JPS5835122A - 抗原の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はしトリム本プ５ストイドインターフエ０ン抗原
の製造方法に関する０ 本明細書において、アミノ酸、べづ予ド、保護基、活性
基、その他に関し略号で表示する場合ＩＵＰＡＣ％ＩＵ
Ｂの規定或いは当該分野における慣・用記号に従うもの
とし、その例を次に挙げる。またアミノ酸などに関し光
学異性体がらシうる場合は、特に明示しなければ１体を
示すものとする。

Ｌ＃箇：０イシシ Ｉｈ：イソ０イシシ ＡＬａ　ニア５ニン ＧＪｓ　：タルタ！シ Ｔ五ｒ：トレオニン Ｈｉｓ：ヒスチ、；シ ５ｅｒ　：セリン ＧＪ７　：クリシン Ａｓｓ　：アスバ５４シ ｌａｐ　：アスパラｆシ酸 と＃ニブ０リン ２　：カルボベシリ中シ基 Ｓ薯　：コへり酸イミド基 Ｔｏｅ　：　ｐ　−トルニジスル本ニル基Ｂｅｅ　：第
３級ブト十ジカルボニル基インターフェロン社、生体の
細胞がウィルス感染を受叶た時に産生する抗ウイルス性
の糖蛋白質乃至は蛋白質であり、その利用によってウィ
ルス性疾患Ｏ予肪乃至治療が可能であるとされ、近年注
目を集めつつある。３Ｊ在解明されているヒトのインタ
ーフェロンはｇＩｌインターフェ０シ（Ｌｅｓｅｅｅｙ
ｔｍａ　　１ｍｔａｒｆａｒｏ＊％　Ｌｙ罵ｐｈｏ　　
ｈＺａｚｔｍｉｄ１１’＊ｔａｒｆａｒ−％）、／ｍイ
シターフエＯＸｉ　（ＦｉｈｒｏｂｌａｚｔＩｎｔｅｒ
ｆｅｒｅｓ　）及びｒ型イシターフエ０　：ｉ　（Ｉｗ
ｓｍ藤ａＩｎｔｅｒｆｅｒｅｓ　）　Ｋ分類されるが、
之等のインターフェロンを単一な糖蛋白質乃至蛋白質に
まで精製する技術は未だ開発されていない。

本発明は、ヒトのｄ型インターフエ０シ特にリム本づラ
ストイドイシターフエ０ンを単離精製する技術を提供す
るための新しい抗体、該抗体製造のためＯ抗原及び該抗
原の製造に適し九へブック並びにこれらを収得する技術
を提供することを目的とするものである。

本発明者らは、上記目的よル鋭意研究を重ねた結果、本
発明者らが新たに合成した特定のヒトリム本づ５ストイ
ドイシターフエ０シ（１）Ｎ−末端べづチド及びその誘
導体を利用する時には、新規なヒトリム本プラストイド
イシターフエ０ン抗原が製造でき、諌抗ＩＩＯ利用によ
ればしトリム本プラストイドイシターフエ０ンに対して
特異性を有する新＊＆抗体が製造でき、蚊抗体をアフイ
ニテイーク０マドｊ５フィーに利用する仁とによって、
目的とするヒトミｌｌインターフェロンの精製が可能と
なることを見い出しえ。本発明は上記の新しい知見に基
づいて完成され丸ものであシ、本発明によれば、容易に
且つ大量に製造できる合成べづ予ドから簡便な操作でヒ
トリム本づ５ストイドイシターフエ０シＯ精製に有用な
、特異反応性を示す抗体が工業的に有利ＫＭ造できるも
のであ）、かくしてヒトリム本プラストイドイシターフ
エ０シＯ精製技術を確立するものである。

本発明に係る新しい合成べ″′ｊチドは、下記一般式（
１）で表わされる。

Ｒ−Ｌｇｍ−ＩＬｇ　−Ｌ−謳−Ｌ＃暮−ＡＬｇ−ＧＬ
ｈ−＃　　　　　　　（１）〔式中Ｒは水素原子、Ｈ−
ＴＡｒ−Ｈｉｐ−Ｅａｒ　−Ｌａｇ　−ＧＺｙ−Ａｓｓ
−Ａｒｃ　−Ａｒｇ−ＡＬｇ基、Ｈ−５ａｒ−Ａｓｐ　
−Ｌａｇ　−Ｐｒｏ−ＧＬｓ−Ｔｈｒ−Ｈｚｚ　−Ｓａ
ｙ　−ＺｇＫ−ＧＺｙ　−Ａｓａ−Ａｒｃ　−Ａｒｙ−
ＡＬｇ基、又はＨ−Ｔｙｒ−５ａｙ−Ａｓｐ−Ｌａｇ　
−Ｐｒｏ　−ＧＬｈ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−５ｕｒ　−Ｌａ
ｙ−ＧＬｙ−ＡｚＩ％−Ａｒｇ−Ａｒｃ　−ＡＬ＠基を
示す。〕 のＮ末端べづチド鎖に相当するべづチド又はそ０鰐導体
である。之等はペプチド合成に通常用いられる方法、具
体的には、「ザ　ペづ予ド（ＴｈｅＰ＃ｐｔｉｄａｚ　
）　Ｊ第１巻（１９６６年）　（５ｃｈｒ′ｏｄｇｒｇ
ｓｄ　Ｌｓムｈ−著、　Ａｃａｄｔｖｍｉｃ　Ｐｒｏｐ
ｓ　、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ　。

Ｕ、Ｓ、Ａ、〕　　あるいは「ベプ予ド合成」〔東屋ら
著。

九養株式金社（１９７５都）〕に記載される如き方法に
従い、丸とえにアジド法、り０５イド法、酸無水物法、
混酸無水物法、ｎｃｃ法、活性エステル法（Ｐ−ニド０
フエニルエステル法、Ｎ−ヒト０中シコ八り駿イニドエ
ステル法、シアノメチルエステル法等）、ウッドワード
試薬Ｉを用いる方法、カルボシイ！：タリール法、酸化
還元法、ＤＣＣ／アディティブ（ＨＯＮＢ％ＨＯＢｔ　
、　Ｈ２Ｓｘ　）法などによ）製造できる。上記方法〈
おいては、固相合成法及び液相合成法のいずれをも適用
できるが、液相合成法が好ましい。

