JPH0581239B2 - - Google Patents

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JPH0581239B2
JPH0581239B2 JP60148140A JP14814085A JPH0581239B2 JP H0581239 B2 JPH0581239 B2 JP H0581239B2 JP 60148140 A JP60148140 A JP 60148140A JP 14814085 A JP14814085 A JP 14814085A JP H0581239 B2 JPH0581239 B2 JP H0581239B2
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JP
Japan
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solvent
hydroxybutyrate
poly
water
azeotrope
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JP60148140A
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JPS6135790A (ja
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Banrautemu Noeru
Girain Jatsuku
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Solvay SA
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Solvay SA
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    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/62Carboxylic acid esters
    • C12P7/625Polyesters of hydroxy carboxylic acids

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  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
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  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
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  • Biotechnology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Extraction Or Liquid Replacement (AREA)

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、溶媒による抽出と組み合せた共沸蒸
溜が行われる、微生物の水性懸濁液からのポリ−
β−ヒドロキシブチレートの抽出方法に関する。
多くの微生物は、ポリ−β−ヒドロキシブチレ
ートを合成でき、これらの微生物におけるポリ−
β−ヒドロキシブチレートの主機能は、炭素含有
物質の形におけるエネルギーの貯蔵であると考え
られる。これらのポリ−β−ヒドロキシブチレー
ト(PHB)は、工業的見地から重要な原料を構
成する。これらのPHBをバイオマスから分離す
るために、既に多くの技術が意図されている。
すなわち、ヨーロツパ特許出願第0015123号明
細書においては、第1工程において熱ガスを導入
することによつて菌体を乾燥し、次いで第2工程
において、冷却後、適当な溶媒をもつてポリ−β
−ヒドロキシブチレートを抽出することが既に提
案された。この2段法に対して、特に溶媒による
抽出の前に菌体を溶解する工程のような補足工程
を追加し得る。
他の方法は、ヨーロツパ特許出願 第0046017号明細書に記載されている。この文書
により、第1工程においてPHを調節することによ
つて高温で菌体を凝集し、次いで第2工程におい
て、冷却後凝集された菌体の懸濁起を、加圧下に
水蒸気を導入することによつて加熱する。PHのこ
れ以上の調節は、この操作の後または前に行われ
る。次いで凝集された菌体を、PHBの抽出用溶
媒と後に接触させるために多孔性粒状生成物を得
るように乾燥する。
ヨーロツパ特許出願第0058480号明細書には、
数工程を要する他の方法が記載されている。この
方法により、先ず、高温において噴霧することに
よつて細菌培養物を乾燥し、次いで冷却後に乾燥
菌体を脂質の抽出のためにメタノールと接触さ
せ、最後にポリ−β−ヒドロキシブチレートを抽
出するために溶媒と接触させる。この溶液を、さ
らに0℃未満に冷却し、次いで30分20℃に加熱
し、これによつてゲルが得られる。このゲルを、
溶媒を追い出すために圧力にさらす。
先行技術の方法は、それにもかかわらず、設備
の複雑化および逐次加熱および冷却から生じる高
エネルギー消費の故にこの方法が工業用設備にお
いて実施された場合に欠点を有する。
本発明は、以前の方法の欠点を有しないポリ−
β−ヒドロキシブチレートの抽出方法の提供に関
する。
