JPH06253879A - グルクロン酸結合オリゴ糖の分離方法 - Google Patents
グルクロン酸結合オリゴ糖の分離方法Info
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- JPH06253879A JPH06253879A JP5064730A JP6473093A JPH06253879A JP H06253879 A JPH06253879 A JP H06253879A JP 5064730 A JP5064730 A JP 5064730A JP 6473093 A JP6473093 A JP 6473093A JP H06253879 A JPH06253879 A JP H06253879A
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Landscapes
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- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 糖転移反応により生成したグルクロン酸結合
オリゴ糖を反応溶液から効率的に分離する方法を提供す
る。 【構成】 乳糖とグルクロン酸とを原料とし、酵素を作
用させて糖転移反応を行わせ、一般式（Ｇａｌ）ｎ−Ｇ
ｌｃＡで表されるグルクロン酸結合オリゴ糖を生成させ
た後、これを採取するに際し、擬似移動床式クロマト分
離装置（ＳＭＢ）を用いる。最適な分離剤と溶離剤を選
択して装置の運転条件を設定することにより、グルクロ
ン酸結合オリゴ糖の効率的な分離が可能となる。（但
し、式中、Ｇａｌはガラクトースを、ＧｌｃＡはグルク
ロン酸をそれぞれ示し、ｎは１〜３の整数を示す。） 【効果】 従来の方法に比べ、グルクロン酸結合オリゴ
糖の分離に要する時間を大幅に短縮することができ、ま
た、塩溶液の使用量も大幅に低減できるので、生理効果
を有するグルクロン酸結合オリゴ糖を医薬、飲食品及び
飼料などの素材として安価に提供することが可能とな
る。
オリゴ糖を反応溶液から効率的に分離する方法を提供す
る。 【構成】 乳糖とグルクロン酸とを原料とし、酵素を作
用させて糖転移反応を行わせ、一般式（Ｇａｌ）ｎ−Ｇ
ｌｃＡで表されるグルクロン酸結合オリゴ糖を生成させ
た後、これを採取するに際し、擬似移動床式クロマト分
離装置（ＳＭＢ）を用いる。最適な分離剤と溶離剤を選
択して装置の運転条件を設定することにより、グルクロ
ン酸結合オリゴ糖の効率的な分離が可能となる。（但
し、式中、Ｇａｌはガラクトースを、ＧｌｃＡはグルク
ロン酸をそれぞれ示し、ｎは１〜３の整数を示す。） 【効果】 従来の方法に比べ、グルクロン酸結合オリゴ
糖の分離に要する時間を大幅に短縮することができ、ま
た、塩溶液の使用量も大幅に低減できるので、生理効果
を有するグルクロン酸結合オリゴ糖を医薬、飲食品及び
飼料などの素材として安価に提供することが可能とな
る。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、新規なグルクロン酸結
合オリゴ糖の分離方法に関する。この新規なグルクロン
酸結合オリゴ糖は、ミネラル吸収促進効果を有するの
で、医薬、飲食品及び飼料の素材として有用である。
合オリゴ糖の分離方法に関する。この新規なグルクロン
酸結合オリゴ糖は、ミネラル吸収促進効果を有するの
で、医薬、飲食品及び飼料の素材として有用である。
【０００２】
【従来の技術】先に、ミネラル吸収促進効果を有する新
規な物質として、乳糖とグルクロン酸とを原料とし、β
−ガラクトシダーゼあるいはβ−グルコシダーゼを作用
させてガラクトース転移反応を行わせて得られるグルク
ロン酸結合オリゴ糖が提案されている〔特願平４−３５
３４０９号〕。そして、この新規なグルクロン酸結合オ
リゴ糖を酵素反応で生成させる過程においては、目的と
するグルクロン酸結合オリゴ糖以外に、グルコース、ガ
