JPH05213977A - オステオポローシスの処置において有用なトリフルオロメチルベンジルホスホネート - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【構成】 一般式Ｉ： （Ｒ_１とＲ_２は水素、アルキル、アルケニル、ヒドロキ
シアルキル、アルコキシアルキル、アラルキル、アリー
ルまたはアミノアルキルで、Ｒ_３とＲ_５の各々はＨまた
はＣＦ_３で、ただしＲ_３またはＲ_５の一方のみがＣＦ_３
であることができ、Ｒ_４とＲ_６の各々はＨまたはＣＦ_３
で、ただしＲ_４とＲ_６のいずれかまたは両者がＣＦ_３で
ある場合Ｒ_３とＲ_５のいずれもＣＦ_３でなく、さらにＲ
_３〜Ｒ_６の各々は同時にＨであることができず、さらに
Ｒ_４とＲ_６がＣＦ_３であるときにのみＲ_１とＲ_２の両者
はエチルであることができる）のベンジルホスホネート
化合物。 【効果】 哺乳動物の骨の形成および骨の量を増加す
る、閉経後のオステオポローシスを包含する骨を消耗す
る病気を処置するとき有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】オステオポローシス(osteoporosis)は、合
計の骨の量の減少を生ずる骨の形成速度と吸収との間の
平行異常(imbalance)またはアンカップリング(uncoupli
ng)が存在する、骨を消耗する病気である。骨の量のこ
の減少の結果、骨格は弱化しそして正常の体重を支える
ストレスにたえることができなくなる。オステオポロー
シスの効果は、一般に骨格の体重を支える部分、ことに
脊椎および股関節部において見られ、これは外傷の不存
在下に骨折を起こすことがある。オステオポローシスは
米国において約２４００万人そして世界中で１億人に影
響を与え、そして中年すぎの女性において毎年２５０万
回の骨折を引き起こすとして非難されている。

【０００２】外傷後のオステオポローシスのための現在
の治療は、ほとんどの部分が予防的である処置から成
る；エストロゲンの置換、ビスホスホネート、ビタミン
Ｄ代謝物およびカルシウムの補助物質は閉経の開始に関
連する骨の吸収を抑制する作用をする。これらの患者に
おけるエストロゲンの置換は骨の量のそれ以上の損失を
減少するとき非常に有効であるが、骨折の危険および痛
みの減少に必要な骨の量の増加を誘発しない。これらの
処置は、高い骨折の危険および関節背後の痛み（ｂａｋ
ｃ／ｊｏｉｎｔ ｐａｉｎ）を有する、骨の量の現存す
るオステオポローシス誘発損失を有する患者の処置にお
いて、ほとんど実用性をもたない。１００ｍｇ／ｃｃよ
り小さい椎骨の損失をもつ閉経後の女性は「骨折の限
界」より下であると考えられ、そして骨の量を増加し、
これにより損失した骨を回復する薬物を使用する処置に
ついての候補であろう。本発明は、個体の骨の量を増加
し、これにより骨折の危険を減少または排除することに
よる骨を消耗する病気を処置するとき有用である薬物に
焦点を合わせる。この型の薬物に必要な治療は、ことに
エストロゲン置換の治療に関連する劣った患者のコンプ
ライアンスを考えるとき、明瞭に存在する。

【０００３】米国特許第４，６１０，８０７号はジエチ
ル３−トリフルオロメチルベンジルホスホネートを開示
している。この化合物はこの特許において特別に特許請
求または特徴づけられていないが、医学以外の用途（繊
維材料の増白剤）をもつ無関係の化合物のための粗製の
合成中間体としてその場で明らかに使用されている。酸
はこの参考文献において開示または特許請求されていな
い。異性体のオルトおよびパラのトリフルオロメチルベ
ンジルホスホネートは同様にエステルとして開示されて
いる。

【０００４】米国特許第２，９１７，５３３号は、抗ヒ
スタミン、抗バクテリアおよび除草または植物成長調節
活性の実用性を特許請求する、いくつかの置換ベンジル
ホスホン酸およびエステルを開示している。

【０００５】一般式Ｉ：

【０００６】

【化５】

【０００７】式中、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄、Ｒ₅およびＲ₆
は後で定義する、の新規なベンジルホスホネート化合物
は、一般に骨の劣化または吸収を抑制を包含する伝統的
なアプローチよりむしろ、骨のカルシウム化の増強によ
りオステオポローシスを包含する骨を消耗する病気を処
理する実用性を有することが発見された。本発明は、ま
た、式Ｉの化合物を含有する製剤学的組成物およびこの
ような化合物および組成物を投与することによってオス
テオポローシスを処置する方法に関する。

