JPS58225028A - ヒトα型インターフェロン抗体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、ヒトα型イシターフエ０ン抗体の製造法に関
する。

本明細書において、アミノ酸、べづチド、保護基、活性
基、その他に関し略号で表示する場合ＩＵＰＡＣ％ＩＵ
Ｂの規定或いは当該分野における慣用記号に従うものと
し、その例を次に挙げる。またアミノ酸などに関し光学
異性体がありうる場合は、特に明示しなければ１体を示
すものとする。

５ａｒ　：セリル Ｌεｕ：０イシシ ’ｆｈｒ　ニスレオニジ ＡＪ？ｎ　：アスパラｆン ＧＡル：クルタミシ ＧＬｕ　：クルタミシ酸 Ａｒｇ　：アルｆニン ＬｙＪＰ：リジル Ｔｙｒ　：チロシン ０ＢｚＬ　：べ、、Ｉジルオ＋シ基 Ｚ　：カルボベシリ士シ基 Ｎｉ２　：　Ｎ−ヒト０＋シ］ハク酸イミド基７ｏｚ　
：　ｐ−トルニジスルホニル基ＢＯＣ：第３級ブト＋ジ
カルボニル基 イシターフエ０シは、生体の細胞がウィルス感染を受け
た時に産生ずる抗ウイルス性糖蛋白質乃至は蛋白質であ
り、その利用によればウィルス性疾患の予防または治療
が可能であるとされ、近年注目を集めつつある。現在解
明されているヒトのイシターフエ０シは、β型イシター
フエＯニア（Ｐ’１ｈｒｏ　ｂｌａｓｔ　１ｒＬｔｔγ
ｆｔｒｏｎ　）、α型イシターフ工Ｏン（Ｌｔｔｔｃｏ
ｃｙｔｇｓ　１ｎｔｅｒｆｅｒｏｎ　、　Ｌｙｍｐｈｏ
　ｈｔａｚｔｏｉｄｉｒＬｔｅｒｆｅｒｏｒＬ）及びγ
型イシターフエ０シ（Ｉｍｍｗｎｔｉｎｔｇｒｆｅｒｏ
ル）に分類される。しかしながらこれらのイシターフエ
０ンを単一な糖蛋白質乃至は蛋白質にまで精製する技術
は未だ確立されていないのが現状である。

本発明者らはヒトのα型イシターフエ０ンに対して特異
的に反応する抗体を利用すれば、抗原−抗体反応によっ
てヒトα型イ１．シターフエＯシを精製出来ると考え、
この着想から感度よくヒトα型イシターフエＯシを選択
し、該インターフエ０シに対して特異的反応性を示す抗
体を得るべく鋭意研究を進めてきた。その過程において
、ヒトα型イシターフエ０シの１種であるヒトリムホづ
ラストイドイシターフエＯシのＣ末端べづチド鎖を有す
るある種のぺづチドを合成し、これを八づテシとして抗
原を合成した所、該抗原は極めて強い免疫原性を有し、
抗原能力に優れたものであり、該抗原からヒトα型イン
ターフエ０シに対し特異的反応性を有する所望の抗体が
収得できることを見い出した。

本発明はこの新しい知見に基づき完成されたものであり
、一般式 ％式％ 〔式中Ｒは水素原子又はＨ−Ｔｙｒ−基を示す〕で表わ
されるヒト：Ｉ！、子ホづラストイドイシターフ工Ｏシ
のＣ末端ぺづチド及びその紡導体の１種と　　　１′担
体との複合体からなるヒトα型インターフエＯン抗原を
師乳動物体に投与し、生成する抗体を採取することを特
徴とするヒトα型イシターフエ〇シ抗体の製造法に係る
。

本発明の抗体を利用すればラジオイムノアッセイ法（Ｒ
ＩＡ法）、■シブイムイムノアッセイ法（ＲＩＡ法）等
によるヒトα型イシターフエ０シの測定や、本発明抗体
のカラムを用いるアフィニティークロマドグラフイー法
により、ヒトα型イシターフエ０シの精製が可能である
。

本発明において使用される前記一般式ｆｌで表わされる
べづチドは、新規化合物であり、これは入手容易な市販
のアミノ酸を利用して、常法に従い合成することができ
、例えば後記製造例に示す方法により製造される。

ヒトα型イシターフエ０シ抗原は、上記べづチドの１種
を八づテシとし、これを八づテシー担体結合試薬の存在
下に、適当な担体と反応させることにより製造される。

上記方法においてハづテシに結合される担体としては、
通常抗原の作成に当り慣用される高分子の天然若しくは
合成蛋白質を広く使用できる。該担体としては、例えば
馬血清アルづミシ、牛血清アルプ三シ、ウサｆ血清アル
づミン、人血清アルづミン、ヒツジ血清アルづミシ等の
動物の血清アルづミコ類、馬血清グＯづリン、牛血清ジ
０づリン、ウサｆ血清’１ｙ０づリン、人血清／ｊＯづ
リン、ヒツジ血清夕０づリン等の動物の血清グＯづリン
類、馬チ０グＯづリン、牛チ０り０プリン、ウサｆチＯ
りＯづリン、人チ０グＯづリン、ヒツジチ０りＤづリン
等の動物のチＯり０″′ｊリシ類、馬へ七り０づリン、
牛へ七グ０プリシ、ウサｆへ七グＯづリン、人へｔグＤ
づリン、しツジヘ七り０づリン等の動物のへｔグＯづリ
ン類、動物のへ七シアニジ類、回虫より抽出された蛋白
質（アスカ−リス抽出物、特開昭５６−１６４１４号公
報、Ｊ。

Ｉｍｍｔｔｎ、、　１１１　、２６０〜２６８　（＋９
７５　）、Ｊ。

ＩｍｍＬＬｒＬ、、　１２．２　、３０２〜３０８　（
＋　９７９　）、Ｊ。

Ｉｒｎｍｕｎ、、　９８　、８９３〜９００　（１９６
７）及びＡｍ　。

Ｊ、　Ｐｈｙｓｉｏｌ、、　１９９　、５７５〜５７８
　（１９６０）に記載されたものまたはこれらを更に精
製したもの）、ボリリジシ、ポリづルタミシ酸、リジシ
ーグルタミシ酸共重合体、リジル又はオルニチンを含む
共重合体等を挙げることができる。

ハづテン−担体結合試薬としては、通常抗原の作成に当
り慣用されているものを広く使用できる具体的にはアミ
ノ基とアミノ基とを架橋結合させる、例えばグリオ士す
−ル、マ０シジアルデヒドクルタールアルデヒド、スク
シシアルデヒド、アジポアルデヒド等の脂肪族ジアルデ
ヒド類、チオール基とチオール基とを架橋結合させる、
例えばＮ、Ｎ’　−０−フエニレシジマレイミド、Ｎ、
Ｎ’　−ｍ　−フエこしシフマレイミド等のシマレイミ
ド化合物、アミノ基とチオール基とを架橋結合させる、
例えばメタマレイミドベシジイルーＮ−しドロ＋シスク
シシイ三ドエステル、４−（マレイミドメチル）−シフ
０へ中サシー１−カルボ＋シルーＮ′−ヒト０＋シスク
シジイミドエステル等のマレイミドカルボ士シルーＮ−
ヒト０士シスクシジイミドエステル化合物、アミノ基と
カルボ士シル基とをアミド結合させる通常のべづチド結
合形成反応に用いられる試薬、例えばＮ、Ｎ−ジシク０
へ牛ジルカルボジイミド（ＤＣＣ）、Ｎ−エチル−Ｎ′
−ジメチ、　　ルアミノカルボジイミド、１−エチル−
３−ジイソづ０ヒルアミノカルボジイミド、１−シフ０
へ十シル−３−（２−Ｅルホリニル−４−エチル）カル
ボジイミド等のカルボシイミド類等の脱水縮合剤を挙け
ることができる。また上記ハづテン−担体結合試薬とし
ては、Ｐ−シアリニウムフェニル酢酸等のシアリニウム
アリールカルポジ酸類と通常のべづチド結合形成反応試
薬、例えば上記脱水縮合剤とを組み合わせたものも使用
可能である。

又上記結合試薬としてはチロシンのフェニル環又はヒス
チ、；シのイミタジール環を各々架橋結合させる、例え
ばビスジアジタイズドベンジジン（Ｂ上記抗原の製造反
応は、例えば水溶液もしくはＰｌｆ７〜１０の通常の緩
衝液中好ましくはＰＨ８〜９の緩衝液中で、０〜４０’
Ｃ好ましくは室温付近で行なわれる。該反応は通常約１
〜２４時間好ましくは３〜５時間で完結する。上記にお
いて用いられる代表的緩衝液としては、次のものを例示
できる。