ラクトース及びガラクトオリゴ糖などが生成する。した
がって、純度の高いグルクロン酸結合オリゴ糖を得るた
めには、これらのグルコース、ガラクトース及びガラク
トオリゴ糖や残存する原料の乳糖及びグルクロン酸を除
去する必要が生じる。
規な物質として、乳糖とグルクロン酸とを原料とし、β
−ガラクトシダーゼあるいはβ−グルコシダーゼを作用
させてガラクトース転移反応を行わせて得られるグルク
ロン酸結合オリゴ糖が提案されている〔特願平４−３５
３４０９号〕。そして、この新規なグルクロン酸結合オ
リゴ糖を酵素反応で生成させる過程においては、目的と
するグルクロン酸結合オリゴ糖以外に、グルコース、ガ
ラクトース及びガラクトオリゴ糖などが生成する。した
がって、純度の高いグルクロン酸結合オリゴ糖を得るた
めには、これらのグルコース、ガラクトース及びガラク
トオリゴ糖や残存する原料の乳糖及びグルクロン酸を除
去する必要が生じる。
【０００３】上記の酵素反応溶液から、一般式（Ｇａ
ｌ）ｎ−ＧｌｃＡ（但し、式中、Ｇａｌはガラクトース
を、ＧｌｃＡはグルクロン酸をそれぞれ示し、ｎは１〜
３の整数を示す。）で表されるグルクロン酸結合オリゴ
糖を分離するには、まず、グルクロン酸及びグルクロン
酸結合オリゴ糖を含む酸性糖画分とグルコース、ガラク
トース、乳糖及びガラクトオリゴ糖を含む中性糖画分と
を分離した後、さらにグルクロン酸及びグルクロン酸結
合オリゴ糖を含む酸性糖画分からグルクロン酸を除去す
るという手順となる。従来、酸性糖と中性糖を分離する
方法としては、酸性糖をアニオン交換樹脂に吸着させた
後、塩溶液で溶出させる吸着分離法が用いられている。
しかし、この吸着分離法では、工業的規模で大量かつ効
率的に分離を行うのに限界があり、また、溶出に際して
高濃度の塩溶液を用いる必要があり、その後の脱塩処理
に多大な負担を要するという問題もあった。
ｌ）ｎ−ＧｌｃＡ（但し、式中、Ｇａｌはガラクトース
を、ＧｌｃＡはグルクロン酸をそれぞれ示し、ｎは１〜
３の整数を示す。）で表されるグルクロン酸結合オリゴ
糖を分離するには、まず、グルクロン酸及びグルクロン
酸結合オリゴ糖を含む酸性糖画分とグルコース、ガラク
トース、乳糖及びガラクトオリゴ糖を含む中性糖画分と
を分離した後、さらにグルクロン酸及びグルクロン酸結
合オリゴ糖を含む酸性糖画分からグルクロン酸を除去す
るという手順となる。従来、酸性糖と中性糖を分離する
方法としては、酸性糖をアニオン交換樹脂に吸着させた
後、塩溶液で溶出させる吸着分離法が用いられている。
しかし、この吸着分離法では、工業的規模で大量かつ効
率的に分離を行うのに限界があり、また、溶出に際して
高濃度の塩溶液を用いる必要があり、その後の脱塩処理
に多大な負担を要するという問題もあった。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、乳糖と
グルクロン酸とを原料とし、β−ガラクトシダーゼある
いはβ−グルコシダーゼを作用させてガラクトース転移
反応を行わせ、グルクロン酸結合オリゴ糖を生成させた
後、これを採取するに際し、従来の吸着分離法に代わる
効率的なグルクロン酸結合オリゴ糖の分離法について検
討を行ったところ、擬似移動床式クロマト分離装置（以
下ＳＭＢと略記する）を用いることにより、グルクロン
酸結合オリゴ糖を効率的に分離できることを見出し、本
発明を成すに至った。したがって、本発明は、乳糖とグ
ルクロン酸とを原料とし、β−ガラクトシダーゼあるい
はβ−グルコシダーゼを作用させてガラクトース転移反
応を行わせ、グルクロン酸結合オリゴ糖を生成させた
後、これを採取するに際し、ＳＭＢを用いてグルクロン
酸結合オリゴ糖を分離する方法を提供することを課題と
する。
グルクロン酸とを原料とし、β−ガラクトシダーゼある
いはβ−グルコシダーゼを作用させてガラクトース転移
反応を行わせ、グルクロン酸結合オリゴ糖を生成させた
後、これを採取するに際し、従来の吸着分離法に代わる
