JPH0453880B2 - - Google Patents
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Landscapes
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- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、ヒトα型インターフエロン抗体に関
する。 本明細書において、アミノ酸、ペプチド、保護
基、活性基、その他に関し略号で表示する場合
IUPAC、IUBの規定或いは当該分野における慣
用記号に従うものとし、その例を次に挙げる。ま
たアミノ酸などに関し光学異性体がありうる場合
は、特に明示しなければＬ体を示すものとする。 Ser：セリン Leu：ロイシン Thr：スレオニン Asn：アスパラギン Glu：グルタミン Glu：グルタミン酸 Arg：アルギニン Lys：リジン Tyr：チロシン OBzl：ベンジルオキシ基 Ｚ：カルボベンゾキシ基 NHS：Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド基 Tos：ｐ−トルエンスルホニル基 Boc：第３級ブトキシカルボニル基 インターフエロンは、生体の細胞がウイルス感
染を受けた時に産生する抗ウイルス性糖蛋白質乃
至は蛋白質であり、その利用によればウイルス性
疾患の予防または治療が可能であるとされ、近年
注目を集めつつある。現在解明されているヒトの
インターフエロンは、β型インターフエロン
（Fibro blast interferon）、α型インターフエロ
ン（Leucocytes interferon、Lympho blastoid
interferon）及びγ型インターフエロン
（Immune interferon）に分類される。しかしな
がらこれらのインターフエロンを単一な糖蛋白質
乃至は蛋白質にまで精製する技術は未だ確立され
ていないのが現状である。 本発明者らはヒトのα型インターフエロンに対
して特異的に反応する抗体を利用すれば、抗原−
抗体反応によつてヒトα型インターフエロンを精
製出来ると考え、この着想から感度よくヒトα型
インターフエロンを選択し、該インターフエロン
に対して特異的反応性を示す抗体を得るべく鋭意
研究を進めてきた。その過程において、ヒトα型
インターフエロンの１種であるヒトリムホブラス
トイドインターフエロンのＣ末端ペプチド鎖を有
するある種のペプチドを合成し、これをハプテン
として抗原を合成した所、該抗原は極めて強い免
疫原性を有し、抗原能力に優れたものであり、該
抗原からヒトα型インターフエロンに対し特異的
反応性を有する所望の抗体が収得できることを見
い出した。 本発明はこの新しい知見に基づき完成されたも
のであり、一般式 Ｒ−Ser−Leu−Ser−Thr−Asn−Leu−Gln−Glu−Ser−L
eu−Arg−Ser−Lys−Glu−OH(1) 〔式中Ｒは水素原子又はＨ−Tyr−基を示す〕 で表わされるペプチドに特異的反応性を有するこ
とを特徴とするヒトα型インターフエロン抗体に
係る。 本発明の抗体を利用すればラジオイムノアツセ
イ法（RIA法）、エンザイムイムノアツセイ法
（EIA法）等によるヒトα型インターフエロンの
測定や、本発明抗体のカラムを用いるアフイニテ
イークロマトグラフイー法により、ヒトα型イン
ターフエロンの精製が可能である。 上記一般式(1)で表わされるペプチドは、新規化
合物であり、これは入手容易な市販のアミノ酸を
利用して、常法に従い合成することができ、例え
ば後記製造例に示す方法により製造される。 ヒトα型インターフエロン抗原は、上記ペプチ
ドの１種のハプテンとし、これをハプテン−担体
結合試薬の存在下に、適当な担体と反応させるこ
とにより製造される。 上記方法においてハプテンに結合される担体と
しては、通常抗原の作成に当り慣用される高分子
の天然若しくは合成蛋白質を広く使用できる。該
担体としては、例えば馬血清アルブミン、牛血清
アルブミン、ウサギ血清アルブミン、人血清アル
ブミン、ヒツジ血清アルブミン等の動物の血清ア
ルブミン類、馬血清グロブリン、牛血清グロブリ
ン、ウサギ血清グルブリン、人血清グロブリン、
ヒツジ血清グロブリン等の動物の血清グロブリン
類、馬チログロブリン、牛チログロブリン、ウサ
ギチログロブリン、人チログロブリン、ヒツジチ
ログロブリン等の動物のチログロブリン類、馬ヘ
モグロブリン、牛ヘモグロブリン、ウサギヘモグ
ロブリン、人ヘモグロブリン、ヒツジヘモグロブ
リン等の動物のヘモグロブリン類、動物のヘモシ
アニン類、回虫より抽出された蛋白質（アスカー
リス抽出物、特開昭56−16414号公報、J.
Immun.、111、260〜268（1973）、J.Immun.、
122、302〜308（1979）、J.Immun.、98、893〜900
（1967）及びAm.J.Physiol.、199、575〜578
（1960）に記載されたものまたはこれらを更に精
製したもの）、ポリリジン、ポリグルタミン酸、
リジン−グルタミン酸共重合体、リジン又はオル
ニチンを含む共重合体等を挙げることができる。 ハプテン−担体結合試薬としては、通常抗原の
作成に当り慣用されているものを広く使用でき
る。具体的にはアミノ基とアミノ基とを架橋結合
させる、例えばグリオキサール、マロンジアルデ
ヒド、グルタールアルデヒド、スクシンアルデヒ
ド、アジポアルデヒド等の脂肪族ジアルデヒド
類、チオール基とチオール基とを架橋結合させ
る、例えばＮ、N′−ｏ−フエニレンジマレイミ
ド、Ｎ、N′−ｍ−フエニレンジマレイミド等の
ジマレイミド化合物、アミノ基とチオール基とを
架橋結合させる、例えばメタマレイミドベンゾイ
ル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、４
−（マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１−カ
ルボキシル−N′−ヒドロキシスクシンイミドエ
ステル等のマレイミドカルボキシル−Ｎ−ヒドロ
キシスクシンイミドエステル化合物、アミノ基と
カルボキシル基とをアミド結合させる通常のペプ
チド結合形成反応に用いられる試薬、例えばＮ、
Ｎ−ジシクロヘキシルカルボジイミド（DCC）、
Ｎ−エチル−N′−ジメチルアミノカルボジイミ
ド、１−エチル−３−ジイソプロピルアミノカル
ボジイミド、１−シクロヘキシル−３−（２−モ
ルホリニル−４−エチル）カルボジイミド等のカ
ルボジイミド類等の脱水縮合剤を挙げることがで
きる。また上記ハプテン−担体結合試薬として
は、ｐ−ジアゾニウムフエニル酢酸等のジアゾニ
ウムアリールカルボン酸類と通常のペプチド結合
形成反応試薬、例えば上記脱水縮合剤とを組み合
わせたものも使用可能である。又上記結合試薬と
してはチロシンのフエニル環又はヒスチジンのイ
ミダゾール環を各々架橋結合させる、例えばビス
ジアゾタイズドベンジジン（BDB Bis−
diazotised benzidime）等をも使用することがで
きる。 上記抗原の製造反応は、例えば水溶液もしくは
PH７〜10の通常の緩衝液中好ましくはPH８〜９の
緩衝液中で、０〜40℃好ましくは室温付近で行な
われる。該反応は通常約１〜24時間好ましくは３
〜５時間で完結する。上記において用いられる代
表的緩衝液としては、次のものを例示できる。 0.2N水酸化ナトリウム−0.2Mホウ酸−0.2M塩
化カリウム緩衝液、 0.2炭酸ナトリウム−0.2Mホウ酸−0.2M塩化カ
リウム緩衝液、 0.05M四ホウ酸ナトリウム−0.2Mホウ酸−
0.05M塩化ナトリウム緩衝液、 0.1Mリン酸二水素カリウム−0.05M四ホウ酸
ナトリウム緩衝液 上記においてハプテン、ハプテン−担体結合試
薬及び担体の使用割合は、適宜に決定できるが、
通常ハプテンに対して担体を２〜６倍重量好まし
くは３〜５倍重量、及びハフテン−担体結合試薬
を５〜10倍モル程度用いるのがよい。上記反応に
よりハプテン−担体結合試薬を仲介させて担体と
ハプテンとが結合したペプチド−担体複合体から
成るヒトα型インターフエロン抗原が収得され
る。 反応終了後得られる抗原は常法に従い、例えば
透析法、ゲル過法、分別沈殿法等により容易に
単離精製できる。また該抗原は通常の凍結乾燥法
により保存できる。 かくしてヒトα型インターフエロンのＣ末端ペ
プチド及びその誘導体の１種と、担体との複合体
から成るヒトα型インターフエロン抗原を得る。
該抗原は、通常蛋白質１モルに対しペプチドが平
均５〜20モル結合したものであり、いずれも引き
続き再現性よく、ヒトα型インターフエロンに対
する特異性の高い抗体の作成を可能とするもので
ある。特に上記蛋白質に対するペプチドの結合モ
ル比が１：８〜15のものは、特異性が一層高く高
力価、高感度の抗体を作成し得るものであり好ま
しい。 上記で得られる抗原による抗体の作成は、以下
の如くして行なわれる。即ち上記抗原を哺乳動物
に投与し、生体内に産生される抗体を採取するこ
とにより行なわれる。 抗体の製造に供せられる哺乳動物としては、特
に制限はないが、通常兎やモルモツトを用いるの
が望ましい。抗体の産生に当つては、上記により
得られる抗原の所定量の生理食塩水で適当濃度に
希釈し、フロインドの補助液（Complete
Freund′s Adjuvant）と混合して懸濁液を調整
し、之を哺乳動物体に投与すればよい。例えば兎
に上記懸濁液を皮内注射（抗原の量として0.5〜
５mg／回）し、以後２週間毎に２〜10ケ月好まし
くは４〜６ケ月間投与し免疫化させればよい。抗
体の採取は、上記懸濁液の最終投与後抗体が多量
産出される時期、通常上記最終投与１〜２週間経
過後、免疫化された動物から採血し、之を遠心分
離後血清を分離採取することにより行なわれる。
上記によれば用いる抗原の特殊性に基づいて、ヒ
トα型インターフエロンに対して優れた特異性を
有し、高力価、高感度の抗体を収得できる。 かくして得られるヒトα型インターフエロン抗
体は、例えばこれをRIA法に利用してヒトα型イ
ンターフエロンの定量の高精度をもつて可能とす
る。また該抗体は、これを酵素または螢光物質で
標識することによつて（EIA）法やフローレツセ
ンスイムノアツセイ（FIA）法等に使用できる。
さらに該抗体は公知の不溶化させる物質と反応さ
せて不溶化抗体とすることもできる。 以下本発明を更に詳しく説明するため、一般式
(1)をペプチド、これを利用した抗原及び該抗原か
らの抗体の製造例を挙げるが、本発明はこれに限
定されるものではない。 尚各製造例におけるRf値はシリカゲル上の薄
層クロマトグラフイーにて下記混合溶媒を用いて
測定したものである。 Rf〓…１−ブタノール酢酸−水（４：１：５） Rf〓…１−ブタノール−ピリジン−酢酸−水
（15：10：３：12） ＜ペプチドの合成＞ 製造例 １ １ Ｚ−Lys（Tos）−Glu（OBzl）−OBzlの製造 Ｈ−Glu（OBzl）−OBzl・Tos 4.18ｇをジメ
チルホルムアミド（DMF）30mlに溶解し、ト
リエチルアミン（TEA）1.21mlを加え、撹拌
下冷却する。一方Ｚ−Lys（Tos）−OH4.35ｇを
テトラヒドロフラン（THF）30mlに溶解し、
Ｎ−メチルモルホリン0.98mlを加え−15℃に冷
却し、撹拌下クロロ蟻酸イソブチル1.27mlを滴
下する。滴下30秒後該液に上記で調製した冷
DMF溶液を加え、この混合液を０℃下に５分
間、次いで40℃の水浴中で１分間、更に15℃下
に30分間撹拌する。反応液よりTHF及びDMF
を減圧留去し、残渣を酢散エチルで抽出する。
抽出液を1Nクエン酸、飽和食塩水、飽和炭酸
水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で順次洗
浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、酢酸エチ
ルを留去する。得られる油状残渣にエチルエー
テルを加えて固化させ、これを酢酸エチル−エ
ーテルより再沈殿させて目的物5.37ｇを得る。 Rf〓＝0.96 Rf〓＝0.90 元素分析値（C40H45N3O9Sとして） 計算値（％） C64.59 H6.10 N5.65 実測値（％） C64.13 H5.95 N5.63 ２(a) Ｈ−Lys（Tos）−Glu−OHの製造 Ｚ−Lys（Tos）−Glu（OBzl）−OBzl5.21ｇ
をメタノール80mlと10％酢酸20mlとの混液に
溶解し、パラジウムブラツク少量を加えH2
ガス導入下１夜撹拌する。反応終了後触媒を
吸引過により去し、液を減圧蒸留し、
