JPH0625011A - ヒト尿性トリプシンインヒビター含有液状製剤及びその製造方法 - Google Patents
ヒト尿性トリプシンインヒビター含有液状製剤及びその製造方法Info
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- JPH0625011A JPH0625011A JP4203211A JP20321192A JPH0625011A JP H0625011 A JPH0625011 A JP H0625011A JP 4203211 A JP4203211 A JP 4203211A JP 20321192 A JP20321192 A JP 20321192A JP H0625011 A JPH0625011 A JP H0625011A
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- Japan
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- trypsin inhibitor
- liquid preparation
- huti
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- preparation
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 本発明の目的は、保存時の安定性に優れたト
リプシンインヒビター含有液状製剤及びその製造方法を
提供することにある。 【構成】 本発明は、低イオン強度、かつｐＨ７以下で
あることを特徴とするヒト尿性トリプシンインヒビター
含有液状製剤である。ヒト尿性トリプシンインヒビター
含有溶液をｐＨ５〜７で６０〜１００℃に加熱後に、そ
の温度を維持しつつ、ｐＨを２〜５に下げて１〜３０分
間加熱処理することからなる前記液状製剤の製造方法。 【効果】 本発明は、トリプシンインヒビターの長期保
存時の安定性を改善すると共に特に、重合による高分子
体および分解による低分子体の生成を抑えた製剤を調製
することができる。
リプシンインヒビター含有液状製剤及びその製造方法を
提供することにある。 【構成】 本発明は、低イオン強度、かつｐＨ７以下で
あることを特徴とするヒト尿性トリプシンインヒビター
含有液状製剤である。ヒト尿性トリプシンインヒビター
含有溶液をｐＨ５〜７で６０〜１００℃に加熱後に、そ
の温度を維持しつつ、ｐＨを２〜５に下げて１〜３０分
間加熱処理することからなる前記液状製剤の製造方法。 【効果】 本発明は、トリプシンインヒビターの長期保
存時の安定性を改善すると共に特に、重合による高分子
体および分解による低分子体の生成を抑えた製剤を調製
することができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はヒト尿性トリプシンイン
ヒビターの液状製剤及びその製造方法に関する。
ヒビターの液状製剤及びその製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】ヒト尿性トリプシンインヒビター（ヒト
尿由来トリプシンインヒビター、以下ＨＵＴＩ）は、Ｐ
ｒｏｋｓｃｈらによりヒト尿より初めてｉｎｔａｃｔな
形で分離・精製された（Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅ
ｄ．，７９，４９１，（１９７２））。同分子はシアル
酸及び中性ヘキソースを数十％含む、分子量約６７ｋｄ
（ゲル濾過分析）、等電点２〜３の糖タンパク質である
（Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．，７９，４９１，
（１９７２）、日泌尿会誌、７４，１６２７，（１９８
３）、Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，
１２，３８９，（１９８６）、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏ
ｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１０９，１２４
７，（１９８２））。
尿由来トリプシンインヒビター、以下ＨＵＴＩ）は、Ｐ
ｒｏｋｓｃｈらによりヒト尿より初めてｉｎｔａｃｔな