効率的なグルクロン酸結合オリゴ糖の分離法について検
討を行ったところ、擬似移動床式クロマト分離装置（以
下ＳＭＢと略記する）を用いることにより、グルクロン
酸結合オリゴ糖を効率的に分離できることを見出し、本
発明を成すに至った。したがって、本発明は、乳糖とグ
ルクロン酸とを原料とし、β−ガラクトシダーゼあるい
はβ−グルコシダーゼを作用させてガラクトース転移反
応を行わせ、グルクロン酸結合オリゴ糖を生成させた
後、これを採取するに際し、ＳＭＢを用いてグルクロン
酸結合オリゴ糖を分離する方法を提供することを課題と
する。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明では、乳糖とグル
クロン酸とを原料とし、β−ガラクトシダーゼあるいは
β−グルコシダーゼを作用させてガラクトース転移反応
を行わせ、グルクロン酸結合オリゴ糖を生成させた後、
これを採取するに際し、ＳＭＢを用いてグルクロン酸結
合オリゴ糖を分離する。
クロン酸とを原料とし、β−ガラクトシダーゼあるいは
β−グルコシダーゼを作用させてガラクトース転移反応
を行わせ、グルクロン酸結合オリゴ糖を生成させた後、
これを採取するに際し、ＳＭＢを用いてグルクロン酸結
合オリゴ糖を分離する。
【０００６】本発明に用いるＳＭＢは、分離剤を充填し
た数塔のカラムを用い、供給液及び分離液の注入口ある
いは分離成分の取出口を半連続的に移動させることによ
り、成分を分離する装置であって、分離剤と溶離液を適
宜選択し、ＳＭＢの運転条件を適正化することにより、
効率的に成分を分離することができるものである。
た数塔のカラムを用い、供給液及び分離液の注入口ある
いは分離成分の取出口を半連続的に移動させることによ
り、成分を分離する装置であって、分離剤と溶離液を適
宜選択し、ＳＭＢの運転条件を適正化することにより、
効率的に成分を分離することができるものである。
【０００７】本発明では、乳糖とグルクロン酸とを原料
とし、β−ガラクトシダーゼあるいはβ−グルコシダー
ゼを作用させてガラクトース転移反応を行わせ、グルク
ロン酸結合オリゴ糖を生成させた後、このＳＭＢを用
い、まず、グルコース、ガラクトース、乳糖及びガラク
トオリゴ糖を含む中性糖画分とグルクロン酸及びグルク
ロン酸結合オリゴ糖を含む酸性糖画分とに分離する。こ
の際、強塩基性アニオン交換樹脂、好ましくは強塩基性
アニオン交換樹脂Ｉ型の樹脂を分離剤として用いるとよ
い。なお、強塩基性アニオン交換樹脂Ｉ型の樹脂として
は、アンバーライト ＸＴ−５０２１（オルガノ（株）
製）、Ｄｏｗｅｘ １×４（ダウ・ケミカル日本（株）
製）、ダイヤイオン ＳＡ１１Ａ（三菱化成工業（株）
製）などが市販されている。
とし、β−ガラクトシダーゼあるいはβ−グルコシダー
ゼを作用させてガラクトース転移反応を行わせ、グルク
ロン酸結合オリゴ糖を生成させた後、このＳＭＢを用
い、まず、グルコース、ガラクトース、乳糖及びガラク
トオリゴ糖を含む中性糖画分とグルクロン酸及びグルク
ロン酸結合オリゴ糖を含む酸性糖画分とに分離する。こ
の際、強塩基性アニオン交換樹脂、好ましくは強塩基性
アニオン交換樹脂Ｉ型の樹脂を分離剤として用いるとよ
い。なお、強塩基性アニオン交換樹脂Ｉ型の樹脂として
は、アンバーライト ＸＴ−５０２１（オルガノ（株）
製）、Ｄｏｗｅｘ １×４（ダウ・ケミカル日本（株）
製）、ダイヤイオン ＳＡ１１Ａ（三菱化成工業（株）
製）などが市販されている。
【０００８】溶離液としては、後に行う脱塩が容易なよ
うに塩化ナトリウムや塩化カリウムなどの塩を０．１〜
０．５Ｍの濃度となるよう水に溶解した塩水溶液を用い
るとよい。なお、この溶離液の塩濃度が０．１Ｍ未満で
は酸性糖画分が移動せず、また、０．５Ｍを超えると酸
性糖画分と中性糖画分との移動速度の差が僅かとなり酸
性糖画分と中性糖画分とを分離することができなくな
る。
うに塩化ナトリウムや塩化カリウムなどの塩を０．１〜
０．５Ｍの濃度となるよう水に溶解した塩水溶液を用い
