JPH0549279B2 - - Google Patents
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- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
(産業上の利用分野)
本発明は、リポプロテインリパーゼ及び/又は
コレステロールエステラーゼまたはコレステロー
ルオキシダーゼを含む酵素類と界面活性剤を含む
脂質測定用酵素含有組成物に関する。更に詳しく
は、生体成分中の遊離グリセロールを消去する中
性脂肪測定または遊離コレステロール測定などの
脂質測定に際し、誤差のない正確な測定を可能と
する酵素含有組成物に関するものである。 (従来の技術) シングルマルチ方式を採用している自動分析機
の場合、反応容器は1回目の反応及び測定を終了
後、水で洗浄され、再び2回目の反応に使用され
るものである。大半の分析項目では、この水洗に
よつて1回目の反応液はきれいに洗い落され、2
回目の反応に影響を及ぼすことはない。しかし、
例えば総コレステロール測定後に遊離コレステロ
ールを測定する場合、大きな正誤差を生ずること
が既に報告されている(特開昭58−41357号公報、
特開昭58−67197号公報)。この正誤差をなくすた
めの従来技術として、遊離コレステロール測定法
において脂質分解酵素の1つであるコレステロー
ルエステラーゼの活性を阻害するオレイン酸ナト
リウム、パルミチン酸ナトリウム等の脂肪酸アル
カリ金属塩を分析用試薬に共存させる方法がある
(特開昭58−41357号公報)。 他の従来技術として遊離型コレステロール測定
試薬にコレステロールエステラーゼ阻害剤である
界面活性剤トリトンX−405或いはフツ化ナトリ
ウム、ヨウド酢酸を共存させる方法がある(特開
昭58−67197号公報)。 (発明の解決しようとする問題点) 本発明者らは、コレステロールエステラーゼを
使用して総コレステロール測定した反応容器を用
いて、その後に遊離コレステロールを測定すると
正誤差を生じることを検討した後、リポプロテイ
ンリパーゼを用いて中性脂肪を測定した後に、同
じ容器で遊離コレステロールを測定すると、正誤
差を生じることを見いだした。さらに遊離グリセ
ロールを消去する中性脂肪の測定においてもリポ
プロテインリパーゼおよび/又はコレステロール
エステラーゼのキヤリーオーバー現象がみられ、
この場合負の誤差を与えることが判明した。そこ
で、これらの分析誤差を解消を測るため従来技術
の検討を行つた。すなわち、脂肪酸アルカリ金属
塩を添加すると充分な吸着阻止が見られなかつ
た。一方、界面活性剤トリトンX−405を添加す
ると脂肪酸アルカリ金属塩より吸着阻止はすぐれ
るが、目的とするトリグリセライドを測定する場
合負誤差を生ずる結果となつた。 (問題点を解決するための手段) 本発明者らは、吸着現象による分析誤差の解消
を計るために、さらに鋭意検討を重ねた結果、測
定系の活性値に悪影響を及ぼさないで、しかも合
成樹脂製反応容器への吸着を阻止する、即ち誤差
のない正確な測定値が得られる点で、従来技術よ
り極めて効果的な特殊構造を有する界面活性剤を
含む脂質測定用の酵素含有組成物を見い出し、本
発明に至つた。 すなわち本発明はリポプロテインリパーゼ及
び/又はコレステロールエステラーゼと下記一般
式で表わされる界面活性剤の少なくとも一種を含
有する脂質測定用酵素含有組成物またはコレステ
ロールオキシダーゼと下記一般式で表される界面
活性剤の少なくとも1種を含有する脂質測定用酵
素含有組成物である。 (式中、A:炭素原子数1〜18のアルキル基、
B:アリール基またはアラルキル基、−(RO)n
−:ポリエチレングリコール残基、l:0又は
1、m:1〜4、n:2〜60を示す。) 本発明に使用されるリポプロテインリパーゼ及
び/又はコレステロールエステラーゼとは一般に
中性脂肪または総コレステロール測定に用いる酵
