JPH0474338B2 - - Google Patents
Info
- Publication number
- JPH0474338B2 JPH0474338B2 JP59159281A JP15928184A JPH0474338B2 JP H0474338 B2 JPH0474338 B2 JP H0474338B2 JP 59159281 A JP59159281 A JP 59159281A JP 15928184 A JP15928184 A JP 15928184A JP H0474338 B2 JPH0474338 B2 JP H0474338B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- hemoglobin
- liposomes
- solution
- dialysis
- inhibitor
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 239000002502 liposome Substances 0.000 claims description 40
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 claims description 34
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 claims description 34
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 16
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 15
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 11
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 9
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 claims description 8
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 6
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 5
- 108010061951 Methemoglobin Proteins 0.000 claims description 4
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 4
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 15
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 9
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 235000010378 sodium ascorbate Nutrition 0.000 description 6
- PPASLZSBLFJQEF-RKJRWTFHSA-M sodium ascorbate Substances [Na+].OC[C@@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1[O-] PPASLZSBLFJQEF-RKJRWTFHSA-M 0.000 description 6
- 229960005055 sodium ascorbate Drugs 0.000 description 6
- PPASLZSBLFJQEF-RXSVEWSESA-M sodium-L-ascorbate Chemical compound [Na+].OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1[O-] PPASLZSBLFJQEF-RXSVEWSESA-M 0.000 description 6
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 5
- NRHMKIHPTBHXPF-TUJRSCDTSA-M sodium cholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 NRHMKIHPTBHXPF-TUJRSCDTSA-M 0.000 description 5
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 4
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 4
- 239000002473 artificial blood Substances 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 3
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical group CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 239000010409 thin film Substances 0.000 description 3
- JQWAHKMIYCERGA-UHFFFAOYSA-N (2-nonanoyloxy-3-octadeca-9,12-dienoyloxypropoxy)-[2-(trimethylazaniumyl)ethyl]phosphinate Chemical compound CCCCCCCCC(=O)OC(COP([O-])(=O)CC[N+](C)(C)C)COC(=O)CCCCCCCC=CCC=CCCCCC JQWAHKMIYCERGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940072107 ascorbate Drugs 0.000 description 2