【０００８】本発明は、式Ｉ：

【０００９】

【化６】

【００１０】の化合物に関する。式中、Ｒ₁およびＲ₂は
同一もしくは相異なり、そして水素、Ｃ_１−Ｃ_８アルキ
ル、Ｃ_１−Ｃ_８アルケニル、ヒドロキシアルキル（ここ
でアルキル部分はＣ_１−Ｃ_８である）、アルコキシアル
キル（ここでアルキル部分はＣ_１−Ｃ_８である）、アラ
ルキル（ここでアルキル部分はＣ_１−Ｃ_８である）、例
えば、ベンジル、フェニルエチル、フェニルプロピル、
アリール、例えば、フェニルまたはアミノアルキルのい
ずれから選択される。アミノアルキルは、式−（Ｃ
Ｈ₂）_n−ＮＲ₇Ｒ₈であり、式中、ｎ＝２〜６であり、そ
してＲ₇およびＲ₈は同一もしくは相異なり、そしてＨ、
Ｃ_１−Ｃ_４アルキル、アラルキル（ここでアルキル部分
はＣ_１−Ｃ_４である）のいずれから選択されるか、ある
いはＲ₇およびＲ₈は一緒になってＮ、ＯおよびＳのいず
れから選択される１または２以上の異種原子を含有する
複素環を形成する。適当な環系の例は、ピペリジノ、モ
ルノリノ、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソ
キノリニル、チオモルホリノおよび置換ピペラジノのい
ずれから選択され、ここでピペラジノはＮ−４位置にお
いてＲ₉により置換されており、Ｒ₉はＣ_１−Ｃ_４アルキ
ル、またはアラルキル（ここでアルキル部分はＣ_１−Ｃ
_４アルキルである）またはフェニルのいずれか１つから
選択される。

【００１１】Ｒ₃およびＲ₅の各々はＨまたはＣＦ₃であ
ることができ、ただしＲ₃またはＲ₅の一方のみが同時に
ＣＦ₃であることができる。Ｒ₄およびＲ₆の各々はＨま
たはＣＦ₃であることができ、ただしＲ₄およびＲ₆のい
ずれかまたは両者がＣＦ₃である場合、Ｒ₃およびＲ₅の
いずれもＣＦ₃であることができず、さらにＲ₃〜Ｒ₆の
各々は同時にＨであることができない。

【００１２】ここで使用するとき、用語「アルキル」、
「アルケニル」および「アルコキシ」は、単独でまたは
他の部分と一緒に使用するとき、直鎖状および分枝鎖状
の両者のアルキル基を包含する。

【００１３】用語「アリール」は、単独でまたは他の用
語と組み合わせでここで使用するとき、芳香族炭化水素
基、例えば、フェニルまたはナフチル基を示す。用語
「アラルキル」は、アリール基で置換した低級Ｃ_１−Ｃ
_８アルキル基を含有する基を示す。

【００１４】本発明の化合物は、また、製剤学的に許容
されうる塩、例えば、ナトリウム、カリウム、アルギニ
ン、リジン、アルキルアンモニウム、例えば、シクロヘ
キシルアミンおよびトリス（ヒドロキシエチル）アミン
の形態でであることができる。塩基性エステルは、ま
た、塩、例えば、塩酸、臭化水素酸、ｐ−トルエンスル
ホネート、メシレート、および有機酸、例えば、フマレ
ートの形態であることができる。

【００１５】本発明によれば、化合物は次の一般の反応
の概要に従い製造することができる。

【００１６】

【化７】

【００１７】示すように、出発物質、Ｘがクロロまたは
ブロモであり、そしてＲ₃、Ｒ₄、Ｒ₅およびＲ₆がここに
定義した通りである、トリフルオロハライドをトリアル
キルホスファイトと約５０℃〜２００℃の温度において
反応させて、式ＩＩＩのトリフルオロベンジルホスホネ
ートを生成する。酸、例えば、塩酸または他の適当な
酸、例えば、（ＣＦ₃）₃ＳｉＢｒ、ＨＢｒまたはＢＢｒ
₃を使用して加水分解を使用して、式ＩＶのホスホン酸
を生成する。あるいは、式ＩＩＩの化合物を塩基、例え
ば、水酸化カリウムまたは水酸化ナトリウムと反応させ
て、対応する式Ｖ対応するモノ酸生成物を生成する。モ
ノ酸の式ＩＶの酸クロライドへの転化は、塩化オキサリ
ルおよびジメチルホルムアミドまたはＰＣｌ₅を使用し
て達成することができる。次いで、式ＶＩＩの混合ジエ
ステルは、式ＶＩの化合物を適当なアルコール、例え
ば、ジエチルアミノエタノール、３−フェニルプロパノ
ール、メトキシエタノール、エチレングリコールおよび
他のよく知られたアルコールと反応させることによって
調製することができる。

【００１８】本発明の製剤学的組成物を調製するため
に、式Ｉの化合物を活性成分として製剤学的担体と普通
の製剤学的配合技術により混合し、この担体は投与、例
えば、経口的に、座薬により、注射により、あるいは非
経口的に望ましい調製物の形態に依存して広範な種類の
形態を取ることができる。経口的投与形態の組成物の調
製において、任意の通常の製剤学的培地を使用すること
ができる。こうして、液体の経口的調製物、例えば、懸
濁液、エリキシルおよび溶液のために、適当な担体およ
び添加剤は、水、グリコール、油、アルコール、香味
剤、防腐剤、着色剤などを包含する。固体の経口的調製
物、例えば、粉末、カプセル剤および錠剤のために、適
当な担体および添加剤は、澱粉、糖、希釈剤、造粒剤、
滑剤、結合剤、崩壊剤などを包含する。投与の容易のた
めに、錠剤およびカプセル剤は最も有利な経口的投与単
位形態を表し、この場合において固体製剤学的担体は明
らかに使用される。必要に応じて、錠剤は標準技術によ
り糖被覆または腸溶被覆することができる。座薬のため
に、担体は通常カカオバターからなる。非経口的薬物の
ために、担体は通常無菌の重量比からなるが、他の成分
を、例えば、溶解の促進または防腐の目的で含めること
ができる。注射可能な懸濁液をまた調製することがで
き、この場合において、適当な液体の担体、懸濁剤など
を使用することができる。ここにおいて製剤学的組成物
は、単位投与量、例えば、カプセル剤、粉末、注射、座
薬、茶さじ１杯など当たり、約０．１〜１００ｍｇ／ｋ
ｇを含有する。連続的１日の投与または期間後の投与の
使用は可能である。

【００１９】次の実施例によって、本発明をさらに説明
する。これらの実施例は本発明を限定しない。実施例
１、２、３および５〜１４は本発明の化合物を例示す
る。実施例４は、実施例５、６および７の化合物のいず
れかを得るための中間体の調製を例示する。

【００２０】

【実施例】実施例１ ジエチル３−トリフルオロメチルベンジルホスホネート ３−トリフルオロメチルベンジルブロミドブロミド
（５．７４ｇ、２４．０ミリモル）およびトリエチルホ
スファイト（４．９８ｇ、３０ミリモル）の混合物を、
窒素雰囲気下に３時間還流において加熱した。過剰のト
リエチルホスファイトを蒸留により除去し、そして得ら
れる粗生成物を１４０〜１４５℃および４ｍｍにおいて
蒸留して、６．４４ｇ（９０．７％）の分析的に精製な
生成物が透明な液体水性得られる、Ｄ．Ｃ．Ｉ．Ｍ．
Ｓ．［ＭＨ⁺、２９７］。

【００２１】実施例２ ３−トリフルオロメチルベンジルホスホン酸 ジエチル３−トリフルオロメチルベンジルホスホネート
（３．０ｇ、１０．０ミリモル）を５０ｍｌの濃塩酸お
よび１．５ｍｌのＥｔＯＨの混合物中に溶解し、そして
１７時間加熱還流した。透明な反応混合物を氷水混合物
中で冷却後、形成した白色結晶質を集めると、２．０５
ｇ（８４．３％）の分析的に純粋な生成物が得られた、
融点１６３−１６４℃、Ｄ．Ｃ．Ｉ．Ｍ．Ｓ．［Ｍ
Ｈ⁺、２４１］。

【００２２】実施例３ エチル３−トリフルオロメチルベンジルホスホン酸 ジエチル３−トリフルオロメチルベンジルホスホネート
（１０．０ｇ、３４．０ミリモル）を３００ｍｌの７５
％の水性エタノールおよび１８．９ｇのＫＯＨの混合物
中に溶解し、そして生ずる混合物を３時間還流加熱し
た。反応混合物をＨ₂Ｏ中に注ぎ、塩酸で酸性化し、そ
してＣＨＣｌ₃（３×５００ｍｌ）で抽出しした。クロ
ロホルムの抽出液を無水Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥し、そして蒸
発させると、８．６４ｇ（９４．７％）の白色固体生成
物が得られた、融点４８−５１℃、Ｄ．Ｃ．Ｉ．Ｍ．
Ｓ．［ＭＨ⁺、２６９］。

【００２３】実施例４ ３−トリフルオロメチルベンジルホスホン酸エチルエス
テル エチル３−トリフルオロメチルベンジルホスホン酸
（７．４６ミリモル）を１５ｍｌのＣＨ₂Ｃｌ₂中に溶解
し、そして窒素雰囲気下に０℃に冷却した。塩化オキサ
リル（０．９５ｇ、７．４６ミリモル）を添加した後、
０．０３ｍｌのＤＭＦを３つの部分でゆっくり添加し、
そして生ずる混合物を室温において３時間撹拌した。真
空蒸発すると、粗製クロライドをそれ以上精製しないで
使用した。

【００２４】実施例５ アリルエチル３−トリフルオロメチルベンジルホスホネ
ート 実施例４の３−トリフルオロメチルベンジルホスホン酸
エチルエステル（０．２ｇ、０．７ミリモル）を２０ｍ
ｌのＣＨ₂Ｃｌ₂中に溶解し、そして０℃において２０ｍ
ｌのＣＨ₂Ｃｌ₂中の１．０ミリモルのアリルアルコール
および１．０ｇのトリエチルアミンの混合物にゆっくり
添加する。反応混合物を５時間撹拌し、次いでＨ₂Ｏで
希釈した。水性相をさらにＣＨ₂Ｃｌ₂で３回抽出した。
有機抽出液を一緒にしそして、無水Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥
後、油として粗生成物を生成した。シリカゲルのカラム
クロマトグラフィーにより精製し、酢酸エチル／ヘキサ
ン（２．５：１）を使用すると、０．１４ｇ（６３％）
の分析的に純粋な生成物が無色の油として得られた、
Ｄ．Ｃ．Ｉ．Ｍ．Ｓ．［ＭＨ⁺、３０９］。

【００２５】実施例６ ジエチルアミノエチルエチル３−トリフルオロメチルベ
ンジルホスホネート エチル３−トリフルオロメチルベンジルホスホン酸
（７．５５ｇ、２８ミリモル）を１００ｍｌのＣＨ₂Ｃ
ｌ₂中に溶解し、そして窒素雰囲気下に０℃に冷却し
た。塩化オキサリル（２８ミリモル）を添加した後、
０．５ｍｌのＤＭＦを３つの部分でゆっくり添加し、そ
して反応混合物を室温において３時間撹拌した。真空蒸
発すると、粗製の酸クロライドが得られ、これを９０ｍ
ｌのＣＨ₂Ｃｌ₂中に溶解し、そして０℃に冷却した６０
ｍｌのＣＨ₂Ｃｌ₂中のＮ，Ｎ−ジエチルアミノエタノー
ル（３．２９ｇ、２８ミリモル）およびトリエチルアミ
ン（３．４２ｇ、３４ミリモル）の混合物に滴々添加し
た。生ずる混合物を室温に加温し、そして４時間撹拌し
た。水を添加し（１００ｍｌ）そして水性相を３回ＣＨ
₂Ｃｌ₂で抽出した。一緒にした有機抽出液を無水Ｎａ₂
ＳＯ₄で乾燥し、そして粗生成物を油としてが得られ
た。精製をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーによ
り達成し、２％のＭｅＯＨおよび０．１％のＮＨ₃を含
有するＣＨ₂Ｃｌ₂を使用すると、１．１ｇの分析生成物
が油として得られた、Ｄ．Ｃ．Ｉ．Ｍ．Ｓ．［ＭＨ⁺、
３６８］。

【００２６】実施例７ エチル３−フェニルプロピル３−トリフルオロメチルベ
ンジルホスホネート ３−トリフルオロメチルベンジルホスホン酸モノエチル
エステル：１．５ｇ、５．６ミリモル）を２０ｍｌのＣ
Ｈ₂Ｃｌ₂中に溶解し、そして窒素雰囲気下に０℃に冷却
した。塩化オキサリル（８．４６ミリモル）を添加した
後、０．０４ｍｌのＤＭＦを３つの部分でゆっくり添加
し、そして生ずる混合物を室温において３時間撹拌し
た。真空蒸発すると、粗製クロライドが得られ、これを
それ以上精製しないで使用した。１５ｍｌのＣＨ₂Ｃｌ₂
中の３−フェニル−１−プロパノール（０．７６ｇ、
５．６ミリモル）を、０℃に冷却した粗製のクロロエチ
ル３−トリフルオロメチルベンジルホスホネート（５．
６ミリモル）、トリエチルアミン（０．８５ｇ、８．４
ミリモル）およびＣＨ₂Ｃｌ₂（２０ｍｌ）の冷混合物に
添加した。生ずる反応混合物を室温において４時間撹拌
した。揮発性成分を蒸発させると、定量的収量の期待し
た生成物がが得られた。カラムクロマトグラフィー（シ
リカゲル、２５％の酢酸エチル／ヘキサン）により精製
すると、１．６６ｇ（５２．３％）の分析的に純粋な生
成物が淡黄色油として得られた、Ｄ．Ｃ．Ｉ．Ｍ．Ｓ．
［ＭＨ⁺、３８７］。

【００２７】実施例８ ジエチル４−トリフルオロメチルベンジルホスホネート ４−トリフルオロメチルベンジルブロミド（５．６８
ｇ、２３．８ミリモル）およびトリエチルホスファイト
（１０．４ｇ、６３ミリモル）の混合物を窒素雰囲気下
に５時間時間還流した。過剰のトリエチルホスファイト
を蒸留により除去し、そして粗生成物を９５℃（０．０
７ｍｍＨｇ）において蒸留により精製すると、６．２７
ｇ（８９％）の生成物が油として得られた、Ｄ．Ｃ．
Ｉ．Ｍ．Ｓ．［ＭＨ⁺、２９７］。

【００２８】実施例９ ４−トリフルオロメチルベンジルホスホン酸 ジエチル４３−トリフルオロメチルベンジルホスホネー
ト（３．０ｇ、１０ミリモル）を５０ｍｌの濃塩酸およ
び５ｍｌのＥｔＯＨの混合物中に溶解し、そして１７時
間時間還流した。氷浴中でこの混合物を冷却した後、白
色結晶を集めた。固体をＨ₂Ｏから再結晶化すると、
１．８０ｇ（７５％）の分析的に純粋な生成物が得られ
た、融点１６３−１６４℃、Ｄ．Ｃ．Ｉ．Ｍ．Ｓ．［Ｍ
Ｈ⁺、２４１］。

【００２９】実施例１０ ジエチル２−トリフルオロメチルベンジルホスホネート ２−トリフルオロメチルベンジルクロライド（２．０
ｇ、１０．０ミリモル）およびトリエチルホスファイト
（２．１３ｇ、１３ミリモル）の混合物を窒素雰囲気下
に１６０℃３時間加熱した。過剰のトリエチルホスファ
イトを蒸留により除去し、そして得られた粗生成物を８
７〜９０℃（０．０５ｍｍＨｇ）において蒸留し、そし
て無色の油として単離した；収量、１．６８ｇ、５６．
８％、Ｄ．Ｃ．Ｉ．Ｍ．Ｓ．［ＭＨ⁺、２９７］。

【００３０】実施例１１ ２−トリフルオロメチルベンジルホスホン酸 ジエチル２−トリフルオロメチルベンジルホスホネート
（１．２２ｇ、４．１２ミリモル）を５０ｍｌの濃塩酸
および５ｍｌのＥｔＯＨの混合物中に溶解し、そして還
流温度において１７時間加熱した。氷浴中でこの混合物
を冷却した後、白色結晶を集めると、０．４６ｇ（４６
％）の所望の生成物が得られた、融点１９０−１９２
℃、Ｄ．Ｃ．Ｉ．Ｍ．Ｓ．［ＭＨ⁺、２４１］。

【００３１】実施例１２ ジエチル３，５−ビス（トリフルオロメチル）ベンジル
ホスホネート ３，５−ビス−トリフルオロメチルベンジルブロミド
（５．０ｇ、１６ミリモル）およびトリエチルホスファ
イト（３．４ｇ、２０ミリモル）の混合物を１６０℃に
おいて２０時間加熱した。反応混合物を冷却し、そして
８３℃（０．０３ｍｍＨｇ）において蒸留すると、２．
３６ｇの生成物が油として得られた、４８％の収量、
Ｄ．Ｃ．Ｉ．Ｍ．Ｓ．［ＭＨ⁺、３６５］。

【００３２】実施例１３ ３，５−ビス（トリフルオロメチル）ベンジルホスホン
酸 １５ｍｌの濃塩酸および０．５ｍｌのエタノール中のジ
エチル３，５−ビス（トリフルオロメチル）ベンジルホ
スホネート（１．０ｇ、２．７ミリモル）を７２時間還
流加熱した。この混合物を蒸発すると、油状残留物が得
られ、これは放置すると結晶化して、０．４１ｇ（４９
％の収率）の生成物が白色固体として得られた、融点２
０６−２０８℃、Ｄ．Ｃ．Ｉ．Ｍ．Ｓ．［ＭＨ⁺、３０
９］。

【００３３】実施例１４ エチルモルホリノエチル３−トリフルオロメチルベンジ
ルホスホネート ２０ｍｌのＣＨ₂Ｃｌ₂中の３−トリフルオロメチルベン
ジルホスホノクロラリド酸エチルエステル（７．０ミリ
モル）を、氷浴中で冷却した２０ｍｌのＣＨ₂Ｃｌ₂中の
Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）モルホリンおよびトリエ
チルアミン（７ミリモル）の混合物にゆっくり添加す
る。生ずる混合物を室温に到達させ、そして５時間撹拌
した。水（１００ｍｌ）を添加し、水性相を３回ＣＨ₂
Ｃｌ₂（３×１００ｍｌ）で抽出する。一緒にした有機
抽出液を無水ＭｇＳＯ_４で乾燥し、そして蒸発させる
と、所望の生成物が得られる。

【００３４】本発明の化合物は、骨の劣化または吸収の
抑制を一般に包含する伝統的アプローチよりむしろ、骨
のカルシウム化の増強によるオステオポローシスを包含
する骨を消耗する病気を処置する実用性を有する。本発
明の化合物は、生体内の骨の量および骨の形成の増強の
前兆となる骨芽細胞の培養物の増殖の刺激として評価し
た。

【００３５】骨芽細胞の増殖 骨芽細胞の成長に対する選択した化合物の作用は、ＤＮ
Ａの中への³Ｈ−チミジンの組み込み速度によりＤＮＡ
の合成速度を推定することによって、測定することがで
きる。ミトシスを行う細胞のみは新しいＤＮＡを合成
し、こうしてこれらの細胞のみは放射線標識したＤＮＡ
特異的チミジンを組み込むであろう。骨形成細胞、すな
わち、骨芽細胞の増殖および分化は、骨の形成および骨
の量の前提条件である。骨芽細胞の増殖および分化を増
加する薬物の能力は、培養した骨芽細胞系統の細胞への
薬物の生体内の作用により予測することができる。この
試験において、須藤ら（日本国郡山）によりクローニン
グされたマウス（ＭＣ３Ｔ３−８５）およびヒト（ＴＥ
−８５）骨芽細胞系統細胞［アメリカン・タイプ・カル
チャー・コレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ
Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）、＃ＣＲＬ１
５４３、マリイランド州ロックビレ］を試験管内培養
し、そして骨芽細胞の増殖への種々の薬物の作用を試験
した。骨芽細胞を文献の方法に従い分離しそして培養し
た［Ｊ．Ｅ．プザス（Ｐｕｚａｓ）、Ｒ．Ｈ．ドリブダ
ール（Ｄｒｉｖｄａｈｌ）、Ａ．Ｇ．ホウワード（Ｈｏ
ｗａｒｄ）およびＤ．Ｊ．ベイリンク（Ｂａｙｌｉｎ
ｋ）、プロシーディングス・オブ・ソサイアティ・フォ
ー・イクスペリメンタル・バイオロジー・アンド・メデ
ィシン（Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐｅｒ．Ｂｉｏｌ．Ｍ
ｅｄｓ．）、１６６、１１３−１２２、１９８１］。細
胞をほぼ全面成長に成長させた培養フラスコからトリプ
シンを使用して細胞を収穫した。細胞を９６ウェルの培
養プレートの中にプレイティングし、胎児子ウシ血清
（１０％）；ペニシリン（１００単位／ｍｌ）およびス
トレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）；ピルビン酸ナ
トリウム（１０μモルの最終濃度）を補充した２５ミリ
モルのＨＥＰＥＳ緩衝液、Ｌ−グルタミン（５８４ｍｇ
／ｌ）Ｄ−グルコース（４．５ｇ／ｌ）を有するダルベ
ッコ変性イーグル培地中の１００μｌ／ウェル中の１６
００細胞。５％のＣＯ₂／９５％の空気の雰囲気中の３
７℃において１０％の胎児子ウシ血清を含有するＤＭＥ
Ｍ中で細胞を一夜をプレイティングした。９６ウェルの
培養プレートの中に入れた後、すべての骨芽細胞、ＭＣ
３Ｔ３−Ｅ１またはＴＥ−８５の細胞系を０．１％のみ
胎児子ウシ血清を含有する培地中でさらに２４時間の間
予備インキュベーションした。次の日に、試験化合物を
添加し、そして研究に依存して１０^-4〜１０^-8モルの濃
度範囲においてスクリーニングした。２時間後、０．４
μＣｉの³Ｈ−チミジンを含有する培地の２０μｌのア
リコートを各培養ウェルに添加した。次いで細胞を培地
を吸引し、そしてＨＢＳＳ［ハンク均衡塩溶液（Ｈａｎ
ｋ’ｓ Ｂａｌａｎｃｅｄ Ｓａｌｔ Ｓｏｌｕｔｉｏ
ｎ）］で洗浄することによって、インキュベーションを
停止した。次いで細胞を１００μｌの０．５％のトリプ
シンおよび５．３ｍｍのＥＤＴＡで室温において３０分
間処置した。次いで細胞をガラス繊維のフィルター上に
吸引し、そして水で洗浄した。フィルターへの放射能を
液体シンチレーションスペクトル分析により定量した。
次いで、³Ｈ−チミジンの組み込み速度を細胞の増殖指
数として利用する。結果を表１に％×対照として表し、
ここで対照は１００％である。

