JPH0552751B2 - - Google Patents

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JPH0552751B2
JPH0552751B2 JP60502331A JP50233185A JPH0552751B2 JP H0552751 B2 JPH0552751 B2 JP H0552751B2 JP 60502331 A JP60502331 A JP 60502331A JP 50233185 A JP50233185 A JP 50233185A JP H0552751 B2 JPH0552751 B2 JP H0552751B2
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tissue
collagen
acetone
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fibrous
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Roy Frederick Oliver
Roy Arthur Grant
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/3683—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment
    • A61L27/3695—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment characterised by the function or physical properties of the final product, where no specific conditions are defined to achieve this
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08H—DERIVATIVES OF NATURAL MACROMOLECULAR COMPOUNDS
    • C08H1/00—Macromolecular products derived from proteins
    • C08H1/06—Macromolecular products derived from proteins derived from horn, hoofs, hair, skin or leather

Description

請求の範囲 １ 皮膚の傷と軟組織の損傷の恒久的修復材とし
て同種もしくは異種移植に適し、ヒトもしくは動
物源のコラーゲン繊維組織の天然の構造と元の構
築を保持し、非繊維状組織蛋白類と糖蛋白類、細
胞要素及び脂質類と脂質類残渣を実質的に含有せ
ず、非細胞毒性であり、移植されたとき宿主細胞
で復活化できかつ脈管再生でき、かつ石灰化に耐
性で非吸収性であるヒトもしくは動物源の実質的
に非抗原性コラーゲン繊維組織製剤。
２ さらに、抗原性多糖類とムコ多糖類とを実質
的に含有しない請求の範囲第１項に記載の製剤。
３ シート形態である前記請求の範囲のいずれか
一つに記載の製剤。
４ 皮膚の傷と軟組織の損傷の恒久的修復材とし
て同種もしくは異種移植に適し、ヒトもしくは動
物源のコラーゲン繊維組織の天然の構造と元の構
築を保持し、非繊維状組織蛋白類と糖蛋白類、細
胞要素及び脂質類と脂質類残渣を実質的に含有せ
ず、非細胞毒性であり、移植されたとき宿主細胞
で復活化できかつ脈管再生でき、かつ石灰化に耐
性で非吸収性であるヒトもしくは動物源の実質的
に非抗原性コラーゲン繊維組織製剤からなるヒト
の皮膚もしくは軟組織の損傷の恒久的修復用移植
材。
５ 製剤が豚の直皮由来である請求の範囲第４項
に記載の移植材。
６ 移植材がポリイソシアネートによつて架橋さ
れたコラーゲン繊維組織のシートから形成されて
いる請求の範囲第４項または第５項に記載の移植
材。
７ ポリイソシアネートがヘキサメチレンジイソ
シアネートである請求の範囲第６項に記載の移植
材。
８ ヒトもしくは動物源材料のコラーゲン繊維組
織を処理して非繊維状組織蛋白類と糖蛋白類とを
除去する、前記組織を化学的に架橋さす処理をす
