JPH05276935A - コリネ型細菌のアミノ酸排出性菌株の効率を増大させる方法及びアミノ酸の発酵的製造方法 - Google Patents
コリネ型細菌のアミノ酸排出性菌株の効率を増大させる方法及びアミノ酸の発酵的製造方法Info
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- JPH05276935A JPH05276935A JP4278305A JP27830592A JPH05276935A JP H05276935 A JPH05276935 A JP H05276935A JP 4278305 A JP4278305 A JP 4278305A JP 27830592 A JP27830592 A JP 27830592A JP H05276935 A JPH05276935 A JP H05276935A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 コリネ型細菌のアミノ酸排出性菌株の効率を
増大させる方法。 【構成】 該菌株においてトレハロース上での増殖能力
を誘発しかつ誘発変異体をトレハロース含有培地で選択
する。
増大させる方法。 【構成】 該菌株においてトレハロース上での増殖能力
を誘発しかつ誘発変異体をトレハロース含有培地で選択
する。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、アミノ酸、特にＬ−リ
シンを排出するコリネ型細菌の効率を増大させる方法に
関する。
シンを排出するコリネ型細菌の効率を増大させる方法に
関する。
【０００２】
【従来の技術】必須アミノ酸であるＬ−リシンは食品及
び動物飼料添加物として及び薬剤学的製品の作用物質及
び成分として工業的に極めて重要である。Ｌ−リシンの
製造のためには発酵が重要な方法である。就中コリネバ
クテリウム屬及びブレビバクテリウム屬のコリネ型細菌
が該製造において使用される。これらの菌株のリシン生
合成の調節は、該菌株がリシンを自己の必要量以上に生
産して培地中に排出するように、突然変異によって変化
されている。このような過剰生産菌は、アミノ酸物質代
謝の個々の段階が阻害されている変異体（例えばＨｓｅ
又はトレオニン栄養要求体）、又はリシンの類似物質に
対しては抵抗性があるか又は他の変異も有している変異
体の探索によって得られる。高効率菌株は一般に、１種
以上の栄養要求性、１種以上の類似物質抵抗性又はこれ
らの変異の組合せを有している。リシン生産菌の開発の
総括的記載はＯ．Ｔｏｓａｋａ及びＫ．Ｔａｋｉｎａｍ
ｉによってなされている（Ｐｒｏｇｒ．Ｉｎｄ．Ｍｉｃ
ｒｏｂｉｏｌ．（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｍｉｎｏ
Ａｃｉｄｓ ２４，１９８６，１５２〜１７２）。
び動物飼料添加物として及び薬剤学的製品の作用物質及
び成分として工業的に極めて重要である。Ｌ−リシンの
製造のためには発酵が重要な方法である。就中コリネバ
クテリウム屬及びブレビバクテリウム屬のコリネ型細菌
が該製造において使用される。これらの菌株のリシン生
合成の調節は、該菌株がリシンを自己の必要量以上に生
産して培地中に排出するように、突然変異によって変化
されている。このような過剰生産菌は、アミノ酸物質代
謝の個々の段階が阻害されている変異体（例えばＨｓｅ
又はトレオニン栄養要求体）、又はリシンの類似物質に
対しては抵抗性があるか又は他の変異も有している変異
体の探索によって得られる。高効率菌株は一般に、１種
以上の栄養要求性、１種以上の類似物質抵抗性又はこれ
らの変異の組合せを有している。リシン生産菌の開発の
総括的記載はＯ．Ｔｏｓａｋａ及びＫ．Ｔａｋｉｎａｍ
ｉによってなされている（Ｐｒｏｇｒ．Ｉｎｄ．Ｍｉｃ
ｒｏｂｉｏｌ．（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｍｉｎｏ
Ａｃｉｄｓ ２４，１９８６，１５２〜１７２）。
【０００３】さて、菌株の効率は全物質代謝の炭素の流
れがリシンの方向にできるだけ効率的に強制されること
によって決まる。これは一つにはリシン生合成の活性化
及びこの範囲におけるネックの除去を意味し、二つには
副生成物の形成をもたらす物質代謝経路の阻害を意味す
る。すなわちＫ．Ｎａｋａｙａｍａは、リシン生産菌に
関してホモセリン、バリン、グルタミン酸、乳酸塩及び
コハク酸塩の生成を記載している（Ｔｈｅ Ｍｉｃｒｏ
ｂｉａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ａｍｉｎｏ
Ａｃｉｄｓ；Ｋ．Ｙａｍａｄａ，Ｓ．Ｋｉｎｏｓｈｉｔ
ａ，Ｔ．Ｔｓｕｎｏｄａ，Ｋ．Ａｉｄａ編；Ｊｏｈｎ
Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，１９７２，３６９〜３９
８）。
れがリシンの方向にできるだけ効率的に強制されること
によって決まる。これは一つにはリシン生合成の活性化
及びこの範囲におけるネックの除去を意味し、二つには
副生成物の形成をもたらす物質代謝経路の阻害を意味す
る。すなわちＫ．Ｎａｋａｙａｍａは、リシン生産菌に
関してホモセリン、バリン、グルタミン酸、乳酸塩及び
コハク酸塩の生成を記載している（Ｔｈｅ Ｍｉｃｒｏ
ｂｉａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ａｍｉｎｏ
Ａｃｉｄｓ；Ｋ．Ｙａｍａｄａ，Ｓ．Ｋｉｎｏｓｈｉｔ
ａ，Ｔ．Ｔｓｕｎｏｄａ，Ｋ．Ａｉｄａ編；Ｊｏｈｎ
Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，１９７２，３６９〜３９
８）。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明の課題は、他の
突然変異によってアミノ酸、特にリシン排出性コリネ型
細菌の効率を高めることである。
突然変異によってアミノ酸、特にリシン排出性コリネ型
細菌の効率を高めることである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】前記課題は、冒頭記載の
方法において、コリネ型細菌のアミノ酸、特にＬ−リシ
ン排出性菌株においてトレハロース上での増殖能力を誘
発することを特徴とする方法によって解決される。トレ
ハロースはα−Ｄ−グルコピラノシル−α−Ｄ−グルコ
ピラノシドである。ブレビバクテリウム・フラブム（ｆ
ｌａｖｕｍ）の例において、トレハロースは野生型によ
って（Ｒ．Ｌｏｎｄｏｎｉ，Ｔｈ．Ｗａｌｋｅｒ；Ｂｉ
ｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｒｅｐｏｒｔｓ ５ ５０９〜５１
５，１９８５）及びリシン排出変異体によって（Ｌ．Ｉ
ｎｂａｒ，Ａ．Ｌａｐｉｄｏｔ；Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ．１６２，６２１〜６３３，１９８７）合成され
ることが証明された。またコリネバクテリウム・グルタ
ミクム（ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ）のアミノ酸生産性菌株
についてもトレハロースの生成が記載された（Ｃ．Ａ．
１１６（１５）１５０１５７ｊ，この場合にはトレハロ
ースを含有するグルタミン酸発酵ブイヨンが酵素トレハ
ロースで後処理される。
方法において、コリネ型細菌のアミノ酸、特にＬ−リシ
ン排出性菌株においてトレハロース上での増殖能力を誘
発することを特徴とする方法によって解決される。トレ
ハロースはα−Ｄ−グルコピラノシル−α−Ｄ−グルコ
ピラノシドである。ブレビバクテリウム・フラブム（ｆ
ｌａｖｕｍ）の例において、トレハロースは野生型によ
って（Ｒ．Ｌｏｎｄｏｎｉ，Ｔｈ．Ｗａｌｋｅｒ；Ｂｉ
ｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｒｅｐｏｒｔｓ ５ ５０９〜５１
５，１９８５）及びリシン排出変異体によって（Ｌ．Ｉ
ｎｂａｒ，Ａ．Ｌａｐｉｄｏｔ；Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ．１６２，６２１〜６３３，１９８７）合成され
ることが証明された。またコリネバクテリウム・グルタ
ミクム（ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ）のアミノ酸生産性菌株
についてもトレハロースの生成が記載された（Ｃ．Ａ．
１１６（１５）１５０１５７ｊ，この場合にはトレハロ
ースを含有するグルタミン酸発酵ブイヨンが酵素トレハ
ロースで後処理される。
【０００６】しかし同時に、コリネバクテリウム・グル
タミクム（ＡＴＣＣ１３０３２）のようなコリネ型細菌
はＣ源としてのトレハロース上では増殖せず、ブレビバ
クテリウム・フラブム（ＡＴＣＣ１４０６７）及びブレ
ビバクテリウム・ラクトフェルメンツム（ｌａｃｔｏｆ
ｅｒｍｅｎｔｕｍ）（ＡＴＣＣ１３８６９）は僅かに増
殖することも証明することもできる。これら３種の菌株
についてはトレハロースからの酸の形成は、全自動同定
装置ＶＩＴＥＫ（ＡＭＳ／ＩＭＳ型）又はＯＦ−試験栄
養培地（Ｍｅｒｋ Ａｒｔ．１０９８７）で検出するこ
とはできない。フェノールレッドブイヨン（Ｍｅｒｃｋ
Ａｒｔ．１０９８７）ではブレビバクテリウム・フラ
ブム及びラクトフェルメンツムの場合弱い陽性反応が認
められ、コリネバクテリウム・グルタミクムの場合には
トレハロースからの酸形成は検出できない。
タミクム（ＡＴＣＣ１３０３２）のようなコリネ型細菌
はＣ源としてのトレハロース上では増殖せず、ブレビバ
クテリウム・フラブム（ＡＴＣＣ１４０６７）及びブレ
ビバクテリウム・ラクトフェルメンツム（ｌａｃｔｏｆ
ｅｒｍｅｎｔｕｍ）（ＡＴＣＣ１３８６９）は僅かに増
殖することも証明することもできる。これら３種の菌株
についてはトレハロースからの酸の形成は、全自動同定
装置ＶＩＴＥＫ（ＡＭＳ／ＩＭＳ型）又はＯＦ−試験栄
養培地（Ｍｅｒｋ Ａｒｔ．１０９８７）で検出するこ
とはできない。フェノールレッドブイヨン（Ｍｅｒｃｋ
Ａｒｔ．１０９８７）ではブレビバクテリウム・フラ
ブム及びラクトフェルメンツムの場合弱い陽性反応が認
められ、コリネバクテリウム・グルタミクムの場合には
トレハロースからの酸形成は検出できない。
【０００７】従来はトレハロースをＣ源として使用する
コリネ型細菌の特性と、アミノ酸を排出する同細菌の能
力との間の関係は知られていなかったけれども、今や、
トレハロース上での増殖能力が誘発されたコリネ型アミ
ノ酸排出細菌が出発細菌よりも増大されたアミノ酸生産
を示すことが見出された。この事実は、特にもともとト
レハロースも排出する菌株の場合にあてはまる。同時
に、トレハロースを利用する変異体が培地でトレハロー
スとは異なるＣ源上で培養される場合には、野生型とは
反対にトレハロースをあまり蓄積しないか又は他の選択
の場合にはもはやトレハロースを蓄積しないことが見出
された。また初めの選択段階後に分離された変異体がト
レハロースを排出しない場合にも、他の選択方法によっ
て収量を出発菌株の収量よりも高めることができる。
コリネ型細菌の特性と、アミノ酸を排出する同細菌の能
力との間の関係は知られていなかったけれども、今や、
トレハロース上での増殖能力が誘発されたコリネ型アミ
ノ酸排出細菌が出発細菌よりも増大されたアミノ酸生産
を示すことが見出された。この事実は、特にもともとト
レハロースも排出する菌株の場合にあてはまる。同時
に、トレハロースを利用する変異体が培地でトレハロー
スとは異なるＣ源上で培養される場合には、野生型とは
反対にトレハロースをあまり蓄積しないか又は他の選択