素である。 本発明の脂質測定用酵素含有組成物は、例えば
遊離グリセロールを消去する中性脂肪測定のため
の酵素含有組成物または遊離コレステロール測定
のための酵素含有組成物であつて、他の酵素又は
発色剤等を含んでいてもよい。例えば中性脂肪を
酵素法で測定する際に使用される種々の酵素及び
試薬として、少なくともリポプロテインリパーゼ
および/又はコレステロールエステラーゼを含
み、更にはグリセロキナーゼ、グリセロリン酸オ
キシダーゼ、ペルオキシダーゼ、グリセロール脱
水素酵素、ジアホラーゼ等の酵素類、マグネシウ
ム、鉄等の金属イオン、4−アミノアンチピリン
(4AA)、N−エチル−N(2−ヒドロキシ3−ス
ルホプロピル)−m−アニシジン(ESPAS)等の
発色基質類、アデノシン5′−トリホスフエイト
(ATP)、ニコチンアミドアデノシンヌクレオチ
ド(NAD)等の補酵素類、リン酸、グツドバツ
フアー等緩衝液等が含まれるが、必ずしもこれら
に限定されるものではない。 更に、場合によつては難溶性の脂質を可溶化す
るためのツイーン20(ポリエチレングリコールソ
ルビタンエステル)のような通常使用される界面
活性剤も含まれる。 ここで使用されるリポプロテインリパーゼはそ
の起源を限定されるものではなく、例えばシユー
ドモナス属、ムコール属、ストレプトマイセス
属、セラチア属、エアロモナス属、バチルス属、
クロモバクテリウム属等に属する微生物で、生産
されるものを含む。 遊離グリセロールを消去する中性脂肪測定法
は、例えばグリセロキナーゼ、グリセロリン酸オ
キシダーゼ、ペルオキシダーゼ、ATP、消去剤
(例えばパラクレゾールなど)を含む第一試薬を
試料に作用させて、試料中の遊離グリセロールを
消去し、次いでリポプロテインリパーゼまたはコ
レステロールエステラーゼ、カツプラー、4−ア
ミノアンチピリンおよび本発明の界面活性剤を含
む第二試薬を反応させ、試料中の中性脂肪を測定
する方法がある。 次にコレステロールオキシダーゼを含む酵素類
とは酵素法で総コレステロール或いは遊離コレス
テロールを測定する酵素及び試薬類を含み、例え
ばコレステロールエステラーゼ、コレステロール
オキシダーゼ、パーオキシダーゼ、4−アミノア
ンチピリン、リン酸バツフアー、N−エチル−N
−(2−ヒドロキシ−3−スルホプロピル)−m−
トルイジン等があり、これらに限定されるもので
はない。更にコレステロールオキシダーゼの起
源、製造法及び精製法には特に限定されるもので
はない。 本発明に用いる界面活性剤としては、下記一般
式で表わされる化合物である。 (式中、A、B、R、l、m、nは前述の通り。) 核置換基AおよびBとしては次のものが挙げら
れる。 A:炭素原子数1〜18のアルキル基、例えばメチ
ル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘ
キシル、ヘプチル、オクチル、イソオクチル、
ノニル、デシル、ドデシル、ミリスチル、パル
ミチル、ステアリル、オレイルなど。 アラルキル…ベンジル、β−フエニルエチ
ル、下記一般式()で示される基など。 (式中、R:炭素原子数1〜18のアルキル、m=
1〜3、n=1〜16) 本発明で用いる界面活性剤としては、例えばポ
リオキシエチレン−o−フエニルフエニルエーテ
ル(n=20)、ポリオキシエチレン−2−フエニ
ル−4−オクチルフエニルエーテル(n=20)、
ポリオキシエチレン4,5,6−トリベンジル−
2−フエニルフエニルエーテル(n=20)、ポリ
オキシエチレン−2−スチリルフエニルエーテル
(n=30)、ポリオキシエチレン2,5−ジフエニ
ル−4−ノニルフエニルエーテル(n=10)、ポ
リオキエチレン−2−ナフチル−4−イソオクチ
ルフエニルエーテル(n=40)、ポリオキシエチ
レン−2−ナフチル−4−オクチルフエニルエー
テル(n=10)、ポリオキシエチレン−2−フエ
ニル−4−ノニルフエニルエーテル(n=20)、
ポリオキシエチレン−o−ベンジルフエニルエー
