JPH05504558A - 合成カルシトニンペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 合成カルシトニンペプチド 発明の背景 本発明は、様々な種の天然カルシトニンの低カルシウム血症作用と類似したもの を有する合成ペプチドに関する。

特に、ヒトのカルシトニンの低カルシウム血症効力よりも高く、かつ／または異 種のカルシトニンよりも低い免疫原性をヒトにおいて有する合成カルシトニンペ プチドに関する。本発明は、さらに、カルシトニンの合成類似体、および環状の ペプチド構造を有するほかの自然に起こる生物活性ペプチドに関し、合成環状構 造の代謝攻撃に対する抵抗性が向上している。さらに、これらの合成ペプチドを 作るための方法にも関する。

カルシトニンは、カルシウム代謝の調節にかかわる３２−アミノ酸ペプチドホル モンである。カルシトニンは、完全には理解されていないメカニズムに従って、 骨代謝の調節および血液カルシウムレベルの恒常性維持の調節において、副甲状 腺ホルモンと関係する。正常な骨代謝は、骨溶解性の吸収および新しい骨の骨芽 細胞形成のバランスをもって吸収空間を埋める。カルシトニンは副甲状腺ホルモ ンの骨溶解性活性を妨害するようであり、破骨および骨細胞活性を変えることに よって骨吸収を禁止するように直接作用する。カルシトニンは骨芽細胞の刺激に よって新しい骨形成を促すことができる。

骨吸収は、カルシウムおよびアルカリホスファターゼを循環に放出させ、かつコ ラーゲンを含む骨マトリックスの分解により、尿のヒドロキシプロリンの症状を 引起こす。

生理的メカニズムによると、高められた血清カルシウムレベルは低カルシウム血 症の作用を有するカルシトニンの分泌を促す。正常なヒトでは、骨吸収は少なく 、外因性カルシトニンは低カルシウム血症作用を有しない。

骨吸収に関連する病気だけではなく、悪性のものを含むほかの疾患に関連するヒ トにおける多くの病気は、高カルシウム血症によって認められ、それが続くと命 にかかわることもある。外因性カルシトニンは、これらの疾患を治療するのに重 要な治療薬であることが明らかになった。したがって、カルシトニン療法は、上 皮小体亢進症の患者の高カルシウム血症、子供の突発性の高カルシウム血症、ビ タミンＤ中毒、および骨溶解挫骨転移を減少させるのに効果がある。同様に、そ れは転移を伴うまたは伴わない悪性のものに随伴する高カルシウム血症、および 複数の骨髄腫の高カルシウム血症を減少させる。

カルシトニンはさらに、骨代謝回転または吸収が促進されるが、血清カルシウム レベルにおける変化は検出、されない疾患の治療に効果がある。この種の１つの 重要な病気は骨粗しよう症、特に閉経後の種類のものであり、骨質量における累 進的な損失がある。骨粗しよう症におけるカルシトニンの効能は合計身体カルシ ウムを増やすことができるその能力によって定められる。パフエツト病（変形性 骨炎）は、正常な骨の特徴的構造が欠けている新しい（パジエティック）　（ｐ ｚｇｅ＋ｉｃ　）骨における不均衡な形成が伴う骨の過度な吸収によって特徴付 けら、れる疾患である。カルシトニンは、この病の人間に見られるアルカリホス ファターゼおよび尿のヒドロキシプロリンの高められた血清レベルを減少させる 。パフエツト病におけるカルシトニン療法の利益は、骨再形成の放射線学証拠に よって示されるが、これは骨生検に見られる破骨の数が減ることに相関し、骨吸 収における減少と一致する。カルシトニンは、病気に伴う痛みおよび圧痛をやわ らげる。

カルシトニンは哺乳類、鳥および魚を含む多様なを椎動物の種において見られる 。ホルモンは、哺乳類の甲状腺にあり、下等を椎動物のさい検体腺にあるＣ細胞 によって分泌される。

ヒトのカルシトニン（ｈＣＴ）は以下のアミノ酸配列を入５ｐ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ −Ｌｙｓ−Ｐｈａ−１（ｉｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−人１ ａ−工１ａ−Ｇｌｙ−カルシトニンは、下等を椎動物および高等を椎動物の間で 、アミノ酸配列においてかなりの違いを見せる。しかし、高度に保護された残基 はカルシトニン分子の２つの端部において集まっており、これが生物学的活性に 重要であるとＣじられている。たとえば、１−７ジスルフイド架橋およびＣ−末 端プロリンアミドは、すべての種の間で不変である。いくつかのほかの不変であ るアミノ酸残基はＮ−およびＣ−末端端部で起こる。分子の中央部分、位置１０ ないし２７は、ペプチドの効力および持続期間を制御するものと思われ、アミノ 酸組成においてかなり変わる。プレイマー　（Ｂ＋ｅｉｚｕ　）　、Ｌ、Ｈ，、 マツクインタイア（Ｖｘｃｌｎｔ７＋り、１．、およびザイジ（２ａｉｄｉ　） 　、Ｍ、　、ｒＢｉｏｃｈｅｚ。

Ｊ、Ｊ　２５５　：　３７７−３９０　（１９８８）は、種々の種からのカルシ トニンペプチドの構造および生物学的特性を検討し、この情報はここに引用によ り援用される。

ヒト以外のある種のカルシトニンは、ヒトのカルシトニンよりも人間にとって効 力があるようだ。鮭、鰻、および鳥類のような起源においてさい後体であるカル シトニンは、ヒトまたは豚のホルモンのような甲状腺カルシトニンよりも効力が ある。鮭、鰻、豚およびヒトのカルシトニンは、パフエツト病、骨粗しよう症お よび悪性高カルシウム血症の治療のために現在臨床で使われている。

カルシトニンペプチドの構造に対する効力の相関はよく理解されていない。向上 した効力は、ホルモンの受容体により好ましく結合されるペプチド立体配座を可 能にするアミノ酸配列によるものかもしれない（マルクス（Ｍａｒｘ）ら、ｒｓ ｃｉｔｎｃｅＪ１７８：９９８−１００１　（１９７２）。

より小さいあまりかさばらないアミノ酸によってもたらされる特徴であるより柔 軟な立体配座は、生物学的活性に影響するものと定められた（エパンド（Ｅｐａ ｎｄ　）ら、ｒＢｉｏｃｈｅｍｉ＋ｔ＋ＹＪ　２５　：１９６４−１９６８　（ １９８８）　）　、鰻および鮭のカルシトニンの同一の生物学的効力は、類似し た基本構造および類似した柔軟性を基準として説明できるかもしれない。

ヒト以外のカルシトニンの比較的高い効力に対する代替の基準としては、特定の 種の特徴であるこれらのカルシトニンのアミノ酸配列が、ヒトのカルシトニンよ りも人体において代謝的低下に対してより大きな抵抗性をもたらし、この理由に よってより持続する効果があるのかもしれない（ヘイベナー（Ｈｘｂｅｎｅｒ　 ）ら、ｌ’−Ｎａｔｕｒｅ　（Ｌｏｎｄｏｎ）　Ｊ　２３２：９１−９２　（１ ９７１））。たとえば、鮭のカルシトニンは投与後約６時間効力を有するが、ヒ トのカルシトニンは約２時間効力を持つ。

しかし、そのより高い効力にもかかわらず、さい検体カルシトニンのようなほか の種からのカルシトニンは、ヒトの臨床使用としては完全には満足できるもので はない、というのはヒト以外のカルシトニンの可変の低い保護された中央部分が 生体内において免疫原として働くからである。

したがって、結果の抗体生産はその有用性を制限することになる。

皮下注射によってヒトに投与された後、すべての天然カルシトニンは比較的短い 半減期を有するが、それは、血漿酵素によって蛋白分解を遅らせる作用をする種 の違いにもかかわらず、それらは迅速な腎臓および組織の浄化作用を受るからで ある。さらに、天然のカルシトニンの活性は位ｌｆｌおよび７におけるシスティ ン基の間の完全なジスルフィド結合に依存するので、生体内におけるこの不安定 な結合の減少は生物学的に活性なペプチドを不活性の形に変える。

生体内においてより大きな安定性のため、かっ／または本来のホルモンよりもよ り高い効力およびより長い持続作用のため、臨床使用においてより有効なカルシ トニンペプチドを有することは役に立つ。さらに、本来のホルモンよりも免疫原 が低いカルシトニンペプチドを有することは有用である。

合成するのが容易で安く、かつ臨床で使用される前の一定期間において保管され ることができるカルシトニンペプチドを有することは有用である。

さらに、親油性および疎水性が高められた類似体は、薬物動態学を変え、向上し た非経口的、鼻または口による生物学的利用率を有する。さらに、これらの利点 をカルシトニンと構造的類似を有するほかの生物活性ペプチドに広げることも有 利である。

したかって、本発明の目的は、人間の病気の治療においてヒトおよびほかの種か らの本来のカルシトニンよりもより安全で効果のある合成カルシトニンペプチド を提供することである。

本発明のほかの目的は、化学的および酵素的安定性が高められたカルシトニンペ プチドおよびほかの生物活性環状ペプチドの合成類似体を提供することである。

本発明のさらなる目的は、製造するのが安価であり、かつ一般的保管状態におい ては安定している合成環状ペプチドを提供することである。

本発明のさらなる目的は、これらの環状ペプチドの合成方法を提供することであ る。

発明の要約 本発明のある局面に従って、カルシトニンペプチドの類似体である合成ペプチド が提供され、低カルシウム血症カルシトニン活性を有し、 Ｙ　−（Ｒ１−Ｒ２−Ａｌ−Ａ２−Ａ３−Ａ４−Ｓｅｒ　−Ｔｈｒ）、、−Ａ７ −ｘＣＴ　（８−３２）　（Ｉ）の式を有し、ＹＳＲｌ、Ｒ２、Ａ１、Ａ２、Ａ ３、Ａ４、Ａ７、およびＸＣＴはここにおいて規定されているとおりであり、な らびに薬事的に許容される塩類である。

本発明のこの局面における実施例において、背椎動物のカルシトニンの位置８． １２．１６．２１または２７における少なくとも１つのアミノ酸残基はロイシン によって置換される。ロイシンは位置０で付加されることもできる。

この基の好ましいペプチドは（Ｌｅｕ−８）−ｘｃＴ：（Ｌｅｕ−８，１２）− ｈＣＴ；Ｌｅｕ−８，１２，１６）−ｈＣＴ；　（Ｌｅｕ−８，１２，１６，２ ７）−ｈＣＴ；Ｌｅｕ　（Ｌｅｕ−８）−ｘＣＴ；Ｌｅｕ　（Ｌｅｕ　８．１２ ）−ｈＣＴ　；およびＬｅｕ　（Ｌｅｕ−８，１２，１６）−ｈＣＴである。

ほかの実施例は、位置１９ないし２２において少なくとも１個のアミノ酸残基の 欠落を有するカルシトニンペプチドの類似体を含む。この基の好ましいペプチド は、ｄｅｓ（２２）−ｘＣＴ　（８−３２）；ｄｅｓ　（１９−２２）−ｘＣＴ 　（８−２３）； （（ＣＨＸ−３ｅ　ｔ）−５，Ａｌ　ａ−７，ｄｅ　ｓ　（２２））−ｘＣＴ　 （５−３２）； （（ＣＨＸ−８ｅｔ）−５，Ａｌａ−７，ｄｅｓ　（１９−２２））−ｘＣＴ　 （５−３２）； （（１２−アミノドデカノイル−５ｅｔ）−５、Ａｌａ−７、ｄｅｓ　（２２） ）−ＸＣＴ　（５−３２）；および（（１２−アミノドデカノイル−５ｅｒ）　 −５、Ａｌ　ａ　−７、ｄｅｓ　（１９−２２））−ｘＣＴ　（５−３２）であ る。

本発明のこの局面におけるほかの実施例に従って、位置１および７におけるシス ティン残基の間のジスルフィド架橋がほかの環状構造と置換されるカルシトニン ペプチドの類似体が提供される。これらの実施例の１つにおいて、Ａ１およびＡ ７は異なり、ジカルボン酸またはジアミノ酸であり、アミド結合によって結合さ れる。この基の好ましいペプチドは、 お瀘ｆ 本発明のこの局面における別の実施例は、Ａ７がリジンであるカルシトニンペプ チドの類似体を含む。このような１つの実施例において、分枝鎖ペプチドが与え られ、ｍは２であり、同じペプチド配列がＡ７リジンに付加される。

この基の好ましいペプチドは （（Ｌａｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−５ｅｒ−Ｌｅｕ−５ｅｒ−Ｔｈｒ−）　２−ＬＹ Ｓ’）　ｃｃＴ　；（（Ｌａｕ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｌａｕ−５ｅｒ−Ｔ ｈｒ）２−Ｌｙｓ−７）−ｘＣＴ　（７−３２）；（（Ｌａｕ−人１ａ−５ａｒ −人５ｎ−Ｌａｕ−５ｅｒ−Ｔｈｒ）２−Ｌｙｓ−７）−ｘｃＴ　（７−３２） ；（（Ｌａｕ−人１ａ”’Ａｌａ−５ｅｒ−Ｌｅｕ−５ｅｒ−Ｔｈｒ）２−Ｌｙ Ｓ−７ｒ　Ｌｅｕ−８）　−Ｃ（：Ｔ（８−３２）；（（Ｌａｕ−Ａｌａ−Ｇｌ ｙ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−５ｅｒ−Ｔｈｒ）２−Ｌｙｓ−７，Ｌｅｕ−８）−ｘＣＴ （８−３２）；（（Ｌａｕ−Ａｌａ−９ｅｒ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−５ａｒ−Ｔｈｒ ）　２−Ｌｙｓ−７、Ｌａｕ−８）　−ｈｅｒ　（８−１２）　：（（Ｌａｕ− 人１ａ−５ａｒ−人５ｎ−Ｌｅｕ−５ｅｒ−Ｔｈｒ）　２−Ｌｙｓ−７，Ｌｅｕ −８，１２）−ｈＣｒ（８−３２）：（（Ｌａｕ−人１ａ−５ｅｒ−Ａｓｎ−Ｌ ｅｕ−５ｅｒ−Ｔｈｒ）２−Ｌｙｓ−７，Ｌｅｕ−８Ｊ２．１６１−ｈＣｒ（８ −４２）：おｊＶ（（Ｃｈｘ−５ｅｒ−Ｔｈｒ）２−Ｌｙｓ−７，Ｌｅｕ−８） −ｘＣＴである。