の場合にはもはやトレハロースを蓄積しないことが見出
された。また初めの選択段階後に分離された変異体がト
レハロースを排出しない場合にも、他の選択方法によっ
て収量を出発菌株の収量よりも高めることができる。
【０００８】これは、トレハロース中での培養菌の増殖
速度がサッカロース中での増殖速度に等しくなるまで、
トレハロース含有培地とサッカロース含有培地に培養菌
を交互に反復接種する方法である。誘発は、出発菌株を
慣用の化学的又は物理的変異誘発要因、例えばＭＮＮ
Ｇ：Ｎ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジ
ン又は紫外線に暴露することによって行われる。適当な
コリネ型細菌、好ましくはコリネバクテリウム屬、特に
コリネバクテリウム・グルタミクム、又はブレビバクテ
リウム屬、特にブレビバクテリウム・フラブム又はラク
トフェルメンツムに属する細菌の選択は、一般に公知の
微生物学的方法によって行われる。
速度がサッカロース中での増殖速度に等しくなるまで、
トレハロース含有培地とサッカロース含有培地に培養菌
を交互に反復接種する方法である。誘発は、出発菌株を
慣用の化学的又は物理的変異誘発要因、例えばＭＮＮ
Ｇ：Ｎ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジ
ン又は紫外線に暴露することによって行われる。適当な
コリネ型細菌、好ましくはコリネバクテリウム屬、特に
コリネバクテリウム・グルタミクム、又はブレビバクテ
リウム屬、特にブレビバクテリウム・フラブム又はラク
トフェルメンツムに属する細菌の選択は、一般に公知の
微生物学的方法によって行われる。
【０００９】
【実施例】実施例は、化学的変異誘発要因（ＭＮＮＧ）
によって得られた、コリネ型バクテリウム・グルタミク
ム（ＡＴＣＣ１３０３２）の種々のＬ−リシン及びトレ
ハロース排出変異体に関している。トレハロースは濃度
範囲０．５〜１００ｇ／ｌ、好ましくは１〜１０ｇ／ｌ
で使用する。
によって得られた、コリネ型バクテリウム・グルタミク
ム（ＡＴＣＣ１３０３２）の種々のＬ−リシン及びトレ
ハロース排出変異体に関している。トレハロースは濃度
範囲０．５〜１００ｇ／ｌ、好ましくは１〜１０ｇ／ｌ
で使用する。
【００１０】例１ ＤＭ２８２−２（ｌｅｕ-，ＡＥＣr）を一晩中標準Ｉ−
ブイヨン（ＭｅｒｃｋＡｒｔ．７８８２）中で培養し、
生理学的食塩水（０．９％ＮａＣｌ）で洗浄し、ＭＮＮ
Ｇ（Ｎ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジ
ン）を用いてＬＤ37で変異誘発を行い、液状選択培地に
接種する。選択培地は、グルコースを含有せず、トレハ
ロース５ｇ／ｌ及びＬ−ロイシン１００μｇ／ｍｌを追
加したＢＭＣＧ培地である（ＢＭＣＧ：Ｌｉｅｂｌ ｅ
ｔ ａｌ，Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅ
ｃｈｎｏｌ．（１９８９） ３２：２０５〜２１０）。
３３℃で２４時間インキュベートした後、試料を取り、
一部分を新しい選択培地に接種する。試料の他の部分を
ＣＡＳＯ寒天（Ｍｅｒｃｋ Ａｒｔ．５４５８）で分離
する。個々のコロニーの表現型を、ＢＭＣＧ培地で遺伝
標識、つまりロイシン栄養素要求性、ＡＥＣ耐性及びト
レハロース利用性にいて試験する。この方法を、トレハ
ロースを利用する変異体が検出されるまで２４時間ごと
反復する。リシン生産を試験するために、トレハロース
を利用する変異体をＣＡＳＯブイヨン（Ｍｅｒｃｋ Ａ
ｒｔ．５４５９）で１６時間インキュベートする（２５
０ｒｐｍ、３３℃）。この懸濁液を、そらせ板を有する
１００ｍｌフラスコ中の試験培地９ｍｌでグルコース*
Ｈ2Ｏ８８ｇ／ｌで１：１０に希釈し、４８時間インキ
ュベートする（３３℃、２５０ｒｐｍ）．４８時間後に
発酵ブイヨンを遠心分離し、上澄み液のリシン濃度をア
ミノ酸分析によって測定し、上澄み液のトレハロース濃