テル(n=30)等があるが、これらに限定される
ものではない。これらのノニオン界面活性剤の
HLB(親水性、疎水性のバランス値)は、特に限
定するものではないが、特に好ましい範囲は
HLB9〜17である。しかし、それ以外の範囲でも
他の界面活性剤との組合せで十分なる効果が得ら
れる。 該界面活性剤の添加濃度は水性組成物中
0.01W/V%〜10%で、好ましくは0.1W/V%
〜3W/V%である。又、リポプロテインリパー
ゼ又はコレステロールエステラーゼまたはコレス
テロールオキシダーゼ等の酵素の最終仕上げ時に
添加する場合は乾性組成中の該酵素重量に対して
0.1〜1000倍が好ましい範囲であるが、添加方法
によつて大きく異なるため、この範囲に限定する
ものではない。 界面活性剤の配合方法としては脂質測定用の水
性組成物に添加する方法と或いはリポプロテイン
リパーゼ又はコレステロールエステラーゼまたは
コレステロールオキシダーゼ等の製造の最終段階
である凍結乾燥前の酵素液に添加する方法があ
る。 (実施例) 次に本発明を実施例により説明する。 実施例 1 透明なメタクリル酸樹脂を反応容器とする、多
項目選択機能をもつシングルマルチ方式の生化学
自動分析機を用いて、グリセロール消去系の中性
脂肪を測定した。この装置の測定条件は、反応容
器が間歇的に移送され、その停止時に第1の場所
でサンプラーから血清試料を10ml添加し、第2の
場所で300mlの第1表に示した第1試薬を添加し
て、所定時間反応させて遊離グリセロールを消去
し、第3の場所で、第2試薬を添加して、脂質の
水解反応及び発色系へ導く酵素反応を行わせ、第
4の場所で、該反応容器に光を照射して、反応液
の吸光度を測定して第1回目の測定を終了した。
反応終了後、反応容器内の反応液は廃棄され、水
洗され第1の場所に戻つて第2回目の測定に使用
した。ここで、同一検体で同一反応容器を用い
て、吸光度を測定し、中性脂肪の標準溶液から、
その含有量を算出した。界面活性剤としてポリオ
キシエチレン−2−フエニル−4−ノニルフエニ
ルエーテル(n=20、HLB15.0)を用いた本発
明の酵素含有組成物を第1表に示す。又、比較の
ため、無添加系、ツイーン20(後記)添加系及び
前述の特開昭58−67197号公報に記載されるトリ
トンX−405(後記)添加系も実施し、それらの結
果を第2表に示した。
コレステロールエステラーゼまたはコレステロー
ルオキシダーゼを含む酵素類と界面活性剤を含む
脂質測定用酵素含有組成物に関する。更に詳しく
は、生体成分中の遊離グリセロールを消去する中
性脂肪測定または遊離コレステロール測定などの
脂質測定に際し、誤差のない正確な測定を可能と
する酵素含有組成物に関するものである。 (従来の技術) シングルマルチ方式を採用している自動分析機
の場合、反応容器は1回目の反応及び測定を終了
後、水で洗浄され、再び2回目の反応に使用され
るものである。大半の分析項目では、この水洗に
よつて1回目の反応液はきれいに洗い落され、2
回目の反応に影響を及ぼすことはない。しかし、
例えば総コレステロール測定後に遊離コレステロ
ールを測定する場合、大きな正誤差を生ずること
が既に報告されている(特開昭58−41357号公報、
特開昭58−67197号公報)。この正誤差をなくすた
めの従来技術として、遊離コレステロール測定法
において脂質分解酵素の1つであるコレステロー
ルエステラーゼの活性を阻害するオレイン酸ナト
リウム、パルミチン酸ナトリウム等の脂肪酸アル
カリ金属塩を分析用試薬に共存させる方法がある
(特開昭58−41357号公報)。 他の従来技術として遊離型コレステロール測定
試薬にコレステロールエステラーゼ阻害剤である
界面活性剤トリトンX−405或いはフツ化ナトリ
ウム、ヨウド酢酸を共存させる方法がある(特開
昭58−67197号公報)。 (発明の解決しようとする問題点) 本発明者らは、コレステロールエステラーゼを
使用して総コレステロール測定した反応容器を用