形で分離・精製された（Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅ
ｄ．，７９，４９１，（１９７２））。同分子はシアル
酸及び中性ヘキソースを数十％含む、分子量約６７ｋｄ
（ゲル濾過分析）、等電点２〜３の糖タンパク質である
（Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．，７９，４９１，
（１９７２）、日泌尿会誌、７４，１６２７，（１９８
３）、Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，
１２，３８９，（１９８６）、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏ
ｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１０９，１２４
７，（１９８２））。
【０００３】このＨＵＴＩは、膵酵素のトリプシン及び
キモトリプシンを特に強く阻害するが、ＡＴ−III やＦ
ＯＹと異なり凝固・線溶系の酵素を全く或は弱くしか阻
害しない（日薬理会誌、８１，２３５，（１９８
３））。また、ライソゾーム膜の安定化効果を持つこと
からライソゾーム酵素の産生を抑制したり、心筋抑制因
子の産生抑制作用を有すると言われている（麻酔、３
３，１３７，（１９８４））。
キモトリプシンを特に強く阻害するが、ＡＴ−III やＦ
ＯＹと異なり凝固・線溶系の酵素を全く或は弱くしか阻
害しない（日薬理会誌、８１，２３５，（１９８
３））。また、ライソゾーム膜の安定化効果を持つこと
からライソゾーム酵素の産生を抑制したり、心筋抑制因
子の産生抑制作用を有すると言われている（麻酔、３
３，１３７，（１９８４））。
【０００４】以上の活性・作用を有することから、急性
膵炎や急性循環不全への有用性が期待され、持田製薬
（株）により初めて製剤化され、１９８５年に商品名ミ
ラクリッドとして発売されるに到った（持田製薬
（株）、ミラクリッド添付文書（１９８５）） 本製剤は、臨床的に急性膵炎及び手術時やエンドトキシ
ンショック時に対処する重篤な副作用の見られない製剤
として使われており、近年の売上は１００億円に達して
いる。
膵炎や急性循環不全への有用性が期待され、持田製薬
（株）により初めて製剤化され、１９８５年に商品名ミ
ラクリッドとして発売されるに到った（持田製薬
（株）、ミラクリッド添付文書（１９８５）） 本製剤は、臨床的に急性膵炎及び手術時やエンドトキシ
ンショック時に対処する重篤な副作用の見られない製剤
として使われており、近年の売上は１００億円に達して
いる。
【０００５】ところで、ＨＵＴＩを製剤化するに当た
り、液状製剤とすることが可能である。この際、添加剤
として、塩化ナトリウム、リン酸塩、リン脂質、マンニ
トール、アルブミン、ゼラチン等を用いることが従来よ
り知られている。（特開昭５５−１６０７２４号、同５
８−２２５０２６号、同６３−２６７７３０号）。
り、液状製剤とすることが可能である。この際、添加剤
として、塩化ナトリウム、リン酸塩、リン脂質、マンニ
トール、アルブミン、ゼラチン等を用いることが従来よ
り知られている。（特開昭５５−１６０７２４号、同５
８−２２５０２６号、同６３−２６７７３０号）。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、保存
時の安定性に優れたトリプシンインヒビター含有液状製
剤を提供することにある。
時の安定性に優れたトリプシンインヒビター含有液状製
剤を提供することにある。
【０００７】
【問題を解決するための手段】本発明者らはＨＵＴＩの
液状製剤について鋭意研究を行い、従来より公知の製剤
に比べて保存時の安定性に優れた製剤を調製できること
を見出して本発明を完成した。即ち、本発明は、低イオ
ン強度、かつｐＨ７以下であることを特徴とするヒト尿
性トリプシンインヒビター含有液状製剤である。
液状製剤について鋭意研究を行い、従来より公知の製剤
に比べて保存時の安定性に優れた製剤を調製できること
を見出して本発明を完成した。即ち、本発明は、低イオ
ン強度、かつｐＨ７以下であることを特徴とするヒト尿
性トリプシンインヒビター含有液状製剤である。
【０００８】また、本発明は、ヒト尿性トリプシンイン
ヒビター含有溶液をｐＨ５〜７で６０〜１００℃に加熱
