JPH0622744A - 細胞培養用コラ−ゲン担体及びその製造方法 - Google Patents
細胞培養用コラ−ゲン担体及びその製造方法Info
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Abstract
の製造方法に関し、特に、高密度に培養できる細胞培養
用コラ−ゲン担体およびその製造方法に関する。 【構成】本発明は、50〜2000μmの範囲のコント
ロ−ルされた気泡径を有し、該気泡は一方の面より他方
の面に真直で連通し、且つ実質的に各気泡相互は独立的
に存在していることを特徴とする細胞培養用コラ−ゲン
担体である。
Description
コラ−ゲン担体およびその製造方法に関し、特に、高密
度に培養できる細胞培養用コラ−ゲン担体およびその製
造方法に関する。
としては、担体に細胞を接着して培養する方法や培養液
に細胞を浮遊した状態で培養する方法等がある。このう
ち接着細胞の場合細胞を接着する担体としてはマイクロ
キャリア、中空糸膜、不織布などが知られている。
持体自身が重合性モノマ−を構成単位とする水不溶性高
分子から成るか、或いは支持体表面が該水不溶性高分子
によって被覆されて成り、且つ該高分子は正に荷電し得
る化学的残基及び負に荷電し得る化学的残基を含有して
成ることを特徴とする細胞培養担体について記載されて
いる。しかし、この培養担体は、細胞がその表面にのみ
接着可能であるため培養効率が悪かった。担体の培養効
率を上げるためスポンジ状の担体を使用することも知ら
れている。例えば特公昭62−502936号公報に
は、多孔質球状コラ−ゲン担体の1例として約1μmか
ら約150μmの範囲の平均細孔寸法を有するコラ−ゲ
ンよりなるミクロスポンジ担体が記載されている。しか
し、このミクロスポンジ担体の製造法は煩雑でミクロス
ポンジの生産効率が悪く多量生産に適さず且つその孔径
をコントロ−ルすることは困難であった。
上述の従来方法における欠点を改良し、更に優れた増殖
性及び培養密度の高い細胞培養担体を得るべく種々検討
した結果、コラ−ゲン溶液をアンモニアガスによりその
コラ−ゲンの等電点付近に近づけるとコラ−ゲンのゲル
状繊維が一方の面より他方の面に並列状に形成され同時
にコラ−ゲンゲル中に水分は円柱状の水柱として分離
し、これを凍結乾燥することにより実質的に一方の面よ
り他方の面に真直で連通した気泡を有する非常にポ−ラ
スなコラ−ゲンスポンジを製造することが出来、このコ
ラ−ゲンスポンジが細胞培養用として極めて優れている
ことを見出し、本発明を完成したもので、本発明の目的
は高密度に培養できる細菌培養用コラ−ゲン担体および
その製造方法を提供するにある。
2000μmの範囲のコントロ−ルされた気泡径を有
し、該気泡は一方の面より他方の面に真直で連通し、且
つ実質的に各気泡相互は独立的に存在していることを特
徴とする細胞培養用コラ−ゲン担体であり、その製造方
法として、コラ−ゲンの酸性溶液をアンモニアガスに曝
すことより、一方の面より他方の面に真直に配列したコ
ラ−ゲン線維を形成すると同時に一方の面より他方の面
に真直な水柱を生じさせたゲル状体とし、しかる後、凍
結乾燥によりゲル内部の水分を揮散させて50〜200
0μmの範囲のコントロ−ルされた気泡径を有し、該気
泡は一方の面より他方の面に真直で且つ実質的に各気泡
相互は独立的に存在していることを特徴とする細胞培養
用コラ−ゲン担体の製造方法である。
〜2000μmの範囲にあるようにコントロ−ルされた
各気孔が実質的に独立され、一方の面から他方の面に連
通した細胞培養用コラ−ゲン担体であって、孔径50μ
m以下の場合には細胞が内部に入ることができず培養不
能であり、また、2000μm以上では担体としては大
きくなり過ぎ培養効率が悪く、壁が薄くなり強度が得ら
れないので好ましくない。
アンモニアガスに曝してコラ−ゲンの等電点に近づけ
て、ゲル状にコラ−ゲン繊維が形成されるが、その際、
コラ−ゲン繊維は一方の面より他方の面に真直に配列
し、また、水分は離漿してコラ−ゲンゲル中に円柱状の
水柱として存し、これを凍結乾燥することにより一方の
面(表面層)より他方の面(裏面層)に真直で且つ実質
的に各気泡相互が独立的に存在する気泡を有するコラ−
ゲンスポンジが形成されるのである。そして、この製造
方法において、コラ−ゲン量とアンモニアガス濃度との
調節によって気泡径をコントロ−ルすることができ、コ
ラ−ゲンスポンジの孔径を変化することができる。以
下、本発明について更に詳細に説明する。
に可溶性で且つアンモニアガスによってコラ−ゲン線維
を形成するコラ−ゲンであれば何れでも良く、アテロコ
ラ−ゲン、酸可溶性コラ−ゲン等が好ましい。このコラ
−ゲンを酸性溶媒に溶解する。使用する酸性溶媒として
は塩酸、酢酸等の無機酸、有機酸の何れでもよく、また
その溶液のPhに特に制限はない。そして、コラ−ゲン
の濃度についても特に制限がないが0.1〜10%程度
が好ましい。
を曝すと、コラ−ゲンは真直に一方の面より他方の面に
向かって繊維状に析出し、白濁し、水分は水柱状として
離漿する。コラ−ゲン線維が一方の面より他方の面に向
って配列していることは、得られたゲル体を引張ること
によって裂けるような状態で切れることより容易に理解
することができる。この時アンモニアガスとしてはボン
ベよりコラ−ゲン溶液のある密閉容器内に導入するか或
いはコラ−ゲンのある密閉容器内に濃度を調節したアン
モニア水を置くことによって中和する。
する。
20cmトレ−に300gずつ分注後、容量5lの密閉
容器に先のトレ−2枚を入れる。その容器の中に更に5