る、かつ前記組織を処理して脂質類と脂質類残渣
を除去する工程を含むことからなる皮膚の傷と軟
組織の損傷の恒久的修復材として同種もしくは異
種移植に適し、ヒトもしくは動物源のコラーゲン
繊維組織の天然の構造と元の構築を保持し、非繊
維状組織蛋白類と糖蛋白類、細胞要素及び脂質類
と脂質類残渣を実質的に含有せず、非細胞毒性で
あり、移植されたとき宿主細胞で復活化できかつ
脈管再生でき、かつ石灰化に耐性で非吸収性であ
るヒトもしくは動物源の実質的に非抗原性コラー
ゲン繊維組織製剤の製法。
９ 脂質類と脂質類残渣を除去する処理が、架橋
処理の前に行われる請求の範囲第８項に記載の方
法。
１０ 架橋処理が、コラーゲン繊維組織を、その
工程の条件下で組織からいずれの残留抗原性も除
去し組織を内生蛋白分解酵素に対して安定化する
ポリイソシアネートで処理する工程を有する請求
の範囲第９項に記載の方法。
１１ ポリイソシアネートが、ヘキサメチレンジ
イソシアネートである請求の範囲第１０項に記載
の方法。
１２ コラーゲン繊維組織を、その工程の条件下
で抗原性多糖類とムコ多糖類とを該組織から除去
する炭水化物切断酵素で処理する工程を有する請
求の範囲第８〜１１項のいずれか一つに記載の方
法。
１３ 非繊維状組織蛋白類と糖蛋白質類の除去処
理が、蛋白分解酵素で行われる請求の範囲第１０
項に記載の方法。
１４ 脂質類および脂質類残渣の除去処理が溶媒
抽出法で行われる請求の範囲第８項に記載の方
法。
１５ 溶媒がアセトン、エタノール、エーテルま
たはその混合物である請求の範囲第１４項に記載
の方法。
１６ コラーゲン繊維組織がシートの形態で処理
される請求の範囲第８〜１５項の何れか一つに記
載の方法。
明細書 この発明は、同種もしくは異種移植（homo
or heterotransplantation）に適切な新規のコラ
ーゲン材料に関する。この材料は、皮膚の傷や軟
組織の損傷の恒久的な修復材、顔や他の部分の奇
形の矯正用および一般外科や形成外科用に用いる
ことができる。またこの発明はかような材料の製
造法に関する。この材料はシート形態が好まし
い。
過去において、種々のコラーゲン製剤が皮膚の
傷や軟組織の損層の修復材用に提案されてきた。
これらものにはコラーゲンの分散液、溶液及びゲ
ルおよびコラーゲンの再形成された形態やスポン
ジ形態のものが含まれている。これらの製剤は動
物由来のコラーゲンを、酸性条件下で活性の蛋白
分解酵素で消化することによつて作製することが
最も多かつた。そのコラーゲン材料は酸性媒体に
溶解され、破片や不溶性の皮膚成分から別する
ことができる。その溶解されたコラーゲンは、溶
液のPHを上昇させ架橋反応で安定化することによ
つて固体、ゲルまたはスポンジとして再成形する
ことができる。しかしコラーゲン固有の構造はこ
の工程で失われる。得られた製剤は、ほとんども
しくは全く引張強度がない傾向があり、構造が無
定形であり、再吸収されたり注入もしくは移植部
位から消失したり、または傷跡の組織で置換され
たりする傾向を示す。多くの先行技術の方法にお
いてコラーゲンから分離される皮膚成分のひとつ
はエラスチンであると現在信じられている。また
現在エラスチンは皮膚由来の繊維状コラーゲン材
料を成功裡に利用するのに有用な役割を演じると
信じられている。その発明の繊維状組織は通常エ
ラスチンを保有している。その繊維状組織のコラ
ーゲン材料はエラスチンを約15重量％も含有して
いることがあるがより普通には１〜５重量％含有
している。そのエラスチンは、組織内に天然の形
態を保持する繊維とし存在している。
別の種類のコラーゲン材料として、天然コラー
ゲン（例えば皮膚由来の）の基本構造が保持され
ているものがある。英国特許第15658340号明細書
は、ヒトもしくは動物由来の繊維組織を、二つの
酵素、すなわちその工程の条件下で非繊維組織の
蛋白を除去する蛋白分解酵素と、その工程の条件
下で抗原性の多糖類、ムコ多糖類および糖蛋白類
を組織から除去する炭水化物切断酵素
（carbohydrate−splitting enzyme）とで処理す
ることからなる、前記繊維状組織を処理して異種
移植に適切な繊維状組織製品を製造する方法を記
載し請求している。この方法は安定で強いコラー
ゲン物質を産生する。この発明の発明者らは、前
記明細書に記載の方法が改良可能であつて、得ら
れる製剤が予想外の利点を有することを見出した