Ａ７がリジンであるカルシトニン類似体の関連する実施例において、Ｙｌはジカ ルボン酸であり、リジンから分枝した同一のペプチド配列はジカルボン酸で付加 されて環状構造を形成する。この基の好ましいペプチドはである。

本発明のこの局面に従って、ヒトβ遺伝子配列のカルシトニンペプチドの類似体 が与えられ、ロイシンは２１の位置で置換される。

本発明のほかの局面に従って、本発明の新規のペプチドを合成するための方法が 提供される。一般式（Ｒ−１ないしＲ−６）２−Ｌｙｓ−７）−ｘＣＴを有する 分枝鎖ペプチドを調整するための方法は、第１のアミノ酸のアミノ基を第２のア ミノ酸のカルボキシル基と結合させてジペプチドを形成するステップと、連続す るアミノ酸で結合を繰り返して、リジン残基が位置７を占める選択されたを推動 物のカルシトニンペプチド配列を得るステップと、リジン残基のαおよびεアミ ノ基の両方をＲ６残基のカルボキシル基と結合させるステップと、全部の示され た配列が合成されるまでアミノ酸をペプチド配列に結合することを繰り返すステ ップとを含む。この方法は、合成された分枝カルシトニンペプチドを適切な溶媒 において無水コハク酸と接触させるステップをさらに含み、前記カルシトニンペ プチドの末端残基のアミノ基は、コハク酸分子のカルボキシル基に結合されて環 状構造を形成する。

本発明は病気を治療するための方法を提供し、記載される新規のカルシトニン類 似体の用途を含む。高カルシウム血症を治療するための方法は、このような治療 を必要とする前記哺乳類に、本発明の合成カルシトニンペプチドの有効な血液カ ルシウムを減少させる量を投与するステ・ツブを含む。パリエツト病または骨粗 しよう症を治療する方法（よ、病のある患者に、骨吸収を減するまたはなくすの に十分な期間の間、本発明のカルシトニン類似体の骨吸収を妨害する量を投与す ることを含む。

本発明の他の局面に従って、ジスルフィド環状ペプチドの類似体が提供され、カ ルシトニンに加えて生物活性ペプチドを含み、ジスルフィド結合を形成する環状 ペプチドのシスティン残基組のメンバーは、互いにアミド結合を形成することが できる有効な官能基を宵する残基によって置換される。好ましい実施例は、ジス ルフィド環状ペプチドのシスティン基の１つがジアミノ酸によって置換され、別 のがジカルボン酸によって置換される類似体を含む。特に好ましい実施例におい て、ジアミノ酸はリジンまたはオルニチンである。ジスルフィド結合がこのよう に置換えられる好ましい環状ペプチドは： （ａ）　ヒトのアミリンの環状類似体であり、または対応するアミドの構造を有 し、 （ｂ）　黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）作動体（（Ｄ−β−ナフチ ルアラニン）’　−ＬＨＲＨの環状類似体であり、 の構造を有し、 （Ｃ）　黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）抗体（（Ｄ−Ｐｈｅ）２． 　（Ｄ−β−ナフチルアラニン）６−ＬＨＲＨ）の環状類似体であり、 の構造を有し、 （ｄ）　利尿ホルモンバソプレッシンの環状類似体であり、 の構造を有し、 （ｅ）　ペプチドホルモンオキシトシンの環状類似体であり、 の構造を有し、 （ｆ）　ソマトスタチンの環状類似体であり、の構造を有し、 （ｇ）　ヒトの心房性ナトリウム排出性ペプチドの新規の環状類似体であり、 の構造を有し、 （ｈ）　ヒトカルシトニン遺伝子関連ペプチドの新規の類似体であり、 Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｌａｕ−５ａｒ−ｋｒｑ−５ａｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ− Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−人ｓｎ−人５ｎ−Ｐｈｅ’Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ− 人５ｎ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−５ｅｒ−Ｌｙｓ−人１ａ−Ｐｈｅ−Ｎ）！２の構造を 有する。

本発明のさらなる局面に従って、高分子支持体の段階的鎖伸長によって環状ペプ チドを合成する方法が提供され、ペプチド合成の間ペプチド鎖における選択され た位置にジアミノカルボン酸を導入するステップを含み、前記ジアミノカルボン 酸はαアミノ基と側鎖アミノ基では異なる保護基を有し、さらに前記ジアミノカ ルボン酸のαアミノ基または側鎖アミノ基から保護基を選択的に取除くステップ と、工ないし５０の付加的アミノ酸から連続的にペプチド鎖に導入することによ って合成を続けて保護αアミノ基を有するする末端アミノ酸で終るステップと、 前記ジアミノカルボン酸のαアミノ基または側鎖アミノ基から残りの保護基を選 択的に取除くステップと、アミノジカルボン酸を脱保護基に結合するステップと を含み、前記アミノジカルボン酸はα−カルボキシル基が保護されており、さら に前記末端アミノ酸のαアミノグループおよび前記アミノジカルボン酸のαカル ボキシル基を脱保護しかつ前記基を結合するステップを含む。高分子支持体の段 階的鎖伸長によって環状ペプチドを合成するための方法がさらに提供され、ペプ チド合成の間アミノジカルボン酸をペプチド鎖の選択された位置に入れるステッ プを含み、前記アミノジカルボン酸は側鎖カルボキシル基に保護基を宵し、１な いし５０の付加的アミノ酸からペプチド鎖に連続的に入れることによって合成を 続けてジアミノ酸で終わるステップを含み、前記ジアミノ酸は保護側鎖アミノ基 を含み、前記アミノジカルボン酸および前記ジアミノ酸から側鎖保護基を取除い て前記基を結合するステップを含む。

この方法の好ましい実施例において、ジアミノカルボン酸はリジンまたはオルニ チンであり、アミノジカルボン酸はアスパラギン酸またはグルタミン酸である。

記載された方法は少なくとも１つの付加的アミノ酸をペプチド鎖に入れる付加的 ステップを含むことができる。

本発明のさらなる局面に従って、ここに開示される方法のいずれかによってもた らされる環状ペプチドが提供される。記載されているペプチドのいずれかの生物 学的に活性な画分が与えられ、好ましくはそれらペプチドの内因性プロテアーゼ の作用によって好ましくは作成される。

発明の詳細な説明 本発明はある局面において、低カルシウム血症ペプチドの類似体、その薬事的に 許容される塩類の形または組成、調製物のための方法、および哺乳類の血清カル シウムレベルを調節するための用途に関する。

関連する局面におけるこの発明は、生物活性環状ペプチドの類似体に向けられ、 カルシトニンは典型であり、化学および酵素の蛋白分解に対してより大きな安定 性を有する。

我々はもとのカルシトニンの類似体である低カルシウム血症ペプチドを合成した が、アミノ酸残基は置換または削除されており、より効力のある生物学的反応を 提供しかつ／またはヒト以外の種の本来のカルシトニンを使うことによって一般 に経験する免疫原的活性を減じる。ペプチドのアミノ酸配列は、より大きな効力 、より長い持続作用、強められた受容体の結合特性、酵素分解に対してより大き な安定性、および鼻または口によるより高い生物学的利用率を有する低カルシウ ム血症剤を提供するために、生物学的活性の原理に従って選択された。

カルシトニンペプチドの立体配座の柔軟性はその生物学的有効性を高めることが できると示唆されている（イーバンド（Ｅｐａｎｄ　）　、Ｒ，Ｍ、ら、ｒＢｉ ｏｃｈｔｍｉｓ＋ｒ７Ｊ　２５　：　１９６４−１９６８　（１９８６）　）。

強直ならせんの形成を促すかさのある残基が存在しないところにおいて柔軟性が 向上することが示されている（シーザー（Ｋｉｉ＋ｅ＋）　、Ｅ。

Ｔ、およびケシ−（Ｋｅｄｓｉｌ、Ｆ、Ｊ、　、ｒｓｃｉｅｎｃｅ　Ｊ　２２３ ：２４９−２５５　（１９８４））。

したがって、本発明のカルシトニン類似体は低カルシウム血症ペプチドを含み、 部分的にもとのカルシトニンに対応するが、柔軟性は一定のアミノ酸残基をなく すことによって向上した。いくつかの類似体は、天然の配列にある最高８個のア ミノ酸が欠けているものもある。たとえば、残基１９ないし２２を含むアミノ酸 配列は生物学的活性のためには必要ないと示されており、したがって本発明に従 う類似体のある基は、本来のカルシトニンの少なくとも１個の残基および多くて すべての残基がなくされた低カルシウ人血症ペプチドを含む。

類似体の第２の基では、ペプチド鎖の柔軟性は、多様なよりかさばらない部分に よっていくつかのアミノ酸残基を置換することによって高められた。位ｌｔ８． １２．１６および２７におけるカルシトニンのアミノ酸残基は、リジン置換によ って発明の類似体において置換されている。ヒトβ遺伝子からの予想されるカル シトニン配列では（プレイマー（Ｂ＋ｅｉｍｅ＋　）　、Ｌ、Ｈ，ら、　ｒＢｉ ｏｃｈｅ：ｎｉｓ＋ｒｙＪ　２５５３７７−３９０　（１９８８））　、位置２ １におけるメチオニン残基はリジンによって置換された。

生体内代謝過程に対して高められた安定性を有するカルシトニン類似体は、不安 定な結合を置換または削除することによって合成された。

位置１および７における残基のシスティンジスルフィド結合に基つく環状構造は 、生物学的活性において必須のように見えるか、この構造は結合を開く代謝出来 事に対して生体内において不安定である。したがって、本発明のいくつかのカル シトニンペプチドでは、ジスルフィド架橋をより大きな安定性を有する環構造で 置換した。たとえば、環状構造は、ジカルボン酸によって位置７でペプチドのＮ −末端アミノ基およびリジン残基のニブシロンアミノ基を結合することによって 調整された。代替的に、複製アミノ酸配列は位置７てリジンのアルファおよびニ ブシロンアミノ基に付加され、これらの配列の末端アミン基はジカルボン酸によ って結合される。これらの両種類の環構造は、天然のカルシトニンにあるジスル フィド架橋よりも安定していると思われる。

調整するのが経済的であり、かつ不安定なジスルフィド架橋のないカルシトニン ペプチドを提供する目的で、我々はた（さんの線状ペプチドを工夫および合成し た。これらは、システィン残基を位！１および７で、アラニンまたはグリシンの ようなアミノ酸で置換することによって得られた。これらの線状カルシトニンペ プチドは調製して精製するのがより容易であり、ジスルフィド架橋を含むペプチ ドよりも安定している。

本発明のカルシトニンペプチドのほかの基は、複製ペプチドを位置７においてリ ジン残基のアルファおよびニブシロンアミノ基の両方に結合することによって調 製された分枝構造を有する。これらのペプチドはホルモン受容体に複数の結合部 位を与えることができ、より高い効力およびより長い持続作用を有すると思われ る。

代謝分解は細胞の可溶性の相で起こるので、工程に対抗するまたは遅らせるため に、我々は高められた疎水性を有するカルシトニン類似体を組立てた。疎水性は ペプチドのＮ−末端端部において様々なアルカリ、アリル、または複素環式の基 を付加することによって与えられた。好ましい例は、Ｎ−末端端部で１２−アミ ノドデカノイル−８ｅｒ−５を含むカルシトニン類似体である。

