JPH05229948A - 悪性腫瘍の治療剤または診断剤およびａｃ８００７物質の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【目的】 ＡＣ８００７物質またはその非毒性塩を含む
悪性腫瘍の治療剤、診断剤の提供。 【構成】 以下の理化学的性質を有するＡＣ８００７物
質またその非毒性塩を含む医薬。 （１）元素分析値：Ｃ：約６０％、Ｈ：５％、Ｎ：約８
％、Ｚｎ：約８〜１０％ （２）質量分析値：７１７（ＭＨ⁺ 、ＦＡＢ−ＭＳによ
る） （３）分子式：Ｃ₃₆Ｈ₃₆Ｏ₈ Ｎ₄ Ｚｎ ＡＣ８００７物質は下記推定構造式を有し、 アースロバクター属に属するＡＣ８００７物質生産菌を
培地に培養し、培養物よりＡＣ８００７特質を採取する
ことにより製造する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、ＡＣ８００７物質また
はその非毒性塩を有効成分とする悪性腫瘍の治療剤また
は診断剤およびＡＣ８００７物質の製造法に関する。

【０００２】

【従来の技術】悪性腫瘍への光化学療法（Ｐｈｏｔｏｄ
ｙｎａｍｉｃ ｔｈｅｒａｐｙ：ＰＤＴ）が開発されて
数十年を経過し、多数の有効例が確認され、早期悪性腫
瘍の根治治療あるいは診断剤として使用されている。こ
のＰＤＴに使用される代表的光増感剤はポルフイリン誘
導体である。

【０００３】しかしながら、ポルフイリン誘導体は次の
ような欠点がる。（１）化学的に単一でない、（２）組
織透過性の良い長波領域に吸収を持たない、（３）腫瘍
組織に長く保持されない、（４）正常細胞からの排泄が
遅い、（５）光化学反応量収率が低いなどがあげられ
る。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】以上のような問題を一
点でも解決できる光増感剤の開発は、将来のＰＤＴに有
効であると期待される。そして、副作用の少ない新規か
つ有用な光増感剤が悪性腫瘍治療のために求めらてい
る。本発明の目的は、ＡＣ８００７物質またはその非毒
性塩を有効成分とする悪性腫瘍の治療剤または診断剤お
よびＡＣ８００７物質の製造法を提供するにある。

【０００５】

【課題を解決するための手段】これまでのＰＤＴにおけ
る光増感剤は、すべて化学的に合成された物質であり、
副作用の面で問題があつた。本発明者らは微生物が生産
する天然の生理活性物質の内から、アースロバクター・
エスピー・ＴＭ−１（微工研条寄第３６７６号）の培養
濾液からＡＣ８００７物質（特開平２−２３４６８８号
公報参照）と同定される物質を採取し、本物質が亜鉛を
有する物質であることを見出した。更に、本発明者ら
は、本物質が悪性腫瘍のＰＤＴの光感剤としての性質を
有する治療剤として、又、診断剤として有用であること
を見出し、さらに、ＡＣ８００７物質の良好な製造法を
見出し、本発明を完成した。

【０００６】本発明の有効物質であるＡＣ８００７物質
は、少なくとも次に示すような理化学的性質を有する。 （１）元素分析 Ｃ：約６０％、Ｈ：約５％、Ｎ：約８％、Ｚｎ：約８〜
１０％ （２）質量分析 ７１７（ＭＨ⁺ , ＦＡＢ−ＭＳによ
る） （３）分子式 Ｃ₃₈Ｈ₃₆Ｏ₈ Ｎ₄ Ｚｎ （４）可視部吸収スペクトル：図１（中性条件）、図２
（酸性条件）