後に、その温度を維持しつつ、ｐＨを２〜５に下げて１
〜３０分間加熱処理することからなる前記液状製剤の製
造方法である。 （１）ＨＵＴＩ 本発明のＨＵＴＩは、尿由来、細胞培養由来、遺伝子工
学由来のいずれにも限定されない。また、医薬品として
適用可能な程度まで精製されておればよい。
ヒビター含有溶液をｐＨ５〜７で６０〜１００℃に加熱
後に、その温度を維持しつつ、ｐＨを２〜５に下げて１
〜３０分間加熱処理することからなる前記液状製剤の製
造方法である。 （１）ＨＵＴＩ 本発明のＨＵＴＩは、尿由来、細胞培養由来、遺伝子工
学由来のいずれにも限定されない。また、医薬品として
適用可能な程度まで精製されておればよい。
【０００９】ＨＵＴＩの精製法としては陰イオン交換体
処理、限外濾過、ゲル濾過、アフィニティクロマト、無
機吸着剤処理、塩析、等電点沈殿法、キトサン処理、不
溶性トリプシン処理等が知られている（特開昭５１−５
１５７９、同５１−１１８８１０、同５１−１２３８１
０、同５５−１６０７２４、同５６−９９４２７、同５
７−１４０７２８、同６０−２６０５１８、同６１−３
７７３６等）。
処理、限外濾過、ゲル濾過、アフィニティクロマト、無
機吸着剤処理、塩析、等電点沈殿法、キトサン処理、不
溶性トリプシン処理等が知られている（特開昭５１−５
１５７９、同５１−１１８８１０、同５１−１２３８１
０、同５５−１６０７２４、同５６−９９４２７、同５
７−１４０７２８、同６０−２６０５１８、同６１−３
７７３６等）。
【００１０】また、金属キレート樹脂処理、疎水性担体
処理、加熱処理等を組み合わせてもよい。こうして得ら
れるＨＵＴＩは分子量６万〜７万程度（好ましくは６７
０００）、等電点は２〜３程度、比活性は２０００〜３
５００単位／ｍｇ蛋白程度である。 （２）液状製剤 本発明の液状製剤におけるＨＵＴＩの濃度は、１０００
〜５００００単位／ｍＬ程度が例示される。本発明の特
徴は低イオン強度、ｐＨ７以下である。低イオン強度と
は、具体的にはｐＨ調整等に使用される物質の濃度が
０．１Ｍ（モル／Ｌ）以下であることを意味するが、好
ましくは０．０１Ｍ以下である。ｐＨは３〜７が例示さ
れるが、好ましくは３〜６程度である。ただし、酸性蛋
白質分解酵素が共存する場合はｐＨ４〜６程度、共存し
ない場合はｐＨ３〜６程度が好都合である。該ｐＨ調整
等に使用される物質としては、リン酸塩、塩化ナトリウ
ム、グリシン−塩酸等が挙げられるが、ＨＵＴＩの調製
過程で既に上記条件が満足されているならば、特になに
も添加しなくともよい。尚、本発明において酸性蛋白質
分解酵素とは以下の性質を有するものを指す。 （ｉ）酸性（ｐＨ２〜４付近）でＨＵＴＩを分解する。 （ii）アスパラギン酸プロテアーゼの阻害剤であるペプ
スタチンまたはアミノペプチダーゼの阻害剤であるベス
タチンによって阻害される。 （iii)１００℃３分間またはｐＨ２〜４程度での６０
℃、３０分間の加温処理により不活化される。
処理、加熱処理等を組み合わせてもよい。こうして得ら
れるＨＵＴＩは分子量６万〜７万程度（好ましくは６７
０００）、等電点は２〜３程度、比活性は２０００〜３
５００単位／ｍｇ蛋白程度である。 （２）液状製剤 本発明の液状製剤におけるＨＵＴＩの濃度は、１０００
〜５００００単位／ｍＬ程度が例示される。本発明の特
徴は低イオン強度、ｐＨ７以下である。低イオン強度と
は、具体的にはｐＨ調整等に使用される物質の濃度が
０．１Ｍ（モル／Ｌ）以下であることを意味するが、好
ましくは０．０１Ｍ以下である。ｐＨは３〜７が例示さ
れるが、好ましくは３〜６程度である。ただし、酸性蛋
白質分解酵素が共存する場合はｐＨ４〜６程度、共存し
ない場合はｐＨ３〜６程度が好都合である。該ｐＨ調整
等に使用される物質としては、リン酸塩、塩化ナトリウ
ム、グリシン−塩酸等が挙げられるが、ＨＵＴＩの調製
過程で既に上記条件が満足されているならば、特になに
も添加しなくともよい。尚、本発明において酸性蛋白質
分解酵素とは以下の性質を有するものを指す。 （ｉ）酸性（ｐＨ２〜４付近）でＨＵＴＩを分解する。 （ii）アスパラギン酸プロテアーゼの阻害剤であるペプ
スタチンまたはアミノペプチダーゼの阻害剤であるベス
タチンによって阻害される。 （iii)１００℃３分間またはｐＨ２〜４程度での６０
℃、３０分間の加温処理により不活化される。
【００１１】また、当該酵素が共存しないようなＨＵＴ
