JPH0562302B2 - - Google Patents
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- JPH0562302B2 JPH0562302B2 JP59034134A JP3413484A JPH0562302B2 JP H0562302 B2 JPH0562302 B2 JP H0562302B2 JP 59034134 A JP59034134 A JP 59034134A JP 3413484 A JP3413484 A JP 3413484A JP H0562302 B2 JPH0562302 B2 JP H0562302B2
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は試料およびラベル付き試薬を含有する
反応混合物を形成せしめ、試料中のアナライトの
量によつて決る割合で二つの形の間に試薬を分割
するように混合物を培養することによつて試料中
のアナライト（analyte）に対する分析を行なう
方法に関する。かかる分析には良く知られている
免疫分析、ワンサイト免疫測定分析（one−site
immunometric assay）、ツーサイト（またはサ
ンドウイツチ）免疫測定分析（two−site
immunometric assay）および凝集反応分析
（agglutination assay）を含む。
反応混合物を形成せしめ、試料中のアナライトの
量によつて決る割合で二つの形の間に試薬を分割
するように混合物を培養することによつて試料中
のアナライト（analyte）に対する分析を行なう
方法に関する。かかる分析には良く知られている
免疫分析、ワンサイト免疫測定分析（one−site
immunometric assay）、ツーサイト（またはサ
ンドウイツチ）免疫測定分析（two−site
immunometric assay）および凝集反応分析
（agglutination assay）を含む。
不均質分析においては、ラベル付き試薬の二つ
の形を分離することが必要である、かくして一つ
の量または濃度が他によつて妨害されることなく
測定できる。種々な分離方法が使用されており、
これには沈澱、沈降、過、遠心分離および傾瀉
を含む。本発明はラベル付き試薬の二つの形を分
離する別の方法に関する。
の形を分離することが必要である、かくして一つ
の量または濃度が他によつて妨害されることなく
測定できる。種々な分離方法が使用されており、
これには沈澱、沈降、過、遠心分離および傾瀉
を含む。本発明はラベル付き試薬の二つの形を分
離する別の方法に関する。
ジエイ・エル・ギーゲル等はClim.Chem.28／
９、1984頁〜1898頁（1982年）に放射状分配免疫
分析を発表しており、これはアナライトに対する
抗体を（第二抗体によつて）ガラス繊維紙の中
心点で非移動性にしている。アナライトを含有す
る試料を、アナライトの酵素ラベル付き変種
（version）での培養後、スポツトに付与してい
る。次に洗浄溶液をスポツトに付与し、非移動性
にされた抗体に結合されなかつたラベル付き試薬
の部分をスポツトから移動させている。洗浄溶液
は酵素の基質を含有する。最後にスポツトに残つ
た酵素濃度を螢光材料の生成速度によつて測定す
る。酵素は自動操作に良く適合されるが次の如き
多くの弱点を有している： (i) 意図するそれぞれ異なる分析に対し別々のセ
ツトの紙を必要とする。
９、1984頁〜1898頁（1982年）に放射状分配免疫
分析を発表しており、これはアナライトに対する
抗体を（第二抗体によつて）ガラス繊維紙の中
心点で非移動性にしている。アナライトを含有す
る試料を、アナライトの酵素ラベル付き変種
（version）での培養後、スポツトに付与してい
る。次に洗浄溶液をスポツトに付与し、非移動性
にされた抗体に結合されなかつたラベル付き試薬
の部分をスポツトから移動させている。洗浄溶液
は酵素の基質を含有する。最後にスポツトに残つ
た酵素濃度を螢光材料の生成速度によつて測定す
る。酵素は自動操作に良く適合されるが次の如き
多くの弱点を有している： (i) 意図するそれぞれ異なる分析に対し別々のセ