残渣を水に注ぎ凍結乾燥して目的物を得る。 Rf〓＝0.29 Rf〓＝0.52 ２(b) Ｚ−Ser−Lys（Tos）−Glu−OHの製造 Ｚ−Ser−NHNH22.13ｇをDMF20mlに溶
解し、6N塩酸／ジオキサン4.20mlを加え、−
15℃に冷却し、撹拌下亜硝酸イソアミル1.13
mlを加える。反応液がヒドラジドテスト陰性
になつた後TEA3.53mlの冷DMF1.20ml溶液
を少量宛滴下し中和させる。このアジドを含
む溶液を、上記(a)で得たＨ−Lys（Tos）−
Glu−OH及びTEA1.96mlの冷DMF溶液に加
え、混合液を−10〜−15℃下２時間、次いで
４℃下20時間撹拌する。DMFを減圧留去し、
残渣を酢酸エチルで抽出し、酢酸エチル層を
1Nクエン酸及び飽和食塩水で洗浄し、無水
硫酸ナトリウムで乾燥後、酢酸エチルを減圧
留去する。得られる残渣にエチルエーテルを
加えて固化させ、酢酸エチル−エーテルより
再沈殿させて、目的物4.14ｇを得る。 Rf〓＝0.64 Rf〓＝0.65 元素分析値（C29H38N4O11S・1/2H2Oとし
て） 計算値（％） C52.80 H5.96 N8.49 実測値（％） C52.87 H5.69 N8.46 ３(a) Ｈ−Ser−Lys（Tos）−Glu−OHの製造 Ｚ−Ser−Lys（Tos）−Glu−OH4.03ｇを
メタノール60mlと10％酢酸40mlとの混液に溶
解し、パラジウムブラツク少量を加えH2ガ
ス導入下１夜撹拌する。反応終了後触媒を吸
引過により去し、液を減圧蒸留し、残
渣を水に注ぎ凍結乾燥して目的物を得る。 Rf〓＝0.23 Rf〓＝0.48 ３(b) Ｚ−Arg（NO2）−Ser−Lys（Tos）−Glu−
OHの製造 上記(a)で得たＨ−Ser−Lys（Tos）−Glu−
OHをDMF20mlに溶解し、TEA1.74mlを加
え、撹拌下冷却する。一方Ｚ−Arg（NO2）−
OH2.41ｇをTHF20mlに溶解し、Ｎ−メチル
モルホリン0.70mlを加え−15℃に冷却し、撹
拌下クロロ蟻酸イソブチル0.86mlを滴下す
る。滴下30秒後該液に上記で調製した冷
DMF溶液を加え、この混合液を０℃に５分
間、次いで40℃の水浴中で１分間、更に15℃
下に30分間撹拌する。反応液よりTHF及び
DMFを減圧留去し、残渣を２％酢酸飽和ブ
タノールで抽出する。抽出液をｎ−ブタノー
ル飽和の２％酢酸で５回洗浄し、減圧蒸留
し、水に置き変えて酢酸を留去し、更にメタ
ノールに置き変えて水を留去する。得られる
油状残渣にエチルエーテルを加えて固化さ
せ、これを酢酸エチル−メタノールより再沈
殿させて目的物4.09ｇを得る。 Rf〓＝0.42 Rf〓＝0.65 元素分析値（C35H49N9O14S・1/2H2Oとし
て） 計算値（％） C48.83 H5.85 N14.64 実測値（％） C49.22 H6.05 N14.11 ４ Ｚ−Ser−Leu−NHNH2の製造 Ｚ−Ser−NHNH22.54ｇをDMF20mlに溶解
し、6N塩酸／ジオキサン5.00mlを加え、−15℃
に冷却し、撹拌下亜硝酸イソアミル1.34mlを加
える。反応液がヒドラジドテスト陰性になつた
後TEA4.20mlの冷DMF1.40ml溶液を少量宛滴
下し中和させる。このアジドを含む溶液を、Ｈ
−Leu−OC2H5・HCl1.96ｇ及びTEA1.40mlの
冷DMF溶液15mlに加え、混合液を−10〜−15
℃下２時間、次いで４℃下20時間撹拌する。
DMFを減圧留去し、残渣を酢酸エチルで抽出
し、酢酸エチル層を1Nクエン酸、飽和食塩水、
飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水
で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、
酢酸エチルを減圧留去する。得られる残渣に石
油エーテルを加えデカンテーシヨンにより洗浄
する。油状物質をデシケーター内で減圧乾燥
し、乾燥物をメタノール50mlに溶かし、氷冷
100％ヒドラジン１水和物2.50mlを加え、室温
下20時間放置し、メタノールを減圧留去する。
残渣にエチルエーテルを加えて固化させ、これ
をデシケーター内で乾燥後、水洗過して過剰
のヒドラジン１水和物を除去し、メタノール−
酢酸エチルから再沈殿させて、目的物2.68ｇを
得る。 Rf〓＝0.73 Rf〓＝0.76 元素分析値（C17H16N4O5として） 計算値（％） C55.73 H7.15 N15.29 実測値（％） C55.72 H7.01 N15.42 ５(a) Ｈ−Arg−Ser−Lys（Tos）−Glu−OHの
製造 Ｚ−Arg（NO2）−Ser−Lys（Tos）−Glu−
OH2.00ｇをメタノール30mlと50％酢酸30ml
との混液に懸濁し、パラジウムブラツク少量
を加えH2ガス導入下36時間撹拌する。反応
終了後触媒を吸引過により去し、液を
減圧蒸留し、残渣を水に注ぎ凍結乾燥し、18
時間後再度水に溶かして凍結乾燥して目的物
を得る。 Rf〓＝0.05 Rf〓＝0.41 ５(b) Ｚ−Ser−Leu−Arg−Ser−Lys（Tos）−
Glu−OHの製造 Ｚ−Ser−Leu−NHNH21.03ｇをDMF15
mlに溶解し、6N塩酸／ジオキサン1.41mlを
加え、−15℃に冷却し、撹拌下亜硝酸イソア
ミル0.38mlを加える。反応液がヒドラジドテ
スト陰性になつた後TEA1.18mlの冷
DMF0.40ml溶液を少量宛滴下し中和させる。
このアジドを含む溶液を、上記(a)で得たＨ−
Arg−Ser−Lys（Tos）−Glu−OH及び
TEA0.66mlの冷DMF溶液10mlに加え、混合
液を−10〜−15℃の下２時間、次いで４℃下
20時間撹拌する。DMFを減圧留去し、残渣
を水飽和のｎ−ブタノールで抽出し、ブタノ
ール層をｎ−ブタノール飽和水で５回洗浄
し、減圧留去する。得られる残渣にエチルエ
ーテルを加えて固化させ、メタノール−酢酸
エチルより再沈殿させて、目的物1.92ｇを得
る。 Rf〓＝0.33 Rf〓＝0.69 元素分析値（C44H66N10O15S・2H2Oとして） 計算値（％） C50.66 H6.76 N13.43 実測値（％） C50.57 H6.51 N13.34 ６(a) Ｈ−Ser−Leu−Arg−Ser−Lys（Tos）−
Glu−OHの製造 Ｚ−Ser−Leu−Arg−Ser−Lys（Tos）−
Glu−OH1.84ｇをメタノール30mlと10％酢
酸30mlとの混液に懸濁し、パラジウムブラツ
ク少量を加えH2ガス導入下13時間撹拌する。
反応終了後触媒を吸引過により去し、
液を減圧蒸留し、残渣を水に注ぎ凍結乾燥し
て目的物を得る。 Rf〓＝0.09 Rf〓＝0.53 ６(b) Boc−Glu（OBzl）−Ser−Leu−Arg−Ser
−Lys（Tos）−Glu−OHの製造 上記(a)で得たＨ−Ser−Leu−Arg−Ser−
Lys（Tos）−Glu−OHをDMF20mlに溶解し、
TEA0.51mlを氷冷下に加え、更にBoc−Glu
（OBzl）−ONHS0.95ｇを加え、混合液を室
温下24時間撹拌する。DMFを減圧留去し、
残渣を水飽和のｎ−ブタノールで抽出し、ブ
タノール層をｎ−ブタノール飽和の水で５回
洗浄する。ブタノール層を減圧留去し、得ら
れる残渣にエチルエーテルを加えて固化さ
せ、メタノール−酢酸エチルより再沈殿させ
て、目的物1.70ｇを得る。 Rf〓＝0.42 Rf〓＝0.60 元素分析値（C53H81N11O18S・2H2Oとして） 計算値（％） C51.82 H6.97 N12.55 実測値（％） C51.27 H6.58 N12.47 ７(a) Boc−Glu−Ser−Leu−Arg−Ser−Lys
（Tos）−Glu−OHの製造 Boc−Glu（OBzl）−Ser−Leu−Arg−Ser−
Lys（Tos）−Glu−OH150mgをメタノール30ml
と10％酢酸30mlとの混液に溶解し、パラジウム
ブラツク少量を加えH2ガス導入下18時間撹拌
する。反応終了後触媒を吸引過により去
し、液を減圧蒸留し、残渣を水に注ぎ凍結乾
燥して目的物を得る。 ７(b) Ｈ−Glu−Ser−Leu−Arg−Ser−Lys
（Tos）−Glu−OHの製造 上記(a)で得たBoc−Glu−Ser−Leu−Arg
−Ser−Lys（Tos）−Glu−OHをTHFに溶解
し、室温で15分間放置する。無水エーテル約
30mlを加え、析出物を過し、無水エーテル
で洗浄後、水酸化カリウム−五酸化リンを入
れたデシケーター内で減圧乾燥して、目的物
を得る。 ８(a) Ｈ−Gln−NHNHBocの製造 Ｚ−Glu−NHNHBoc16.00ｇをメタノー
ル100mlに懸濁し、パラジウムブラツク少量
を加えH2ガス導入下18時間撹拌する。反応
終了後触媒を吸引過により去し、液を
減圧蒸留し、残渣をデジケーター内で減圧乾
燥して目的物を得る。 Rf〓＝0.37 Rf〓＝0.58 ８(b) Ｚ−Leu−Gln−NHNHBocの製造 上記(a)で得たＨ−Gln−NHNHBocを
THF50mlに溶解し、氷冷下Ｚ−Leu−
ONHS5.51ｇを加え、室温下18時間撹拌す
る。THFを減圧留去し、残渣を酢酸エチル
で抽出し、酢酸エチル層を1Nクエン酸、飽
和食塩水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及
び飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリ
ウムで乾燥後、酢酸エチルを留去する。得ら
れる油状残渣にエチルエーテルを加えて固化
させ、これをメタノール−エチルエーテルよ
り再沈殿させて目的物6.04ｇを得る。 Rf〓＝0.81 Rf〓＝0.86 元素分析値（C24H37N5O7として） 計算値（％） C56.79 H7.35 N13.80 実測値（％） C56.67 H7.15 N13.75 ９(a) Ｈ−Leu−Gln−NHNHBocの製造 Ｚ−Leu−Gln−NHNHBoc2.79ｇをメタ
ノール80mlに懸濁し、パラジウムブラツク少
量を加えH2ガス導入下32時間撹拌する。反
応終了後触媒を吸引過により去し、液
を減圧蒸去し、残渣をデシケーター内で減圧
乾燥して、目的物を得る。 Rf〓＝0.33 Rf〓＝0.66 ９(b) Ｚ−Asn−Leu−Gln−NHNHBocの製造 上記(a)で得たＨ−Leu−Gln−NHNHBoc
をDMF30mlに溶解し、撹拌下冷却する。一
方Ｚ−Asn−OH1.61ｇをTHF30mlに溶解
し、Ｎ−メチルモルホリン0.62mlを加え−15
℃に冷却し、撹拌下クロロ蟻酸イソブチル
0.80mlを滴下する。滴下30秒後該液に上記で
調製した冷DMF溶液を加え、この混合液を
０℃下に５分間、次いで40℃の水浴中で１分
間、更に15℃下に30分間撹拌する。反応液よ
りTHF及びDMFを減圧留去し、残渣を酢酸
エチルで抽出する。抽出液を1Nクエン酸、
飽和食塩水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液
及び飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸ナト
リウムで乾燥後、酢酸エチルを留去する。得
られる油状残渣にエチルエーテルを加えて固
化させ、メタノール−酢酸エチルで再沈殿さ
せて目的物2.55ｇを得る。 Rf〓＝0.63 Rf〓＝0.77 元素分析値（C28H43N7O9として） 計算値（％） C53.10 H6.97 N15.77 実測値（％） C53.67 H6.63 N15.68 10(a) Ｚ−Thr−ONHSの製造 Ｚ−Thr−OH1.28ｇをTHF30mlに溶解
し、これにNHS0.58ｇを加え、氷冷し、次
いでＮ，Ｎ−ジシクロヘキシルカルボジイミ
ド（DCC）1.05ｇを加える。この混合液を４
℃で24時間撹拌し、析出物を去し、液を
減圧留去し、残渣にエチルエーテルを加え、
デカンテーシヨン洗浄する。得られる油状物
質をデシケーター内にて減圧乾燥して目的物
を得る。 10(b) Ｈ−Asn−Leu−Gln−NHNHBocの製造 Ｚ−Asn−Leu−Gln−NHNHBoc2.43ｇ
をメタノール80mlに懸濁し、パラジウムブラ
ツク少量を加え、H2ガス導入下18時間撹拌
する。反応終了後触媒を吸引過により去
し、液を減圧留去し、デジケーター内で減
圧乾燥して目的物を得る。 Rf〓＝0.31 Rf〓＝0.64 10(c) Ｚ−Thr−Asn−Leu−Gln−NHNHBoc
の製造 上記(b)で得たＨ−Asn−Leu−Gln−
NHNHBocをDMF30mlに溶解し、この溶解
に上記(a)で得たＺ−Thr−ONHSのDMF20
ml溶液を氷冷下に加え、混合液を室温下18時
間撹拌する。DMFを減圧留去して得られた
残渣に1Nクエン酸を加えて固化し、メタノ