【０００７】

【化４】 少なくとも３８６（肩）（７５０）、４０６（３５２
５）、５３８（１８５）、５７４（１９０）ｎｍ付近に
特徴的な吸収を有する

【０００８】

【化５】 少なくとも３８６（肩）（１２７５）、４０２（４６９
０）、５６０（１７５）、５９１（６０）ｎｍ付近に特
徴的な吸収を有する。

【０００９】（５）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ
法）：図３ 少なくとも３４２０、２９２０、１７０５、１４００、
１２７５、１１３０、９４０、８３５cm^-1付近に特徴的
な吸収を有する。 （６）溶剤に対する溶解性 メタノール、酢酸エチル、酢酸、ジメチルスルホキシド
に可溶性、水、ヘキサン、ベンゼンに不溶性

【００１０】（７）呈色反応 過マンガン酸カリウム反応、ヨード反応は陽性、塩化第
二鉄反応、ドラーゲンドルフ反応、ニンヒドリン反応は
陰性 （８）塩基性、酸性、中性の区別 酸性物質 （９）物質の色 暗赤色 （１０）¹H−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、２７℃、ｄ₆ ＤＭ
ＳＯ中で測定）：図４

【００１１】（１１）¹³Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、２
７℃、ＤＭＳＯ中で測定）：少なくとも下記に示したシ
グナルが認められた。１７４．２０（ｓ）、１４７．６
２（ｓ）、１４７．５４（ｓ）、１４６．８３（ｓ）、
１４６．７７（ｓ）、１４６．７３（ｓ）、１３９．４
４（ｓ）、１３９．３０（ｓ）、１３６．６５（ｓ）、
１３６．５４（ｓ）、９７．０６（ｄ）、９６．９５
（ｄ）、３７．４１（ｔ）、２１．６３（ｔ）、２１．
５９（ｔ）、１１．４６（ｑ）

【００１２】（１２）薄層クロマトグラフイー（東京化
成社製、スポツトフイルムシリカゲルｆ使用） Ｒｆ＝０．４５〔展開溶媒：クロロホルム−メタノール
酢酸（１０：１．５：０．１）〕 Ｒｆ＝０．３７〔展開溶媒：ブタノール−エタノール−
クロロホルム−アンモニア水（４：５：２：４）〕

【００１３】ＡＣ８００７物質は、以上の性質を有する
ことから、次式で表される構造であると推定される。

【００１４】

【化６】

【００１５】本発明の有効成分であるＡＣ８００７物質
を生産するには、微生物の培養による醗酵法が最も適切
である。生産に好適な微生物としては、アースロバクタ
ー・エスピー ＴＭ−１（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ
ｓｐ．ＴＭ−１：微工研条寄第３６７６号）を挙げるこ
とができる。本菌は、滋賀県甲賀郡甲賀町の白菜畑の土
壌より分離した細菌ＴＭ−１株であり、本発明に最も有
効に使用される菌株の一例であって、本菌株の菌学的性
質を示すと次の通りである。

【００１６】尚、本菌株の同定に当たって、同定試験は
「医学細菌同定の手引き、第２版、１９７４」や、「Ｍ
ｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ３
巻」等に準じて実施した。実験結果を、「医学細菌同定
の手引き、第２版、１９７４」「Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍ
ａｎｎｕａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔ
ｅｒｉｏｌｏｇｙ Ｖｏl ．１（１９８４），Ｖｏl ．
２（１９８６），Ｖｏl．３（１９８９）」等に対比し
て同定した。培養温度は２８〜３０℃で行った。（＋：
陽性、（＋）：弱陽性、−：陰性、ＮＴ：未試験、Ｎ
Ｄ：文献に記載が無い、ＮＣ：変化しない）

【００１７】実験結果 １．生育の特徴 普通寒天斜面培地 周辺はギザギザ状の丸い集落を形成し、中央が凸状に盛
り上がる。半透明、湿潤で灰白色〜淡黄土色を呈する
が、可溶性色素は産生しない。 普通寒天平面培地 生育は、悪いが線状に生育する。半透明、湿潤で灰白色
〜淡黄土色を呈するが、可溶性色素は産生しない。 液体培地（ペプトン水） 一様に混濁する。 リトモスミルク培地 アルカリになりペプトン化する。