いて、その後に遊離コレステロールを測定すると
正誤差を生じることを検討した後、リポプロテイ
ンリパーゼを用いて中性脂肪を測定した後に、同
じ容器で遊離コレステロールを測定すると、正誤
差を生じることを見いだした。さらに遊離グリセ
ロールを消去する中性脂肪の測定においてもリポ
プロテインリパーゼおよび/又はコレステロール
エステラーゼのキヤリーオーバー現象がみられ、
この場合負の誤差を与えることが判明した。そこ
で、これらの分析誤差を解消を測るため従来技術
の検討を行つた。すなわち、脂肪酸アルカリ金属
塩を添加すると充分な吸着阻止が見られなかつ
た。一方、界面活性剤トリトンX−405を添加す
ると脂肪酸アルカリ金属塩より吸着阻止はすぐれ
るが、目的とするトリグリセライドを測定する場
合負誤差を生ずる結果となつた。 (問題点を解決するための手段) 本発明者らは、吸着現象による分析誤差の解消
を計るために、さらに鋭意検討を重ねた結果、測
定系の活性値に悪影響を及ぼさないで、しかも合
成樹脂製反応容器への吸着を阻止する、即ち誤差
のない正確な測定値が得られる点で、従来技術よ
り極めて効果的な特殊構造を有する界面活性剤を
含む脂質測定用の酵素含有組成物を見い出し、本
発明に至つた。 すなわち本発明はリポプロテインリパーゼ及
び/又はコレステロールエステラーゼと下記一般
式で表わされる界面活性剤の少なくとも一種を含
有する脂質測定用酵素含有組成物またはコレステ
ロールオキシダーゼと下記一般式で表される界面
活性剤の少なくとも1種を含有する脂質測定用酵
素含有組成物である。 (式中、A:炭素原子数1〜18のアルキル基、
B:アリール基またはアラルキル基、−(RO)n
−:ポリエチレングリコール残基、l:0又は
1、m:1〜4、n:2〜60を示す。) 本発明に使用されるリポプロテインリパーゼ及
び/又はコレステロールエステラーゼとは一般に
中性脂肪または総コレステロール測定に用いる酵
素である。 本発明の脂質測定用酵素含有組成物は、例えば
遊離グリセロールを消去する中性脂肪測定のため
の酵素含有組成物または遊離コレステロール測定
のための酵素含有組成物であつて、他の酵素又は
発色剤等を含んでいてもよい。例えば中性脂肪を
酵素法で測定する際に使用される種々の酵素及び
試薬として、少なくともリポプロテインリパーゼ
および/又はコレステロールエステラーゼを含
み、更にはグリセロキナーゼ、グリセロリン酸オ
キシダーゼ、ペルオキシダーゼ、グリセロール脱
水素酵素、ジアホラーゼ等の酵素類、マグネシウ
ム、鉄等の金属イオン、4−アミノアンチピリン
(4AA)、N−エチル−N(2−ヒドロキシ3−ス
ルホプロピル)−m−アニシジン(ESPAS)等の
発色基質類、アデノシン5′−トリホスフエイト
(ATP)、ニコチンアミドアデノシンヌクレオチ
ド(NAD)等の補酵素類、リン酸、グツドバツ
フアー等緩衝液等が含まれるが、必ずしもこれら
に限定されるものではない。 更に、場合によつては難溶性の脂質を可溶化す
るためのツイーン20(ポリエチレングリコールソ
ルビタンエステル)のような通常使用される界面
活性剤も含まれる。 ここで使用されるリポプロテインリパーゼはそ
の起源を限定されるものではなく、例えばシユー
ドモナス属、ムコール属、ストレプトマイセス
属、セラチア属、エアロモナス属、バチルス属、
クロモバクテリウム属等に属する微生物で、生産
されるものを含む。 遊離グリセロールを消去する中性脂肪測定法
は、例えばグリセロキナーゼ、グリセロリン酸オ
キシダーゼ、ペルオキシダーゼ、ATP、消去剤
(例えばパラクレゾールなど)を含む第一試薬を
試料に作用させて、試料中の遊離グリセロールを
消去し、次いでリポプロテインリパーゼまたはコ
レステロールエステラーゼ、カツプラー、4−ア
ミノアンチピリンおよび本発明の界面活性剤を含
む第二試薬を反応させ、試料中の中性脂肪を測定
する方法がある。 次にコレステロールオキシダーゼを含む酵素類
