JPH0480202A - 燐脂質結合グリコサミノグリカン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、癌転移抑制剤として有用な燐脂質結合グリコ
サミノグリカン又はその塩に関する。

［従来の技術］ 癌転移は、血管内やリンパ管内に流出した癌細胞が、血
管内皮細胞やその下の基底膜と呼ばれる血管内皮細胞の
細胞外マトリックスと接着し、接着した癌細胞が細胞外
マトリックス内に湿潤、透過して新しい組織に転移巣を
つくることが知られている。例えばＳ、　Ｋｏｒａｃｈ
らは（ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ　４６．３６２４
−３６２９．　　（１９８６））癌細胞のクローニング
で高転移性細胞と低転移性細胞の群に分け、培養内皮細
胞に対するｉｎ　ｖｉｔｒｏでの接触試験で、高転移性
の癌細胞は窩い接着率を示し、低転移性のものは低い接
着率を示すことから、血管内皮細胞やその細胞外マトリ
ックスに対する接着性が癌の転移と深くかかわっている
ことを報告している。

また、細胞外マトリックス成分であるフィブロネクチン
の細胞接着部位にあるペプチド・ＧＲＧＤＳは、拮抗的
に細胞と細胞外マトリックスとの結合を阻害する。山田
らは（Ｓｃｉｅｎｃｅ　２３３４６７〜４７０．　　（
１９８６））このペプチド・ＧＲＧＤＳがＢ１６Ｆ１０
細胞のマウスにおける肺転移を抑制することを示してい
る。このことから、非常に微量で細胞接着阻害活性を持
つ物質は癌転移抑制剤として利用し得ることを示唆して
いる。

［発明が解決しようとする課題］ 本発明は、燐脂質結合グリコサミノグリカン又はその塩
が、上記の癌細胞の血管内皮細胞や細胞外マトリックス
への接着を阻害することにより癌の転移を抑制する知見
を得て本発明をなした。

［課題を解決するための手段］ 本発明は、下記燐脂質結合グリコサミノグリカン又はそ
の塩である。

グリコサミノグリカンは表１に示すようにＤ−グルコサ
ミン又はＤ−ガラクトサミンと、Ｄ−グルクロン酸、Ｌ
−イズロン酸及び／又はＤ−ガラクトースの２糖又は４
糖の繰り返し単位より構成されている長い鎖状の多糖で
あり、ヒアルロン酸、コンドロイチン、コンドロイチン
硫酸Ａ、コンドロイチン硫ＭＣ、コンドロイチン硫酸Ｄ
、コンドロイチン硫酸Ｅ、コンドロイチン硫酸Ｋ、コン
ドロイチンポリ硫酸、デルマタン硫酸、ヘパリン、ヘパ
ラン硫酸及びケラタン硫酸、ケラタンポリ硫酸が知られ
ている。

表１ ＩｃＮＡｃ ａｌＮＡｃ ＩｃＮ５ ｐｃＵＡ ＩｄｕＬｌ、Ａ ａｐ Ｎ−アセチルＤ−グルコサミン Ｎ−アセチルＤ−ガラクトサミン Ｄ−グルコサミンＮ−硫酸 Ｄ−グルクロン酸 Ｌ−イズロン酸 Ｄ−ガラクトース Ｑ−硫酸 本発明の燐脂質結合グリコサミノグリカンは、その塩で
あることができ、好ましくはナトリウム、カリウムのよ
うなアルカリ金属塩；カルシウム、マグネシウムのよう
なアルカリ土類金属塩ニトリアルキルアミン、ピリジン
のようなアミン塩であることができる。

本発明の燐脂質結合グリコサミノグリカンは、次のもの
を包含する。

一般式 を有する燐脂質結合グリコサミノグリカン又はその塩。

上記式中、ＧＡＧはヒアルロン酸、コンドロイチン、コ
ンドロイチン硫酸Ａ、Ｃ，ＥもしくはＫ、コンドロイチ
ンポリ硫酸、デルマタン硫酸、ヘパリン、ケラタン硫酸
又はケラタンポリ硫酸から還元性末端のへキソサミン部
分を除いたグリコサミノグリカン残基を示し、Ｐは１級
アミン基を有する燐脂質を示す。

