JPS6216497A - シチジン―５′―ジリン酸コリン１水和物結晶の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明はシチジン−５′−ジリン酸コリン（以下、ＣＤ
Ｐ−コリンと称する。）の精製法に関する。

従来の技術 ＣＤＰ−コリンは脳代謝賦活剤として用いられている物
質であって、その製造法としては微生物を用いる方法と
化学的に合成する方法とが知られている。

化学的合成法によるＣＤＰ−コリンの製造法としては、
たとえばフチジン−５フーモツリン酸（以下、５’−Ｃ
ＭＰと略称する。）とホスホリルコリンとを原料とし、
これらをジシクロへキシルカルボジイミドの存在下に反
応させる方法［ジャーナル　オブ　バイオロジカル　ケ
ミストリー（Ｊ。

Ｂｔｏｌ、　　Ｃｈｅｗ、　）第２２２巻１８５頁（１
９５６年）コ、５’−ＣＭＰのアミド類とホスホリルコ
リンとを反応させる方法「特公昭４２−１３８４号公報
１５’　−ＣＭＰとホスホリルコリンのアミド類とを反
応させる方法［特公昭４５−４７４７号公報］などが提
案されている。しかし、これらいずれの方法においても
反応は定量的には進行しないで、反応生成物中には目的
物であるＣＤＰ−コリンのほかに、未反応の原料や副反
応により生成した副生成物が不純物として存在している
。このような不純物はその種類が多いうえに、ＣＤＰ−
コリン自体の物理化学的性質に類似する物質も含まれて
おり、このような不純物を含む粗製のＣＤＰ−コリンか
ら不純物を除去するには、未だ数多くの課題が残されて
いる。

従来、化学的合成法により製造された粗製のＣＤＰ−コ
リンを精製する方法として、活性炭を用いる方法、強塩
基性イオン交換樹脂を用いる方法、あるいはこれらを併
用する方法が提案されている。

しかしながら、これら精製法は、いずれもＣＤＰ−コリ
ン、さらには数種の不純物を、まず活性炭やイオン交換
樹脂に吸着させ、続いて吸着されたＣＤＰ−コリンと不
純物とを各種溶離剤を用いて分別溶出させる方法であり
、このような方法では（ｉ）大量の活性炭あるいはイオ
ン交換樹脂を必要とする、（１１）溶離剤として水のほ
かに蟻酸、アンモニア、アルコールなどの各種酸、アル
カリ、溶剤を必要とする、（ｉｉｉ）溶出液中のＣＤＰ
−コリン感度が低く、濃縮などによるＣＤＰ−コリンの
採取に多量のエネルギーを必要とする、（ｉｖ）溶出に
用いた酸、アルカリ、溶剤などの回収に煩雑な操作を必
要とするなどの欠点があるため工業的精製法としては必
ずしも有利な方法とはいえない。

問題点を解決すめための手段 本発明者らは、従来技術が有するこのような欠点を克服
すべく鋭意検討の結果、特定の２Ｎのイオン交換樹脂を
使用することにより粗製のＣＤＰ−コリン水溶液から不
純物のみを特異的に吸着除去できることを見い出した。

すなわち、本発明は化学的合成法により製造された粗製
のシチジン−５′−ジリン酸コリンの水溶液を強酸性イ
オン交換樹脂および弱塩基性イオン交換樹脂と接触させ
ることを特徴とするシチジン−５′−ジリン酸コリンの
精製法である。

本発明憾おける、化学的合成法によって製造された粗製
のシチジン−５′−ジリン酸コリン（以下、単に粗製の
ＣＤＰ−コリン、と略称する。）としては、たとえば５
′−ＣＭＰまたはその反応性誘導体とホスホリルコリン
またはこれらの塩、あるいは５’−ＣＭＰとホスホリル
コリンの反応性誘導体またはこれらの塩を反応させるこ
とにより製造されたものを挙げる二七ができる。このよ
うな原料化合物を用いるＣＤＰ−コリンの製造法は、す
でに公知であり、５’−ＣＭＰの反応性誘導体としては
、たとえば５’−ＣＭＰのアミド類（たとえば遊離のア
ミド、モノメチルアミド、ジエチルアミ１１モルホリド
など）、またホスホリルコリンの反応性誘導体としては
、たとえばホスホリルコリンのアミド類（たとえば遊離
のアミド、モノメチルアミド、ジエチルアミド、モルホ
リドなど）などがある。　本反応は、通常非水系の有機
溶媒（たとえば０〜クロロフエノール、トリクレゾール
、アセトニトリル、ピリジンなど）中で行なわれる。こ
のような反応により得られた粗製のＣＤＰ−コリンには
未反応原料あるいはこれに起因する不純物のほかに、副
反応により生成した不純物（たとえばジシチジンピロリ
ン酸エステル、シチジン−５′−ジリン酸など）が含ま
れている。

