料中のL-アスパラギンを測定するためのキット:
(A液)アスパラギン酸トランスアミナーゼ、グルタミナーゼ、グルタミン酸オキシダーゼ、カタラーゼ、及びα-ケトグルタル酸を含む液;
(B液)アスパラギナーゼ、ペルオキシダーゼ、及びカタラーゼ失活剤を含む液;
ただし、A液及びB液は、いずれか一方がカプラー化合物を含み、他方が新トリンダー試薬を含む。 - A液がさらにアスコルビン酸オキシダーゼを含む、請求項1に記載のキット。
- A液がカプラー化合物を含み、B液が新トリンダー試薬を含み、A液がさらにピリドキサールリン酸を含む、請求項1又は2に記載のキット。
- カプラー化合物が、4-アミノアンチピリンである、請求項1~3のいずれか1項に記載のキット。
- 新トリンダー試薬が、N-エチル-N-(2-ヒドロキシ-3-スルホプロピル)-3-メチルアニリン・ナトリウム塩(TOOS)、又はN-エチル-N-スルホプロピルアニリン(ALPS)である、請求項1~4のいずれか1項に記載のキット。
- L-アスパラギン標準溶液をさらに含む、請求項1~5のいずれか1項に記載のキット。
- 生じた色素の量を測定するためのLED光源を用いた装置を含む、請求項1~6のいずれか1項に記載のキット。
- 下記工程1及び工程2を含む、L-アスパラギン酸、L-グルタミン、L-グルタミン酸、アスコルビン酸、及びエリソルビン酸からなる群より選択されるいずれかを含んでいてもよい試料中の、L-アスパラギンを測定する方法:
(工程1)容器内で、L-アスパラギン酸にアスパラギン酸トランスアミナーゼ及びα-ケトグルタル酸を作用させてL-グルタミン酸を生成させ、L-グルタミンにグルタミナーゼを作用させてL-グルタミン酸を生成させ、L-グルタミン酸にグルタミン酸オキシダーゼを作用させてα-ケトグルタル酸を生成させるとともに生成された過酸化水素にカタラーゼを作用させて分解し、アスコルビン酸又はエリソルビン酸にアスコルビン酸オキシダーゼを作用させてアスコルビン酸又はエリソルビン酸を分解する工程;
(工程2)(工程1)に続いて同じ容器内で行われる工程であって、該カタラーゼに、カタラーゼ失活剤を作用させてカタラーゼを失活させ、かつL-アスパラギンにアスパラギナーゼ、アスパラギン酸トランスアミナーゼ、α-ケトグルタル酸、L-グルタミン酸オキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、カプラー化合物及び新トリンダー試薬を作用させて色素を形成させる工程。 - 工程1及び工程2が、25~40℃で行われる、請求項8に記載の方法。
Priority Applications (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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---|---|---|---|---|
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