【００１８】２．ＤＮＡのＧＣｍｏl ％ ＮＴ ３．主たるイソプレノイドキノン ＮＴ ４．形態の特徴 培養前期には長桿状を示し、彎曲し、大きさは０．８×
４〜５μｍでＶ字状を示すものもある。培養後期には
１．２×１．５μｍの短桿状〜球状に変化する細菌。

【００１９】 ５．生理・化学的性状 グラム染色 ＋ ＫＯＨ反応 − 抗酸性染色 − カプセル形成 −

【００２０】 ＯＦテスト（Ｈｕｇｈ−Ｌｅｉｆｓｏｎ） ＮＴ ＯＦテスト（Ｎ源にＮＨ₄ Ｈ₂ ＰＯ₄ ） Ｏ 好気での生育 ＋ 嫌気での生育 ＋ 生育温度 ４２℃ − ３７℃ ＋ ２０℃ ＋ １０℃ ＮＴ

【００２１】 食塩耐性 ０％ ＋ ０．５％ ＋ ３．０％ ＮＴ ５．０％ ＮＴ 生育pH ４．７ − ５．６ ＋ ９．０ ＋ １０．０ −

【００２２】 ゲラチン分解 − デンプン分解 − カゼイン分解 ＋ エスクリン分解 ＮＴ セルロース分解 − チロシン分解 ＮＴ Ｔｗｅｅｎ８０分解 ＮＴ アルギニン分解 ＮＴ カタラーゼ産生 − オキシダーゼ産生 ＮＴ

【００２３】 レシチナーゼ産生 − ウレアーゼ産生（ＳＳＲ） ＮＴ ウレアーゼ産生（Ｃｈｒｉｓ．） ＮＴ インドール産生 − 硫化水素産生（ｌｅａｄ ａｃｅｔａｔｅ ｐａｐｅｒ） ＋ アセトイン産生（Ｋ₂ ＨＰＯ₄ ） − アセトイン産生（ＮａＣl ） − ＭＲテスト − 硝酸塩還元テスト（ガス産生） − （ＮＯ₂ ^- の検出） − （ＮＯ₃ ^- の検出） ＋

【００２４】 シモンズ培地での利用性（アルカリ産生） クエン酸塩 − リンゴ酸塩 ＋ マレイン酸塩 − マロン酸塩 − プロピオン酸塩 − グルコン酸塩 （＋） コハク酸塩 ＋

【００２５】 クリステンゼン培地での利用性（アルカリ産生） クエン酸塩 ＋ リンゴ酸塩 ＋ マレイン酸塩 ＋ マロン酸塩 ＋ プロピオン酸塩 ＋ グルコン酸塩 ＋

【００２６】 コハク酸塩 ＋ グルコースよりガスの産生 − 糖より酸の産生（窒素源にＮＨ₄ Ｈ₂ ＰＯ₄ ） アドニトール − Ｌ（＋）−アラビノース − セロビオース − ズルシトール − メリ−エリスリトール − フラクトース ＋

【００２７】 Ｄ−ガラクトース − Ｄ−グルコース ＋ グリセリン ＋ イノシトール − イヌリン − ラクトース − マルトース − マンニトール −

【００２８】 マンノース − メレジトース − メリビオース − ラフィノース − Ｌ（＋）−ラムノース − Ｄ−リボース − サリシン − Ｌ−ソルボース − ソルビトール −

【００２９】 スタ−チ − サッカロース ＋ トレハロース （＋） Ｄ−キシロース ＋

【００３０】６．その他の分析（化学分析等） 本菌株ＴＭ−１の主性状 グラム陽性菌の細菌で短時間培養菌では桿状を示し、定
常期の細胞は球状〜短桿状になる。また、Ｖ、Ｙ字形の
細胞も観られる。運動性なし、カタラーゼ非産生、グル
コースを酸化的に分解し、酸を産生する。

