JPH0585160B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

〔産業上の利用分野〕 本発明はγ−ハロアセト酢酸エステルに微生物
を作用させて、γ−ハロ−β−ヒドロキシ酪酸エ
ステルを製造する方法に関する。γ−ハロ−β−
ヒドロキシ酪酸エステルはＬ−カルチニンの合成
原料として有用である。 〔従来の技術及び発明が解決しようとする問題
点〕 γ−ハロアセト酢酸エステルを化学的に還元し
てγ−ヒドロキシ酪酸エステルを製造する場合、
脱ハロゲンが起こりやすく、目的物の収率が低い
という欠点がある。 これに対して、微生物の作用でγ−ハロアセト
酢酸エステルを還元する方法は脱ハロゲン等の副
反応が起きないものの、従来から知られている微
生物（特開昭59−118093号公報）では目的物質の
収率が低く、実用的ではない。 上記の問題点を解決するために研究を重ねた結
果、γ−ハロアセト酢酸エステルにスポロボロミ
セス（Sporobolomyces）属の微生物を作用させ
ることにより、高収率でγ−ハロ−β−ヒドロキ
シ酪酸エステルが得られることを見出し、本発明
を完成するに到つた。 〔問題点を解決するための手段〕 本発明は、γ−ハロアセト酢酸エステルをγ−
ハロ−β−ヒドロキシ酪酸エステルに変換する能
力を有するスポロボロミセス属の微生物の培養
液、菌体又は菌体処理物を、γ−ハロアセト酢酸
エステルに作用させ、生成物を採取することを特
徴とするγ−ハロ−β−ヒドロキシ酪酸エステル
の製造法である。 本発明で用いる出発原料であるγ−ハロアセト
酢酸エステルは、一般式： Ｘ−CH₂CO・CH₂COOR （式中、Ｘはハロゲン、Ｒはアルキル基、フエ
ニル基、アリール基等の任意の有機残基である）
で示される化合物である。ハロゲンとしてはクロ
ルまたはブロム、Ｒは炭素数１〜８の直鎖または
分岐のアルキル基が好ましい。 本発明で用いるγ−ハロアセト酢酸エステル
は、例えば有機溶媒中でハロゲンとジケテンを反
応させることにより得られるが、必要ならγ−ハ
ロ酢酸エステルから通常のグリニヤール反応によ
つても製造することができる。 次に、本発明で用いる微生物としては、スポロ
ボロミセス（Sporobolomyces）属に属し、γ−
ハロアセト酢酸エステルを還元してγ−ハロ−β
−ヒドロキシ酪酸エステルに変換する能力を有す
るものであればいずれも用いることができる。そ
の例としてはスポロボロミセス・サリモニコロル
（Sporoboromyces salmonicolor）IFO1038が挙
げられる。この菌株は財団法人発酵研究所
（IFO）において寄託番号1038番で保存されてお
り、必要に応じて容易に入手できる菌株である。
スポロボロミセス属は一般的性質として自然ある
いは人工変異的手段により変異を起し得るが、γ
−ハロアセト酢酸エステルを還元してγ−ハロ−
β−ヒドロキシ酪酸エステルに変換するものすべ
て本発明の製造法に利用し得る。 本発明で用いる微生物は常法に従つて培養する
ことができる。培養に用いられる倍地は微生物の
生育に必要な炭素源、窒素源、無機物質等を含む
通常の培地である。更にビタミン、アミノ酸等の
有機微量栄養素を添加すると望ましい結果が得ら
れる場合が多い。 培養は好気的条件下にPH３〜８、温度10〜40℃
の適当な範囲に制御しつつ１〜10日間培養を行
う。反応にあたつては、微生物の培養液、培養液
から分離採取した培養菌体などいずれも使用でき
る。また菌体処理として、凍結乾燥やアセトン乾
燥などの方法で得た乾燥菌体、菌体を磨砕あるい
は自己消化、超音波処理などの方法で得た菌体破
砕液等のほか、γ−ハロアセト酢酸エステルをγ
−ハロ−β−ヒドロキシ酪酸エステルに変換する
酵素活性を有する酵素タンパク区分、更にはこれ
ら菌体または菌体処理物の固定化物、その他いず
れも使用できる。 γ−ハロアセト酢酸エステルをγ−ハロ−β−
ヒドロキシ酪酸エステルに変換する方法は、水性