一般式 を有する燐脂質結合グリコサミノグリカン又はその塩。

上記式中、Ｒ１はＯＨ又はＮＨＣＯＣＨ３を示し、Ｒ３
は水素又は５Ｏ３Ｈを示し、ＧＡＧはヒアルロン酸、コ
ンドロイチン、コンドロイチン硫酸ＡもしくはＫ又はデ
ルマタン硫酸から還元性末端のへキソサミン部分を除い
たグリコサミノグリカン残基、或いはケラタン硫酸又は
ケラタンポリ硫酸から還元性末端のガラクトース部分を
除いたグリコサミノグリカン残基を示し、Ｐｌは１級ア
ミノ基を有する燐脂質を示す。

一般式 を有する燐脂質結合グリコサミノグリカン又はその塩。

上記式中、ＧＡＧはケラタン硫酸又はケラタンポリ硫酸
から還元性末端のガラクトース部分を除いたグリコサミ
ノグリカン残基を示し、Ｐｌは１級アミノ基を有する燐
脂質を示す。

グリコサミノグリカンの分子量は好ましくは前記表１に
記載のものが用いられる。

上記式（Ｉ）、Ｈｌ）及び（［１）のＰ’で示される１
級アミノ基を有する燐脂質としては、式　　　ＣＨ２−
０−Ｒ’ ＯＨ （式中、Ｒ４及びＲ’はそれぞれ水素、ＣＨ＝ＣＨＲ’
又は−ＣＯＲ’　　（Ｒ’及びＲ７は０６〜２４のアル
キル基）であり、Ｙは−ＣＨ，ＣＨ２ＮＨ−又は−ＣＨ
，ＣＨＮＨ−でＯＯＨ ある） で示されるものが用いられる。特にＲ４及びＲ５がとも
にヘキサデカノイル又はオクタデカノイルのような−Ｃ
ＯＲ’であるか、Ｒ４が−ＣＨ＝ＣＨＲ’でＲ’が−Ｃ
ＯＲ’であるものが好ましい。

以下に１本発明の燐脂質結合グリコサミノグリカンの製
造法について詳しく説明する。

還一端限定酸化法 この方法は、グリコサミノグリカンの還元性末端のウロ
ン酸部分もしくは表ラクトース部分又はヘキソサミン部
分を還元及び部分酸化することにより開裂させてアルデ
ヒドを形成させ、このアルデヒドと燐脂質の１級アミノ
基との間の還元的アルキル化反応により、燐脂質結合グ
リコサミノグツカンを製造する方法である。この方法を
反応式で示せば次のとおりである。

（Ａ）還元性末端糖のグルクロン酸又はイズロン酸に反
応する場合 （ｐ＋は１級アミノ基を有する燐脂質を示す）還元性末
端がＣ−２にＯＨを有するＤ−グルクロン酸又はＬ−イ
ズロン酸である式（１）のヒアルロン酸、コンドロイチ
ン、コンドロイチン硫酸Ａ、コンドロイチン硫酸Ｃ、コ
ンドロイチン硫酸Ｅ、コンドロイチン硫酸Ｋ、コンドロ
イチンポリ硫酸、デルマタン硫酸、ヘパリンを原料とし
て使用したとき、上記反応式に従い、式（１）の燐脂質
結合グリコサミノグリカンが製造できる。

（Ｂ）還元性末端糖のグルコサミン又はガラクトサミン
に反応する場合 （６）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　（ｎ
）（式中、Ｒ３は前述と同し、Ｐｌは１級アミン基を有
する燐脂質を示す） 還元性末端のＣ−５にＣＨ２０Ｈを有するグルコサミン
又はガラクトサミンである式（４）のヒアルロン酸、コ
ンドロイチン、コンドロイチン硫酸Ａ、コンドロイチン
硫酸Ｋ、コンドロイチンボッ硫酸又はデルマタン硫酸を
原料として使用したとき、上記反応式に従い、式（ＩＩ
）の燐脂質結合′グリコサミノグリカンが製造できる。

（Ｃ）還元性末端糖のガラクトースに反応する場合 １式中、 は１級アミン基を有する燐脂質を示 す） 還元性末端糖がガラクトースである式（７）のグラタン
硫酸又はケラタンポリ硫酸を原料として使用したとき、
上記反応式に従い、式（１）、（ＩＩ）及び（Ｉｌｌ　
）の燐脂質結合グリコサミノグリカンが製造できる。