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 2
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 2
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003058 plasma substitute Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- -1 sphingomyelin Chemical compound 0.000 description 2
- PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycerol-3-phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 0.000 description 1
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 1
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical compound [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N [1-[2,3-dihydroxypropoxy(hydroxy)phosphoryl]oxy-3-hexadecanoyloxypropan-2-yl] (9e,12e)-octadeca-9,12-dienoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCC(O)CO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\C\C=C\CCCCC ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 description 1
- AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N alpha-glycerophosphate Natural products OCC(O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003633 blood substitute Substances 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000000385 dialysis solution Substances 0.000 description 1
- ZGSPNIOCEDOHGS-UHFFFAOYSA-L disodium [3-[2,3-di(octadeca-9,12-dienoyloxy)propoxy-oxidophosphoryl]oxy-2-hydroxypropyl] 2,3-di(octadeca-9,12-dienoyloxy)propyl phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].CCCCCC=CCC=CCCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCC=CCC=CCCCCC)COP([O-])(=O)OCC(O)COP([O-])(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCC=CCC=CCCCCC)COC(=O)CCCCCCCC=CCC=CCCCCC ZGSPNIOCEDOHGS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000010408 film Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 150000003278 haem Chemical class 0.000 description 1
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 description 1
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 description 1
- 150000003905 phosphatidylinositols Chemical class 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 description 1
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000002525 ultrasonication Methods 0.000 description 1
- 239000006200 vaporizer Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
- A61K9/1277—Processes for preparing; Proliposomes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/41—Porphyrin- or corrin-ring-containing peptides