【００３１】本菌株ＴＭ−１の同定 グラム陽性の細菌で桿状細胞から球状細胞に変化し、
Ｖ、Ｙ字形（擬分岐）等の配列を示す菌属は、Ｃｏｒｙ
ｎｅｆｏｒｍ群のＡｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ属がある。
本菌株の主性状から判断しＡｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ属
に属するものと判断した（他のＣｏｒｙｎｅｆｏｒｍ群
も検索したが該当する菌属の記載はなかった）。

【００３２】本菌株ＴＭ−１の諸性状とＡｒｔｈｒｏｂ
ａｃｔｅｒ属の各菌種の諸性状を対比した結果Ａ．ｓｉ
ｍｐｌｅｘが糖よりの酸産生パターンは似ているが、澱
粉の分解能、カタラーゼ産生能及びリトモスミルク培地
での生育の特徴が、一致しなかった。よって、本菌株を
アースロバクター・エスピー ＴＭ−１（Ａｒｔｈｒｏ
ｂａｃｔｅｒ ｓｐ．ＴＭ−１）と同定命名した。本
菌、アースロバクター・エスピー（Ａｒｔｈｒｏｂａｃ
ｔｅｒ ｓｐ．）ＴＭ−１株は工業技術院微生物工業技
術研究所に寄託した（微工研条寄第３６７６号、ＦＥＲ
Ｍ ＢＰ−３６７６）。

【００３３】本発明の有効成物ＡＣ８００７物質を得る
には、まず、上記の微生物またはＡＣ８００７物質を採
取し得る量でＡＣ８００７物質を生産し得る能力を有す
る変異株又は変種を常法にしたがって培地中で好気的に
培養する。本発明で例示する培地としては、上記アース
ロバクター属に属するＡＣ８００７物質生産菌を、イオ
ン交換純水１l あたり、イソプロピルアルコール１０m
l、酵母エキス０．３ｇ、ペプトン３．０ｇ、硝酸アン
モニウム３．０ｇ、リン酸カリウム０．４ｇ、リン酸二
ナトリウム１．５ｇ、硫酸マグネシウム０．５ｇ、硫酸
マンガン１０mg、硫酸亜鉛１０mg、硝酸銅５０μｇ、三
酸化モリブデン１０μｇ、炭酸カルシウム５．０ｇを含
有する殺菌した培地１００mlを収容した５００ml容三角
フラスコに植菌して、３０℃で３日間振とう培養すれば
よい。この培養物を、上記同様の培地１００mlを含む５
００ml容三角フラスコに、１ml植菌して、３０℃で５日
間振とう培養すればよい。

【００３４】このようにして得られた培養物からＡＣ８
００７物質を採取するには、ＡＣ８００７物質が主に培
養濾液中に存在するため、例えば培養物を濾過し、その
濾過液に非水溶性有機溶媒、たとえば酢酸エチル、ブタ
ノール、酢酸ブチルなどを加え、酸性pHにて抽出し、次
いでアルカリpHで水に転溶し、さらに酸性pHで溶媒抽出
すればよい。これをさらに、シリカゲル、アルミナ、合
成吸着剤などによるクロマトグラフイーに付して、分離
生成するか、また、高速液体クロマトグラフイーなどを
用いて分離取得することもできる。また、得られたＡＣ
８００７物質は、公知の方法によりナトリウム塩などの
アルカリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩等のア
ルカリ土類金属塩、アンモニウム塩、公知の非毒性有機
アミンとの塩などの塩とすることもできる。このように
して得られたＡＣ８００７物質は、前記したような理化
学的性質を有する。本発明のＡＣ８００７物質は、以下
に示す作用を有する。

【００３５】（１）抗腫瘍作用 １）Ｓａｒｃｏｍａ−１８０に対する光増感治療効果 一群５匹のＩＣＲマウス２０ｇ（雄）の背部一ケ所にｓ
ａｒｃｏｍａ−１８０（１×１０⁸ ｃｅｌｌｓ／ml）を
０．０５ml皮内接種した。２日後にＡＣ８００７物質、
ヘマトポルフイリン（ＨｐＤ；シグマ社製）をそれぞれ
１５mgを３mlの０．１ｍＭトリス塩酸緩衝液（pH７．
４）を加えた生理食塩水に溶解し、０．２mlをマウス腹
腔内に投与した。

【００３６】１０分後にペントバルビタール麻酔を行
い、さらに１０分後にハロゲンランプ（ＪＲ１５Ｖ１５
０ＷＢ）を使用したルミナエースＬ−１５０Ｓ（林時計
製）により光照射を１０分間、腫瘍部位に熱が伝わらな
いように行つた。３日目から腫瘍の長径と短径を測定
し、以下の式に基き計算した値を腫瘍の大きさとした。 結果 ＡＣ８００７物質は、５０mg／kg腹腔内投与後、２０分
に光を照射することにより表１および図５に示すとおり
著名なｓａｒｃｏｍａ−１８０の増殖を抑制した。

【００３７】

【表１】

【００３８】２）Ｓａｒｃｏｍａ−１８０に対する作用 上記１）と同様の方法で、ＩＣＲマウスを１群３匹使用
した。ＡＣ８００７物質、ヘマトポルフイリンジハイド
ロクロライド（ＮＯ．Ｈ−１８７５、純度約７５％、シ
グマ社製）、ヘマトポルフイリン（ＮＯ．Ｈ−５５１
８、純度約５０％、シグマ社製）を、それぞれ２５mg／
kg、１２．５mg／kg、６．３mg／kgとなるよう５mg／２
ml、２．５mg／２ml、１．２５mg／２ml溶液を０．１Ｍ
トリス塩酸緩衝液（pH７．４）を加えた生理食塩水で調
製した。この混合溶液０．２mlをマウスの腹腔内に投与
し、治療効果を検べた。結果は、表２および図６に示す
とおりで、ＡＣ８００７物質は、対照薬として使用した
ヘマトポルフイリンおよびヘマトポルフイリン２・ＨＣ
l よりも効果が優れていることが確認された。

【００３９】

【表２】

【００４０】（２）腫瘍診断への応用 ＩＣＲマウスの背部一ケ所にＳａｒｃｏｍａ−１８０
（１×１０⁸ ｃｅｌｌｓ／ml）を０．０５ml皮内接種し
た。２日後にＡＣ８００７物質５０mg／kg投与し、光ガ
イドを通じて照射すると、腫瘍は蛍光により局所決定が
できる。

【００４１】（３）抗腫瘍作用 １）Ｂ−１６メラノーマに対する光増感治療効果 一群３匹のＢＤＦ₁ マウス２０ｇ（雄）の背部一ケ所に
Ｂ−１６メラノーマ（２×１０⁷ ｃｅｌｌｓ／ml）を
０．０５ml皮内接種した。７日後にＡＣ８００７物質、
ヘマトポルフイリン（ＨｐＤ；シグマ社製）をそれぞれ
５０mg／kg、２５mg／kg、１２．５mg／kgとなるように
１０mg／２ml、５mg／２ml、２．５mg／２ml溶液を０．
１Ｍトリス塩酸緩衝液（pH７．４）を加えた生理食塩水
に溶解し、０．２mlをマウス腹腔内に投与した。１０分
後にペントバルビタール麻酔を行い、さらに１０分後に
ハロゲンランプ（ＪＲ１５Ｖ１５０ＷＢ）を使用したル
ミナエースＬ−１５０Ｓ（林時計製）により光照射を１
０分間、腫瘍部位に熱が伝わらないように行った。８日
目から腫瘍の長径と短径を測定し、以下の式に基き計算
した値を腫瘍の大きさとした。

【００４２】結果 ＡＣ８００７物質は、５０mg／kg、２５mg／kg腹腔内投
与後、２０分に光を照射することにより表３および図８
に示すとおり著名なＢ−１６メラノーマの増殖を抑制
し、ＨｐＤの光照射による光増感治療は表３および図９
に示した。