0ml容器に30mlの3.0%のアンモニア水を入れ
たものを入れ12時間室温で放置する。放置後流水にて
形成したゲルを1晩洗浄後凍結乾燥を行うことによりポ
アサイズ300〜500μmのスポンジを得ることが出
来る。これを数mm角にカットし滅菌後CHO細胞の培
養を行ったところ5日後に図1に示すようにポアの内部
にまで細胞は均一に接着増殖していた。
溶液を500g分注し、他の条件を同様に中和、洗浄、
凍結乾燥することによりポアサイズ800〜1000μ
mのスポンジを得ることが出来る。 実施例3 実施例1のアンモニア中和の際、各トレ−にコラ−ゲン
溶液を150g分注し、他の条件を同様に中和、洗浄、
凍結乾燥することによりポアサイズ100〜400μm
のスポンジを得ることが出来る。
がアンモニアガスの濃度によってコントロ−ルできるの
で培養すべき細胞に最適な気泡径を有するコラ−ゲン担
体を得ることができると共にその表面積を増大できるの
で高密度に培養できる細胞培養用コラ−ゲン担体を提供
することが出来る。
CHO細胞を接着、5日後の状態を示す写真である。写
真中の白線は100μmである。
を曝すと、コラーゲンは真直に一方の面より他方の面に
向かって繊維状に析出し、白濁し、水分は水柱状として
離漿する。コラーゲン線維が一方の面より他方の面に向
って配列していることは、得られたゲル体を引張ること
によって裂けるような状態で切れることより容易に理解
することができる。この時アンモニアガスとしてはボン
ベよりコラーゲン溶液のある密閉容器内に導入するか或
いはコラーゲンのある密閉容器内に濃度を調節したアン
モニア水を置くことによって中和する。中和後凍結乾燥
を行いスポンジを作製する。得られたスポンジは、用途
に合わせ切断等により希望する形に成型することが出来
る。例えばさいころの様なキューブ状、ブロック状、板
状その板状物を重ねた積層状、板状物を巻いたもの或は
紐状等に成型し利用することができる。
する。
20cmトレーに300gずつ分注後、容量5lの密閉
容器に先のトレー2枚を入れる。その容器の中に更に5
0ml容器に30mlの3.0%のアンモニア水を入れ
たものを入れ12時間室温で放置する。放置後流水にて
形成したゲルを1晩洗浄後凍結乾燥を行うことによりポ
アサイズ300〜500μmのスポンジを得ることが出
来る。これを数mm角にカットし滅菌後CHO細胞の培
養を行ったところ5日後に図1に示すようにポアの内部
にまで細胞は均一に接着増殖していた。また、この実施
例で得られたコラーゲン担体にBHK細胞を接着7日後
の状態を図2として示す。同様にこの実施例で得られた
コラーゲン担体にヒト皮膚線維芽細胞を接着10日後の
状態を図3として、また、このコラーゲン担体にウシ血
管内皮細胞を接着5日後の状態を図4としてそれぞれ示
す。これら写真中の白線は100μmを表わす。
CHO細胞を接着、5日後の状態を示す写真である。写
真中の白線は100μmである。
BHK細胞を接着、7日後の状態を示す写真である。写
真中の白線は100μmである。
ヒト皮膚線維芽細胞を接着、10日後の状態を示す写真
である。写真中の白線は100μmである。
ウシ血管内皮細胞を接着、5日後の状態を示す写真であ
る。写真中の白線は100μmである。
Claims (2)
- 【請求項1】 50〜2000μmの範囲のコントロ−
ルされた気泡径を有し、該気泡は一方の面より他方の面
に真直で連通し、且つ実質的に各気泡相互は独立的に存
在していることを特徴とする細胞培養用コラ−ゲン担
体。 - 【請求項2】 コラ−ゲンの酸性溶液をアンモニアガス
に曝すことより、一方の面より他方の面に真直に配列し
たコラ−ゲン線維を形成すると同時に一方の面より他方
の面に真直な水柱を生じさせたゲル状体とし、しかる
後、凍結乾燥によりゲル内部の水分を揮散させて50〜
2000μmの範囲のコントロ−ルされた気泡径を有
し、該気泡は一方の面より他方の面に真直で且つ実質的
に各気泡相互は独立的に存在していることを特徴とする
細胞培養用コラ−ゲン担体の製造方法。
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Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP20423992A JP3170693B2 (ja) | 1992-07-09 | 1992-07-09 | 細胞培養用コラ−ゲン担体及びその製造方法 |
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Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
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ID=16487157
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Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
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-
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- 1992-07-09 JP JP20423992A patent/JP3170693B2/ja not_active Expired - Lifetime
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