JPH0572920B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

産業上の利用分野 本発明は、医薬として実用に供しうる高純度の
メチルコバラミンの製造方法に関する。 従来の技術 メチルコバラミンは、血液および髄液存在型の
補酵素型B₁₂として、神経細胞などの組織移行性
に優れている。生化学的にはメチル基転移反応に
関与し、核酸・蛋白・脂質代謝においてB₁₂同族
体の中で最も優れた生体内活性を示す。臨床的に
は、巨赤芽球性貧血に有効であるのみならず、糖
尿病性神経障害、多発性神経炎などの末梢性神経
障害治療剤として有効である。 メチルコバラミンの製法についての種々の方法
が知られているが、代表的な方法としては例えば
出発原料としてシアノコバラミンを使用する方法
がある（特公昭45−38059）。 発明が解決しようとする問題点 この合成法によつて得られたメチルコバラミン
含有溶液中には、微量のシアノコバラミン、ヒド
ロキソコバラミン、更に黄色物質、塩類などが含
有されている。したがつて、いかにしてこれらの
メチコバール意外の挾雑成分を除き、高純度のメ
チルコバラミンを得るかが問題である。 これらの挾雑成分を除去する方法としては、こ
れらの物質は塩類を除いてその性質が近似してい
るため、吸着性の差を利用した方法、例えば、イ
オン交換樹脂クロマトグラフイーによる方法およ
び水−アセトン結晶化法などがすでに知られてい
る。 しかしながら、これらの方法は、次のような欠
点を有する。すなわち、イオン交換樹脂交脂クロ
マトグラフイーによる方法は、イオン交換樹脂が
高価なため、再利用するための別途設備を要する
という欠点を有し、また水−アセトン結晶化法で
は化学的性質が近似しているため、メチルコバラ
ミンの分離精製は困難であるという欠点を有して
いる。 問題点を解決するための手段 そこで、本発明者等は、これらの欠点を有しな
い高純度メチルコバラミンを得るため、長年にわ
たつて研究を重ねてきたが、次の手段により解決
できることを見い出し、本発明を完成した。すな
わち、 シアノコバラミンを常法によりメチル化して、
メチルコバラミンを主成分とする反応混合物を
得、この反応混合物を出発物質としてこれを精製
し、高純度のメチルコバラミンを得る工程におい
て、次の５つの工程を結合することを特徴とする
高純度のメチルコバラミンの製造法。 反応混合液のPHを約2.5〜7.0に調整する工
程、 シリカゲルに接触させ、該吸着物に低級脂肪
族アルコール−水または低級脂肪族ケトン−水
を流出せしめる工程、 次いで該吸着物に、低級脂肪族アルコール−
水を流出せしめ、吸着物を留出する工程、 該留出液をジビニルベンゼン／スチレン系共
重合体樹脂クロマトグラフイーと接触させ、そ
の際、低級脂肪族アルコール−水または低級脂
肪族ケトン−水を低濃度から段階的に濃度をあ
げて溶出せしめる工程、 吸着部を低級脂肪族ケトン−水を流出して吸
着物を脱離せしめ、該留出液を濃縮し、低級脂
肪族ケトンを加えて結晶化させ、結晶部より高
純度のメチルコバラミンを得る工程 出発物質として用いるメチルコバラミンを主成
分とする反応混合物とは、シアノコバラミンを常
法によりメチル化して得られるが、具体的に代表
的な方法を述べれば、例えば特公昭45−38059実
施例３に記載されている方法であり、本法によれ
ば、主成分としてのメチルコバラミンのほか、不
純物としてシアノコバラミン、ヒドロキソコバラ
ミン、コバルト原子にメチル基が２個配位した副
生物、Naclなどの塩類などを含有するものであ
る。 本発明は、これを出発物質として不純物を除去
し、高純度のメチルコバラミンを得る方法である
が、上記の工程を更に詳細に述べれば次のとおり
である。 の工程 反応混合物のPHを約2.5〜7.0に調整する工程で
あるが、通常は希塩酸水溶液、好ましくは0.03N
以下の希塩酸を用いておこなう。PHは５前後が最
も好ましい。この範囲のPHに調整することによつ
て吸着量の増加と溶出分離に著しく効果がある。
PH7.0を超えた場合は未分離となり不利である。 の工程 このメチル化反応液を、シリカゲルに接触させ
る工程である。シリカゲルとしては例えばシリカ
ゲル−40（メルク社製）などを用いる。シリカゲ
ル−40は、細孔径が40Åで他のシリカゲルに比し
大きく吸着に有利である。 溶出は、低級脂肪族アルコール−水または低級
脂肪族ケトン−水、好ましくはメタノール水溶液
を用い、sv0.7でおこなうことが好結果を与える。
５％メタノール水溶液が特に好ましい。 この操作により、目的物質は吸着部にあり、塩
化ナトリウムなどが非吸着部分として除かれる。 の工程 目的物質であるメチルコバラミンを含む吸着物
に、更に低級脂肪族アルコール類−水を流出せし
め、吸着物を留出する工程である。この際svは