度をＨＰＬＣによって測定する。
ブイヨン（ＭｅｒｃｋＡｒｔ．７８８２）中で培養し、
生理学的食塩水（０．９％ＮａＣｌ）で洗浄し、ＭＮＮ
Ｇ（Ｎ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジ
ン）を用いてＬＤ37で変異誘発を行い、液状選択培地に
接種する。選択培地は、グルコースを含有せず、トレハ
ロース５ｇ／ｌ及びＬ−ロイシン１００μｇ／ｍｌを追
加したＢＭＣＧ培地である（ＢＭＣＧ：Ｌｉｅｂｌ ｅ
ｔ ａｌ，Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅ
ｃｈｎｏｌ．（１９８９） ３２：２０５〜２１０）。
３３℃で２４時間インキュベートした後、試料を取り、
一部分を新しい選択培地に接種する。試料の他の部分を
ＣＡＳＯ寒天（Ｍｅｒｃｋ Ａｒｔ．５４５８）で分離
する。個々のコロニーの表現型を、ＢＭＣＧ培地で遺伝
標識、つまりロイシン栄養素要求性、ＡＥＣ耐性及びト
レハロース利用性にいて試験する。この方法を、トレハ
ロースを利用する変異体が検出されるまで２４時間ごと
反復する。リシン生産を試験するために、トレハロース
を利用する変異体をＣＡＳＯブイヨン（Ｍｅｒｃｋ Ａ
ｒｔ．５４５９）で１６時間インキュベートする（２５
０ｒｐｍ、３３℃）。この懸濁液を、そらせ板を有する
１００ｍｌフラスコ中の試験培地９ｍｌでグルコース*
Ｈ2Ｏ８８ｇ／ｌで１：１０に希釈し、４８時間インキ
ュベートする（３３℃、２５０ｒｐｍ）．４８時間後に
発酵ブイヨンを遠心分離し、上澄み液のリシン濃度をア
ミノ酸分析によって測定し、上澄み液のトレハロース濃
度をＨＰＬＣによって測定する。
【００１１】 表１ 菌株 Ｌ−リシン トレハロース トレハロース ｇ／ｌ ｇ／ｌ 上での増殖 ＤＭ２８２−２ ３４．６ ５．５ − Ｋｌｏｎ Ｉａ３ ３６．７ ０ ＋ Ｋｌｏｎ Ｉａ６ ３７．２ ０ ＋ ＤＭａ４５ ３６．５ ０ ＋ Ｋｌｏｎ ＩＩＩｅ２ ３５．４ ０ ＋ 例２ 例１と同様にしてＤＭ３４６−１（ｌｅｕ-，ＡＥＣr，
ＯＸＡr）に変異誘発及び選択を施す。３３℃で２４時
間インキュベートした後、試料を取って、一部分を新し
い選択培地に接種する。試料の他の部分をＣＡＳＯ寒天
（ＭｅｒｃｋＡｒｔ．５４５８）で分離する。個々のコ
ロニーの表現型をＢＭＣＯ培地で遺伝標識、すなわちロ
イシン栄養素要求性、ＡＥＣ耐性、オキサリシン耐性及
びトレハロース利用性について試験する。トレハロース
を利用する変異体が検出できるまで、前記方法を２４時
間ごとに反復する。リシンの生産及びトレハロースの蓄
積の試験は例１と同様にして行う。
ＯＸＡr）に変異誘発及び選択を施す。３３℃で２４時
間インキュベートした後、試料を取って、一部分を新し
い選択培地に接種する。試料の他の部分をＣＡＳＯ寒天
（ＭｅｒｃｋＡｒｔ．５４５８）で分離する。個々のコ
ロニーの表現型をＢＭＣＯ培地で遺伝標識、すなわちロ
イシン栄養素要求性、ＡＥＣ耐性、オキサリシン耐性及
びトレハロース利用性について試験する。トレハロース
を利用する変異体が検出できるまで、前記方法を２４時
間ごとに反復する。リシンの生産及びトレハロースの蓄
積の試験は例１と同様にして行う。
【００１２】 表２ 菌株 Ｌ−リシン トレハロース トレハロース ｇ／ｌ ｇ／ｌ 上での増殖 ＤＭ３４６−１ ３６．９ ４．９ − ＤＭ５４８ ４２．０ ０ ＋ ＤＭ５５９ ３７．７ ０ ＋ ＤＭ５９１ ４０．３ ０ ＋ 例３ 例１及び例２で分離した変異体のＬ−リシン生成と比較
してさらにＬ−リシン生成を相対的に増大させるため
に、前記変異体をさらに変更方法でトレハロースに対し
て選択する。ＤＭ５４５（例１）を、グルコースの代り
にサッカロース１ｇ／ｌを含有しかつＬ−ロイシン１０
０μｇ／ｍｌの追加されたＢＭＣＧ培地で３３℃で一晩
中培養する。２４時間後に試料を、グルコースの代りに