とは酵素法で総コレステロール或いは遊離コレス
テロールを測定する酵素及び試薬類を含み、例え
ばコレステロールエステラーゼ、コレステロール
オキシダーゼ、パーオキシダーゼ、4−アミノア
ンチピリン、リン酸バツフアー、N−エチル−N
−(2−ヒドロキシ−3−スルホプロピル)−m−
トルイジン等があり、これらに限定されるもので
はない。更にコレステロールオキシダーゼの起
源、製造法及び精製法には特に限定されるもので
はない。 本発明に用いる界面活性剤としては、下記一般
式で表わされる化合物である。 (式中、A、B、R、l、m、nは前述の通り。) 核置換基AおよびBとしては次のものが挙げら
れる。 A:炭素原子数1〜18のアルキル基、例えばメチ
ル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘ
キシル、ヘプチル、オクチル、イソオクチル、
ノニル、デシル、ドデシル、ミリスチル、パル
ミチル、ステアリル、オレイルなど。 アラルキル…ベンジル、β−フエニルエチ
ル、下記一般式()で示される基など。 (式中、R:炭素原子数1〜18のアルキル、m=
1〜3、n=1〜16) 本発明で用いる界面活性剤としては、例えばポ
リオキシエチレン−o−フエニルフエニルエーテ
ル(n=20)、ポリオキシエチレン−2−フエニ
ル−4−オクチルフエニルエーテル(n=20)、
ポリオキシエチレン4,5,6−トリベンジル−
2−フエニルフエニルエーテル(n=20)、ポリ
オキシエチレン−2−スチリルフエニルエーテル
(n=30)、ポリオキシエチレン2,5−ジフエニ
ル−4−ノニルフエニルエーテル(n=10)、ポ
リオキエチレン−2−ナフチル−4−イソオクチ
ルフエニルエーテル(n=40)、ポリオキシエチ
レン−2−ナフチル−4−オクチルフエニルエー
テル(n=10)、ポリオキシエチレン−2−フエ
ニル−4−ノニルフエニルエーテル(n=20)、
ポリオキシエチレン−o−ベンジルフエニルエー
テル(n=30)等があるが、これらに限定される
ものではない。これらのノニオン界面活性剤の
HLB(親水性、疎水性のバランス値)は、特に限
定するものではないが、特に好ましい範囲は
HLB9〜17である。しかし、それ以外の範囲でも
他の界面活性剤との組合せで十分なる効果が得ら
れる。 該界面活性剤の添加濃度は水性組成物中
0.01W/V%〜10%で、好ましくは0.1W/V%
〜3W/V%である。又、リポプロテインリパー
ゼ又はコレステロールエステラーゼまたはコレス
テロールオキシダーゼ等の酵素の最終仕上げ時に
添加する場合は乾性組成中の該酵素重量に対して
0.1〜1000倍が好ましい範囲であるが、添加方法
によつて大きく異なるため、この範囲に限定する
ものではない。 界面活性剤の配合方法としては脂質測定用の水
性組成物に添加する方法と或いはリポプロテイン
リパーゼ又はコレステロールエステラーゼまたは
コレステロールオキシダーゼ等の製造の最終段階
である凍結乾燥前の酵素液に添加する方法があ
る。 (実施例) 次に本発明を実施例により説明する。 実施例 1 透明なメタクリル酸樹脂を反応容器とする、多
項目選択機能をもつシングルマルチ方式の生化学
自動分析機を用いて、グリセロール消去系の中性
脂肪を測定した。この装置の測定条件は、反応容
器が間歇的に移送され、その停止時に第1の場所
でサンプラーから血清試料を10ml添加し、第2の
場所で300mlの第1表に示した第1試薬を添加し
て、所定時間反応させて遊離グリセロールを消去
し、第3の場所で、第2試薬を添加して、脂質の
水解反応及び発色系へ導く酵素反応を行わせ、第
4の場所で、該反応容器に光を照射して、反応液
の吸光度を測定して第1回目の測定を終了した。
反応終了後、反応容器内の反応液は廃棄され、水
洗され第1の場所に戻つて第2回目の測定に使用
した。ここで、同一検体で同一反応容器を用い
て、吸光度を測定し、中性脂肪の標準溶液から、
その含有量を算出した。界面活性剤としてポリオ