したがって、本発明の合成された低カルシウム血症ペプチドは以下の式： ％式％ Ｙはコハク酸、グルタル酸、Ｌ−アスパラギン酸、Ｄ−アスパラギン酸、Ｌ−グ ルタミン酸、Ｄ−グルタミン酸を含むグループから選択されたジカルボン酸であ り、またはその部分がなぐ、 Ｒ１は、ＨＳＨ−（ＣＨ２）　１．１−ＣＯ−１Ｈ２Ｎ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ− １またはＺ−ＣＯ−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ０−（ＺはＨＯ−、コレステロール、アダ マンチルアルコール、または芳香族アルコールであり）、Ｌ−トレオニンまたは Ｄ−トレオニン、Ｌ−アラニン、Ｄ−アラニン、Ｌ−ロイシン、Ｄ−ロイシン、 シクロプロパンカルボキシル（ＣＰＲＣ）、シクロペンタンカルボキシル（ＣＰ 　Ｃ）シクロヘキサンカルボキシル（ＣＨＣ）　、シクロへキシルプロピオニル （ＣＩ（Ｘ）、シクロへブタンカルボキシル（ＣＨＰＴ）、アダマンタンアセチ ル（ＡＤＭ）、アダマンタンカルボキシル（ＡＤＣ）、または芳香族もしくは複 素環式カルボン酸のアシル基であり、 Ｒ２は１−アミノ−１−シクロプロパンカルボキシル（ＡＣＰＲ）　、１−アミ ノ−１−シクロペンタンカルボキシル（ＡＣＰＣ）　、１−アミノ−１−シクロ ヘキサンカルボキシル（ＡＣＨＣ）　、１−アミノ−１−シクロへブタンカルボ キシル（ＡＣＨＰ）、その部分なし、またはＲ１と同じであり、 Ａ１およびＡ７は同じまたは異なり、かつ独立してＬ−システィン、Ｌ−トレオ ニン、Ｄ−トレオニン、Ｌ−チロシン、Ｄ−チロシン、Ｌ−アラニン、Ｄ−アラ ニン、Ｌ−ロイシン、Ｄ−ロイシン、または２−アミノイソ酪酸であり、または Ａ１およびＡ７は異なり、かつＡ１はメルカプトプロピオン酸、メルカプト酢酸 、Ｈ−（ＣＨ２）ｎ−Ｃｏ−１１−アミノ−１−シクロプロパンカルボキシル、 １−アミノ−１−シクロペンタンカルボキシル、１−アミノ−１−シクロヘキサ ンカルボキシル、１−アミノ−１−シクロへブタンカルボキシル、またはその部 分なしであり、またはＡ１およびＡ７は異なり、かつコハク酸、グルタル酸、Ｌ −アスパラギン酸、Ｄ−アスパラギン酸、Ｌ−グルタミン酸、およびＤ−グルタ ミン酸からなるグループから選択されたジアミノ酸またはジカルボン酸であり、 但しＡ７はコハク酸ではなく、 Ａ２はグリシン、Ｌ−アラニン、Ｌ−セリン、またはその部分なしであり、 Ａ３はＬ−アスパラギン、Ｌ−セリン、またはその部分なしであり、 Ａ４はＬ−ロイシンまたはその部分なしであり、ｍは１または２であり、 ｎは工ないし２２であり、 ＸＣＴは少なくとも残基９−１１．１３−１５．１７．１８．２３−２６、およ び２８−３２においてマウス、鮭、鰻、鳥類、豚、牛、羊、またはヒトのカルシ トニンに対応するアミノ酸配列であり、但し配列（Ｒ１−Ｒ２−Ａｌ−Ａ２−Ａ ３−Ａ４−３ｅｒ−Ｔｈｒ）−−Ａ７がある種の天然カルシトニンの対応する配 列と同じ場合、ｘＣＴ　（８−３２）は前記カルシトニンの対応する配列と同じ ではなく、または薬事的に許容される塩類であり、Ａ１およびＡ７が同じであり かつアラニンであるのなら、Ｒ２は存在しかつＨではないことを条件とする。

ここで説明されるアミノ酸は特に言及しない限りＬ形であり、使用されている略 称はペプチド分野において一般的に用いられているものであり、かつたとえばＩ ＵＰＡＣ−ＩＵＢコミッションオンバイオケミカルノーメンクラチャ、ｒｌ、Ｂ ｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、　Ｊ　２４７、９７９−９８２　（１９７２）の文献に記さ れているものである。ヒトのカルシトニンは現在周知のヒトカルシトニンの配列 およびヒトβ遺伝子のＤ　Ｎ　Ａ配列から予測される配列（プレイマー（３Ｂ！ ｉｚ！＋）、Ｌ、Ｈ，ら、ｒＢｉｏｃ＋！ｆｆ１ｉ、Ｊ　２５５　：　３７７− ３９０　（１９８８））を含み、不変残基の２つ（位置１および９）は変えられ て、Ｔｘｒ−１、Ｇｌｎ−９である。

以下のペプチドは特に好ましい： （（Ｌａｕ−人１ａ−Ａｌａ−５ｉ！ｒ−Ｌｍｕ−５ｌｋｒ−Ｔｈｒ）ｚ−Ｌ” ／５−７ｔ　Ｌｅｕ−８）　−Ｃ（：’！’（８−３２）；（（Ｌａｕ二人１ａ −Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｌａｕ−５ａｒ−Ｔｈｒ）２−Ｌｙｓ−７，Ｌａｕ−８）− ｘＣｒ（８−３２）７（（Ｌｅｕ−人１ａ−５＠ｒ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−５ｅｒ− Ｔｈｒ）２−Ｌｙｓ−７，Ｌａｕ−８）−ｈｅＴ（８−３２）；（（Ｌａｕ−人 １ａ−５ｅｒ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−５ａｒ−Ｔｈｒ）２−Ｌｙｓ−７，Ｌａｕ−８ ，１２−ｈＣＴ（Ｅｌ−３２）；（（Ｌ４！ｕ−Ａｌａ−５ｅｒ−ＡＳｎ−Ｌａ ｕ−５ａｒ−Ｔｈｒｌｚ−Ｌｙｓ−７ｒ　Ｌａｕ−８ｒ　１２　ｒ　１６−ｈ（ ：’ｒ（８−R２１ （（Ｃｈｘ−５ａｒ−Ｔｈｒ）、−Ｌｙｓ−７，Ｌａｕ−８）−ｘ（ｒ；（（Ｌ ａｕ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−人５ｎ−Ｌａｕ−５ｅｒ−Ｔｈｒ）　２−Ｌｙｓ−７） −ｈＣＴ（７−コ２）　：（（Ｌａｕ−人１ａ−５ａｒ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−５ｅ ｒ−Ｔｈｒ）ｚ−ＬｙＳ−７）−ｘＣＴ（７−３２）：（（Ｌａｕ−Ａｌａ−Ａ ｌａ−５ａｒ−Ｌａｕ−５ａｒ−Ｔｈｒ）　２−Ｌｙｓ−７）　−ｃｃＴ　；（ ，１又下庁ン白） （（Ｎ−了Ｖ＋ルー了ミンオククノイル　−５ａｒ−Ｔｈｒ）２−Ｌｙｓ−フ） −ｘＣＴ（７−３２）；（（Ｓａｒ−Ｔｈｒつ、−Ｌｙｓ−７）−ｘＣＴ（７− ３２）；（（Ｃｈｘ−５ａｒ−Ｔｈｒ）　２−Ｌｙｓ−７）−ｘＣＴ（７−３２ ）；（（ＣＨＸ−５ａｒｌ−５，Ａｌａ−７，ｄａｓ（２２））−ｘＣＴ（５− ３２）：（（ＣＨＸ−５ａｒ）−５，入ユａ−７，ｄａｓ（１９−２２））−ｘ ＣＸ”（５−３２）；（」メーＦボ白） （（１２−了ミノドテ゛カノイ）し　−５ａｒ）−５，入１ａ−７，ｄｏｓ（２ ２））−ｘｃＴ（５−コ２）；（（１２−Ｔミ）ド干−ｈ）４Ａｔ　−５ａｒ） −５，入１ａ−７，ｄａｓ（１９−２２））−ｘＣＴ（５−３２）；（（１２− 了Ｓ／ドデカノイ）レ−５；ａｒ）−５，入１ａ−７）−ｘｃＴ（５−３２］　 ；（（１２−了ミノ”ド′テ°カノイ）し　−５ａｒ）−ｊ　入１ａ−７，Ｌａ ｕ　８，１２１−ｈＣＴ（５−３２）；（（１２−了ミノトチ゛カッイル−５＠ ｒ）−５，入１ａ−７，Ｌａｕ　８，１２．１６）−ｈＣＴ（５−３２）：（（ Ｄ−人１ａ−１２−了ミノドテ゛４Ｂル　−５ａｒ）−５，入１ｍ−７）−ｘＣ Ｔ（５−３２１；Ｄ−人１ａ−（Ｌａｕ−８，１２Ｊ６）−ｈＣＴ；　Ｌａｕ− （Ｌａｕ−８）−ｈＣｒ；　Ｌａｕ−（Ｌａｕ　８，１２）−ｈｃＴ；Ｌａｕ− （Ｌａｕ−８，ｉ２，１６）−ｈＣＴ；　（Ｌａｕ−８，１２，１６，２７）− ｈＣＴ；Ｌａｕ（Ｌａｕ−ａ）−ｘσ蓼シ川用シｕ−８＃　２７　）　−Ｘσ８ （Ｌａｕ−ｌｉｔ）−ｈＣＴ；　（Ｌａｕ−８，１２）−ｈＣＴ；　（Ｌａｕ− ８，１２Ｊ６）−ｈＣＴ；（Ｌａｕ−Ｅｌ）−ｘＣＴ；　＆Ｅひ゛（Ｌａｕ−１ １，２７）−ｘＣＴ。

ここでｈはヒトであり、Ｘはヒトまたはマウスまたは鮭または鰻または鳥または 豚または牛または羊を表わし、および以下の構造を有するβ遺伝子からのヒトカ ルシトニンペプチドの類似体である。

゛工１ａ−Ｐｒｏ−ＮＨ２；　ｓｘｖ リジン、アルギニン、およびヒスチジンのような塩基性アミノ酸を含むペプチド は塩化物、アセテート、リン酸塩、クエン酸塩、コハク酸塩、シュウ酸塩などの ような塩類の形で存在してもよい。特にアセテートおよび塩酸塩の形が好ましい 。本発明の目的のため、式■のペプチドおよび酸付加塩は１つで同じものである と考えられている。

ペプチド合成： 本発明のペプチドは、当業者にとって周知であり、かつたとえばバラニー（Ｂｕ ｕ７）　、Ｇ、およびＲ，Ｂ、　メリフィールド（Ｒｅｓ＋１ｌｉｅｌｄ）のｒ Ｔｈｅ　ＰｅｐｔｉｄｓｓＪ　、箪２巻、編集Ｅ、グロスおよびＪ、メインホッ ファ、アカデミツクブレス、ニューヨーク、３−２８４頁（１９７９）の文献で 詳細に説明されている固相ペプチド合成（Ｓ　Ｐ　Ｐ　Ｓ）方法によって合成す ることができる。Ｃ−末端アミド基を含むカルシトニンのようなペプチドの合成 は、好ましくは４一メチルベンツヒドリルアミンージビニルベンゼン一共重合ス チレンで行なわれ、これは一般に市場で入手できるＭＢＨＡ樹脂と呼ばれる。５ ＰＰＳにおける調製および応用は当該分野において文献がたくさんあり、ビニツ タ（Ｐｉｅｔ＋ｅ）、Ｐ、　Ｇ、およびＧ、　Ｒ，７−シヤル（Ｍａ＋５ｈａｌ ｌ）、［Ｊ、Ｃｈ＋ｍ、Ｓｏｃ、ＤＪ、６５０−６５１　（１９７０）、および チャナバサバイア（Ｃｈａｎｎａｂａｕｙｉｉａｈ　）　、Ｋ、　＆　Ｊ。

Ｍ、スチュアー）　（Ｓ＋ｅｖａｕ　）、ｒＢｉｏｃｈ！ｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ 、　Ｒｅｓ、　Ｃｏｍｍｕｎ、Ｊ　８６．１２６６−１２７３、（１９７９）参 照。

本発明において説明されるペプチドは、市場で入手可能であるＭＢＨＡ樹脂（Ｂ ｏｃ−Ｐｒｏ−ＭＢＨＡ）に結合される１−ブチルオキシカルボニル−プロリン から始まって調製される。Ｂｏｃ−Ｐｒｏ−ＭＢＨＡレジンは無水トリフルオロ 酢酸（Ｔ　Ｆ　Ａ）で処理される、またはジクロロメタン（ＴＦＡ−ＤＣＭ）に おける２５％ないし７５％混合のＴＦＡで処理されて、アミノ基を脱保護し、結 果の塩はＤｃＭ　（ＴＥＡ−ＤＣＭ）ｌ、−おける５％ないＬ２０％ｃ７）トリ エチルアミンを使ってまたはＤＣＭ　（Ｄ　Ｉ　ＥＡ−ＤＣＭ）における５％な いし２０％のジイソブロイルエチルアミンを使って中和されて、Ｈ２Ｎ−Ｐ　ｒ 　ｏ−ＭＢＨＡ樹脂を与える。

適当な保護基を含む配列（ＡＡ３１）における次のアミノ酸は、ＮＮ’−ジシク ロへキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）およびＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール （ＨＯＢｔ）を使ってＨ２Ｎ−Ｐ　ｒ　ｏ−ＭＢＨＡ樹脂に結合される。結合反 応は工ないし１８時間およびトルエン、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、ジメチルホ ルムアミド（ＤＭＦ）またはテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）またはその混合のよ うな適切な溶媒で行なわれる。望ましいペプチド鎖は適当なアミノ酸誘導体を使 って脱保護、中和および結合反応を連続的に繰り返すことによって組立てられる 。アミノ酸は２つ以上の反応官能基を含み、５ｐｐｓの様々な工程に関与しない １つ以上のこれらの基をマスクする必要があることは、当業者にとって周知であ る。