上記（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）の方法においては、先ず
、上記式（１）、（４）及び（７）で示されるグリコサ
ミノグリカンを還元して還元性末端糖部分を開裂させて
式（２）、（５）及び（８）の化合物とする。

この還元に使用しつる還元剤としては、水素化ホウ素す
１−リウム、シアノ水素化ホウ素ナトリウムなどの水素
化ホウ素アルカリ塩等を用いることができる。

また、上記還元反応における溶媒は、水又は００５Ｍホ
ウ酸塩緩衝液（ｐＨ８，３）等を用いることができる。

また還元反応温度は、通常１０〜３０°Ｃ１好ましくは
１５〜２５°Ｃて行うことができる。

還元剤の使用量は、その種類等によっても異なるが、一
般には式（１）、（４）又は（７）の化合物１モルに対
して５〜５０当量、好ましくは２５〜３０当量の範囲で
ある。

得られる式（２）、（５）及び（８）の化合物を次いで
部分的に酸化すると、式（３）、（６）、（９）、（１
０）及び（１１）のアルデヒド化合物が生成する。

この酸化反応に使用しつる酸化剤としては、過ヨウ素酸
ナトリウム、過ヨウ素酸カリウムなどの過ヨウ素酸アル
カリ塩等を用いることができる。

酸化剤の使用量は、式（２）、（５）゛又は（８）の化
合物１モルに対して１〜１０当量、好ましくは３〜６当
量の範囲である。

酸化反応温度は、０〜１０℃、好ましくは０〜４°Ｃの
範囲で行うことができる。

生成した（３）、（６）、（９）、（１０）及び（１１
）のアルデヒド化合物は、それ自体既知の還元的アルキ
ル化法に従い、燐脂質の１級アミノ基と反応させること
ができ、これによって本発明が目的とする一般式（Ｉ）
、（ＩＩ）及び（ＩＩＩ　）で示される燐脂質結合グリ
コサミノグリカンを得ることができる。

上記反応に用いることのできる燐脂質としては、Ｌ−（
ａ−ホスファチジル）エタノールアミン、ＤＬ−ホスフ
ァチジル−し−セリン、エタノールアミンプラスマロゲ
ン、セリンプラスマロゲン等を挙げることができる。

上記還元的アルキル化反応は、水、０．０５Ｍノン酸緩
衝液（ｐＨ７，０）又はジメチルホルムアミドのような
溶媒中において、式（３）。

（６）、（９）、（１０）又は（１１）のアルデヒド化
合物とクロロホルム等に溶解した燐脂質とを混合して均
一な溶液にし、通常１５〜６０℃の温度で反応させ、そ
れと同時に又はその後に、例えばシアノ水素化ホウ素ナ
トリウム等の還元剤を用いて還元することにより一般式
（１）、（ＩＩ　）及び（ＩＩＩ　）の化合物を製造す
ることができる。

、本発明の一般式（Ｉ）、（Ｈ）及び（Ｉｌｌ　）て示
される燐脂質結合グリコサミノグリカンの燐脂質の含有
量は、０．０５〜５０％、好ましくは２〜１０％の範囲
である。

以上に述べた各種の方法で製造される燐脂質結合グリコ
サミノグリカンの分離、精製方法としては、反応液に酢
酸ナトリウム飽和エタノールを加えて生じた沈澱物を炉
取することで未反応の燐脂質又は脂質を除き、さらに該
沈澱物を疎水クロマトに負荷し、酢酸アンモニウム、塩
化アンモニウム又は塩化ナトリウム等の塩の水溶液で洗
浄することで未反応のグリコサミノグリカンを除去する
。この後、該疎水クロマトに吸着した燐脂質結合グリコ
サミノグリカンを１０〜５０％メタノール水溶液で溶出
する方法で行うことができる。

本発明の燐脂質結合グリコサミノグリカン又はその薬学
的に許容される塩を、固体又は液体の医薬用担体又は希
釈剤、即ち、賦形剤、安定剤等の添加剤とともに含む製
剤とすることが好ましい。