ール−酢酸エチルより再沈殿させて、目的物
2.12ｇを得る。 Rf〓＝0.82 Rf〓＝0.79 元素分析値（C32H50N8O11として） 計算値（％） C53.18 H6.97 N15.50 実測値（％） C52.85 H6.95 N15.28 11(a) Ｚ−Thr−Asn−Leu−Gln−NHNH2の製
造 Ｚ−Thr−Asn−Leu−Gln−
NHNHBoc0.91ｇをTFA8mlに溶解し、室温
下15分間放置する。無水エーテル80mlを加え
て析出物をすばやく過し、無水テーテルで
洗浄後、水酸化カリウム−五酸化リンを入れ
たデシケーター内で減圧乾燥して目的物を得
る。 Rf〓＝0.34 11(b) Ｈ−Glu（OBzl）−Ser−Leu−Arg−Ser−
Lys（Tos）−Glu−OHの製造 Boc−Glu（OBzl）−Ser−Leu−Arg−Ser
−Lys（Tos）−Glu−OH1.00ｇをTFA8mlに
溶解し、室温下15分間放置する。無水エーテ
ル80mlを加えて析出物をすばやく過し、無
水エーテルで洗浄後、水酸化カリウム−五酸
化リンを入れたデシケーター内で減圧乾燥し
て目的物を得る。 Rf〓＝0.24 Rf〓＝0.44 11(c) Ｚ−Thr−Asn−Leu−Gln−Glu（OBzl）−
Ser−Leu−Arg−Ser−Lys（Tos）−Glu−
OHの製造 上記(a)で得たＺ−Thr−Asn−Leu−Gln
−NHNH2をDMF10mlに溶解し、6N塩酸／
ジオキサン0.63mlを加え、−15℃に冷却し、
撹拌下亜硝酸イソアミル0.17mlを加える。反
応液がヒドラジドテスト陰性になつた後
TEA0.53mlの冷DMF0.40ml溶液を少量宛滴
下し中和させる。このアジドを含む溶液を、
上記(b)で得たＨ−Glu（OBzl）−Ser−Leu−
Arg−Ser−Lys（Tos）−Glu−OH及び
TEA0.24mlの冷DMF溶液10mlに加え、混合
液を−10〜−15℃下２時間、次いで４℃下18
時間撹拌反応させる。さらに上記(a)と同様に
してＺ−Thr−Asn−Leu−Gln−
NHNHBoc1.16ｇをTFAで処理して得た反
応物を上記反応混合物に加え24時間同温度下
に撹拌反応させる。DMFを減圧留去し、残
渣を水飽和のｎ−ブタノールで抽出し、ｎ−
ブタノール飽和の水で５回洗浄し、減圧蒸留
する。残渣にエチルエーテルを加えて固化さ
せ、メタノール−酢酸エチルより再沈殿させ
更に熱メタノールで洗浄して、目的物を得
る。 11(d) Ｈ−Thr−Asn−Leu−Gln−Glu−Ser−
Leu−Arg−Ser−Lys（Tos）−Glu−OHの製
造 上記(c)で得たＺ−Thr−Asn−Leu−Gln
−Glu（OBzl）−Ser−Leu−Arg−Ser−Lys
（Tos）−Glu−OHをメタノール50ml及び30
％酢酸50mlとの混液に懸濁させ、パラジウム
ブラツク少量を加え、H2ガス導入下18時間
撹拌する。反応終了後触媒を吸引過より
去し、液を減圧濃縮し、メタノールを完全
に留去後、得られる濃縮液を、50％酢酸を溶
出液とするセフアデツクスＧ−25によりゲル
過して、目的とするフランクシヨンを集め
凍結乾燥して目的物740mlを得る。 Rf〓＝0.17 Rf〓＝0.35 元素分析値（C66H99N17O23・C2H4O2・
2H2Oとして） 計算値（％） C48.91 H7.08 N15.64 実測値（％） C48.82 H6.63 N15.74 12 Ｚ−Leu−Ser−OCH3の製造 Ｈ−Ser−OCH3・HCl1.81ｇをDMF25mlに
溶解し、TEA1.62mlを加え−10℃に氷冷する。
撹拌下Ｚ−Leu−ONHS4.21ｇを加え、室温で
18時間撹拌を続ける。DMFを減圧留去し、残
渣を酢酸エチルで抽出し、酢酸エチル層を水洗
し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、酢酸エチル
を減圧留去する。得られる残渣にエチルエーテ
ルを加えて固化させ、酢酸エチル−エーテルよ
り再沈殿させて、目的物2.68ｇを得る。 Rf〓＝0.81 Rf〓＝0.82 元素分析値（C18H26O6として） 計算値（％） C59.00 H7.15 N7.65 実測値（％） C58.62 H7.03 N7.65 13(a) Ｈ−Leu−Ser−OCH3・HClの製造 Ｚ−Leu−Ser−OCH34.20ｇをメタノール
40mlと1N塩酸11.46mlとの混液に懸濁させ、
パラジウムブラツク少量を加え、H2ガス導
入下18時間撹拌する。反応終了後触媒を吸引
過により去し、液を減圧蒸留し、更に
水を加え減圧蒸留する操作を３回繰返す。残
渣を五酸化リンを入れたデシケーター内で減
圧乾燥して目的物を得る。 Rf〓＝0.38 13(b) Ｚ−Ser−Leu−Ser−OCH3の製造 Ｚ−Ser−NHNH23.19ｇをDMF25mlに溶
解し、6N HCl／ジオキサン6.30mlを加え、
−15℃に冷却し、撹拌下亜硝酸イソアミル
1.69mlを加える。反応液がヒドラジドテスト
陰性になつた後TEA5.29mlの冷DMF1.76ml
溶液を少量宛滴下し中和させる。このアジド
を含む溶液を、上記(a)で得たＨ−Leu−Ser
−OCH3・HCl及びTEA1.60mlの冷DMF溶
液20mlに加え、混合液を−10〜−15℃下２時
間、次いで４℃18時間撹拌する。DMFを減
圧留去し、残渣に水を加えて固化させ、メタ
ノール−酢酸エチルより再沈殿させて、目的
物4.11ｇを得る。 Rf〓＝0.76 Rf〓＝0.79 元素分析値（C21H31N3O8として） 計算値（％） C55.62 H6.89 N9.27 実測値（％） C55.48 H6.92 N9.18 14(a) Ｚ−Ser−Leu−Ser−NHNH2の製造 Ｚ−Ser−Leu−Ser−OCH32.00ｇをメタ
ノール40mlに溶解し、氷冷下100％
NH2NH2・H2O1.10mlを加え、室温で18時
間放置する。反応終了後、溶媒を減圧留去
し、エーテルを加えて固化させ、過剰の
NH2NH2・H2Oを水を加えて除去し、メタ
ノール−酢酸エチルより再沈殿させて目的物
1.91ｇを得る。 Rf〓＝0.43 Rf〓＝0.73 元素分析値（C20H31N5O7として） 計算値（％） C52.97 H6.89 N15.44 実測値（％） C52.85 H6.70 N15.44 15(a) Ｚ−Ser−Leu−Ser−Thr−Asn−Leu−
Gln−Glu−Ser−Leu−Arg−Ser−Lys
（Tos）−Glu−OHの製造 Ｚ−Ser−Leu−Ser−NHNH270.42mgを
DMF5mlに溶解し、6N塩酸／ジオキサンの
DMF10倍希釈液0.78mlを加え、−15℃に冷却
し、撹拌下亜硝酸イソアミルのDMF10倍希
釈液0.20mlを加え、反応液がヒドラジドテス
ト陰性になつた後、TEAのDMF10倍希釈液
0.65mlを少量宛滴下し中和させる。このアジ
ドを含む溶液を、上記11(d)で得たＨ−Thr−
Asn−Leu−Gln−Glu−Ser−Leu−Arg−
Ser−Lys（Tos）−Glu−OH151mgと
TEAnDMF10倍希釈液0.29mlの冷DMF5ml
溶液に加え、混合液を−10〜−15℃下２時
間、次いで４℃下18時間撹拌する。更にＺ−
Ser−Leu−Ser−NHNH2117.36mgを加え、
24時間反応させる。 DMFを減圧留去し、残渣を水飽和のｎ−
ブタノールで抽出し、ｎ−ブタノール飽和の
水で10回、更にｎ−ブタノール飽和の２％酢
酸で５回洗浄し、減圧濃縮し、水を加えて更
に減圧濃縮し、完全にｎ−ブタノールを留去
後、凍結乾燥する。これを酢酸エチル−エー
テルで再沈殿させて目的物を得る。 15(b) Ｈ−Ser−Leu−Ser−Thr−Asn−Leu−
Gln−Glu−Ser−Leu−Arg−Ser−Lys−
Glu−OHの製造 Ｚ−Ser−Leu−Ser−Thr−Asn−Leu−
Gln−Glu−Ser−Leu−Arg−Ser−Lys
（Tos）−Glu−OH150mgを予め金属ナトリウ
ムで乾燥した液体アンモニアに溶解し、撹拌
下金属ナトリウムの小片を溶液が青色を30秒
〜１分間保つまで加える。更に結晶NH4Cl
を加え、過剰のナトリウムを中和し、室温で
アンモニアを完全に蒸発後、溶出液に50％酢
酸を用いたセフアデツクスＧ−25ゲルにより
ゲル過して、フラクシヨンを集めこれを濃
縮後水を加えて凍結乾燥して、目的物94mgを
得る。これを「ペプチドＡ」と呼ぶ。 Rf〓＝0.02 Rf〓＝0.39 元素分析値（C65H120N20O26・C2H4O2・
H2Oとして） 計算値（％） C48.19 H7.24 N16.78 実測値（％） C47.93 H6.93 N16.49 16(a) Ｚ−Tyr−OSuの製造 Ｚ−Tyr−OH1.04ｇをTHF30mlに溶解
し、Ｎ−ヒドロキシサクシンイミド0.38mlを
加え、氷冷後更にDCC0.68ｇを氷冷下に加
え、混合物を４℃で18時間撹拌する。析出物
を吸引過により除き、液を減圧濃縮し、
残渣にエチルエーテルと石油エーテルとを加
えてデカンテーシヨン、乾燥して目的物を得
る。 16(b) Ｈ−Ser−Leu−Ser−OCH3の製造 参考例13(b)で得たＺ−Ser−Leu−Ser−
COH31.00ｇをメタノール20mlと10％酢酸20
mlに懸濁し、パラジウムブラツク少量を加
え、H2ガス導入下14時間撹拌する。反応終
了後触媒を吸引過により去し、液を減
圧濃縮後水を加えて凍結乾燥して目的物を得
る。 Rf〓＝0.35 Rf〓＝0.65 16(c) Ｚ−Tyr−Ser−Leu−Ser−COH3の製造 上記(b)で得たＨ−Ser−Leu−Ser−COH3
をDMF10mlに溶解し、TEA0.31mlを氷冷下
に加え、この溶液に上記(a)で得たＺ−Tyr−
OSuの冷DMF溶液を撹拌下に加える。混合
液を室温下18時間撹拌し、DMFを減圧留去
し、残渣に水を加えて固化させ、メタノール
−エーテル次いでメタノール−酢酸エチルか
ら再沈殿させて目的物1.08ｇを得る。 Rf〓＝0.78 Rf〓＝0.82 元素分析値（C30H40N4O10として） 計算値（％） C58.43 H6.54 N9.09 実測値（％） C58.14 H6.58 N9.16 16(d) Ｚ−Tyr−Ser−Leu−Ser−NHNH2の製
造 Ｚ−Tyr−Ser−Leu−Ser−COH31.00ｇ
をメタノールに溶解し、氷冷下100％
NH2NH2・H2O0.82mlを加え、室温で18時
間放置する。メタノールを減圧留去し、残渣
にエチルエーテルを加えて固化させ、水洗に
より過剰のNH2NH2・H2Oを除去し、メタ
ノール−エーテルで再沈殿後熱メタノールで
洗浄して目的物0.81ｇを得る。 Rf〓＝0.45 Rf〓＝0.76 元素分析値（C29H40N6O9として） 計算値（％） C56.48 H6.54 N13.63 実測値（％） C56.12 H6.57 N13.58 17(a) Ｚ−Tyr−Ser−Leu−Ser−Thr−Asn−
Leu−Gln−Glu−Ser−Leu−Arg−Ser−
Lys（Tos）−Glu−OHの製造 Ｚ−Tyr−Ser−Leu−Ser−NHNH242.3
mlをDMF4mlに溶解し、6N塩酸／ジオキサ
ンのDMF10倍希釈液0.34mlを加え、−15℃に
冷却し、撹拌下亜硝酸イソアミルのDMF10
倍希釈液0.09mlを加え、反応液がヒドラジン
テスト陰性になつた後、TEAのDAF10倍希
釈液0.29mlを少量ずつ滴下し中和させる。こ
のアジドを含む溶液を、Ｈ−Tyr−Asn−
Leu−Gln−Glu−Ser−Leu−Arg−Ser−
Lys（Tos）−Glu−OH50.0mgとTEAの
DMF10倍希釈液0.10の冷DMF4ml溶液に加
え、混合液−10〜−15℃下２時間、次いで４
℃下18時間撹拌する。更にＺ−Tyr−Ser−
Leu−Ser−NHNH242.3mlを加え24時間反応
させる。DMFを減圧留去し、残渣を水飽和
のｎ−ブタノール30mlで抽出し、抽出液をｎ
−ブタノール飽和水で10回、次いでｎ−ブタ
ノール飽和の２％酢酸で５回洗浄する。有機
層を集め減圧濃縮し、ｎ−ブタノールを留去
後、凍結乾燥し、酢酸エチル−エーテルで再
沈殿させて目的物を得る。 17(b) Ｈ−Tyr−Ser−Leu−Ser−Thr−Asn−
Leu−Gln−Glu−Ser−Leu−Arg−Ser−
Lys−Glu−OHの製造 上記(a)で得たＺ−Tyr−Ser−Leu−Ser−
Thr−Asn−Leu−Gln−Glu−Ser−Leu−
Arg−Ser−Lys（Tos）−Glu−OHを予め金
属ナトリウムで乾燥した液体アンモニアに溶
解し、撹拌下金属ナトリウム小片の溶液が青
色の30秒〜１分間保つまで加える。更に結晶
NH4Clを加え、過剰のナトリウムを中和し、
室温でアンモニアを完全に蒸発後、溶出液に
50％酢酸を用いてセフアデツクスＧ−25ゲル
によりゲル過して、フラクシヨンを集め目
的物33mgを得る。これを「ペプチドＢ」と呼
ぶ。 Rf〓＝0.02 Rf〓＝0.35 元素分析値（C74H123N21O28・C2H4O2・
4H2Oとして） 計算値（％） C47.71 H7.30 N15.79 実測値（％） C47.32 H7.24 N15.82 ＜抗原の製造＞ 製造例 １ ペプチドの合成製造例15(b)で得たペプチドＡの
５mg及び牛血清アルブミン（BSA）25mgを水４
mlに溶解する。この溶液にジシクロヘキシルカー
ボジイミド（DCC）200mgを加え、室温で５時間
撹拌する。次に反応混合物を水２を用い４℃に
て48時間要して透析する。透析中５回水を交換す
る。この後ペプチド−蛋白質複合体を含む溶液を
凍結乾燥してヒトα型インターフエロン抗原（以
下「抗原」と呼ぶ）28mgを得る。 得られた抗原は、BSA1モルに対してペプチ
ドＡが平均12モル結合したものである。 製造例 ２ ペプチド合成製造例17(b)で得たペプチドＢの４
mg及びBSAの20mgを酢酸アンモニウム緩衝液
（0.1モル、PH7.0）２mlに溶かす。この溶液に0.1
モルのグルタールアルデヒド溶液0.11mlを加え、
室温で５時間撹拌する。その後反応混合物を48時
間、４℃で水１で透析する。透析中５回水を交
換する。その後、ペプチド−蛋白質複合体を含む
溶液を凍結乾燥してヒトα型インターフエロン抗
原（以下「抗原」と呼ぶ）22mgを得る。 得られた抗原は、BSA1モルに対してペプチ
ドＢが平均９モル結合したものである。 製造例 ３ ペプチドの合成製造例15(b)で得たペプチドＡの
４mg及びBSA20mgを酢酸アンモニウム緩衝液
（0.1モル、PH7.0）２mgに溶かる。この溶液に0.1
モルのグルタールアルデヒド溶液0.11mlを加え室
温で５時間撹拌する。その後反応混合物を48時間
４℃で水１で透析する。透析中５回水を交換す
る。その後ペプチド−蛋白質複合体を含む溶液を
凍結乾燥してヒトα型インターフエロン抗原（以
下「抗原」と呼ぶ）21mgを得る。 得られた抗原はBSA1モルに対してペプチド
Ａが平均８モル結合したものである。 製造例 ４ ペプチドの合成製造例17(b)で得たペプチドＢの
5.55mg及びBSAの10.23mgを0.16Mホウ酸塩緩衝液
（0.13M NaCl、PH＝9.0）２mlに溶かす。この溶
液に、BDB1.64mgの同緩衝液3.0mlを加え、４℃
にて５時間撹拌する。その後反応混合物を水１
で透析し、透析中水を５回交換する。その後ペプ
チド−蛋白質複合体を含む溶液を凍結乾燥してヒ
トα型インターフエロン抗原（以下「抗原」と
呼ぶ）17.27mgを得る。得られた抗原はBSA1モ
ルに対してペプチドＢが平均20モル結合したもの
である。 ＜抗体の製造＞ 製造例 １ 抗原の製造例１で得た抗原の60μｇを1.5mlの
生理食塩水に溶解後、之にフロインドの補助液
1.5mlを加えて調製した懸濁液を、５羽の兎（2.5
〜3.0Kg）に皮下投与し、２週間毎に６回同量投
与する。更にその後１カ月毎に３回、最初投与し
た量と同量を投与する。最終投与後７日経過して
のち各試験動物から採血し、遠心分離して抗血清
を夫々採取してヒトα型インターフエロン抗体
（以下「抗体〜」と夫々呼ぶ）を得る。 製造例 ２ 上記製造例１において、抗原を30μｇ使用す
る以外は同様の操作によりヒトα型インターフエ
ロン抗体（抗体〜）を夫々得る。 製造例 ３ 前記抗原の製造例３で得た抗原を60μｇ用い
る以外は、上記製造例１と同様の操作によりヒト
α型インターフエロン抗体（抗体XI〜）を
夫々得る。 製造例 ４ 前記抗原の製造例４で得た抗原を50μｇ用
い、２羽の兎を用いて上記製造例１と同様の操作
によりヒトα型インターフエロン抗体（抗体
及び）を夫々得る。 Γ標識ペプチドの製造 Ｈ−Tyr−Ser−Leu−Ser−Thr−Asn−
Leu−Gln−Glu−Ser−Leu−Arg−Ser−Lys
−Glu−OH即ちペプチドＢをクロラミンＴを
用いる方法で以下の通り標識化する。 即ち上記ペプチド5μｇの0.5モルのリン酸塩
緩衝液（PH7.0）20μにNa〔 125〕 （carrier free N.E.N）１ミリキユーリーの
の0.5モルリン酸塩緩衝液を加え、次にクロラ
ミンT70mg／mlの0.5モルリン酸塩緩衝液20μ
を加える。室温で30秒間撹拌して60mg／mlのメ
タ重亜硫酸ナトリウム（Na2S2O5）の0.5Mリ
ン酸塩緩衝液50μを加えることで反応を終わ
らせる。次いで反応液に１％の冷沃化ナトリウ
ム水溶液100μを加え、反応混合物をセフア
デツクスＧ−25のカラム（1.0×30cm）にかけ
（溶出液0.25％BSA、10ｍＭ EDTA及び0.02
％NaN3を含む0.05モルリン酸塩緩衝液、PH
7.4）、125で標識されたペプチドＢを得る。 Γ力価の測定 上記で得られる抗体の力価を次の通り測定す
る。即ち抗体をそれぞれ生理食塩水で10、102、
103、104、105……倍に希釈（イニシヤル）し、
これらの夫々100μに、I125標識ペプチド（上
記で得られる標識ペプチドを約9500cpmになる
ように希釈したもの）0.1ml及び0.05モルリン
酸塩緩衝液（PH＝7.4）〔0.25％BSA、10ｍ
MEDTA及び0.02％NaN3を含む〕0.2mlを加
え、４℃で24時間インキユベートし、生成した
抗体とI125標識抗原との結合体を、デキストラ
ン−活性炭法及び遠心分離法（４℃、30分間、
3000rpm）により未反応（結合しない）I125標
識ペプチドから分離し、その放射線をカウント
し、各希釈濃度における抗体のI125標識ペプチ
ドとの結合率（％）を測定する。縦軸に抗体の
I125標識ペプチドとの結合率（％）及び横軸に
抗体の希釈倍率（イニシヤル濃度）をとり、
各々の濃度において結合率をプロツトする。結
合率が50％となる抗体の希釈倍率即ち抗体の力
価を求める。その結果を下記第１表に示す。 【表】 第１表より明らかなように一般式(1)で表わさ
れるペプチドは免疫原性が極めて強く、投与動
物のほとんど全てに有用な抗体を製造すること
ができる。 Γ抗体のヒトα型インターフエロン特異性試験供
試試料として各種濃度のヒトβ型インターフエ
ロン（東レ株式会社製）、ペプチドの合成製造
例15(b)で得たペプチドＡ即ちヒトα型インター
フエロンのペプチド鎖及びヒトα型インターフ
エロン〔林原研究所製、リムホブラストイドイ
ンターフエロン；NIH、ドーロス氏より入手、
ロイコサイトインターフエロン〕を使用する。
また標準希釈剤として0.25％BSA、５ｍ
MEDTA及び0.02％のNaN3を含む0.05モルリ
ン酸塩緩衝液（PH7.4）を使用する。 各々の試験管に、標準希釈剤0.2ml、供試試
料0.1ml、抗体の製造例４で得た抗体の0.1
ml及びI125標識ペプチド（上記で得られる標識
ペプチドを約2800cpmになるように希釈したも
の）0.1mlを入れ、４℃で72時間インキユベー
トした後、ノーマルブタ血清（normal
porcine serum）を0.1ml加え、次いてデキス
トランで被膜した活性炭の懸濁液0.5mlを加え、
４℃で30分間放置し、次に４℃、3000rpmの条
件下に30分間遠心分離を行ない、抗体とI125標
識ペプチドとの結合体及び未反応（結合しな
い）I125標識ペプチドを分離し、その放射線を
カウントし、用いた抗体の力価に相当する結合
率（B0）を100％として、供試試料の濃度及び
希釈率における抗体とI125標識ペプチドとの結
合体Ｂの百分率を求める。得られる結果を第１
図に示す。 図中、縦軸は結合％（Ｂ／B0×100）を、横
軸は供試試料の各濃度を示す。また該図におい
て曲線イはペプチドＡを、ロはリムホブラスト
イドインターフエロンを、ハはロイコサイトイ
ンターフエロンを、又ニは、ヒトβ型インター
フエロンを夫々示す。 第１図より抗体は、ヒトα型インターフ
エロンに対する反応性とヒトβ型インターフエ
ロンに対する反応性において明確に区別される
曲線を示し、このことよりヒトβ型インターフ
エロンとは1.0×106IU／mlまで交叉しない特異
性の高い抗体であることがわかる。 本発明により得られる他の抗体についても同一
試験を行なつた結果いづれも略々同様の特異性を
有することが確認された。
する。 本明細書において、アミノ酸、ペプチド、保護
基、活性基、その他に関し略号で表示する場合
IUPAC、IUBの規定或いは当該分野における慣
用記号に従うものとし、その例を次に挙げる。ま
たアミノ酸などに関し光学異性体がありうる場合
は、特に明示しなければＬ体を示すものとする。 Ser：セリン Leu：ロイシン Thr：スレオニン Asn：アスパラギン Glu：グルタミン Glu：グルタミン酸 Arg：アルギニン Lys：リジン Tyr：チロシン OBzl：ベンジルオキシ基 Ｚ：カルボベンゾキシ基 NHS：Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド基 Tos：ｐ−トルエンスルホニル基 Boc：第３級ブトキシカルボニル基 インターフエロンは、生体の細胞がウイルス感
染を受けた時に産生する抗ウイルス性糖蛋白質乃
至は蛋白質であり、その利用によればウイルス性
疾患の予防または治療が可能であるとされ、近年
注目を集めつつある。現在解明されているヒトの
インターフエロンは、β型インターフエロン
（Fibro blast interferon）、α型インターフエロ
ン（Leucocytes interferon、Lympho blastoid
interferon）及びγ型インターフエロン
（Immune interferon）に分類される。しかしな
がらこれらのインターフエロンを単一な糖蛋白質
乃至は蛋白質にまで精製する技術は未だ確立され
ていないのが現状である。 本発明者らはヒトのα型インターフエロンに対
して特異的に反応する抗体を利用すれば、抗原−
抗体反応によつてヒトα型インターフエロンを精
製出来ると考え、この着想から感度よくヒトα型
インターフエロンを選択し、該インターフエロン
に対して特異的反応性を示す抗体を得るべく鋭意
研究を進めてきた。その過程において、ヒトα型
インターフエロンの１種であるヒトリムホブラス
トイドインターフエロンのＣ末端ペプチド鎖を有
するある種のペプチドを合成し、これをハプテン
として抗原を合成した所、該抗原は極めて強い免
疫原性を有し、抗原能力に優れたものであり、該
抗原からヒトα型インターフエロンに対し特異的
反応性を有する所望の抗体が収得できることを見
い出した。 本発明はこの新しい知見に基づき完成されたも
のであり、一般式 Ｒ−Ser−Leu−Ser−Thr−Asn−Leu−Gln−Glu−Ser−L
eu−Arg−Ser−Lys−Glu−OH(1) 〔式中Ｒは水素原子又はＨ−Tyr−基を示す〕 で表わされるペプチドに特異的反応性を有するこ
とを特徴とするヒトα型インターフエロン抗体に
係る。 本発明の抗体を利用すればラジオイムノアツセ
イ法（RIA法）、エンザイムイムノアツセイ法
（EIA法）等によるヒトα型インターフエロンの
測定や、本発明抗体のカラムを用いるアフイニテ
イークロマトグラフイー法により、ヒトα型イン
ターフエロンの精製が可能である。 上記一般式(1)で表わされるペプチドは、新規化
合物であり、これは入手容易な市販のアミノ酸を
利用して、常法に従い合成することができ、例え
ば後記製造例に示す方法により製造される。 ヒトα型インターフエロン抗原は、上記ペプチ
ドの１種のハプテンとし、これをハプテン−担体
結合試薬の存在下に、適当な担体と反応させるこ
とにより製造される。 上記方法においてハプテンに結合される担体と
しては、通常抗原の作成に当り慣用される高分子
の天然若しくは合成蛋白質を広く使用できる。該
担体としては、例えば馬血清アルブミン、牛血清
アルブミン、ウサギ血清アルブミン、人血清アル
ブミン、ヒツジ血清アルブミン等の動物の血清ア
ルブミン類、馬血清グロブリン、牛血清グロブリ
ン、ウサギ血清グルブリン、人血清グロブリン、
ヒツジ血清グロブリン等の動物の血清グロブリン
類、馬チログロブリン、牛チログロブリン、ウサ
ギチログロブリン、人チログロブリン、ヒツジチ
ログロブリン等の動物のチログロブリン類、馬ヘ
モグロブリン、牛ヘモグロブリン、ウサギヘモグ
ロブリン、人ヘモグロブリン、ヒツジヘモグロブ
リン等の動物のヘモグロブリン類、動物のヘモシ
アニン類、回虫より抽出された蛋白質（アスカー
リス抽出物、特開昭56−16414号公報、J.