本発明で説明される様々なペプチドの５ｐｐｓのために使われる市場で入手可能 な誘導体化されたアミノ酸（ぺ二ンシラ研究所、ベルモント、カリフォルニア） は、ＢＯｃ−Ａ　１　ａ−ＯＨ，Ｂｏ　ｃ−Ｄ−Ａ　ｌ　ａ−ＯＨ，Ｂｏ　ｃ　 −Ａｒｇ（Ｔｏｓ）−〇Ｈ，Ｂｏｃ−Ａｓｎ−ＯＨ，Ｂｏａ−Ａｓｐ（ｏ−シク ロヘキシル）−ＯＨ，Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚ　１）−ＯＨ，Ｂｏｃ−Ｃｙｓ　 （Ｓ−４−ＭｅＢｚｌ）　−Ｇ　ｌ　ｎ−ＯＨ，Ｂｏ　ｃ−Ｇ　ｌ　ｕ　（０− シクロヘキシル）−ＯＨ％Ｂｏａ−Ｇｌ　ｕ　（ＯＢｚ　１）−ＯＨ，Ｂｏａ− Ｇｌｙ−ＯＨＳＢｏｃ−Ｈｉ　ｓ　（Ｔｏｓ）−ＯＨ，Ｂ。

ｃ−１１ｅ−ＯＨＳ　Ｂｏｃ−Ｌａｕ−ＯＨ，Ｂｏｃ−Ｄ−Ｌｅｕ−ＯＨ，Ｂｏ ａ−Ｌｙｓ　（ＣＩ−Ｚ）−ＯＨＳ　Ｂ。

ｃ−Ｌｙｓ　−（Ｂｏｃ）−ＯＨＳ　Ｂｏｃ−Ｍｅ　ｔ　−ＯＨ。

Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨＳ　Ｂｏｃ−Ｐｒｏ　−ＯＨ，Ｂｏｃ　−３ｅ　ｒ　（Ｂ ｚｌ）−ＯＨＳＢｏｃ−Ｔｈｒ　（Ｂｚｌ）−０ＨＳＢｏｃ−Ｔｈｒ　（Ｂｚｌ ）−ＯＨ，Ｂｏａ−Ｔｒｐ−ＯＨＳＢｏｃ−Ｔｙｒ　（Ｂｒ−Ｚ）−ＯＨ１およ びＢ。

ｃ−Ｖａｌ−ＯＨである。市場で入手可能ではない誘導体であるＢｏａ−１−ア ミノ−１−シクロプロパンカルボン酸、Ｂｏｃ−１−アミノ−１−シクロペンタ ンカルボン酸、Ｂｏａ−１−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸、Ｂｏｃ− １−アミノ−１−シクロへブタンカルボン酸、およびＢｏｃ−ＨＮ−（ＣＨ２） 、−ＣＯＯＨは、アシル化剤ｔ−ブチルオキシカルボニル無水物（［ＢＯＣ］２ 　０）を対応するアミノ酸と反応させることによって調製される。

合成の後、ペプチド樹脂はフッ化水素で処理されて、ペプチドを放出してクロマ トグラフィによってさらに精製される。塩基性アミノ酸残基の酸付加塩類は、当 業者にとって周知な方法によって適当な有機または無機酸でペプチドを処理する ことによって調製される。

本発明のカルシトニンペプチドは、本来のまたは合成されたものにかかわらず、 病の治療のために天然カルシトニンより多（の利点をもたらす。

開示された合成カルシトニンペプチドの多くは、より少ない合計アミノ酸を有す る、すなわち３２より少ない。合成ペプチドに組入れなければならない残基の数 が小さいことは、合成された本来のカルシトニンよりも便利で、有効で製造する のもより安くなる。さらに、これらのカルシトニンペプチドのより低い分子量は 、投与されたペプチドのモール当りの生物学的活性を高める結果となる。

本発明のカルシトニンペプチドは安定性の面でも有利である。ジスルフィド架橋 を有するペプチドの方が合成するのが難しい。これらのほとんどのペプチドにお いてジスルフィド架橋がないということは、合成における問題をなくすだけでは なく、保管における不安定の原因、および生物学的不活性化の要因をなくす。

カルシトニンは、骨吸収を禁止することによって未熟なラットの血液カルシウム を下げる。その効力は、血清カルシウムを１０％下げるのに必要なペプチドのマ イクログラムを定めることによって決めることができる。本発明の合成カルシト ニンペプチドの生物学的活性の生体内テストの結果は例３７で示される。テスト されたすべてのペプチドはその効力、持続作用、または両方において本来のヒト カルシトニンよりも優れていた。

療法 本発明のカルシトニンペプチドは、たとえば悪性の高カルシウム血症のようなカ ルシウムの高められた血清レベルに伴う病に苦しむ患者の血清血漿カルシウムレ ベルを下げるために、およびパンエツト病および骨粗しよう症の治療のために使 われる。これらの低カルシウム血症ペプチドは１日当りキログラム体重当り０． ０５ないし１００国際単位（ＩＵ）の範囲の量が投与される。ペプチドは少な（ て週に１または２回、または多くて１日２回与えることができる。最適の結果を もたらすための好ましい投薬量は０゜２ないし１０　ＩＵ／ｋｇ／日である。投 薬養生法は臨床指示に従って変えることができる。悪性の高カルシウム血症の治 療では、パンエツト病および骨粗しよう症の投薬量（０，２ないし２　ＩＵ／ｋ ｇ／日）よりもいささか多い投薬量が必要かもしれない（５ないし２０ＩＵ／ｋ ｇ／日）。経口または鼻による投与は、５ないし２００倍多い投薬量を必要とす る。

ほかの生物活性環状ペプチドの類似体 カルシトニンのものと類似した構造活性関係を有するほがの生物活性環状ペプチ ドの効能は、カルシトニンに対して上記で説明した効方向上変形を有する類似体 の合成によって高められることができる。

したがって、この発明のほかの局面に従って、我々はアミリン、カルシトニン遺 伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）、ソマトスタチン、心房性ナトリウム排出性ペプ チド、オキシトシンおよびバソプレッシンの類似体を合成し、環状構造を形成す るジスルフィド架橋は本発明の方法に従ってより安定する環状構造によって置換 されている。アミリン、カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）　、ソマ トスタチン、心房性排出性ペプチドの類似体は環状構造を有し、ジスルフィド架 橋を形成するシスティン残基は例２４の合成方法に従って、側鎖基によって結合 されるジカルボン酸残基およびジアミノ酸残基と置換される。オキシトシンおよ びバソプレッシンの類似体は、例８の合成方法に従って、内部位置においてジス ルフィド架橋のシスティン残基の１つがジアミノ酸残基と置換され、位置１でシ スティンを形成するジスルフィド架橋はジアミノ酸の側鎖に結合されるジカルボ ン酸によって置換される環状構造を有する。

１０アミノ酸を伴う線状ペプチドホルモンである黄体形成ホルモン（ＬＨＲＨ） は、視床下部によって分泌され、下垂体線によってＬＨおよびＦＳＨの放出を刺 激する（マツオ（Ｍｕ＋ａｏ）　、Ｈ，ら、ｒＢｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈ７ｓ 、Ｒｅｄ、Ｃａｍｚｕｎ、Ｊ　４３　：１３３４−１３３９　（１９７１））。

構造活性研究により、位置１および７のアミノ酸がシスティン残基で置換されか つジスルフィド架橋によって結合されるＬＨＲＨの立体配座的に制限される類似 体は、優れた生物学的活性を示すことがわかった（ロスヶ（Ｒｕ＋ｋｅ）ＲｏＷ 、ら、ｒＰｅｐｔｉｄｅｓ：　Ｓ＋ｒｕｃｔｕｒｅ　ａｎｄ　ＦｕｎＮｉｏｎＰ ｒａｃｅ＋ｄｉｏｇ＋　ｏｆ　ｔｈｅ　８ｔｈ　Ａｍｅｒｉｃｘｎ　Ｐｅｐｔｉ ｄｅ　Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ　Ｊ　（ハルビー（Ｈ＋ｎｂ７　）　Ｄ、Ｊ、　およ びリッチ（Ｒｉｃｈ）　、Ｄ、Ｈ。

編集）頁３３３−３３６　（１９８３）　）。したがって、我々は合成ＬＨＲＨ 作動体および抗体類似体を合成し、例８で示されるように、本発明の方法に従っ て位置１および７で残基が安定した環状構造によって置換される。

心房性ナトリウム排出性因子（ＡＮＦ）は心房性組織から隔離された環状ペプチ ドホルモンの仲間であり、効力のある利尿、ナトリウム排出性および血管緊張低 下作用を示す（ナツト（Ｎｏｔｔ）、Ｒ，Ｆ、およびウェーバ−（Ｗｅｂｅｒ　 ）、Ｄ、Ｆ、　、ｒｃｌｉｎ、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ、　ＭｅＨｂ、Ｊ　１６　 ：　１９（１９８７）の総説参照）。システィンジスルフィド架橋は心房性ペプ チドの位置７および２３の間にあり、この不安定な結合は本発明に従って説明さ れる代替の環状構造を組入れることによって安定するようになる。

ＣＧＲＰは３７アミノ酸単−鎖ポリペプチドであり、位置１および７の間にジス ルフィド架橋とＮ末端ベニルアラニンアミド残基とを有する。ペプチドが心臓血 管系に作用し、線条のある筋肉に対して神経親和性作用を有するという直接的な 証拠がある。ＣＧＲＰ＊似体は、高血圧症に対して０．０８ないし２００ｎｍｏ ｌ／ｋｇ／時間の用量で使用されることができる。

アミリンペプチド類似体は、タイプ■糖尿病の治療に使用することができ、皮下 に０．２ないし２．０００μｇ／ｋｇの用量で投与される。

バソプレッシンペプチド類似体は、糖尿病尿崩症、血友病、またはフォノ・ビレ プラント病の治療として、皮下で０．０１ないし４０μｇ／ｋｇまたは鼻腔内で ０．０５ないし２００μｇ／ｋｇの用量で投与できる。

ソマトスタチンペプチド類似体は、先端巨大症または漿液性下痢症状に対して、 皮下で２ないし２０，０００μｇ／ｋｇの用量を毎日与えることができる。

ＬＨＲＨ（作動体）ペプチド類似体は、女性の避妊、または子宮類線維腫、多嚢 胞卵巣、性的早熟、または子宮内膜症の治療として、毎日２μｇないし１２０ｍ ｇ／７０　ｋｇの投与で使用できる。５ないし１０倍の投与が同じ条件で使われ るかもしれない。ＬＨＲＨ（抗体）は女性の避妊のために類似した態様で使用さ れる。

オキシトシンペプチド類似体は、出血を制御するために胎盤の分娩時に筋肉内に ０，２ないし２０００μｇの用量で、分娩後の子宮出血を制御するために静脈連 続注入によって０．０２ないし４００　ｎ　ｇ／分の用量で、および乳生産を誘 発するために（乳汁分泌）鼻孔内に０．２４ないし２４００μｇで与えられる。

心房性ナトリウム排出性ペプチド類似体は、大動脈血圧を下げるため、またはナ トリウムおよび水の恒営性を制御するために、皮下で０．０１ないし１０００μ ｇ／ｋｇ／日の用量で投与できる。同じペプチドが０．０１ないし１０μｇ／ｋ ｇ／分の用量で静脈注射によって投与されてもよい。

本発明のペプチドは、自由ペプチドとして、または薬事的に許容される塩類の形 で投与できる。活性ペプチドは非経口で、すなわち皮下、筋肉内または静脈注射 で投与されてもよい。注入使用のための適する薬事的な製剤は無菌の水溶液また は散布剤を含み、無菌の注入できる溶剤または散布剤の即座な調製のための無菌 粉末を含む。すべての場合、製剤は無菌でなければならず、溶剤は簡単に注射で きるという点で流体でなければならない。製造および保管の条件下で安定してい なければならず、またたとえば細菌および真菌のような微生物の汚れに対して保 存できなければならない。担体はたとえば水またはグリセロールのようなポリオ ル、およびその適切な混合物を含む溶媒または散布媒体であることができる。筋 肉内で使用するための組成は、張度を調整するためおよび溶液を緩和するために 少量の塩類、酸および塩基を含んでもよい。適する緩和および等優性試剤は当業 者にとって容易に定められる。

経口または鼻による投与は、親油性の基を有するまたはジスルフィド架橋がない 類似体に特に可能である。経口摂取のための製剤はタブレット、カプセル、錠剤 、粉末活性剤のアンプル剤の形、または油性もしくは水性の懸濁剤または溶液の 形にある。タブレットまたはほかの非液体経口組成物は、薬事的組成の製造のた め当該技術において既知である許容可能な賦形剤を含んでもよく、乳糖または炭 酸カルシウムのような希釈薬、ゼラチンまたはデンプンのような結合剤および食 べやすくするために甘味剤、味付剤、着色または保存剤からなるグループから選 択された１つ以上の物質を含む。さらに、このような経口による調製物は、腸内 の崩壊および吸収をさらに遅らすために既知の技術によってコーティングされて もよい。このような経口組成および調製物は、組成のパーセンテージが広範囲に わたってもよいが、活性ペプチドの少な（とも０．１％を含むべきである。この ような組成物における治療学的に活性な混合物の量は、消化のための適切な量で 得られる適切な投薬量のものである。

水性の懸濁剤は薬理学的に許容可能な賦形剤との混合物として活性成分を含んで もよく、メチルセルロースのような懸濁剤を含み、およびレシチンまたは長鎖脂 肪アルコールのような湿滑剤を含む。前記水性懸濁剤は、業界基準に従って、保 存料、着色剤、調味剤および甘味剤を含んでもよい。

カルシトニンペプチドのリポソームの調製物は、引用により援用される米国特許 第４，６９２，４３３号「崎乳類の血清カルシウムレベルを調整するための方法 および組成」で開示されているように、経口投与を高めるために有用である。