トレハロース１ｇ／ｌを含有しかつＬ−ロイシン１００
μｇ／ｌの追加されたＢＭＣＧ中に１：１００の割合で
移す。並行試験では、糖を含有せずかつＬ−ロイシン１
００μｇ／ｍｌの追加されたＢＭＣＧを１：１００の割
合で接種する。二つの培養菌を、トレハロース含有培養
菌の６６０ｎｍでの光学濃度が糖不含培養菌の光学濃度
を越えるまで、３３℃で振盪下にインキュベートする。
次にトレハロース含有培養菌から試料を１：１００の割
合で、グルコースの代りにトレハロース１ｇ／ｌを含有
しかつＬ−ロイシン１００μｇ／ｌの追加されたＢＭＣ
Ｇ中に接種する。２４時間後に培養菌を前記のようにし
てトレハロース含有培地及びサッカロース含有培地に接
種する。トレハロース含有培地とサッカロース含有培地
への交互接種を、トレハロースにおける増殖速度がサッ
カロース含有培地での増殖速度に等しくなるまで続け
る。この培養菌から菌細胞を分離し、例１と同様にして
ＣＡＳＯブイヨンでインキュベートする。この懸濁液を
試験培地９ｍｌ中でサッカロース８０ｇ／ｌで１：１０
に希釈し、例１と同様にして７２時間インキュベートす
る。発酵ブイヨンの分析を例１と同様に行う。
してさらにＬ−リシン生成を相対的に増大させるため
に、前記変異体をさらに変更方法でトレハロースに対し
て選択する。ＤＭ５４５（例１）を、グルコースの代り
にサッカロース１ｇ／ｌを含有しかつＬ−ロイシン１０
０μｇ／ｍｌの追加されたＢＭＣＧ培地で３３℃で一晩
中培養する。２４時間後に試料を、グルコースの代りに
トレハロース１ｇ／ｌを含有しかつＬ−ロイシン１００
μｇ／ｌの追加されたＢＭＣＧ中に１：１００の割合で
移す。並行試験では、糖を含有せずかつＬ−ロイシン１
００μｇ／ｍｌの追加されたＢＭＣＧを１：１００の割
合で接種する。二つの培養菌を、トレハロース含有培養
菌の６６０ｎｍでの光学濃度が糖不含培養菌の光学濃度
を越えるまで、３３℃で振盪下にインキュベートする。
次にトレハロース含有培養菌から試料を１：１００の割
合で、グルコースの代りにトレハロース１ｇ／ｌを含有
しかつＬ−ロイシン１００μｇ／ｌの追加されたＢＭＣ
Ｇ中に接種する。２４時間後に培養菌を前記のようにし
てトレハロース含有培地及びサッカロース含有培地に接
種する。トレハロース含有培地とサッカロース含有培地
への交互接種を、トレハロースにおける増殖速度がサッ
カロース含有培地での増殖速度に等しくなるまで続け
る。この培養菌から菌細胞を分離し、例１と同様にして
ＣＡＳＯブイヨンでインキュベートする。この懸濁液を
試験培地９ｍｌ中でサッカロース８０ｇ／ｌで１：１０
に希釈し、例１と同様にして７２時間インキュベートす
る。発酵ブイヨンの分析を例１と同様に行う。
【００１３】 表３ 菌株 Ｌ−リシン トレハロース ｇ／ｌ ｇ／ｌ ＤＭ２８２−２ ２８．１５ ４．８４ ＤＭ５４５ ３０．０９ ０ ＤＭ６４１ ３１．１５ ０ Ｓ２３４ ３０．７８ ０ Ｓ２５６ ３１．１４ ０ Ｓ１９８ ３１．５２ ０ 例４ 例３で記載した実験を反復した、但し選択培地における
トレハロース及びサッカロースの濃度はそれぞれ１０ｇ
／ｌであった。
トレハロース及びサッカロースの濃度はそれぞれ１０ｇ
／ｌであった。
【００１４】 表４ 菌株 Ｌ−リシン トレハロース ｇ／ｌ ｇ／ｌ ＤＭ２８２−２ ２８．７ ５．２ ＤＭ５４５ ３０．６ ０ ＤＭ６４６ ３３．１７ ０ ＤＭ６４７ ３３．０６ ０ ＤＭ６４８ ３３．０２ ０ ＤＭ６４９ ３２．６８ ０ ＤＭ６５３ ３３．０３ ０
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:13） (Ｃ１２Ｐ 13/08 Ｃ１２Ｒ 1:15） (Ｃ１２Ｐ 13/08 Ｃ１２Ｒ 1:13） (72)発明者 ベルント バッハマン ドイツ連邦共和国 ヴェルター マイヤー フェルト 10 アー
Claims (7)
- 【請求項１】 コリネ型細菌のアミノ酸排出性菌株の効