るとよい。なお、この溶離液の塩濃度が０．１Ｍ未満で
は酸性糖画分が移動せず、また、０．５Ｍを超えると酸
性糖画分と中性糖画分との移動速度の差が僅かとなり酸
性糖画分と中性糖画分とを分離することができなくな
る。
【０００９】次に、ＳＭＢで中性糖を分離して得られた
酸性糖画分を電気透析などによって脱塩した後、グルク
ロン酸とグルクロン酸結合オリゴ糖とを分離する。この
際、分離剤としては、Ｎａ型強酸性カチオン交換樹脂を
用いることができる。また、溶離液として塩化ナトリウ
ムや塩化カリウムなどの塩を適当な濃度となるよう水に
溶解した塩水溶液などを用いることにより、強塩基性ア
ニオン交換樹脂を分離剤として用いることもできる。分
離剤として強塩基性アニオン交換樹脂を用いた場合は、
Ｎａ型強酸性カチオン交換樹脂を用いた場合に比べて酸
性糖どうしの分離が良いので、同様の純度のものを得よ
うとする場合には、数倍多く処理ができる。なお、分離
剤として強塩基性アニオン交換樹脂を用いた場合は、グ
ルクロン酸結合オリゴ糖画分を分離した後、電気透析な
どによってその画分の脱塩を行う必要がある。
酸性糖画分を電気透析などによって脱塩した後、グルク
ロン酸とグルクロン酸結合オリゴ糖とを分離する。この
際、分離剤としては、Ｎａ型強酸性カチオン交換樹脂を
用いることができる。また、溶離液として塩化ナトリウ
ムや塩化カリウムなどの塩を適当な濃度となるよう水に
溶解した塩水溶液などを用いることにより、強塩基性ア
ニオン交換樹脂を分離剤として用いることもできる。分
離剤として強塩基性アニオン交換樹脂を用いた場合は、
Ｎａ型強酸性カチオン交換樹脂を用いた場合に比べて酸
性糖どうしの分離が良いので、同様の純度のものを得よ
うとする場合には、数倍多く処理ができる。なお、分離
剤として強塩基性アニオン交換樹脂を用いた場合は、グ
ルクロン酸結合オリゴ糖画分を分離した後、電気透析な
どによってその画分の脱塩を行う必要がある。
【００１０】得られたグルクロン酸結合オリゴ糖画分
は、常法に従って濃縮、乾燥し、グルクロン酸結合オリ
ゴ糖粉末とする。また、必要に応じ、例えば、カラムに
充填した活性炭にグルクロン酸結合オリゴ糖画分を通液
し、水でグルクロン酸を溶出させた後、２５％濃度のエ
タノール溶液でグルクロン酸結合オリゴ糖を溶出させる
精製法、あるいは、ゲル濾過による精製法などを用いて
精製し、純度を高めることもできる。次に本発明の実施
例を挙げて具体的に説明する。
は、常法に従って濃縮、乾燥し、グルクロン酸結合オリ
ゴ糖粉末とする。また、必要に応じ、例えば、カラムに
充填した活性炭にグルクロン酸結合オリゴ糖画分を通液
し、水でグルクロン酸を溶出させた後、２５％濃度のエ
タノール溶液でグルクロン酸結合オリゴ糖を溶出させる
精製法、あるいは、ゲル濾過による精製法などを用いて
精製し、純度を高めることもできる。次に本発明の実施
例を挙げて具体的に説明する。
【００１１】
【実施例１】グルクロン酸ナトリウム２８０ｇと乳糖１
ｋｇを１，２５０ｍｌの水で溶解した溶液に市販のバチ
ルス・サーキュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｉｒｃｕ
ｌａｎｓ）由来のβ−ガラクトシダーゼ１．３７５ｇを
添加し、ｐＨ６．２、温度４０℃の条件で１５．５時間
反応させた後、９０℃で５分間の加熱を行って酵素を失
活させ、グルクロン酸結合オリゴ糖含有溶液を得た。
ｋｇを１，２５０ｍｌの水で溶解した溶液に市販のバチ
ルス・サーキュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｉｒｃｕ
ｌａｎｓ）由来のβ−ガラクトシダーゼ１．３７５ｇを
添加し、ｐＨ６．２、温度４０℃の条件で１５．５時間
反応させた後、９０℃で５分間の加熱を行って酵素を失
活させ、グルクロン酸結合オリゴ糖含有溶液を得た。
【００１２】このグルクロン酸結合オリゴ糖含有溶液を
０．３Ｍ塩化ナトリウム溶液で固形率１０％となるよう