- A61K38/42—Haemoglobins; Myoglobins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/08—Plasma substitutes; Perfusion solutions; Dialytics or haemodialytics; Drugs for electrolytic or acid-base disorders, e.g. hypovolemic shock
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Hematology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明はヘモグロビン及びメトヘモグロビン化
防止剤を含有したリポソームの製造方法に関する
ものである。 本発明によつて製造されるリポソームは酸素運
搬能の高い人工血液として利用される。 先行技術及び問題点 ヘモグロビンを含有するリポソームとして従来
いわゆる薄膜法により製造されたものが知られて
いる。即ち、リポソーム形成脂質をクロロホルム
等の適当な有機溶媒に溶解し、得られた溶液から
溶媒を留去して脂質の薄膜をつくり、この薄膜に
ヘモグロビン溶液を加え、激しく攪拌して多重層
リポソームを形成し、次にこれを超音波処理する
ことによつてヘモグロビン含有リポソームを製造
していた(米国特許第4133874号)。この製造法に
よれば、ヘモグロビンが酸素に触れる時間が少な
いのでヘモグロビンの変性が比較的少ない利点が
ある。しかしながら他方、収率が低く、また大規
模な製造装置をつくることが困難なため、リポソ
ームを大量に生産するには適していない。 そこで本発明者等は大量生産に適した製法であ
る透析法によりヘモグロビン含有リポソームを製
造することを研究した。透析法には、製造装置が
簡単であり、連続操作も可能であるので大量生産
に適しているが、反面操作時間が長く、ヘモグロ
ビンが酸素と接触する機会が多い。その結果ヘモ
グロビンのヘム鉄が酸化されてメトヘモグロビン
に変質して酸素の運搬機能を失うおそれがある。 血球内においては、ヘモグロビンはメト型に酸
化されても酵素の作用によりもとへ還元される機
構を備えているが、溶血して血球外へとり出され
るとこのような機構がないため一旦メト型に変質
すると酸素運搬能を失う。 発明の目的 本発明はヘモグロビンの酸化を防止したヘモグ
ロビン含有リポソームの製造方法を提供すること
を目的とする。 発明の具体的説明 本発明に用いられるリポソーム膜形成脂質には
特に制限はなく、リポソームを形成するものであ
れば天然または合成の脂質が使用可能である。特
にリン脂質が好適に使用され、その例として、レ
シチン,ホスフアチジルエタノールアミン,ホス
フアチジン酸,ホスフアチジルセリン,ホスフア
チジルイノシトール,ホスフアチジルグリセロー
ル,スフインゴミエリン,カルジオリピン及びこ
れを常法に従つて水素添加したものがあげられ、
これらを組合せて用いることもできる。 ヘモグロビンは赤血球を常法に従つて溶血して
得られたものが使用される。 メトヘモグロビン化防止剤には特に制限はない
が代用血液としての用途の性質上毒性のおそれの
ないのものが使用される。アスコルビン酸塩,グ
ルタチオン等が好適に使用される。アスコルビン
酸塩としては、リチウム,カリウム,ナトリウム
等アルカリ金属の塩が適当である。リポソーム中
に含有されるヘモグロビンの濃度(wt/%)は
臨界的ではないが通常5〜45である。メトヘモグ
ロビン化防止剤はヘモグロビンの酸化を防止する
に必要な量が使用され、種類によつても異なるが
およそ仕込ヘモグロビンに対して2〜10倍モル使
用される。リポソームの直径はおよそ0.1〜1.0μ
mが適当である。 界面活性剤は、ヘモグロビンを変性させないも
のを注意深く選択する必要があり、その例として
コール酸ナトリウムや非イオン界面活性剤として
ポリオキシエチレングリコール系界面活性剤(ト
リトンX)などが使用される。 リポソーム膜の構成成分として所望によりステ
ロール,電荷付与物質等を添加して膜構造の強化
や崩壊時間の調節を図ることができる。リポソー
ム膜構成成分を溶解させる有機溶媒としては通常
クロロホルム,エタノール等が用いられるがこれ
らに限定されるものではない。リポソーム膜構成
成分の溶液から有機溶媒を蒸留等により除去し、
残留物にヘモグロビンの生理食塩水溶液にメトヘ
モグロビン化防止剤を添加したものを加え、望ま
しくは超音波処理等により均一系とする。かくし
て得られた原料溶液を常法に従つて透析処理す
る。透析液として上記メトヘモグロビン化防止剤
を添加した生理食塩水を用いる。透析により原料
溶液から界面活性剤が除去され、その際内部にヘ
モグロビン及びメトヘモグロビン化防止剤をとり
込んだリポソームが形成される。かくして得られ
たリポソームは透析速度により直径0.1〜1.0μm
の範囲で均一なサイズに調整される。透析法とし
ては透析膜を張つた平膜セルに原料溶液を入れて
行うバツチ式でもよく、また中空系モジユールを
用いた循環方式により連続的に実施してもよい。 本発明によつて製造されるヘモグロビン含有リ
ポソームは、従来公知のものと同様にして人工血
液として使用される。即ち、本発明のリポソーム
を生理食塩水または代用血漿中に分散させて人工
血液として使用する。また本発明のリポソームを
凍結乾燥して保存し、使用時に生理食塩水または
代用血漿中に分散させることもできる。 次に実施例及び試験例を示して本発明を更に具
体的に説明する。 実施例 1 卵黄レシチン1.211g、コレステロール0.273g
及びコール酸ナトリウム(界面活性剤)2.156g
をクロロホルムとメチアルコールからなる混合溶
媒中に溶解させ、次いでバポレーターで該溶液か
ら溶媒を除去する。残留物に、溶血ヘモグロビン
(濃度14.4g/dl)60mlにアスコルビン酸ナトリ
ウム0.03gを添加したものを加え、超音波処理
(135ワツト,20分間)により系を均一にする。か
くして得られた原料溶液を平膜セルに入れ、開口