０．２　Ｎ水酸化ｆ　）　！Ｊ　’）　ム−０，２，Ｍ
＄　’＞酸−０，２Ｍ塩化カリウム緩衝液、 ０．２１ｄ炭ｅｆト！Ｊｒ）ムー０．２Ｍホ’）酸−０
．２Ｍ塩化カリウム緩衝液、 ０．０５Ｍ四ホウ酸ナトリウムー０．２Ｍホウ酸−０、
０５Ｍ塩化ナトリウム緩衝液、 ０、ＩＪ／リシ酸二水素カリウム−０，０５Ｍ四ホウ酸
ナトリウム緩衝液 上記においてハづテン、ハづテン−相体結合試薬及び担
体の使用割合は、適宜に決定できるが、通常へづテンに
対して担体を２〜６倍重量好ましくは３〜５倍重量、及
びハづテン−担体結合試薬を５〜ｌＯ倍ｔル程度用いる
のがよい。上記反応によりハづテン−担体結合試薬を仲
介させて担体とハづテンとが結合したべづチドー担体複
合体から成るヒトα型イシターフエ０ン抗原が収得され
る。

反応終了後得られる抗原は常法に従い、例えば透析法、
ゲル濾過法、分別沈殿法等にょシ容易に単離精製できる
。また該抗原は通常の凍結乾燥法により保存できる。

かくしてヒトα型イシターフエ０シのｃ末端べづチド及
びその誘導体の１種と、担体との複合体から成るヒトα
型イ、７ターフエ０シ抗原を得る。

該抗原は、通常蛋白質１１１ニルに対しべづチドが平均
５〜２０Ｅル結合したものであり、いずれも引き続き再
現性よく、ヒトα型イシターフエ０シに対する特異性の
高い抗体の作成を可能とするものである。特に上記蛋白
質に対するべづチドの結合ｔル比がｌ：８〜１５のもの
は、特異性が一層高く高力価、高感度の抗体を作成し得
るものであり好ましい。

上記で得られる抗原による抗体の作成は、以下の如くし
て行なわれる。即ち上記抗原を哺乳動物に投与し、生体
内に産生される抗体を採取することＫより行なわれる。

抗体の製造に供せられる哺乳動物としては、特に制限は
ないが、通常兎や’Ｅ：　Ｌ　ｔットを用いるのが望ま
しい。抗体の産生に当っては、上記により得られる抗原
の所定量を生理食塩水で適当濃度に希釈し、フロイシド
の補助液（ＣｏｒｎｐＬｔｔｔ　Ｆｒｇｕｔｖｌ’ｚＡ
ｄ）’ｔｂｖａｒＬｔ　）と混合して懸濁液を調整し、
之を晴乳動物体に投与すればよい。例えば兎に上記懸濁
液を皮肉注射（抗原め量として０．５〜５キ／回）し、
以後２週間毎に２〜ｌＯケ月好ましくけ４〜６ケ月間投
与し免疫化させればよい。抗体の採取は、上記懸濁液の
最終投与後抗体が多量産出される時期、通常上記最終投
与１〜２週間経過後、免疫化された動物から採血し、之
を遠心分離後血清を分離採取することにより行なわれる
。上記によれば用いる抗原の特殊性に基づいて、ヒトα
型イシターフエＯシに対して優れた特異性を有し、高力
価、高感度の抗体を収得できる。

かくして得られるヒトα型イシターフエＯシ抗体は、例
えばこれをＲＩＡ法に利用してヒトα型イシターフエＯ
シの定量を高精度をもって可能とする。また該抗体は、
これを酵素または螢光物質で標識することによって（ｐ
：ＩＡ　）法やフＯ−レツセシスイムノアツセイＣＦＩ
Ａ）法等に使用できる。さらに該抗体は公知の不溶化さ
せる物質と反応させて不溶化抗体とすることもできる。

　　　　　　“以下本発明を更に詳しく説明するため、
一般式ｆｌｌのぺづチド、これを利用した抗原及び該抗
原からの抗体の製造例を挙げるが、本発明はこれに限定
される吃のではない。

尚各製造例におけるＲｆ値はシリカゲル上の薄層り０マ
ドクラフイーにて下記混合溶媒を用いて測定したもので
ある。

Ｒｆｌ・・・　１−づタノールー酢酸−水（４：ｌ：５
）Ｒｆ　　・・・　ｌ−づタノールーヒリジシー酢酸−
水（＋５：１０：３：１２） くペプチドの合成〉 製造例　１ １、　　Ｚ−Ｌｙｅ（Ｔｏｙ）−ＧＩＴＬ（ＯＢｚＬ）
−０ＢｚＬの製造Ｈ−Ｇｌｕ　（ＯＢｚｌ　）−０Ｂｚ
ｌ　−Ｔｏｓ　４．　ｌ　８　ｆをジメチルホルムアミ
ド（ＤＭＦ　）３０ｍｌに溶解し、トリエチルアミシ（
ＴＥＡ）１．２１ｒｄを加え、攪拌下冷却する。一方Ｚ
−Ｌｙｓ　（Ｔｏｙ　）−ＯＨ４，３５ｆをテトラしド
ロフラン（ＴＨＦ）３０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルｔル
ホリシ０．９８ｍ１を加え一１５℃に冷却し、攪拌下ク
ロＯ蟻酸イソブチル１．２７ｍ／を滴下する。

滴下３０秒後該液に上記で調製した冷ＤＭＦ溶液を加え
、この混合液を０℃下に５分間、次いで４０℃の水浴中
で１分間、更に１５℃下に３０分間攪拌する。反応液よ
りＴＨＦ及びＤＭＦを減圧留去し、残渣を酢酸エチルで
抽出する。抽出液をＩＮクエシ酸、飽和食塩水、飽和炭
酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で順次洗浄し、
無水硫酸ナトリウムで乾燥後、酢酸エチルを留去する。

得られる油状残渣にエチルエーテルを加えて固化させ、
これを酢酸エチル−エーテルより再沈殿させて目的物５
．３７ｒを得る。

Ｒｆ”＝０．９６ Ｒｆ＝０．９０ 元素分析値（Ｃ４゜Ｈ４５Ｎ３０９Ｓとして）計算値（
％）　　Ｃ６４，５９Ｈ６，ＩＯＮ５．６５実測値（％
）　　Ｃ６４，１３Ｈ５，９５Ｎ　５．６３２（（Ｚ）
、　　Ｈ−Ｌｙｚ（Ｔｏｓ）−Ｇｌｕ−ＯＨの製造Ｚ−
ＬｙＪＰ（Ｔｏｙ　）−ＧｌｔＬ（０Ｂｚｌ　）−０Ｂ
ｚＬ　５．２１　ｆをメタノール８０ｍ／と１０％酢酸
２０ｍとの混液に溶解し、パラジウムづう゛シフ少量を
加えＨ２ｊ５ス導入下１夜攪拌する。反応終了後触媒を
吸引ｐ過によりＦ去し、Ｆ液を減圧蒸留し、残渣を水に
注ぎ凍結乾燥して目的物を得る。

Ｒｆ＝０．２９ Ｒｆ＝０．５２ ２（ｈ）、　　Ｚ−５ａｒ−Ｌｙｚ（Ｔａ、？）−Ｇｌ
ｔＬ−ＯＲの製造Ｚ　−Ｓａ　ｒ　−ＩＶＩＩＮＨ；ａ
　２−１３　ＷをＤＭＦ’１０ｍ１に溶解し、６Ｎ塩酸
／ジオ＋サシ４．２０Ｒｔを加え、−１５℃に冷却し、
攪拌下皿硝酸イソアミル１．１３ｍ１を加える。反応液
がヒドラジドテスト陰性になった後ＴＥＡ３．５３１ｄ
の冷ＤＭＦ　１．２０ゴ溶液を少量宛滴下し中和させる
。このアジドを含む溶液を、上記（ａ）で得たＨ−Ｌｙ
ｚＣＴｏｚ）−ＧｌｔＬ−ＯＨ及びＴＥＡｌ、９６ｄの
冷ＤＭＦ溶液に加え、混合液を−１０〜−１５℃下２時
間、次いで４℃下２０時間攪拌する。ＤＭＦを減圧留去
し、残渣を酢酸エチルで抽出し、酢酸エチル層をｌＮク
エシ酸及び飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで
乾燥後、酢酸エチルを減圧留去する。得られる残渣にエ
チルエーテルを加えて固化させ、酢酸エチル−エーテル
より再沈殿させて、目的物４．１４ｔを得る。

Ｒｆ”＝０．６４ Ｒｆ−０，６５ 元素分析値（Ｃ２９Ｈ３８Ｎ４０□１Ｓ−イＨ２０とし
て）計算値（％）　　Ｃ５２，８０Ｈ５，９６Ｈ８，４
９実測値（％）　　Ｃ５２，８７Ｈ５，６９Ｈ８，４６
３（ａ）、　　Ｈ−５ａｒ−ＬｙｚＣＴｏｚ）　−ＧＬ
ＴＬ−ＯＨの製造Ｚ−Ｅａｒ−Ｌｙｅ（Ｔｏｓ　）　−
ＧＺｔＬ−ＯＨ４，０３ｆをメタノール６０ゴと１０チ
酢酸４０ゴとの混液に溶解し、パラジウムづラック少量
を加えＨ２ガス導入下ｌ夜攪拌する。反応終了後触媒を
吸引濾過によりＰ去　　　、ｉし、涙液を減圧蒸留し、
残渣を水に注ぎ凍結乾燥して目的物を得る。

Ｒｆ”＝０．２３ Ｒｆ　　±０．４８ ３（ｈ）、　　Ｚ−Ａｒｇ（ＮＯ２）−５ａτ−Ｌｙｓ
（Ｔｏｅ）−ＧＬｗ−ＯＨの製造 上記（α）で得たＨ’−Ｓａｙ　−Ｌｙ、？（Ｔａｇ　
）−Ｇｌｕ　−ＯＨをＤＭＦ２０ｗｒｌに溶解し、ＴＥ
Ａｌ、７４ｍ１を加え、攪拌下冷却する。一方Ｚ−Ａｒ
ｙ）　（Ａ’０２）　−ＯＨ２−４１ｔをＴＨＦ２０ｍ
ｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリシ０．７０ｍ１を加え
−１５℃に冷却し、攪拌下り００蟻酸イソづチル０．８
６ｍ１を滴下する。滴下３０秒後該液に上記で調製した
冷ＤＭＦ溶液を加え、この混合液を０℃下に５分間、次
いで４０℃の水浴中で１分間、更に１５℃下に３０分間
攪拌する。

反応液よりＴＨＦ及びＤＭＦを減圧留去し、残渣を２チ
酢酸飽和ブタノールで抽出する。抽出液をルーづタノー
ル飽和の２％酢酸で５回洗浄し、減圧蒸留し、水に置き
変えて酢酸を留去し、更にメタノールに置き変えて水を
留去する。得られる油状残渣にエチルエーテルを加えて
固化させ、これを酢酸エチル−メタノールより再沈殿さ
せて目的物４．０９ｆを得る。

Ｒｆ＝０．４２ Ｒｆ＝０．６５ 元素分析値（Ｃ３５入、Ｎ９０１４Ｓ−イＨ２０として
）計算値（チ）　　Ｃ４８，８３Ｈ５，８５Ｎ　１４．
６４実測値（％）　　Ｃ４９，２２Ｈ６，０５＃＋４．
１１４、Ｚ−５ｅｒ−Ｌａ１Ｌ−ＮＩＩＮＨ２の製造Ｚ
　−Ｅａｒ−ＮＨＭＩＩ２２　、５４　ｆをＤＭＦ２０
ｒｎｌに溶解し、６Ｎ塩酸／、；才士サン５．００ｍ１
を加え、−１５℃に冷却し、攪拌下皿硝酸イソアミル１
．３４　ｄを加える。反応液がヒドラジドテスト陰性に
なった後ＴＥＡ４．２０ｍ１の冷ＤＭＦ１．４０ｍ１溶
液を少量宛滴下し中和させる。このアジドを含む溶液を
、Ｈ−ＬａＩ４−ＱＣ２Ｈ５・ＨＣＬ　１．９６　ｆ及
びＴＥＡｌ、４０ｍ１の冷ＤＭＦ溶液１５ｍＡ’に加え
、混合液を−１０〜−１５℃下２時間、次いで４℃下２
０時間攪拌する。ＤＭＦを減圧留去し、残渣を酢酸エチ
ルで抽出し、酢酸エチル層をＩＮクエシ酸、飽和食塩水
、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で順次
洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、酢酸エチルを減
圧留去する。得られる残渣に石油エーテルを加えデカシ
テーショシにより洗浄する。油状物質をデシケータ−内
で減圧乾燥し、乾燥物をメタノール５０１ｎｌに溶かし
、水冷下１００％しドラジンｌ水和物２．５０　ｍｌを
加え、室温下２０時間放置し、メタノールを減圧留去す
る。残渣にエチルエーテルを加えて固化させ、これをデ
シケータ−内で乾燥後、水洗濾過して過剰のしドラ、；
シ１水和物を除去し、メタノール−酢酸エチルから再沈
殿させて、目的物２．６８＆を得る。

Ｒｆ＝０．７３ Ｒｆ＝０．７６ 元素分析値（Ｃ□７Ｈ２６Ｎ１．０５として）計算値（
％）　　Ｃ５５，７３Ｈ７，１５＃１５．２９実測値（
チ）　　Ｃ５５，７２ｌｉ７．０１　　＃Ｉ５．４２５
　（ａ）、　　Ｈ−Ａｒｇ−５ａｙ−Ｌｙｅ　ＣＴｏｚ
　）−ＧＬｔＬ−ＯＨの製造Ｚ−ＡｒｇＣＮ０２）−５
ｔｒ−Ｌｙｚ（Ｔｏｐ　）　−Ｇに一〇Ｈ２，ＯＯＶを
メタノール３０ｄと５０チ酢酸３０ｄとの混液に懸濁し
、パラジウムブラック少量を加えＨ２ガス導入下３６時
間攪拌する。反応終了後触媒を吸引濾過により戸去し、
Ｐ液を減圧蒸留し、残渣を水に注ぎ凍結乾燥し、１８時
間後再度水に溶かして凍結乾燥して目的物を得る。

Ｒｆ１＝０．０５ Ｒｆ”＝０．４１ ５（ｈ）、　　Ｚ−５ｔｒ−１，ｔＩＬ−Ａｒｇ−Ｅａ
ｒ−ＬｙｓＣＴｏｓ）−ＧＬｒＬ−解し、６Ｎ塩酸／ジ
オ十サシ１．今１ｍＡ’を加え、−１５℃に冷却し、攪
拌下皿硝酸イソアミル０．３８・１： ＴＩＬｌを加える。反応液がヒドラジドテスト陰性にな
　　　′−。

つた後ＴＥ、（１，１８−の冷ＤＭＦ０．４０ｍ１溶液
を少量宛滴下し中和させる。このアジドを含む溶液を、
−上記（α）で得たＨ　−Ａｒｇ　−Ｓｔｙ　−ＬｙＳ
　（Ｔｏｓ　）　−Ｇｌｔｂ　−ＯＨ及びＴＥＡｏ、６
６ｍ１の冷ＤＭＦ溶液１０ｍ／に加え、混合液を−１０
〜−１５℃下２時間、次いで４℃下２０時間攪拌する。

ＤＭＦを減圧留去し、残渣を水飽和のルーづタノールで
抽出し、づタノール層をルーづタノール飽和水で５回洗
浄し、減圧留去する。得られる残渣にエチルエーテルを
加えて固化させ、メタノール−酢酸エチルより再沈殿さ
せて、目的物１．９ＳＭ’を得る。

Ｒｆ＝０．３３ Ｒｆ＝０．６９ 元素分析値（Ｃ′４４Ｈ６６Ｎ□。０□５Ｓ・２Ｈ２ｏ
として）計算値（チ）　　Ｃ５０，６６Ｈ６，７６＃　
１３．４３実測値（チ）　　Ｃ５０，５７Ｈ６，５Ｉ　
　＃１３．３４６　（αル　　ＩＩ−５ｉｒ−ＬｇｔＬ
−Ａｒｙ−５ｅｒｌｌ−５ｉｒ−Ｌ　）−Ｇｔｕ　−Ｏ
Ｈの製造 Ｚ−Ｅｔｒ−Ｌａｕ−Ａｒｇ−５ｔｒ−Ｌｙｚ（Ｔｏｊ
ｌ）−Ｇｔｕ−Ｏｆｆｌ、８４Ｆをメタノール３Ｑｍｌ
と１０％酢酸３０ｍ１との混液に懸濁し、パラジウムブ
ラック少量を加えＨ２カス導入下１３時間攪拌する。反
応終了後触媒を吸引濾過により沖去し、Ｐ液を減圧蒸留
し、残渣を水に注ぎ凍結乾燥して目的物を得る。

Ｒｆ’＝０．０９ Ｒｆ＝０．５３ ６（ｂ）、　　Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−５ａｙ−
Ｌｔｕ−Ａｒｇ−５ａｙ　−Ｌｙｓ　（７’０．？　）
〜ＧＬｔＬ−ＯＨの製造上記（α）で得たＨ−５ｔｒ−
Ｌｔｕ−Ａｒｇ　−５ｔｒ−Ｌｙｚ（Ｔｏｙ）−Ｇｌｕ
−ＯＨをＤＭＦ２０１ｆＬｔに溶解し、Ｔ　Ｅ　Ａ　Ｏ
，５１ゴを氷冷下に加え、更にＢｙ　ｃ　−Ｇｌ　ｗ　
（ＯＢｚ　ｌ　）　−０ＮＨ５０，９５Ｆを加え、混合
液を室温下２４時間攪拌する。ＤＭＦを減圧留去し、残
渣を水飽和のルーラタノールで抽出し、づタノール層を
ルーづタノール飽和の水で５回洗浄する。づタノール層
を減圧留去し、得られる残渣にエチルエーテルを加えて
固化させ、メタノール−酢酸エチルより再沈殿させて、
目的物１．７（１’を得る。

Ｒｆ＝（〕、４２ Ｒｆ＝０．６０ 元素分析値（Ｃ５３Ｈ８□Ｎ工□Ｏ□８Ｓ・２Ｈ２０と
して）計算値（％’）　　Ｃ５１，８２Ｈ６，９７＃１
２．５５実測値（％）　　Ｃ５１，２７Ｈ６，５８＃　
１２．４７７（α）、　　Ｂｏｃ−ＧＩＬＬ−、Ｓｔｒ
　−Ｌｔｕ−Ａｒｇ−５ｅｒ−Ｌｙｓ（Ｔａｘ）−ＧＬ
ｕ−ＯＨの製造 Ｂｏｃ−Ｇｌｔｔ（ＯＢｚｌ　）−５ｅｒ−Ｌａｗ　−
Ａｒｇ−５ｔｒ−Ｌｙｚ（Ｔｏｐ）−ＧＺＷ−ＯＨｌ　
５０　’９をメタノール３０ｍ１とｌＯ％酢酸３０ｍ１
との混液に溶解し、パラジウムブラック少量を加えＨ２
ガス導入下１８時間攪拌する。反応終了後触媒を吸引濾
過により炉去し、Ｐ液を減圧蒸留し、残渣に水を注ぎ凍
結乾燥して目的物を得る。

７　（ｈ）、　　ＩＩ−Ｇｌｕ−５ｔｒ−ＬａＴＬ−Ａ
ｒｇ７Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（Ｔｏｐ）　−ＧＩＬＬ−ＯＨの
製造 上記（α）で得たＢｏｃ−ＧＩＬＬ−５ｅｒ−ＬｇＬＬ
−Ａｒｇ−５ｅｒ　−Ｌｙｓ　（Ｔｏｓ）−Ｇｌｔｔ−
０１１をＴＨＦに溶解し、室温で１５分間放置する。無
水エーテル約３０ｍ１を加え、析出物を濾過し、無水エ
ーテルで洗浄後、水酸化カリウム−五酸化リンを入れた
デシケータ−内で減圧乾燥して、目的物を得る。

８　（（Ｚ）、　　Ｈ−Ｇｌ　ｎ　−ＮＨＮＨＢｏ　ｃ
の製造Ｚ−ＧＬｎ−Ｎ１１ＮＨＢｏｃ　Ｉ　６．００　
ｔをメタノール１００ｍ／に懸濁し、パラジウムブラッ
ク少量を加えＨ２カス導入下１８時間攪拌する。反応終
了後触媒を吸引濾過により瀘去し、Ｐ液を減圧蒸留し、
残渣をデシケータ−内で減圧乾燥して目的物を得る。

Ｒｆ＝０．３７ Ｒｆ＝０．５８ ８（ｂ）、　　Ｚ−Ｌｅａ−Ｇｌｎ−ＮＨＮＨＢｏｃの
製造上記（α）で得たＨ　−Ｇｌ　ｎ　−ＮＨＮＨＢｏ
　ｃをＴＨＦ５０ｍｌに溶解し、水冷下Ｚ、−Ｌルー０
ＮＢＳ　５．５１９を加え、　　　　□室ｒｌ！、Ｔ　
Ｉ　８時間攪拌する。ＴＨＦを減圧留去し、残渣を酢酸
エチルで辿出し、酢酸エチル層をｌＮクエン酸、飽和食
塩水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で
順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、酢酸エチル
を留去する。得られる油状残渣にエチルエーテルを加え
て固化させ、これをメタノール−エチルエーテルより再
沈殿させて目的物６．０４ｆを得る。

Ｒｆ１＝０．８１ Ｒｆ”　、＝　０．８６ 元素分析値（Ｃ２４Ｈ３７Ｈ５０７として）計算値（％
）　　Ｃ５６，７９Ｍ　７．３５　　＃　１３．８０実
測値（％）　　Ｃ５６，６７Ｈ７，Ｈ５＃Ｉ３．７５９
（ａ）、　　Ｈ−Ｌｔｕ−ＧＺｎ−ＮＨＮＨＢｏｃの製
造Ｚ　−Ｌｔ　ｗ　−Ｇｌｎ　−ＮＨＮＨＢｏ　ｃ　２
．７９２をメタノール８０ｒｔｒｌに懸濁し、パラジウ
ムブラック少量を加えＨ２ガス導入下３２時間攪拌する
。反応終了後触媒を吸引濾過により沖去し、Ｆ液を減圧
留去し、残渣をダシケータ−内で減圧乾燥して、目的物
を得る。

Ｒｆ”　−＝　０．３３ Ｒｆ＝０．６６ ９　（Ａ）、　　Ｚ　−ＡｓルーＬｔ払−ＧＬルーＮＨ
ＮＨＢｏ　ｃの製造上記（α）で得たＨ　−Ｌａ　ｕ　
−Ｇｌ　ｎ　−ＮＨＮＨＢｏ　ｃをＤＭＦ３０ｍｌに溶
解し、攪拌下冷却する。一方Ｚ−Ａｓｎ−ＯＨ１，６１
ｆをＴＨＦ３Ｑｍｌに溶解し、Ｎ−メチルセルホリン０
．６２ｍ１を加え一１５℃に冷却し、攪拌下り００蟻酸
イソづチル０．８０１７１１を滴下する。

滴下３０秒後該液に上記で調製した冷ＤＭＦ溶液を加え
、この混合液を０℃下に５分間、次いで４０℃の水浴中
で１分間、更に１５℃下に３０分間攪拌する。反応液よ
りＴＨＦ及びＤ　Ａｆ　Ｆを減圧留去し、残渣を酢酸エ
チルで抽出する。抽出液をｌＮクエン酸、飽和食塩水、
飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で順次洗
浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、酢酸エチルを留去
する。

得うれる油状残渣にエチルエーテルを加えて固化させ、
メタノール−酢酸エチルで再沈殿させて目的物２．５５
ｒを得る。

Ｒｆ　　＝０．６３ Ｒｆ＝０．７７ 元素分析値（Ｃ２８Ｈ４３Ｎ７０９として）計算値（チ
）Ｃ５３，１０Ｈ６，９７＃　１５．７７実測値（％）
　　Ｃ５３，６７Ｈ６，６３＃１５．６８Ｉ　Ｑ　（ｃ
ｚ）、　　Ｚ　−ＴＡ　ｒ　−０ＮＨ５の製造Ｚ−Ｔｈ
ｒ−ＯＨ１，２８？をＴＩＩ’Ｆ３０ｒｎｅに溶解し、
これにＮＨ３０，５８ｆを加え、氷冷し、次いでＮ、Ｎ
−ジシク０へ士ジルカルボジイミド（ＤＣＣ）１．０５
ｆを加える。この混合液を４℃で２４時間攪拌し、析出
物を沖去し、Ｐ液を減圧留去し、残液にエチルエーテル
を加え、デカシテーショシ洗浄する。得られる油状物質
をデシケータ−内にて減圧乾燥して目的物を得る。

１０（Ａ１．　　〃−Ａｚｎ−Ｌａｗ−ＧムーＮＩＩＮ
ＨＢｏ　ｃの製造Ｚ−Ａｓｎ−ＬｔｔＬ−Ｇｌｎ−ＮＨ
ＮＨＢｏｃ　２−４３９をメタノール８０ｍ１Ｋ懸濁し
、パラジウムブラック少量を加え、Ｈ２ガス導入下１８
時間攪拌する。反応終了後触媒を吸引濾過によりＰ去し
、ろ液を減圧留去し、デシケータ−内で減圧乾燥して目
的物を得る。