Ｉの製法としては、 当該酵素の阻害剤を固定化した担体を用いて、酵素を
吸着除去する方法。 弱酸性ｐＨ（例えば、ｐＨ５〜７程度）で６０〜１０
０℃に加温後に、ｐＨを下げて（例えば、ｐＨ２〜５程
度）、１〜３０分程度加温処理することにより、酵素を
不活化する方法等を用いることができる。
Ｉの製法としては、 当該酵素の阻害剤を固定化した担体を用いて、酵素を
吸着除去する方法。 弱酸性ｐＨ（例えば、ｐＨ５〜７程度）で６０〜１０
０℃に加温後に、ｐＨを下げて（例えば、ｐＨ２〜５程
度）、１〜３０分程度加温処理することにより、酵素を
不活化する方法等を用いることができる。
【００１２】本発明の液状製剤には公知の添加剤、二糖
類（例、ショ糖、マルトース）あるいは糖アルコール
（例、マンニトール、ソルビトール）を、例えば０．０
１〜１ｍｇ／ｍＬ程度用いてもよい。ＨＵＴＩ含有溶液
に必要に応じて添加剤を添加後、通常の方法により、除
菌濾過、分注、加熱処理等の操作を施して、液状製剤と
して供与できる。本製剤は注射剤、点眼剤、点鼻剤等と
して、患者に投与することができる。
類（例、ショ糖、マルトース）あるいは糖アルコール
（例、マンニトール、ソルビトール）を、例えば０．０
１〜１ｍｇ／ｍＬ程度用いてもよい。ＨＵＴＩ含有溶液
に必要に応じて添加剤を添加後、通常の方法により、除
菌濾過、分注、加熱処理等の操作を施して、液状製剤と
して供与できる。本製剤は注射剤、点眼剤、点鼻剤等と
して、患者に投与することができる。
【００１３】
【実施例】本発明をより詳細に説明するために実施例お
よび参考例を挙げるが、本発明はこれらによって、なん
ら限定されるものではない。 実施例１ ＨＵＴＩ（比活性 ２５００Ｕ／ｍｇ蛋白）１０ｍｇを
精製水１ｍＬ（ミリリットル）に溶解し、ｐＨを６に調
整して、本発明の液状製剤を得た。
よび参考例を挙げるが、本発明はこれらによって、なん
ら限定されるものではない。 実施例１ ＨＵＴＩ（比活性 ２５００Ｕ／ｍｇ蛋白）１０ｍｇを
精製水１ｍＬ（ミリリットル）に溶解し、ｐＨを６に調
整して、本発明の液状製剤を得た。
【００１４】実施例２ ＨＵＴＩ（比活性 ２５００Ｕ／ｍｇ蛋白）１０ｍｇを
０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６）１ｍＬに溶解し、本
発明の液状製剤を得た。 実施例３ ＨＵＴＩ（比活性 ２５００Ｕ／ｍｇ蛋白）１０ｍｇを
精製水１ｍＬに溶解し、１００℃に加温した。温度を保
ちつつ、ｐＨ３〜４に調整して３分間置き、その後に温
度を下げることにより、本発明の液状製剤を得た。
０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６）１ｍＬに溶解し、本
発明の液状製剤を得た。 実施例３ ＨＵＴＩ（比活性 ２５００Ｕ／ｍｇ蛋白）１０ｍｇを
精製水１ｍＬに溶解し、１００℃に加温した。温度を保
ちつつ、ｐＨ３〜４に調整して３分間置き、その後に温
度を下げることにより、本発明の液状製剤を得た。
【００１５】実施例４ ＨＵＴＩ（比活性 ２５００Ｕ／ｍｇ蛋白）１０ｍｇを
０．１５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７）１ｍＬに溶解した後
に、ペプスタチンを固定化したセファロース６Ｂカラム
にアプライし、その非吸着画分を回収した。さらにｐＨ
を４に調整して、本発明の液状製剤を得た。
０．１５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７）１ｍＬに溶解した後
に、ペプスタチンを固定化したセファロース６Ｂカラム
にアプライし、その非吸着画分を回収した。さらにｐＨ
を４に調整して、本発明の液状製剤を得た。
【００１６】実施例５ ＨＵＴＩ（比活性 ２５００Ｕ／ｍｇ蛋白）１０ｍｇを
精製水１ｍＬに溶解し、６０℃に加温した。温度を保ち
つつ、ｐＨ３〜４に調整して３０分間置き、その後に温
度を下げることにより、本発明の液状製剤を得た。 実施例６ ＨＵＴＩ（比活性 ２５００Ｕ／ｍｇ蛋白）１０ｍｇを
精製水１ｍＬに溶解し、６０℃で１０時間加熱処理後
に、温度を保ちつつ、グリシン−塩酸緩衝液でｐＨ３〜
４に調整して３０分間置き、その後に温度を下げること
により、本発明の液状製剤を得た。
精製水１ｍＬに溶解し、６０℃に加温した。温度を保ち
つつ、ｐＨ３〜４に調整して３０分間置き、その後に温