希釈してＳＭＢ供給液とした。また、０．３Ｍ塩化ナト
リウム溶液をＳＭＢ溶離液として用いた。ＳＭＢは、カ
ラムの直径が２５ｍｍ、長さが４６０ｍｍの８塔型で、
各々アニオン交換樹脂Ｄｏｗｅｘ １×４（ダウ・ケミ
カル（株）製）を充填した。ＳＭＢの運転条件は、ＳＭ
Ｂ供給液供給量５．９ｍｌ／分、ＳＭＢ溶離液供給量１
０．４ｍｌ／分、エキストラクト抜き出し量７．５ｍｌ
／分、ラフィネート抜き出し量８．７ｍｌ／分とし、カ
ラム温度５５℃、ステップ時間１５．６７分とした。
０．３Ｍ塩化ナトリウム溶液で固形率１０％となるよう
希釈してＳＭＢ供給液とした。また、０．３Ｍ塩化ナト
リウム溶液をＳＭＢ溶離液として用いた。ＳＭＢは、カ
ラムの直径が２５ｍｍ、長さが４６０ｍｍの８塔型で、
各々アニオン交換樹脂Ｄｏｗｅｘ １×４（ダウ・ケミ
カル（株）製）を充填した。ＳＭＢの運転条件は、ＳＭ
Ｂ供給液供給量５．９ｍｌ／分、ＳＭＢ溶離液供給量１
０．４ｍｌ／分、エキストラクト抜き出し量７．５ｍｌ
／分、ラフィネート抜き出し量８．７ｍｌ／分とし、カ
ラム温度５５℃、ステップ時間１５．６７分とした。
【００１３】以上の条件でグルクロン酸結合オリゴ糖含
有溶液７．１ｌを処理したところ、ラフィネートにグル
コース、ガラクトース、乳糖及びガラクトオリゴ糖を含
む中性糖画分１０．４ｌとエキストラクトにグルクロン
酸及びグルクロン酸結合オリゴ糖を含む酸性糖画分９．
０ｌをそれぞれ得た。次に、このエキストラクをロータ
リー・エバポレーターで３ｌとなるまで濃縮した後、電
気透析装置（ＴＳ−２型、徳山曹達（株）製）を用いて
脱塩し、酸性糖画分２．６ｌを得た。この酸性糖画分に
は、グルクロン酸１９％及びグルクロン酸結合オリゴ糖
６％が含まれており、グルコース、ガラクトース、乳糖
及びガラクトオリゴ糖を含む中性糖は検出されなかっ
た。
有溶液７．１ｌを処理したところ、ラフィネートにグル
コース、ガラクトース、乳糖及びガラクトオリゴ糖を含
む中性糖画分１０．４ｌとエキストラクトにグルクロン
酸及びグルクロン酸結合オリゴ糖を含む酸性糖画分９．
０ｌをそれぞれ得た。次に、このエキストラクをロータ
リー・エバポレーターで３ｌとなるまで濃縮した後、電
気透析装置（ＴＳ−２型、徳山曹達（株）製）を用いて
脱塩し、酸性糖画分２．６ｌを得た。この酸性糖画分に
は、グルクロン酸１９％及びグルクロン酸結合オリゴ糖
６％が含まれており、グルコース、ガラクトース、乳糖
及びガラクトオリゴ糖を含む中性糖は検出されなかっ
た。
【００１４】このようにして得られたグルクロン酸及び
グルクロン酸結合オリゴ糖を含む酸性糖画分をイオン交
換水で固形率１０％となるよう希釈してＳＭＢ供給液と
した。また、イオン交換水をＳＭＢ溶離液として用い
た。ＳＭＢは、カラムの直径が２５ｍｍ、長さが４６０
ｍｍの８塔型で、各々カチオン交換樹脂ＵＢＫ５１０ｌ
（三菱化成工業（株）製）を充填した。ＳＭＢの運転条
件は、ＳＭＢ供給液供給量０．５ｍｌ／分、ＳＭＢ溶離
液供給量２．１ｍｌ／分、エキストラクト抜き出し量
１．３ｍｌ／分、ラフィネート抜き出し量１．３ｍｌ／
分とし、カラム温度５０℃、ステップ時間５．５１分と
した。
グルクロン酸結合オリゴ糖を含む酸性糖画分をイオン交
換水で固形率１０％となるよう希釈してＳＭＢ供給液と
した。また、イオン交換水をＳＭＢ溶離液として用い
た。ＳＭＢは、カラムの直径が２５ｍｍ、長さが４６０
ｍｍの８塔型で、各々カチオン交換樹脂ＵＢＫ５１０ｌ
（三菱化成工業（株）製）を充填した。ＳＭＢの運転条
件は、ＳＭＢ供給液供給量０．５ｍｌ／分、ＳＭＢ溶離
液供給量２．１ｍｌ／分、エキストラクト抜き出し量
１．３ｍｌ／分、ラフィネート抜き出し量１．３ｍｌ／
分とし、カラム温度５０℃、ステップ時間５．５１分と
した。
【００１５】以上の条件でグルクロン酸及びグルクロン
酸結合オリゴ糖を含む酸性糖画分２．５ｌを処理したと
ころ、ラフィネートにグルクロン酸結合オリゴ糖画分
６．５ｌとエキストラクトにグルクロン酸画分６．５ｌ