Ｒｆ”＝０．３１ Ｒｆ”＝０．６４ ｔｏ（Ｃ）、　　Ｚ−Ｔｈｒ−ＡｓｒＬ−Ｌａｗ−Ｇｌ
ｒ＆−ＮＨＮＨＢｏｃの製造上記＜ｈ＞で得たＩＩ　−
ＡｓｒＬ−Ｌｇ　ｗ　−ＧＡ　ｎ　−ＮＨＮＨＢｏ　ｃ
をＤＭＦ３０ｒｔｔｌに溶解し、この溶液に上記（α）
で得たＺ　−Ｔｈｒ−０ＮＨ５のＤＭＦ２０１ｍｌ溶液
を水冷下に加え、混合液を室温下１８時間攪拌する。Ｄ
ＭＦを減圧留去して得られた残渣にｌＮクエシ酸を加え
て固化し、メタノール−酢酸エチルより再沈殿させて、
目的物２．１ＳＭを得る。

Ｒｆ’＝０．８２ Ｒｆ”＝０．７９ 元素分析値（９３２Ｈ５ｏＮ８０１１として）計算値（
チ）　　Ｃ５３，＋８　　Ｈ６，９７＃１５．５０　　
　　　’実測値（チ）　　Ｃ５２，８５Ｈ６，９５Ｎ　
１５．２８■（ａ）、　　Ｚ−Ｔｈｒ　−Ａｒｎ−Ｌａ
ｗ−Ｇｉｎ−ＮＨＮＨ２の製造Ｚ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｌ
ｇｕ−Ｇｌｎ−ＮＨＮＨＢｏｃ　Ｏ，９１ｔをＴＦＡＢ
ｍｌに溶解し、室温下１５分間放置する。

無水エーテル８Ｑｍ／を加えて析出物をすげやく濾過し
、無水エーテルで洗浄後、水酸化カリウム−五酸化リシ
を入れたデシケータ−内で減圧乾燥して目的物を得る。

Ｒｆ”＝０．３４ １１（ｈ）、　　Ｈ−Ｇｈｂ（ＯＢｚｌ　）−５ａｒ−
Ｌｔｔｔ−Ａｒｇ−５ｅｒ−ＬｙＪ？（Ｔｏｐ）−Ｇｌ
ｔＬ−ＯＨの製造 Ｂｏｃ−ＧＩＬＬ（０Ｂｚｌ　）−５ａｒ−Ｌａｗ　−
Ａｒｇ　−Ｓｇｒ−Ｌｙｚ　（Ｔｏｓ　）−Ｇｌｗ−〇
Ｈ１，０ＯｆをＴＦＡ８ｍｌＫ溶解し、室温下１５分間
放置する。無水エーテル８０ｍ１を加えて析出物をすば
やく濾過し、無水エーテルで洗浄後、水酸化カリウム−
五酸化リシを入れたデシケータ−内で減圧乾燥して目的
物を得る。

Ｒ，ｆ”　＝　０．２４ Ｒｆ”＝０．４４ ＋１（Ｃ）、　　Ｚ−Ｔｈｒ−ＡｚｔＬ−Ｌａｗ−Ｇｔ
ｎ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）　−５ａｙ−ＬａＬＬ−Ａｒｙ
−５ｉｒ−Ｌｙｅ　（Ｔａｘ　）　−ＧＬｗ−ＯＨの製
造上記（α）で得たＺ　−Ｔｈｒ　−Ａｚｎ　−Ｌｇｔ
ｔ　−ＧＬｒＬ−ＮＨＮＨ２をＤＡＩＦｌｏｍｌに溶解
し、６Ｎ塩酸／、；オ＋サシ０、６３　ｍｌを加え、−
１５℃に冷却し、攪拌下皿硝酸イソアミル０．１７１ｄ
を加える。反応液がヒドラジドテスト陰性になった後Ｔ
　Ｅ　Ａ　０．５３１１１ｊの冷ＤＭＦ０．４０ｔｎｌ
溶液を少量宛滴下し中和させる。

このアジドを含む溶液を、上記Ｃｈ）で得たＨ−Ｇｌｔ
ｂ（ＯＢｚｌ）−５ｉｒ−ＬＣＩＬ−Ａｒｇ−５ｅｒ−
Ｌｙｓ　（Ｔｏｐ）　−Ｇｌｗ−０１１及びＴＥＡｏ、
２４ｍ１の冷ＤＭＦ溶液ｌ０ｍ１に加え、混合液を−１
０〜−１５℃下２時間、次いで＋Ｕ下１８時間攪拌反応
させる。さらに上記（α）と同様にしてＺ−Ｔｈｒ−Ａ
ｚｒＬ−Ｌａ１Ｌ−Ｇｉｎ−ＮＨＮＨＢｏｃ　　１．　
ｌ　６　ｔをＴＦＡで処理して得た反応物を上記反応混
合物に加え２４時間同温度下に攪拌反応させる。ＤＭＦ
を減圧留去し、残渣を水飽和のルーづタノールで抽出し
、ルーブタノール飽和の水で５回洗浄し、減圧蒸留する
。残渣にエチルエーテルを加えて固化させ、メタノール
−酢酸エチルよシ再沈殿させ更に熱メタノールで洗浄し
て、目的物を得る。

１１（ｄ）、　　　Ｈ−Ｔｈｒ−Ａｚｎ−Ｌａｗ−Ｇｔ
ｎ−ＧＬｗ−５ａｒ−Ｌａｗ　−Ａｒｇ−５ａｙ−Ｌｙ
ｅ　（Ｔｏｙ　）−Ｇｌｕ−ＯＨの製造上記（Ｃ）で得
たＺ−Ｔｈｒ　−１ｈｎ−Ｌｅｕ−ＧＬｎ−ＧＴｏ（Ｏ
Ｂｚｌ　）−５ａｒ−Ｌａｕ−Ａｒｇ−５ａｒ−Ｌｙｅ
（Ｔｏｐ）−Ｇｈｔ−ＯＨをメタノール５０ｄ及び３０
チ酢酸５Ｑｍｇとの混液に懸濁させ、パラジウムブラッ
ク少量を加え、Ｈ２ガス導入下１８時間攪拌する。反応
終了後触媒を吸引濾過により沖去し、炉液を減圧濃縮し
、メタノールを完全に留去後、得られる濃縮液を、５０
％酢酸を溶出液とするセファデックスＧ−２５によシゲ
ル濾過して、目的とするフラクショシを集め凍結乾燥し
て目的物７４０■を得る。

Ｒｆ”＝Ｏ，＋７ Ｒｆ”＝０．３５ 元素分析値（Ｃ６６Ｈ９９Ｎ１７０２３・Ｃ２も０２・
２Ｈ２０として） 計算値（％）　　Ｃ４８，９１Ｎ７．０８　　Ｎ１５．
６４実測値（％）　　Ｃ４８，８２Ｈ６，６３７Ｖ１５
．７４１２、　　Ｚ−Ｌａｗ−Ｅａｒ−ＯＣＨ３の製造
Ｈ−５ａ　ｒ−ＯＣＨｙ、　・ＨＣＬ　１−８１　ｔを
ＤＭＦ　２５ｄに溶解し、ＴＥＡｌ、６２ｒｎｌを加え
一１０℃に氷冷す。

る。攪拌下Ｚ−ＬｅＬＬ−ＯＮＨ５４，２１ｆを加え、
室温で１８時間攪拌を続ける。ＤＭＦを減圧留去し、残
渣を酢酸エチルで抽出し、酢酸エチル層を水洗し、無水
硫酸ナトリウムで乾燥後、酢酸エチルを減圧留去する。

得られる残渣にエチルエーテルを加えて固化させ、酢酸
エチル−エーテルより再沈殿させて、目的物２．６８９
を得る。

Ｒｆ１＝０．８１ Ｒｆ”＝０．８２ 元素分析値（Ｃ□８Ｈ２６Ｎ２０６として）計算値（チ
）　　Ｃ５９，ＯＯ＃７．１５　　Ｎ７．６５実測値（
％）　　Ｃ５８，６２Ｈ７，０３Ｎ　７．６５１３（ａ
）、　　Ｅ’−Ｌａｕ−５ｔｒ−ＯＣＨ，・ＨＣｌの製
造Ｚ−ＬｇｔＬ−５ａｙ−ＯＣＨ３４，２０ｔをメタ／
−Ｌ４０ｄとＩＡ’塩酸１１．４６１Ｌ／との混液に懸
濁させ、パラジウムブラック少量を加え、Ｈ２ガス導入
下１８時間１、　　　　攪拌する。反応終了後触媒を吸
引濾過にょｈｐ去し、Ｆ液を減圧蒸留し、更に水を加え
減圧蒸留する操作を３回繰返す。残渣を五酸化リンを入
れたデシケータ−内で減圧乾燥して目的物を得る。