部を透析膜で覆う。この平膜セルを攪拌羽根を備
えた容器に収容し、該容器に透析液を充たし、攪
拌しながら透析を行う。その際回転子及びスター
ラーを用いて原料溶液も攪拌する。透析液には生
理食塩水にアスコルビン酸ナトリウムを添加
(0.05%w/v)したものを用いる。室温(25〜
28℃)で22時間透析を行い、コール酸ナトリウム
を除去するとヘモグロビン及びアスコルビン酸ナ
トリウムを含有したリポソームが得られる。 かくして得られたヘモグロビン含有リポソーム
中のメト型ヘモグロビン濃度(作製直後)を測定
したところ0.9%であつた。これに対してメトヘ
モグロビン化防止剤を使用しないで実施例1と同
様にして作製したヘモグロビン含有リポソーム
(対照リポソーム)中のメト型ヘモグロビン濃度
(作製直後)は40〜50%であつた。更に、実施例
1のリポソームと対照リポソームを4℃で1〜4
週間保存したときのリポソーム内のメト型ヘモグ
ロビン濃度(%)は表1のとおりであつた。メト
型ヘモグロビン濃度はCOオキシメーター
(Instrumentation Laboratory社製)を用いて測
定した。
防止剤を含有したリポソームの製造方法に関する
ものである。 本発明によつて製造されるリポソームは酸素運
搬能の高い人工血液として利用される。 先行技術及び問題点 ヘモグロビンを含有するリポソームとして従来
いわゆる薄膜法により製造されたものが知られて
いる。即ち、リポソーム形成脂質をクロロホルム
等の適当な有機溶媒に溶解し、得られた溶液から
溶媒を留去して脂質の薄膜をつくり、この薄膜に
ヘモグロビン溶液を加え、激しく攪拌して多重層
リポソームを形成し、次にこれを超音波処理する
ことによつてヘモグロビン含有リポソームを製造
していた(米国特許第4133874号)。この製造法に
よれば、ヘモグロビンが酸素に触れる時間が少な
いのでヘモグロビンの変性が比較的少ない利点が
ある。しかしながら他方、収率が低く、また大規
模な製造装置をつくることが困難なため、リポソ
ームを大量に生産するには適していない。 そこで本発明者等は大量生産に適した製法であ
る透析法によりヘモグロビン含有リポソームを製
造することを研究した。透析法には、製造装置が
簡単であり、連続操作も可能であるので大量生産
に適しているが、反面操作時間が長く、ヘモグロ
ビンが酸素と接触する機会が多い。その結果ヘモ
グロビンのヘム鉄が酸化されてメトヘモグロビン
に変質して酸素の運搬機能を失うおそれがある。 血球内においては、ヘモグロビンはメト型に酸
化されても酵素の作用によりもとへ還元される機
構を備えているが、溶血して血球外へとり出され
るとこのような機構がないため一旦メト型に変質
すると酸素運搬能を失う。 発明の目的 本発明はヘモグロビンの酸化を防止したヘモグ
ロビン含有リポソームの製造方法を提供すること
を目的とする。 発明の具体的説明 本発明に用いられるリポソーム膜形成脂質には
特に制限はなく、リポソームを形成するものであ
れば天然または合成の脂質が使用可能である。特
にリン脂質が好適に使用され、その例として、レ
シチン,ホスフアチジルエタノールアミン,ホス
フアチジン酸,ホスフアチジルセリン,ホスフア
チジルイノシトール,ホスフアチジルグリセロー
ル,スフインゴミエリン,カルジオリピン及びこ
れを常法に従つて水素添加したものがあげられ、
これらを組合せて用いることもできる。 ヘモグロビンは赤血球を常法に従つて溶血して
得られたものが使用される。 メトヘモグロビン化防止剤には特に制限はない
が代用血液としての用途の性質上毒性のおそれの
ないのものが使用される。アスコルビン酸塩,グ
ルタチオン等が好適に使用される。アスコルビン
酸塩としては、リチウム,カリウム,ナトリウム
等アルカリ金属の塩が適当である。リポソーム中
に含有されるヘモグロビンの濃度(wt/%)は
臨界的ではないが通常5〜45である。メトヘモグ
ロビン化防止剤はヘモグロビンの酸化を防止する
に必要な量が使用され、種類によつても異なるが
およそ仕込ヘモグロビンに対して2〜10倍モル使
用される。リポソームの直径はおよそ0.1〜1.0μ
mが適当である。 界面活性剤は、ヘモグロビンを変性させないも
のを注意深く選択する必要があり、その例として
コール酸ナトリウムや非イオン界面活性剤として
ポリオキシエチレングリコール系界面活性剤(ト
リトンX)などが使用される。 リポソーム膜の構成成分として所望によりステ
ロール,電荷付与物質等を添加して膜構造の強化
や崩壊時間の調節を図ることができる。リポソー
ム膜構成成分を溶解させる有機溶媒としては通常
クロロホルム,エタノール等が用いられるがこれ
らに限定されるものではない。リポソーム膜構成
成分の溶液から有機溶媒を蒸留等により除去し、
残留物にヘモグロビンの生理食塩水溶液にメトヘ
モグロビン化防止剤を添加したものを加え、望ま
しくは超音波処理等により均一系とする。かくし
て得られた原料溶液を常法に従つて透析処理す
る。透析液として上記メトヘモグロビン化防止剤
を添加した生理食塩水を用いる。透析により原料
溶液から界面活性剤が除去され、その際内部にヘ
モグロビン及びメトヘモグロビン化防止剤をとり
込んだリポソームが形成される。かくして得られ
たリポソームは透析速度により直径0.1〜1.0μm
の範囲で均一なサイズに調整される。透析法とし
ては透析膜を張つた平膜セルに原料溶液を入れて
行うバツチ式でもよく、また中空系モジユールを
用いた循環方式により連続的に実施してもよい。 本発明によつて製造されるヘモグロビン含有リ
ポソームは、従来公知のものと同様にして人工血
液として使用される。即ち、本発明のリポソーム
を生理食塩水または代用血漿中に分散させて人工
血液として使用する。また本発明のリポソームを
凍結乾燥して保存し、使用時に生理食塩水または
代用血漿中に分散させることもできる。 次に実施例及び試験例を示して本発明を更に具
体的に説明する。 実施例 1 卵黄レシチン1.211g、コレステロール0.273g