キシエチレン−2−フエニル−4−ノニルフエニ
ルエーテル(n=20、HLB15.0)を用いた本発
明の酵素含有組成物を第1表に示す。又、比較の
ため、無添加系、ツイーン20(後記)添加系及び
前述の特開昭58−67197号公報に記載されるトリ
トンX−405(後記)添加系も実施し、それらの結
果を第2表に示した。
【表】
【表】
無添加系:本発明第2試薬のポリオキシエチ
レン−2−フエニル−4−ノニルフエニルエー
テルを抜く。 ツイーン20系:本発明第2試薬のポリオキシ
エチレン−2−フエニル−4−ノニルフエニル
エーテルの代わりにツイーン20(ポリオキシエ
チレンソルビタンモノラウレートエーテル
HLB16.9)を0.2W/V%使用した。 トリトンX−405系:本発明第2試薬のポリ
オキシエチレン−2−フエニル−4−ノニルフ
エニルエーテルの代わりに、トリトンX−405
(ポリエチレングリコールオクチルフエノール
エーテルHLB17.9)を0.2W/V%使用した。
レン−2−フエニル−4−ノニルフエニルエー
テルを抜く。 ツイーン20系:本発明第2試薬のポリオキシ
エチレン−2−フエニル−4−ノニルフエニル
エーテルの代わりにツイーン20(ポリオキシエ
チレンソルビタンモノラウレートエーテル
HLB16.9)を0.2W/V%使用した。 トリトンX−405系:本発明第2試薬のポリ
オキシエチレン−2−フエニル−4−ノニルフ
エニルエーテルの代わりに、トリトンX−405
(ポリエチレングリコールオクチルフエノール
エーテルHLB17.9)を0.2W/V%使用した。
【表】
第2表から明らかな如く、本発明の酵素含有組
成物では酵素活性(即ち、中性脂肪測定値)の低
下は全くみられず、しかも第2回の測定値も第1
回測定値と全く変らず、負誤差を与える対照の何
れよりも著しく優れた酵素含有組成物であること
が認められた。 実施例 2 アクリル酸系反応容器にリポプロテインリパー
ゼ(LPL)3U/mlを含む50mMグツド緩衝液
(PH7.0)を0.5ml添加し、更に本発明で使用のポ
リオキシエチレン−2−フエニル−4−ノニルフ
エニルエーテル(n=20)0.2W/V%或いはポ
リオキシエチレン−o−ベンジルフエニルエーテ
ル(n=30)0.2W/V%を該溶液に加えて、37
℃×10分間水浴中で加温後、排液し、1mlの蒸留
水で3回洗浄した。次いで、リパーゼキツトS
(大日本製薬)を用いて、反応容器に吸着されて
いるLPL活性をOD412nmの吸光度変化
(ΔOD412)で測定した。その結果を第3表に示
す。 対照として、界面活性剤無添加系、実施例1で
使用した特開昭58−67117号公報に記載されるフ
ツ化ナトリウム、及び特開昭58−41357号公報に
記載されるオレイン酸ナトリウムの場合も実施し
た。
成物では酵素活性(即ち、中性脂肪測定値)の低
下は全くみられず、しかも第2回の測定値も第1
回測定値と全く変らず、負誤差を与える対照の何
れよりも著しく優れた酵素含有組成物であること
が認められた。 実施例 2 アクリル酸系反応容器にリポプロテインリパー
ゼ(LPL)3U/mlを含む50mMグツド緩衝液
(PH7.0)を0.5ml添加し、更に本発明で使用のポ
リオキシエチレン−2−フエニル−4−ノニルフ
エニルエーテル(n=20)0.2W/V%或いはポ
リオキシエチレン−o−ベンジルフエニルエーテ
ル(n=30)0.2W/V%を該溶液に加えて、37
℃×10分間水浴中で加温後、排液し、1mlの蒸留
水で3回洗浄した。次いで、リパーゼキツトS
(大日本製薬)を用いて、反応容器に吸着されて
いるLPL活性をOD412nmの吸光度変化
(ΔOD412)で測定した。その結果を第3表に示
す。 対照として、界面活性剤無添加系、実施例1で
使用した特開昭58−67117号公報に記載されるフ
ツ化ナトリウム、及び特開昭58−41357号公報に
記載されるオレイン酸ナトリウムの場合も実施し
た。
【表】
第3表より本発明に添加した界面活性剤は、対