のである。
その方法の改良点には次の事項が含まれてい
る。
Ａ 動物組織中に見出されるムコ多糖類の量と組
成は著しく変動する（一般に少量含有されてい
るに過ぎないが動脈のようないくつかの組織に
は大きな百分率で含有されている場合がある）。
さらに糖蛋白類と比べてムコ多糖類は抗原性が
低くまた非抗原性のものもある。蛋白分解酵素
処理によつて、糖蛋白類は炭水化物類とペプチ
ド類とに切断され速やかに組織から除かれる。
したがつて、ムコ多糖類がごく少量しか存在し
ない場合（例えば皮膚中）、またはムコ多糖類
が明白に抗原性でない場合、組織を炭水化物切
断酵素で処理することは必らずしも必要でない
ときがある。そして蛋白分解酵素による単一酵
素処理法は移植可能な製造をもたらすであろ
う。このことは、真皮のごとき原料を用いる場
合、この発明の繊維状組織の製造に特に有用で
ある。
Ｂ 英国特許第1565340号明細書の製剤は一般に、
動物もしくはヒトに移植後経時変性
（degenerative change）をほとんど示さない
が自発的な石灰化が、移植組織中に小さな点状
もしくは大きな面積にわたつて起こることが見
出された。かような石灰化は動物に対し有毒で
はないが、それに伴つて移植部に柔軟性が失わ
れることは不利であり、また取替え材もしくは
修復材としての価値が減少する。この発明の発
明者らは、この石灰化はある意味で、脂質類や
それらの会合物質（association material）が
組織中に存在していることに関連があると信ず
るものである。またこの発明の発明者らは、こ
れらの脂質部分類を組織から除去することによ
つて石灰化の発生を著しく減少させることがで
きることを見出した。これらの部分類を除去す
る一つの方法はリパーゼのような選択性酵素を
用いる方法である。もう一つのより簡単で好ま
しい方法は有機溶媒を用いる溶媒抽出法であ
る。特に適切な溶媒はアセトン、エタノール、
エーテル、またはその混合物である。脂質の除
去、特に溶媒抽出の簡単な工程による除去によ
つて石灰化に対して耐性で移植可能な材料が得
られるという知見は、実際の臨床上の観点から
極めて重要なことであり、これらの物質がヒト
を対象とする一般外科や形成外科に用いること
ができる場合かような製剤の医学的価値を著し
く増大させるものである。
Ｃ 英国特許第1565340号明細書は、ある種の化
学化合物を使用して、その製剤から残余抗原性
（residual antigenicity）を除き移植後の内因
性蛋白分解酵素のアクツタによる分解に対して
安定化させることを開示している。この特許に
引用されている特定の化合物類は、アルデヒド
類、スルホン類および塩化シアヌルであり、そ
の中でアルデヒド類が好ましいものである。上
記のアルデヒド類や他の化合物は、細胞や生き
ている組織に対して有毒であることは知られて
おり、またこれらの化合物のすべての痕跡を前
記製剤から除くのは難しいということは知られ
ている。移植に続いて残留有毒物質の存在が移
植部位における、リンパ球の浸潤や巨細胞によ
つて示されることがある。さらに食塩水もしく
は緩衝液での洗浄時間を延長して残留化合物を
前記製剤から除去することは実用上の観点から
不利である。
ジイソシアネートのようなポリイソシアネート
類で製剤を処理すると、内因性蛋白分解酵素によ
るアタツクに対する安定性を与えその結果製剤は
分解することなく動物中への移植後再吸収されな
いようになるのみならず、移植時にほとんど細胞
毒性でないか全く細胞毒性でない製剤が得られる
という予想外のことが見出されたのである。この
ことは、アルデヒド処理された製剤は残留毒性が
みとめらる場合があるのと比べて著しく異なる。
この知見は、長期間にわたる製剤の不活性性が要
求される臨床上の観点から極めて重要である。も
うひとつの利点は、ジイソシアネート類で安定化
されたコラーゲン製剤がアルデヒド処理された製
剤のカーキ色と比べて白色であることであり、外
見上好ましいものである。
さらにもう一つの利点は、この方法ではコラー
ゲンの繊維状組織の元の構築が保持できるという
ことである。この原料は、その工程で可溶化され
たり変性されたりせず、その天然の構造が保持さ
れ、その原料由来の移植材を不活性物質よりむし
ろ自然に感じさせ、移植材に、従来市販されてい
る移植材のいくつかのものにはなかつた恒久性を
与える。