及びコール酸ナトリウム(界面活性剤)2.156g
をクロロホルムとメチアルコールからなる混合溶
媒中に溶解させ、次いでバポレーターで該溶液か
ら溶媒を除去する。残留物に、溶血ヘモグロビン
(濃度14.4g/dl)60mlにアスコルビン酸ナトリ
ウム0.03gを添加したものを加え、超音波処理
(135ワツト,20分間)により系を均一にする。か
くして得られた原料溶液を平膜セルに入れ、開口
部を透析膜で覆う。この平膜セルを攪拌羽根を備
えた容器に収容し、該容器に透析液を充たし、攪
拌しながら透析を行う。その際回転子及びスター
ラーを用いて原料溶液も攪拌する。透析液には生
理食塩水にアスコルビン酸ナトリウムを添加
(0.05%w/v)したものを用いる。室温(25〜
28℃)で22時間透析を行い、コール酸ナトリウム
を除去するとヘモグロビン及びアスコルビン酸ナ
トリウムを含有したリポソームが得られる。 かくして得られたヘモグロビン含有リポソーム
中のメト型ヘモグロビン濃度(作製直後)を測定
したところ0.9%であつた。これに対してメトヘ
モグロビン化防止剤を使用しないで実施例1と同
様にして作製したヘモグロビン含有リポソーム
(対照リポソーム)中のメト型ヘモグロビン濃度
(作製直後)は40〜50%であつた。更に、実施例
1のリポソームと対照リポソームを4℃で1〜4
週間保存したときのリポソーム内のメト型ヘモグ
ロビン濃度(%)は表1のとおりであつた。メト
型ヘモグロビン濃度はCOオキシメーター
(Instrumentation Laboratory社製)を用いて測
定した。
【表】
実施例 2
卵黄レシチン3.0275g、コレステロール0.6825
g及びコール酸ナトリウム5.389gをクロロホル
ムとメチルアルコールからなる混合溶媒中に溶解
させ、次いでエバポレーターで該溶液から溶媒を
除去する。残留物に、溶血ヘモグロビン(濃度
14.4g.dl)130mlにアスコルビン酸ナトリウム
0.065gを添加したものを加え、超音波処理(135
ワツト,20分間)により系を均一にする。かくし
て得られた原料溶液を中空系モジユールを用いた
循環方式透析法により透析を行う。その際回転子
及びスターラーを用いて原料溶液を攪拌する。透
析液には生理食塩水にアスコルビン酸ナトリウム
を添加(0.05%w/v)したものを用いる。室温
(25〜28℃)で8時間透析を行い、コール酸ナト
リウムを除去するとヘモグロビン及びアスコルビ
ン酸ナトリウムを含有したリポソームが得られ
る。 発明の具体的作用効果 本発明におけるヘモグロビン含有リポソームの
製造方法は、透析法によりリポソームを形成せし
めるので製造装置が簡単であり、大量生産に適し
ている。 更に、本発明の製法によれば、薄膜法に比べて
径が均一化されたリポソームが得られる。リポソ
ームの径にばらつきがあると、これを人工赤血球
として使用する際に不都合が生じる。即ち、リポ
ソームの中に径の大きすぎるものがあると血管を
閉塞して血栓の原因となり、また径の小さすぎる
ものは血管壁を通り抜けてしまう。従つて本発明
の製法によれば人工赤血球に適したリポソームが
提供される。 更にメトヘモグロビン化防止剤の存在下で透析
を行うのでヘモグロビンが製造工程中にメト型へ
酸化されるものを防止されている。
g及びコール酸ナトリウム5.389gをクロロホル
ムとメチルアルコールからなる混合溶媒中に溶解
させ、次いでエバポレーターで該溶液から溶媒を
除去する。残留物に、溶血ヘモグロビン(濃度
14.4g.dl)130mlにアスコルビン酸ナトリウム
0.065gを添加したものを加え、超音波処理(135
ワツト,20分間)により系を均一にする。かくし
て得られた原料溶液を中空系モジユールを用いた
循環方式透析法により透析を行う。その際回転子
及びスターラーを用いて原料溶液を攪拌する。透
析液には生理食塩水にアスコルビン酸ナトリウム
を添加(0.05%w/v)したものを用いる。室温
(25〜28℃)で8時間透析を行い、コール酸ナト
リウムを除去するとヘモグロビン及びアスコルビ
ン酸ナトリウムを含有したリポソームが得られ
る。 発明の具体的作用効果 本発明におけるヘモグロビン含有リポソームの
製造方法は、透析法によりリポソームを形成せし
めるので製造装置が簡単であり、大量生産に適し
ている。 更に、本発明の製法によれば、薄膜法に比べて
径が均一化されたリポソームが得られる。リポソ
ームの径にばらつきがあると、これを人工赤血球
として使用する際に不都合が生じる。即ち、リポ
ソームの中に径の大きすぎるものがあると血管を
閉塞して血栓の原因となり、また径の小さすぎる
ものは血管壁を通り抜けてしまう。従つて本発明
の製法によれば人工赤血球に適したリポソームが
提供される。 更にメトヘモグロビン化防止剤の存在下で透析
を行うのでヘモグロビンが製造工程中にメト型へ
酸化されるものを防止されている。
Claims (1)
- 1 リポソーム膜形成脂質及び界面活性剤を有機
溶媒に溶解し、該溶解から溶媒を除去し、その残
留物にヘモグロビンの生理食塩水溶液にメトヘモ
グロビン化防止剤を添加した溶液を加え、得られ
た原料溶液を上記メトヘモグロビン化防止剤を含
む生理食塩水で透析し、原料溶液から界面活性剤
を除去することにより、リポソームにヘモグロビ
ン及びメトヘモグロビン化防止剤を取り込ませる
ことを特徴とするヘモグロビン含有リポソームの
製造方法。
Priority Applications (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP15928184A JPS6137735A (ja) | 1984-07-31 | 1984-07-31 | ヘモグロビン含有リポソ−ムおよびその製造方法 |
DE8585109515T DE3579865D1 (de) | 1984-07-31 | 1985-07-29 | Haemoglobin-enthaltende liposomen und ein verfahren zu ihrer herstellung. |
EP85109515A EP0170247B1 (en) | 1984-07-31 | 1985-07-29 | Hemoglobin-containing liposomes and process for preparing the same |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP15928184A JPS6137735A (ja) | 1984-07-31 | 1984-07-31 | ヘモグロビン含有リポソ−ムおよびその製造方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS6137735A JPS6137735A (ja) | 1986-02-22 |
JPH0474338B2 true JPH0474338B2 (ja) | 1992-11-26 |
Family
ID=15690365
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP15928184A Granted JPS6137735A (ja) | 1984-07-31 | 1984-07-31 | ヘモグロビン含有リポソ−ムおよびその製造方法 |
Country Status (3)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0170247B1 (ja) |
JP (1) | JPS6137735A (ja) |
DE (1) | DE3579865D1 (ja) |
Families Citing this family (15)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR2597367B1 (fr) * | 1986-04-22 | 1988-07-15 | Oreal | Procede pour faciliter la formation de spherules lipidiques en dispersion dans une phase aqueuse et pour ameliorer leur stabilite et leur taux d'encapsulation, et dispersions correspondantes. |
US4776991A (en) * | 1986-08-29 | 1988-10-11 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy | Scaled-up production of liposome-encapsulated hemoglobin |
JPS63211230A (ja) * | 1987-02-27 | 1988-09-02 | Terumo Corp | ヘモグロビン含有リポソ−ム |
JPS6461426A (en) * | 1987-08-31 | 1989-03-08 | Terumo Corp | Artificial erythrocyte |
JP2916684B2 (ja) * | 1988-03-04 | 1999-07-05 | 武田薬品工業株式会社 | リポソーム製剤の精製法 |
JPH0661459B2 (ja) * | 1988-09-26 | 1994-08-17 | テルモ株式会社 | リポソームおよびその製法 |
DE69420876T2 (de) * | 1993-03-18 | 2000-04-20 | Terumo Corp | Liposom mit eingekapseltem Hämoglobin sowie Verfahren zu dessen Herstellung |
US5674528A (en) * | 1994-06-15 | 1997-10-07 | Terumo Kabushiki Kaisha | Hemoglobin-encapsulated liposome |
WO2001002438A1 (fr) * | 1999-07-01 | 2001-01-11 | International Reagents Corporation | Moyens pour stabiliser les hemoglobines |
US20040077604A1 (en) | 2001-12-19 | 2004-04-22 | Lenard Lichtenberger | Method and compositions employing formulations of lecithin oils and nsaids for protecting the gastrointestinal tract and providingenhanced therapeutic activity |
GB0111279D0 (en) * | 2001-05-10 | 2001-06-27 | Nycomed Imaging As | Radiolabelled liposomes |
EP1585504A4 (en) * | 2002-11-06 | 2009-07-15 | Azaya Therapeutics Inc | LIPOSOMAL PREPARATIONS OF PHARMACEUTICAL AGENTS STABILIZED BY PROTEINS |
JP2004307404A (ja) | 2003-04-08 | 2004-11-04 | Nipro Corp | 人工酸素運搬体を含む医薬組成物 |
JP5046327B2 (ja) * | 2007-04-18 | 2012-10-10 | 株式会社三谷バルブ | エアゾール容器のガス抜き機構および、このガス抜き機構を備えたエアゾール式製品 |