燐脂質結合グリコサミノグリカンの塩は水溶性であるた
め、注射剤として用いる場合に最適である。該医薬製剤
において、前記有効成分の担体成分に対する割合は、１
〜９０重量％の間で変動させつる。

剤形及び投与形態としては、顛粒剤、細粒剤、散剤、錠
剤、カプセル剤、火剤もしくは液剤等の剤形にして、又
は原末のまま経口投与してもよいし、注射剤として静脈
内投与、筋肉的投与又は皮下投与してもよい。また、坐
剤、軟膏剤、パップ剤、貼付剤、リニメント剤、ローシ
ョン剤等の剤形にして、外用剤として用いることもでき
る。また、注射用の粉末にして、用時調製して使用して
もよい。

経口、経腸、非経口もしくは局所投与に適した医薬用の
有機又は無機の、固体又は液体の担体もしくは希釈剤を
、本発明の燐脂質又は脂質結合グリコサミノグリカン又
はその塩を含む医薬製′剤を調製するために用いること
ができる。水、ゼラチン、乳糖、デンプン、ステアリン
酸マグネシウム、タルク、動植物油脂、ベンジルアルコ
ール。

ガム、ポリアルキレンゲルコール、石油樹脂、へし油、
ラノリン又は医薬に用いられる他のキャ１゜アー（担体
）は全て１本発明品の担体として用しることができる。

また、安定剤、湿潤剤、乳化斉や、浸透圧を変えたり、
製剤の適切なｐＨを維持するための塩類を補助薬剤とし
て適宜用いること吃できる。

顆粒剤、細粒剤、散剤、錠剤又はカプセル剤σ場合には
、該医薬製剤は本発明品を５〜８０ＭＭ％含有している
ことが好ましく、液剤の場合には、１〜３０重量％含有
していることが好ましい。また、注射剤の場合は１〜１
０重量％、坐斉の場合は１〜５０重量％が好ましい。局
所投与性である軟膏剤又はバッグ剤等として用いる場合
は、Ｏ１〜１０重量％含有していることが好ましい。

臨床投与量は、経口投与の場合、成人に対し有効成分と
して、１日量１００〜２０００ｍｇを内厄することが好
ましいが、年令、症状により適宜埠滅することも可能で
ある。前記１日量を１回、又は適当な間隔をおいて２も
しくは３回に分けて投与することが好ましい。

また、注射剤として用いる場合には、成人に対し有効成
分として、１目量１０〜ｌｏ００ｍｇを投与することが
好ま゛しく、軟膏剤又はパップ剤等として用いる場合は
、前記含有割合のものを適当量患部に塗布することが好
ましい。

［発明の効果〕 本発明品の燐脂質結合グリコサミノグリカン又はその塩
は、細胞接着阻害作用を有し、かつ毒性もないので癌転
移抑制剤として有用である。

［実施例］ 次に実施例により本発明をさらに詳細に説明するが、本
発明は、実施例に限定されるものではなし）＋ 以下の実施例において、燐脂質結合グリコサミノグリカ
ンのリン含量、燐脂質含量、及びグリコサミノグリカン
（ＧＡＧ）含量は、以下の方法で測定した。

色足１ １、ＧＡＧの定量 （１）ウロン酸を含有するＧＡＧ　　カルバゾール硫酸
法（Ｂｉｔｔｅｒ−Ｍｕｉｒ法）　ＡＮＡＬＹＴＩＣＡ
ＬＢＩＯＣＨＥＭＩＳＴＲＹ　４．３３０−３３４　［
１９６２）（２）ガラクトースを含有するケラタン硫酸
又はケラタンポリ硫酸：アンスロン法　Ｂｉｏｃｈｅｍ
、　Ｊ５０、２９８−３０３　（１９５２１ ２燐脂質の定量 （１）リンの定量：モリブデンブルー法、無機応用比色
分析、４、共立出版株式会社、編集代表　平野匹敵　１
３０〜１３５頁 （２）脂肪酸の定量　１０−５０ｍｇのＧＡＧ−脂質を
１０−のＩＮ−水酸化ナトリウム水溶液に溶解し、１０
０℃で１時間加水分解する。反応液をＩＮ−塩酸水溶液
で酸性にした後、クロロホルムで抽出し、クロロホルム
相を水で洗浄する。脱水ボウ硝で乾燥後、減圧下で溶媒
を除去。残渣に３％塩酸（ガス）含有メタノールを加え
、封管中、１００°Ｃて３時間加熱後、石油エーテルで
３回抽出する。石油エーテルを３回水洗し、混入した塩
酸を除き、脱水ポウ硝で乾燥後、減圧濃縮し、次の（Ｇ
ＬＣ）用試料とする。