通常一般式（１）のペプチドは、上記した一般のポリペ
プチドの合成法に従い、例えば末端アミノ酸に順次１個
づつアミノ酸を縮合させる所謂ステップワイズ法によっ
て、又は数個のフ５クメントに分けてカラプリシフさせ
ていく方法によって製造される。よ）詳細には上記ペプ
チドは、そＯ結合Ｏ任意の位置で２分される２種Ｏフ５
クメシトの一方に相当すゐ反応性カルボ中シル基を有す
る原料と、他方Ｏフ５ｊメントに和尚する反応性アニノ
基を有する原料をぺづチド合成の常套手段で縮合させ、
生成する縮合物が保護基を有する場合、そＯ保護基を常
套手段で脱離させることにより製造し得る。尚一般式（
１）のべづナトを製造する反応工程でアスバ５４ン酸を
用いる場合、これは通常保護しておくのが望ましい場合
が多く、最終工程では、通常べづチドの構成アミノ酸残
基の少なくとも一つが保護された保護ぺづチドからすべ
ての保護基を脱離する。

また上記一般式用のペプチドの合成反応工程では、反応
Ｋｌｌ与すべきでない官能基は、通常の保護基によシ保
護され、反応終了後膣保護基は脱離される。更に反応に
関与する官能基は通常活性化される。之等各反応方法は
公知であり、それに用いられる試薬等も公知のものから
適宜選択し得る。

ア三ノ基０保護基としては、例えばカルボペシソ中シ、
ｔａｒｔ−づチルオ中ジカルボニル、ｔａｒｔ　−７＝
ルオ中ジカルボニル、イソ寧ルニルオ＋ジカルボニル、
Ｐ−メト中シベンジルオ中ジカルボニル、２−り０ルー
ベニＪジルオ十ジカルボニル、アタマシチルオ中ジカル
ボニル、トリフルオＯｙｔチル、フタリル、ホルミル、
’−：）Ｏフェニルスルフェニル、ジフェニル本スフイ
ノチオイルなどが挙げられる。カル寧士シル基の保護基
としては、例えばアル中ルエステル（例メチル、エチル
、づ０ビル、づナル、ｔａｒｔ−ブチルなどのエステル
基）、ベンジルエステル、Ｐ−二トロベンジルエステル
、Ｐ−メト牛ジベンジルエステル、Ｐ−りＯルベンジル
エステル、ベンズしドリルエステル、カルボベシリ中シ
ヒド５Ｍ５ド、ｔａｒｔ−づチルオ中ジカルボニルヒド
ラ！；ド、トリナルヒドラジド等が挙げられる。

アルイニシのクアニジノ基保護基としては、例えばニド
０、トシル、Ｐ−メト十シベシゼシスルホニル、カルボ
ベンリ牛シ、イソボルニルオ中ジカルボニル、アタマシ
ナルオ中ジカルボニル等が挙げられる。また、そのクア
ニジノ基は適轟な酸例えばベシゼシスルホン酸、トルニ
ジスル本シ酸、塩酸、硫酸などの塩の形で保護してもよ
い。

スレオニジの水酸基は、例えばエステル化まえはエーテ
ル化によって保護することができるが必ずしも保護する
必要はない。このエステル化に適する基としては例えｄ
アをナル等の低級アルカノイル、ベシリイル等のアロイ
ル、ペンリイルオ士ジカルボニル、工ナルオ牛ジカルボ
ニル等Ｏ炭酸から＊＊−ｇれる基等が挙げられる。また
エーテル化に適する基としては、例えばベンジル、テト
ラしドロど５ニル、ｔｇｒｔ−ブチル等である。

カルボ中シル基の活性化されたものとしては、例えば対
応する酸り０ライド、酸無水物又は混合酸無水物、アジ
ド、活性エステル（メチルアルクール、エチルアルコー
ル、ベンジルアルコール、ベンタフ００フエノール、Ｐ
−二ト０フェノール、Ｎ−ヒト０十シサクシンイエド、
Ｎ−しドロ中ジベンズトリアリール、Ｎ−ヒト０＋シー
５−ノルポルネジ−２，３−ジカルボ士ジイミド等との
エステル）等が挙げられる。尚ぺづチド結合形成反応は
、縮合剤例えば全シフ０へ＋ジルカルボシイニド、カル
ボシイ！タリール等のカルボジイミド試薬やテトラエチ
゛−ルビＯホスフィト等の存在下に実施し得る場合もあ
る。