をそれぞれ得た。次に、このラフィネートをロータリー
・エバポレーターで３ｌとなるまで濃縮してグルクロン
酸結合オリゴ糖画分を得た。この画分には、グルクロン
酸結合オリゴ糖が１．５９％含まれていた。そしてさら
に、このグルクロン酸結合オリゴ糖画分を減圧濃縮した
後、凍結乾燥して純度９９％のグルクロン酸結合オリゴ
糖白色粉末４２ｇを得た。
酸結合オリゴ糖を含む酸性糖画分２．５ｌを処理したと
ころ、ラフィネートにグルクロン酸結合オリゴ糖画分
６．５ｌとエキストラクトにグルクロン酸画分６．５ｌ
をそれぞれ得た。次に、このラフィネートをロータリー
・エバポレーターで３ｌとなるまで濃縮してグルクロン
酸結合オリゴ糖画分を得た。この画分には、グルクロン
酸結合オリゴ糖が１．５９％含まれていた。そしてさら
に、このグルクロン酸結合オリゴ糖画分を減圧濃縮した
後、凍結乾燥して純度９９％のグルクロン酸結合オリゴ
糖白色粉末４２ｇを得た。
【００１６】
【実施例２】実施例１に記載した方法で得られたグルク
ロン酸１９％及びグルクロン酸結合オリゴ糖６％を含む
酸性糖画分を０．５Ｍ塩化ナトリウム水溶液で固形率１
０％となるよう希釈してＳＭＢ供給液とした。また、
０．５Ｍ塩化ナトリウム水溶液をＳＭＢ溶離液として用
いた。ＳＭＢは、カラムの直径が２５ｍｍ、長さが４６
０ｍｍの８塔型で、各々アニオン交換樹脂Ｄｏｗｅｘ
１×４（ダウ・ケミカル（株）製）を充填した。ＳＭＢ
の運転条件は、ＳＭＢ供給液供給量４．５６ｍｌ／分、
ＳＭＢ溶離液供給量７．８３ｍｌ／分、エキストラクト
抜き出し量６．１９ｍｌ／分、ラフィネート抜き出し量
６．１９ｍｌ／分とし、カラム温度５０℃、ステップ時
間１１．６４分とした。
ロン酸１９％及びグルクロン酸結合オリゴ糖６％を含む
酸性糖画分を０．５Ｍ塩化ナトリウム水溶液で固形率１
０％となるよう希釈してＳＭＢ供給液とした。また、
０．５Ｍ塩化ナトリウム水溶液をＳＭＢ溶離液として用
いた。ＳＭＢは、カラムの直径が２５ｍｍ、長さが４６
０ｍｍの８塔型で、各々アニオン交換樹脂Ｄｏｗｅｘ
１×４（ダウ・ケミカル（株）製）を充填した。ＳＭＢ
の運転条件は、ＳＭＢ供給液供給量４．５６ｍｌ／分、
ＳＭＢ溶離液供給量７．８３ｍｌ／分、エキストラクト
抜き出し量６．１９ｍｌ／分、ラフィネート抜き出し量
６．１９ｍｌ／分とし、カラム温度５０℃、ステップ時
間１１．６４分とした。
【００１７】以上の条件でグルクロン酸及びグルクロン
酸結合オリゴ糖を含む酸性糖画分４．０ｌを処理したと
ころ、ラフィネートにグルクロン酸結合オリゴ糖画分
５．４３ｌとエキストラクトにグルクロン酸画分５．４
３ｌをそれぞれ得た。次に、このラフィネートをロータ
リー・エバポレーターで３ｌとなるまで濃縮した後、電
気透析装置（ＴＳ−２型、徳山曹達（株）製）を用いて
脱塩し、グルクロン酸結合オリゴ糖画分２．６ｌを得
た。この画分には、グルクロン酸結合オリゴ糖が２．９
６％含まれていた。そして、このグルクロン酸結合オリ
ゴ糖画分を減圧濃縮した後、凍結乾燥して純度９９％の
グルクロン酸結合オリゴ糖白色粉末６９ｇを得た。
酸結合オリゴ糖を含む酸性糖画分４．０ｌを処理したと
ころ、ラフィネートにグルクロン酸結合オリゴ糖画分
５．４３ｌとエキストラクトにグルクロン酸画分５．４
３ｌをそれぞれ得た。次に、このラフィネートをロータ
リー・エバポレーターで３ｌとなるまで濃縮した後、電
気透析装置（ＴＳ−２型、徳山曹達（株）製）を用いて
脱塩し、グルクロン酸結合オリゴ糖画分２．６ｌを得
た。この画分には、グルクロン酸結合オリゴ糖が２．９
６％含まれていた。そして、このグルクロン酸結合オリ
ゴ糖画分を減圧濃縮した後、凍結乾燥して純度９９％の
グルクロン酸結合オリゴ糖白色粉末６９ｇを得た。
【００１８】
【比較例】ここでは、アニオン交換樹脂Ｄｏｗｅｘ １
×４（ダウ・ケミカル（株）製）を用い、中性糖画分と
酸性糖画分との分離について、従来法のカラムクロマト
グラフィーと本発明のＳＭＢ法との比較を行った。従来
法のカラムクロマトグラフィーの場合、原液量３００ｍ