度を下げることにより、本発明の液状製剤を得た。 実施例６ ＨＵＴＩ（比活性 ２５００Ｕ／ｍｇ蛋白）１０ｍｇを
精製水１ｍＬに溶解し、６０℃で１０時間加熱処理後
に、温度を保ちつつ、グリシン−塩酸緩衝液でｐＨ３〜
４に調整して３０分間置き、その後に温度を下げること
により、本発明の液状製剤を得た。
【００１７】実験例１ 実施例１で調製した液状製剤を用いて、ｐＨ６、イオン
強度０〜１Ｍの条件で６０℃、７日間保存し、その効果
を確認した。ＨＵＴＩの凝集による高分子体およびＨＵ
ＴＩの分解による低分子体の各々の含有率はゲル濾過法
により測定した。結果を表１に示す。
強度０〜１Ｍの条件で６０℃、７日間保存し、その効果
を確認した。ＨＵＴＩの凝集による高分子体およびＨＵ
ＴＩの分解による低分子体の各々の含有率はゲル濾過法
により測定した。結果を表１に示す。
【００１８】
【表１】
【００１９】実験例２ 実施例１で調製した液状製剤を用いて、イオン強度０．
０１、ｐＨ１〜１０の条件下で６０℃１０時間保存し、
その効果を確認した。ＨＵＴＩの高分子体および低分子
体の各々の含有率はゲル濾過法により測定した。ＨＵＴ
Ｉ活性はカッセルらの方法（メソッド・イン・エンザイ
モロジー、１９巻、８４４頁、１９７０年）に準じて測
定した。結果を表２に示す。
０１、ｐＨ１〜１０の条件下で６０℃１０時間保存し、
その効果を確認した。ＨＵＴＩの高分子体および低分子
体の各々の含有率はゲル濾過法により測定した。ＨＵＴ
Ｉ活性はカッセルらの方法（メソッド・イン・エンザイ
モロジー、１９巻、８４４頁、１９７０年）に準じて測
定した。結果を表２に示す。
【００２０】
【表２】
【００２１】実験例３ 実施例３で調製した液状製剤を用いて、ｐＨ５、イオン
強度０〜１Ｍの条件で６０℃、６日間保存し、その効果
を確認した。ＨＵＴＩの凝集による高分子体および低分
子体の各々の含有率はゲル濾過法により測定した。結果
を表３に示す。
強度０〜１Ｍの条件で６０℃、６日間保存し、その効果
を確認した。ＨＵＴＩの凝集による高分子体および低分
子体の各々の含有率はゲル濾過法により測定した。結果
を表３に示す。
【００２２】
【表３】
【００２３】実験例４ 実施例３および５で調製した液状製剤中の、酸性蛋白質
分解酵素が不活化されたかどうかを確認した。その効果
は、液状製剤をｐＨ２．５で３７℃１５分間処理して生
じたＨＵＴＩの低分子体の生成度から判断した。結果を
表４に示す。
分解酵素が不活化されたかどうかを確認した。その効果
は、液状製剤をｐＨ２．５で３７℃１５分間処理して生
じたＨＵＴＩの低分子体の生成度から判断した。結果を
表４に示す。
【００２４】
【表４】
【００２５】実験例５ 実施例６で得た液状製剤をイオン強度０．０１Ｍ、ｐＨ
４〜５．５に調整した上で４０℃で２月間保存し、安定
性を確認した。また、安定化剤としてソルビトールを
０．２ｍｇ／ｍＬ添加した場合の効果も確認した。ＨＵ
ＴＩの高分子体および低分子体の含有率、ＨＵＴＩ活性
は、実験例１または２に準じて測定した。結果を表５に
示す。
４〜５．５に調整した上で４０℃で２月間保存し、安定
性を確認した。また、安定化剤としてソルビトールを
０．２ｍｇ／ｍＬ添加した場合の効果も確認した。ＨＵ
ＴＩの高分子体および低分子体の含有率、ＨＵＴＩ活性
は、実験例１または２に準じて測定した。結果を表５に
示す。
【００２６】
【表５】
【００２７】参考例 人尿を特開昭６２−９３２３８の方法に準じて調製した
ものを本実施例に使用されるＨＵＴＩの出発原料とし
た。出発原料４２０ｍＬをｐＨ６．４に調整後、０．１
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．４）で平衡化したＱＡＥ−ア
ガロースゲル（商品名Ｑ−セファロース ファストフロ
ー、ファルマシア社）にアプライした。その後、０．５
Ｍ塩化ナトリウム加０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．
４）で溶出しＨＵＴＩ含有画分を回収した。
ものを本実施例に使用されるＨＵＴＩの出発原料とし
た。出発原料４２０ｍＬをｐＨ６．４に調整後、０．１
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．４）で平衡化したＱＡＥ−ア
ガロースゲル（商品名Ｑ−セファロース ファストフロ
ー、ファルマシア社）にアプライした。その後、０．５