媒体中にてγ−ハロアセト酢酸エステルと上記微
生物の培養液、菌体、菌体処理物、あるいはこれ
らを公知の方法で固定化したものと接触させれば
良い。 かかる反応時の水性媒体としては、水、緩衝
液、および含水有機溶媒が使用できる。 上記微生物をγ−ハロアセト酢酸エステルに作
用させるには、通常PHを３〜８、反応温度を10〜
60℃の範囲に制御しつつ行なう。 反応系に対してγ−ハロアセト酢酸エステルは
そのまま、あるいは溶媒に溶解するか、あるいは
分散させて添加する。反応系のエステル濃度は通
常0.01〜50重量％の範囲が良い。かかるγ−ハロ
アセト酢酸エステルの添加は反応の任意の段階で
可能であり、一括、連続、分割のいずれの手段で
も実施できる。 また反応時にグリコース等の糖類や、微生物の
栄養素、界面活性剤等を共存させて反応を行なう
こともできる。反応時間は、濃度条件により調整
できるが、長くとも240時間程度反応を行なえば、
γ−ハロアセト酢酸エステルはγ−ハロ−β−ヒ
ドロキシ酪酸エステルに変換される。 なお、γ−ハロアセト酢酸エステルを含有する
培地に本微生物を培養することによつてもγ−ハ
ロ−β−ヒドロキシ酪酸エステルを得ることがで
きる。 このようにして得られたγ−ハロ−β−ヒドロ
キシ酪酸エステルを培養液又は反応液より採取す
るには、菌体又は菌体処理物を遠心分離や限外濾
過等の常法に従つて除去し、エーテル、四塩化炭
素、ベンゼン等の有機溶媒を用いて抽出する方法
等の通常の方法を採用することができる。 〔実施例〕 次に、実施例によつて本発明の方法を更に詳し
く説明する。 実施例 １ グルコース５重量％、コーン・ステイープ・リ
カー５重量％からなる培地（PH６）５mlを試験管
に取り、スポロボロミセス・サルモニコロル
（Sporoboromyces salmonicolor）IFO1038を接
種して28℃で24時間振とう培養を行ない種培養液
を得た。 次に上記と同一組成の培地100mlを500ml溶坂口
フラスコに取り、種培養５mlを添加して28℃で64
時間振とう培養を行なつた。 この系にγ−クロロアセト酢酸エステル１ｇ添
加し、28℃で４時間振とう培養を続け反応を行な
つた。 得られた反応液を遠心分離で除菌処理した後、
エーテル300ml（100ml×３回）で抽出を行なつ
た。このエーテル層に無水硫酸マグネシウムを添
加、脱水したのち蒸留し、ガスクロマトグラフイ
ー（島津GC−9APF，PEG20M×1m，150℃、
N₂30ml／min）、IR（島津IR−435）、NMR（日本
電子PMX60SI）で確認したところ、γ−クロロ
−β−ヒドロキシ酪酸エチルであることを確認し
た。 NMR δ（CDCl₃中）：δ（ppm） 1.25（3H，ｔ），2.60（2H，ｄ）， 3.35（1H，ｓ，exchangeable，OH） 3.60（2H，ｄ），4.2（2H，ｑ） GC Ｒ・Ｔ（分） 4.6 また、反応収率は95％であつた。 実施例 ２ 第１表に示すγ−クロロアセト酢酸エステルを
基質に用いて実施例１と同様に反応を行ない、対
応するγ−クロロ−β−ヒドロキシ酪酸エステル
を得た。結果を表に示す。 尚、基質がオクチルエステルの場合には反応開
始時に0.2mlの10％トウイーン80（KAO−
ATLAS）を加えて反応させた。

〔発明の効果〕

本発明によればγ−ハロアセト酢酸エステルか
ら、γ−ハロ−β−ヒドロキシ酪酸エステルを高
収率で得ることができ、工業的に有利である。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ γ−ハロアセト酢酸エステルをγ−ハロ−β
   −ヒドロキシ酪酸エステルに変換する能力を有す
   るスポロボロミセス属の微生物の培養液、菌体又
   は菌体処理物を、γ−ハロアセト酢酸エステルに
   作用させ、生成物を採取することを特徴とするγ
   −ハロ−β−ヒドロキシ酪酸エステルの製造法。