Ｒｆ”＝０．３８ １３（Ａ）、　　Ｚ−５ｅｒ−Ｌｇｕ、−５ａｒ−ＯＣ
Ｈ３の製造Ｚ　−Ｓａ　ｒ　−ＮＨＮＨ２３、Ｉ　９　
ｆをＩ）ＭＦ２５ｍｌに溶解し、６＃　ＨＣ１／”５才
子ｔシロ、３０ｒａｌをカｌえ、−１５℃に冷却し、攪
拌下皿硝酸イソアミルＬ６９ｍｌを加える。反応液がヒ
ドラジドテスト陰性になった後ＴＥＡ５．２９１Ｒ１の
冷ＤＭＦ１．７６ｍ１溶液を少量宛滴下し中和させる。

このアジドを含む溶液を、上記（ａ）で得たＨ−ＬａＬ
Ｌ−５ａｒ−ＯＣＨ３・ｌｌＣｌ及びＴＥＡｌ、６０ｍ
／の冷ＤＭＦ溶液２０ｔｎｌに加え、混合液を−１０〜
−１５℃下２時間、次いで４℃下１８時間攪拌する。Ｄ
ＭＦを減圧留去し、残液に水を加えて固化させ、メタノ
ール−酢酸エチルよりＦ［殿させて、目的物４．ｌｌｆ
を得る。

Ｒｆ＝０．Ｉ６ Ｒｆ”＝０．７９ 元素分析値（０２□Ｈ３□Ｎ３０８として）計算値（％
）　　Ｃ５５，６２Ｈ６，８９＃　９．２７実測値（％
）　　Ｃ５５，４８Ｈ６，９２＃９．１８１４、　　Ｚ
−５ａｒ−Ｌａｕ−５ｔｙ−ＮＨＮＨ２の製造Ｚ７Ｓｇ
ｒ　−Ｌａｗ−５ａｙ−ＯＣＨ３２，００？をメタノー
ル４０ＷＬｔに溶解し、氷冷下１００チＮ〃ノＥ２・Ｈ
２Ｏ１、ｌＱｍｔを加え、室温で１８時間放置する。反
応終了後、溶媒を減圧留去し、エーテルを加えて固化さ
せ、過剰のＮＨ２ＮｌＩ２・Ｈ２Ｏを水を加えて除去し
、メタノール−酢酸エチルよシ再沈殿させて目的物１．
９１Ｆを得る。

Ｒｆ＝０．４３ ＲｆＩＩ＝０．７３ 元素分析値（Ｃ２ｏＨ３□Ｎ５０７として）計算値（％
）　　Ｃ５２，９７Ｈ６，８９Ｎ　１５．４４実測値（
％）　　Ｃ５２，８５Ｈ６，７０Ｎ　１５．４４１５（
Ｃ１，Ｚ−５ｔｒ−Ｌｅｔｔ−５ｔｒ−ＴＡｒ−Ａｚｎ
−Ｌｇｕ−ＧＡｎ　−Ｇに一５ｅｒ　−ＬｔＬＬ−Ａｒ
ｇ−Ｅａｒ−Ｌｙｚ　（Ｔｏｅ）−Ｇｌｕ　−ＯＨの製
造 Ｚ　−Ｓｅｒ　−Ｌａｗ−５ｉｒ−ＮＨＮＩＩ２７０．
４２　ＷをＤＭＦ　５−に溶解し、６Ｎ塩酸／、；オ＋
サシのＤＭＦＩＯ倍希釈液０．７８ｍ／を加え、−１５
℃に冷却し、攪拌下皿硝酸イソアミルのＤＭＦ　１０倍
希釈液０．２０ｍ／を加え、反応液がヒドラジドテスト
陰性になった後、ＴＥＡのＤＭＦ　Ｉ　０倍希釈液０．
６５ｍ１を少葉宛滴下し中和させる。このアジドを含む
溶液を、上記１１（ｄ）で得たＨ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ　−
Ｌｔｕ−Ｇｌｎ　−Ｇｌｕ　−５ｔｒ−Ｌａｗ−Ａｒｃ
−５ｅｒ−Ｌｙｚ（Ｔｏ、？）　−Ｇｌｗ−ＯＨ１５１
■とＴＥＡのＤＭＦ　Ｉ　０倍希釈液０．２９　ｍｌの
冷ＤＭＦ５ｍｌ溶液に加え、混合液を−１０〜−１５℃
下２時間、次いで４℃下１８時間攪拌する。更ｉＣＺ　
−Ｓ　ｔ　ｒ　−Ｌ　ｔ　ｔＬ−Ｓ　ｅ　ｒ　−ＮＨＮ
ＩＩ２１１７．３６　”Ｆを加え、２４時間反応させる
。

Ｄ　Ｍ　Ｆを減圧留去し、残渣を水飽和のルーづタノー
ルで抽出し、ｎ−ブタノール飽和の水で１０回、更にル
ーづタノール飽和の２チ酢酸で５回洗浄し、減圧濃縮し
、水を加えて更に減圧濃縮し、完全ｐＣｎ−ブタノール
を留去後、凍結乾燥する。

これを酢酸エチル−エーテルで再沈殿させて目的物を得
る。

１５（ｈ）、　　　Ｈ−５ｔｒ−ＬａＬＬ−５ｔｙ−Ｔ
ｈｒ−Ａｓｎ−Ｌａｗ−ＧｌｒＬ−ＧＺＷ−５ｔｙ−Ｌ
ｅｓｔ−Ａｒｇ−５ｔｒ−Ｌｙｅ−ＧＺＬＬ−ＯＨの製
造 Ｚ−５ａｙ−Ｌｔｕ−５ｔｒ−Ｔｈｒ−ＡｓｒＬ−Ｌａ
ｗ−Ｇｌｎ−ＣＩＬＬ−５ａｙ−Ｌｅａ　−Ａｒｇ−５
ａｙ−ＬｙｚＣＴｏｚ）　−ＧＩＬＬ−ＯＨｌ　　５０
　ｔｉｌｌを予め金属すトリ、ラムで乾燥した液体アン
モニアに溶解し、攪拌下金属ナトリウムの小片を溶液が
　　　　〈”′青色を３０秒〜１分間保つまで加える。

更に結晶Ｎｌｆ　Ｃ１を加え、過剰のナトリウムを中和
し、室温でアンモニアを完全に蒸発後、溶出液に５０９
６酢酸を用いたセファデックスＧ−２５ゲルによりゲル
濾過して、フラクションを集めこれを濃縮後水を加えて
凍結乾燥して、目的物９４■を得る。これを「ぺづチド
Ａ」と呼ぶ。

Ｒ，ｆ”　＝　ｏ、０２ Ｒｆ”＝ｏ、３９ 元素分析値（Ｃ６５Ｈよ、。Ｎ２ｏＯ２６・Ｃ２ＩＩ４
０２・Ｎ２０として） 計算（ｉＭ　（チ）　　Ｃ４８，１９Ｎ　７．２４　　
Ｎ　１６．７８実測値（％）　　Ｃ４７，９３ＩＩ　６
．９３　　＃　１６．４９１６（α）、　　Ｚ　−Ｔｙ
ｒ　−Ｏ５ｕの製造Ｚ−Ｔｙｒ−０１１１，０４ｆをＴ
ＩＩＦ３０ｍｌに溶解し、Ｎ−ヒト０＋シサクシシイミ
ド０．３８ｆを加え、水冷後更にＤＣＣｏ、６８Ｗを水
冷下に加え、混合物を４℃で１８時間攪拌する。析出物
を吸引濾過により除き、Ｐ液を減圧濃縮し、残渣にエチ
ルエーテルと石油エーテルとを加えてデカンテーション
、乾燥して目的物を得る。

１６（ｈ）、　　Ｈ−５ｉｒ−Ｌｔｗ−５ｔｒ−ＯＣＨ
３の製造参考例１３　（ｈ）で得たＺ　−Ｓａｒ　−Ｌ
ａｔｈ　−Ｓｇｒ　−０ＣＨ３１、ＯＯｆをメタノール
２０ｍＡ’と１０チ酢酸２０１ｄに懸濁し、パラジウム
ブラック少量を加え、Ｈ２ガス導入下１４時間攪拌する
。反応終了後触媒を吸引ｐ過により戸去し、ｐ液を減圧
濃縮後水を加えて凍結乾燥して目的物を得る。

Ｒｆ”＝０．３５ Ｒｆ＝０．６５ ＋６（’）、　　Ｚ−Ｔｙｒ−５ｔｙ−Ｌｅｔｔ−５ａ
ｙ−ＯＣＨ３の製造上記（ｈ）で得＊　Ｈ−５ｅｒ−Ｌ
ｍｕ−５ｔｒ−ＯＣＨ３をＤ　Ｍ　Ｐ’）Ｑｍｌに溶解
し、ＴＥＡｏ、３１ｍ１を水冷下Ｋ　７ＪＩ］え、コ（
７）溶液に上記（α）で得たＺ−Ｔｙｒ−０５ｗの冷Ｄ
　Ｍ　Ｆ溶液を攪拌下に加える。混合液を室温下１８時
間借押し、Ｄ　Ａｆ　Ｆを減圧留去し、残渣に水を加え
て固化させ、メタノール−エーテル次いでメタノール−
酢酸エチルから再沈殿させて目的物１．０８ｒを得る。