Immun.、111、260〜268（1973）、J.Immun.、
122、302〜308（1979）、J.Immun.、98、893〜900
（1967）及びAm.J.Physiol.、199、575〜578
（1960）に記載されたものまたはこれらを更に精
製したもの）、ポリリジン、ポリグルタミン酸、
リジン−グルタミン酸共重合体、リジン又はオル
ニチンを含む共重合体等を挙げることができる。 ハプテン−担体結合試薬としては、通常抗原の
作成に当り慣用されているものを広く使用でき
る。具体的にはアミノ基とアミノ基とを架橋結合
させる、例えばグリオキサール、マロンジアルデ
ヒド、グルタールアルデヒド、スクシンアルデヒ
ド、アジポアルデヒド等の脂肪族ジアルデヒド
類、チオール基とチオール基とを架橋結合させ
る、例えばＮ、N′−ｏ−フエニレンジマレイミ
ド、Ｎ、N′−ｍ−フエニレンジマレイミド等の
ジマレイミド化合物、アミノ基とチオール基とを
架橋結合させる、例えばメタマレイミドベンゾイ
ル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、４
−（マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１−カ
ルボキシル−N′−ヒドロキシスクシンイミドエ
ステル等のマレイミドカルボキシル−Ｎ−ヒドロ
キシスクシンイミドエステル化合物、アミノ基と
カルボキシル基とをアミド結合させる通常のペプ
チド結合形成反応に用いられる試薬、例えばＮ、
Ｎ−ジシクロヘキシルカルボジイミド（DCC）、
Ｎ−エチル−N′−ジメチルアミノカルボジイミ
ド、１−エチル−３−ジイソプロピルアミノカル
ボジイミド、１−シクロヘキシル−３−（２−モ
ルホリニル−４−エチル）カルボジイミド等のカ
ルボジイミド類等の脱水縮合剤を挙げることがで
きる。また上記ハプテン−担体結合試薬として
は、ｐ−ジアゾニウムフエニル酢酸等のジアゾニ
ウムアリールカルボン酸類と通常のペプチド結合
形成反応試薬、例えば上記脱水縮合剤とを組み合
わせたものも使用可能である。又上記結合試薬と
してはチロシンのフエニル環又はヒスチジンのイ
ミダゾール環を各々架橋結合させる、例えばビス
ジアゾタイズドベンジジン（BDB Bis−
diazotised benzidime）等をも使用することがで
きる。 上記抗原の製造反応は、例えば水溶液もしくは
PH７〜10の通常の緩衝液中好ましくはPH８〜９の
緩衝液中で、０〜40℃好ましくは室温付近で行な
われる。該反応は通常約１〜24時間好ましくは３
〜５時間で完結する。上記において用いられる代
表的緩衝液としては、次のものを例示できる。 0.2N水酸化ナトリウム−0.2Mホウ酸−0.2M塩
化カリウム緩衝液、 0.2炭酸ナトリウム−0.2Mホウ酸−0.2M塩化カ
リウム緩衝液、 0.05M四ホウ酸ナトリウム−0.2Mホウ酸−
0.05M塩化ナトリウム緩衝液、 0.1Mリン酸二水素カリウム−0.05M四ホウ酸
ナトリウム緩衝液 上記においてハプテン、ハプテン−担体結合試
薬及び担体の使用割合は、適宜に決定できるが、
通常ハプテンに対して担体を２〜６倍重量好まし
くは３〜５倍重量、及びハフテン−担体結合試薬
を５〜10倍モル程度用いるのがよい。上記反応に
よりハプテン−担体結合試薬を仲介させて担体と
ハプテンとが結合したペプチド−担体複合体から
成るヒトα型インターフエロン抗原が収得され
る。 反応終了後得られる抗原は常法に従い、例えば
透析法、ゲル過法、分別沈殿法等により容易に
単離精製できる。また該抗原は通常の凍結乾燥法
により保存できる。 かくしてヒトα型インターフエロンのＣ末端ペ
プチド及びその誘導体の１種と、担体との複合体
から成るヒトα型インターフエロン抗原を得る。
該抗原は、通常蛋白質１モルに対しペプチドが平
均５〜20モル結合したものであり、いずれも引き
続き再現性よく、ヒトα型インターフエロンに対
する特異性の高い抗体の作成を可能とするもので
ある。特に上記蛋白質に対するペプチドの結合モ
ル比が１：８〜15のものは、特異性が一層高く高
力価、高感度の抗体を作成し得るものであり好ま
しい。 上記で得られる抗原による抗体の作成は、以下
の如くして行なわれる。即ち上記抗原を哺乳動物
に投与し、生体内に産生される抗体を採取するこ
とにより行なわれる。 抗体の製造に供せられる哺乳動物としては、特
に制限はないが、通常兎やモルモツトを用いるの
が望ましい。抗体の産生に当つては、上記により
得られる抗原の所定量の生理食塩水で適当濃度に
希釈し、フロインドの補助液（Complete
Freund′s Adjuvant）と混合して懸濁液を調整
し、之を哺乳動物体に投与すればよい。例えば兎
に上記懸濁液を皮内注射（抗原の量として0.5〜
５mg／回）し、以後２週間毎に２〜10ケ月好まし
くは４〜６ケ月間投与し免疫化させればよい。抗
体の採取は、上記懸濁液の最終投与後抗体が多量
産出される時期、通常上記最終投与１〜２週間経
過後、免疫化された動物から採血し、之を遠心分
離後血清を分離採取することにより行なわれる。
上記によれば用いる抗原の特殊性に基づいて、ヒ
トα型インターフエロンに対して優れた特異性を
有し、高力価、高感度の抗体を収得できる。 かくして得られるヒトα型インターフエロン抗
体は、例えばこれをRIA法に利用してヒトα型イ
ンターフエロンの定量の高精度をもつて可能とす
る。また該抗体は、これを酵素または螢光物質で
標識することによつて（EIA）法やフローレツセ
ンスイムノアツセイ（FIA）法等に使用できる。
さらに該抗体は公知の不溶化させる物質と反応さ
せて不溶化抗体とすることもできる。 以下本発明を更に詳しく説明するため、一般式
(1)をペプチド、これを利用した抗原及び該抗原か
らの抗体の製造例を挙げるが、本発明はこれに限
定されるものではない。 尚各製造例におけるRf値はシリカゲル上の薄
層クロマトグラフイーにて下記混合溶媒を用いて
測定したものである。 Rf〓…１−ブタノール酢酸−水（４：１：５） Rf〓…１−ブタノール−ピリジン−酢酸−水
（15：10：３：12） ＜ペプチドの合成＞ 製造例 １ １ Ｚ−Lys（Tos）−Glu（OBzl）−OBzlの製造 Ｈ−Glu（OBzl）−OBzl・Tos 4.18ｇをジメ
チルホルムアミド（DMF）30mlに溶解し、ト
リエチルアミン（TEA）1.21mlを加え、撹拌
下冷却する。一方Ｚ−Lys（Tos）−OH4.35ｇを
テトラヒドロフラン（THF）30mlに溶解し、
Ｎ−メチルモルホリン0.98mlを加え−15℃に冷
却し、撹拌下クロロ蟻酸イソブチル1.27mlを滴
下する。滴下30秒後該液に上記で調製した冷
DMF溶液を加え、この混合液を０℃下に５分
間、次いで40℃の水浴中で１分間、更に15℃下
に30分間撹拌する。反応液よりTHF及びDMF
を減圧留去し、残渣を酢散エチルで抽出する。
抽出液を1Nクエン酸、飽和食塩水、飽和炭酸
水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で順次洗
浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、酢酸エチ
ルを留去する。得られる油状残渣にエチルエー
テルを加えて固化させ、これを酢酸エチル−エ
ーテルより再沈殿させて目的物5.37ｇを得る。 Rf〓＝0.96 Rf〓＝0.90 元素分析値（C40H45N3O9Sとして） 計算値（％） C64.59 H6.10 N5.65 実測値（％） C64.13 H5.95 N5.63 ２(a) Ｈ−Lys（Tos）−Glu−OHの製造 Ｚ−Lys（Tos）−Glu（OBzl）−OBzl5.21ｇ
をメタノール80mlと10％酢酸20mlとの混液に
溶解し、パラジウムブラツク少量を加えH2
ガス導入下１夜撹拌する。反応終了後触媒を
吸引過により去し、液を減圧蒸留し、
残渣を水に注ぎ凍結乾燥して目的物を得る。 Rf〓＝0.29 Rf〓＝0.52 ２(b) Ｚ−Ser−Lys（Tos）−Glu−OHの製造 Ｚ−Ser−NHNH22.13ｇをDMF20mlに溶
解し、6N塩酸／ジオキサン4.20mlを加え、−
15℃に冷却し、撹拌下亜硝酸イソアミル1.13
mlを加える。反応液がヒドラジドテスト陰性
になつた後TEA3.53mlの冷DMF1.20ml溶液
を少量宛滴下し中和させる。このアジドを含
む溶液を、上記(a)で得たＨ−Lys（Tos）−
Glu−OH及びTEA1.96mlの冷DMF溶液に加
え、混合液を−10〜−15℃下２時間、次いで
４℃下20時間撹拌する。DMFを減圧留去し、
残渣を酢酸エチルで抽出し、酢酸エチル層を
1Nクエン酸及び飽和食塩水で洗浄し、無水
硫酸ナトリウムで乾燥後、酢酸エチルを減圧
留去する。得られる残渣にエチルエーテルを
加えて固化させ、酢酸エチル−エーテルより
再沈殿させて、目的物4.14ｇを得る。 Rf〓＝0.64 Rf〓＝0.65 元素分析値（C29H38N4O11S・1/2H2Oとし
て） 計算値（％） C52.80 H5.96 N8.49 実測値（％） C52.87 H5.69 N8.46 ３(a) Ｈ−Ser−Lys（Tos）−Glu−OHの製造 Ｚ−Ser−Lys（Tos）−Glu−OH4.03ｇを
メタノール60mlと10％酢酸40mlとの混液に溶
解し、パラジウムブラツク少量を加えH2ガ
ス導入下１夜撹拌する。反応終了後触媒を吸
引過により去し、液を減圧蒸留し、残
渣を水に注ぎ凍結乾燥して目的物を得る。 Rf〓＝0.23 Rf〓＝0.48 ３(b) Ｚ−Arg（NO2）−Ser−Lys（Tos）−Glu−
OHの製造 上記(a)で得たＨ−Ser−Lys（Tos）−Glu−
OHをDMF20mlに溶解し、TEA1.74mlを加
え、撹拌下冷却する。一方Ｚ−Arg（NO2）−
OH2.41ｇをTHF20mlに溶解し、Ｎ−メチル
モルホリン0.70mlを加え−15℃に冷却し、撹
拌下クロロ蟻酸イソブチル0.86mlを滴下す
る。滴下30秒後該液に上記で調製した冷
DMF溶液を加え、この混合液を０℃に５分
間、次いで40℃の水浴中で１分間、更に15℃
下に30分間撹拌する。反応液よりTHF及び
DMFを減圧留去し、残渣を２％酢酸飽和ブ
タノールで抽出する。抽出液をｎ−ブタノー
ル飽和の２％酢酸で５回洗浄し、減圧蒸留
し、水に置き変えて酢酸を留去し、更にメタ
ノールに置き変えて水を留去する。得られる
油状残渣にエチルエーテルを加えて固化さ
せ、これを酢酸エチル−メタノールより再沈
殿させて目的物4.09ｇを得る。 Rf〓＝0.42 Rf〓＝0.65 元素分析値（C35H49N9O14S・1/2H2Oとし
て） 計算値（％） C48.83 H5.85 N14.64 実測値（％） C49.22 H6.05 N14.11 ４ Ｚ−Ser−Leu−NHNH2の製造 Ｚ−Ser−NHNH22.54ｇをDMF20mlに溶解
し、6N塩酸／ジオキサン5.00mlを加え、−15℃
に冷却し、撹拌下亜硝酸イソアミル1.34mlを加
える。反応液がヒドラジドテスト陰性になつた
後TEA4.20mlの冷DMF1.40ml溶液を少量宛滴
下し中和させる。このアジドを含む溶液を、Ｈ
−Leu−OC2H5・HCl1.96ｇ及びTEA1.40mlの
冷DMF溶液15mlに加え、混合液を−10〜−15
℃下２時間、次いで４℃下20時間撹拌する。
DMFを減圧留去し、残渣を酢酸エチルで抽出
し、酢酸エチル層を1Nクエン酸、飽和食塩水、
飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水
で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、
酢酸エチルを減圧留去する。得られる残渣に石
油エーテルを加えデカンテーシヨンにより洗浄
する。油状物質をデシケーター内で減圧乾燥
し、乾燥物をメタノール50mlに溶かし、氷冷
100％ヒドラジン１水和物2.50mlを加え、室温
下20時間放置し、メタノールを減圧留去する。
残渣にエチルエーテルを加えて固化させ、これ
をデシケーター内で乾燥後、水洗過して過剰
のヒドラジン１水和物を除去し、メタノール−
酢酸エチルから再沈殿させて、目的物2.68ｇを
得る。 Rf〓＝0.73 Rf〓＝0.76 元素分析値（C17H16N4O5として） 計算値（％） C55.73 H7.15 N15.29 実測値（％） C55.72 H7.01 N15.42 ５(a) Ｈ−Arg−Ser−Lys（Tos）−Glu−OHの
製造 Ｚ−Arg（NO2）−Ser−Lys（Tos）−Glu−
OH2.00ｇをメタノール30mlと50％酢酸30ml
との混液に懸濁し、パラジウムブラツク少量
を加えH2ガス導入下36時間撹拌する。反応
終了後触媒を吸引過により去し、液を
減圧蒸留し、残渣を水に注ぎ凍結乾燥し、18
時間後再度水に溶かして凍結乾燥して目的物
を得る。 Rf〓＝0.05 Rf〓＝0.41 ５(b) Ｚ−Ser−Leu−Arg−Ser−Lys（Tos）−
Glu−OHの製造 Ｚ−Ser−Leu−NHNH21.03ｇをDMF15
mlに溶解し、6N塩酸／ジオキサン1.41mlを
加え、−15℃に冷却し、撹拌下亜硝酸イソア
ミル0.38mlを加える。反応液がヒドラジドテ
スト陰性になつた後TEA1.18mlの冷
DMF0.40ml溶液を少量宛滴下し中和させる。
このアジドを含む溶液を、上記(a)で得たＨ−
Arg−Ser−Lys（Tos）−Glu−OH及び
TEA0.66mlの冷DMF溶液10mlに加え、混合
液を−10〜−15℃の下２時間、次いで４℃下
20時間撹拌する。DMFを減圧留去し、残渣
を水飽和のｎ−ブタノールで抽出し、ブタノ
ール層をｎ−ブタノール飽和水で５回洗浄
し、減圧留去する。得られる残渣にエチルエ
ーテルを加えて固化させ、メタノール−酢酸
エチルより再沈殿させて、目的物1.92ｇを得
る。 Rf〓＝0.33 Rf〓＝0.69 元素分析値（C44H66N10O15S・2H2Oとして） 計算値（％） C50.66 H6.76 N13.43 実測値（％） C50.57 H6.51 N13.34 ６(a) Ｈ−Ser−Leu−Arg−Ser−Lys（Tos）−
Glu−OHの製造 Ｚ−Ser−Leu−Arg−Ser−Lys（Tos）−
Glu−OH1.84ｇをメタノール30mlと10％酢
酸30mlとの混液に懸濁し、パラジウムブラツ
ク少量を加えH2ガス導入下13時間撹拌する。
反応終了後触媒を吸引過により去し、
液を減圧蒸留し、残渣を水に注ぎ凍結乾燥し
て目的物を得る。 Rf〓＝0.09 Rf〓＝0.53 ６(b) Boc−Glu（OBzl）−Ser−Leu−Arg−Ser
−Lys（Tos）−Glu−OHの製造 上記(a)で得たＨ−Ser−Leu−Arg−Ser−
Lys（Tos）−Glu−OHをDMF20mlに溶解し、
TEA0.51mlを氷冷下に加え、更にBoc−Glu
（OBzl）−ONHS0.95ｇを加え、混合液を室
温下24時間撹拌する。DMFを減圧留去し、
残渣を水飽和のｎ−ブタノールで抽出し、ブ
タノール層をｎ−ブタノール飽和の水で５回
洗浄する。ブタノール層を減圧留去し、得ら
れる残渣にエチルエーテルを加えて固化さ
せ、メタノール−酢酸エチルより再沈殿させ
て、目的物1.70ｇを得る。 Rf〓＝0.42 Rf〓＝0.60 元素分析値（C53H81N11O18S・2H2Oとして） 計算値（％） C51.82 H6.97 N12.55 実測値（％） C51.27 H6.58 N12.47 ７(a) Boc−Glu−Ser−Leu−Arg−Ser−Lys
（Tos）−Glu−OHの製造 Boc−Glu（OBzl）−Ser−Leu−Arg−Ser−
Lys（Tos）−Glu−OH150mgをメタノール30ml
と10％酢酸30mlとの混液に溶解し、パラジウム
ブラツク少量を加えH2ガス導入下18時間撹拌
する。反応終了後触媒を吸引過により去
し、液を減圧蒸留し、残渣を水に注ぎ凍結乾
燥して目的物を得る。 ７(b) Ｈ−Glu−Ser−Leu−Arg−Ser−Lys
（Tos）−Glu−OHの製造 上記(a)で得たBoc−Glu−Ser−Leu−Arg
−Ser−Lys（Tos）−Glu−OHをTHFに溶解
し、室温で15分間放置する。無水エーテル約
30mlを加え、析出物を過し、無水エーテル
で洗浄後、水酸化カリウム−五酸化リンを入
れたデシケーター内で減圧乾燥して、目的物
を得る。 ８(a) Ｈ−Gln−NHNHBocの製造 Ｚ−Glu−NHNHBoc16.00ｇをメタノー
ル100mlに懸濁し、パラジウムブラツク少量
を加えH2ガス導入下18時間撹拌する。反応
終了後触媒を吸引過により去し、液を
減圧蒸留し、残渣をデジケーター内で減圧乾
燥して目的物を得る。 Rf〓＝0.37 Rf〓＝0.58 ８(b) Ｚ−Leu−Gln−NHNHBocの製造 上記(a)で得たＨ−Gln−NHNHBocを
THF50mlに溶解し、氷冷下Ｚ−Leu−
ONHS5.51ｇを加え、室温下18時間撹拌す
る。THFを減圧留去し、残渣を酢酸エチル
で抽出し、酢酸エチル層を1Nクエン酸、飽
和食塩水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及
び飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリ
ウムで乾燥後、酢酸エチルを留去する。得ら
れる油状残渣にエチルエーテルを加えて固化
させ、これをメタノール−エチルエーテルよ
り再沈殿させて目的物6.04ｇを得る。 Rf〓＝0.81 Rf〓＝0.86 元素分析値（C24H37N5O7として） 計算値（％） C56.79 H7.35 N13.80 実測値（％） C56.67 H7.15 N13.75 ９(a) Ｈ−Leu−Gln−NHNHBocの製造 Ｚ−Leu−Gln−NHNHBoc2.79ｇをメタ
ノール80mlに懸濁し、パラジウムブラツク少
量を加えH2ガス導入下32時間撹拌する。反
応終了後触媒を吸引過により去し、液
を減圧蒸去し、残渣をデシケーター内で減圧
乾燥して、目的物を得る。 Rf〓＝0.33 Rf〓＝0.66 ９(b) Ｚ−Asn−Leu−Gln−NHNHBocの製造 上記(a)で得たＨ−Leu−Gln−NHNHBoc
をDMF30mlに溶解し、撹拌下冷却する。一
方Ｚ−Asn−OH1.61ｇをTHF30mlに溶解
し、Ｎ−メチルモルホリン0.62mlを加え−15
℃に冷却し、撹拌下クロロ蟻酸イソブチル
0.80mlを滴下する。滴下30秒後該液に上記で
調製した冷DMF溶液を加え、この混合液を
０℃下に５分間、次いで40℃の水浴中で１分
間、更に15℃下に30分間撹拌する。反応液よ
りTHF及びDMFを減圧留去し、残渣を酢酸
エチルで抽出する。抽出液を1Nクエン酸、
飽和食塩水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液
及び飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸ナト
リウムで乾燥後、酢酸エチルを留去する。得
られる油状残渣にエチルエーテルを加えて固
化させ、メタノール−酢酸エチルで再沈殿さ
せて目的物2.55ｇを得る。 Rf〓＝0.63 Rf〓＝0.77 元素分析値（C28H43N7O9として） 計算値（％） C53.10 H6.97 N15.77 実測値（％） C53.67 H6.63 N15.68 10(a) Ｚ−Thr−ONHSの製造 Ｚ−Thr−OH1.28ｇをTHF30mlに溶解
し、これにNHS0.58ｇを加え、氷冷し、次
いでＮ，Ｎ−ジシクロヘキシルカルボジイミ
ド（DCC）1.05ｇを加える。この混合液を４
℃で24時間撹拌し、析出物を去し、液を
減圧留去し、残渣にエチルエーテルを加え、
デカンテーシヨン洗浄する。得られる油状物
質をデシケーター内にて減圧乾燥して目的物
を得る。 10(b) Ｈ−Asn−Leu−Gln−NHNHBocの製造 Ｚ−Asn−Leu−Gln−NHNHBoc2.43ｇ
をメタノール80mlに懸濁し、パラジウムブラ
ツク少量を加え、H2ガス導入下18時間撹拌
する。反応終了後触媒を吸引過により去
し、液を減圧留去し、デジケーター内で減
圧乾燥して目的物を得る。 Rf〓＝0.31 Rf〓＝0.64 10(c) Ｚ−Thr−Asn−Leu−Gln−NHNHBoc
の製造 上記(b)で得たＨ−Asn−Leu−Gln−
NHNHBocをDMF30mlに溶解し、この溶解
に上記(a)で得たＺ−Thr−ONHSのDMF20
ml溶液を氷冷下に加え、混合液を室温下18時
間撹拌する。DMFを減圧留去して得られた
残渣に1Nクエン酸を加えて固化し、メタノ
ール−酢酸エチルより再沈殿させて、目的物
2.12ｇを得る。 Rf〓＝0.82 Rf〓＝0.79 元素分析値（C32H50N8O11として） 計算値（％） C53.18 H6.97 N15.50 実測値（％） C52.85 H6.95 N15.28 11(a) Ｚ−Thr−Asn−Leu−Gln−NHNH2の製
造 Ｚ−Thr−Asn−Leu−Gln−
NHNHBoc0.91ｇをTFA8mlに溶解し、室温
下15分間放置する。無水エーテル80mlを加え
て析出物をすばやく過し、無水テーテルで
洗浄後、水酸化カリウム−五酸化リンを入れ
たデシケーター内で減圧乾燥して目的物を得
る。 Rf〓＝0.34 11(b) Ｈ−Glu（OBzl）−Ser−Leu−Arg−Ser−
Lys（Tos）−Glu−OHの製造 Boc−Glu（OBzl）−Ser−Leu−Arg−Ser
−Lys（Tos）−Glu−OH1.00ｇをTFA8mlに
溶解し、室温下15分間放置する。無水エーテ
ル80mlを加えて析出物をすばやく過し、無
水エーテルで洗浄後、水酸化カリウム−五酸
化リンを入れたデシケーター内で減圧乾燥し
て目的物を得る。 Rf〓＝0.24 Rf〓＝0.44 11(c) Ｚ−Thr−Asn−Leu−Gln−Glu（OBzl）−
Ser−Leu−Arg−Ser−Lys（Tos）−Glu−
OHの製造 上記(a)で得たＺ−Thr−Asn−Leu−Gln
−NHNH2をDMF10mlに溶解し、6N塩酸／
ジオキサン0.63mlを加え、−15℃に冷却し、
撹拌下亜硝酸イソアミル0.17mlを加える。反
応液がヒドラジドテスト陰性になつた後
TEA0.53mlの冷DMF0.40ml溶液を少量宛滴
下し中和させる。このアジドを含む溶液を、
上記(b)で得たＨ−Glu（OBzl）−Ser−Leu−
Arg−Ser−Lys（Tos）−Glu−OH及び
TEA0.24mlの冷DMF溶液10mlに加え、混合
液を−10〜−15℃下２時間、次いで４℃下18
時間撹拌反応させる。さらに上記(a)と同様に
してＺ−Thr−Asn−Leu−Gln−
NHNHBoc1.16ｇをTFAで処理して得た反
応物を上記反応混合物に加え24時間同温度下
に撹拌反応させる。DMFを減圧留去し、残
渣を水飽和のｎ−ブタノールで抽出し、ｎ−
ブタノール飽和の水で５回洗浄し、減圧蒸留
する。残渣にエチルエーテルを加えて固化さ
せ、メタノール−酢酸エチルより再沈殿させ
更に熱メタノールで洗浄して、目的物を得
る。 11(d) Ｈ−Thr−Asn−Leu−Gln−Glu−Ser−
Leu−Arg−Ser−Lys（Tos）−Glu−OHの製
造 上記(c)で得たＺ−Thr−Asn−Leu−Gln
−Glu（OBzl）−Ser−Leu−Arg−Ser−Lys
（Tos）−Glu−OHをメタノール50ml及び30
％酢酸50mlとの混液に懸濁させ、パラジウム
ブラツク少量を加え、H2ガス導入下18時間
撹拌する。反応終了後触媒を吸引過より
去し、液を減圧濃縮し、メタノールを完全
に留去後、得られる濃縮液を、50％酢酸を溶
出液とするセフアデツクスＧ−25によりゲル
過して、目的とするフランクシヨンを集め
凍結乾燥して目的物740mlを得る。 Rf〓＝0.17 Rf〓＝0.35 元素分析値（C66H99N17O23・C2H4O2・
2H2Oとして） 計算値（％） C48.91 H7.08 N15.64 実測値（％） C48.82 H6.63 N15.74 12 Ｚ−Leu−Ser−OCH3の製造 Ｈ−Ser−OCH3・HCl1.81ｇをDMF25mlに
溶解し、TEA1.62mlを加え−10℃に氷冷する。
撹拌下Ｚ−Leu−ONHS4.21ｇを加え、室温で
18時間撹拌を続ける。DMFを減圧留去し、残
渣を酢酸エチルで抽出し、酢酸エチル層を水洗
し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、酢酸エチル
を減圧留去する。得られる残渣にエチルエーテ
ルを加えて固化させ、酢酸エチル−エーテルよ
り再沈殿させて、目的物2.68ｇを得る。 Rf〓＝0.81 Rf〓＝0.82 元素分析値（C18H26O6として） 計算値（％） C59.00 H7.15 N7.65 実測値（％） C58.62 H7.03 N7.65 13(a) Ｈ−Leu−Ser−OCH3・HClの製造 Ｚ−Leu−Ser−OCH34.20ｇをメタノール
40mlと1N塩酸11.46mlとの混液に懸濁させ、
パラジウムブラツク少量を加え、H2ガス導
入下18時間撹拌する。反応終了後触媒を吸引
過により去し、液を減圧蒸留し、更に
水を加え減圧蒸留する操作を３回繰返す。残
渣を五酸化リンを入れたデシケーター内で減
圧乾燥して目的物を得る。 Rf〓＝0.38 13(b) Ｚ−Ser−Leu−Ser−OCH3の製造 Ｚ−Ser−NHNH23.19ｇをDMF25mlに溶
解し、6N HCl／ジオキサン6.30mlを加え、
−15℃に冷却し、撹拌下亜硝酸イソアミル
1.69mlを加える。反応液がヒドラジドテスト
陰性になつた後TEA5.29mlの冷DMF1.76ml
溶液を少量宛滴下し中和させる。このアジド
を含む溶液を、上記(a)で得たＨ−Leu−Ser
−OCH3・HCl及びTEA1.60mlの冷DMF溶
液20mlに加え、混合液を−10〜−15℃下２時
間、次いで４℃18時間撹拌する。DMFを減
圧留去し、残渣に水を加えて固化させ、メタ
ノール−酢酸エチルより再沈殿させて、目的
物4.11ｇを得る。 Rf〓＝0.76 Rf〓＝0.79 元素分析値（C21H31N3O8として） 計算値（％） C55.62 H6.89 N9.27 実測値（％） C55.48 H6.92 N9.18 14(a) Ｚ−Ser−Leu−Ser−NHNH2の製造 Ｚ−Ser−Leu−Ser−OCH32.00ｇをメタ
ノール40mlに溶解し、氷冷下100％
NH2NH2・H2O1.10mlを加え、室温で18時
間放置する。反応終了後、溶媒を減圧留去
し、エーテルを加えて固化させ、過剰の
NH2NH2・H2Oを水を加えて除去し、メタ
ノール−酢酸エチルより再沈殿させて目的物
1.91ｇを得る。 Rf〓＝0.43 Rf〓＝0.73 元素分析値（C20H31N5O7として） 計算値（％） C52.97 H6.89 N15.44 実測値（％） C52.85 H6.70 N15.44 15(a) Ｚ−Ser−Leu−Ser−Thr−Asn−Leu−
Gln−Glu−Ser−Leu−Arg−Ser−Lys
（Tos）−Glu−OHの製造 Ｚ−Ser−Leu−Ser−NHNH270.42mgを
DMF5mlに溶解し、6N塩酸／ジオキサンの
DMF10倍希釈液0.78mlを加え、−15℃に冷却
し、撹拌下亜硝酸イソアミルのDMF10倍希
釈液0.20mlを加え、反応液がヒドラジドテス
ト陰性になつた後、TEAのDMF10倍希釈液
0.65mlを少量宛滴下し中和させる。このアジ
ドを含む溶液を、上記11(d)で得たＨ−Thr−
Asn−Leu−Gln−Glu−Ser−Leu−Arg−
Ser−Lys（Tos）−Glu−OH151mgと
TEAnDMF10倍希釈液0.29mlの冷DMF5ml
溶液に加え、混合液を−10〜−15℃下２時
間、次いで４℃下18時間撹拌する。更にＺ−
Ser−Leu−Ser−NHNH2117.36mgを加え、
24時間反応させる。 DMFを減圧留去し、残渣を水飽和のｎ−
ブタノールで抽出し、ｎ−ブタノール飽和の
水で10回、更にｎ−ブタノール飽和の２％酢
酸で５回洗浄し、減圧濃縮し、水を加えて更
に減圧濃縮し、完全にｎ−ブタノールを留去
後、凍結乾燥する。これを酢酸エチル−エー
テルで再沈殿させて目的物を得る。 15(b) Ｈ−Ser−Leu−Ser−Thr−Asn−Leu−
Gln−Glu−Ser−Leu−Arg−Ser−Lys−
Glu−OHの製造 Ｚ−Ser−Leu−Ser−Thr−Asn−Leu−
Gln−Glu−Ser−Leu−Arg−Ser−Lys
（Tos）−Glu−OH150mgを予め金属ナトリウ
ムで乾燥した液体アンモニアに溶解し、撹拌
下金属ナトリウムの小片を溶液が青色を30秒
〜１分間保つまで加える。更に結晶NH4Cl
を加え、過剰のナトリウムを中和し、室温で
アンモニアを完全に蒸発後、溶出液に50％酢
酸を用いたセフアデツクスＧ−25ゲルにより
ゲル過して、フラクシヨンを集めこれを濃
縮後水を加えて凍結乾燥して、目的物94mgを
得る。これを「ペプチドＡ」と呼ぶ。 Rf〓＝0.02 Rf〓＝0.39 元素分析値（C65H120N20O26・C2H4O2・
H2Oとして） 計算値（％） C48.19 H7.24 N16.78 実測値（％） C47.93 H6.93 N16.49 16(a) Ｚ−Tyr−OSuの製造 Ｚ−Tyr−OH1.04ｇをTHF30mlに溶解
し、Ｎ−ヒドロキシサクシンイミド0.38mlを
加え、氷冷後更にDCC0.68ｇを氷冷下に加
え、混合物を４℃で18時間撹拌する。析出物
を吸引過により除き、液を減圧濃縮し、
残渣にエチルエーテルと石油エーテルとを加
えてデカンテーシヨン、乾燥して目的物を得
る。 16(b) Ｈ−Ser−Leu−Ser−OCH3の製造 参考例13(b)で得たＺ−Ser−Leu−Ser−
COH31.00ｇをメタノール20mlと10％酢酸20
mlに懸濁し、パラジウムブラツク少量を加
え、H2ガス導入下14時間撹拌する。反応終
了後触媒を吸引過により去し、液を減
圧濃縮後水を加えて凍結乾燥して目的物を得
る。 Rf〓＝0.35 Rf〓＝0.65 16(c) Ｚ−Tyr−Ser−Leu−Ser−COH3の製造 上記(b)で得たＨ−Ser−Leu−Ser−COH3
をDMF10mlに溶解し、TEA0.31mlを氷冷下
に加え、この溶液に上記(a)で得たＺ−Tyr−
OSuの冷DMF溶液を撹拌下に加える。混合
液を室温下18時間撹拌し、DMFを減圧留去
し、残渣に水を加えて固化させ、メタノール
−エーテル次いでメタノール−酢酸エチルか
ら再沈殿させて目的物1.08ｇを得る。 Rf〓＝0.78 Rf〓＝0.82 元素分析値（C30H40N4O10として） 計算値（％） C58.43 H6.54 N9.09 実測値（％） C58.14 H6.58 N9.16 16(d) Ｚ−Tyr−Ser−Leu−Ser−NHNH2の製
造 Ｚ−Tyr−Ser−Leu−Ser−COH31.00ｇ
をメタノールに溶解し、氷冷下100％
NH2NH2・H2O0.82mlを加え、室温で18時
間放置する。メタノールを減圧留去し、残渣
にエチルエーテルを加えて固化させ、水洗に
より過剰のNH2NH2・H2Oを除去し、メタ
ノール−エーテルで再沈殿後熱メタノールで
洗浄して目的物0.81ｇを得る。 Rf〓＝0.45 Rf〓＝0.76 元素分析値（C29H40N6O9として） 計算値（％） C56.48 H6.54 N13.63 実測値（％） C56.12 H6.57 N13.58 17(a) Ｚ−Tyr−Ser−Leu−Ser−Thr−Asn−
Leu−Gln−Glu−Ser−Leu−Arg−Ser−
Lys（Tos）−Glu−OHの製造 Ｚ−Tyr−Ser−Leu−Ser−NHNH242.3
mlをDMF4mlに溶解し、6N塩酸／ジオキサ
ンのDMF10倍希釈液0.34mlを加え、−15℃に
冷却し、撹拌下亜硝酸イソアミルのDMF10
倍希釈液0.09mlを加え、反応液がヒドラジン
テスト陰性になつた後、TEAのDAF10倍希
釈液0.29mlを少量ずつ滴下し中和させる。こ
のアジドを含む溶液を、Ｈ−Tyr−Asn−
Leu−Gln−Glu−Ser−Leu−Arg−Ser−
Lys（Tos）−Glu−OH50.0mgとTEAの
DMF10倍希釈液0.10の冷DMF4ml溶液に加
え、混合液−10〜−15℃下２時間、次いで４
℃下18時間撹拌する。更にＺ−Tyr−Ser−
Leu−Ser−NHNH242.3mlを加え24時間反応
させる。DMFを減圧留去し、残渣を水飽和
のｎ−ブタノール30mlで抽出し、抽出液をｎ
−ブタノール飽和水で10回、次いでｎ−ブタ
ノール飽和の２％酢酸で５回洗浄する。有機
層を集め減圧濃縮し、ｎ−ブタノールを留去
後、凍結乾燥し、酢酸エチル−エーテルで再
沈殿させて目的物を得る。 17(b) Ｈ−Tyr−Ser−Leu−Ser−Thr−Asn−
Leu−Gln−Glu−Ser−Leu−Arg−Ser−
Lys−Glu−OHの製造 上記(a)で得たＺ−Tyr−Ser−Leu−Ser−
Thr−Asn−Leu−Gln−Glu−Ser−Leu−
Arg−Ser−Lys（Tos）−Glu−OHを予め金
属ナトリウムで乾燥した液体アンモニアに溶
解し、撹拌下金属ナトリウム小片の溶液が青
色の30秒〜１分間保つまで加える。更に結晶
NH4Clを加え、過剰のナトリウムを中和し、
室温でアンモニアを完全に蒸発後、溶出液に
