JP2722143B2 - トリプシンインヒビター含有凍結乾燥製剤 - Google Patents
トリプシンインヒビター含有凍結乾燥製剤Info
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- trypsin inhibitor
- formulation containing
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はヒト尿性トリプシンイン
ヒビターの凍結乾燥製剤に関する。
ヒビターの凍結乾燥製剤に関する。
【０００２】
【従来技術】ヒト尿性トリプシンインヒビター（ヒト尿
由来トリプシンインヒビター、以下ＨＵＴＩ）は、Ｐｏ
ｒｋｓｃｈらによりヒト尿より初めてｉｎｔａｃｔな形
で分離・精製された（Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅ
ｄ．，７９，４９１，（１９７２））。同分子はシアル
酸及び中性ヘキソースを数十％含む、分子量約６７ｋｄ
（ゲル濾過分析）、等電点２〜３．５の糖タンパク質で
ある（Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．，７９，４９
１，（１９７２）、日泌尿会誌、７４，１６２７，（１
９８３）、Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ
ｓ，１２，３８９，（１９８６）、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂ
ｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１０９，１２
４７，（１９８２））。
由来トリプシンインヒビター、以下ＨＵＴＩ）は、Ｐｏ
ｒｋｓｃｈらによりヒト尿より初めてｉｎｔａｃｔな形
で分離・精製された（Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅ
ｄ．，７９，４９１，（１９７２））。同分子はシアル
酸及び中性ヘキソースを数十％含む、分子量約６７ｋｄ
（ゲル濾過分析）、等電点２〜３．５の糖タンパク質で
ある（Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．，７９，４９
１，（１９７２）、日泌尿会誌、７４，１６２７，（１
９８３）、Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ
ｓ，１２，３８９，（１９８６）、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂ
ｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１０９，１２
４７，（１９８２））。
【０００３】このＨＵＴＩは、膵酵素のトリプシン及び
キモトリプシンを特に強く阻害するが、ＡＴ−III やＦ
ＯＹと異なり凝固・線溶系の酵素を全く或は弱くしか阻
害しない（日薬理会誌、８１，２３５，（１９８
３））。また、ライソゾーム膜の安定化効果を持つこと
から同酵素の産生を抑制したり、心筋抑制因子の産生抑
制作用を有すると言われている（麻酔、３３，１３７，
（１９８４））。
キモトリプシンを特に強く阻害するが、ＡＴ−III やＦ
ＯＹと異なり凝固・線溶系の酵素を全く或は弱くしか阻
害しない（日薬理会誌、８１，２３５，（１９８
３））。また、ライソゾーム膜の安定化効果を持つこと
から同酵素の産生を抑制したり、心筋抑制因子の産生抑
制作用を有すると言われている（麻酔、３３，１３７，
（１９８４））。
【０００４】以上の活性・作用を有することから、急性
膵炎や急性循環不全への有用性が期待され、持田製薬
（株）により初めて製剤化され、１９８５年に商品名ミ
ラクリッドとして発売されるに到った（持田製薬
（株）、ミラクリッド添付文書（１９８５）） 本製剤は、臨床的に急性膵炎及び手術時やエンドトキシ
ンショック時に対処する重篤な副作用の見られない製剤
として使われており、近年の売上は１００億円に達して
いる。
膵炎や急性循環不全への有用性が期待され、持田製薬
（株）により初めて製剤化され、１９８５年に商品名ミ
ラクリッドとして発売されるに到った（持田製薬
（株）、ミラクリッド添付文書（１９８５）） 本製剤は、臨床的に急性膵炎及び手術時やエンドトキシ
ンショック時に対処する重篤な副作用の見られない製剤
として使われており、近年の売上は１００億円に達して