気相液相クロマトグラフィー（ＧＬＣ）ＧＣ−１５Ａ（
腸性製作所） 充填剤：　ＰＥＧ−ＨＴ　　５％　Ｕｎｉｐｏｒｔ　Ｈ
Ｐ　６０／８０ガスクロ工業■ 運転条件・試料気化室温度　３５０℃ カラム温度・１９０〜２００″Ｃ カラム・３φＸ２ｍ 流速：　Ｎ　２４５　ｍｆ／ｍｉｎ 実施例１ 還元末端限定酸化法による燐脂質結合グリコサミノグリ
カンの製造 （１）還元末端限定酸化グリコサミノグリカンの製造 １）還元末端残基開環ヒアルロン酸の製造ヒアルロン酸
（鶏冠由来、ＭＷ　１万　ＨＡＩ＋２０００ｎ＋ｇを２
００−の００５Ｍホウ酸塩緩衝液（ｐＨ８、３）に溶解
し、１８２ｍｇの水素化ホウ酸ナトリウムを加えて室温
で５時間反応させた８酢酸でｐＨ４，５にしてエタノー
ルを加えて生成物を沈澱させ、次いで生成物をエタノー
ルで洗浄した。これによりロット番号１００の還元末端
残基開環ヒアルロン酸ｆＲ−ＨＡＩＩ　を１８００ｍｇ
得た。

２）還元末端限定酸化ヒアルロン酸の製造１７００ｍｇ
のＲ−ＩＡＩ　（ロット番号１００）を２５０ｍ１の４
０ｍＭイミダゾール（ｐＨ６，５）に溶解し、０℃で１
３９．９６ｍｇの過ヨウ素酸ナトリウムを加え、１時間
反応させた。反応液にエタノールを加えて生成物を沈澱
させ、次いでエタノールで洗浄した。これによりロット
番号２００の還元末端限定酸化ヒアルロン酸ｆＯ−ＨＡ
Ｉ　１６００ｍｇを得た。

３）他のグリコサミノグリカンの還元末端限定酸化物（
０−ＧＡＧＩの製造 ヒアルロン酸（鶏冠由来、ＭＷ　５万：　ＨＡ５．　Ｍ
Ｗｌ５万：　ＨＡＩ５）、 コンドロイチン（コンドロイチン硫酸Ａから酸性メタノ
ール溶液で脱硫酸したもの、ＭＷｌ、５万、ＣＨＩ　、 コンドロイチン硫酸Ｃ（鮫軟骨由来、ＭＷ１万Ｃ３ＦＳ
ＩＩ、　ＭＷ３万：　Ｃ３（Ｓ３）、　ＭＷ６万　Ｃ５
＋Ｓ６１１　、コンドロイチン硫酸Ａ（鮫軟骨由来、Ｍ
Ｗ３万。

Ｃ３ｆＷ＋　１、 デルマタン硫酸（豚皮由来、ＭＷｌ、５万：　ＤＳ）、
ヘパリン（豚小腸由来、ＭＷｌ、５万：　Ｈｅｐ）、ケ
ラタン硫酸（牛角膵由来、ＭＷｌ、５万　ＫＳ）を原料
として上記の１）に準じて表２の条件で還元末端残基開
環グリコサミノグリカン１Ｒ−ＧＡＧ）を製造した。ひ
きつづき、上記の２）の方法に準じて表３の条件で還元
末端限定酸化グリコサミノグリカン（０−ＧＡＧ）を製
造した。