Ｍ塩化ナトリウム加０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．
４）で溶出しＨＵＴＩ含有画分を回収した。
【００２８】溶出画分８００ｍＬをｐＨ８に調整後、
０．５Ｍ塩化ナトリウム加０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ
８）で平衡化したＣｕ2+キレートアガロースゲル（商品
名キレートセファロース ファスト フロー、 ファル
マシア社）にアプライし、非吸着画分を回収した。非吸
着画分２６０ｍＬに酢酸緩衝液（ｐＨ５）を加えて、最
終５０ｍＭに調整し、６０℃、１０時間加熱処理した。
さらに２Ｍ硫酸アンモニウムを添加して濃度０．８Ｍに
調整後、０．８Ｍ硫酸アンモニウムで平衡化したフェニ
ル−アガロースゲル（商品名フェニル セファロース４
Ｂ、ファルマシア社）にアプライし、非吸着画分を回収
した。
０．５Ｍ塩化ナトリウム加０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ
８）で平衡化したＣｕ2+キレートアガロースゲル（商品
名キレートセファロース ファスト フロー、 ファル
マシア社）にアプライし、非吸着画分を回収した。非吸
着画分２６０ｍＬに酢酸緩衝液（ｐＨ５）を加えて、最
終５０ｍＭに調整し、６０℃、１０時間加熱処理した。
さらに２Ｍ硫酸アンモニウムを添加して濃度０．８Ｍに
調整後、０．８Ｍ硫酸アンモニウムで平衡化したフェニ
ル−アガロースゲル（商品名フェニル セファロース４
Ｂ、ファルマシア社）にアプライし、非吸着画分を回収
した。
【００２９】非吸着画分６１０ｍＬにＥＤＴＡを１ｍＭ
となるように添加後に限外濾過膜（商品名ＵＦメンブラ
ン、フィルトロン社、分子量１万以下の画分をカット）
で処理し、濃縮画分を回収した。濃縮画分２８ｍＬを
０．１５Ｍ塩化ナトリウム加５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ
６．２）で平衡化したポリアクリルアミドゲル（商品名
セファクリルＳ−２００ＨＰ、ファルマシア社）にアプ
ライし、同緩衝液で溶出しＨＵＴＩ画分を回収した。最
後に精製水で透析した。
となるように添加後に限外濾過膜（商品名ＵＦメンブラ
ン、フィルトロン社、分子量１万以下の画分をカット）
で処理し、濃縮画分を回収した。濃縮画分２８ｍＬを
０．１５Ｍ塩化ナトリウム加５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ
６．２）で平衡化したポリアクリルアミドゲル（商品名
セファクリルＳ−２００ＨＰ、ファルマシア社）にアプ
ライし、同緩衝液で溶出しＨＵＴＩ画分を回収した。最
後に精製水で透析した。
【００３０】
【発明の効果】本発明によれば、ＨＵＴＩの長期保存時
の安定性が改善される。特に、重合による高分子体およ
び分解による低分子体の生成を抑えた製剤を調製するこ
とができる。
の安定性が改善される。特に、重合による高分子体およ
び分解による低分子体の生成を抑えた製剤を調製するこ
とができる。
フロントページの続き (72)発明者 広瀬 正明 大阪府枚方市招提大谷２丁目25番１号 株 式会社ミドリ十字中央研究所内 (72)発明者 真崎 厚司 大阪府枚方市招提大谷２丁目25番１号 株 式会社ミドリ十字中央研究所内
Claims (2)
- 【請求項１】 低イオン強度、かつｐＨ７以下であるこ
とを特徴とするヒト尿性トリプシンインヒビター含有液
状製剤。 - 【請求項２】 ヒト尿性トリプシンインヒビター含有溶
液をｐＨ５〜７で６０〜１００℃に加熱後に、その温度
を維持しつつ、ｐＨを２〜５に下げて１〜３０分間加熱
処理することからなる請求項１記載の液状製剤の製造方
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4203211A JP2861655B2 (ja) | 1992-07-08 | 1992-07-08 | ヒト尿性トリプシンインヒビター含有液状製剤及びその製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4203211A JP2861655B2 (ja) | 1992-07-08 | 1992-07-08 | ヒト尿性トリプシンインヒビター含有液状製剤及びその製造方法 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10026198A Division JPH10182482A (ja) | 1998-02-06 | 1998-02-06 | ヒト尿性トリプシンインヒビター含有液状製剤及びその製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0625011A true JPH0625011A (ja) | 1994-02-01 |
| JP2861655B2 JP2861655B2 (ja) | 1999-02-24 |
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ID=16470308
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4203211A Expired - Fee Related JP2861655B2 (ja) | 1992-07-08 | 1992-07-08 | ヒト尿性トリプシンインヒビター含有液状製剤及びその製造方法 |
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| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2861655B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH07278015A (ja) * | 1994-04-12 | 1995-10-24 | Green Cross Corp:The | ヒト尿性トリプシンインヒビター含有液状製剤 |
| JP2003514790A (ja) * | 1999-11-13 | 2003-04-22 | バイエル・コーポレーシヨン | 可逆的に不活性化された酸性化プラスミンの局所送達による血栓溶解の方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6137736A (ja) * | 1984-07-31 | 1986-02-22 | Nippon Chem Res Kk | 人尿トリプシンインヒビタ−製剤の製法 |
-
1992
- 1992-07-08 JP JP4203211A patent/JP2861655B2/ja not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6137736A (ja) * | 1984-07-31 | 1986-02-22 | Nippon Chem Res Kk | 人尿トリプシンインヒビタ−製剤の製法 |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH07278015A (ja) * | 1994-04-12 | 1995-10-24 | Green Cross Corp:The | ヒト尿性トリプシンインヒビター含有液状製剤 |
| JP2003514790A (ja) * | 1999-11-13 | 2003-04-22 | バイエル・コーポレーシヨン | 可逆的に不活性化された酸性化プラスミンの局所送達による血栓溶解の方法 |
| JP2003514789A (ja) * | 1999-11-13 | 2003-04-22 | バイエル・コーポレーシヨン | 可逆的不活性化酸性化プラスミン |
| JP4988115B2 (ja) * | 1999-11-13 | 2012-08-01 | グリフオルス・セラピユーテイクス・インコーポレーテツド | 可逆的に不活性化された酸性化プラスミンの局所送達による血栓溶解の方法 |
| US9879246B2 (en) | 1999-11-13 | 2018-01-30 | Grifols Therapeutics Inc. | Reversibly inactivated acidified plasmin composition |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2861655B2 (ja) | 1999-02-24 |
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