いる。
【０００５】ところで、ＨＵＴＩを製剤化するに当た
り、凍結乾燥製剤とすることが可能である。この際、添
加剤として、塩化ナトリウム、マンニトール、アルブミ
ン、ゼラチン等を用いることが従来より知られている。
（特開昭５５−１６０７２４号、同５８−２２５０２６
号、同６３−２６７７３０号）。
り、凍結乾燥製剤とすることが可能である。この際、添
加剤として、塩化ナトリウム、マンニトール、アルブミ
ン、ゼラチン等を用いることが従来より知られている。
（特開昭５５−１６０７２４号、同５８−２２５０２６
号、同６３−２６７７３０号）。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、凍結
乾燥時および保存時の安定性に優れたヒト尿性トリプシ
ンインヒビター含有凍結乾燥製剤を提供することにあ
る。
乾燥時および保存時の安定性に優れたヒト尿性トリプシ
ンインヒビター含有凍結乾燥製剤を提供することにあ
る。
【０００７】
【問題を解決するための手段】本発明者らはＨＵＴＩの
凍結乾燥製剤について鋭意研究を行い、従来より公知の
添加剤に比べて凍結乾燥時および保存時の安定性に優れ
た製剤を調製できることを見出して本発明を完成した。
凍結乾燥製剤について鋭意研究を行い、従来より公知の
添加剤に比べて凍結乾燥時および保存時の安定性に優れ
た製剤を調製できることを見出して本発明を完成した。
【０００８】即ち、本発明は、ヒト尿性トリプシンイン
ヒビターと、蔗糖、アルギニン、リジン、グルタミン酸
およびアスパラギン酸から選ばれた安定化剤からなるヒ
ト尿性トリプシンインヒビター含有凍結乾燥製剤であ
る。 （１）ＨＵＴＩ 本発明のＨＵＴＩは、尿由来、細胞培養由来、遺伝子工
学由来のいずれにも限定されない。また、医薬品として
適用可能な程度まで精製されておればよい。
ヒビターと、蔗糖、アルギニン、リジン、グルタミン酸
およびアスパラギン酸から選ばれた安定化剤からなるヒ
ト尿性トリプシンインヒビター含有凍結乾燥製剤であ
る。 （１）ＨＵＴＩ 本発明のＨＵＴＩは、尿由来、細胞培養由来、遺伝子工
学由来のいずれにも限定されない。また、医薬品として
適用可能な程度まで精製されておればよい。
【０００９】ＨＵＴＩの精製法としては陰イオン交換体
処理、限外濾過、ゲル濾過、アフィニティクロマト、無
機吸着剤処理、塩析、等電点沈殿法、キトサン処理、不
溶性トリプシン処理等が知られている（特開昭５１−５
１５７９、同５１−１１８８１０、同５１−１２３８１
０、同５５−１６０７２４、同５６−９９４２７、同５
７−１４０７２８、同６０−２６０５１８、同６１−３
７７３６等）。
処理、限外濾過、ゲル濾過、アフィニティクロマト、無
機吸着剤処理、塩析、等電点沈殿法、キトサン処理、不
溶性トリプシン処理等が知られている（特開昭５１−５
１５７９、同５１−１１８８１０、同５１−１２３８１
０、同５５−１６０７２４、同５６−９９４２７、同５
７−１４０７２８、同６０−２６０５１８、同６１−３
７７３６等）。
【００１０】また、金属キレート樹脂処理、疎水性担体
処理、加熱処理等を組み合わせてもよい。こうして得ら
れるＨＵＴＩは分子量６万〜７万程度（好ましくは６７
０００）、等電点は２〜３．５程度、比活性は２０００
〜３０００単位／ｍｇ蛋白程度である。 （２）安定化剤 本発明の安定化剤としては、蔗糖、アルギニン、リジ
ン、グルタミン酸、アスパラギン酸が用いられる。
処理、加熱処理等を組み合わせてもよい。こうして得ら
れるＨＵＴＩは分子量６万〜７万程度（好ましくは６７
０００）、等電点は２〜３．５程度、比活性は２０００
〜３０００単位／ｍｇ蛋白程度である。 （２）安定化剤 本発明の安定化剤としては、蔗糖、アルギニン、リジ
ン、グルタミン酸、アスパラギン酸が用いられる。
【００１１】アルギニン、リジンの場合は、その塩酸塩
等でもよく、アスパラギン酸、グルタミン酸の場合は、
そのＮａ塩等でもよい。添加量としては、ＨＵＴＩ ５
０００〜２万単位当たり、１０〜１００ｍｇ程度が例示
される。
等でもよく、アスパラギン酸、グルタミン酸の場合は、
そのＮａ塩等でもよい。添加量としては、ＨＵＴＩ ５
０００〜２万単位当たり、１０〜１００ｍｇ程度が例示
される。
【００１２】ＨＵＴＩ含有溶液に安定剤を添加後、通常
の方法により、凍結乾燥を行い、粉末製剤として保存で
きる。本製剤は用時、注射用水等に溶解して、患者に投
与することができる。
の方法により、凍結乾燥を行い、粉末製剤として保存で
きる。本製剤は用時、注射用水等に溶解して、患者に投
与することができる。