このような粗製のＣＤＰ−コリンから、その水溶液を調
製するには反応生成物に水を加えればよい。通常ＣＤＰ
−コリンの濃度がほぼ１〜３０重量％（好ましくは、は
ぼ３〜ｌＯ重量％）になるように水を加える。反応は通
常有機溶媒中で行なわれるが、このような場合には反応
液から有機溶媒を留去して濃縮したのち水を加えて水溶
液とするか、あるいは反応液にエーテルなどを加えたの
ち、水で抽出することにより粗製のＣＤＰ−コリンの水
溶液を得ることができる。

本発明では、このようにして得られた水溶液を強酸性イ
オン交換樹脂と弱塩基性イオン交換樹脂との両樹脂に接
触させる。

本発明で用いることのできる強酸性イオン交換樹脂とし
ては１．ＳＯ，Ｈを活性基とする強酸型のイオン交換樹
脂を挙げることができ、通常架橋ポリスチレンをスルホ
ン化した樹脂が用いられる。

このような強酸性イオン交換樹脂として、たとえばアン
バーライト　Ｉ　Ｒ−１２４，２００，２５２（オルガ
ノ（株）製）、ダイヤイオン　　ＰＫ−■ ２０８．２１６，２２８．ダイヤイオ：／ＳＫ−■ ２０、グイ’ｒイオン　　ＨＰＫ−２５，３０゜５５（
三菱化成工業（株）製）、ダウエックス　５゜ＷＸ８．
ＭＳＣ−１（ダウケミカル社（株）製）などを挙げるこ
とができる。このような強酸性イオン交換樹脂（↓、Ｈ
型を用いる。この樹脂の使用量は、不純物の種類あるい
はその量によっても左右されるが、通常処理されるべき
粗製のＣＤＰ−コリン１００ｇ当たりほぼ５００〜３０
００−である。

また、本発明で用いることのできる弱塩基性イオン交換
樹脂としては、第３級アミン、ポリアミンなどを活性基
とする有効ｐＨ範囲０〜９のイオン交換樹脂を挙げるこ
とができる。このような弱塩基性イオン交換樹脂として
は、たとえばアン歯 ＋０．２０．３０（三菱化成工業（株）製）、ダウ■ エックス　ＭＷＡ−１、ＷＧｒｔ（ダウケミカル（株）
製）などである。このような弱塩基性イオン交換樹脂は
ＯＨ型を用いる。この樹脂の使用量は、不純物の種類あ
るいはその量によっても左右されるが、通常処理される
べき粗製のＣＰＤ−コリンの１００ｇ当たりほぼ２００
〜５００ｄである。これら両樹脂に粗製のＣＰＤ−コリ
ンの水溶液を接触させる方式としては、バッチ式と塔式
とを挙げることができる。一般に効率の面からみて塔を
用いるのが好ましい。水溶液との接触は両樹脂のうちの
いずれを先に行ってもよい。一般には強酸性イオン交換
樹脂を先°に接触させる。これら両樹脂は混床式で用い
てもよい。　不純物として無機塩が含まれている場合に
は、まず、強酸性イオン交換樹脂で処理し、次いで弱塩
基性イオン交換樹脂で処理するのがよい。塔方式の場合
にはＳｖがほぼ０．１〜５の速度で通液する。接触温度
は強酸性イオン交換樹脂の場合にはＣＰＤ−コリンの加
水分解を防止するため約１０℃以下が好ましく、弱塩基
性イオン交換樹脂の場合には室温で行なわれる。

接触処理後の樹脂は、常法により再生することができる
。すなわち強酸性イオン交換樹脂については、たとえば
塩酸などの鉱酸の水溶液を用いてＨ型に再生することが
できる。また弱塩基性イオン交換樹脂については、たと
えば水酸化ナトリウムなどのアルカリの水溶液を用いて
ＯＩ−（型に再生することができる。