鼻による投与の製剤は、粉末または液体の形であってもよく、また当該分野にお いて訓練されているものにとって周知である吸収促進物質を含んでもよい。

本発明は以下の例を使って詳細に説明されるが、説明される方法はここで述べら れるすべてのペプチドの調製に適用でき、以下の例に制限されない。

例１ ［：（Ｓｅ　ｒ−Ｔｈｒ）２−Ｌ５’Ｓ−７１−鳥類カルシト（Ｓｅｔ−Ｔｈｒ ）２−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙｌｌ　１２　１３　１４　１５　１６ −Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｇｉｎ−Ｔｈｒ −Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ −Ａ　ｌ　ａ−Ｇ　１　ｙ−Ｔｈ　ｒ−Ｐ　ｒ　０−ＮＨ２の合成樹脂ペプチド 合成： Ｂｏｃ−Ｐｒｏ−ＭＢＨＡ樹脂（２ｇ、１ｍｍｏ　１）はベックマン９９０　Ｂ ペプチドシンセサイザ（ベックマンインストラメンツ、パロアルト、カリフォル ニア）の反応容器に入れられ、以下の操作が行なわれた。各ステップは特に明記 しない限り１回行われ、各ステップ後の試薬および溶媒は、窒素の濾過によって ペプチド樹脂から分離された。

ステップ　試薬　溶媒量　回数　混合時間（分） １．　ＤＣＭ　３０ａ＋ｌ　３回　１５２、７Ｆへ−ＤＣＭ（１：Ｉ）　３０　 山１１．５３、　ＴＦ、へ−ＤＣＭ（１：ｌ）　３０　ｍｌ　３０．０４、ＤＣ Ｍ　３０ｚｌ　３回　１５ ５、Ｍｅ＋ｔ＋ａｎａｌ　３０　ｍｌ　３回　１６、ＤＣＭ　Ｈコ１３回　１５ ７、　ＴＦ〜　ＤＣＭ（ｌｉ：　３０　ｍｌ　１．５８、　丁Ｆへ−ＤＣＭｆｌ 　ｌ；　３０　ｍ１５．０９、ＤＣＩＩ　３０ｍ１　３回　１．５１０、ＤＭＦ 　３０ｍ１　３回　１５ １１、　Ｂｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｒｌ！−ＯＨ／ＨＯＢ＋／ＤＣＣ（各４１ｍ０１） ［１！！Ｆ　２（ｌｎｉ　２４Ｇ、０１２、ＤＣＭ　３０ｚｌ　３回　１５ １３、Ｍ！ｔｈａｎｏｌ　３０　ｍｌ　３回　１．５１４、ＤＣＭ　３０ｍ１　 ３回　１．５結合反応は、この場合のように平均４時間、またはニンヒドリンテ スト　（シーザー（Ｋａｉｕ＋）Ｅ、Ｔ、ら、ｒ、４ｎｘｌＢｉｏｃｈ＋ｚ、ｊ 　３４　：　５９５−５９８．１９６９）が遊離アミノ基の不在を示す負の結果 を示すまで行なわれた。同じ反応シーケンスは適当なアミノ酸誘導体を使って繰 り返された。位置７におけるリジンはＢｏｃ−Ｌｙｓ　（Ｂｏｃ）ｆ−ｏＨを使 って入れられ、後の２つの誘導体のＢｏｃ−Ｔｈｒ　（Ｂｚ　１）−ＯＨおよび Ｂｏｃ−３ｅ　ｒ　（Ｂｚ　１）−ＯＨは、誘導体ＨＯＢｔおよびＤＣＣを１０ ｍｍｏｌ使って結合された。この合成の完了の後、樹脂は容器から取出され真空 で乾燥された。

フッ化水素（ＨＦ）を使った樹脂−ペプチドの分解乾燥されたペプチド樹脂（１ ｇ）、アニソール（１ｍｌ）およびλ−クレゾール（０，１ｇ）はＫｅ　ｌ−Ｆ 反応容器に入れられた。容器は液体窒素の浴槽に入れられ、無水ＨＦ（１５ｍｌ ）は容器内に凝縮された。反応混合物は一１０℃で１時間撹拌され、ＨＦは真空 下の蒸発によって取除かれた。残基はドライエーテル（５０ｍ　ｌ）で粉砕され 、ろ過され、付加的量のエーテル（３Ｘ５０ｍｌ）によって洗浄された。混合物 におけるペプチドプロダクトは氷酢酸（３Ｘ５０ｍｌ）で抽出することによって 隔離され、凍結乾燥されて溶媒を取除いた。

ペプチド精製 ＨＦ分解（２００ｍｇ）からのペプチド粉末はＩＮ酢酸（３ｍｌ）で溶かされ、 セファデックスＧ−２５（ごく微細）カラム（１，５ｃｍＸ１００ｃｍ）に入れ られ、ＩＮ酢酸で溶離された。ペプチドを含む溶離断片は貯留され、凍結乾燥さ れた。結果のペプチド（５０ｍｇ）は、ウオーダーズ（Ｗａ　ｔ　ｅ　ｒ　ｓ） 　Ｃ−４カラムおよび水中０．１％ＴＦＡないし水中０．　１％ＴＦＡの７０％ アセトニトリルの緩衝液勾配を使って、既成の逆相高速クロマトグラフィー（Ｒ Ｐ−ＨＰＬＣ）によってさらに精製された。純ペプチドを含む画分（分析的ＨＰ ＬＣによって定められる）（よ混合され、プロダクトは凍結乾燥によって分離さ れた。ペプチドの純度はＨＰＬＣによって９５％より高く、アミノ酸分析は酸加 水分解（６Ｎ　ＨＣＩ、１１０℃、２４時間）が続いて、予期されたアミノ酸比 をもたらした。

例２ 合成 りｏｃ−Ｐｒｏ−ＭＢＨＡ樹脂（２ｇ、１ｍｍｏ　ｌ）力）ら始まって、ペプチ ド鎖は位置８におけるツク１ノンカ〈例１で示されるように組込まれるまで組立 てられた。この時点で、リジン樹脂はＢｏｃ−Ｌｙｓ　（Ｆｍｏｃ）−ＯＨを使 って組入れられ、合成はＢｏｃ−Ｔｈｒ　（Ｂｚ　１）−ＯＨおよびＢｏａ−３ ｅ　ｒ　（Ｂｚ　１）−ＯＨを使って続番すられた。

脱保護および中和（ステ・ツブ１から１０）されたプロダクトは以下のステップ にさらされた： １、　ＤＣＭ（３０ｍｌ）における無水コハク酸（２０ｍｍｏｌ）、４時間： ２、　ＤＣＭ洗浄（３Ｘ５０ｍｌ）； ３、　ＤＭＦ洗浄（３Ｘ　５０ｍ　ｌ）　；４、　５０％ピペリジン−ＤＭＦ　 （２Ｘ５０ｍｌ）　、２時間； ５、ＤＣＣ−ＤＣＭ　（３０ｍｍｏ　ｌ）８時間；６、ＤＣＭ洗浄（３Ｘ５０ｍ ｌ）； ７、ＤＭＦ洗浄（３Ｘ５０ｍｌ）；および８、ＤＣＭ洗浄（３Ｘ５０ｍｌ） 次に樹脂は濾過され、真空の下で乾燥された。ペプチドの樹脂からの分解、精製 、および特性化は例１で示されるように行なわれた。

例３ Ｂｏｃ−Ｐｒｏ−ＭＢＨＡ樹脂（２ｇ、１ｍｍｏ　ｌ）から始まって、ペプチド 鎖は組立てられ、例１で示されるようにＨＦを使って樹脂から分解された。位置 １および７でシスチン残基に遊離スルフヒドリル基を含む線状ペプチドは、蒸留 水に溶かされ（５ｍｌ当り１ｍｇ）およびｐＨ７，５の空気酸化で２４時間ざら された。得られた環状プロダクトは上記のように精製および特性化された。

例４ ７　ｉｌ＋　９　１０１１１２１３ （Ｌｅｕ−Ａｌａ−５ａｒ−Ａｓｎ−Ｌａｕ−５ｅｒ−Ｔｈｒ）２−Ｌｙｓ−Ｌ ａｕ−Ｌａｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｌａｕ−５ｅｒ−λ１ａ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐ ｒｏ−Ｎ’Ｈ２Ｂｏａ−Ｐｒｏ−ＭＢＨＡ樹脂（２ｇｓ　１ｍｍｏ　ｌ）から始 まって、ペプチド鎖は例１で示されるように、位置９でアミノ酸ロイシンが入る まで組立てられた。次に以下の保護アミノ酸誘導体を順次使って合成が続けられ た：Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ，Ｈ２０ＳＢｏａ−Ｌｙｓ　（Ｂ。

ｃ）−ＯＨ，Ｂｏａ−Ｔｈｒ　（ＢＺ　１）−ＯＨＳＢｏｃ−３ｅ　ｒ　（Ｂｚ 　１）−ＯＨ，Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−○Ｈ，Ｈ２Ｏ０ペプチド樹脂はＨＦ反応にさら され、隔離されたペプチドは例１で示された方法に従って精製および特性化され た。

例５ 合成　［（＋：ｈｘ−５ａｒ−Ｔｈｒ　）　２−Ｌｙ　ｓｙ、　シｕ”　］　− 亡管’Ｓ／ｌ／シト：υ　（７−コ２）：Ｌｙｓ−Ｌａｕ−Ｇｉｎ−Ｔｈｒ−Ｔ ’ｙｒ−Ｐｒｏ−λｒｇ−’ｒｈｒ−λ５ｐ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−人１ａ−Ｇｌｙ −Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｎs（。

Ｂｏｃ−Ｐｒｏ−ＭＢＨＡ樹脂（２ｇ、１ｍｍｏ　ｌ）で始まって、ペプチド鎖 は例１で示されるように位置９でアミノ酸ロイシンが入るまで組立てられた。次 に以下の保護アミノ酸誘導体を順次使って合成が続けられた：Ｂｏｃ−Ｌｅｕ− ＯＨ，Ｈ２０，Ｂｏｃ−Ｌｙｓ　（Ｂｏｃ）−〇Ｈ９Ｂｏｃ−Ｔｈｒ　（Ｂｚ　 １）　−ＯＨ，Ｂｏｃ−５ｅ　ｒ　（Ｂｚｌ）−ＯＨ，樹脂からのＢｏａ基はト リフルオロ酸を使って取除かれ、プロダクトは凝縮剤としてＤＣＣを使ってシク ロへキシルプロピオン酸で結合された。得られた樹脂はＨＦ反応にさらされ、分 離されたペプチドは例１で示された方法に従って精製および特性化された。

例５で示される［　（Ｃｈｘ−３ｅ　ｒ−Ｔｈ　ｒ）　２−Ｌｙｓ’、Ｌｅｕ８ ］−鰻カルシトニン（７−３２）の構造は、［（Ｃｈｘ−３ｅ　ｒ−Ｔｈｒ）２ −Ｌｙｓ７．Ｌｅｕ８］−鳥カルシトニン（７−３２）の類似体も表わす。

例６ （Ｌａｕ８）−鰻カルシトニンの合成：Ｇｌｕ−Ｌａｕ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ−Ｌｅ ｕ−Ｇｉｎ−Ｔｈｒ−ＴＹｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−τｈｒ−Ａｓｐ−Ｖａｌ　＜ｌ ｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｎｌ（２Ｂｏｃ−Ｐｒｏ−ＭＢＨＡ樹脂 （２ｇ、１ｍｍｏｌ）から始まって、ペプチド鎖は適当な保護アミノ酸誘導体を 使って組立てられた。ペプチドの樹脂からの分離、ジスルフィス架橋の形成、そ の精製および特性化は例３に示される方法に従って行なわれた。

例７゜ 合成（（Ｌａｕ−Ｃｙｓ）’、　Ｌａｕ”）　−９カルシトニジ：タイトルのペ プチドは例６に従って調製された。

例８ 合成 りｏａ−Ｐｒｏ−ＭＢＨＡ樹脂（２ｇ、１ｍｍｏ　１）から始まって、ペプチド 鎖は位置９のロイシンが例１で示されるように組入れられるまで組立てられた。

次に合成は以下の保護アミノ酸誘導体を順次使って続けられた・Ｂｏｃ−Ｌｅｕ −ＯＨ，Ｈ２０，Ｂｏｃ−Ｌｙｓ　（Ｆｍｏｃ）−ＯＨＳＢｏｃ−Ｔｈｒ　（Ｂ ｚ　１）−〇Ｈ，Ｂｏｃ−８ｅｒ（Ｂｚ　１）−ＯＨ，Ｂｏａ−Ｌｅｕ−○Ｈ， Ｈ２０ＳＢ。