表 表 ミノ・ （ＧＡＧ ミノ・ Ｌ−（α−ホスファチジル）エタノールアジバルミトイ
ル結合グリコサミノグリカンＰＰＥＡＤＰＩの製造 Ｌ−（α−ホスファチジル）エタノールアジバルミトイ
ル結合ヒアルロン酸の製造１０００ｍｇの口・ント番号
２００の０−ＨＡを００５Ｍリン酸塩緩衝液（ｐＨ７，
０）ｌ　ＯＯＪに溶解し、クロロホルム：メタノール＝
２．１の溶媒で（１ｍｇ／　ｍｌ　）に溶解したＬ　−
（ａ−ホスファチジル）エタノールアミン・ジパルミト
イル（ＰＰＥＡＤＰ）を６９．２−加えた。さらに、メ
タノールを加えて均一な溶液にして、５０℃で１時間反
応させ、その後、シアン水素化ホウ素ナトリウムを２５
ｍｇを加えた。２時間５０°Ｃで反応させ、減圧上濃縮
し、酢酸飽和のエタノールを５倍量加えて生じた沈澱を
ン戸数した。沈澱を０．３Ｍ塩化アンモニウム塩で溶解
し、疎水クロマトカラム（ＴＳＸｇｅｌフェニルトヨバ
ール６５０Ｍ４００−）に吸着し、充分に０．３Ｍ塩化
アンモニウム水溶液で洗浄し、３０％メタノール水溶液
で溶出した。素通り及び洗浄画分に未反応のＩＡＩが溶
出され、３０％メタノール水溶液の両分に目的とする本
島が溶出した。３０％メタノール水溶液凛出両分を減圧
上濃縮し、透析て脱塩後、凍結乾燥してロット番号３０
０の白色粉末を得た。

収量：４０ｍｇ ＰＰＥＡＤＰｓ量＋６．２１％ ヒアルロン酸含量：６２．１２％ 疎水クロマトグラフィ、図−１に示す。

疎水クロマトグラフィの条件 カラム：　ＴＳＫ　ｇｅｌフェニル５ＰＷ（７，５φｘ
７．５ｃｍ） 溶媒、０〜５分　　０，３Ｍ塩化アンモニウム水溶液 ５〜５０分　３０％メタノール水浴水 浴液溶変速０５−７分 圧：　７　ｋｇｌｏ、５ｃｍ２ 分画容量：１ｉ／管 検出：　ＯＤ　２２０ｎｆｆｌ 検体＋　１００ｐ１　（１ｍｇ／ｍｆ　０．３Ｍ塩化ア
ンモニウム水溶液） ２）その他の燐脂質結合ゲルコサミノグリカンの製造 表３に示した０−ＧＡＧとＰＰＥＡＤＰとを表４に示し
た条件で、上記（２）−１＋の方法に準して鱗脂質結合
グリコサミノグリカンを製造した。

得られた生 酸物の分析値を表４に示した。

参考例１ フィブロネクチンを予め塗布した培養皿に塗布した燐脂
質結合グリコサミノグリカンのＢＨＫ２１細胞の接着に
一対する効果 ９６穴培養皿を５μｇ／−ウシ血漿フィブロネクチン１
００１ＬＩで塗布した後、洗浄し、実施例１て得た各種
燐脂質結合グリコサミノグルカン１００４／穴を表５に
示す各濃度で塗布した。

別に、１００ｍｍ径の培養皿に培養したＢＨＫ２１細胞
（新生ハムスター腎細胞）を０．１ｍｇ／　ｄ！の濃度
のトリプシン溶液５Ｗｄ！を加え、３７℃で５分間処理
した。次いて、ｌ　ｍｇ／−の大豆トリプシンインヒビ
ター溶液５＋ｎｌを加え、トリプシンを不活性化した後
、遊離した細胞を遠心により集めた。細胞は２回洗浄後
、１−あたり１×１０５個細胞となるように単一細胞懸
濁液とした。

得られた単一細胞懸濁液１００Ｎ（ＩＸＩＯ’個細胞）
を、上記フィブロネクチンと燐脂質結合グリコサミノグ
リカンを塗布した培養皿に加え、３７℃で１時間処理し
た。接着しなかった細胞を洗浄した後、接着した細胞を
２％ホルムアルデヒドで固定し、直接位相差顕微鏡で観
察して、その細胞数をカウントした。