この発明の一つの態様として、非繊維状の組織
蛋白類や糖蛋白類を実質的に含有せず、非細胞毒
性であり、細胞要素を実質的に含有せず、およひ
脂質類と脂質類残渣を実質的に含有しない、皮膚
組織や軟組織の損傷の恒久的修復材として同種も
しくは異種移植に適する、ヒトもしくは動物源の
実質的に非抗原性の繊維状組織製剤を提供するも
のである。
この発明の上記態様は、次のように別の形態で
明確に記述することができる。すなわちこの発明
は、非繊維状組織蛋白類や糖蛋白類を実質的に含
有せずかつ細胞要素を実用的に含有せず、また脂
質類や脂質類残渣を実質的に含有せず非細胞毒性
であることを特徴とする、皮膚や軟組織の損傷の
恒久的修復材として同種もしくは異種移植に適切
であるヒトもしくは動物源の実質的に非抗原性繊
維性組織製剤を提供するものである。
非繊維状組織蛋白類や糖蛋白類には球状蛋白な
どが含まれる。細胞要素には、毛包や汗腺が含ま
れるだけでなく、抗原性蛋白類、酵素類、処理条
件が原因で生成する他の細胞破片類のいずれも含
まれる。
物質を“実質的に含有しない”と記載されてい
る物質は一般に、該物質を５％未満好ましくは１
％未満含有されている。
他の態様として、この発明は、繊維状組織を処
理してその組織から実質的すべての脂質類および
脂質類残渣を除去し、次いで得られた組織をその
工程条件下で非繊維状蛋白類や糖蛋白類を該組織
から除去する蛋白分解酵素で処理することからな
る、同種もしくは異種の移植に適する繊維状組織
製剤を得るためのヒトもしくは動物源の繊維状組
織の処理法を提供するものである。
また追加の態様において、この発明は、同種も
しくは異種移植に適するヒトもしくは動物源の繊
維状組織製剤をポリイソシアネート好ましくはジ
イソシアネートで処理することからなる、該製剤
を安定化すると同時にそれから残留抗原性を除去
する方法を提供するものである。
ポリイソシアネートとして使用するのに適切な
のは、コラーゲン物質の蛋白鎖のアミノ基とヒド
ロキシル基と反応しうるものである。多官能性イ
ソシアネート類は別々の蛋白鎖のアミノ基もしく
はヒドロキシル基と反応するかもしくは両者を架
橋させて、コラーゲンの元の構造を保持する安定
な構造を有しかつ酵素のアタツクに耐性の物質を
形成する。抗原性はコラーゲン物質の蛋白鎖のア
ミノ基と会合（associate）しており、これらの
基はイソシアネートと反応することによつてこれ
らの基と会合されたいずれの抗原性も除去される
ことが知られている。好ましいポリイソシアネー
ト類には、脂肪族、芳香族および脂環式ジイソシ
アネート類が含まれ、例えば１，６−ヘキサメチ
レンジイソシアネート、トルエンジイソシアネー
ト、４，4′−ジフエニルメタンジイソシアネート
および４，4′−ジシクロヘイシルメタンジイソシ
アネートが挙げられる。好ましいジイソシアネー
トはヘキサメチンジイソシアネート（HMDI）
である。
さらに新材料の低細胞毒性の証拠は、ヒトの皮
膚の繊維芽細胞と分散されたラツト上皮細胞
（dispersed rat epidermal cells）の両者が、前
記新材料上で組織培養条件下で成育するいう知見
によつて示される。このことは皮膚再形成のごと
き分野において重要な臨床上の意味がある。
この発明の製剤はシート形態のものが好まし
く、最も好ましいのは、豚や牛のごとき動物の真
皮由来のものであり、このうち豚の真皮が好まし
い。
好ましい態様としてこの発明は、実質的に非抗
原性で、非繊維状の組織蛋白類、糖蛋白類および
細胞要素を実質的に含有せず、また非細胞毒性で
脂質類や脂質類残渣を実質的に含有しないことを
特徴とする、シート形態の真皮由来繊維状コラー
ゲン組織からなる、皮膚もしくは軟組織の損傷の
恒久的修復用移植材を提供するものである。
最も好ましい移植材は豚の真皮由来のものであ
る。
繊維状コラーゲン組織として適切なものは厚み
は0.25〜５mmであり、より適切なものは0.5〜４
mmであり、好ましくは1.0〜３mmで例えば1.5mm、
2.0mm、2.5mmおよび3.0mmである。
幅と長さで表わす繊維状コラーゲン組織の大き
さは修復部の大きさによつて変わるが、通常でそ
の大きさの範囲は１cm×１cmから12cm×12cmまで
変わるが、10〜30cm×１〜５cmのストリツプ形の
ものも例えばいくつかのヘルニア根治手術用移植