ツトの紙を必要とする。
(ii) 非移動性にされた抗体を用い紙の調整に注
意を払わなければならない。何故なら反応性抗
体の量は均一に分布し、一つの紙から他の
紙へと同じでなければならないからである。
意を払わなければならない。何故なら反応性抗
体の量は均一に分布し、一つの紙から他の
紙へと同じでなければならないからである。
(iii) 同時に紙に一つより多くの試薬を加えるこ
とができない。各試薬の添加後次の試薬の添加
前に培養期間を行なわなければならない。さも
ないと第一の試薬は続く試薬の添加によつて非
移動性にされた抗体から洗い出されてしまう。
とができない。各試薬の添加後次の試薬の添加
前に培養期間を行なわなければならない。さも
ないと第一の試薬は続く試薬の添加によつて非
移動性にされた抗体から洗い出されてしまう。
(iv) 特に高温で行なうとき培養期間中に紙が乾
燥するのを防ぐ予防策を講じなければならな
い。
燥するのを防ぐ予防策を講じなければならな
い。
本発明はこれらの欠点を克服することにある。
本発明は試料中のアナライトの分析を行なう方
法を提供することにあり、この方法はクロマトグ
ラフイ媒体を用意し、一部が上記媒体に移動性で
ある形で存在し、一部が上記媒体に非移動性であ
る形で存在するラベル付き試薬を含有する反応混
合物を形成し、二つの形の割合を試料中のアナラ
イトの量によつて決定し、反応混合物をクロマト
グラフイ媒体上のスポツトに付与し、ラベル付き
試薬の移動性の形をスポツトから移動させ、その
後ラベル付試薬の移動性および非移動性の形の一
つまたは両者を測定することからなる。
法を提供することにあり、この方法はクロマトグ
ラフイ媒体を用意し、一部が上記媒体に移動性で
ある形で存在し、一部が上記媒体に非移動性であ
る形で存在するラベル付き試薬を含有する反応混
合物を形成し、二つの形の割合を試料中のアナラ
イトの量によつて決定し、反応混合物をクロマト
グラフイ媒体上のスポツトに付与し、ラベル付き
試薬の移動性の形をスポツトから移動させ、その
後ラベル付試薬の移動性および非移動性の形の一
つまたは両者を測定することからなる。
本発明方法によれば水性媒体中の他の所望の試
薬とアナライトを含有する試料の反応混合物を形
成し、培養し、所望によつてそれを数段階で行な
う。次いで反応が完了したときまたは所望時間続
けたとき、反応混合物の全部または一部をクロマ
トグラフイ媒体上のスポツトに付与する。媒体上
で非移動性である種はスポツトで残り、移動性の
種はそこから移動し去る。所望によつてはスポツ
トに好適な溶媒を続いて付与することによつて移
動を助けることができる。好適な溶媒は非移動性
種でなく移動性種をクロマトグラフイ媒体を通つ
て移動させる溶媒である。水性液体の使用が好ま
しいが、エタノールの如き有機液体も使用可能で
ある。所望によつては溶媒は、クロマトグラフイ
媒体中でラベル付き試薬を非移動性にするようラ
ベル付き試薬の形の一つを沈澱させるように選択
してもよい。
薬とアナライトを含有する試料の反応混合物を形
成し、培養し、所望によつてそれを数段階で行な
う。次いで反応が完了したときまたは所望時間続
けたとき、反応混合物の全部または一部をクロマ
トグラフイ媒体上のスポツトに付与する。媒体上
で非移動性である種はスポツトで残り、移動性の
種はそこから移動し去る。所望によつてはスポツ
トに好適な溶媒を続いて付与することによつて移
動を助けることができる。好適な溶媒は非移動性
種でなく移動性種をクロマトグラフイ媒体を通つ
て移動させる溶媒である。水性液体の使用が好ま
しいが、エタノールの如き有機液体も使用可能で
ある。所望によつては溶媒は、クロマトグラフイ
媒体中でラベル付き試薬を非移動性にするようラ
ベル付き試薬の形の一つを沈澱させるように選択
してもよい。
ラベル付試薬の移動性の形の移動が充分な程度
に生じたとき、ラベル付き試薬の移動性または非
移動性の形の何れかが他から妨害されることなく
測定できる。好ましくは移動性の形のラベル付き
試薬を少なくとも0.5cm移動させる。スポツトに
残つた非移動性の形のラベル付き試薬を測定する
のが好ましい。
に生じたとき、ラベル付き試薬の移動性または非