率を増大させる方法において、該菌株においてトレハロ
ース上で増殖するための能力を誘発しかつトレハロース
含有培地によって選択を行うことを特徴とする、前記方
法。 - 【請求項２】 トレハロース含有培地及びサッカロース
含有培地によって交互に選択を行う、請求項１記載の方
法。 - 【請求項３】 コリネバクテリウム屬を使用する、請求
項１又は２記載の方法。 - 【請求項４】 ブレビバクテリウム屬を使用する、請求
項１又は２記載の方法。 - 【請求項５】 Ｌ−リシン排出性菌株を使用する、請求
項１から請求項４までのいずれか１項記載の方法。 - 【請求項６】 改良すべき菌株がトレハロースを排出す
る、請求項５記載の方法。 - 【請求項７】 請求項１記載の細菌菌株を使用すること
を特徴とするアミノ酸の発酵的製造方法。
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|---|---|---|---|
| DE4134450.2 | 1991-10-18 | ||
| DE4134450A DE4134450A1 (de) | 1991-10-18 | 1991-10-18 | Verfahren zur erhoehung der leistungsfaehigkeit aminosaeuren ausscheidender bakterien |
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|---|---|---|---|---|
| US7307160B1 (en) | 2000-07-05 | 2007-12-11 | Ajinomoto Co. Inc. | OtsA gene encoding trehalose-6-phosphate synthase from a coryneform bacterium |
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1992
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- 1992-10-17 KR KR1019920019107A patent/KR930008129A/ko not_active Application Discontinuation
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|---|---|---|---|---|
| US7307160B1 (en) | 2000-07-05 | 2007-12-11 | Ajinomoto Co. Inc. | OtsA gene encoding trehalose-6-phosphate synthase from a coryneform bacterium |
| WO2010061890A1 (ja) * | 2008-11-27 | 2010-06-03 | 味の素株式会社 | Ｌ－アミノ酸の製造法 |
| US8673597B2 (en) | 2008-11-27 | 2014-03-18 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing L-amino acid |
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| EP0537443A1 (de) | 1993-04-21 |
| HU215910B (hu) | 1999-03-29 |
| EP0537443B1 (de) | 1996-09-18 |
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| DE4134450A1 (de) | 1993-04-22 |
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