【００１３】
【実施例】本発明をより詳細に説明するために実施例お
よび参考例を挙げるが、本発明はこれらによって、なん
ら限定されるものではない。
よび参考例を挙げるが、本発明はこれらによって、なん
ら限定されるものではない。
【００１４】実施例１ ＨＵＴＩ（比活性 ２５００Ｕ／ｍｇ蛋白）１０ｍｇを
精製水１ｍｌに溶解し、各種添加剤を加えて凍結乾燥し
た。長期安定性を確認するために６０℃で４週間の過酷
な条件下で保存し、精製水１ｍｌに溶解し、ＨＵＴＩの
凝集体含有率をゲル濾過法により測定した。結果を表１
に示す。
精製水１ｍｌに溶解し、各種添加剤を加えて凍結乾燥し
た。長期安定性を確認するために６０℃で４週間の過酷
な条件下で保存し、精製水１ｍｌに溶解し、ＨＵＴＩの
凝集体含有率をゲル濾過法により測定した。結果を表１
に示す。
【００１５】
【表１】
【００１６】実施例２ ＨＵＴＩ（比活性 ２５００Ｕ／ｍｇ蛋白）１０ｍｇを
０．１５ｍＭ塩化ナトリウム加０．０５ｍＭリン酸緩衝
液１ｍｌに溶解し、各種添加剤を加えて凍結乾燥した。
長期安定性を確認するために８０℃で１０日間の過酷な
条件下で保存し、精製水１ｍｌに溶解し、ＨＵＴＩの凝
集体含有率をゲル濾過法により測定した。また、比較と
して、ミラクリッド（持田製薬（株）製）（ＨＵＴＩ
１０ｍｇ含有）を使用した。結果を表２に示す。
０．１５ｍＭ塩化ナトリウム加０．０５ｍＭリン酸緩衝
液１ｍｌに溶解し、各種添加剤を加えて凍結乾燥した。
長期安定性を確認するために８０℃で１０日間の過酷な
条件下で保存し、精製水１ｍｌに溶解し、ＨＵＴＩの凝
集体含有率をゲル濾過法により測定した。また、比較と
して、ミラクリッド（持田製薬（株）製）（ＨＵＴＩ
１０ｍｇ含有）を使用した。結果を表２に示す。
【００１７】
【表２】
【００１８】参考例 人尿を特開昭６２−９３２３８の方法に準じて調製した
ものを本実施例に使用されるＨＵＴＩの出発原料とし
た。
ものを本実施例に使用されるＨＵＴＩの出発原料とし
た。
【００１９】出発原料４２０ｍｌをｐＨ６．４に調整
後、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．４）で平衡化した
ＱＡＥ−アガロースゲル（商品名Ｑ−セファロース フ
ァストフロー、ファルマシア社）にアプライした。その
後、０．５Ｍ塩化ナトリウム加０．１Ｍリン酸緩衝液
（ｐＨ６．４）で溶出しＨＵＴＩ含有画分を回収した。
後、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．４）で平衡化した
ＱＡＥ−アガロースゲル（商品名Ｑ−セファロース フ
ァストフロー、ファルマシア社）にアプライした。その
後、０．５Ｍ塩化ナトリウム加０．１Ｍリン酸緩衝液
（ｐＨ６．４）で溶出しＨＵＴＩ含有画分を回収した。
【００２０】溶出画分８００ｍｌをｐＨ８に調整後、
０．５Ｍ塩化ナトリウム加０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ
８）で平衡化したＣｕ2+キレートアガロースゲル（商品
名キレートセファロース ファスト フロー、 ファル
マシア社）にアプライし、非吸着画分を回収した。
０．５Ｍ塩化ナトリウム加０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ
８）で平衡化したＣｕ2+キレートアガロースゲル（商品
名キレートセファロース ファスト フロー、 ファル
マシア社）にアプライし、非吸着画分を回収した。
【００２１】非吸着画分２６０ｍｌに酢酸緩衝液（ｐＨ
５）を加えて、最終５０ｍＭに調整し、ウイルス不活化
を目的として６０℃、１０時間加熱処理した。さらに２
Ｍ硫酸アンモニウムを添加して濃度０．８Ｍに調整後、
０．８Ｍ硫酸アンモニウムで平衡化したフェニル−アガ
ロースゲル（商品名フェニル セファロース４Ｂ、ファ
ルマシア社）にアプライし、非吸着画分を回収した。
５）を加えて、最終５０ｍＭに調整し、ウイルス不活化
を目的として６０℃、１０時間加熱処理した。さらに２
Ｍ硫酸アンモニウムを添加して濃度０．８Ｍに調整後、
０．８Ｍ硫酸アンモニウムで平衡化したフェニル−アガ
ロースゲル（商品名フェニル セファロース４Ｂ、ファ
ルマシア社）にアプライし、非吸着画分を回収した。
【００２２】非吸着画分６１０ｍｌにＥＤＴＡを１ｍＭ
となるように添加後に限外濾過膜（商品名ＵＦメンブラ
ン、フィルトロン社、分子量１万以下の画分をカット）
で処理し、濃縮画分を回収した。
となるように添加後に限外濾過膜（商品名ＵＦメンブラ