【００４３】

【表３】

【００４４】以上のＳａｒｃｏｍａ−１８０、Ｂ−１６
メラノーマを用いた腫瘍形成マウスに対し、ＡＣ８００
７物質はＰＤＴにより治療効果が認められ、ヒト肺由来
悪性腫瘍Ａ５４９株、ヒト大腸由来悪性腫瘍ＡＺ５２１
株、ヒトメラノーマＧ３６１株やヒト子宮頸部由来Ｈｅ
ｌａ細胞などのヒト由来腫瘍に対しても有効であると認
められる。

【００４５】（３）急性毒性 ＡＣ８００７物質をマウスに４００mg／kg腹腔内投与し
ても死亡例はみられなかつた。 （４）マウス急性光毒性実験 光増感剤は生体に取り込まれ、直射日光にあたると光過
敏症を引き起こす。症状は初めヒフの紅斑と痛痒で始ま
り、その後水腫が発生し、数日後腫脹はひくがヒフの壊
死が観察される。重篤な場合、昏睡状態になり死亡する
例もある。 １）実験方法 ＩＣＲ（♂、２２〜２５ｇ）マウス（１群３匹）にＡＣ
８００７、ＨｐＤをそれぞれについて１００mg／kg、５
０mg／kgとなるように、腹腔内投与を行った。投与直後
からマウスの上部からハロゲンランプ（ルミナエース、
林時計（株）、ＪＣＲ１５Ｖ、１５０ＷＢ）により２時
間（２５〜２８℃温度条件に維持）照射した。この時、
３２０００ルックスであった。その後普通飼育し、マウ
ス体重と生死を観察した。 ２）実験結果 その結果を表４に示す。

【００４６】

【表４】

【００４７】上記の表４に示す通り、ＡＣ８００７物質
（１００mg／kg、５０mg／kg）投与群では死亡例は認め
られなかった。ＨｐＤ１００mg／kg投与群では全例翌日
までに死亡し、５０mg／kg投与群では翌日１／３例の死
亡例が認められた。体重変化については図１０に示す通
りであり、ＡＣ８００７物質群は無投与照射コントロー
ル群と同じ様に体重の増加が認められた。ＨｐＤ５０mg
／kg投与群で生き残り２／３例の体重変化は翌日、翌々
日まで体重減少が認められ、７２時間後に回復した。以
上のように急性光毒性においてＡＣ８００７物質はＨｐ
Ｄにくらべ高い安全性を認めた。

【００４８】以上に述べたように、ＡＣ８００７物質
を、０．１Ｍトリス塩酸緩衝液を含む生理食塩水（pH
７．４）に溶解し、腹腔内投与、静脈内投与、経口投与
等により、本物質を投与することにより、腫瘍部位に行
き渡つている期間に、光、レーザー、超音波、Ｘ線など
の照射を行うものである。その結果、悪性腫瘍細胞を壊
死にいたらしめ、悪性腫瘍の増殖を抑制することができ
る。したがつて、本発明の有効物質ＡＣ８００７物質の
投与量としては、１日成人１人当り１〜１０mg／kgであ
り、投与方法としては、無菌緩衝液（pH７．４付近）を
加えた生理食塩水に溶解し、静脈内投与、局所投与ある
いは経口投与により行う。

【００４９】

【発明の効果】本発明は、ＡＣ８００７物質の光増感・
蛍光作用により悪性腫瘍の治療ならびに診断に有効であ
る。

【００５０】実施例 １ （１）アースロバクター・エスピー・ＭＴ−１（ＦＥＲ
Ｍ ＢＰ−３６７６）を、イオン交換純水１l あたり、
イソプロピルアルコール１０ml、酵母エキス０．３ｇ、
ペプトン３．０ｇ、硝酸アンモニウム３．０ｇ、リン酸
カリウム０．４ｇ、リン酸二ナトリウム１．５ｇ、硫酸
マグネシウム０．５ｇ、硫酸マンガン１０mg、硫酸亜鉛
１０mg、硫酸銅５０μｇ、三酸化モリブデン１０μｇ、
炭酸カルシウム５．０ｇを含有する殺菌した培地１００
mlを収容した５００ml容三角フラスコに植菌して、３０
℃で３日間振とう培養した。この培養物を、上記同様の
培地１００mlを含む５００ml容三角フラスコに、１ml植
菌して、３０℃で５日間振とう培養した。この培養物を
５００ml容フラスコ２００本を合わせた後、遠心分離に
よって除菌して培養上清約１９l を得た。