上記一般式１１で表わされるぺづチドは、Ｒで示される
基０＊ｍに応じて、より具体的ＫＦｉ以下に示すＣＩ）
〜（財）の方法に従い製造される。

ＣＩ）　　Ｒが水素原子を示す場合 ノー７Ｚａ−Ｅ　　ｔり ↓　Ｈ−ＧｔルーＯＲ＋３１ Ａ−ＡＬａ−ＧＬｎ−ＯＨ（４） ↓ Ｈ−ＡＬａ−ＧＬ霧−ＯＨ（ｉｌ ↓　Ａ−Ｌｍ塾−Ｂ（６） Ａ−Ｌａｈ−Ａｌａ−Ｇｌｎ　−ＯＨ（？１Ｈ−Ｌｇｍ
−ＡＬｔｘ−ＧＬｓ−ＯＮ　　（８１↓　Ａ−Ｌ−μ−
Ｂ　（＠） ｊ−Ｌｍｓ−Ｌａｇ−ＡＺａ−ＧＬｓ−ＯＨＩｌｌ↓ Ｈ−Ｌａｗ−Ｌａｇ−ｊｕｇ−ＧＺｓ−ＯＮ　　（Ｍ）
４　　Ａ−ＩＬｇ　−Ｂ　　（１１） Δ−ＩＬｇ−Ｌ−瓢−Ｌｍｓ−ＡＬａ−ＧＬ＋％−ＯＨ
拳肴↓ Ｈ−ＩＬｇ−Ｌａｕ−Ｌｇ塾−ＡＬａ−ＧＬｓ−ＯＨ輪
↓　Ａ−Ｌａｇ−Ｂ　　（＠１ ｊ−Ｌａｇ−ｆｉｇ−Ｌａｗ−Ｌａｗ−ＡＬａ−ＧＬｒ
イ近Ｏ４↓ Ｈ−Ｌａｗ、−ＩＺｇ　−４ｓａ−Ｌａｇ−，４２１！
−ＧＬｎ　−ＯＨＱ＠（Ｉｆ）　　　ＲがＨ−Ｔ五ｙ−
Ｈｉｐ−５ａｙ−Ｌｇｕ−ＧＬｙ−ＡｓＷ−Ａｒｇ−Ａ
ｒｙ−ＡＬａ基を示す場合 Ａ−Ａｒｇ−Ｂ　拳鴫 ↓　Ｈ−ＡＬａ−Ｂ輌 畠 ｊ−Ａｒｃ−ＡＬａ−Ｂ　　１１ Ｈ−Ａｒｇ−ＡＬａ−Ｂ　　ｌ１ｌ Ｃ ↓　　Ａ−Ａ、鳩−Ｂ　四 ↓ Ａ−Ａｚｖ＆−Ａｒｇ−Ａｒｃ−ｊＺａ−Ｅ　　＠４１
↓ ｊｆ−Ａｓｓ−Ａｒｙ−Ａｒｇ−ＡＬａ−Ｌｇｕ−ＩＬ
ｍ−Ｌａｇ−Ｌａｇ−ＡＬｇ−ＧＺｓ−ＯＨ１ａｌ ｊ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−５ｅｔ−ＬｅＫ−ＧＬｙ−ＡｓＩ
＆−Ａｒｇ　−一〇Ｈ＠ ↓ ＯＨｍ 但し−　は以下の工程による。

Ａ−Ｌａｇ−Ｂ　（ｓ） ↓　Ｈ−ＧＬｙ−Ｂ四 Ａ−Ｌａｗ、−ＧＬｙ−Ｂ　９４ ↓ Ｈ−Ｌａｗ−ＧＬｙ　−Ｂ　Ｈ ↓　　Ａ−５ａｙ−Ｂｇ Ａ−５ａｙ−Ｌａｍ−ＧＬｙ−Ｂ　ｆｉｇ↓ ｊｒ−５ａｙ−Ｌａｗ、−ＧＺｙ−Ｂ　Ｈ↓　　ｊ−Ｔ
ｈｙ−Ｈｓｚ　−Ｂ　＠ Ａ　二Ｔｈｙ−Ｈｉｓ−５ｅｔ−Ｌｅｇ−ＧＬｙ−Ｂ　
　（Ｉｌ”ａＩＤ　　λがＨ−５ａｙ−Ａｓｐ　−Ｌａ
ｗ　−Ｐｒｏ　−Ｇｉｎ　−Ｔｈｒ　−Ｈｌｔ−Ｅａｒ
　−１ａｙ−ＧＬｙ−Ａｓｓ−Ａｒｇ　−Ａｒｇ−ＡＬ
ａ基を示す場合 Ａ−Ｐｒｅ−Ｂ（ロ） ↓　Ｈ−ＧＬｓ−Ｂｌｌ Ａ−Ｐｒｏ　−ＧＬｈ−Ｂ　ＩＩＩ ↓ Ｈ−Ｐｒｏ　−ＧＬｎ−Ｂ　ｆ４１ ↓　　Ａ−Ｌｅ茜−Ｂ（６） Ａ−Ｌｅｇ−Ｐｒｏ−Ｇｊｓ　−Ｂ　ＩＩ）↓ Ｈ−Ｌａｇ−Ｐｒｏ−Ｇｈｓ−Ｂ　嫡 ↓　Ａ−Ａｓｐ−Ｂ＠３ Ａ−Ａｓｐ−Ｌａｇ−Ｐｒｏ　−ＧＬｖｈ−Ｂ　＠４↓ Ａ−Ａｓｐ−Ｌａｗ−ＰｒＯ−（Ｊｓ−Ｂ　＠↓ Ｍ−Ａｓｐ−Ｌａｗ−Ｐｒｏ　−ＧＬｓ−Ｂ　＠↓　　
Ａ−５ａｙ−Ｂ＠ Ａ−５ａｙ−Ａｓｐ−Ｌａｗ−Ｐｒｏ−ＧＩＦ＆−Ｂ−
ηｊｒ−７ｈｒ−Ｈｉｐ−５ａｙ−Ｌａｗ−ＧＬｙ−Ａ
ｓＩ％↓−Ａｒｃ　−Ａｒｇ−ＡＬａ−Ｌａｗ−ＩＬａ
−Ｌａｇ　−り一襲−Ａｋ−ＯＬ島−ＯＩ　＠ −Ｉｌａ−Ｌ化−Ａ＃ＩＬ　−Ａｉｍ−ＧＺｓ−ＱＺｒ
　　＠↓ Ｈ−５ａｙ−Ａｓｐ−Ｌａｗ−Ｐｒｙ−ＧＬｈ−Ｔｋｒ
−Ｈａｐ　−Ｇ’Ｖ）ＮがＨ−Ｔｒｙ−５ａｙ−Ａｓｐ
−Ｌａｉ＆−Ｐｒｔｓ−ＧＺａ−Ｔｋｒ−Ｈｉｐ−５ａ
ｙ−Ｌａｇ−ＧＬｙ−Ａｓｓ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＡＬ＠
基Ｏ基台 場合５ａｙ　−Ａｓｐ−ＬａＫ−Ｐｒｅ　−Ｇａｓ−Ｂ
　−↓ Ｈ−５ａｙ　−ｌａｐ−Ｌｍ瓢−Ｐｒｏ−ＧＺａ−Ｂ　
５４↓　　　Ａ−Ｔ９ｒ−Ｂ　　＄９ Ａ−Ｔｙｒ−５ａｙ−Ａｓｐ−Ｌａｇ−Ｐｒｏ　−ＧＬ
ｈ−Ｂ　ｗａｊｒ−Ｔｋｒ−Ｈｉｓ−５ａｒ−Ｌａｓｈ
−ＧＬｙ−Ａｓｓ↓　−Ａｒｇ−Ａｒｃ　−ｊＬａ−Ｌ
ａｗ−１１ａ−ＬａＩ＆−Ｌａｓｂ−ＡＬａ−ＧＬｙｂ
−ＯＨ＠ Ａ−Ｔｙｒ−Ｅａｒ　−Ａｓｐ−Ｌａｗ−Ｐｒｃｒ−Ｇ
Ｚｓ−Ｔ五ｒ−−Ｌａｗ−１１ａ−Ｌｅａ−Ｌａｗ−Ａ
Ｌａ−Ｇｉｎ−ＯＨ６４↓ −Ｌｍ番−ＩＬａ−ＬｍμｍＬ−箇−，４Ｚｇ−ＧＬ路
−ＯＨｆ４〔上記方法ＣＩ）〜（５）において、Ａはア
ミノ基の保護基、Ｂは水酸基又はカルボ中シル基の活性
基、Ｃはアル甲二ンのクアニジノ基保膜基及びＤはアス
バ５ｆシ酸の保護基をそれぞれ示す。〕上記においてＡ
としては好ましくはＢｏｃｌＺｚＰ−メト中シベシジル
オ中ジカルボニル基等を、Ｂに示すカルボ中シル基の活
性基としては好ましくはＮ−七ドロ中シサクシシイエド
等の活性エステル、イソプチルオ＋ジカルボニル等の混
合酸無水物残基、アジド等を、Ｃとしては好ましくはニ
ド０、トシル等を、またＤとしては好ましくはベンジル
オ中シ基勢を例示できる。

上記方法（Ｉ）　においてアミノ酸（りとアミ）酸（３
）とＯ反応は、Ｓ媒Ｏ存在下に行なうことができる。

溶媒としては、べづ予ド縮合反応に使用し得る仁とが知
られている缶型のもの例えば無水または含水Ｏジメチル
本ルムアミド、ジメチルスル車中シト、ピリジン、り０
０本ルム、ジオ牛サン、ジグ０ルメタシ、テトラヒト０
フ５シ、酢駿工ナル、Ｎ−メチルビ０リドシ、へ牛すメ
チルリシ酸トリアニド或いはこれらの混合溶媒等を用い
得る。アミノ酸ｍとアミノ酸（２）との使用割合として
はＩ！ＩｆＫ限定されず広い範囲内で適宜選択すること
ができるが、通常前者に対して後者を等量〜５倍量、好
ましくは等量〜１．５倍量使用するのがよい。反応温度
はペプチド結合形成反応に使用され得ることが知られて
いる範囲、通常約−４０〜約６０℃、好ましくは約−２
０〜約４０℃０１１１ＩＩから適宜選択される。反応時
間は一般に数分〜３０時間程度である。

方法（Ｉ）にシけるべづチド（６）とアミノ酸（ｓ）と
の反応、ペプチド（８）とアミノ酸（６）との反応、べ
づチドーとアミ／ＩＩ（ｍｌ）との反応、及びべづチド
輌とアミノ酸（１１との反応は上記ア！）酸（ｔ）とア
ミノ酸（３）との反応と同様にして行なうことができる
。ま九方法（ｎ）におけるアミノ酸轡とアミノ酸・ηと
の反応、ぺづチドーとアミノ酸輌との反応、べづチド彰
υとアミノ酸（財）との反応、ペプチド（財）とペプチ
ド９瞬との反応、ぺづラド−とぺづラド−との反応、ア
ミノ酸（＠）とアミノ酸四との反応、べづチド（ロ）と
アミノ酸−との反応及びべづチドーとべづ予ド■とＯ反
応も同様にして実施できる。更に方法（２）Ｋシけるア
ミノ酸−とアミノ酸−との反応、べづチドーとアミノ酸
（＠）との反応、べづラド−とアミノ酸−との反応、ペ
プチドｌｌｌ５２７Σノ駿−との反応及びべづチドーと
ペプチド−との反応、並びに方法（ト）におけるぺづチ
ドーとアミ／ＩＩ！ＩＩとの反応及びべづチドーとペプ
チド−との反応も亦上記と同様にして行ない得る。

上記各反応によシ得られるべづチド（４）、（７）、（
９）、争躊、拳荀、輌、−１−１（財）、−１−１−１
←乃、鵠、（ロ）、−及び−の有する保護基Ａの離脱反
応は、常法によ）行なわれる。該方法としては、例えば
還元的方法（例パラジウム、バラ、；ラム黒等の触媒を
用いる水素添加、液体アシモニア中金属ナつリウムによ
る還元）、アシドリシス（例トリフル才０酢酸、弗化水
素、メタンスルホン酸、臭化水素酸等の強酸によるアシ
ドリシス）等が挙げられる。

上記触媒を用いる水素添加は、例えば水素圧１気圧、０
〜４０℃にて行なうことができる。触媒の使用量は通常
１００ｓＦ−１１＠度でよく、一般に１〜４８時間租度
で反応は終了する。また上記アシドリシスは無溶媒下、
通常Ｏ〜３０℃程度、好ましくは０〜２０℃にて行表わ
れ、一般に１５分〜１時間程度で反応は終了する。酸の
使用量としては原料化合物に対し通常５〜１０倍量程度
とするのがよい。また液体アシモニア中金属ナつリウム
による還元にシいて、金属ナトリウムは、反応溶液がパ
ーマネジドブルーに３０秒〜１０分間程度呈色している
ような量で用いられる。この還元は通常−４０〜−７０
℃程度にて行なわれる。

を九ペプチドｃｒｓｏ保膜基（Ｃ）及びべづチド■の保
護基（Ｊ））は、上記還元的方法によって、同様に脱保
護することができる。

上記方法（Ｉ）乃至（ＩＶ）Ｋ利用されるア！ノ酸（２
）、（６）、ｏＩ）、Ｈｌ（２）、−１−１−及びＩＦ
ｉ公知の市販品でよく、ｔえペプチド拳時、−１−１−
１−１（ロ）、及び−は会知Ｏ布歳品又は混合酸無水物
法、アジド化法等によ）得られるもＯが利用できる。該
混合酸無水物法唸、適当な溶媒中塩基性化合物の存在下
、アル中ルへ〇カルボン酸を用いて行なわれる。使用さ
れるアル牛ルハ０カルボン酸としては例えばり００蟻酸
メチル、プＯｔ蟻酸メチル、りＯＯ蟻酸エチル、づ０で
蟻酸エチル、り００蟻酸イソブチル等が挙げられる。ま
た塩基性化合物としては例えばトリエチルアΣシ、トリ
メチルアΣン、ピリジン、ジメチルアニリン、Ｎ−メチ
ルでル本リン、１．５−ジアザピシクＯ（４，３，０）
ノネ：、ｔ　−５（ＤＢＮ　）、１．５−ジアザピシク
０　（５，４，０）ウシヅセシー５ＣＤＢＩＩ）、１．
４−、；　７ザビシク。

（２，２，２）オ９’）ｖ　（ＤＡＢＣＯ）等の有機塩
基、脚酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素カリウム
、炭酸水素ナトリウム等の無機塩基が挙げられる。用い
られる溶媒としては混合酸無水物法に慣用の各種溶媒、
具体的には塩化メチレジ、りｎ。

ホルム、ジグ００エタン等のハ０ゲシ化炭化水素類、ペ
シゼシ、トルニジ、＋シレシ等の芳香族炭化水素類、ジ
エチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジメト中シエタ
シ等のエーテル類、酢酸メチル、酢酸エチル等のエステ
ル類、Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスル車
中シト、へ中サメナルリシ酸トリア！ド等Ｏ非づ０トシ
性極性溶媒などが挙けられる。皺反応は一２０〜１００
℃好壇しくは一２０〜５０’Ｃにおいて行なわれ、反応
時閣紘一般に５分〜ｌＯ時間好ましくは５分〜２時間で
Ｔｏる。

またアジド化法は、まず活性化され九カルボ＋シル基、
例えばメチルアルコール、エチルアルコール、ベンジル
アルコール等のアルコールで活性化され九カルボ＋シル
基にヒトうジシ水和物を適当な溶媒中にて反応させるこ
とにより行なわれる。

用いられる溶媒としては例えばジオ牛サン、ジメラル本
ルムアミド、ジメチルスル車中シト又はこれらＯ混合溶
媒等を挙げることができる。しド５ジシ水和物の使用量
は、活性化されたカルボ中シル基に対して通常５〜２０
倍モル量、好ましぐは５〜ｌＯ倍モル量とするのがよい
。該反応は通常５０℃以下、好ましくは一２０〜３０℃
にて行なわれる。斯くして末端アミノ酸０力ルボ士シル
基部分がしドラジンで置換された化合物（しドラジン誘
導体）を製造し得る。末端アΣノ酸のカルボ士シル基部
分がアジドで置換された化合物は、酸の存在下適当な溶
媒中上記で得られるしドラごシ誇導体と亜硝酸化合物を
反応させることにより製造される。酸としては通常塩酸
が用いられる。溶媒としては例えばジオ中サン、ジメチ
ル本ルムア三ド、ジメチルスル本生シト又はこれらの混
合溶媒等を使用できる。また亜硝酸化合物としては例え
ば亜硝酸ナトリウム、亜硝酸イソアミル、塩化ニドＯシ
ル等を使用することができる。斯かる亜硝酸化合物はし
ドラジシ誘導体に対して通常等でルー２倍℃ル量、好ま
しくは等でル〜１．５倍モル量用いられる。該反応は通
常−２０〜０℃、好ましくは−２０−−ｌＯ℃にて行な
われ、一般に５〜ｌＯ分程度で反応社終了する。

上記のようにして製造された一般式＋１のべづチドは反
応混合物からべづチドの分離手段例えば抽出、分配、カ
ラムクロマドクラフィー郷によシ単離精製される。

かくして前記一般式（ｌで表わされる合成べづ予ド即ち
しトリシホづ５ストイドインターフエロンＯＮ末端べづ
チド及びその誘導体を得る。

かくして得られる合成べづチドは、これにＩ　％Ｉ　　
等の放射性ヨードを導入することによシ、５ジオイム０
７）ｔイ法（ＲＩＡ法）において用いられる標識抗原の
製造用原料である標識べづチドとして利用できる。上記
放射性ヨードの導入は、通常Ｏヨード化法、例えばりＯ
う三シＴを用いる酸化的ヨード化法（ｆ、Ｍ、　Ｈｕｎ
ｔｅｒ　ａｎｄＦ、Ｃ，Ｇｒｅｅｎｗｏｏｄ　；　Ｎａ
ｔｕｒｅ　、　１９４．　？４９５（１９６２）、Ｂｉ
ｏｃｈａｗｇ、　Ｊ、　８９　、　Ｐ　１１４　（１９
６３）参照〕により行なわれる。例えば上記ヨード化法
は、適当な溶媒例えば０．２Ｍリシ酸緩衝液ＣＰＨ＝７
．４＞等の溶媒中、り０５ニンＴの存在下室温付近にて
ｌＯ〜３０秒程度で行なわれる。用いられるべづチド、
放射性ヨード及びり０う！ンＴの使用割合としては、例
えばチＯシシに放射性ヨードを１個導入する場合には、
ペプチド中に含まれるチロ５３分ｌナナノモルに対して
放射性ヨードを１ミリ＋ユ一リー程度、り０５ミシ７ｔ
−１０〜１００ナノ℃ル程度用いるのがよく、またチ０
シシに放射性ヨードを２個導入する場合には、ぺづラド
中に含まれる９０シシ分子１ナノ℃ルに対して放射性ヨ
ードを２ニリ中ユ一リー程度、り０５！ンＴを１０〜１
００ナノ℃ル狽度用いるのがよい。斯くして製造される
放射性ヨードにより標識化され九ペプチドは通常の分一
手段例えば抽出、分配、力５ムク０マトク５フィー、透
析等により単離精製される。

このようにして得られるべづ予ドは必要ならば凍結乾燥
させて保存しておくこともできる。

を九上記一般式（１）で表わされる合成ぺづ予ド社、ヒ
トリム本プ５ストイドインターフエ０シ抗原の製造用ハ
プテンとして利用できる。

以下上記ヒトリム本プ５ストイドインターフ工０シ抗原
の製造方法につき詳述する。

しトリム本プラストイドイシターフエ０ン抗原は、上記
一般式＋１＋で表わされる合成ぺづチドの少なくとも１
１ｍをハづテンとし、これを八づテン−担体結合試薬の
存在下に担体と反応させることによ〕製造される。

上記方法においてへブテンに結合される担体としては、
通常抗原の作成に当シ慣用される高分子の天然若しくは
合成蛋白質を広く使用できる。誼担体としては、例えば
馬血清アルづテン、牛血清アルづテン、ウサｆ血清アル
プミシ、人血清アルブミン、ヒツジ血清アルプ三ン等の
動物Ｏ血清アルプミシ類、馬血清り０プリン、牛血清Ｊ
ｊＯプリシ、ウサイ血清グロブリン、人血清り０プリン
、ヒツジ血清ｊＯプリン等の動物の血清り０プリン類、
馬チ０り０プリシ、牛チ０り０づリシ、ウサｆチ０り０
プリシ、人チ０り０プリシ、ヒツジチ０り０プリシ等の
動物のチ０りＯプリン類、馬へ′ｅり０と２７．牛へ℃
クロプリン、ウサイヘｔり０づリコ、人へ℃り０プリシ
、ヒツジへｒ−り０づリシ等の動物のへｔり０プリシ類
、動物のヘモシアニジ類、回虫よシ抽出された蛋白質（
アスカ−リス抽出物、ｑ＃開昭５６−１６４１４号参照
）、ポリリジン、ポリクルタΣシ酸、リジシークルタミ
ン酸共重合体、リジン又はオルニチシを含む共重合体等
を挙げることができる。

アスカ−リス抽出物につき以下に詳述する。

アスカ−リス抽出法は、ブタ回虫（Ａｚｃａｒｉｚ＃菖
１賜）の粉砕物より通常の蛋白抽出法に従い抽出される
。抽出溶媒としては例えば水、生理食塩水、５０−メタ
ノールま九はエタノール水溶液、中性付近の緩衝液等の
公知の各種蛋白抽出溶媒を使用でき、特に生理食塩水を
用いるのが好ましい。上記抽出物は、よシ具体的に紘、
例えば次の如くして製造される。即ちブタ回虫の内容物
を除去し、生理食塩水で洗浄後、抽出を容易とするため
好ましくは細断し、該細断物を例えば生理食塩水等の蛋
白抽出溶媒中に添加し、本モジネートしながら抽出する
。この抽出は通常低温下において行なわれ、好ましくは
約２〜１０℃で有利に行なわれる。

かくして得られる抽出液を次いで遠心分離し、上清を採
堆し透析侵透析液を凍結乾燥するか又は更に上記透析液
を再度遠心分離し、上清を採取し、浮遊物を除去後凍結
乾燥することによって、目的とするアスカ−リス抽出物
が製造される。これは更に必ｌＩＫ応じて通常の蛋白精
製手段例えば透析法、ゲルー過法、吸着法、り０マトク
５フ法等によ〉精製後、本発明に利用することができる
。また上記アスカ−リス抽出物は、例えばＪ、１ｍｗｈ
ｕ算、　。

１１１．２６０〜２６８　（１９７３’）、Ｊ、　１ｗ
ａ＞關３．。

１２２．５０２−４０８　（１９７９）、ｊ、Ｉｍ＠＊
ｖｈ、、　９８゜８９５〜９００（１９６７）及びＡｗ
ｎ、　Ｊ、　Ｐｈｙｚ＊ａＬ、。

１９９．５７５〜５７８　（１９６０）に記載されたも
のｔ九はこれらを更に精製したものであってもよい。

ハプテン−担体結合試薬としては通常抗原の作成に蟲）
慣用されているものを広く使用でき、具体的Ｋａ７！：
ノ基とア！ノ基とを架橋結合させる、例えばタリオ中す
−ル、マロンジアルデヒド、タルタールアルヂしド、ス
クシンアルヂしド、アジボアルデヒド等の脂肪族ジアル
デヒド類、チオール基とチオール基とを架橋結合させる
、例えばｘ、ｉｔ’−ｅ−フエニレシジマレイミド、ｘ
、ｙ’−諺一フェニレンごマレイミド等のシマレイニド
化６６、アミノ基とチオール基とを架橋結合させる、例
えばメタマレイ：ドベシリイルーＮ−七ド０十シスクシ
シイニドエステル、４−（マレイエトメチル）−シフＯ
へ十サンー１−カルボ中シルーＮ′−ヒドロ＋シスクシ
ジイミドエステル等のマレイミドカルボ＋シル−Ｎ−し
ドロ＋シスクシシイ三ドエステル化合物、アミノ基とカ
ルボ中シル基とをアニド結合させる通常のペプチド結合
形成反応に用いられる試薬、例えばＮ、Ｎ−ジシク０へ
士ジルカルボジイミド、Ｎ−エチル−ｒ−ジメ予ルアミ
ノカルボシイごド、１−エチル−３−シイツブａピルア
！ノカルボジイミド、ｌ−シフ０へ＋シルー３−（２−
’！！ル本リユリニル−４−エチルルボジイミド等のカ
ルボごイミド類等の脱水縮合剤を挙げることかできるが
、さらにはＰ−ジアジニウムフェニル酢酸等のシアリニ
ウムアリールカルポジ酸類と通常Ｏペプチド結合形成反
応試薬、例えば上記脱水縮合剤とを組み合わせたものも
使用可能である。

本発明抗原の製造反応は、例えば水溶液もしくはｐＨ７
〜１００通常の緩衡液中好ましくはｐＨ８〜９０１１に
漬液中で、０〜４０℃好ましくは室温付近で行なわれる
。該反応は通常約１〜２４時間、好ましくは５〜５時間
で完結する。上記において用いられる代表的緩衝液とし
ては、次のようなものを例示できる。

０．２　Ｎ水酸化ナトリウム−０，２Ｍホウ酸−０，２
Ｍ塩化カリウム緩衝液、 ０．２ｔｊｉ［ｔ　）’Ｊ’）ム−０，２ｊ／１１）酸
−０．２Ｍ塩化カリウム緩衝液、 ０．０５Ｍ四本つ酸ナトリウムー０．２Ｍホウ酸−０、
０５Ｍ塩化ナトリウム緩衝液、 ０、ＩＪ／リン酸二水素カリウム−０，０５Ｍ四ホウ酸
ナトリウム緩衝液 上記においてハづテン、ハプテン−担体結合試薬及び担
体の使用割合は、適宜に決定できるが、通常へつテンに
対して担体を２〜６倍重量好ましくは３〜５倍重量、及
びハづテン−担体結合試薬を５〜１０倍モル程度用いる
のがよい。上記反応によりハづテン−担体結合試薬を仲
介させて担体とハづテンとが結合したべづチドー担体複
合体から成るヒトリム本づうストイドインターフェロン
抗原が収得される。

反応終了後書られる抗原社常法に従い、例えば透析流、
ゲルー過法、分別沈殿法等によシ容易に単一精製できる
。ま九該抗原は通常の凍結乾燥法によ）保存できる。

かくして前記一般式＋１）で表わされるヒドリンホブ５
ストイドインターフエ０シのＮ末端ぺづチド及び七Ｏｌ
ｌ導体の少なくとも璽種と担体との複合体から成るヒド
リン本づラストイドインターフェロン抗原を得る。該抗
原は、通常蛋白質ｌｖニルに対しべづチドが平均５〜２
０ｔル結合したものでＴｏシ、いずれも引き続き再現性
よく、ヒトリムホづラストイドインターフェ０シに対す
る特異性の高い抗体の作成を可能とするものである。特
に上記蒼白質に対するペプチドの結合ｔル比がｌ：８〜
１５０もＯは、特異性が一層高く高力価、高感度の抗体
を作威し得るものでＴｏシ好ましい。

上記で得られる抗原による抗体の作成は、以下の如くし
て行なわれる。即ち上記抗原を哺乳動物に投与し、生体
内に産生される抗体を採取することによ〕行なわれる。

抗体の製造に供せられる鴫乳動物としては、特に制限は
ないが、通常兎十七ルｔットを用いるのが望ましい。抗
体の産生に当っては、上記によ〉得られる抗原の所定量
を生理食塩水で適当濃度に希釈し、フロインドの補助液
（ＣｏｗｓｐＬａｔｇ　Ｆｒａｕｄ　ＪＦ屈ｊｓ−νａ
ｓｔ　）と混合して懸濁液を調整し、之を哺乳動物体に
投与すればよい。例えば兎に上記懸濁液を皮肉注射（抗
原の量として０．５〜５′ｑ／回）し、以後２週間毎に
２〜１０ケ月好ましくｔ１４〜６ケ月間投与し免疫化さ
せればよい。抗体の採職は、上記懸濁液の最終投与後抗
体が多量産出される時期、通常上記最終投与１−２週間
経過後、免疫化され大動物から採血し、之を遠心分離後
血清を分離課電することによシ行なわれる。殊に本発明
方法によれば、用いる抗原の特殊性に基づいて、しトリ
ム本プラストイドインターフエロシに対して非常に優れ
た特異性を有し、高力価、高感度の抗体を収得できる利
点がある。

かくして得られるしトリシホづ５ストイドインタ一フエ
０ン抗体は、上記Ｏ通シ殊に優れたヒトリシ本プ５スト
イドインターフエＯ：Ｊ％異性を有するもので套シ、斯
界で要望されているＲ１１法によるヒドリンホブ５スト
イドイシターフエ０ンの定量を高精度をもって可能とす
る有用なものである。ｔえ鋏抗体は、これに酵素また祉
螢光物質で標識することによってエンザイムイムノアッ
セィ（Ｅｚ７）ｍ、フローレッセシスイムノアッセイＣ
ＦＩＡ＞法等に使用できる。さらに該抗体は公知の不溶
化させる物質と反応させて不溶化抗体とすることもでき
る。