ン、フィルトロン社、分子量１万以下の画分をカット）
で処理し、濃縮画分を回収した。
【００２３】濃縮画分２８ｍｌを０．１５Ｍ塩化ナトリ
ウム加５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ６．２）で平衡化した
ポリアクリルアミドゲル（商品名セファクリルＳ−２０
０ＨＰ、ファルマシア社）にアプライし、同緩衝液で溶
出しＨＵＴＩ画分を回収した。
ウム加５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ６．２）で平衡化した
ポリアクリルアミドゲル（商品名セファクリルＳ−２０
０ＨＰ、ファルマシア社）にアプライし、同緩衝液で溶
出しＨＵＴＩ画分を回収した。
【００２４】
【発明の効果】本発明によれば、ＨＵＴＩの凍結乾燥時
および長期保存時の安定性が改善される。また、再溶解
時の溶解性も優れている。
および長期保存時の安定性が改善される。また、再溶解
時の溶解性も優れている。
フロントページの続き (72)発明者 武智 和男 大阪府枚方市招提大谷２丁目25番１号 株式会社ミドリ十字 中央研究所内 (56)参考文献 特開 昭56−139422（ＪＰ，Ａ)
Claims (1)
- 【請求項１】 ヒト尿性トリプシンインヒビターと、蔗
糖、アルギニン、リジン、グルタミン酸およびアスパラ
ギン酸から選ばれた安定化剤からなるヒト尿性トリプシ
ンインヒビター含有凍結乾燥製剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3248419A JP2722143B2 (ja) | 1991-09-03 | 1991-09-03 | トリプシンインヒビター含有凍結乾燥製剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3248419A JP2722143B2 (ja) | 1991-09-03 | 1991-09-03 | トリプシンインヒビター含有凍結乾燥製剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0558910A JPH0558910A (ja) | 1993-03-09 |
| JP2722143B2 true JP2722143B2 (ja) | 1998-03-04 |
Family
ID=17177843
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3248419A Expired - Fee Related JP2722143B2 (ja) | 1991-09-03 | 1991-09-03 | トリプシンインヒビター含有凍結乾燥製剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2722143B2 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU695520B2 (en) * | 1994-12-29 | 1998-08-13 | Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. | Urinastatin-containing suppository |
| US5770700A (en) * | 1996-01-25 | 1998-06-23 | Genetics Institute, Inc. | Liquid factor IX formulations |
| CA2643693A1 (en) * | 2006-03-10 | 2007-09-20 | Dyax Corp. | Formulations for ecallantide |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0035204B2 (en) * | 1980-03-05 | 1991-05-22 | Miles Inc. | Pasteurized therapeutically active protein compositions |
-
1991
- 1991-09-03 JP JP3248419A patent/JP2722143B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0558910A (ja) | 1993-03-09 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |