JPH05125071A - Ｄｃ８１１８化合物 - Google Patents
Ｄｃ８１１８化合物Info
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- JPH05125071A JPH05125071A JP3288675A JP28867591A JPH05125071A JP H05125071 A JPH05125071 A JP H05125071A JP 3288675 A JP3288675 A JP 3288675A JP 28867591 A JP28867591 A JP 28867591A JP H05125071 A JPH05125071 A JP H05125071A
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- methanol
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
- C12P17/06—Oxygen as only ring hetero atoms containing a six-membered hetero ring, e.g. fluorescein
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D309/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings
- C07D309/34—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D309/36—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with oxygen atoms directly attached to ring carbon atoms
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 優れた抗菌および抗腫瘍作用を有するＤＣ８
１１８化合物を提供する。 【構成】 式 【化３】 〔式中、Ｒは−CH(OH)CH3 または−COCH3を表す〕で表
されるＤＣ８１１８化合物。
１１８化合物を提供する。 【構成】 式 【化３】 〔式中、Ｒは−CH(OH)CH3 または−COCH3を表す〕で表
されるＤＣ８１１８化合物。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、抗菌作用および抗腫瘍
作用を有し、抗菌剤および抗腫瘍剤として有用であるＤ
Ｃ８１１８化合物に関する。
作用を有し、抗菌剤および抗腫瘍剤として有用であるＤ
Ｃ８１１８化合物に関する。
【０００２】
【従来の技術】アゾキシ基を有する抗生物質として、エ
ライオマイシン、LL-BH872αなどいくつかの化合物が報
告されている〔シーアールシー・ハンドブック・オブ・
アンタイバイオチック・コンパウンズ、シーアールシー
プレス（ＣＲＣ Handbook of Antibiotic Compounds,Ｃ
ＲＣ Press） U. S. A. 1981〕。
ライオマイシン、LL-BH872αなどいくつかの化合物が報
告されている〔シーアールシー・ハンドブック・オブ・
アンタイバイオチック・コンパウンズ、シーアールシー
プレス（ＣＲＣ Handbook of Antibiotic Compounds,Ｃ
ＲＣ Press） U. S. A. 1981〕。
【０００３】本発明に関連した骨格を有する化合物は知
られていない。
られていない。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、優れ
た抗菌作用および抗腫瘍作用を有する化合物を提供する
ことにある。
た抗菌作用および抗腫瘍作用を有する化合物を提供する
ことにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、土壌から
分離した微生物（以下、DO-118株という。）を培地に培
養して得られる培養物中に抗菌および抗腫瘍作用を有す
る物質が生産されることを見出した。この物質を単離、
精製し、物理化学的性質を調べた結果、新規物質である
ことがわかり、ＤＣ８１１８化合物と命名した。
分離した微生物（以下、DO-118株という。）を培地に培
養して得られる培養物中に抗菌および抗腫瘍作用を有す
る物質が生産されることを見出した。この物質を単離、
精製し、物理化学的性質を調べた結果、新規物質である
ことがわかり、ＤＣ８１１８化合物と命名した。
【０００６】本発明によれば、式（Ｉ）
【０００７】
【化２】
【０００８】〔式中、Ｒは−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ3 または
−ＣＯＣＨ3 を表す〕で表される抗菌および抗腫瘍作用
を有する新規物質ＤＣ８１１８化合物が提供される。
〔以下、式（Ｉ）中、Ｒが−CH(OH)CH3 である化合物を
ＤＣ８１１８Ａ、またＲが−COCH 3 である化合物をＤＣ
８１１８Ｂと称する。〕この化合物はストレプトマイセ
ス属に属する微生物を培養することによって得られる。
−ＣＯＣＨ3 を表す〕で表される抗菌および抗腫瘍作用
を有する新規物質ＤＣ８１１８化合物が提供される。
〔以下、式（Ｉ）中、Ｒが−CH(OH)CH3 である化合物を
ＤＣ８１１８Ａ、またＲが−COCH 3 である化合物をＤＣ
８１１８Ｂと称する。〕この化合物はストレプトマイセ
ス属に属する微生物を培養することによって得られる。
【０００９】以下に本発明を詳細に説明する。 ＤＣ８１１８Ａの理化学的性質： (i) 分子量：284 (ii) 分子式：Ｃ13Ｈ20Ｎ2 Ｏ5 (iii) 質量分析：高分解能FAB マススペクトルによる実
測値：285.1421 Ｃ13Ｈ21Ｎ2 Ｏ5 としての計算値：285.1451 (iv) 比旋光度：〔α〕D 25 = -176 °（c=0.174, メ
タノール) (v) 紫外部吸収スペクトル：（メタノール中で測定） λmax ：212nm （ε=4,600） 288nm （ε=2,600） (vi) 赤外部吸収スペクトル：（KBr 錠剤法で測定） （cm-1）3421, 1745, 1496, 1230, 1132 (vii) ＰＭＲスペクトル：（ＤＭＳＯ-d6 で測定、内部
基準ＴＭＳ）1 H-NMR(400MHz): δ(ppm) 7.09(1H, dd, J=9.8, 5.6Hz), 6.11(1H, d, J=9.8Hz),
6.01(1H, br.s), 4.89(1H, d, 5.6Hz), 4.30(1H, br.
s), 4.26(2H, t, J=6.8Hz), 3.58(1H, m), 1.850(2H,
m), 1.846(3H, s)，1.47-1.25(4H, m), 1.03(3H, d, J=
6.0Hz) (viii)ＣＭＲスペクトル：（ＤＭＳＯ-d6 で測定、内部
基準ＴＭＳ）13 C-NMR(125MHz):δ(ppm) 159.1, 146.2, 138.7, 125.6, 119.8, 69.5, 65.5, 56.
1, 38.2, 27.5, 23.5, 21.9, 11.5 (ix) 溶解性：水、エタノール、メタノールおよびジメ
チルスルホキシド（ＤＭＳＯ) に可溶、酢酸エチル、ク
ロロホルムには難溶。 (x) 呈色反応：ヨード試薬に陽性。 (xi) 物質の色、性質：淡黄色の吸湿性粉末。 (xii) 薄層クロマトグラフィー：シリカゲル薄層 （HPTLC plate Art. 15647, Merk社製） トルエン：アセトン（1:1 v/v ）の展開溶媒でRf値は0.
61。 クロロホルム：メタノール（20:1）の展開溶媒でRf値は
0.64。 展開後ＤＣ８１１８Ａのスポットは、バチルス ズブチ
リス(Bacillus subtilis) を用いるバイオアッセイ、熱
硫酸、および紫外部吸収により検出できる。
測値：285.1421 Ｃ13Ｈ21Ｎ2 Ｏ5 としての計算値：285.1451 (iv) 比旋光度：〔α〕D 25 = -176 °（c=0.174, メ
タノール) (v) 紫外部吸収スペクトル：（メタノール中で測定） λmax ：212nm （ε=4,600） 288nm （ε=2,600） (vi) 赤外部吸収スペクトル：（KBr 錠剤法で測定） （cm-1）3421, 1745, 1496, 1230, 1132 (vii) ＰＭＲスペクトル：（ＤＭＳＯ-d6 で測定、内部
基準ＴＭＳ）1 H-NMR(400MHz): δ(ppm) 7.09(1H, dd, J=9.8, 5.6Hz), 6.11(1H, d, J=9.8Hz),
6.01(1H, br.s), 4.89(1H, d, 5.6Hz), 4.30(1H, br.
s), 4.26(2H, t, J=6.8Hz), 3.58(1H, m), 1.850(2H,
m), 1.846(3H, s)，1.47-1.25(4H, m), 1.03(3H, d, J=
6.0Hz) (viii)ＣＭＲスペクトル：（ＤＭＳＯ-d6 で測定、内部
基準ＴＭＳ）13 C-NMR(125MHz):δ(ppm) 159.1, 146.2, 138.7, 125.6, 119.8, 69.5, 65.5, 56.
1, 38.2, 27.5, 23.5, 21.9, 11.5 (ix) 溶解性：水、エタノール、メタノールおよびジメ
チルスルホキシド（ＤＭＳＯ) に可溶、酢酸エチル、ク
ロロホルムには難溶。 (x) 呈色反応：ヨード試薬に陽性。 (xi) 物質の色、性質：淡黄色の吸湿性粉末。 (xii) 薄層クロマトグラフィー：シリカゲル薄層 （HPTLC plate Art. 15647, Merk社製） トルエン：アセトン（1:1 v/v ）の展開溶媒でRf値は0.
61。 クロロホルム：メタノール（20:1）の展開溶媒でRf値は
0.64。 展開後ＤＣ８１１８Ａのスポットは、バチルス ズブチ
リス(Bacillus subtilis) を用いるバイオアッセイ、熱
硫酸、および紫外部吸収により検出できる。
【００１０】ＤＣ８１１８Ｂの理化学的性質： (i) 分子量：282 (ii) 分子式：Ｃ13Ｈ18Ｎ2 Ｏ5 (iii) 質量分析：高分解能FAB マススペクトルによる実
測値：283.1296 Ｃ13Ｈ19Ｎ2 Ｏ5 としての計算値：283.1294 (iv) 比旋光度：〔α〕D 25 = -245 °（c=0.278,メタ
ノール) (v) 紫外部吸収スペクトル：（メタノ−ル中で測定） λmax ：227nm （sh，ε=7,900） 286nm （ε=3,800） (vi) 赤外部吸収スペクトル：（KBr 錠剤法で測定） （cm-1）3417, 3251, 1739, 1716, 1508, 1225, 1126 (vii) ＰＭＲスペクトル：（ＤＭＳＯ-d6 で測定、内部
基準ＴＭＳ）1 H-NMR(500MHz): δ(ppm) 7.10(1H, dd, J=9.8, 5.7Hz), 6.11(1H, d, J=9.8Hz),
6.01(1H, d, J=7.0Hz),4.90(1H,dd, J=7.0, 5.7Hz), 4.
27(2H, t, J=6.8Hz), 2.49(2H, t,J=7.1Hz), 2.08(3H,
s), 1.852(3H, s), 1.846(2H, m), 1.56(2H,m) (viii) ＣＭＲスペクトル：（ＤＭＳＯ-d6 で測定、内
部基準ＴＭＳ）13 C-NMR (125MHz): δ(ppm) 208.0, 159.1, 146.3, 138.7, 125.6, 119.8, 69.2, 5
6.1, 41.8, 29.6,26.8, 19.8,11.6 (ix) 溶解性：水、エタノール、メタノールおよびＤＭ
ＳＯに可溶、酢酸エチル、クロロホルムには可溶、トル
エンに難溶、ヘキサンに不溶。 (x) 呈色反応：ヨード試薬に陽性。 (xi) 物質の色、性質：白色針状晶物質。 (xii) 薄層クロマトグラフィー：シリカゲル薄層 （HPTLC plate Art. 15647, Merk社製） トルエン：アセトン（1:1 v/v ）の展開溶媒でRf値は0.
64。 クロロホルム：メタノール（20:1）の展開溶媒でRf値は
0.40。 展開後ＤＣ８１１８Ｂのスポットは、バチルス ズブチ
リス(Bacillus subtilis) を用いるバイオアッセイ、熱
硫酸、および紫外部吸収により検出できる。
測値：283.1296 Ｃ13Ｈ19Ｎ2 Ｏ5 としての計算値：283.1294 (iv) 比旋光度：〔α〕D 25 = -245 °（c=0.278,メタ
ノール) (v) 紫外部吸収スペクトル：（メタノ−ル中で測定） λmax ：227nm （sh，ε=7,900） 286nm （ε=3,800） (vi) 赤外部吸収スペクトル：（KBr 錠剤法で測定） （cm-1）3417, 3251, 1739, 1716, 1508, 1225, 1126 (vii) ＰＭＲスペクトル：（ＤＭＳＯ-d6 で測定、内部
基準ＴＭＳ）1 H-NMR(500MHz): δ(ppm) 7.10(1H, dd, J=9.8, 5.7Hz), 6.11(1H, d, J=9.8Hz),
6.01(1H, d, J=7.0Hz),4.90(1H,dd, J=7.0, 5.7Hz), 4.
27(2H, t, J=6.8Hz), 2.49(2H, t,J=7.1Hz), 2.08(3H,
s), 1.852(3H, s), 1.846(2H, m), 1.56(2H,m) (viii) ＣＭＲスペクトル：（ＤＭＳＯ-d6 で測定、内
部基準ＴＭＳ）13 C-NMR (125MHz): δ(ppm) 208.0, 159.1, 146.3, 138.7, 125.6, 119.8, 69.2, 5
6.1, 41.8, 29.6,26.8, 19.8,11.6 (ix) 溶解性：水、エタノール、メタノールおよびＤＭ
ＳＯに可溶、酢酸エチル、クロロホルムには可溶、トル
エンに難溶、ヘキサンに不溶。 (x) 呈色反応：ヨード試薬に陽性。 (xi) 物質の色、性質：白色針状晶物質。 (xii) 薄層クロマトグラフィー：シリカゲル薄層 （HPTLC plate Art. 15647, Merk社製） トルエン：アセトン（1:1 v/v ）の展開溶媒でRf値は0.
64。 クロロホルム：メタノール（20:1）の展開溶媒でRf値は
0.40。 展開後ＤＣ８１１８Ｂのスポットは、バチルス ズブチ
リス(Bacillus subtilis) を用いるバイオアッセイ、熱
硫酸、および紫外部吸収により検出できる。
【００１１】次にＤＣ８１１８化合物の生物活性につい
て説明する。 （Ａ）各種細菌に対する抗菌作用 各種細菌に対する最小生育阻止濃度（MIC)を、バクト・
トリプトン(Difco社製) ３ｇ、肉エキス３ｇ、酵母エキ
ス１ｇ、グルコース１ｇ、寒天16ｇを１ｌの水に溶解し
て作成した培地(pH 7)を用いて寒天希釈法により測定し
た。
て説明する。 （Ａ）各種細菌に対する抗菌作用 各種細菌に対する最小生育阻止濃度（MIC)を、バクト・
トリプトン(Difco社製) ３ｇ、肉エキス３ｇ、酵母エキ
ス１ｇ、グルコース１ｇ、寒天16ｇを１ｌの水に溶解し
て作成した培地(pH 7)を用いて寒天希釈法により測定し
た。
【００１２】結果を第１表に示す。
【００１３】
【表１】
【００１４】（Ｂ）ＨｅＬａＳ3 細胞に対する生育阻害 ９６穴マイクロタイタープレートにRPMI-1640 培地（Gi
bco 社製) 、10％牛胎児血清、10μg ／mlインシュリン
および10-8M エストラジオールからなる培地（以下、培
地Ａと称す）で4.5 ×104 個／mlに調製したHeLaS3細胞
(ATCC HTB22)を0.1ml ずつ該プレートの各穴に分注し
た。該プレートを炭酸ガスインキュベータ内で37℃、20
時間培養後、これに培地Ａにより適宜希釈した試験化合
物0.05mlずつを加え、炭酸ガスインキュベーター内で37
℃、72時間培養した。培養上清を除去後、残渣に培地Ａ
および0.02% ニュートラルレッドからなる培地を0.1 ml
ずつ加え、37℃で 1時間炭酸ガスインキュベータ内で培
養し、細胞を染色した。培養上清を除去後、残渣を生理
食塩水で１回洗浄した。ついで0.001 規定塩酸／30％エ
タノールで色素を抽出後、マイクロプレートリーダーに
より 550nmの吸光度を測定した。無処理細胞と既知濃度
の試験化合物で処理した細胞の吸光度を比較することに
より細胞の増殖を50％阻害する試験化合物濃度(IC50)を
算出した。
bco 社製) 、10％牛胎児血清、10μg ／mlインシュリン
および10-8M エストラジオールからなる培地（以下、培
地Ａと称す）で4.5 ×104 個／mlに調製したHeLaS3細胞
(ATCC HTB22)を0.1ml ずつ該プレートの各穴に分注し
た。該プレートを炭酸ガスインキュベータ内で37℃、20
時間培養後、これに培地Ａにより適宜希釈した試験化合
物0.05mlずつを加え、炭酸ガスインキュベーター内で37
℃、72時間培養した。培養上清を除去後、残渣に培地Ａ
および0.02% ニュートラルレッドからなる培地を0.1 ml
ずつ加え、37℃で 1時間炭酸ガスインキュベータ内で培
養し、細胞を染色した。培養上清を除去後、残渣を生理
食塩水で１回洗浄した。ついで0.001 規定塩酸／30％エ
タノールで色素を抽出後、マイクロプレートリーダーに
より 550nmの吸光度を測定した。無処理細胞と既知濃度
の試験化合物で処理した細胞の吸光度を比較することに
より細胞の増殖を50％阻害する試験化合物濃度(IC50)を
算出した。
【００１５】結果を第２表に示す。
【００１６】
【表２】
【００１７】次にＤＣ８１１８化合物の製造法について
説明する。ＤＣ８１１８化合物はストレプトマイセス属
に属し、ＤＣ８１１８化合物を生産する能力を有する微
生物を培地に培養し、培養物中にＤＣ８１１８化合物を
生成蓄積させ、該培養物からＤＣ８１１８化合物を採取
することによって得ることができる。
説明する。ＤＣ８１１８化合物はストレプトマイセス属
に属し、ＤＣ８１１８化合物を生産する能力を有する微
生物を培地に培養し、培養物中にＤＣ８１１８化合物を
生成蓄積させ、該培養物からＤＣ８１１８化合物を採取
することによって得ることができる。
【００１８】ＤＣ８１１８化合物生産菌株としてはスト
レプトマイセス属に属し、ＤＣ８１１８化合物生産能を
有する菌株であればいずれの菌株でも用いることができ
る。またこれらの菌株の人工的変異方法、たとえば紫外
線照射、Ｘ線照射、変異誘起剤処理などによって変異さ
せた変異株あるいは自然的に変異した変異株でもＤＣ８
１１８化合物を生産するものであれば本発明に用いるこ
とができる。代表的菌株としてＤＯ−１１８株があげら
れる。
レプトマイセス属に属し、ＤＣ８１１８化合物生産能を
有する菌株であればいずれの菌株でも用いることができ
る。またこれらの菌株の人工的変異方法、たとえば紫外
線照射、Ｘ線照射、変異誘起剤処理などによって変異さ
せた変異株あるいは自然的に変異した変異株でもＤＣ８
１１８化合物を生産するものであれば本発明に用いるこ
とができる。代表的菌株としてＤＯ−１１８株があげら
れる。
【００１９】ＤＯ−１１８株の菌学的性質について以下
に述べる。該性質の決定は、国際ストレプトマイセス
（Streptomyces）プロジェクト（ＩＳＰ）がストレプト
マイセス種の特性決定のために推奨する方法〔E.B.シェ
リング(E.B. Shirling) およびD.ゴットリーブ(D.Gottl
ieb)、インターナショナル・ジャーナル・システマティ
ック・バクテリオロジー(Int. J. Syst. Bacteriol.)1
6, 313-340(1966) 〕に従った。全細胞の加水分解物中
のジアミノピメリン酸の異性体はビー・ベッカー(B.Bec
ker)らの方式〔アプライド・ミクロバイオロジー(Appl.
Microbiol.)12,421-423(1964)〕によって確認した。形
態学的検討は、光学顕微鏡を用いて行い、とくに胞子表
面の形態については走査型電子顕微鏡を用いて行った。
色の名称の割当てには、カラー・ハーモニー・マニュア
ル(Color Harmony Manual)〔コンティナー・コーポレー
ション・オブ・アメリカ(Container Corporation of Am
erica)、第４版(1985)〕を使用した。
に述べる。該性質の決定は、国際ストレプトマイセス
（Streptomyces）プロジェクト（ＩＳＰ）がストレプト
マイセス種の特性決定のために推奨する方法〔E.B.シェ
リング(E.B. Shirling) およびD.ゴットリーブ(D.Gottl
ieb)、インターナショナル・ジャーナル・システマティ
ック・バクテリオロジー(Int. J. Syst. Bacteriol.)1
6, 313-340(1966) 〕に従った。全細胞の加水分解物中
のジアミノピメリン酸の異性体はビー・ベッカー(B.Bec
ker)らの方式〔アプライド・ミクロバイオロジー(Appl.
Microbiol.)12,421-423(1964)〕によって確認した。形
態学的検討は、光学顕微鏡を用いて行い、とくに胞子表
面の形態については走査型電子顕微鏡を用いて行った。
色の名称の割当てには、カラー・ハーモニー・マニュア
ル(Color Harmony Manual)〔コンティナー・コーポレー
ション・オブ・アメリカ(Container Corporation of Am
erica)、第４版(1985)〕を使用した。
【００２０】ＤＯ−１１８株の菌学的性質は次の通りで
ある。 （１）形態 気菌糸：直鎖状。 基生菌糸：分枝するが、分断はない。 胞子：気菌糸上に分節胞子（10個から30個もしくはさら
に多数）の長い連鎖として着生する。連鎖の形態は屈曲
状もしくはループ状。
ある。 （１）形態 気菌糸：直鎖状。 基生菌糸：分枝するが、分断はない。 胞子：気菌糸上に分節胞子（10個から30個もしくはさら
に多数）の長い連鎖として着生する。連鎖の形態は屈曲
状もしくはループ状。
【００２１】胞子の表面：平滑 胞子の運動性：なし 胞子の形・大きさ：楕円形（0.5 X 0.7μm）なお、菌
核、胞子のうは観察されない。 （２）色調 気菌糸：灰色〜白色 基生菌糸：茶色 可溶性色素：黄色 メラニン色素：なし （３）細胞壁の化学組成 ジアミノピメリン酸の立体型：ＬＬ型 （４）生理学的性質 炭素源の同化性： 同化する：グルコース、アラビノース、キシロース、マ
ンニトール、フラクトース、ラムノース、ガラクトース 同化しない：イノシトール、シュクロース、ラフィノー
ス、サリシン ゼラチンの液化：陰性 スターチの加水分解：陽性 脱脂牛乳の凝固：陽性 脱脂牛乳のペプトン化：陽性 繊維素の分解：陽性 生育温度範囲：16-37 ℃（至適温度範囲28-32 ℃） なお、生育温度範囲については２日後、ゼラチン、脱脂
牛乳および繊維素に対する作用については、28℃、1ケ月
後の結果を、そのほかの性質は28℃、2 週間後の結果を
示した。 （５）各種寒天培地における生育状態 各種寒天培地で28℃、28日間、ＤＯ−１１８株を培養し
た結果を第３表に示す。
核、胞子のうは観察されない。 （２）色調 気菌糸：灰色〜白色 基生菌糸：茶色 可溶性色素：黄色 メラニン色素：なし （３）細胞壁の化学組成 ジアミノピメリン酸の立体型：ＬＬ型 （４）生理学的性質 炭素源の同化性： 同化する：グルコース、アラビノース、キシロース、マ
ンニトール、フラクトース、ラムノース、ガラクトース 同化しない：イノシトール、シュクロース、ラフィノー
ス、サリシン ゼラチンの液化：陰性 スターチの加水分解：陽性 脱脂牛乳の凝固：陽性 脱脂牛乳のペプトン化：陽性 繊維素の分解：陽性 生育温度範囲：16-37 ℃（至適温度範囲28-32 ℃） なお、生育温度範囲については２日後、ゼラチン、脱脂
牛乳および繊維素に対する作用については、28℃、1ケ月
後の結果を、そのほかの性質は28℃、2 週間後の結果を
示した。 （５）各種寒天培地における生育状態 各種寒天培地で28℃、28日間、ＤＯ−１１８株を培養し
た結果を第３表に示す。
【００２２】
【表３】
【００２３】
【表４】
【００２４】なお、略号は次のとおりである。 Ｇ：生育の程度 ＡＭ：気菌糸の着生度および色調 ＳＭ：基生菌糸の色調 Ｐ：可溶性色素の色調 （６）ＤＯ−１１８株の同定 ＤＯ−１１８株はＬＬ型ジアミノピメリン酸が検出され
ることから、エム・ピー・レチェバリエとエイチ・エー
・レチェバリエ（M.P.Lechevalier and H.A.Lechevalie
r）による放線菌の分類〔インターナショナル・ジャー
ナル・システマティック・バクテリオロジー（Int. J.
Syst. Bacteriol.）20, 435-443(1970)〕によると細胞
壁Ｉ型と分類される。
ることから、エム・ピー・レチェバリエとエイチ・エー
・レチェバリエ（M.P.Lechevalier and H.A.Lechevalie
r）による放線菌の分類〔インターナショナル・ジャー
ナル・システマティック・バクテリオロジー（Int. J.
Syst. Bacteriol.）20, 435-443(1970)〕によると細胞
壁Ｉ型と分類される。
【００２５】さらに該菌株の形態学的特徴を組み合わせ
ると、この菌株を、ストレプトマイセス属に帰属させる
のが適当である。本属における種の同定においては、灰
色〜白色の気菌糸、直鎖状の胞子連鎖、平滑な胞子表
面、メラニン様色素産生、可溶性色素の産生および炭素
源の資化パターンなどの本菌株の特徴をもとに、細菌学
名承認リスト〔ヴィー・ビー・ディー・スカーマン(V.
B.D.Skerman）ら、Int. J. Syst. Bacteriol., 30, 225
-420(1980)〕で承認されている種名より、分類学的特徴
が類似している種をＩＳＰの記載〔Int. J. Syst. Bact
eriol.18, 69-189 (1968)、同誌、18, 391-512.(196
8)、同誌、22, 265-394 (1972) およびアール・イー・
ブカナン(R. E. Buchanan)とエヌ・イー・ギボンズ(N.
E. Gibbons)編、バージーズ・マニュアル・オブ・デタ
ーミネイティブ・バクテリオロジィ(Bergey's Manual o
f Determinative Bacteriology）第８版〕をもとに検索
した。
ると、この菌株を、ストレプトマイセス属に帰属させる
のが適当である。本属における種の同定においては、灰
色〜白色の気菌糸、直鎖状の胞子連鎖、平滑な胞子表
面、メラニン様色素産生、可溶性色素の産生および炭素
源の資化パターンなどの本菌株の特徴をもとに、細菌学
名承認リスト〔ヴィー・ビー・ディー・スカーマン(V.
B.D.Skerman）ら、Int. J. Syst. Bacteriol., 30, 225
-420(1980)〕で承認されている種名より、分類学的特徴
が類似している種をＩＳＰの記載〔Int. J. Syst. Bact
eriol.18, 69-189 (1968)、同誌、18, 391-512.(196
8)、同誌、22, 265-394 (1972) およびアール・イー・
ブカナン(R. E. Buchanan)とエヌ・イー・ギボンズ(N.
E. Gibbons)編、バージーズ・マニュアル・オブ・デタ
ーミネイティブ・バクテリオロジィ(Bergey's Manual o
f Determinative Bacteriology）第８版〕をもとに検索
した。
【００２６】検索の結果、種を特定することは困難であ
り、ストレプトマイセス・エスピー（Streptomyces s
p.）ＤＯ−１１８と命名した。該菌株はブダペスト条約
に基づき、工業技術院微生物工業技術研究所に微工研条
寄第３５９５号(FERM BP−３５９５）として寄託されて
いる（原寄託日：平成３年１０月８日）。
り、ストレプトマイセス・エスピー（Streptomyces s
p.）ＤＯ−１１８と命名した。該菌株はブダペスト条約
に基づき、工業技術院微生物工業技術研究所に微工研条
寄第３５９５号(FERM BP−３５９５）として寄託されて
いる（原寄託日：平成３年１０月８日）。
【００２７】次にＤＣ８１１８化合物生産菌株の培養法
について述べる。本発明のＤＣ８１１８化合物の生産菌
株の培養においては通常の放線菌の培養法が一般に用い
られる。培地としては資化可能な炭素源、窒素源、無機
物および必要な生育、生産促進物質を程よく含有する培
地であれば合成培地、天然培地いずれでも使用可能であ
る。
について述べる。本発明のＤＣ８１１８化合物の生産菌
株の培養においては通常の放線菌の培養法が一般に用い
られる。培地としては資化可能な炭素源、窒素源、無機
物および必要な生育、生産促進物質を程よく含有する培
地であれば合成培地、天然培地いずれでも使用可能であ
る。
【００２８】炭素源としてはグルコース、澱粉、デキス
トリン、マンノース、フラクトース、シュクロース、ラ
クトース、キシロース、アラビノース、マンニトール、
糖蜜などが単独または組合せて用いられる。さらに、菌
の資化能によっては炭化水素、アルコール類、有機酸な
ども用いられる。窒素源としては塩化アンモニウム、硝
酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、硝酸ナトリウム、
尿素、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、乾燥酵母、コ
ーン・スチープ・リカー、大豆粉、カザミノ酸などが単
独または組合せで用いられる。そのほか、必要に応じて
塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸マグネシウム、炭
酸カルシウム、リン酸二水素カリウム、硫酸第一鉄、塩
化カルシウム、硫酸マンガン、硫酸亜鉛、硫酸銅などの
無機塩類を加える。さらに、使用菌の生育やＤＣ８１１
８ＡおよびＤＣ８１１８Ｂの生産を促進する微量成分を
適当に添加することができる。
トリン、マンノース、フラクトース、シュクロース、ラ
クトース、キシロース、アラビノース、マンニトール、
糖蜜などが単独または組合せて用いられる。さらに、菌
の資化能によっては炭化水素、アルコール類、有機酸な
ども用いられる。窒素源としては塩化アンモニウム、硝
酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、硝酸ナトリウム、
尿素、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、乾燥酵母、コ
ーン・スチープ・リカー、大豆粉、カザミノ酸などが単
独または組合せで用いられる。そのほか、必要に応じて
塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸マグネシウム、炭
酸カルシウム、リン酸二水素カリウム、硫酸第一鉄、塩
化カルシウム、硫酸マンガン、硫酸亜鉛、硫酸銅などの
無機塩類を加える。さらに、使用菌の生育やＤＣ８１１
８ＡおよびＤＣ８１１８Ｂの生産を促進する微量成分を
適当に添加することができる。
【００２９】培養法としては、液体培養法、特に深部攪
拌培養法が適している。培養は温度16〜37℃、好ましく
は25〜32℃、pH 4〜10、好ましくは 6〜8で行われ、通
常１〜７日で完了し、目的物質ＤＣ８１１８化合物が培
養液中および菌体中に生成蓄積される。なお、培地のpH
調整にはアンモニア水や炭酸アンモニウム溶液などが用
いられる。
拌培養法が適している。培養は温度16〜37℃、好ましく
は25〜32℃、pH 4〜10、好ましくは 6〜8で行われ、通
常１〜７日で完了し、目的物質ＤＣ８１１８化合物が培
養液中および菌体中に生成蓄積される。なお、培地のpH
調整にはアンモニア水や炭酸アンモニウム溶液などが用
いられる。
【００３０】培養物中の生成量が最大に達したときに培
養を停止する。培養物からＤＣ８１１８化合物の単離精
製は、微生物代謝生産物をその培養物から単離精製する
ために常用される方法に従って行われる。例えば培養物
を濾過により培養濾液と菌体に分け、菌体をクロロホル
ム、アセトンなどで抽出する。ついで、抽出液と培養濾
液とを併せて、ポリスチレン系吸着剤、例えばダイヤイ
オンＨＰ２０（三菱化成社製）などに通塔して活性成分
を吸着させ、ついで酢酸エチル、アセトンなどで溶出す
る。溶出液を濃縮し、シリカゲルによるカラムクロマト
グラフィー、高速液体クロマトグラフィーなどにより、
ＤＣ８１１８化合物を得る。なお、培養、精製操作中の
ＤＣ８１１８化合物の動向はバチルス・ズブチリスNo.1
0707を用いるバイオアッセイ、または薄層クロマトグラ
フィーによるＤＣ８１１８化合物の紫外部吸収を目安と
して追跡することができる。
養を停止する。培養物からＤＣ８１１８化合物の単離精
製は、微生物代謝生産物をその培養物から単離精製する
ために常用される方法に従って行われる。例えば培養物
を濾過により培養濾液と菌体に分け、菌体をクロロホル
ム、アセトンなどで抽出する。ついで、抽出液と培養濾
液とを併せて、ポリスチレン系吸着剤、例えばダイヤイ
オンＨＰ２０（三菱化成社製）などに通塔して活性成分
を吸着させ、ついで酢酸エチル、アセトンなどで溶出す
る。溶出液を濃縮し、シリカゲルによるカラムクロマト
グラフィー、高速液体クロマトグラフィーなどにより、
ＤＣ８１１８化合物を得る。なお、培養、精製操作中の
ＤＣ８１１８化合物の動向はバチルス・ズブチリスNo.1
0707を用いるバイオアッセイ、または薄層クロマトグラ
フィーによるＤＣ８１１８化合物の紫外部吸収を目安と
して追跡することができる。
【００３１】以下に本発明の実施例を示す。
【００３２】
実施例1.種菌としてストレプトマイセス・エスピーＤＯ
−１１８株(FERM BP-3595）を用いた。該菌株を２ｌ容
量の三角フラスコ中のバクト・トリプトン(Difco社製)
５ｇ／ｌ、酵母エキス５ｇ／ｌ、肉エキス３ｇ／ｌ、 可
溶性澱粉10ｇ／ｌ、 グルコース10ｇ／ｌ、炭酸カルシウ
ム５ｇ／ｌの組成からなる種培地（殺菌前pH7.2)300ml
に植菌し、30℃で48時間振盪 (200rpm) 培養した。
−１１８株(FERM BP-3595）を用いた。該菌株を２ｌ容
量の三角フラスコ中のバクト・トリプトン(Difco社製)
５ｇ／ｌ、酵母エキス５ｇ／ｌ、肉エキス３ｇ／ｌ、 可
溶性澱粉10ｇ／ｌ、 グルコース10ｇ／ｌ、炭酸カルシウ
ム５ｇ／ｌの組成からなる種培地（殺菌前pH7.2)300ml
に植菌し、30℃で48時間振盪 (200rpm) 培養した。
【００３３】得られた種培養液を30 l容量のジャーファ
ーメンター中の下記組成の発酵培地15lに10％（容量）
の割合で移し、28℃で通気攪拌 (回転数200rpm, 通気量
15ｌ／分)方式により培養を行った。 発酵培地組成：可溶性デンプン50ｇ／ｌ、大豆粉15ｇ／
ｌ、 NaCl 10ｇ／ｌ、KH2PO4 0.5ｇ／ｌ、MgSO4 ・7H2O
0.5ｇ／ｌ、MnSO4・H2O 0.022ｇ／ｌ、ZnSO4・7H2O 0.0
16ｇ／ｌ，CoSO4・7H2O 0.0005ｇ／ｌ、炭酸カルシウム
5ｇ／ｌ、ダイヤイオンＨＰ−２０ 10%(培養１８時間
で添加) (殺菌前pH7.0 、NaOHで調整)培養中、培地のpH
は特に制御しないで、90時間培養した。培養物からダイ
ヤイオンＨＰ−２０を含む菌体を濾別し、この固形物に
アセトン40lを加えてＤＣ８１１８ＡおよびＤＣ８１１
８Ｂを抽出した。
ーメンター中の下記組成の発酵培地15lに10％（容量）
の割合で移し、28℃で通気攪拌 (回転数200rpm, 通気量
15ｌ／分)方式により培養を行った。 発酵培地組成：可溶性デンプン50ｇ／ｌ、大豆粉15ｇ／
ｌ、 NaCl 10ｇ／ｌ、KH2PO4 0.5ｇ／ｌ、MgSO4 ・7H2O
0.5ｇ／ｌ、MnSO4・H2O 0.022ｇ／ｌ、ZnSO4・7H2O 0.0
16ｇ／ｌ，CoSO4・7H2O 0.0005ｇ／ｌ、炭酸カルシウム
5ｇ／ｌ、ダイヤイオンＨＰ−２０ 10%(培養１８時間
で添加) (殺菌前pH7.0 、NaOHで調整)培養中、培地のpH
は特に制御しないで、90時間培養した。培養物からダイ
ヤイオンＨＰ−２０を含む菌体を濾別し、この固形物に
アセトン40lを加えてＤＣ８１１８ＡおよびＤＣ８１１
８Ｂを抽出した。
【００３４】アセトン抽出液を濃縮し、シリカゲルカラ
ム(BW300;富士デヴィソン化学社製) を用い、クロロホ
ルム: メタノール:酢酸 (100:1:0.1 ; v/v)で展開し
た。溶出された活性画分を濃縮し、 逆相系シリカゲル
（ＹＭＣＲ335-20、ワイエムシー社製) カラムに通塔
し、メタノール／ 50mM KH2PO4-K2HPO4(35/65)(pH7) を
溶媒として高速液体クロマトグラフィーを行い、ＤＣ８
１１８Ａを含む画分番号20〜21およびＤＣ８１１８Ｂを
含む画分番号28〜32をそれぞれ集めた。それぞれの画分
をダイヤイオンHP−20カラムに吸着させ、水洗後メタノ
ールで溶出した。溶出液を濃縮することによりＤＣ８１
１８Ａの吸湿性粉末 1gおよびＤＣ８１１８Ｂの白色針
状晶0.3gがそれぞれ得られた。
ム(BW300;富士デヴィソン化学社製) を用い、クロロホ
ルム: メタノール:酢酸 (100:1:0.1 ; v/v)で展開し
た。溶出された活性画分を濃縮し、 逆相系シリカゲル
（ＹＭＣＲ335-20、ワイエムシー社製) カラムに通塔
し、メタノール／ 50mM KH2PO4-K2HPO4(35/65)(pH7) を
溶媒として高速液体クロマトグラフィーを行い、ＤＣ８
１１８Ａを含む画分番号20〜21およびＤＣ８１１８Ｂを
含む画分番号28〜32をそれぞれ集めた。それぞれの画分
をダイヤイオンHP−20カラムに吸着させ、水洗後メタノ
ールで溶出した。溶出液を濃縮することによりＤＣ８１
１８Ａの吸湿性粉末 1gおよびＤＣ８１１８Ｂの白色針
状晶0.3gがそれぞれ得られた。
【００３５】
【発明の効果】本発明により抗菌および抗腫瘍作用を有
するＤＣ８１１８化合物が提供される。
するＤＣ８１１８化合物が提供される。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:465） 7804−4Ｂ
Claims (1)
- 【請求項１】 式（Ｉ） 【化１】 〔式中、Ｒは−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ3 または−ＣＯＣＨ3
を表す〕で表されるＤＣ８１１８化合物。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3288675A JPH05125071A (ja) | 1991-11-05 | 1991-11-05 | Ｄｃ８１１８化合物 |
| PCT/JP1992/001408 WO1993009110A1 (en) | 1991-11-05 | 1992-10-30 | Compound dc8118 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3288675A JPH05125071A (ja) | 1991-11-05 | 1991-11-05 | Ｄｃ８１１８化合物 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05125071A true JPH05125071A (ja) | 1993-05-21 |
Family
ID=17733233
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3288675A Pending JPH05125071A (ja) | 1991-11-05 | 1991-11-05 | Ｄｃ８１１８化合物 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH05125071A (ja) |
| WO (1) | WO1993009110A1 (ja) |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA1166646A (en) * | 1981-02-20 | 1984-05-01 | Thomas R. Opie | Process for the preparation of 4-hydroxy-6-methyl-2- pyrone |
-
1991
- 1991-11-05 JP JP3288675A patent/JPH05125071A/ja active Pending
-
1992
- 1992-10-30 WO PCT/JP1992/001408 patent/WO1993009110A1/ja active Application Filing
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO1993009110A1 (en) | 1993-05-13 |
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