【００３６】

【表１】

【００３７】本発明の主な特徴および態様は、次の通り
である。

【００３８】１、式Ｉ：

【００３９】

【化８】

【００４０】式中、Ｒ₁およびＲ₂は同一もしくは相異な
り、そして水素、アルキル、アルケニル、ヒドロキシア
ルキル、アルコキシアルキル、アラルキル、アリールま
たはアミノアルキルのいずれから選択され、Ｒ₃および
Ｒ₅の各々はＨまたはＣＦ₃であることができ、ただしＲ
₃またはＲ₅の一方のみが同時にＣＦ₃であることがで
き、Ｒ₄およびＲ₆の各々はＨまたはＣＦ₃であることが
でき、ただしＲ₄およびＲ₆のいずれかまたは両者がＣＦ
₃である場合、Ｒ₃およびＲ₅のいずれもＣＦ₃であること
ができず、さらにＲ₃〜Ｒ₆の各々は同時にＨであること
ができず、そしてさらにＲ₄およびＲ₆の各がＣＦ₃であ
るときにのみ、Ｒ₁およびＲ₂の両者はエチルであること
ができる、の化合物およびその製剤学的に許容されうる
塩。

【００４１】２、アミノアルキルが−（ＣＨ₂）_n−ＮＲ
₇Ｒ₈であり、ｎ＝２〜６であり、そしてＲ₇およびＲ₈は
同一もしくは相異なり、そしてＨ、アルキル、アラルキ
ルのいずれから選択されるか、あるいはＲ₇およびＲ₈は
一緒になってＮ、ＯおよびＳのいずれから選択される１
または２以上の異種原子を含有する複素環を形成する上
記第１項記載の化合物。

【００４２】３、複素環がピペリジノ、モルノリノ、チ
オモルノリノ、ピペラジノ、テトラヒドロイソキノリニ
ル、テトラヒドロキノリニルおよび置換ピペラジノのい
ずれから選択され、ここでピペラジノは末端のＮ−４位
置においてアラルキルおよびフェニルのいずれかにより
置換されている上記第２項記載の化合物。

【００４３】４、３−トリフルオロメチルベンジルホス
ホン酸、エチル３−トリフルオロメチルベンジルホスホ
ン酸、アリルエチル３−トリフルオロメチルベンジルホ
スホネート、ジエチルアミノエチルエチル３−トリフル
オロメチルベンジルホスホネートおよびエチル３−フェ
ニルプロピル３−トリフルオロメチルベンジルホスホネ
ートのいずれか１つから選択される上記第１項記載の化
合物。

【００４４】５、式Ｉ：

【００４５】

【化９】

【００４６】式中、Ｒ₁およびＲ₂は同一もしくは相異な
り、そして水素、アルキル、アルケニル、ヒドロキシア
ルキル、アルコキシアルキル、アラルキル、アリールま
たはアミノアルキルのいずれから選択され、Ｒ₃および
Ｒ₅の各々はＨまたはＣＦ₃であることができ、ただしＲ
₃またはＲ₅の一方のみが同時にＣＦ₃であることがで
き、Ｒ₄およびＲ₆の各々はＨまたはＣＦ₃であることが
でき、ただしＲ₄およびＲ₆のいずれかまたは両者がＣＦ
₃である場合、Ｒ₃およびＲ₅のいずれもＣＦ₃であること
ができず、さらにＲ₃〜Ｒ₆の各々は同時にＨであること
ができない、の化合物、およびその製剤学的に許容され
うる担体からなり、ここで式Ｉの化合物は治療学的に有
効な量で存在する製剤学的組成物。

【００４７】６、アミノアルキルは−（ＣＨ₂）_n−ＮＲ
₇Ｒ₈であり、ｎ＝２〜６であり、そしてＲ₇およびＲ₈は
同一もしくは相異なり、そしてＨ、アルキル、アラルキ
ルのいずれから選択されるか、あるいはＲ₇およびＲ₈は
一緒になってＮ、ＯおよびＳのいずれから選択される１
または２以上の異種原子を含有する複素環を形成する上
記第５項記載の組成物。

【００４８】７、複素環がピペリジノ、モルノリノ、ピ
ペラジノ、テトラヒドロイソキノリニル、テトラヒドロ
キノリニルおよび置換ピペラジノのいずれから選択さ
れ、ここでピペラジノは末端のＮ−４位置においてアラ
ルキルおよびフェニルのいずれかにより置換されている
上記第６項記載の組成物。

【００４９】８、化合物がジエチル３−トリフルオロメ
チルベンジルホスホネート、３−トリフルオロメチルベ
ンジルホスホン酸、エチル３−トリフルオロメチルベン
ジルホスホン酸、アリルエチル３−トリフルオロメチル
ベンジルホスホネート、ジエチルアミノエチルエチル３
−トリフルオロメチルベンジルホスホネートおよびエチ
ル３−フェニルプロピル３−トリフルオロメチルベンジ
ルホスホネートのいずれか１つから選択される上記第５
項記載の組成物。