照の何れの界面活性剤よりも該反応容器への
LPL吸着活性が認められなかつた。すなわち、
本発明による酵素含有組成物はLPL吸着を阻止
する極めて効果的な組成物であることが確認され
た。 実施例 3 実施例1と同様の自動分析機用いて、コレステ
ロールエステラーゼ、コレステロールオキシダー
ゼ、ジエチルアニリン、4−アミノアンチピリン
及びペルオキシダーゼを含むリン酸緩衝液を用い
て、総コレステロールを測定し、反応容器を水洗
後、同じアクリル系反応容器を用いて、第4表に
示す本発明の酵素含有組成物を用いてプール血清
中の遊離コレステロールを測定した。
照の何れの界面活性剤よりも該反応容器への
LPL吸着活性が認められなかつた。すなわち、
本発明による酵素含有組成物はLPL吸着を阻止
する極めて効果的な組成物であることが確認され
た。 実施例 3 実施例1と同様の自動分析機用いて、コレステ
ロールエステラーゼ、コレステロールオキシダー
ゼ、ジエチルアニリン、4−アミノアンチピリン
及びペルオキシダーゼを含むリン酸緩衝液を用い
て、総コレステロールを測定し、反応容器を水洗
後、同じアクリル系反応容器を用いて、第4表に
示す本発明の酵素含有組成物を用いてプール血清
中の遊離コレステロールを測定した。
【表】
又、対照として、ポリオキシエチレン−2−ス
チリルフエニルエーテル(n=30)の代わりに無
添加系及びポリオキシエチレンラウリルエーテル
(HLB13.0)を同濃度含む組成物も実施した。遊
離コレステロールの測定結果は、新しい反応容器
を用いた遊離コレステロールの測定値53mg/dlで
あり、本発明による酵素含有組成物では、54mg/
dlであり、殆んど同じ測定値が得られたのに対
し、対照テストの測定値は、夫々163mg/dl、154
mg/dlと大きな正誤差となつた。即ち、本発明の
該酵素含有組成物の測定値は正確であることが確
認された。 実施例 4 シユウドモナス属に属する微生物より得られた
リポプロテインリパーゼを塩析及びカラムクロマ
トグラフイー等の精製手段を用いて精製した。 該酵素液2500U/mlに対し、ポリオキシエチレ
ン−o−フエニルフエニルエーテル(n=20)を
5W/V%混合し、更にデキストラン0.2W/V
%、乳糖10W/V%添加した後に凍結乾燥を行な
い仕上りの良好な粉状該酵素含有組成物を得た。 次いで、実施例1の試薬2のポリオキシエチレ
ン−2−フエニル−4−ノニルフエニルエーテル
(n=20)とリポプロテインリパーゼの代わりに
リポプロテインリパーゼが3U/mlになるように
調製した上記酵素含有組成物を使用して実施例1
と同様のテストを行なつた。その結果、遊離グリ
セロール消去系中性脂肪測定値への負誤差のない
ことが確認された。 (発明の効果) 本発明のリポプロテインリパーゼ又はコレステ
ロールエステラーゼと特定の界面活性剤を含む酵
素含有組成物を用いることによつて、合成樹脂製
反応容器への酵素類の吸着を阻止し、誤差のない
中性脂肪測定(グリセロール消去系)、遊離コレ
ステロール測定が可能となつた。
チリルフエニルエーテル(n=30)の代わりに無
添加系及びポリオキシエチレンラウリルエーテル
(HLB13.0)を同濃度含む組成物も実施した。遊
離コレステロールの測定結果は、新しい反応容器
を用いた遊離コレステロールの測定値53mg/dlで
あり、本発明による酵素含有組成物では、54mg/
dlであり、殆んど同じ測定値が得られたのに対
し、対照テストの測定値は、夫々163mg/dl、154
mg/dlと大きな正誤差となつた。即ち、本発明の
該酵素含有組成物の測定値は正確であることが確
認された。 実施例 4 シユウドモナス属に属する微生物より得られた
リポプロテインリパーゼを塩析及びカラムクロマ
トグラフイー等の精製手段を用いて精製した。 該酵素液2500U/mlに対し、ポリオキシエチレ
ン−o−フエニルフエニルエーテル(n=20)を
5W/V%混合し、更にデキストラン0.2W/V