CN104261576A (zh) * | 2014-09-30 | 2015-01-07 | 北京建筑材料科学研究总院有限公司 | 一种洗灰水在蒸发结晶器中的阻垢防垢方法及装置 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS52151718A (en) * | 1976-06-10 | 1977-12-16 | Univ Illinois | Production of capsulated hemoglobin |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB658060A (en) * | 1948-06-23 | 1951-10-03 | Sharp & Dohme Inc | Pharmaceutical compositions and their preparation |
-
1984
- 1984-07-31 JP JP15928184A patent/JPS6137735A/ja active Granted
-
1985
- 1985-07-29 EP EP85109515A patent/EP0170247B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-07-29 DE DE8585109515T patent/DE3579865D1/de not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS52151718A (en) * | 1976-06-10 | 1977-12-16 | Univ Illinois | Production of capsulated hemoglobin |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP0170247A3 (en) | 1986-05-14 |
JPS6137735A (ja) | 1986-02-22 |
EP0170247A2 (en) | 1986-02-05 |
DE3579865D1 (de) | 1990-10-31 |
EP0170247B1 (en) | 1990-09-26 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JPH0474338B2 (ja) | ||
EP0234919B1 (en) | Lipid composition | |
US4397846A (en) | Storage-stable lipid vesicles and method of preparation | |
US4675310A (en) | Liposome composition as gas transport agents | |
Finkelstein et al. | Effect of cholesterol on the water permeability of thin lipid membranes | |
US4921706A (en) | Unilamellar lipid vesicles and method for their formation | |
CA2097199C (en) | Preparation of prothrombin time reagents from recombinant human tissue factor and purified natural and synthetic phospholipids | |
Rouslin et al. | Mitochondrial cholesterol content and membrane properties in porcine myocardial ischemia | |
Laws et al. | Metabolism of isolated liver cells | |
US5049391A (en) | Liposome encapsulated hemoglobin | |
JPH1146759A (ja) | 細胞培養液 | |
JPH0459735A (ja) | ヘモグロビン含有リポソーム | |
JPS62178521A (ja) | ヘモグロビン含有リポソ−ム | |
EP0687463A1 (en) | Hemoglobin-encapsulated liposome | |
Simpkins et al. | Studies on the characterization of the sodium—potassium transport adenosinetriphosphatase: XIII. On the organization and role of phospholipids in the purified enzyme | |
JPH02178233A (ja) | ヘモグロビン含有リポソームおよびその製法 | |
WO1988006436A1 (en) | Process for preparing liposome | |
JP2936109B2 (ja) | ヘモグロビン含有小胞体の製造法 | |
JPH0610131B2 (ja) | リポソームの製法 | |
JPH02295917A (ja) | 内包物の酸化を抑制したリポソームおよびその製法 | |
JPH049337A (ja) | ヘモグロビン含有リポソームの製造法 | |
JPH0573726B2 (ja) | ||
RU2097038C1 (ru) | Способ получения фосфолипидного носителя холестерина | |
JPH02295933A (ja) | 封入純度の高いプラスミノーゲン活性化因子封入リポソームの製造法 | |
Domokos et al. | Preparation, properties and biological function of liposome encapsulated hemoglobin |