移動性の形の何れかが他から妨害されることなく
測定できる。好ましくは移動性の形のラベル付き
試薬を少なくとも0.5cm移動させる。スポツトに
残つた非移動性の形のラベル付き試薬を測定する
のが好ましい。
本発明方法においては、通常の分析に使用でき
る任意のラベルを使用できる。最も普通の群のラ
ベルは放射性原子、酵素、および螢光および発光
材料である。
る任意のラベルを使用できる。最も普通の群のラ
ベルは放射性原子、酵素、および螢光および発光
材料である。
使用するクロマトグラフイ媒体は、ラベル付き
試薬が分配された二つの形が異なる移動性を有す
る媒体であり、かくすると一つの形を他の形から
物理的に分離できる。一つの形が媒体で実質的に
非移動性、好ましくは完全に非移動性である、し
かし僅かな移動性は必ずしも本発明方法を無効に
することはない。媒体はシート、例えばクロマト
グラフイ紙の形である、そして反応混合物をその
上にスポツトで付与し、移動性の形のラベル付き
試薬をスポツトから放射状に移動させる。媒体が
紙の詰物または材料のブロツクの形であるとき、
移動性の形のラベル付試薬は詰物またはブロツク
中に移動せしめられ、その表面から消失する。或
いは一枚の紙または他のクロマトグラフイ媒体を
反応混合物中に浸漬する、このとき移動性の形の
ラベル付き試薬は上方へ移動せしめられる。或い
は一つの形が磁性的に官応性であるとき、外部磁
界を適用することによつてそれは非移動性にする
ことができ、一方非磁性の形のものは移動性のま
ま残る。
試薬が分配された二つの形が異なる移動性を有す
る媒体であり、かくすると一つの形を他の形から
物理的に分離できる。一つの形が媒体で実質的に
非移動性、好ましくは完全に非移動性である、し
かし僅かな移動性は必ずしも本発明方法を無効に
することはない。媒体はシート、例えばクロマト
グラフイ紙の形である、そして反応混合物をその
上にスポツトで付与し、移動性の形のラベル付き
試薬をスポツトから放射状に移動させる。媒体が
紙の詰物または材料のブロツクの形であるとき、
移動性の形のラベル付試薬は詰物またはブロツク
中に移動せしめられ、その表面から消失する。或
いは一枚の紙または他のクロマトグラフイ媒体を
反応混合物中に浸漬する、このとき移動性の形の
ラベル付き試薬は上方へ移動せしめられる。或い
は一つの形が磁性的に官応性であるとき、外部磁
界を適用することによつてそれは非移動性にする
ことができ、一方非磁性の形のものは移動性のま
ま残る。
クロマトグラフイ手段によつてラベル付き試薬
の結合された形および結合されない形の分離を有
利に行なうことのできるそれ自体良く知られた各
種の分析がある。
の結合された形および結合されない形の分離を有
利に行なうことのできるそれ自体良く知られた各
種の分析がある。
(a) 二重抗体例。競争分析において、試料中のア
ナライト、およびアナライトのラベル付き変種
をアナライトに対する特異性結合剤の限定量と
競争反応させる。アナライトが抗原体またはハ
プテンであるとき、特異性結合剤は一般にその
連合した抗体である。アナライト／特異性結合
剤錯体は特異性結合剤に抗体（第二抗体）の添
加により不溶性にされる。特異性結合剤はアナ
ライトおよびラベル付きアナライトで培養する
前、培養中または培養後第二抗体と反応しても
よい。反応混合物をクロマトグラフイ媒体上の
スポツトに付与したとき、二重抗体複合体はス
ポツトに近く残り、一方非結合ラベル付き試薬
は続いて適当な溶媒を付与することによつてス
ポツトから除去される。
ナライト、およびアナライトのラベル付き変種
をアナライトに対する特異性結合剤の限定量と
競争反応させる。アナライトが抗原体またはハ
プテンであるとき、特異性結合剤は一般にその
連合した抗体である。アナライト／特異性結合
剤錯体は特異性結合剤に抗体（第二抗体）の添
加により不溶性にされる。特異性結合剤はアナ
ライトおよびラベル付きアナライトで培養する
前、培養中または培養後第二抗体と反応しても
よい。反応混合物をクロマトグラフイ媒体上の
スポツトに付与したとき、二重抗体複合体はス
ポツトに近く残り、一方非結合ラベル付き試薬
は続いて適当な溶媒を付与することによつてス
ポツトから除去される。
(b) 粒状固体相。抗体結合ラベル付き試薬および
非結合ラベル付き試薬間の区別は時々方法(a)に
よつて達成するのが困難である。これは高分子
量のアナライトに対する幾つかの競争分析でそ
うである、或いは免疫測定分析系を使用すると
き更に重要である。かかる場合、アナライトに
対する特異性結合剤は粒状固体相に結合させる
とよい、粒状固体相は、クロマトグラフイ媒体
上のスポツトに付与したとき、粒子が続いて付
与した溶媒の影響下に著しい程度に移動しない
ように選択する。好適な粒状材料は市場で入手
でき、それらに試薬を結合させる方法は良く知
られている。続いて付与する溶媒は非結合ラベ
ル付き試薬をスポツトから移動し去るようにす
る。
非結合ラベル付き試薬間の区別は時々方法(a)に
よつて達成するのが困難である。これは高分子
量のアナライトに対する幾つかの競争分析でそ
うである、或いは免疫測定分析系を使用すると
き更に重要である。かかる場合、アナライトに
対する特異性結合剤は粒状固体相に結合させる
とよい、粒状固体相は、クロマトグラフイ媒体
上のスポツトに付与したとき、粒子が続いて付
与した溶媒の影響下に著しい程度に移動しない
ように選択する。好適な粒状材料は市場で入手
でき、それらに試薬を結合させる方法は良く知
られている。続いて付与する溶媒は非結合ラベ
ル付き試薬をスポツトから移動し去るようにす
る。
本発明のこの応用は競争分析例えば免疫分析
に好適である、しかし特に試料中のアナライト
が過剰の非移動性にされた特異性結合剤に結合
せしめられ、アナライトに対するラベル付き特
異性結合剤がアナライトの空の結合位置に結合
せしめられているツーサイト免疫測定分析に好
適である。良く知られているように試料中のア
ナライトは、二つの特異性結合剤（一つは非移
動性にされ、他はラベル付けされている）で、
何れかの順序でまたは同時に培養できる。非移
動性にされた材料に結合されたラベル付き試薬
の量は試料中のアナライトの量に正比例する。
に好適である、しかし特に試料中のアナライト
が過剰の非移動性にされた特異性結合剤に結合
せしめられ、アナライトに対するラベル付き特
異性結合剤がアナライトの空の結合位置に結合
せしめられているツーサイト免疫測定分析に好
適である。良く知られているように試料中のア
ナライトは、二つの特異性結合剤（一つは非移
動性にされ、他はラベル付けされている）で、
何れかの順序でまたは同時に培養できる。非移
動性にされた材料に結合されたラベル付き試薬
の量は試料中のアナライトの量に正比例する。
(c) 凝集反応。凝集の終点は肉眼および器械使用
による多くの方法で評価できる。しかしながら
低凝集度では、少数の凝集物は非凝集粒子の大
きな背景によつて不明瞭になることがあり、判
別困難にし、分析の感度を低下させる。本発明
方法を使用すると、クロマトグラフイ媒体上の
スポツトに付与したとき、凝集した粒子はスポ
ツト近くに残り、一方非凝集粒子は適当な溶媒
によつて除去されるように粒子特性を選択する
ことができる。螢光または着色粒子を用いるこ
とによつて、非凝集粒子の不存在下スポツトで
凝集粒子を検出（肉眼または器械測定によつ
て）することができる。この方法で、感度が改
良される。凝集した粒子は、米国特許第
4332788号に記載されている如く、固定化合物
を用いることにより非凝集粒子からクロマトグ
ラフイにより分離する前に安定化することがで
きる。
による多くの方法で評価できる。しかしながら
低凝集度では、少数の凝集物は非凝集粒子の大
きな背景によつて不明瞭になることがあり、判
別困難にし、分析の感度を低下させる。本発明
方法を使用すると、クロマトグラフイ媒体上の
スポツトに付与したとき、凝集した粒子はスポ
ツト近くに残り、一方非凝集粒子は適当な溶媒
によつて除去されるように粒子特性を選択する
ことができる。螢光または着色粒子を用いるこ
とによつて、非凝集粒子の不存在下スポツトで
凝集粒子を検出（肉眼または器械測定によつ
て）することができる。この方法で、感度が改
良される。凝集した粒子は、米国特許第
4332788号に記載されている如く、固定化合物
を用いることにより非凝集粒子からクロマトグ
ラフイにより分離する前に安定化することがで
きる。
凝集反応にラベル付き粒子を使用することは
知られており、例えば米国特許第3853987号お
よび第4332788号に記載されている。しかしク
ロマトグラフイによるラベルの二つの形の分離
は教示されていない。
知られており、例えば米国特許第3853987号お
よび第4332788号に記載されている。しかしク
ロマトグラフイによるラベルの二つの形の分離
は教示されていない。
下記実施例は本発明を示す。
実施例 １
〔方法(a)を示す〕
チロキサンの放射線免疫分析
１ 下記試薬を一連の試験管中で一緒に室温で45
分間培養した。
分間培養した。
20μのヒト血清中のチロキシンの標準溶
液。
液。
50μの好適な緩衝剤中の125Iラベル付きチ
ロキシン。
ロキシン。
50μのトリス／NaCl緩衝剤中で稀釈した羊
抗チロキシン血清（γ−グロブリン画分）。
抗チロキシン血清（γ−グロブリン画分）。
２ ５％PEG6000を含有するトリス／NaCl緩衝
剤中で稀釈したろば抗羊γ−グロブリン血清
100μを各試験管に加え、室温で更に５分培
養した。
剤中で稀釈したろば抗羊γ−グロブリン血清
100μを各試験管に加え、室温で更に５分培
養した。
３ 各試験管中の反応混合物から100μ容量を
取り、周辺で支持された直径2.5cmのガラス繊
維フイルター盤（ワツトマンGF／Ｄ）の中心
に徐々に付与した。
取り、周辺で支持された直径2.5cmのガラス繊
維フイルター盤（ワツトマンGF／Ｄ）の中心
に徐々に付与した。
４ トリス／NaCl緩衝剤400μ容量を次いで各
フイルター盤の中心に徐々に付与した。
フイルター盤の中心に徐々に付与した。
５ フイルター盤の中心に残つている放射能を、
盤の中心部分のみがカウンターに曝露されるよ
うに視準させたγ−シンチレーシヨンカウンタ
ーを用いて測定した。
盤の中心部分のみがカウンターに曝露されるよ
うに視準させたγ−シンチレーシヨンカウンタ
ーを用いて測定した。
チロキシン標準 盤の中心に残つている（μ／100ml）
全放射能の％
０ 73.3
２ 45.3
６ 29.3
12 16.0
25 8.7
実施例 ２
〔方法(a)を示す〕
チロキシンの酵素免疫分析（予備形成した第二
抗体複合体使用） １ ホスフエート緩衝剤中で適当量の羊抗チロキ
シン血清（γ−グロブリン画分）およびろば抗
羊γ−グロブリン血清を混合し、室温で一夜培
養して抗体複合体の懸濁液を形成した。
抗体複合体使用） １ ホスフエート緩衝剤中で適当量の羊抗チロキ
シン血清（γ−グロブリン画分）およびろば抗
羊γ−グロブリン血清を混合し、室温で一夜培
養して抗体複合体の懸濁液を形成した。
２ 下記試薬を一連の試験管内で室温で２時間一
緒に培養した。
緒に培養した。
100μのヒト血清中のチロキシンの標準溶
液。
液。
200μのβ−ガラクトシダーゼに抱合させ
ホスフエート緩衝剤で稀釈したチロキシン。
ホスフエート緩衝剤で稀釈したチロキシン。
400μの上述した第二抗体複合体の懸濁液。
３ 各試験からの反応混合物50μ容量をガラス
繊維盤（ワツトマンGF／Ｄ）の中心に徐々に
付与した。
繊維盤（ワツトマンGF／Ｄ）の中心に徐々に
付与した。
４ １mg／mlの牛血清アルブミン、９mg／mlの
NaClおよび10ｍＭの塩化マグネシウムを含有
するホスフエート緩衝剤中のONPG（オルソニ
トロフエニルガラクトシド）の20ｍＭ溶液
400μ容量を各フイルター盤の中心に徐々に
付与した。
NaClおよび10ｍＭの塩化マグネシウムを含有
するホスフエート緩衝剤中のONPG（オルソニ
トロフエニルガラクトシド）の20ｍＭ溶液
400μ容量を各フイルター盤の中心に徐々に
付与した。
５ 盤の中心で黄色スポツトの強度を肉眼で測定
する前に室温で５分間盤を放置した。
する前に室温で５分間盤を放置した。
チロキシン標準（μ／100ml）
黄色スポツトの強度
０ ＋＋＋
２ ＋＋＋
６ ＋＋
12 ＋
25 着色ナシ
実施例 ３
〔方法(b)を示す〕
チロキシンの放射線免疫分析
１ 一連の試験管内で下記試薬を室温で45分間一
緒に培養した。
緒に培養した。
20μのヒト血清中のチロキシンの標準溶
液。
液。
50μの好適な緩衝剤中の125I−ラベル付き