ｃ−Ａｓｎ−ＯＨ，およびＢｏｃ−３ｅ　ｒ　（Ｂｚ　ｌ）　−０Ｈ０結果のペ プチド樹脂は以下の操作が施された：１、ＤＣＭ洗浄　（３Ｘ５０ｍｌ） ２、　ＤＭＦ洗浄　（３Ｘ！５０ｍ１）３、　ビベリンン−ＤＭＦ　（１：　１ ）　（１ｘ５０ｍｌ、１．　５　分）４、　ピ＜すＶン　−ＤＭＦ　（１：　１ ）　（ＩＸ５０ｍｌ、２０　分）５、、ＤＭＦ洗浄　（３Ｘ５０ｍｌ） ６、　ＤＣＭ洗浄　（３Ｘ５０ｍｌ） ７、コハク無水物（２０ｍｍｏ　ｌ）ＤＣＭ４時間８、ＤＭＦ洗浄　（３Ｘ５０ ｍｌ） ９、ＤＣＭ洗浄　（３ｘ５０ｍｌ） １０、ＴＦＡ−ＤＣＭ　（１：Ｉ　）（１ｘ５０ｍｌ、１．５分）１１、ＴＦＡ 　（１：　１）　（ＩＸ５０ｍｌ、３０分）１２、ＤＣＭ洗浄　（３Ｘ５０ｍｌ ） １３、メタノール洗浄　（３ｘ５０ｍｌ）１４、ＤＣＭ洗浄　（３Ｘ５０ｍｌ） １５、ＴＥＡ　（１：　９）　（ＩＸ５０ｍｌ、１．５分）１６、ＴＥＡ　（１ ：９）　（ＩＸ５０ｍｌ、５分）１７、ＤＣＭ洗浄　（３Ｘ５０ｍｌ） １８、ＤＣＣ−ＤＣＭ　（３０ｍｍｏ　１）２０時間１９、ＤＦＭ洗浄　（３ｘ 　５０ｎ　１　）２０、ＤＣＭ洗浄　（３Ｘ５０ｍｌ） ２１、メタノール洗浄　（３Ｘ５０ｍｌ）樹脂は濾過され、真空の下で乾燥され た。ペプチドの樹脂からの分離、精製およびプロダクトの特性化は例１で示され ているように行なわれた。、 例９ 合成 （了ｔ−４−ルーＡｏａ−５ａｒ−Ｔｈｒ）２−Ｌｙｓ−Ｌａｕ−Ｌａｕ−Ｇｌ ｙ−Ｌｙｓ−Ｌａｕ−５ｅｒ−Ｇｉｎ−Ｇｌｕ−Ｌａｕ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ−Ｌｅ ｕ−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−人ｒｇ−Ｔｈｒ−人５ｐ−ＶａＬ−Ｇｌ ｙ−Ａｌａ−に１ｙ−Ｔｆｉｒ−Ｐｒｏ−ＭＢ２ このペプチドは例５で示された方法に従って合成されたが、シクロへキシルプロ ピオン酸の代わりにＢｏｃ−８−アミノオクタン酸を使用し、トリフルオロ酸を 使ってＢ。

Ｃ基を取除き、無水酢酸を使ってプロダクトをアセチル化した。

［（アセチル−Ａｏａ−３ｅｒ−Ｔｈｒ）２−Ｌｙｓ７゜Ｌｅｕ８］　−鳥カル シトニン（７−３２）の構造は鰻カルシトニン類似体も表わす・ ［（アセチル−Ａｏａ−３ｅｒ−Ｔｈｒ）２−Ｌｙｓ’。

Ｌｅｕ８］　−鰻カルシトニン（７−３２）ＨＡｓ−Ｌｙｓ−Ｌａｕ−４ｉｎ＋ 丁ｈｒ−Ｐｒｏ−人ｒｇ−Ｔｂｘ−人５ｐ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−人ユａ−Ｇｌｙ− Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｎ’ＭB この混合物の調製は、Ｂｏｃ−Ｐｒｏ−ＭＢＨＡ樹脂（２ｇｓ　１ｍｍｏ　ｌ） から始まって、例１で示される方法に従って適当なアミノ酸誘導体を使って行な われたが、位置２２におけるＢｏｃ−Ｔｙｒ　（Ｂｒ−Ｚ）−ＯＨの結合ステッ プは削除された。

［Ｄ−Ａｌａ−Ａｄａ−３ｅｒ）’、Ａｌａ７．ｄｅｓ−２２コー鳥カルシトニ ン（５−３２）の構造は鰻類似体も表わす： ＣＤ−Ａｌａ−Ａ、ｄａ−３ｅｒ）５．Ａｌａ７．ｄｅｓ−２２〕−鰻カルシト ニン（５−３２）。

例１１ 合成 Ｃ（口＞ｘ−５ｅｒ）’、Ａ１ｍ’、ｄａｓ−”］　、％カ〜シト＝ｖ　（５− ３２）：［Ｃｈｘ−５ｅｒ）’−Ｔｈｒ−人１ａ−Ｖａｌ−Ｌａｕ−Ｇｌｙ−Ｌ ｙｓ−Ｌａｕ−５ｓｒ−Ｇｉｎ−Ｇｌｕ−Ｌａｕ−Ｈｉｓ−このペプチドは例５ で示される方法に従って調製された。

［（Ｃｈｘ−３ｅｔ）’、　Ａｌａ’、　ｄｅｓ　−２２コ　−鶴カルシトニン （５−３２）の構造は鰻カルシトニン類似体も表す・ ［（Ｃｈｘ−８ｅｒ）５．Ａｌａ７．ｄｅｓ−２２］−鰻カルシトニン（５−３ ２）。

例１２ 合成 Ｐｈｅ−人５ｎ−Ｌｙｓ−Ｐｈａ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈ＠−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ− Ｔｈｒ−人１ａ−工１＊−Ｇｌｙ−Ｖａｌ＜ｌｙ−尼ａ−Ｐｒｏ→馬 このペプチドは例３の［Ｌａｕ８．”　、”　］　−ｈＣＴに示された方法に従 って調製された。

例１３ 合成ｒ　（Ｌａｕ−Ｃｙｓ）　’　／　Ｌａｕ”、　”］−ヒトカルシトニジ　 ：Ｇｌｙ−人１ａ−ＰｒＯ−ＭＷ。

このペプチドは例３における［Ｌｅｕａ、＋　２．ｌ　６］−ｈＣＴの調製で示 された方法に従って調製された。

例１４ 合成［”ｕ−ｃＹ”）’ｌ　Ｌａｕ””””３−　ｕ）−４７Ｌシ）ニー／　’ λ５ｐ−Ｌａｕ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ− Ｇｉｎ−Ｔｈｒ−人１ａ４１ａ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｎ ’Ｈ２ このペプチドは例３における［Ｌｅｕａ、＋　２．＋　６］−ｈＣＴの調製で示 された方法に従って調製された。

例１５ 合成 （Ｉａｕ’）　−’！至カルシトニン　：Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−ＭＢ２ Ｂｏｃ−Ｐｒｏ−ＭＢＨＡ樹脂（２ｇ、１ｍｍｏ　ｌ）から始まって、ペプチド 鎖は適当な保護アミノ酸誘導体を使って集められた。ペプチドの樹脂からの分離 、ジスルフィド架橋の形成、その精製および特性化は、例３で示される方法に従 って行なわれた。

例１６ 合成　（（Ｌａｕ−ｃｙｓ）’、　ｘＡｕ”）　−％カｔｂｖトニｙ　：Ｇｌｕ −Ｌａｕ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ−Ｌａｕ−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−人ｒｇ −Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−５ａｒ−タイトルのペプチドは上記の例６ に従って調製された。

（ＩＪｕ−Ａｌａ−５ｅｒ−Ａｓｎ−ｘＡｕ−５ｅｒ−Ｔｈｒ）２−Ｌｙｓ−ｒ ｌＪｕ−−ｕ−Ｇｌｙ−ＬＹｓ−Ｌｅｕ−ｓｅｒ−Ｇｉｎ−Ｇｌｕ−Ｌａｕ−Ｈ ｉｓ−Ｌｙｓ−Ｌａｕ−Ｇｉｎ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ａ ｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−て調製された。

例１８ （ＣｈＸ−５ａｒ−Ｔｈｒ）２−ＬＹＳ−Ｌａｕ−Ｉａｕ−Ｇｌｙ−ＬＹ！！− Ｌａｕ−５ａｒ−ｃｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌａｕ−ＨｌＳ−タイトルのペプチドは上記 の例４に示される方法に従って調製された。

例１９ 合成 ５ａｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌａｕ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ−Ｌａｕ−Ｇｉｎ−Ｔｈｒ− Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−人ｒｇ−Ｔｈｒ−人ｓｎ−例２０ （ＸＪｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−５ａｒ−ＴＡｕ−５ａｒ−Ｔｈｒ）　２−ＬＹｆｈ −Ｌａｕ−Ｌａｕ−Ｇｌ”／−Ｌ”／５−Ｌａｕ−５ｅ’−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌ ａｕ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ−Ｌａｕ−Ｇｌｎ−？ｈｒ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｔ ｈｒ−人５ｐ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−＾１ａ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｎ）ｉ２こ の混合物は例４に示される方法に従って調製された。

例２１ 合成　（シｕ８）−基６ルシトニン　：このペプチドの調製は例６に示される方 法に従って行な合成　（（あｕ−ＣＹＳ）・、ア。・、−襄ｈ　７．”、ｙ　Ｈ ユッ　。

このペプチドは例７で示される方法に従って調製された。

Ａｌａ−ａｌｙ−？ｌＩｒ−Ｐｒｏ−１ｎｌ。

このペプチドは例８で示される方法に従って調製された。

例２４ 合成 りｏａ−Ｔｙｒ　（Ｂｒ−Ｚ）−０−樹脂（２ｇ、１ｍｍｏｆ；０ｍｎ１　Ｂｉ ｏｃｈｅｍ、サンディエゴ、カリフォルニア）から始まって、ペプチド鎖は例１ で示されるように、位置８のアラニン残基まで集められた。合成はアミノ酸誘導 体Ｂｏｃ−Ｌｙｓ　（Ｆｍｏｃ）−〇Ｈ，Ｂｏｃ−Ｔｈｒ　（Ｂｚ　１）−ＯＨ ，Ｂｏｃ−Ａｌａ−ＯＨＳＢｏａ−ＴＨｒ　（Ｂｚ　１）−ＨＯおよびＢｏｃ− Ａｓｎ−ＯＨを順次組み入れることによって続けられて、Ｂｏｃ−Ａｓｎ−Ｔｈ ｒ　（Ｂｚ　１）−Ａｌａ−Ｔｈｒ　（Ｂｚ　ｌ）−Ｌｙｓ（Ｆｍｏ　ｃ）−（ ９−３７）−ラットアミリン−ポリマーの樹脂を得た。

位置７におけるリジンのニプンロンアミノ基にあるＦｍ０Ｃ基は、例８で示され るようにピペリジン−ＤＭＦ　（１：１）を使って脱保護された。次に、Ｆｍｏ ｃ−アスパラギン酸−アルファーｔ−ブチルエステルはＤＣＣＤを凝縮剤として 使って結合された。

口酢酸で処理されて、位置３におけるアスパラギンのアルファアミノ基および位 置２のアスパラギン酸のアルファカルボキシル基を脱保護した。これらの基はＤ ＣＣを使って結合された。プロダクトからのＦｍｏ　ｃ保護部分はピペリジン− ＤＭＦ　（１：　１）を使って分離され、最後のアミノ酸はＢｏａ−Ｌｙｓ　（ Ｂｏｃ）−ＯＨとして入れられた。

ペプチドの樹脂からの分離および精製は例１で示されるよ合成 ５ａｒ−５ａｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−ＧＩＹ−５ａｒ−ＪＬｓｎ−Ｔｈｒ −ＴＹｒ−ｏＨＢｏａ−Ｔｙｒ−（Ｂｒ−Ｚ）−０−樹脂（２ｇ、Ｉｍｒｎｏ　 ｌ）から始まって、タイトルのベプチ）ζ番ヨ例２４で示されるように合成され た。

例２６ 人５ｎ−Ｐｈｅ−Ｌａｕ−Ｖａ１−人ｒｇ−ｓａｒ−ｓ＠ｒ−人ｓｎ−人ｓｎ− Ｌａｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｌａｕ−Ｐｒｏ−ＰｒＯ−Ｔｈｒ−Ｍｎ−Ｖ ａ　１−ＧＩＹ−５＠ｒ−態ｎ−１１−Ｔ’ｆｒ−ＮＴＬ２Ｂｏａ−Ｔｙｒ　− （Ｂｒ−Ｚ）　−ＭＢＨＡ　−樹Ｍ旨　（２ｇ。

１ｍｍｏＬ）から始まって、タイトルのペプチド（よ例２４で示されるように合 成された。

例２７ 合成 Ａｌ１−人＊ｎ−Ｐｈａ−Ｌａｕ−Ｖａｌ−Ｈ１！ｉ−５＠ｒ−５＠ｒ−人Ｊｏ ｎ−人５ｎ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−人１ａ−工１＠−Ｌａｕ−５ｅｒ−５ａｒ−τｈ ｒ−人５ｎ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−５ａｒ−人ＢＨ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−ＮＨ。

Ｂｏ　ｃ−Ｔｙ　ｒ　−（Ｂ　ｒ−Ｚ）　−ＭＢＨＡ　−樹月旨　（２ｇｌｌｍ ｍｏｌ）から始まって、タイトルのペプチド！ｔｇＡ＋２４で示されるように合 成された。

例２８ 合成 黄体形成ホルモン放出ホルモン（Ｌ　ＨＲＨ）作動体の新規の環状類似体（（Ｄ −β−ナフチルアラニン）’　−ＬＨＲＨ，ナファレリンＲ）であるタイトルの 混合物は、Ｂ。

ｃ−Ｇｌｙ−ＭＢＨＡ樹脂（２ｇ、１ｍｍｏ　ｌ　；　Ｏｍｎ　ｉＢｉｏｃｈｅ ｍ、サンディエゴ、カリフォルニア）から始まって、例８で示される方法に従っ て調製された。