粗製のＣＰＤ−コリンの水溶液を両樹脂に接触処理させ
たあとの水溶液は、そのまま濃縮し、濃縮液を常法によ
りアルコールで晶出することにより純品のＣＰＤ−コリ
ンｌ水和物の結晶を得ることができる。

なお、粗製の、あるいは精製されたＣＤＰ−コリンの水
溶液中に含まれる不純物は高速液体クロマトグラフィー
（Ｕｖ検出またはＲ１検出）を用いて分析することがで
きる。

本発明の作用効果 本発明の精製法によれば、粗製のＣＤＰ−コリンに含ま
れる不純物成分のみが選択的に吸着除去されるため、従
来の吸着炭、吸着樹脂による精製法と比べて樹脂の使用
量が大幅に減少し、また水辺外の特殊な溶離剤を必要と
しない。このため、極めて高濃度のＣＤＰ−コリンを含
有する精製液を得ることができる。また本精製法では精
製収率が約９７％以上であり、はぼ定量的である。また
本発明の精製法によれば、各種溶離剤などの回収操作が
不要となるなどの利点を有している。

このように本発明は工業上極めて有用な精製法である。

以下実施例を挙げて本発明を更に具体的に説明する。

実施例　１ ３０ｇのＣＤＰ−コリン、７ｇのホスホリルコリンおよ
び１．５ｇの５’−ＣＭＰを含有する粗製のＣＤＰ−コ
リンの水溶液５００顧を強酸性イオン交換樹脂充填塔［
塔内径１．５ｃｍの二重管式り６０メツシユ、Ｈ型４０
０滅を充填（樹脂層の高さ２２５ｃｍ）したもの、外筒
には５℃の冷水を通じておく］にＳｖが０．５の速度で
通液し、通液後７００ｄの水を用いて水洗（ＳＶ＝、０
．５）した。

この間ＣＤＰ−コリンを含有する合計９５０−の溶出液
を採液した。高速液体クロマトグラフィー（Ｒ１検出）
による分析の結果、この溶出液中のホスホリルコリンの
量はＯ、ｌ　ｇ（除去率９８．５％）、５’−ＣＭＰの
量は１．５ｇであることを確認した。

次いでこの溶出液を弱塩基性イオン交換樹脂充填塔［塔
内径１．０ｃｍのクロマト塔にダ■ イヤイオン　ＷＡ−３０，ＯＨ型１００−を充填したも
の（樹脂層の高さ１２７　ａｍ）にＳＶが２．０の速度
で通液し、通液後４００ｄの水を用いて水洗（ｓｖ＝２
．０）した。この間ＣＤＰ−コリンを含有する合計＋　
３００ｄの溶出液を採液した。この溶出液を高速液体ク
ロマトグラフィー（ＵＶ検出）によって分析したところ
、ＣＤＰ−コリン量は２９．４ｇであり、５’−ＣＭＰ
、その他不純物ピークは検出されなかった（ＣＤＰ−コ
リンの回収率９８．０％）。

実施例　２ ６．５Ｗ／Ｖ％のＣＤＰ−コリン、１．４Ｗ／Ｖ％のホ
スホリルコリン、０．２Ｗ／Ｖ％の５′−ＣＭＰ、１．
０Ｗ／Ｖ％の５’−ＣＭＰモルホリゾート、モルホリン
、ジシチジンビロリン酸エステル、４−モルホリン−Ｎ
、Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド、遊離リン酸
、その他の不純物を含有する粗製のＣＤＰ−コリンの水
溶液４００ｄを強酸性イオン交換樹脂充填塔［塔内径１
．５ｃｍの■ 二重管式クロマト塔へダイヤイオン　　ＨＰ　Ｋ　−３
０，４２〜６０メツシユ、Ｈ型４００威を充填（樹脂層
の高さ２２５ｃｍ）したちの、外筒には５℃の冷水を通
じておく］にＳｖが０．５の速度で通液し、通液後６０
０旙の水を用いて水洗（Ｓ　Ｖ　＝　０　。