チロキシン。
チロキシン。
100μの羊抗チロキシン血清で被覆したポ
リビニルトルエンラテツクス粒子（直径2.1μ）
の懸濁液。
リビニルトルエンラテツクス粒子（直径2.1μ）
の懸濁液。
２ 各試験管中の反応混合物から100μ容量を
取り出し、2.5cmのプレフイルター盤（ミリポ
ア）の中心に徐々に付与した。
取り出し、2.5cmのプレフイルター盤（ミリポ
ア）の中心に徐々に付与した。
３ 各フイルター盤の中心にトリス／NaCl緩衝
剤の400μ容量を徐々に付与し、盤の中心に
残つた放射能を実施例１に記載した如く測定し
た。
剤の400μ容量を徐々に付与し、盤の中心に
残つた放射能を実施例１に記載した如く測定し
た。
チロキシン標準 盤の中心に残つた（μ／100ml）
全放射能％
０ 93.7
２ 52.2
６ 33.7
12 17.0
25 15.3
実施例 ４
〔方法(b)を示す〕
ヒト胎盤ラクトゲンに対する免疫放射能測定分
析 １ 一連の試験管内で下記試薬を室温で30分一緒
に培養した。
析 １ 一連の試験管内で下記試薬を室温で30分一緒
に培養した。
120μのヒト血清中のヒト胎盤ラクトゲン
（HPL）の標準溶液。
（HPL）の標準溶液。
300μの羊抗HPL血清で被覆したポリスチ
レンラテツクス粒子（0.8μ直径）の懸濁液。
レンラテツクス粒子（0.8μ直径）の懸濁液。
300μの125Iでラベル付けしたHPLに対する
羊抗体の溶液。
羊抗体の溶液。
２ 各試験管中の反応混合物から100μ容量を
取り、2.5cmプレフイルター盤（ミリポア）の
中心に徐々に付与した。
取り、2.5cmプレフイルター盤（ミリポア）の
中心に徐々に付与した。
３ 500μ容量のトリス／NaCl緩衝剤を各フイ
ルター盤の中心に徐々に付与し、盤の中心に残
つた放射能を実施例１に記載した如く測定し
た。
ルター盤の中心に徐々に付与し、盤の中心に残
つた放射能を実施例１に記載した如く測定し
た。
HPL標準 盤の中心に残つた（ｎｇ／ml）
放射能％
０ 1.8
0.14 9.5
0.54 23.1
1.07 29.2
3.3 42.5
9.98 45.9
実施例 ５
〔方法(b)を示す〕
フエリチンの免疫酵素測定分析
１ 下記試薬を一連の試験管内で一緒に室温で45
分培養した。
分培養した。
200μのホスフエート緩衝剤中のフエリチ
ンの標準溶液。
ンの標準溶液。
100μの羊抗フエリチン血清で被覆したポ
リスチレンラテツクス粒子（直径0.8μ）の懸濁
液。
リスチレンラテツクス粒子（直径0.8μ）の懸濁
液。
200μの山葵ペルオキシダーゼに抱合した
フエリチンに対する羊抗体の溶液。
フエリチンに対する羊抗体の溶液。
２ 各試験管中の反応混合物から100μ容量を
取り、2.5cmプレフイルター盤（ミリポア）の
中心に徐々に付与した。
取り、2.5cmプレフイルター盤（ミリポア）の
中心に徐々に付与した。
３ テトラメチルベンチジン、過酸化水素および
トリトン100を含有するPH5.0の0.2Mアセテー
ト緩衝剤500μ容量を各フイルター盤の中心
に徐々に付与した。
トリトン100を含有するPH5.0の0.2Mアセテー
ト緩衝剤500μ容量を各フイルター盤の中心
に徐々に付与した。
４ 各盤の中心で青色スポツトの強度の肉眼によ
る測定の前に各盤を５分間放置した。色の強度
は、フエリチンの標準濃度がゼロから2000n
ｇ／mlまで上昇するに従つて増大した。肉眼で
の検知限界は30nｇ／mlフエリチンであつた。
る測定の前に各盤を５分間放置した。色の強度
は、フエリチンの標準濃度がゼロから2000n
ｇ／mlまで上昇するに従つて増大した。肉眼で
の検知限界は30nｇ／mlフエリチンであつた。
実施例 ６
〔方法(c)を示す〕
フエリチンの凝集反応分析
１ 下記試薬を一緒に室温で１時間培養した。
20μのホスフエート緩衝剤中のフエリチン
の標準溶液。
の標準溶液。
20μの羊抗フエリチン血清で被覆したポリ
スチレンラテツクス粒子（ローダミン螢光染料
を含有する直径1.2μ）の懸濁液。
スチレンラテツクス粒子（ローダミン螢光染料
を含有する直径1.2μ）の懸濁液。
２ ホスフエート緩衝した食塩水（１％Ｖ／Ｖ）