ｌの処理に樹脂１ｌ当たり、洗浄水として水３ｌ、脱離
液として０．５Ｍ塩化ナトリウム水溶液３ｌ及び再生剤
として１Ｍ塩化ナトリウム水溶液３ｌが必要であり、処
理時間も約７時間を要した。一方、本発明のＳＭＢ法の
場合、原液量３００ｍｌの処理に樹脂１ｌ当たり、溶離
液として０．３Ｍ塩化ナトリウム水溶液５３０ｍｌを用
いるのみであり、処理時間も１．５時間程度で済んだ。
したがって、本発明のＳＭＢ法を用いることによって処
理効率が飛躍的に高まり、しかも、塩化ナトリウムの使
用量を少なく抑えることができるので、工業的規模でグ
ルクロン酸結合オリゴ糖を製造する場合に有利である。
×４（ダウ・ケミカル（株）製）を用い、中性糖画分と
酸性糖画分との分離について、従来法のカラムクロマト
グラフィーと本発明のＳＭＢ法との比較を行った。従来
法のカラムクロマトグラフィーの場合、原液量３００ｍ
ｌの処理に樹脂１ｌ当たり、洗浄水として水３ｌ、脱離
液として０．５Ｍ塩化ナトリウム水溶液３ｌ及び再生剤
として１Ｍ塩化ナトリウム水溶液３ｌが必要であり、処
理時間も約７時間を要した。一方、本発明のＳＭＢ法の
場合、原液量３００ｍｌの処理に樹脂１ｌ当たり、溶離
液として０．３Ｍ塩化ナトリウム水溶液５３０ｍｌを用
いるのみであり、処理時間も１．５時間程度で済んだ。
したがって、本発明のＳＭＢ法を用いることによって処
理効率が飛躍的に高まり、しかも、塩化ナトリウムの使
用量を少なく抑えることができるので、工業的規模でグ
ルクロン酸結合オリゴ糖を製造する場合に有利である。
【００１９】
【発明の効果】このように、本発明の方法を用いること
により、グルクロン酸結合オリゴ糖を含む酵素反応液か
ら、生成したグルクロン酸結合オリゴ糖を、効率的に分
離することができる。したがって、ミネラル吸収促進効
果などの生理効果を有するグルクロン酸結合オリゴ糖を
医薬、飲食品及び飼料の素材として、安価に提供するこ
とができる。
により、グルクロン酸結合オリゴ糖を含む酵素反応液か
ら、生成したグルクロン酸結合オリゴ糖を、効率的に分
離することができる。したがって、ミネラル吸収促進効
果などの生理効果を有するグルクロン酸結合オリゴ糖を
医薬、飲食品及び飼料の素材として、安価に提供するこ
とができる。
Claims (5)
- 【請求項１】 乳糖とグルクロン酸とを原料とし、β−
ガラクトシダーゼあるいはβ−グルコシダーゼを作用さ
せてガラクトース転移反応を行わせ、一般式（Ｇａｌ）
ｎ−ＧｌｃＡで表されるグルクロン酸結合オリゴ糖を生
成させた後、これを採取する方法であって、以下の工程
からなることを特徴とするグルクロン酸結合オリゴ糖の
分離方法。（但し、式中、Ｇａｌはガラクトースを、Ｇ
ｌｃＡはグルクロン酸をそれぞれ示し、ｎは１〜３の整
数を示す。） （１）酵素反応液を擬似移動床式クロマト分離装置に供
給してグルクロン酸及びグルクロン酸結合オリゴ糖を含
む画分を分離、回収する工程。 （２）回収したグルクロン酸及びグルクロン酸結合オリ
ゴ糖を含む画分を脱塩する工程。 （３）脱塩したグルクロン酸及びグルクロン酸結合オリ
ゴ糖を含む画分を擬似移動床式クロマト分離装置に供給
してグルクロン酸結合オリゴ糖を含む画分を分離、回収
する工程。 - 【請求項２】 酵素反応液を擬似移動床式クロマト分離
装置に供給してグルクロン酸及びグルクロン酸結合オリ
ゴ糖を含む画分を分離、回収するに際し、分離剤として
強塩基性アニオン交換樹脂を用い、溶離液として塩溶液
を用いる請求項１記載のグルクロン酸結合オリゴ糖の分
離方法。 - 【請求項３】 溶離液として用いる塩溶液の塩濃度が
０．１〜０．５Ｍである請求項２記載のグルクロン酸結
合オリゴ糖の分離方法。 - 【請求項４】 脱塩したグルクロン酸及びグルクロン酸
結合オリゴ糖を含む画分を擬似移動床式クロマト分離装
置に供給してグルクロン酸結合オリゴ糖を含む画分を分
離、回収するに際し、分離剤としてＮａ型強酸性カチオ
ン交換樹脂を用い、溶離液として水を用いる請求項１乃