５）した。この間ＣＤＰ−コリンを含有する合計７２０
−の溶出液を採液した。

次いでこの溶出液を弱塩基性イオン交換樹脂充填塔［塔
内径ｌ、Ｏｃｍのクロマト塔にアンバーライトＩ　ＲＡ
−９４Ｓ、ＯＨ型６０戒を充填（樹脂層の高さ７５ｃｎ
＋）ｌ、たもの］にＳＶが２，０の速度で通夜し、通液
後４２０戒の水を用いて水洗（ＳＶ　＝２．０）した。

この間ＣＤＰ−コリンを含有する合計１１００ｄの溶出
液を採液した。

この溶出液を高速液体クロマトグラフィー（ＵＶ検出）
によって分析したところ２５．５ｇのＣＤＰ−コリンが
確認され、不純物ピークは認められなかった。

このＣＤＰ−コリン含有の水溶液を濃縮し、濃縮液をア
ルコールで晶出することにより純品のＣＤＰ−コリン１
水和物の結晶が得られた。この結晶の元素分析値は次の
通りであった。

Ｃ（％’）　　Ｉ（（％）　Ｎ（％）０（％）分析値　
３３．３０　　５．６５　　１１．０２　　１２．３０
計算値　３３．２１　　５．５７　　１１．０７　　１
２．２４実施例　３ 遊離のホスホリルコリン１２ｇとシチジン−５′−リン
酸アミドのジシクロへキシルグアニジウム塩２８ｇとを
オルトクロロフェノール５００１ｎ１．に溶解させ１０
０℃で１６時間反応させた。反応終了後オルトクロロフ
ェノールを減圧で殆んど濃縮留去した。この濃縮液にエ
ーテル５００−を加えこれを水２５０滅で２回抽出した
。両袖出液を合しエーテルｌｏＯｍ９で洗い水層に含ま
れるエーテルを減圧留去し液量を４００−とした。この
ようにして得られた粗製のＣＤＰ−コリンの水溶液を実
施例２で用いたのと同じ２種のイオン交換樹脂充填塔を
用いて同じ条件下で処理し、得られたＣＤＰ−コリン水
溶液を高速液体クロマトグラフィーによって分析したと
ころ不純物のピークは全く認められなかった。

この水溶液を濃縮し、濃縮液をアルコールで晶出するこ
とにより純品のＣＤＰ−コリンｌ水和物の結晶１３．９
ｇを得た。

【図面の簡単な説明】

第１図は実施例２で用いた粗製のＣＤＰ−コリンの水溶
液の高速液体クロマトグラフィー（ＵＶ検出）による分
析チャートを示す。　第２図は、強酸性イオン交換樹脂
と接触させて得られたＣＤＰ−コリンを含有する溶出液
の高速液体クロマトグラフィー（ＵＶ検出）による分析
チャートを示す。 第３図は、さらに弱塩基性イオン交換樹脂と接触させる
ことにより得られたＣＤＰ−コリンを含有する精製液の
高速液体クロマトグラフィー（ＵＶ検出）による分析チ
ャートを示す。　　ＰａはＣＤＰ−コリンのピークを示
し　ｐ１〜Ｐ、はいずれも不純物のピークを示す。 図面の浄書（内容に変更なし） ぜ　　葦　貨 ヅ　褌　槌 手　　谷■　　、？ｒｆｆ　　　正　　書（方式）１．
　事件の表示 昭和６０年特許願第１５４９３０号 ２、　発明の名称 シチジン−５゛−ジリン酸コリンの精製法３、　補正を
する者 事件との関係　　特許出願人 住所　　大阪市東区道修町２丁目２７番地名称　　（２
９３）　　武田薬品工業株式会社代表者　　倉　林　　
育　四　部 ４　代理人 住所　大阪市淀用区十三本町２丁目１７番８５号東京連
絡先（特許法規課）電話２７ｇ−２２１８，２２１９５
、補正命令の日付　　昭和６０年１０月２９日（発送日
）６、補正の対象 図面の企図 ７、補正の内容 第１図、第２図および第３図をそれぞれ別紙の通りに補
正（浄書）する（内容に変更なし）。 ８、添付書類の目録 （１）別紙　　　　　　　　　　　　　　１通以上

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 化学的合成法により製造された粗製のシチジン−５′−
   ジリン酸コリンの水溶液を強酸性イオン交換樹脂および
   弱塩基性イオン交換樹脂と接触させることを特徴とする
   シチジン−５′−ジリン酸コリンの精製法。