中のグルタルアルデヒドの溶液40μを各反応
試験管に加え、更に15分室温で培養した。
中のグルタルアルデヒドの溶液40μを各反応
試験管に加え、更に15分室温で培養した。
３ ゆるやかに撹拌後、各反応混合物50μを2.5
cmガラス繊維盤（ワツトマンGF／Ｄ）の中心
に徐々に付与した。
cmガラス繊維盤（ワツトマンGF／Ｄ）の中心
に徐々に付与した。
４ 各ガラス繊維盤の中心にホスフエート緩衝し
た食塩水400μ容量を徐々に付与した。
た食塩水400μ容量を徐々に付与した。
５ 次に盤を紫外線の下で観察し、各盤の中心で
の赤色螢光スポツトの強度を測定した。フエリ
チンの標準濃度の上昇に従い螢光の強度は増大
した。肉眼による検知限界は15nｇ／mlフエリ
チンであつた。
の赤色螢光スポツトの強度を測定した。フエリ
チンの標準濃度の上昇に従い螢光の強度は増大
した。肉眼による検知限界は15nｇ／mlフエリ
チンであつた。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ アナライト、ラベル付き試薬及びアナライト
のための特異性結合剤を含有する反応混合物を形
成し、 ラベル付き試薬を、一部がクロマトグラフイ媒
体上で移動性である遊離の形で存在させ、かつ一
部がラベル付き試薬／特異性結合剤反応生成物で
ある結合した形で存在させ、 前記二つの形の割合は試料中のアナライトの量
で決定されるようにし、 クロマトグラフイ媒体を用意し、 クロマトグラフイ媒体に反応混合物を適用し、
その後ラベル付き試薬の遊離の形又は結合した形
の一つ又は両方を観察することを含む試料中のア
ナライトの分析を行なう方法において、(a)ラベル
付き試薬／特異性結合剤反応生成物を前記クロマ
トグラフイ媒体上で非移動性であるように不溶性
にし、(b)クロマトグラフイ媒体がシートの形であ
り、反応混合物をシート上のスポツトに付与し、
ラベル付き試薬の移動性の形をスポツトから放射
状に移動させることを特徴とする試料中のアナラ
イトの分析を行なう方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB838305197A GB8305197D0 (en) | 1983-02-24 | 1983-02-24 | Assay methods |
| GB8305197 | 1983-02-24 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59166866A JPS59166866A (ja) | 1984-09-20 |
| JPH0562302B2 true JPH0562302B2 (ja) | 1993-09-08 |
Family
ID=10538561
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59034134A Granted JPS59166866A (ja) | 1983-02-24 | 1984-02-23 | 分析方法 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4666863A (ja) |
| EP (1) | EP0120602B1 (ja) |
| JP (1) | JPS59166866A (ja) |
| DE (1) | DE3480953D1 (ja) |
| GB (1) | GB8305197D0 (ja) |
Families Citing this family (33)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4552839A (en) * | 1983-08-01 | 1985-11-12 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Determination of analytes in particle-containing medium |
| USRE34405E (en) * | 1983-08-01 | 1993-10-12 | Abbott Laboratories | Determination of analytes in particle-containing medium |