【００５１】（２）上記（１）で得た培養上清液を酢酸
でpHを２．０に調整後、酢酸エチル８l で有効成分を抽
出した。この抽出液に水４l を加え、水層のpHをアンモ
ニア水で９．０に調整した後、抽出操作を行つた。分液
した水層を約５００mlにまで減圧濃縮した。濃縮液を吸
着樹脂（ダイヤイオンＨＰ−２０、三菱化成社製）４０
０mlのカラムに通した。水３l で洗浄後、水３l および
８０％アセトン水３lを用いる直線型濃度勾配により溶
出を行つた。最初の２l を捨て、その後、１７ｇづつの
分画を行うと、フラクションＮｏ．８７〜１５０に有効
成分が溶出された。これらのフラクションを集めて減圧
濃縮して暗赤色粉末を得た。

【００５２】この粉末を予めブタノール−エタノール−
クロロホルム−アンモニア水（４：５：２：３）の混合
溶媒で充填したシリカゲル（メルク社製、Ａｒｔ７７３
４、３５０ml）のカラムにチャージし、上記と同一の混
合溶媒で溶出した。最初の６００mlを捨て、その後、１
７ｇづつの分画を行うと、フラクションＮｏ．１１〜４
０に有効成分が溶出された。これらのフラクションを集
めて減圧濃縮してＡＣ８００７物質の暗赤色粉末を得
た。

【００５３】（３）上記（２）で得た暗赤色粉末を、メ
タノール５０％酢酸アンモニウム水溶液（５５：４５）
の混合溶媒２mlに溶解し、これをオクタデシルシリカゲ
ル（山村化学社製、ＹＭＣ−ＧＥＬ−ＯＤＳ、６６２m
l）のカラムにチャージし、前記と同一混合溶媒で溶出
した。これを２０mlづつ分画を行うとフラクションＮ
ｏ．４２〜５５に有効成分が溶出された。これらのフラ
クションを集めて減圧下メタノール留去した。残渣を吸
着樹脂（三菱化成社製、ダイヤイオンＨＰ−２０、１０
０ml）のカラムに通した。水１l で洗浄後、８０％アセ
トン水で溶出した。溶出液を減圧濃縮し、残渣を酢酸エ
チルに溶解した。

【００５４】この溶液を１０ｍＭエチレンジアミンテト
ラアセテート水溶液（pH２）で洗浄した後、酢酸エチル
層を減圧濃縮した。残渣にヘキサンを加え、析出した沈
澱物をガラスフイルター上に集め、減圧乾燥して精製さ
れたＡＣ８００７物質（遊離液）を暗赤色粉末として得
た。収量１５９mg。

【００５５】（４）上記（３）でＡＣ８００７物質（遊
離液）１０mgを４Ｎアンモニア水１mlに溶解した後、凍
結乾燥してＡＣ８００７物質のアンモニウム塩を得た。
収量１１mg。

【００５６】実施例 ２ 一群３匹のＩＣＲマウス、２０ｇ、雄の背部にｓａｒｃ
ｏｍａ−１８０（１×１０⁸ ｃｅｌｌｓ／ml）を０．０
５ml皮内に接種し、２日後にＡＣ８００７物質を腹腔内
に投与した。１０分後にペントバルビタール麻酔を行
い、更にその後、１０分後にハロゲンランプ（ＪＣＲ１
５Ｖ１５０ＷＢ）を使用したルミナエースＬ１５０ｓ
（林時計製）により光照射を１０分間、腫瘍部位に熱が
伝わらないように行つた。腫瘍の大きさを３日目から８
日目にかけて測定し、表１および表２に示すようなＡＣ
８００７物質の著名な腫瘍増殖抑制作用が認められた。