至３のいずれかに記載のグルクロン酸結合オリゴ糖の分
離方法。 - 【請求項５】 脱塩したグルクロン酸及びグルクロン酸
結合オリゴ糖を含む画分を擬似移動床式クロマト分離装
置に供給してグルクロン酸結合オリゴ糖を含む画分を分
離、回収するに際し、分離剤として強塩基性アニオン交
換樹脂を用い、溶離液として塩溶液を用いる請求項１乃
至３のいずれかに記載のグルクロン酸結合オリゴ糖の分
離方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5064730A JPH06253879A (ja) | 1993-03-01 | 1993-03-01 | グルクロン酸結合オリゴ糖の分離方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5064730A JPH06253879A (ja) | 1993-03-01 | 1993-03-01 | グルクロン酸結合オリゴ糖の分離方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06253879A true JPH06253879A (ja) | 1994-09-13 |
Family
ID=13266565
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5064730A Pending JPH06253879A (ja) | 1993-03-01 | 1993-03-01 | グルクロン酸結合オリゴ糖の分離方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06253879A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2010090160A (ja) * | 1997-02-13 | 2010-04-22 | Tate & Lyle Plc | 塩素化スクロースのクロマトグラフィー精製 |
| JP2016535724A (ja) * | 2013-10-04 | 2016-11-17 | イェンネワイン バイオテクノロジー ゲーエムベーハーＪ | 擬似移動床クロマトグラフィーを用いる中性ヒトミルクオリゴ糖の精製方法 |
-
1993
- 1993-03-01 JP JP5064730A patent/JPH06253879A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2010090160A (ja) * | 1997-02-13 | 2010-04-22 | Tate & Lyle Plc | 塩素化スクロースのクロマトグラフィー精製 |
| JP2016535724A (ja) * | 2013-10-04 | 2016-11-17 | イェンネワイン バイオテクノロジー ゲーエムベーハーＪ | 擬似移動床クロマトグラフィーを用いる中性ヒトミルクオリゴ糖の精製方法 |
| US10435427B2 (en) | 2013-10-04 | 2019-10-08 | Jennewein Biotechnologie Gmbh | Process for purification of neutral human milk oligosaccharide using simulated moving bed chromatography |
| US11168105B2 (en) | 2013-10-04 | 2021-11-09 | Jennewein Biotechnologie Gmbh | Process for purification of neutral human milk oligosaccharide using simulated moving bed chromatography |
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