【００５０】９、有効量の式Ｉ：

【００５１】

【化１０】

【００５２】式中、Ｒ₁およびＲ₂は同一もしくは相異な
り、そして水素、アルキル、アルケニル、ヒドロキシア
ルキル、アルコキシアルキル、アラルキル、アリールま
たはアミノアルキルのいずれから選択され、Ｒ₃および
Ｒ₅の各々はＨまたはＣＦ₃であることができ、ただしＲ
₃またはＲ₅の一方のみが同時にＣＦ₃であることがで
き、Ｒ₄およびＲ₆の各々はＨまたはＣＦ₃であることが
でき、ただしＲ₄およびＲ₆のいずれかまたは両者がＣＦ
₃である場合、Ｒ₃およびＲ₅のいずれもＣＦ₃であること
ができず、さらにＲ₃〜Ｒ₆の各々は同時にＨであること
ができない、の化合物およびその製剤学的に許容されう
る塩を哺乳動物に投与することからなる、哺乳動物にお
ける骨を消耗する病気の処置方法。

【００５３】１０、式Ｉの化合物がジエチル３−トリフ
ルオロメチルベンジルホスホネートである上記第９項記
載の方法。

【００５４】１１、有効量の式Ｉ：

【００５５】

【化１１】

【００５６】式中、Ｒ₁およびＲ₂は同一もしくは相異な
り、そして水素、アルキル、アルケニル、ヒドロキシア
ルキル、アルコキシアルキル、アラルキル、アリールま
たはアミノアルキルのいずれから選択され、Ｒ₃および
Ｒ₅の各々はＨまたはＣＦ₃であることができ、ただしＲ
₃またはＲ₅の一方のみが同時にＣＦ₃であることがで
き、Ｒ₄およびＲ₆の各々はＨまたはＣＦ₃であることが
でき、ただしＲ₄およびＲ₆のいずれかまたは両者がＣＦ
₃である場合、Ｒ₃およびＲ₅のいずれもＣＦ₃であること
ができず、さらにＲ₃〜Ｒ₆の各々は同時にＨであること
ができない、の化合物およびその製剤学的に許容されう
る塩を哺乳動物に投与することからなる哺乳動物におけ
るオステオポローシスの処置方法。

【００５７】１２、式Ｉの化合物がジエチル３−トリフ
ルオロメチルベンジルホスホネートである上記第１１項
記載の方法。

【００５８】１３、式Ｉの化合物が３−トリフルオロメ
チルベンジルホスホン酸である上記第１１項記載の方
法。

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【手続補正書】

【提出日】平成４年１０月１６日

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】特許請求の範囲

【補正方法】変更

【補正内容】

【特許請求の範囲】

【化１】 式中Ｒ_１およびＲ_２は同一もしくは相異なり、そして水
素、アルキル、アルケニル、ヒドロキシアルキル、アル
コキシアルキル、アラルキル、アリールまたはアミノア
ルキルのいずれから選択され、 Ｒ_３およびＲ_５の各々はＨまたはＣＦ_３であることがで
き、ただしＲ_３またはＲ_５の一方のみが同時にＣＦ_３で
あることができ、 Ｒ_４およびＲ_６の各々はＨまたはＣＦ_３であることがで
き、ただしＲ_４およびＲ_６のいずれかまたは両者がＣＦ
_３である場合、Ｒ_３およびＲ_５のいずれもＣＦ_３である
ことができず、さらにＲ_３〜Ｒ_６の各々は同時にＨであ
ることができず、そしてさらにＲ_４およびＲ_６の各がＣ
Ｆ_３であるときにのみ、Ｒ_１およびＲ_２の両者はエチル
であることができる、の化合物およびその製剤学的に許
容されうる塩。

【化２】 式中、 Ｒ_１およびＲ_２は同一もしくは相異なり、そして水素、
アルキル、アルケニル、ヒドロキシアルキル、アルコキ
シアルキル、アラルキル、アリールまたはアミノアルキ
ルのいずれから選択され、 Ｒ_３およびＲ_５の各々はＨまたはＣＦ_３であることがで
き、ただしＲ_３またはＲ_５の一方のみが同時にＣＦ_３で
あることができ、 Ｒ_４およびＲ_６の各々はＨまたはＣＦ_３であることがで
き、ただしＲ_４およびＲ_６のいずれかまたは両者がＣＦ
_３である場合、Ｒ_３およびＲ_５のいずれもＣＦ_３である
ことができず、さらにＲ_３〜Ｒ_６の各々は同時にＨであ
ることができない、の化合物、およびその製剤学的に許
容されうる担体からなり、ここで式Ｉの化合物は治療学
的に有効な量で存在する製剤学的組成物。

【化３】 式中、 Ｒ_１およびＲ_２は同一もしくは相異なり、そして水素、
アルキル、アルケニル、ヒドロキシアルキル、アルコキ
シアルキル、アラルキル、アリールまたはアミノアルキ
ルのいずれから選択され、 Ｒ_３およびＲ_５の各々はＨまたはＣＦ_３であることがで
き、ただしＲ_３またはＲ_５の一方のみが同時にＣＦ_３で
あることができ、Ｒ_４およびＲ_６の各々はＨまたはＣＦ
_３であることができ、ただしＲ_４およびＲ_６のいずれか
または両者がＣＦ_３である場合、Ｒ_３およびＲ_５のいず
れもＣＦ_３であることができず、さらにＲ_３〜Ｒ_６の各
々は同時にＨであることができない、の化合物およびそ
の製剤学的に許容されうる塩を哺乳動物に投与すること
からなる、哺乳動物における骨を消耗する病気の処置方
法。