50％酢酸を用いてセフアデツクスＧ−25ゲル
によりゲル過して、フラクシヨンを集め目
的物33mgを得る。これを「ペプチドＢ」と呼
ぶ。 Rf〓＝0.02 Rf〓＝0.35 元素分析値（C74H123N21O28・C2H4O2・
4H2Oとして） 計算値（％） C47.71 H7.30 N15.79 実測値（％） C47.32 H7.24 N15.82 ＜抗原の製造＞ 製造例 １ ペプチドの合成製造例15(b)で得たペプチドＡの
５mg及び牛血清アルブミン（BSA）25mgを水４
mlに溶解する。この溶液にジシクロヘキシルカー
ボジイミド（DCC）200mgを加え、室温で５時間
撹拌する。次に反応混合物を水２を用い４℃に
て48時間要して透析する。透析中５回水を交換す
る。この後ペプチド−蛋白質複合体を含む溶液を
凍結乾燥してヒトα型インターフエロン抗原（以
下「抗原」と呼ぶ）28mgを得る。 得られた抗原は、BSA1モルに対してペプチ
ドＡが平均12モル結合したものである。 製造例 ２ ペプチド合成製造例17(b)で得たペプチドＢの４
mg及びBSAの20mgを酢酸アンモニウム緩衝液
（0.1モル、PH7.0）２mlに溶かす。この溶液に0.1
モルのグルタールアルデヒド溶液0.11mlを加え、
室温で５時間撹拌する。その後反応混合物を48時
間、４℃で水１で透析する。透析中５回水を交
換する。その後、ペプチド−蛋白質複合体を含む
溶液を凍結乾燥してヒトα型インターフエロン抗
原（以下「抗原」と呼ぶ）22mgを得る。 得られた抗原は、BSA1モルに対してペプチ
ドＢが平均９モル結合したものである。 製造例 ３ ペプチドの合成製造例15(b)で得たペプチドＡの
４mg及びBSA20mgを酢酸アンモニウム緩衝液
（0.1モル、PH7.0）２mgに溶かる。この溶液に0.1
モルのグルタールアルデヒド溶液0.11mlを加え室
温で５時間撹拌する。その後反応混合物を48時間
４℃で水１で透析する。透析中５回水を交換す
る。その後ペプチド−蛋白質複合体を含む溶液を
凍結乾燥してヒトα型インターフエロン抗原（以
下「抗原」と呼ぶ）21mgを得る。 得られた抗原はBSA1モルに対してペプチド
Ａが平均８モル結合したものである。 製造例 ４ ペプチドの合成製造例17(b)で得たペプチドＢの
5.55mg及びBSAの10.23mgを0.16Mホウ酸塩緩衝液
（0.13M NaCl、PH＝9.0）２mlに溶かす。この溶
液に、BDB1.64mgの同緩衝液3.0mlを加え、４℃
にて５時間撹拌する。その後反応混合物を水１
で透析し、透析中水を５回交換する。その後ペプ
チド−蛋白質複合体を含む溶液を凍結乾燥してヒ
トα型インターフエロン抗原（以下「抗原」と
呼ぶ）17.27mgを得る。得られた抗原はBSA1モ
ルに対してペプチドＢが平均20モル結合したもの
である。 ＜抗体の製造＞ 製造例 １ 抗原の製造例１で得た抗原の60μｇを1.5mlの
生理食塩水に溶解後、之にフロインドの補助液
1.5mlを加えて調製した懸濁液を、５羽の兎（2.5
〜3.0Kg）に皮下投与し、２週間毎に６回同量投
与する。更にその後１カ月毎に３回、最初投与し
た量と同量を投与する。最終投与後７日経過して
のち各試験動物から採血し、遠心分離して抗血清
を夫々採取してヒトα型インターフエロン抗体
（以下「抗体〜」と夫々呼ぶ）を得る。 製造例 ２ 上記製造例１において、抗原を30μｇ使用す
る以外は同様の操作によりヒトα型インターフエ
ロン抗体（抗体〜）を夫々得る。 製造例 ３ 前記抗原の製造例３で得た抗原を60μｇ用い
る以外は、上記製造例１と同様の操作によりヒト
α型インターフエロン抗体（抗体XI〜）を
夫々得る。 製造例 ４ 前記抗原の製造例４で得た抗原を50μｇ用
い、２羽の兎を用いて上記製造例１と同様の操作
によりヒトα型インターフエロン抗体（抗体
及び）を夫々得る。 Γ標識ペプチドの製造 Ｈ−Tyr−Ser−Leu−Ser−Thr−Asn−
Leu−Gln−Glu−Ser−Leu−Arg−Ser−Lys
−Glu−OH即ちペプチドＢをクロラミンＴを
用いる方法で以下の通り標識化する。 即ち上記ペプチド5μｇの0.5モルのリン酸塩
緩衝液（PH7.0）20μにNa〔 125〕 （carrier free N.E.N）１ミリキユーリーの
の0.5モルリン酸塩緩衝液を加え、次にクロラ
ミンT70mg／mlの0.5モルリン酸塩緩衝液20μ
を加える。室温で30秒間撹拌して60mg／mlのメ
タ重亜硫酸ナトリウム（Na2S2O5）の0.5Mリ
ン酸塩緩衝液50μを加えることで反応を終わ
らせる。次いで反応液に１％の冷沃化ナトリウ
ム水溶液100μを加え、反応混合物をセフア
デツクスＧ−25のカラム（1.0×30cm）にかけ
（溶出液0.25％BSA、10ｍＭ EDTA及び0.02
％NaN3を含む0.05モルリン酸塩緩衝液、PH
7.4）、125で標識されたペプチドＢを得る。 Γ力価の測定 上記で得られる抗体の力価を次の通り測定す
る。即ち抗体をそれぞれ生理食塩水で10、102、
103、104、105……倍に希釈（イニシヤル）し、
これらの夫々100μに、I125標識ペプチド（上
記で得られる標識ペプチドを約9500cpmになる
ように希釈したもの）0.1ml及び0.05モルリン
酸塩緩衝液（PH＝7.4）〔0.25％BSA、10ｍ
MEDTA及び0.02％NaN3を含む〕0.2mlを加
え、４℃で24時間インキユベートし、生成した
抗体とI125標識抗原との結合体を、デキストラ
ン−活性炭法及び遠心分離法（４℃、30分間、
3000rpm）により未反応（結合しない）I125標
識ペプチドから分離し、その放射線をカウント
し、各希釈濃度における抗体のI125標識ペプチ
ドとの結合率（％）を測定する。縦軸に抗体の
I125標識ペプチドとの結合率（％）及び横軸に
抗体の希釈倍率（イニシヤル濃度）をとり、
各々の濃度において結合率をプロツトする。結
合率が50％となる抗体の希釈倍率即ち抗体の力
価を求める。その結果を下記第１表に示す。 【表】 第１表より明らかなように一般式(1)で表わさ
れるペプチドは免疫原性が極めて強く、投与動
物のほとんど全てに有用な抗体を製造すること
ができる。 Γ抗体のヒトα型インターフエロン特異性試験供
試試料として各種濃度のヒトβ型インターフエ
ロン（東レ株式会社製）、ペプチドの合成製造
例15(b)で得たペプチドＡ即ちヒトα型インター
フエロンのペプチド鎖及びヒトα型インターフ
エロン〔林原研究所製、リムホブラストイドイ
ンターフエロン；NIH、ドーロス氏より入手、
ロイコサイトインターフエロン〕を使用する。
また標準希釈剤として0.25％BSA、５ｍ
MEDTA及び0.02％のNaN3を含む0.05モルリ
ン酸塩緩衝液（PH7.4）を使用する。 各々の試験管に、標準希釈剤0.2ml、供試試
料0.1ml、抗体の製造例４で得た抗体の0.1
ml及びI125標識ペプチド（上記で得られる標識
ペプチドを約2800cpmになるように希釈したも
の）0.1mlを入れ、４℃で72時間インキユベー
トした後、ノーマルブタ血清（normal
porcine serum）を0.1ml加え、次いてデキス
トランで被膜した活性炭の懸濁液0.5mlを加え、
４℃で30分間放置し、次に４℃、3000rpmの条
件下に30分間遠心分離を行ない、抗体とI125標
識ペプチドとの結合体及び未反応（結合しな
い）I125標識ペプチドを分離し、その放射線を
カウントし、用いた抗体の力価に相当する結合
率（B0）を100％として、供試試料の濃度及び
希釈率における抗体とI125標識ペプチドとの結
合体Ｂの百分率を求める。得られる結果を第１
図に示す。 図中、縦軸は結合％（Ｂ／B0×100）を、横
軸は供試試料の各濃度を示す。また該図におい
て曲線イはペプチドＡを、ロはリムホブラスト
イドインターフエロンを、ハはロイコサイトイ
ンターフエロンを、又ニは、ヒトβ型インター
フエロンを夫々示す。 第１図より抗体は、ヒトα型インターフ
エロンに対する反応性とヒトβ型インターフエ
ロンに対する反応性において明確に区別される
曲線を示し、このことよりヒトβ型インターフ
エロンとは1.0×106IU／mlまで交叉しない特異
性の高い抗体であることがわかる。 本発明により得られる他の抗体についても同一
試験を行なつた結果いづれも略々同様の特異性を
有することが確認された。
第１図は、本発明により得られる抗体の特異性
を示すグラフである。
を示すグラフである。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 一般式 Ｒ−Ser−Leu−Ser−Thr−Asn−Leu−Gln−Glu−Ser−L
eu−Arg−Ser−Lys−Glu−OH 〔式中Ｒは水素原子又はＨ−Tyr−基を示す〕 で表わされるペプチドに特異的反応性を有するこ
とを特徴とするヒトα型インターフエロン抗体。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11047082A JPS58225028A (ja) | 1982-06-25 | 1982-06-25 | ヒトα型インターフェロン抗体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11047082A JPS58225028A (ja) | 1982-06-25 | 1982-06-25 | ヒトα型インターフェロン抗体 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58225028A JPS58225028A (ja) | 1983-12-27 |
| JPH0453880B2 true JPH0453880B2 (ja) | 1992-08-27 |
Family
ID=14536515
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11047082A Granted JPS58225028A (ja) | 1982-06-25 | 1982-06-25 | ヒトα型インターフェロン抗体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58225028A (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP3524401B2 (ja) | 1998-09-16 | 2004-05-10 | 株式会社ニチレイ | 酵素抗体複合体およびその製造方法 |
| US7087726B2 (en) | 2001-02-22 | 2006-08-08 | Genentech, Inc. | Anti-interferon-α antibodies |
-
1982
- 1982-06-25 JP JP11047082A patent/JPS58225028A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS58225028A (ja) | 1983-12-27 |
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