結果を表５に示す。表５は、各濃度における細胞接着の
変動を示す。値は３回ないし４回の測定の平均を示し、
誤差（標準偏差）もあわせて表した。

なおそれぞれの遊離グリコサミノグリカンおよび未結合
の燐脂質のみでは高濃度にしても全く細胞接着阻害効果
を示さなかった。

表５ 参考例２ 各種培養細胞の細胞接着物質に対する燐脂質結合グリコ
サミノグリカンの接着阻害効果実施例１で得た燐脂質結
合グリコサミノグリカンについて、ＢＨＫ２１細胞（新
生ハムスター腎細胞）、ＣＥＦにワトリ胚線維芽細胞）
、Ｂ１６Ｆ１０　（高転移性マウスメラノーマ細胞）、
ＣＨＯ（チャイニーズハムスター卵巣細胞）、及びｂａ
ＥＣ（ウシ大動脈内皮細胞）の各種細胞群に対しての、
フィブロネクチン（Ｆ、Ｎ）、ラミニン（ＬＮ）、１型
コラーゲン（Ｃｏｉｌ）及びビトロネクチン（ＶＮ）に
よる接着に対する阻害効果を検討した。

各５μｇ／−のウシ血漿フィブロネクチン、マウスＥＨ
５腫瘍細胞由来ラミノン、ラット肺由来Ｉ型コラーゲン
、及びウシ血清ビトロネクチンをそれぞれ９６穴培養皿
に塗布し、参考例１と同様にして、実施例１て得た燐脂
質結合グリコサミノグツカンを塗布した後、それぞれＢ
ＨＫ２１細胞、ＣＥＦ細胞、Ｂ１６Ｆ１０細胞、ＣＨＯ
細胞、及びｂａＥＣ細胞の単一細胞懸濁液１００ｐｌ（
ＩＸＩＯ’個細胞）を加え細胞接着の変動を見た。対間
として燐脂質結合グリコサミノグリカンを添加せず、接
着物質のみの細胞接着を１００％とした。結果を表６に
示す。

なお、表６中で相対接着細胞数として、全くあるいは殆
ど細胞接着しなかった場合（０〜１０％未満）な−、１
０〜３０％未満を＋、３０〜５０％未満を＋＋、５０〜
７０％未満を千十＋、７０〜９０％未満を＋＋＋十、そ
して９０〜１００％の細胞が接着した場合を＋＋＋＋＋
と半定量的に表した。

【図面の簡単な説明】

図１は実施例１−　（２）−１１の燐脂質結合グリコサ
ミノグリカンの疎水クロマトグラフィーを示す。 図 手続補正書 平成 ７月２３日

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） を有する燐脂質結合グリコサミノグリカン又はその塩。 上記式中、ＧＡＧはヒアルロン酸、コンドロイチン、コ
   ンドロイチン硫酸Ａ、Ｃ、ＥもしくはＫ、コンドロイチ
   ンポリ硫酸、デルマタン硫酸、ヘパリン、ケラタン硫酸
   又はケラタンポリ硫酸から還元性末端のヘキソサミン部
   分を除いたグリコサミノグリカン残基を示し、Ｐ＾１は
   １級アミノ基を有する燐脂質を示す。 ２、一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼（II） を有する燐脂質結合グリコサミノグリカン又はその塩。 上記式中、Ｒ＾１はＯＨ又はＮＨＣＯＣＨ＿３を示し、
   Ｒ＾３は水素又はＳＯ＿３Ｈを示し、ＧＡＧはヒアルロ
   ン酸、コンドロイチン、コンドロイチン硫酸Ａもしくは
   Ｋ又はデルマタン硫酸から還元性末端のヘキソサミン部
   分を除いたグリコサミノグリカン残基、或いはケラタン
   硫酸又はケラタンポリ硫酸から還元性末端のガラクトー
   ス部分を除いたグリコサミノグリカン残基を示し、Ｐ＾
   １は１級アミノ基を有する燐脂質を示す。 ３、一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼（III） を有する燐脂質結合グリコサミノグリカン又はその塩。 上記式中、ＧＡＧはケラタン硫酸又はケラタンポリ硫酸
   から還元性末端のガラクトース部分を除　いたグリコサ
   ミノグリカン残基を示し、Ｐ＾１は　１級アミノ基を有
   する燐脂質を示す。