（以下余白） 例２９ 合成 黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）抗体の新規の環状類似体（（Ｄ−Ｐ ｈｅ）　２　（Ｄ−β−ナフチルアラニン）’−ＬＨＲＨ）のタイトルの混合物 は、Ｂｏａ−Ｇ１７−ＭＢＨＡ樹脂（２ｇ、１ｍｍｏ　ｌ　；○ｍｎｉ　Ｂｉｏ ｃｈｅｍ、サンディエゴ、カリフォルニア）から始まって、例８で示される方法 に従って調製された。

例３０ 利尿ホルモンバソプレッシンの新規の環状類似体であるタイトルの化合物は、Ｂ ｏ　ｃ−Ｇ　ｌ　ｙ−ＭＢＨＡ樹脂（２ｇ、１ｍｍｏｌ）から始まって、例８で 示される方法に従って調製された。

例３１ 合成 ペプチドホルモンオキシトシンの新規の環状類似体であるタイトルの混合物は、 Ｂｏ　ｃ−Ｇ　ｌ　ｙ−ＭＢＨＡ樹脂（２ｇｓ　１ｍｍｏ　ｌ）から始ま、って 、例８で示される方法に従って調製された。

例３２ 合成 ソマトスタチンの新規の環状類似体であるタイトルの３毘合物は、Ｂｏｃ−Ｌｙ ｓ　（Ｆｍｏｃ）−０−ＣＨ２＝樹脂Ｃ２ｇ５１ｍｍｏｌ、０ｍｎ１　Ｂｉｏｃ ｈｅｍ、サンディエゴ、カリフォルニア）から始まって、例２４で示される方法 に従って調製された。

例３３ 合成 １３ｏｃ−Ｔｙｒ　（Ｂｒ−Ｚ）−０−樹脂（２ｇ、１ｍｍｏ１）から始まって 、人間の心房性ナトリウム排出性ペプチドの新規環状類似体であるタイトルのペ プチドは、例２４で示されるように合成された。

例３４ 環状ラット心房性ナトリウム排出性ペプチドの合成りｏｃ−Ｔｙｒ−（Ｂｒ−Ｚ ）−０−樹脂（２ｇ、Ｌｍｎｏ　１）から始まって、ラットの心房性ナトリウム 排出性ペプチドの新規の環状類似体であるタイトルのペプチドは、例２４で示さ れるように合成された。

例３５ 人１ａ−Ｇｌｙ−Ｌａｕ−Ｌａｕ−５ａｒ−人ｒｑ−５ｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ− Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｌ”／５−ＡＳｎ−Ａｓｎ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ −人ｓｎ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−５ａｒ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−ＮＨ２Ｂｏｃ− Ｐｈｅ−ＭＢＨＡ樹脂（２ｇ、Ｌｍｎｏ　ｌ）から始まって、人間のカルシトニ ン遺伝子関連ペプチドの新規の環状類似体であるタイトルのペプチドは、例２４ で示されるように合成された。

例３６ 合成 入１＆−ＧＩＹ−Ｌａｕ−Ｌａｕ−５ａｒ−人ｒｇ−５ａｒ−Ｇｌｙ−ＧＬｙ− Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−人５ｎ−Ｐｈｅ−Ｖａ　１−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ −Ａｓｎ−Ｖａｌ　−Ｇｌｙ−５ａ　ｒ−に　１ｕ−Ａｌ　ａ−Ｐｈａ−ＮＨ２ Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−ＭＢＨＡ樹脂（２ｇ、Ｌｍｎｏ　ｌ）から始まって、ラットカ ルシトニン遺伝子関連ペプチドの新規の環状類似体であるタイトルのペプチドは 、例２４で示されるように合成された。

式１のペプチドは重要な低カルシウム血症活性を示した。

この活性は以下のとおり測られた。雄のネズミ（Ｓｐｒｚ（ＩＩｅＤｚｖｌｅｒ ）体重的１００ｇは一晩絶食させらた。様々な効方向上変形を含む本発明のペプ チドは、１ｍｌ当り０．００１ｇｇから約１００μｇの濃度範囲でｐＨ７，４Ｐ ＢＳ緩衝剤で溶解された。ネズミはメトフェイヌ（Ｍｅｔｏｐｈｚｎｓ亭）で麻 酔され、重さが図られ、１ｋｇの体重当り０．００１から約１００μｇの用量で ペプチド溶液で皮下注入された。

様々な時間の後、動物は麻酔され腹部切開が行なわれ、工大静脈から血液サンプ ルが採られ、血清はリーダイク（Ｌｉｅｄｔｋｅ）、クリニカルケメストリ、２ ７．２０２５−２０２８（１９８１）の方法によってカルシウムが分析された。

合成ペプチドのカルシウム低下効力は、Ｍ９　クーマー（Ｋｕｍｕ　）　ら、ｒ Ｊ、Ｅｎｄｏｃ＋１ｎｏｌｏ（ｙＪ３３：４６９−４７５（１９６４）の方法に 示されるように、ｍｇ当り国際単位（ＩＵ）で計算できる。このテストに従って 、１０ＩＵは皮下注射の１時間後、１００ｇのネズミでＣａ”濃度を１０％低下 させるのに必要なペプチド量として定められる。

様々なペプチドが皮下注入された後のネズミにおける血清Ｃａ”　レベルは以下 にまとめられている・１（Ｓｕ−Ｔｈｒ）２−Ｌ７ｓ−７；−ｃＣＨ７−３２！ 　ｌ　１時間　２０９１０　１時間　２．７５ １００１時間　２．７５ ］ｆＡｃ−ＡＯＡ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ）　２−Ｌ１＋−７’、−ｃＣＴ（７−３２ ）０．１１時間　０．４２ ０４１時間　０．４５ １　１時間　２２９ １０　１時間　２．４５ １００１時間　２３４ ’、（Ｄ−、＋１ｘ−ＤＡ−５ｅｔ、’、　−５，１ｌａ−７，ｄｅｓ−２２： 　−ｃｃｔ　（５−３２：１　１時間　０３２ １０　１時間　１．４２ １００１時間　１．８２ （（ＣＨＸ−５ｅａ）　−５，Ａｌ１−７．　ｄｅｓ−２２ｊ　−ｃｃＴ　（５ −３２）１　１時間　０３２ ｉ（Ｏｉｔ７ｉ−Ｓｅｔ）　−５，，４１＝−７，’−ｃｃＴｆ５−３２）１　 １時間　０．４７ １０　１時間　０．６０ １００１時間　１．１５ （ｆＡＤＡ−５ｕ）−５，Ａｌｔ−７］−ｃＣＴ（５−３２）　１　１時間　０ ．１９３　１時間　０．３３ １０　１時間　２８３ １　３時間　０．１４ ３　３時間　０．２１ １０　３時間　２．９８ ＩＱ　６時間　２．１０ 、：Ｌｅａ−Ｌ　１２：　−ｈＣＴ　Ｏ，１１時間　０．３７０３１時間　１． １７ １　１時間　２．０５ ３　１時間　２．１３ １０　１時間　２．８１ １０　１時間　１９８ ［Ｌｅｕ−８，１２，１６ｉ　−ｈＣＴ　Ｏ，ｌ　１時間　００３Ｑ、３　１時 間　０９２ １　１時間　１９２ ３　１時間　２．１２ １０　ｉ時間　３．９５ １０　１時間　２．ＱＱ ！０　６時間　１７２ ｉ（Ｌｅａ−Ａｌａ−３ｕ−ｂコ４ｅ＊づｅ＋−Ｔｈｒ！２−Ｌ７＋７．　Ｌｅ ｄ８：　−ｔｃＴ　（？−３２ｉ　０．０１　１時間　０．６４０．０３　１時 間　Ｑ、８２ ０．１１時間　１８４ ０．３２１時間　２．６４ １．０１時間　３１９ ｊ（ＣｈＸ−５ｅｔ−Ｔｈｒ）２−ｔ４ｓ”　、　Ｌｒａ８；−５ｃＴ（７−３ １０，０１１時間　Ｏ１！３ ０．０３１時間　・〕２４ ０．１１時間　３．３９ ０３２１時間　１′Ｊ９ １．０　１時間　、２．４２ （Ｌｕ’　）　−ｅＣＴ　０．０１　１時間　０．１５０１２　１時間　１．０ ２ ０．１１時間　１．８２ １．０１時間　２．９０ ［（Ｌｔｕ−Ｃｙｓ）’、Ｌｅｕ８１−ｅＣＴ　１１．１　１時間　Ｇ、３３０ ．０３　１時間　１．２４ ０．１１時間　２．３４ １．０１時間　３．３５ ０、［ｌｌ　１時間　Ｇ、Ｏ５ ０，０３１時間　０．１７ ０．１１時間　１．４８ ０．３２　１時間　２．６８ 人間Ｃ７１，０１時間　Ｇ、０２ ３．２１時間　０．５４ ＩＱ、０　１時間　１．５９ 鳥ＣＴ　Ｏ，０１１時間　０．１８ ０．０３　１時間　０２２ ０１１時間　１．３９ ０３２１時間　２．７６ 鮭ＣＴ　Ｏ，０１１時間　つ８２ ００３１時間　１．５２ ０１１時間　２４０ ｃＣＴ　鳥カルシトニン ｈＣＴ：人間カルシトニン ｅＣＴ：鰻カルシトニン 例３８ 低カルシウム血症ペプチドの鼻による生物学的利用率式Ｉのペプチドは鼻腔内に 投与されると、動物において低カルシウム血症効果を示す。その生物学的利用率 を定めるために、鼻腔内に投与された低カルシウム血症ペプチドの影響は、以下 で示すように、静脈注入されたものと比べられた。乾燥粉末３０ｍｇ当り１００ ＩＵを含む鼻による粉末製剤は、実賀的に米国特許第４，６１３，５００号で示 されるように調製された。ペプチドはウサギに対して、２．８ＩＵ／ｋｇの用量 で鼻腔内に、または１．７５ＩＵ／ｋｇの用量で静脈内に与えられた。血液サン プルはペプチドの投与前および投与後０．５．１．２．４、および６時間後採ら れ、血清カルシウムレベルが定められた。鼻腔内および静脈による投与後の低カ ルシウム血症効果（０ないし６時間）の曲線による領域の比率が計算された。

混合物　鼻腔対静脈の生物学的利用率 〔Ｌ、ｕａ、１２，１４１−ｈＣＴ２８　、０　％（Ｉａｕ’）　−＠ＣＴ　２ ８　、６％（（Ｉ４ｕ−Ｃ’／！Ｉ）’、ＸＡｕ’）−ａｃ’ｒ　コア、５ｔ（ （Ｃｈｘ−５ａｒ−Ｔｈｒ）ｚ−Ｌ”／Ｓ’ｔ　シｕ”　］　−ａｃ’ｒ　１７ −４　Ｎ様々なペプチド類似体、カルシトニン類似体およびほかの生物活性ペプ チド類似体のものを含めて、これらは同様の結果を得るために例において置換で きることは明らかである。

したがって、本発明はその精神または本質的特性から逸脱することなくほかの特 定の形で実施されてもよい。示された実施例はあらゆる点において例示だけであ り、制限されるものではなく、したがって発明の範囲は前の説明よりむしろ添付 のクレームによって示される。クレームの法的等価の意味および範囲内にあるす べての変形は、その範囲内において包含される。

国際調査報告 二一一一一＾−〇−”＝　ｒ／１ＫＯｎ／ｎＡ’ｌ＜ｆｆＰＣＴ／＋ＪＳ９０１ ０６１５２ Ｘｔｔａｃｈｍｅｎｔ　ｔｏ　ＰＣＴ　Ｔｅ１ｅｐｈｏｎｅ　Ｍｅｍｏｒａｎｄ ｕｌ＋＋Ｄｅｔ、ａｊｌｅｄ　Ｒｅａｓｏｎｓ　ｆｏｒ　Ｈｏ１ｄ’ｎ　ａｃｋ 　ｏ　ＩＩ　’ｔ、ｖ　ｏｆ　Ｉｎｖｅｎｔｌｏｎ：ＰＣＴ、Ｔ”：ＣＩＯＩ０ ６３５２

Claims (47)