%、乳糖10W/V%添加した後に凍結乾燥を行な
い仕上りの良好な粉状該酵素含有組成物を得た。 次いで、実施例1の試薬2のポリオキシエチレ
ン−2−フエニル−4−ノニルフエニルエーテル
(n=20)とリポプロテインリパーゼの代わりに
リポプロテインリパーゼが3U/mlになるように
調製した上記酵素含有組成物を使用して実施例1
と同様のテストを行なつた。その結果、遊離グリ
セロール消去系中性脂肪測定値への負誤差のない
ことが確認された。 (発明の効果) 本発明のリポプロテインリパーゼ又はコレステ
ロールエステラーゼと特定の界面活性剤を含む酵
素含有組成物を用いることによつて、合成樹脂製
反応容器への酵素類の吸着を阻止し、誤差のない
中性脂肪測定(グリセロール消去系)、遊離コレ
ステロール測定が可能となつた。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1 リポプロテインリパーゼ及び/又はコレステ
ロールエステラーゼと下記一般式で表される界面
活性剤を含有する脂質測定用酵素含有組成物。 (式中、A:炭素原子数1〜18のアルキル基、
B:アリール基またはアラルキル基、−(RO)n
−:ポリエチレングリコール残基、l:0又は
1、m:1〜4、n:2〜60) 2 コレステロールオキシダーゼと下記一般式で
表される界面活性剤を含有する脂質測定用酵素含
有組成物。 (式中、A:炭素原子数1〜18のアルキル基、
B:アリール基またはアラルキル基、−(RO)n
−:ポリエチレングリコール残基、l:0又は
1、m:1〜4、n:2〜60)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP22517684A JPS61104798A (ja) | 1984-10-25 | 1984-10-25 | 脂質測定用酵素含有組成物 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP22517684A JPS61104798A (ja) | 1984-10-25 | 1984-10-25 | 脂質測定用酵素含有組成物 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS61104798A JPS61104798A (ja) | 1986-05-23 |
JPH0549279B2 true JPH0549279B2 (ja) | 1993-07-23 |
Family
ID=16825143
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP22517684A Granted JPS61104798A (ja) | 1984-10-25 | 1984-10-25 | 脂質測定用酵素含有組成物 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS61104798A (ja) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2013157642A1 (ja) * | 2012-04-20 | 2013-10-24 | デンカ生研株式会社 | 低密度リポ蛋白以外のリポ蛋白中のトリグリセリドの消去方法 |
JP7298151B2 (ja) * | 2017-12-26 | 2023-06-27 | 東洋紡株式会社 | 測定誤差の低減方法 |
-
1984
- 1984-10-25 JP JP22517684A patent/JPS61104798A/ja active Granted
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPS61104798A (ja) | 1986-05-23 |
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