Ｒ７’＝０．７８ ＲｆＩ［−〇、８２ 元素分析値（Ｃ，。偽。Ｎ４ｏよ。とじて）計算値（％
）　　Ｃ５８，４３Ｎ６．５４　　＃９．０９実測値（
チ）　　Ｃ５８，＋４　　Ｈ６，５８＃９．１６１６（
ｄ）、　　Ｚ−Ｔｙｒ−５ｔｒ−Ｌｔｕ−５ｔｒ−ＮＨ
Ｎｕ２の製造Ｚ−Ｔｙｒ−５ｔｒ　−Ｌｔｕ−５ｔｒ−
０（：’Ｈ３１，０Ｏｆをメタノールに溶解し、水冷下
１００％ＮＨ２ＮＨ２・Ｈ２Ｏ０−８２ｍｌを加え、室
温で１８時間放置する。メタノールを減圧留去し、残液
にエチルエーテルを加えて固化させ、水洗により過剰の
Ｎ１１２ＮＨ２・Ｂ２０を除去し、メタノール−エーテ
ルで再沈殿後熱メタ〕・ ノールで洗浄して目的物０．８１ｒを得る。

Ｒｆ＝０．４５ Ｒｆ−０，７６ 元素分析値（Ｃ２９Ｈ１，。Ｎ６０９として）計算値け
）　　Ｃ５６，４８Ｂ　６．５４　　Ｎ　１３．６３実
測値（％）　　Ｃ５６，１２Ｎ６．５７　　＃　１３．
５８１７（α）、　　Ｚ−Ｔｙｒ−５ｔｒ−Ｌｔｕ−５
ｔｒ−Ｔｈｒ−Ａｒｎ−Ｌｇｕ　−ＧｌｒＬ−ＧＩＬＬ
−５ｔｒ−ＬｅＬＬ−Ａｒｇ−５ｅｒ−Ｌｙｅ（Ｔｏｐ
）　−Ｇｈｔ−ＯＨの製造 Ｚ−Ｔｙｒ　−５ｅｒ−ＬｅＬＬ−５ｅｒ−ＮＨＮＨ２
４２，３ｔｌＶをＤＭＦ４ｍｌに溶解し、６Ｎ塩酸／、
、；１十サシのＤＭＦｌＯ倍希釈液０．３４ｍ１を加え
、−１５℃に冷却し、攪拌下皿硝酸イソアミルのＤＭＦ
　Ｉ　０倍希釈液０．０９ｍ／を加え、反応液がしドラ
ジシテスト陰性になった後、ＴＥＡのＤＭＦ　Ｉ　０倍
希釈液０，２９ＴＬｔを少量ずつ滴下し中和させる。こ
のアジドを含む溶液を、Ｈ−Ｔｈｒ−Ａｓｒｂ−Ｌａｔ
Ｌ−Ｇｌｎ−Ｇに一５ｅｒ　−Ｌｔｕ−Ａｒｇ−５ｅｒ
−Ｌｙｓ（Ｔｏｓ）−Ｇｌｕ−ＯＨ５０，０１１９とＴ
ＥＡのＤＭＦＩＯ倍希釈液０．ｌＯの冷ＤＭＦ４ｔ／溶
液に加え、混合液を−１０〜−１５℃下２時間、次いで
４℃下１８時間攪拌する。更にＺ−Ｔｙｒ−５ｔｒ−Ｌ
ｔｗ　−Ｅａｒ−ＮＨＮＨ２４２，３”ｆを加え２４時
間反応させる。ＤＭＦを減圧留去し、残渣を水飽和のル
ーづタノール３０ｒｎｌで抽出し、抽出液をルーブタノ
ール飽和水で１０回、次めでルーづタノール飽和の２％
酢酸で５回洗浄する。有機層を集め減圧濃縮し、ルーブ
タノールを留去後、凍結乾燥し、酢酸エチル−エーテル
で再沈殿させて目的物を得る。

１７（ｈ）、　　Ｈ−Ｔｙｒ−Ｅａｒ−ＬｔＬＬ−５ｔ
ｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｌｔｕ　−ＧＬｎ−ＧｌｔＬ−８
ｔｒ　−ＬａＬＬ−Ａｒｇ−５ｅｒ−Ｌｙｚ−ＧＬｕ　
−ＯＨの製造 −Ｅ記（α）で得ｆｃ、　Ｚ−Ｔｙｒ−５ｔｒ−Ｌｔｔ
Ｌ−５ｔｒ−Ｔｈｒ　−Ａｚｎ−ＬｔＬＬ−Ｇｌｎ−Ｇ
Ｌｕ−Ｅａｒ−Ｌａｗ　−Ａｒｇ−５ｅｒ−Ｌｙｚ（Ｔ
ｏｓ　）−０１μｍＯＨを予め金属ナトリウムで乾燥し
た液体７．７ｅニアに溶解し、攪拌下金属ナトリウムの
小片を溶液が青色を３０秒〜１分間保つまで加える。

更に結晶Ｈ４ｃｔを加え、過剰のナトリウムを中和し、
室温でアシ七ニアを完全に蒸発後、溶出液に５０％酢酸
を用いたセファデックスＧ−２５ゲルによりゲル沖過し
て、フうクシヨシを集め目的物３３〜を得る。これを「
べづチドＢ」と呼ぶ。

Ｒｆ＝０．０２ Ｒｆ＝０．３５ 元素分析値（Ｃ７４Ｈ１２３Ｎ２□０２８・Ｃ２Ｈ１，
０２，４Ｈ２０として） 計算値（％）　　Ｃ４７，７１Ｈ７，３０＃　１５．７
９実測値（％）　　Ｃ４７，３２Ｈ７，２４Ｎ　１５．
８２く抗原の製造〉 製造例　ｌ Ｉ？Ｘづチドの合成製造例＋５（Ａ）で得たべづチドＡ
の５η及び牛血清アルづミンＣＢＳＡ）２５〜を水４ｍ
ｌに溶解する。この溶液にジシクＯへ士シルカーポジイ
ミド（ＤＣＣ）２００■を加え、室温で５時間攪拌する
。次に反応混合物を水２ｔを用い４℃にて４８時間要し
て透析する。透析中５回水を交換する。その後べづチド
ー蛋白質複合体を含む溶液を凍結乾燥してヒトα型イシ
ターフエＯシ抗原（以下「抗原■」と呼ぶ）　２８　ｍ
ｌを得る。

得られた抗原■は、Ｂ５Ａｌ七ルに対してぺづチＦ、（
が平均１２七ル結合したものである。

製造例　２ べづチド合成製造例＋７（ｈ）で得たべづチドＢの４■
及びＢＳＡの２０■を酢酸アシ上ニウム緩衝液（０，Ｉ
Ｅル、Ｐ　Ｈ７，０）　２　ｉ／ＩＣ溶かす。この溶液
にＯ，ｌｔルのクルタールアルデヒド溶液０．１１ｍ１
を加え、室温で５時間攪拌する。その後反応混合物を４
８時間、４℃で水１ｔで透析する。透析−中５回水を交
換する。その後、べづチドー蛋白質複合体を含む溶液を
凍結乾燥してヒトα型イシターフエＯン抗原（以下「抗
原■」と呼ぶ）２２■を得る。

得られた抗原■は、Ｂ５Ａｌ七ルに対してぺづチドＢが
平均９モル結合したものである。

製造例　３ べづチドの合成製造例１５（Ａ）で得たべづチドＡの４
■及びＢ５Ａ２０ｗｇを酢酸アンモニウム緩衝液（０，
１！ニル、Ｐ　Ｈ７，０）　２ｗｇに溶かす。コノ溶液
にＯ，ｌ′ｆニルのクルタールアルデヒド溶液０．１１
ｗｇを加え室温で５時間攪拌する。その後反応混合物を
４８時間４℃で水１ｔで透析する。透析中５回水を交換
する。その後へづチドー蛋白質複合体を含む溶液を凍結
乾燥してヒトα型イシターフエ０シ抗原（以下「抗原Ｉ
ＩＴＪと呼ぶ）２１′Ｉｑを得る。

得られた抗原■ＩはＢＳＡ　Ｉ　Ｅルに対してべづチド
Ａが平均８モル結合したものである。

製造例　４ べづチドの合成製造例＋７（ｈ）で得たべづチドＢの５
．５５　ｍＦ及びＢＳＡの１０．２３　Ｗを０．１６Ｍ
ホウ酸塩緩衝液（０，１３Ａ／　ＮａＣ１，ｐＨ＝９．
０　）　２ｔｎｌに溶かす。この溶液に、ＢＤＢｌ、６
４’ｌ？の同緩衝液３−０ｍ１を加え、４℃にて５時間
攪拌する。その後反応混合物を本、ｌｔで透析し、透析
中水を５回交換する。その後べづチドー蛋白質複合体を
含む　　　０“溶液を凍結乾燥してヒトα型インターフ
エ０シ抗原（以下「抗原■」と呼ぶ）１７．２７１Ｉｖ
を得る。