【特許請求の範囲】
1. １．式 ▲数式、化学式、表等があります▼ を有する低カルシウム血症ペプチドであって、Ｙはコハク酸、グルタル酸、Ｌ− アスパラギン酸、Ｄ−アスパラギン酸、Ｌ−グルタミン酸、Ｄ−グルタミン酸を 含むグループから選択されたジカルボン酸であり、またはその部分がなく、 Ｒ１は、Ｈ、Ｈ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−、Ｈ２Ｎ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−、また はＺ−ＣＯ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−（ＺはＨＯ−、コレステロール、アダマンチ ルアルコール、または芳香族アルコールであり）、Ｌ−トレオニンまたはＤ−ト レオニン、Ｌ−アラニン、Ｄ−アラニン、Ｌ−ロイシン、Ｄ−ロイシン、シクロ プロパンカルボキシル（ＣＰＲＣ）、シクロペンタンカルボキシル（ＣＰＣ）シ クロヘキサンカルボキシル（ＣＨＣ）、シクロヘキシルプロピオニル（ＣＨＸ） 、シクロヘプタンカルボキシル（ＣＨＰＴ）、アダマンタンアセチル（ＡＤＭ） 、アダマンタンカルボキシル（ＡＤＣ）、または芳香族もしくは複素環式カルボ ン酸のアシル基であり、 Ｒ２は１−アミノ−１−シクロプロパンカルボキシル（ＡＣＰＲ）、１−アミノ −１−シクロペンタンカルボキシル（ＡＣＰＣ）、１−アミノ−１−シクロヘキ サンカルボキシル（ＡＣＨＣ）、１−アミノ−１−シクロヘプタンカルボキシル （ＡＣＨＰ）、その部分なし、またはＲ１と同じであり、 Ａ１およびＡ７は同じまたは異なり、かつ独立してＬ−システイン、Ｌ−トレオ ニン、Ｄ−トレオニン、Ｌ−チロシン、Ｄ−チロシン、Ｌ−アラニン、Ｄ−アラ ニン、Ｌ−ロイシン、Ｄ−ロイシン、または２−アミノイソ酪酸であり、または Ａ１およびＡ７は異なり、かつＡ１はメルカプトプロピオン酸、メルカプト酢酸 、Ｈ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−、１−アミノ−１−シクロプロパンカルボキシル、 １−アミノ−１−シクロペンタンカルボキシル、１−アミノ−１−シクロヘキサ ンカルボキシル、１−アミノ−１−シクロヘプタンカルボキシル、またはその部 分なしであり、またはＡ１およびＡ７は異なり、かつコハク酸、グルタル酸、Ｌ −アスパラギン酸、Ｄ−アスパラギン酸、Ｌ−グルタミン酸、およびＤ−グルタ ミン酸からなるグループから選択されたジアミノ酸またはジカルボン酸であり、 但しＡ７はコハク酸ではなく、 Ａ２はグリシン、Ｌ−アラニン、Ｌ−セリン、またはその部分なしであり、 Ａ３はＬ−アスパラギン、Ｌ−セリン、またはその部分なしであり、 Ａ４はＬ−ロイシンまたはその部分なしであり、ｍは１または２であり、 ｎは１ないし２２であり、 ｘＣＴは少なくとも残基９−１１、１３−１５、１７、１８、２３−２６、およ び２８−３２においてマウス、鮭、鰻、鳥類、豚、牛、羊、またはヒトのカルシ トニンに対応するアミノ酸配列であり、但し配列（Ｒ１−Ｒ２−Ａ１−Ａ２−Ａ ３−Ａ４−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ）ｍ−Ａ７がある種の天然カルシトニンの対応する配 列と同じ場合、ｘＣＴ（８−３２）は前記カルシトニンの対応する配列と同じで はなく、または薬事的に許容される場類であり、Ａ１およびＡ７が同じでありか つアラニンであるのなら、Ｒ２は存在しかつＨではないことを条件とする、ペプ チド。
2. ２．Ａ７がリジンである、請求項１に記載のペプチド。
3. ３．位置８、１２、１６、２１、または２７の少なくとも１個のアミノ酸残基は 、Ｌ−ロイシンによって置換される、脊椎動物のカルシトニンまたはカルシトニ ン関連遺伝子ペプチド。
4. ４．位置８、１２、１６、２１、または２７の少なくとも１個のアミノ酸残基は 、Ｌ−ロイシンによって置換される、請求項１に記載のペプチド。
5. ５．（Ｌｅｕ−８）−ｘＣＴ；（Ｌｅｕ−８，１２）−ｈＣＴ； Ｌｃｕ−８，１２，１６）−ｈＣＴ；（Ｌｅｕ−８，１２，１６，２７）−ｈＣ Ｔ：Ｄ−Ａｌａ−（（Ｌｅｕ−８，１２，１６）−ｈＣＴ；（（１２−アミノド デカノイル−Ｓｅｒ）−５，Ａｌａ−７，Ｌｅｕ　８，１２）−ｘＣＴ（５−３ ２）；および（（１２−アミノドデカノイル−Ｓｅｒ）−５，Ａｌａ−７，Ｌｅ ｕ８，１２，１６）−ｘＣＴ（５−３２）からなるグループから選ばれた、請求 項４に記載のペプチド。
6. ６．ｘＣＴは人間、鮭、鰻または鳥のカルシトニンアミノ酸配列である、請求項 ４に記載のペプチド。
7. ７．さらに、位置０でロイシン残基を含む、請求項４に記載のペプチド。
8. ８．Ｌｅｕ（Ｌｅｕ−８）−ｘＣＴ；Ｌｅｕ（Ｌｅｕ８，１２）−ｈＣＴ；およ びＬｅｕ−（Ｌｅｕ−８，１２，１６）−ｈＣＴからなるグループから選はれた 、請求項７に記載のペプチド。
9. ９．ｘＣＴ（８−３２）はｄｏｓ（２２）−ｘＣＴ（８−３２）、またはｄｅｓ （１９−２２）−ｘＣＴ（８−３２）である、請求項１に記載のペプチド。
10. １０．（（ＣＨＸ−Ｓｅｒ）−５，Ａｌａ−７，ｄｅｓ（２２））−ｘＣＴ（５ −３２）： （（ＣＨＸ−Ｓｅｒ）−５，Ａｌａ−７，ｄｅｓ（１９−２２））−ｘＣＴ（５ −３２）； （（１２−アミノドデカノイル−Ｓｅｒ）−５，Ａｌａ−７，ｄｅｓ（２２）） −ｘＣＴ（５−３２）；および（（１２−アミノドデカノイル−Ｓｅｒ）−５， Ａｌａ−７，ｄｅｓ（１９−２２））−ｘＣＴ（５−３２）からなるグループか ら選ばれた、請求項８に記載のペプチド。
11. １１．Ａ７はＬ−システインであり、Ａ１はＬ−システイン、メルカプトプロピ オン酸、またはメルカプト酢酸であり、Ａ１およびＡ７はジスルフィド架橋によ って結合される、請求項１に記載のペプチド。
12. １２．Ａ１およびＡ７は異なり、かつジカルボン酸またはジアミノ酸であり、ジ アミノ酸の末端アミノ基とジカルボン酸の末端カルボキシルとの間でアミド結合 によって結合される、請求項１に記載のペプチド。
13. １３． 【配列があります】 および 【配列があります】 からなるグループから選択された、請求項１２に記載のペプチド。
14. １４．ｍ＝２であり、 【配列があります】 および （（Ｃｈｘ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ）２−Ｌｙｓ７）−ｘＣＴからなるグループから選 はれた、請求項１に記載のペプチド。
15. １５．ｍ＝２であり、 【配列があります】 からなるグループから選択された、請求項１に記載のペプチド。
16. １６．Ｙはジカルボン酸であり、 【配列があります】からなるグループから選択された、請求項１に記載のペプチ ド。
17. １７．（（１２−アミノドデカノイル−Ｓｅｒ）−５，Ａｌａ−７）ｘＣＴ（５ −３２）または（（Ｄ−Ａｌａ−１２−アミノドデカノイル−Ｓｃｒ）−５．Ａ ｌａ−７）ｘＣＴである、請求項１記載のペプチド。
18. １８． 【配列があります】 のアミノ酸配列を有するヒトのカルシトニンペプチドの類似体。
19. １９． 【配列があります】 のアミノ酸配列を有するヒトのカルシトニンペプチドの類似体。
20. ２０．（Ｒ−１ないしＲ−６）２−Ｌｙｓ−７）−ｘＣＴの分枝されたカルシト ニンペプチドを調製するための方法であって、Ｒ１ないしＲ６はペプチド配列に おける残基１ないし６を表わし、ｘＣＴは脊椎動物カルシトニンにおける残りの ペプチド配列を表わし、 （ａ）第１のアミノ酸のアミノ基を第２のアミノ酸のカルボキシル基と結合させ てジペプチドを形成するステップと、 （ｂ）リジン残基が位置７を占める選択された脊椎動物カルシトニンペプチド配 列を得るために、連続するアミノ酸との結合を繰り返すステップと、 （ｃ）リジン残基のアルファおよびエプシロンアミノ基の両方をＲ６残基のカル ボキシル基と結合させるステップと、 （ｄ）全部の示された配列が合成されるまで、アミノ酸のペプチド配列への結合 を繰り返すステップとを含む方法。
21. ２１．合成された分枝カルシトニンペプチドを適する溶媒において無水コハク酸 と接触させ、それによって前記カルシトニンペプチドの末端残基のアミノ基が、 コハク酸分子のカルボキシル基に結合されて環状構造を形成するステップをさら に含む、請求項２０に記載の方法。
22. ２２．薬事的に許容される担体と組合わせて、請求項１に記載の構造を有する、 有効に血液カルシウムを減少する量のペプチドを含む製薬組成物。
23. ２３．哺乳類において血清カルシウムレベルを減じるための製薬的製造のための 、クレーム１ないし１９のいずれかに記載の構造を有するカルシトニンペプチド 類似体の用途。
24. ２４．哺乳類における骨吸収を減じるまたはなくすために、製薬的製造のための 、クレーム１ないし１９のいずれかに記載の構造を有する合成カルシトニンの用 途。
25. ２５．ジスルフィド環状ペプチドの類似体であって、ジスルフィド結合を形成す る環状ペプチドのシステイン残基組のメンバーは、互いにアミド結合を形成する ことができる有効な官能基を有する残基によって置換される、類似体。
26. ２６．前記ジスルフィド環状ペプチドのシステイン基の一つはジアミノ酸と置換 され、別のものはジカルボン酸と置換される、請求項２５に記載の類似体。
27. ２７．前記ジアミノ酸はリジンまたはオルニチンである、請求項２６に記載の類 似体。
28. ２８．前記ジカルボン酸はグルタミン酸またはアスパラギン酸である、請求項２ ６に記載の類似体。
29. ２９．環状ペプチドのＮ末端システインはコハク酸によって置換される、請求項 ２６に記載の類似体。
30. ３０．ヒトのアミリン、ネズミのアミリン、ヒト、ネズミおよびニワトリ起源の 心房性ナトリウム排出性因子、脊椎動物カルシトニン、ヒト、ネズミおよびニワ トリ起源のカルシトニン遺伝子関連ペプチド、オキシトシン、ソマトスタチン、 ソマトスタチン−２８、ならびにバソプレッシンからなるペプチドのグループか ら選択された、請求項２５に記載の合成類似体。
31. ３１． 【配列があります】 または対応するアミドの構造を有するヒトアミリンの環状類似体。
32. ３２． 【配列があります】 の構造を有する黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）作動体（（Ｄ−β− ナフチルアラニン）６−ＬＨＲＨの環状類似体。
33. ３３． 【配列があります】 の構造を有する黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）抗体（（Ｄ−Ｐｈｅ ）２，（Ｄ−β−ナフチルアラニン）６−ＬＨＲＨ）の環状類似体。
34. ３４． 【配列があります】 の構造を有する利尿ホルモンバソプレッシンの環状類似体。
35. ３５． 【配列があります】 の構造を有するペプチドホルモンオキシトシンの環状類似体。
36. ３６． 【配列があります】 の構造を有するソマトスタチンの環状類似体。
37. ３７． 【配列があります】 の構造を有するヒト心房性ナトリウム排出性ペプチドの新規な環状アナログ。
38. ３８． 【配列があります】 の構造を有するヒトのカルシトニン遺伝子関連ペプチドの類似体。
39. ３９．高分子支持体の段階的鎖伸長によって環状ペプチドを合成するための方法 であって、 ジアミノカルボン酸をペプチド合成の間ペプチド鎖における選択された位置に入 れるステップを含み、前記ジアミノカルボン酸はアルファアミノ基および側鎖ア ミノ基において異なる保護基を有し、 前記ジアミノカルボン酸のアルファアミノ基または側鎖アミノ基のいずれかから 保護基を選択的に取除くステップと、 １ないし５０の付加的アミノ酸からペプチド鎖に順次に導入することによって合 成を続けて、保護アルファアミノ基を有する末端アミノ酸で終わるステップと、 前記ジアミノカルボン酸のアルファアミノ基または側鎖アミノ基のいずれかから 残りの保護基を選択的に取除くステップと、 脱保護基にアミノジカルボン酸を結合するステップとを含み、前記アミノジカル ボン酸はアルファカルボキシル基が保護され、 前記末端アミノ酸のアルファアミノ基および前記アミノジカルボン酸のアルファ カルボキシル基を脱保護して、前記基を結合するステップとを含む、方法。
40. ４０．高分子支持体の段階的鎖伸長によって環状ペプチドを合成するための方法 であって、 ペプチド合成の間、アミノジカルボン酸をペプチド鎖における選択された位置に 入れるステップを含み、前記アミノジカルボン酸は側鎖カルボキシル基に保護基 を有し、１ないし５０の付加的アミノ酸からペプチド鎖に順次組み込むことによ って合成を続け、ジアミノ酸で終るステップを含み、前記ジアミノ酸は保護され た側鎖アミノ基を有し、 前記アミノジカルボン酸および前記ジアミノ酸から側鎖保護基を取除き、前記基 を結合するステップとを含む、方法。
41. ４１．前記ジアミノカルボン酸はリジンまたはオルニチンである、請求項３９ま たは４０の方法。
42. ４２．前記アミノジカルボン酸はアスパラギン酸またはグルタミン酸である、請 求項３９または４０の方法。
43. ４３．ペプチド鎖に少なくとも１個の付加的アミノ酸を導入するステップをさら に含む、請求項３９または４０の方法。
44. ４４．クレーム３９から４３のいずれかの方法によって作られた環状ペプチド。
45. ４５．クレーム１から１９、またはクレーム２５から３８のいずれかのペプチド の生物学的に活性な断片。
46. ４６．前記ペプチドの内因性プロテアーゼの作用によって発生される、請求項４ ５の生物学的に活性な断片。
47. ４７．クレーム１から１９のいずれかに記載される構造を有する有効に血液カル シウムを減少する量のペプチドを含む製薬的組成物の調製に向けられる、請求項 ２０に記載の方法。