材に用いられる。より適切な大きさは、２cm×２
cm〜10cm×10cmであり、好ましくは２cm×２cm〜
８cm×８cmであり、例えば２cm×２cm、３cm×３
cm、２cm×４cm、３cm×７cm、６cm×８cmおよび
８cm×８cmである。
この新規なコラーゲンシート材料は安定であ
り、また急速冷凍もしくは凍結乾燥するかまたは
殺菌剤の存在下もしくはアセトンのごとき溶媒中
に湿潤製剤として長期間貯蔵することができる。
製剤は例えばガンマ線照射もしくは過酸化水素に
よつて殺菌され、次いで耐細菌性パツケージ中に
殺菌状態で包装することができる。
新材料の好ましい製造法は次のとおりである。
(a) あらたに切断した真皮をアセトンで１回以上
変えて抽出する。
(b) その真皮を緩衝液もしくは食塩水中に入れて
アセトンを除去する。
(c) 次いで真皮をPH7.0〜9.0とトリプシン溶液で
消化し抗原性蛋白および毛包や汗腺のごとき細
胞要素を除去する。
(d) 任意にその組織を、アミラーゼ、ヒアルロニ
ダーゼもしくはノイラミニダーゼのごとき炭水
化物切断酵素で処理して抗原性多糖類とムコ多
糖類を除去してもよい。
(e) 精製された組織を、ジイソシアネート例えば
0.1％のアセトン溶液としてのヘキサンジイソ
シアネートで処理することによつて安定化す
る。
(f) さらに２回アセトンで洗浄。
(g) 緩衝液もしくは食塩水でゆすぐ。
(h) 殺菌剤の存在下もしくはガンマ線照射で殺菌
して貯蔵。
(i) 滅菌条件下で包装。
他の組織も同様に処理できる。
この新規なコラーゲンシート材は皮下に移植さ
れると、宿主細胞によつて再集落化され
（recolonize）血管が再生される。このことは、
コラーゲンシート材が長期間使用できるので臨床
上非常に重要なことである。このコラーゲン材
は、動物内で免疫反応を誘発せずまた種々の時間
間隔でのバイオプシーによつて採取したところ退
化もしくは石灰化の形跡のないことが見出され
つ。さらにこの新規な材料は組織培養において次
のようなことが見出された。すなわちスプリツト
シツクネス スキン（split thickness skin）
の小片を前記材料内に置くと構造真皮
（structural epidermis）で被覆されるようにな
り、また皮膚の傷内に該材料を移植すると真皮で
覆われついには毛がないことは別にして通常の皮
膚と同じようになることが見出された。このこと
は英国特許第1565340号明細書の架橋材や安定剤
で処理された組織とは著しく異なつている。この
発明のコラーゲンシート材は、いくつかのフル
シツクネス（full thickness）の皮膚の傷が収縮
するのを防止し、かような傷中に肉芽組織が形成
するのを抑制することが見出された。この後者の
性質は瘢痕組織の形成を防止する傾向があるとい
う点で重要である。
この発明がより充分に理解されるため、下記実
施例を単に例証として示す。
実施例 １ 適当に切断した豚の真皮をアセトン中に浸漬し
た。1hr後そのアセトンを除き新たなアセトンと
取り替えた。さらに1hr後該真皮をアセトンから
取り出しPH9.0の0.1Mリン酸緩衝液中に入れて残
留アセトを抽出した。次いでその真皮を、殺菌剤
としてアジ化ナトリウム0.5mg／含有の0.1Mリ
ン酸緩衝液による結晶トリプシン溶液（２mg／
）で15℃にて28日間消化した。その精製組織を
トリプシン溶液から取り出し、緩衝液中でゆす
ぎ、過剰の溶液を除去し、0.1％ヘキサンジイソ
シアネートのアセトン溶液中に入れた。9hr後組
織をジイソシアネート溶液から取り出し、２回ア
セトンでゆすぎ次いで緩衝液で２回ゆすいだ。白
色の得られた製剤を近交糸のポートンラツト
（porton rats）（PVG／Ｃ）の皮下に移植した。
７、14および28日並びに３および６ケ月の連続バ
イオプシーによつて、移植された製剤には宿主の
繊維芽細胞が浸透し血管が再生していることが分
かつた。移植部には、リンパ球の浸入もしくは巨
細胞形成の形跡は全くなくまた石灰化の微候も全
くなかつた。
該製剤のストリツプを、ヒト繊維芽細胞の組織
培養培地懸濁物内に入れ37℃に保持した。適切な
間隔の５日後に該製剤を培地からとりだして組織
学的に試験した。その製剤は繊維芽細胞の層で覆
われていることが見出され、さらに別の繊維芽細
胞がその組織マトリツクス内に移行しており、製
剤がヒト繊維芽細胞に対して非細胞毒性であるこ