この目的を達するために、本発明は、 a ポリ−β−ヒドロキシブチレートを含有する
微生物の水性懸濁液を、水と最低沸点共沸混合
物を形成しその共沸混合物が共沸点を有する、
ポリ−β−ヒドロキシブチレートの選択抽出溶
媒と接触させ、 b 共沸混合物を共沸点で共沸蒸留することによ
つて、微生物の水性懸濁液から水を除き、 c 同時に共沸混合物の共沸点でポリ−β−ヒド
ロキシブチレートを抽出溶媒で抽出して、ポリ
−β−ヒドロキシブチレート及び抽出溶媒を含
有する抽出物層を得ること、 を特徴とする、溶媒によるポリ−β−ヒドロキシ
ブチレートを含有する微生物の水性懸濁液からの
ポリ−β−ヒドロキシブチレートの抽出方法に関
する。
水と最低沸点共沸混合物を形成する溶媒によつ
て、本出願人は水と混合された場合にその沸点が
一定であり、しかも別々にとつた溶媒または水の
沸点より低く、しかも所定の圧力において一定の
組成を保つ混合物を形成する溶媒を理解している
〔アシクロペデイ・エテルナシヨナレ・デ・シヤ
ース・エ・デ・テクニク(Encyclopedie
Internationale de Sciences et des Techniques
−ラルース(Larousse)(1970,2巻,205〜206
頁)〕。
ポリ−β−ヒドロキシブチレート用の、水と最
低沸点共沸混合物を形成する溶媒として、この性
質を有する任意の溶媒を使用できる。溶媒は、通
常有機溶媒、さらにとりわけハロゲン化脂肪族溶
媒から選ばれる。後者の中で、一般に塩素化飽和
脂肪族溶媒を用いる。
クロロメタン、クロロエタンおよびクロロプロ
パンをもつて良い結果が得られた。後者の中で、
1,2−ジクロロエタン、1,1,2−トロクロ
ロエタンおよび1,2−ジクロロ−プロパンが好
ましく用いられる。
1,2−ジクロロエタンは、ポリ−β−ヒドロ
キシブチレート用の、水と共沸混合物を形成する
溶媒として最も特に好ましい。
参考のために、良い結果を得た溶媒の沸点およ
び大気圧において溶媒と水によつて形成された最
低共沸混合物の沸点も下表に示す。
表 溶媒 沸点℃水と共沸 混合物℃ (P=1.0バール) 1,1,2−トリクロロエタン 113.786.0 1,2−ジクロロエタン 8372.0 1,2−ジクロロプロパン 9678 本発明によつて処理できる微生物の水性懸濁液
は、種々の起源の微生物から得ることができる。
微生物の選択は、一般に微生物に存在するポリ−
β−ヒドロキシブチレートの相対量に基づいて、
しかもまた微生物の生長速度およびそのポリ−β
−ヒドロキシブチレートの合成速度によつても行
われる。
微生物は、その培地において抽出溶媒によつて
直接に処理できる。しかしながら、また抽出前に
その培地から微生物の部分的分離から生じた微生
物の水性懸濁液を使用することもできる。この部
分分離は、この目的に既知の任意の手段によつて
行うことができる。培養物は濃縮の目的のために
遠心分離または限外ろ過でき、しかもこれは栄養
培地の残留物の部分を除くために、後にあるいは
1回またはそれ以上の洗浄によることができる。
本発明の方法は、また予備乾燥培養物の水中再懸
濁から生じた微生物の水性懸濁液にも適用され
る。しかしながら、このような技術は、その中に
含まれる追加のエネルギー消費の故に好ましくな
いことは明らかである。
使用する微生物の水性懸濁液の量対使用する抽
出溶媒の量の比はそれ自体重要でない。重量比
1:1〜1:100が、一般に用いられる。比1:
2〜1:50が、通例用いられ、最後に使用比1:
5〜1:20が好ましく用いられる。
この比の選択は、処理される微生物の性質、温
度、抽出数および抽出による望まれる収率のよう
な種々のパラメーターによつて影響される。さら
に、抽出媒質に一層少ない微生物が存在する場
合、細胞残留物の除去が一層容易である。
プロセスが行われる圧力は重要でなく、一般に
0.1バール〜10バールである。
本発明の方法において、水は共沸乾燥によつて
除去される。無水溶媒またはなお水をもつて飽和
された溶媒の相が得られるまで、脱水が起こり、
かつこれによつて単一透明液相が得られることに
なる。
この方法は、この目的に企図された任意の装置
において行うことができる。本発明による方法
は、微生物の水性懸濁液および同方向または反対
方向に循環する抽出溶媒をもつて連続または不連
続に行うことができる。
本発明による方法において、共沸蒸溜から生じ
る水をもつて飽和されているかあるいは飽和され
ていない溶媒は、抽出溶媒として任意に再循環で
きる。
抽出後、ポリ−β−ヒドロキシブチレートを含
有する溶媒は、微生物の細胞膜のような媒質に不
溶性の化合物を除くことができる。この目的に
は、任意の既知の手段を用いることができる。こ
の操作は、通例1回またはそれ以上のろ過によつ
て行われる。
抽出されたポリ−β−ヒドロキシブチレート
は、この目的に既知の任意の方法によつて抽出溶
媒から分離できる。すなわち、これらのポリ−β
−ヒドロキシブチレートは、溶媒の蒸発あるいは
沈殿剤の単なる添加によつて分離できる。使用で
きる沈殿剤として、石油エーテル、未置換脂肪族
炭化水素、ベンゼン、を初め芳香族化合物または
脂肪族アルコールのようなポリ−β−ヒドロキシ
ブチレートの溶媒でない化合物を挙げることがで
きる。好ましい沈殿剤は、脂肪族アルコールおよ
びケトンさらにとりわけ経済的理由でメタノール
およびエタノールである。
抽出溶媒から分離されたポリ−β−ヒドロキシ
ブチレートは、次いで前記のような非溶媒をもつ
て1回またはそれ以上の洗浄によつて精製でき、
次いで乾燥され、その後これらのポリ−β−ヒド
ロキシブチレートは白色塊の形をとる。回収およ