0.5〜1.0の範囲でおこなうことが好ましい。 低級脂肪族アルコール類とは、メタノール、エ
タノール、プロパノール、ブタノールなどがあげ
られるが、メタノールが最も好ましい。メタノー
ルの濃度は15％前後が好ましい結果を与える。 この工程により目的物質であるメチルコバラミ
ンは非吸着部分にあり、吸着されるのは黄色不純
物およびヒドロキソコバラミンである。非吸着部
分には、メチルコバラミンのほか、シアノコバラ
ミンが存在するものと考えられる。 の工程 該留出液を、ジビニルベンゼン／スチレン系共
重合体樹脂に接触させる工程である。 ジビニルベンゼン／スチレン系共重合体はポリ
スチレン系のもので、構造的には下記の構造
（）を有している。 具体例をあげれば、例えばダイヤイオンHP−
20またはダイヤイオンHP−40などをあげること
ができる。

【化】 溶出は、低級脂肪族アルコール−水、または低
級脂肪族ケトン−水でおこなうが、最も好ましい
のは、10％アセトン水溶液でsvは1.0程度である。
この操作により、非吸着部分にはシアノコバラミ
ンが、吸着部分には、目的物であるメチルコバラ
ミンが存在する。 の工程 吸着部から目的物質であるメチルコバラミンを
得る方法である。 具体的には、低級脂肪族ケトン、好ましくは20
％アセトン水溶液を、上記カラムにsv1.0で流し、
目的物を脱離せしめたのち、更に低級脂肪族ケト
ン、好ましくはアセトンで結晶化し、常法により
目的物であるメチルコバラミンを得ることができ
る。 本発明のメリツトを要約すると次のとおりであ
る。 (1) 高純度・高収率のメチルコバラミンを得る工
業的な方法である。 (2) 本法では、シリカゲルクロマトおよびジビニ
ルベンゼン／スチレン系共重合体樹脂クロマト
の再精製工程を低級アルコールおよび低級ケト
ンの水溶液で、同一カラム内溶出除去をおこな
うため、大幅な時間短縮と、精製設備が不要で
ある。 次に、本発明の代表的な実施例を掲げるが、本
発明がこれらのみに限定されることがないことは
いうまでもない。 実施例 １ シアノコバラミンからメチルコバラミンを製造
する方法（特公昭45−38059）にしたがい、還
元・メチル化反応（シアノコバラミン8.0ｇ）を
おこない、反応溶液から残余のヨードメチルを濃
縮留去し、95％メチルコバラミン含有メタノール
−水溶液600c.c.を得た。 溶液を希塩酸水溶液（0.03N以下）にて、PH5.0
に調整した後、シリカゲル（Kieselgel−40メチ
ル社製）500c.c.が充填されたカラムにsv0.5の流速
で吸着させる。次いで、５％メタノール水溶液
500c.c.をsv0.7にて溶出し、ヒドロキソコバラミ
ン、食塩および金属錯体塩（可溶化物）の除去を
おこなう。次いで、15％メタノール水溶液1500c.c.
をsv0.5で流し、99％メチルコバラミン、微量の
シアノコバラミンを含有する溶液1000mlを溶出し
た。この溶液をジビニルベンゼン・スチレン共重
合体樹脂（ダイヤイオンHP−20）1000c.c.が充填
されているカラムに導き、sv0.5で吸着せしめ、
続いて10％アセトン水溶液400c.c.をsv1.0で流し、
シアノコバラミンを除去し、続いて20％アセトン
水溶液1500c.c.をsv1.0で流し、メチルコバラミン
100c.c.を溶出した。これを60℃以下で減圧、濃縮
し、100c.c.水溶液とした。これにアセトン100c.c.を
加えて、40℃に溶解後、アセトン800c.c.を徐々に
滴下、結晶化をおこない、メチルコバラミン7.4
ｇ（収率92.5％）を得た。結晶はHPLC法で含量
測定の結果メチルコバラミン99.9％であり、シア
ノコバラミンは検出されなかつた。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ シアノコバラミンを常法によりメチル化し
   て、メチルコバラミンを主成分とする反応混合物
   を得、この反応混合物を出発物質としてこれを精
   製し、高純度のメチルコバラミンを得る工程にお
   いて、次の５つの工程を結合することを特徴とす
   る高純度のメチルコバラミンの製造法。 反応混合液のPHを約2.5〜7.0に調整する工
   程、 シリカゲルに接触させ、該吸着物に低級脂肪
   族アルコール−水または低級脂肪族ケトン−水
   を流出せしめる工程、 次いで該吸着物に、低級脂肪族アルコール−
   水を流出せしめ、吸着物を留出する工程、 該留出液をジビニルベンゼン／スチレン系共
   重合体樹脂クロマトグラフイーと接触させ、そ
   の際、低級脂肪族アルコール−水または低級脂
   肪族ケトン−水を低濃度から段階的に濃度をあ
   げて溶出せしめる工程、 吸着部を、低級脂肪族ケトン−水を流出して
   吸着物を脱離せしめ、該留出液を濃縮し、低級
   脂肪族ケトンを加えて結晶化させ、結晶部より
   高純度のメチルコバラミンを得る工程