得られた抗原１ｖはＢＳＡ１ｆルに対してべづチドＢが
平均２０ｔル結合したものである。

〈抗体の製造〉 製造例　ｌ 抗原の製造例１で得た抗原Ｉの６０μＶを１．５−の生
理食塩水に溶解後、之に″）０イシドの補助液１．５ｗ
ｇを加えて調製した懸濁液を、５羽の兎（２，５〜３．
０Ｋｇ　）　Ｋ皮下投与し、２週間毎に６回同量投与す
る。更にその後１カ月毎に３回、最初投与した量と同量
を投与する。最終投与後７日経過してのち各試験動物か
ら採血し、遠心分離して抗血清を夫々採取してヒトα型
イシターフエ０シ抗体（以下［抗体Ｉ−ＶＪと夫々呼ぶ
）を得る。

製造例　２ 上記製造例１において、抗原Ｉを３０μｍ使用する以外
は同様の操作によシヒトα型イシターフ工０シ抗体（抗
体■〜Ｘ）を夫々得る。

製造例　３ 前記抗原の製造例３で得た抗原■を６０μＶ用いる以外
は、上記製造例１と同様の操作によりヒトα型イシター
フエ０シ抗体（抗体η〜ＸＶ）を夫々得る。

製造例　４ 前記抗原の製造例４で得た抗原■を５０μ２用い、２羽
の兎を用いて上記製造例１と同様の操作によりヒトα型
イシターフエ０シ抗体（抗体用及びＸＶｌ［）を夫々得
る。

０標識へづチドの製造 Ｈ−Ｔｙｒ　−５ｉｒ−Ｌｔｕ　−Ｓｔｒ　−Ｔｈｒ　
−Ａｚｎ−Ｌａｗ　−Ｇｉｎ　−ＧＬｕ−５ａｒ−Ｌａ
ｗ−Ａｒｇ−５ａｒ−Ｌｙｚ　−Ｇｌｕ−ＯＨ即ちべづ
チドＢをり０ラミンＴを用いる方法で以下の通り標識化
する。

即ち上記ぺづチド５μＶの０．５モルのリシ酸塩緩衝液
（ＰＨ７，０）２０μｔにＮａ〔Ｉ〕（ｃ’ａｒｒｉｅ
ｒ　ｆｒｅｔ　Ｎ、Ｅ、Ｎ、　）　Ｉ　Ｅり士ユーリー
のの０．５　ｔルリシ酸塩緩衝液を加え、次にクロラミ
シＴ７０〜／ｄの０．５七ルリシ酸塩緩衝液２０μｔを
加える。室温で３０秒間攪拌して６０η／ｍｌのゝ　　
　　メタ重亜硫酸ナトリウム（Ｎα２Ｓ２０５）の０．
５Ｍリシ酸塩緩衝液５０μｔを加えることで反応を終わ
らせる。次いで反応液に１％の冷沃化ナトリウム水溶液
１００μｔを加え、反応混合物をセファデックスＧ−２
５のカラム（１，０Ｘ３０口）にかけ（浴出液０．２５
％ＢＳＡ、１０７１１Ａｆ　　ＥＤＴＡ及び０．０２チ
ＮａＮ３を含む０．０５七ルリシ酸塩緩衝液、ＰＨ７，
４）　、１２５　■で標識されたぺづチドＢを得る。

Ｑ力価の測定　　　　　　　　　　　　−上記で得られ
る抗体の力価を次の通り測定する。

即ち抗体をそれぞれ生理食塩水でｌＯ１＋０１１０、＋
０４、［）”・・・倍に希釈（イニシャル）し、これら
の夫々１００μｔに、Ｔ１２５標識ぺづチド（上記で得
られる標識べづチドを約９５０００ｐｍになるように希
釈したもの）Ｏ，＋ｍｇ及び０．０５七ルリシ酸塩緩衝
液（ＰＨ＝７．４　）［０，２５％ＢＳＡ％　ｒｏｍＭ
ＥＤＴＡ及び０．０２％Ｎａ　Ｎ、を含む）０．２ｍ／
を加え、４℃で２４時間イシ士ユベートし、生成した抗
体と１１２５標識抗原との結合体を、ヂ士ストラシー活
性炭法及び遠心分離法（４℃、３０分間、３０００ｒｐ
ｍ　）により未反応（結合しない）１１２５標識べづチ
ドから分離し、その放射線をカウントし、各希釈濃度に
おける抗体のＴ１２５標識べづチドとの結合率（％）を
測定する。縦軸に抗体の１１２５標識べづチドとの結合
率（％）及び横軸に抗体の希釈倍率（イニシャル濃度）
をとり、各々の濃度において結合率をづＯッ卜する。結
合率が５０％となる抗体の希釈倍率即ち抗体の力価を求
める。その結果を下記第１表に示す。

第　　１　　表 第１表より明らかなように一般式＋１１で表わされるべ
づチドは免疫原性が極めて強く、投与動物のほとんど全
てに有用な抗体を製造することができる。

Ｏ抗体のヒトα型インターフェロン特異性試験供試試料
として各種濃度のヒトβ型イシターフ工０ン（東し株式
会社製）、べづチドの合成製造例１５ｔｈ）で得たべづ
チドＡ即ちヒトα型イシターフエ０シのぺづチド鎖及び
ヒトα型イシターフエ０シ〔林原研究所製、リムホづラ
ストイドイシターフエ０シ：ＮＩＨ，ドー０ス氏より入
手、０イコサイトイシターフエ０シ〕を使用する。また
標準希釈剤として０．２５％Ｂ　Ｓ　Ａ、　　５　ｍＡ
／　ＥＤＴＡ及び０．０２％のＮａＮ３を含む０．０５
ｔルリシ酸塩緩衝液（ｐＨ７，４）を使用する。

各々の試験管に、標準希釈剤５．２ｍｌ、供試試料０．
１ｍ１１抗体の製造例４で得た抗体用のＯ，１ｍ／及び
Ｔ１２５標識ぺづチド（上記で得られる標識べづチドを
約２８００Ｃｐｍになるように希釈したもの）Ｑ、１ｍ
ｌを入れ、４℃で７２時間イシ士ユベートした後、ノー
マルづ夕血清（ｎｏｒｍａｌ　ｐｏｒｃｉｎｇ　ｓｅｒ
ｕｍ　）を０．１ｍｌ加え、次いでヂ＋ストラシで被膜
した活性成の懸濁液０．５ｍｌを加え、４℃で３０分間
放置し、次に４℃、３００Ｏｒｐｍの条件下に３０分間
遠心分離を行ない、抗体とＩ　　標識ぺづチドとの結合
体及び未反応（結合しない）Ｉ　標識ぺづチドを分離し
、その放射線をカラシトし、用いた抗体の力価に相当す
る結合率ＣＢＯ）を１００％として、供試試料の濃度及
び希釈率における抗体と１１２５標識べづチドとの結合
体（Ｂ）の百分率を求める。得られる結果を第１図に示
す。

図中、縦軸は結合チ（Ｂ／Ｂｏ　ｘ　Ｉ　ＯＯ）を、横
軸は供試試料の各濃度を示す。また該図において曲線（
イ）はぺづチドＡを、（０）はリム小づラストイドイン
ターフエ０シを、（ハ）はＤイ〕サイトイシターフより
シを、又（ニ）は、ヒトβ型インターフ工０シを夫々示
す。

第１図よシ抗体■は、ヒトα型インターフ工０ンに対す
る反応性とヒトβ型インターフよりシに対する反応性に
おいて明確に区別される曲線を示し、このことよりヒト
β型イシターフエ０シとは１．ＯＸ　１０６１Ｕ／ｍｌ
まで交叉しない特異性の高い抗体でおることがわかる。

本発明により得られる他の抗体についても同一試験を行
なった結果いづれも略々同様の特異性を有することが確
認された。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明により得られる抗体の特異性を示すグ
ラフである。 （以　上）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ■　一般式 ％式％ 〔式中Ｒは水素原子又はＨ−Ｔｙｒ−基を示す〕で表わ
   されるしトリムポプラストイドイシターフエ０ンのＣ末
   端べづチド及びその銹導体の１種と担体との複合体から
   なるヒトα型インターフエ０ン抗原を哺乳動物体に投与
   し、生成する抗体を採取することを特徴とする抗体の製
   造法。