び精製操作は通例、室温において行われる。
ポリ−β−ヒドロキシブチレートは、特に糸が
容易に殺菌できるのでポリ−β−ヒドロキシブチ
レートが糸の形で使用できる外科において多くの
用途を有する重合体である。さらにこれらの重合
体は、補綴を製作する成形の種々の既知の技術に
よつて賦形できる。これらの重合体は、また通例
の方法によつて防糸または押出できる。最後に、
これらのポリ−β−ヒドロキシブチレートはオリ
ゴマーの形またはβ−ヒドロキシ−酪酸である単
量体の形で解重合できる。この目的を達するため
に、特にフランス特許出願第2486072号明細書に
記載されたような方法を使用できる。
下記の例は、本発明を具体的に説明するのに役
立つ。
例 1 攪拌機、温度計、滴下漏斗および水冷凝縮器を
備えた2丸底フラスコに、乾燥物53gを含有す
る菌株アルカリゲネス・ユートロフス
(Alcaligenes eutrophus)の細菌培養物からなる
微生物の水性懸濁液79.5gを導入する。
次いで1,2−ジクロロエタン1を導入し
た。有効な攪拌をしながら、懸濁液を0.4hの間大
気圧において還流させる。72℃において1.5hで
水/1,2−ジクロロエタン最低共沸混合物を除
く。この蒸留の間有機溶媒を最循環する。
水がすべて共沸混合物の形で除かれた時に、温
度は83℃に達し、次いでこの温度を0.5時間保つ。
次いで、懸濁液を急冷し、次に微生物の固体の
遺骸を除くために、圧力3バールにおいて加圧ろ
過する。ケークを1,2−ジクロロエタン300ml
をもつて洗浄する。
次いで、有機溶媒を蒸発乾固し、次に29.15g
のポリ−β−ヒドロキシブチレートを回収する。
抽出の収率は、使用する微生物の乾燥物の重量
で除した抽出重合体の重量によつて与えられ、そ
して55%の量になる。
例2および例3 乾燥物53gを含有する微生物の水性懸濁液106
gを用いて、例1を繰り返す。
72℃における水の共沸飛末同伴には1.6hを要す
る。
この後、第1の場合(例2)においては0.4hし
かも第2の場合(例3)においては1.4h、温度を
83℃を保つ。
ポリ−β−ヒドロキシブチレートのそれぞれの
回収は、28.6g(例2)および30.0g(例3)
〔それぞれ抽出収率54%(例2)および56%(例
3)に相当する〕である。
これらの結果から、本発明により、共沸混合物
を形成する乾燥操作を実際の抽出操作と結合する
連続プロセスによつてポリ−β−ヒドロキシブチ
レートの最適抽出収率を得ることができると推論
できる。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 1 a ポリ−β−ヒドロキシブチレートを含有
    する微生物の水性懸濁液を、水と最低沸点共沸
    混合物を形成しその共沸混合物が共沸点を有す
    る、ポリ−β−ヒドロキシブチレートの選択抽
    出溶媒と接触させ、 b 共沸混合物を共沸点で共沸蒸留することによ
    つて、微生物の水性懸濁液から水を除き、 c 同時に共沸混合物の共沸点でポリ−β−ヒド
    ロキシブチレートを抽出溶媒で抽出して、ポリ
    −β−ヒドロキシブチレート及び抽出溶媒を含
    有する抽出物層を得ること を特徴とする、溶媒によるポリ−β−ヒドロキシ
    ブチレートを含有する微生物の水性懸濁液からの
    ポリ−β−ヒドロキシブチレートの抽出方法。 2 ハロゲン化脂肪族溶媒を、ポリ−β−ヒドロ
    キシブチレート用の、水と最低沸点共沸混合物を
    形成する溶媒として用いることを特徴とする、特
    許請求の範囲第1項に記載の方法。 3 ポリ−β−ヒドロキシブチレート用の、水と
    最低沸点共沸混合物を形成する溶媒が、塩素化飽
    和脂肪族溶媒であることを特徴とする、特許請求
    の範囲第1項および第2項に記載の方法。 4 溶媒が、クロロメタン、クロロエタンおよび
    クロロプロパンから選ばれることを特徴とする、
    特許請求の範囲第3項に記載の方法。 5 使用する溶媒が、1,2−ジクロロエタンで
    あることを特徴とする、特許請求の範囲第4項に
    記載の方法。 6 無水溶媒が得られるまで、水を共沸蒸留によ
    つて除くことを特徴とする、特許請求の範囲第1
    項ないし第5項の何れか1項に記載の方法。 7 ポリ−β−ヒドロキシブチレート用溶媒が問
    題の温度において水をもつて飽和されるまで、水
    を共沸的に除くことを特徴とする、特許請求の範
    囲第1項ないし第5項の何れか1項に記載の方
    法。 8 微生物の水性懸濁液および抽出溶媒が重量比
    1:2〜1:50で使用されることを特徴とする、
    特許請求の範囲第1項ないし第7項の何れか1項
    に記載の方法。 9 重量比が1:5〜1:20であることを特徴と
    する、特許請求の範囲第8項に記載の方法。
JP14814085A 1984-07-06 1985-07-05 ポリ‐β‐ヒドロキシブチレートの抽出方法 Granted JPS6135790A (ja)

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FR8410921 1984-07-06

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JPS6135790A JPS6135790A (ja) 1986-02-20
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