とを示した。
またスプリツト−シツクネスのラツト皮膚の小
片（0.2×0.2cm）を１×１cmの大きさの新しい製
剤片上に移植するか、または分散された上皮細胞
を新しい製剤上に置くと、移植片から上皮細胞が
移行し増殖して８〜９日間で生成した層状の上皮
細胞で完全に覆われた。
この新規なコラーゲンシート材は、種々の関節
形成外科や一般的な形成外科や再形成外科におけ
る、ヘルニア、火傷を含む皮膚の傷の治療、顔部
の奇形や腱の損傷の矯正のためにヒトや家畜の外
科で使用するのに適切なものである。
実施例 ２ 適当に切断した豚の真皮をアセトン中に浸漬し
た。１時間後そのアセトンを除き、第２番目のア
セトンと取替えた。さらに１時間後、真皮をアセ
トンから取り出し0.1Mリン酸塩緩衝液（PH7.0）
中に入れ残余のアセトンを抽出した。次いで該真
皮を、活性化剤としてのシステイン（0.01M）と
殺菌剤としてのアジ化ナトリウム（0.5mg／）
を含有する0.1Mリン酸塩緩衝液による結晶性パ
パインの溶液（８mg／ml濃度）で15℃にて28日間
消化した。得られた精製組織をパパイン溶液から
取り出し緩衝液中でゆすぎ過剰の溶液を除き、
0.1％ヘキサンジイソシアネートのアセトン溶液
中に入れた。９時間後、組織をジイソシアネート
溶液から取り出しアセトンをとりかえて２回ゆす
ぎ、次いで緩衝液をとりかえて２回ゆすいだ。得
られた白色の製剤を、近交糸のポートンラツト
（PVG／Ｃ）の皮下に移植した。３ケ月と６ケ月
の連続バイオプシーによつて、移植された材料に
宿主の繊維芽細胞が浸透し血管が再生しているこ
とが分つた。移植部には、リンパ球の浸入もしく
は巨細胞形成の形跡は全くなくまた石灰化の微候
も全くなかつた。
組織培地中でヒトの繊維芽細胞が増殖し５日後
には該製剤を覆うことが見出された。
またストリツプ−シツクネスのラツト皮下の小
片（0.2×0.2cm）を１×１cmの製剤片上に移植す
るか、または分散された上皮細胞を新しい製剤上
に置くと、移植片から上皮細胞が移行し増殖した
８〜９日間で生成した層状の上皮細胞が完全に覆
われた。
実施例 ３ ダーマトームを用いて豚の皮膚から角質層を除
去する。残りの皮膚組織すなわち真皮を４cm×１
cmのピースに切断し、ダーマトームを用いて0.2
cm厚のストリツプに切断する。これらのピースを
アセトンで１時間づつ３回および36時間で１回抽
出する。各抽出での組織のアセトンに対する比率
は１：５（Ｗ／Ｖ）である。次いで真皮ピースを
殺菌食塩水中で数回洗浄してアセトンを除去す
る。洗浄されたピースを、0.9％（Ｗ／Ｖ）の塩
化ナトリウムおよび0.5ｇ／のアジ化ナトリウ
ム含有の殺菌0.1Mリン酸ナトリウム緩衝液（PH
8.0）中に、この緩衝液２当り100ｇのトリプシ
ンとともに入れる。トリプシン消化を７日間行い
液をデカントする。組織片を食塩水で数回洗浄す
る。次いで組織を点検し、残余の毛を鉗子を用い
て除去する。毛を除いたピースを洗浄し21日間第
二回のトリプシン消化に付される。この消化後液
をデカントしピースを殺菌食塩水で数回洗浄し、
最後は20時間洗浄する。湿潤組織片をポリプロピ
レンのトレイ中に平らに入れアセトンに浸漬する
ことによつて、アセトンで脱水する。得られた脱
水組織は固く、スクリユー・クラツプド・ボトル
（scew clapped bottle）にうつしてさらに２回
アセトンで洗浄する。そのアセトンで洗浄された
ピースを、0.01％（Ｗ／Ｖ）ヘキサメチレンジイ
ソシアネート（HMDI）の乾燥アセトン溶液で、
組織250ｇについて５のこの溶液を用いて処理
する。処理時間は20時間（ほぼ）である。次いで
組織片を湿アセトンで、１時間づつ４回と最後に
20時間洗浄した。次いで組織片を、殺菌食塩水で
１時間づつ２回、最後に20時洗浄してアセトンを
除去する。
かようにして作製された繊維状組織製剤は、ア
ジ化ナトリウム含有の殺菌リン酸塩緩衝液
（0.1M、PH7.2）中に浸漬して貯蔵される。
この繊維状組織製剤はガンマ線照射によつて殺
菌してもよく、異種移植に用いることができる。
（この繊維状組織製剤は、この発明の他のコラー
ゲン材と同様に、小比率のエラスチン含有のカラ
ーゲンで本質的に構成されている。）
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