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| US5958790A (en) * | 1984-12-20 | 1999-09-28 | Nycomed Imaging As | Solid phase transverse diffusion assay |
| US4740468A (en) * | 1985-02-14 | 1988-04-26 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Concentrating immunochemical test device and method |
| US4670381A (en) * | 1985-07-19 | 1987-06-02 | Eastman Kodak Company | Heterogeneous immunoassay utilizing horizontal separation in an analytical element |
| US5240844A (en) * | 1985-09-13 | 1993-08-31 | Wie Siong I | Test kit for determining the presence of organic materials and method of utilizing same |
| US5501949A (en) * | 1985-12-10 | 1996-03-26 | Murex Diagnostics Corporation | Particle bound binding component immunoassay |
| ZA869297B (en) * | 1985-12-13 | 1987-11-25 | Scripps Clinic Res | Modulation of animal cellular responses with compositions containing isoxanthopterin-8-(1'-beta-aldoglycosidyl)derivatives |
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| JPS6319559A (ja) * | 1986-07-11 | 1988-01-27 | Fuji Photo Film Co Ltd | 免疫分析方法 |
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| JPH0743364B2 (ja) * | 1990-03-23 | 1995-05-15 | 株式会社ピーシーシーテクノロジー | イムノアッセイによる強心配糖体の分析方法 |
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| US5874216A (en) | 1996-02-23 | 1999-02-23 | Ensys Environmental Products, Inc. | Indirect label assay device for detecting small molecules and method of use thereof |
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| US7270959B2 (en) | 2001-07-25 | 2007-09-18 | Oakville Hong Kong Company Limited | Specimen collection container |
| US7560272B2 (en) | 2003-01-04 | 2009-07-14 | Inverness Medical Switzerland Gmbh | Specimen collection and assay container |
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