【００５７】実施例 ３ ＡＣ８００７物質を無菌生理食塩水（pH７．５付近に調
整）に５mg／mlとなるよう溶解した。これを０．２２μ
ｍミリポアフイルターで無菌濾過し、注射剤とした。

【図面の簡単な説明】

【図１】溶媒としてメタノールを用いたときのＡＣ８０
０７物質の可視部吸収スペクトルである。

【図２】溶媒として０．１ＮＨＣl ・メタノールを用い
たときのＡＣ８００７物質の可視部吸収スペクトルであ
る。

【図３】ＡＣ８００７物質の赤外線吸収スペクトルであ
る。

【図４】ＡＣ８００７物質のプロトン核磁気共鳴スペク
トルである。

【図５】ＡＣ８００７物質の光増感治療効果を示した曲
線である。

【図６】ＡＣ８００７物質の光増感治療効果を示した曲
線である。

【図７】ＡＣ８００７物質の蛍光スペクトルである。

【図８】ＡＣ８００７物質の光増感治療効果を示した曲
線である。

【図９】対照としてのヘマトポルフイリン（ＨｐＤ）の
光増感治療効果を示した曲線である。

【図１０】ＡＣ８００７物質およびヘマトポルフィリン
（ＨｐＤ）のマウス急性光毒性実験における体重変化の
曲線である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:06） 7804−4Ｂ

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 以下の理化学的性質を有するＡＣ８００
   ７物質またはその非毒性塩を有効成分とすることを特徴
   とする悪性腫瘍の治療剤または診断剤。 （１）元素分析値 Ｃ：約６０％、Ｈ：約５％、Ｎ：約８％、Ｚｎ：約８〜
   １０％ （２）質量分析値 ７１７（ＭＨ⁺ 、ＦＡＢ−ＭＳによる） （３）分子式 Ｃ₃₆Ｈ₃₆Ｏ₈ Ｎ₄ Ｚｎ （４）可視部吸収スペクトル 【化１】 少なくとも３８６（肩）（７５０）、４０６（３５２
   ５）、５３８（１８５）、５７４（１９０）ｎｍ付近に
   特徴的な吸収を有する 【化２】 少なくとも３８６（肩）（１２７５）、４０２（４６９
   ０）、５６０（１７５）、５９１（６０）ｎｍ付近に特
   徴的な吸収を有する （５）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ法） 少なくとも３４２０、２９２０、１７０５、１４００、
   １２７５、１１３０、９４０、８３５cm^-1付近に特徴的
   な吸収を有する （６）溶剤に対する溶解性 メタノール、酢酸エチル、酢酸、ジメチルスルホキシド
   に可溶性、水、ヘキサン、ベンゼンに不溶性 （７）呈色反応 過マンガン酸カリウム反応、ヨード反応は陽性、塩化第
   二鉄反応、ドラーゲンドルフ反応、ニンヒドリン反応は
   陰性 （８）塩基性、酸性、中性の区別 酸性物質 （９）物質の色 暗赤色
2. 【請求項２】 ＡＣ８００７物質が下記の推定化学構造
   式を有することを特徴とする請求項１記載の悪性腫瘍の
   治療剤または診断剤。 【化３】
3. 【請求項３】 アースロバクター属に属するＡＣ８００
   ７物質生産菌を培地に培養し、次いで培養物よりＡＣ８
   ００７物質を採取することを特徴とするＡＣ８００７物
   質の製造法。
4. 【請求項４】 アースロバクター属に属するＡＣ８００
   ７物質生産菌が、アースロバクター・エスピー・ＴＭ−
   １（ＦＥＲＭ ＢＰ−３６７６）である請求項３記載の
   製造法。