【化４】 式中、 Ｒ_１およびＲ_２は同一もしくは相異なり、そして水素、
アルキル、アルケニル、ヒドロキシアルキル、アルコキ
シアルキル、アラルキル、アリールまたはアミノアルキ
ルのいずれから選択され、 Ｒ_３およびＲ_５の各々はＨまたはＣＦ_３であることがで
き、ただしＲ_３またはＲ_５の一方のみが同時にＣＦ_３で
あることができ、Ｒ_４およびＲ_６の各々はＨまたはＣＦ
_３であることができ、ただしＲ_４およびＲ_６のいずれか
または両者がＣＦ_３である場合、Ｒ_３およびＲ_５のいず
れもＣＦ_３であることができず、さらにＲ_３〜Ｒ_６の各
々は同時にＨであることができない、の化合物およびそ
の製剤学的に許容されうる塩を哺乳動物に投与すること
からなる、哺乳動物におけるオステオポローシスの処置
方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 キース・デマレスト アメリカ合衆国ニユージヤージイ州08822 フレミントン・ロツクタウンスクールロー ド28 (72)発明者 デイビツド・ワストロー アメリカ合衆国ミシガン州48103アンアー バー・ジヨンホームズロード5101

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 式Ｉ： 【化１】 式中、 Ｒ₁およびＲ₂は同一もしくは相異なり、そして水素、ア
   ルキル、アルケニル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ
   アルキル、アラルキル、アリールまたはアミノアルキル
   のいずれから選択され、 Ｒ₃およびＲ₅の各々はＨまたはＣＦ₃であることがで
   き、ただしＲ₃またはＲ₅の一方のみが同時にＣＦ₃であ
   ることができ、 Ｒ₄およびＲ₆の各々はＨまたはＣＦ₃であることがで
   き、ただしＲ₄およびＲ₆のいずれかまたは両者がＣＦ₃
   である場合、Ｒ₃およびＲ₅のいずれもＣＦ₃であること
   ができず、さらにＲ₃〜Ｒ₆の各々は同時にＨであること
   ができず、そしてさらにＲ₄およびＲ₆の各がＣＦ₃であ
   るときにのみ、Ｒ₁およびＲ₂の両者はエチルであること
   ができる、の化合物およびその製剤学的に許容されうる
   塩。
2. 【請求項２】 式Ｉ： 【化２】 式中、 Ｒ₁およびＲ₂は同一もしくは相異なり、そして水素、ア
   ルキル、アルケニル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ
   アルキル、アラルキル、アリールまたはアミノアルキル
   のいずれから選択され、 Ｒ₃およびＲ₅の各々はＨまたはＣＦ₃であることがで
   き、ただしＲ₃またはＲ₅の一方のみが同時にＣＦ₃であ
   ることができ、 Ｒ₄およびＲ₆の各々はＨまたはＣＦ₃であることがで
   き、ただしＲ₄およびＲ₆のいずれかまたは両者がＣＦ₃
   である場合、Ｒ₃およびＲ₅のいずれもＣＦ₃であること
   ができず、さらにＲ₃〜Ｒ₆の各々は同時にＨであること
   ができない、の化合物、およびその製剤学的に許容され
   うる担体からなり、ここで式Ｉの化合物は治療学的に有
   効な量で存在する製剤学的組成物。
3. 【請求項３】 有効量の式Ｉ： 【化３】 式中、 Ｒ₁およびＲ₂は同一もしくは相異なり、そして水素、ア
   ルキル、アルケニル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ
   アルキル、アラルキル、アリールまたはアミノアルキル
   のいずれから選択され、 Ｒ₃およびＲ₅の各々はＨまたはＣＦ₃であることがで
   き、ただしＲ₃またはＲ₅の一方のみが同時にＣＦ₃であ
   ることができ、 Ｒ₄およびＲ₆の各々はＨまたはＣＦ₃であることがで
   き、ただしＲ₄およびＲ₆のいずれかまたは両者がＣＦ₃
   である場合、Ｒ₃およびＲ₅のいずれもＣＦ₃であること
   ができず、さらにＲ₃〜Ｒ₆の各々は同時にＨであること
   ができない、の化合物およびその製剤学的に許容されう
   る塩を哺乳動物に投与することからなる、哺乳動物にお
   ける骨を消耗する病気の処置方法。
4. 【請求項４】 有効量の式Ｉ： 【化４】 式中、 Ｒ₁およびＲ₂は同一もしくは相異なり、そして水素、ア
   ルキル、アルケニル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ
   アルキル、アラルキル、アリールまたはアミノアルキル
   のいずれから選択され、 Ｒ₃およびＲ₅の各々はＨまたはＣＦ₃であることがで
   き、ただしＲ₃またはＲ₅の一方のみが同時にＣＦ₃であ
   ることができ、 Ｒ₄およびＲ₆の各々はＨまたはＣＦ₃であることがで
   き、ただしＲ₄およびＲ₆のいずれかまたは両者がＣＦ₃
   である場合、Ｒ₃およびＲ₅のいずれもＣＦ₃であること
   ができず、さらにＲ₃〜Ｒ₆の各々は同時にＨであること
   ができない、の化合物およびその製剤学的に許容されう
   る塩を哺乳動物に投与することからなる、哺乳動物にお
   けるオステオポローシスの処置方法。