以下本発明を更に詳しく説明するため、本発明ペプチド
、これを利用した抗原及び該抗原からの抗体の製造例を
挙げるが、本発明はこれに限定されるものではない。

尚各製造例におけるＲｆｆｌｌＦｉシリカゲル上０薄層
り０マドＪｊ５フイーにて下記混合溶媒を用いて測定し
たもＯである。

Ｒｆ・・・１−ブタノール−酢酸−水（４：１：５）Ｒ
ｆ・・・１−ブタノール−ごリジン−酢酸−水（１５：
１０：３：１２） くべづチドの合成〉 製造例　１ １、　　Ｚ−ｊｕｇ−ＧＺｓ−ＯＨｔ）１１に造Ｚ−Ａ
１ｇ−Ｏ５ｗｂ　４．８０　ｔ　ｏ　？トラヒト０フ５
シロ０１１４１１波にＨ−ＧＬｖｈ　−０１１２，１９
ｆ　Ｏ水４ｏ−溶液とトリエチルアエシ２．！０−を加
え、室温で２０時間攪拌する。ナト５ヒト０フ５シ及び
水を留去し、残渣を亀−ブタノールで抽出する。抽出液
を２−酢酸で洗浄し、ブタノールを留去する。析出物質
をデ取し、メタノール−酢酸エチルで再沈殿して、Ｚ−
Ａｌ＠−Ｇｊｓ−ＯＮ　３．８７　ｆ　を得ル。

Ｒｆ、０．４１ Ｒｆ、０．５６ 元素分析値（Ｃ，、Ｒ２，Ｎ、０６として）計算値（−
）　　Ｃ５４，６９Ｒ６，０２ｆｆ１１．９６実測値（
−）　　Ｃ５４，５０Ｒ６，３１ｆｆ１１．６２２（→
、Ｈ−ＡＬａ−ＧＬ路−ＯＨ□　＠造Ｚ−ｊｊａ−ＧＬ
＊−ＯＨ３，５Ｏｆを水５〇−及びメタノール５０−に
溶かし、バ５ジウムを触媒として接触還元して、Ｈ−Ａ
に一〇Ｊｖｈ−ＯＫを得る。

Ｒｆ、０．０４ ２（ｈ）、　　Ｚ−Ｌｅｔｓ　−ＡＬａ−ＧＺａ−ＯＮ
Ｅ）製造Ｚ−Ｌａｇ−Ｏ５ｓｂ　’３．９７　ｆ　、上
記（−）で得たＨ−ＡＬｇ−ＧＬｎ−ＯＫ及びトリエチ
ルアミン１．３９−をジメチル本ルムア！ド５０ｃＪに
溶解し、室温で２０時間攪拌する。ジメチル本ルムアエ
ドを留去し、残渣を酢酸エチルで抽出する。抽出液をＩ
Ｎ−クエシ酸で３回及び水で５回洗浄する。酢酸エチル
を留去し、残渣にエーテルを加え、析出する沈殿物をＦ
取乾燥し、メタノール−酢酸エチルよシ再沈殿させて、
Ｚ−ＬｅＩｌ−ＡＬｔｔ−ＧＺルーＯＫ２．１５１を得
る。

ｘｆ、０．４９ ｊ／、０．６２ 元素分析値（Ｃ２２Ｎ、２Ｎ、Ｏヮとして）計算値（１
Ｇ）　　Ｃ５６，８８Ｎ６．９４　　＃１２．０６実測
値（＄）　　Ｃ５６−４１Ｎ６．８０　　＆１２．１８
３（→、　　Ｈ−Ｌａｗ−ＡＬａ−ＧＬｎ−ＯＨの製造
Ｚ−Ｌａｇ−ＡＬｍ−Ｇｊｓ　−ＯＮ　２−１０１　Ｋ
　２５チ臭化水嵩含有酢酸１１１Ｅ２０−加え、室温で
１時間放置する。反応ｉＩに乾燥エーテルを加えて、Ｈ
−Ｌａｇ−ｊＪｇ−σムーＵを得る。

Ｊｊ７．０．１０ ３（４，ｊｒ−Ｌｅａ−Ｌｓｓ−ＡＬａ−ＧＪｓ−ＱＨ
Ｏ製造Ｚ−Ｌａｇ−Ｏ５ｓ　１−９６Ｆ、）リエチルア
ミン０．６３ｄ及びＩＩ　−Ｌａｘ　−ｊｅｔ　−（Ｊ
ｓ　−０１１ｆ：、；メチル本ルムア！ド５０１１７に
溶かし、室温で２０時間攪拌する。

ジメチルホルムアミドを留去して、残渣に１Ｍクエン酸
を加え、析出する結晶なＶ取し結晶をＰＩＥが中性にな
るまで水洗し乾燥する。メタノール−酢酸エチルで洗浄
して、Ｚ−Ｌａｇ−１，ｍ５−ＡＬａ−ＧＬａ　−０Ｈ
１，６３ｔを得る。

Ｒｆ、０．５８ Ｒｆ、０．６４ 元素分析値（Ｃ２，Ｈ，、Ｎ５０８として）計算値Ｃｍ
）　　Ｃ５８，２２Ｎ７．５０　　Ｎ　１２．１２実測
値（１）　　（：’５７．８５　　Ｎ７．９０　　Ｎ１
１．９６４（ａ）、　　ｊｒ−Ｌａｗ−Ｌａｗ−ＡＬａ
−ＧＪｓ−０１１（Ｄ製造Ｚ−Ｌａｗ−Ｌａｇ−ＡＬｔ
ｔ　−ＧＺｓ−ＯＨ１−５０ｆ　Ｋ　２５　ｇｉ臭化水
嵩含有酢酸溶液２０―を加え、室温で１時間攪拌する。

反応液に乾燥エーテルを加えて、析出する固体をＶ取し
て、Ｈ−Ｌａｗ−Ｌａｗ−Ａｌｅｌ−ＧＬ亀−ＯＨを得
る。

Ｒｆ、０．１９ ４（Ｊ＋）、　　Ｚ−１１ｍ−Ｌａｗ−ＬａｌＬ−ＡＬ
ａ　−ＧＺｓ−ＯＮの製造Ｚ−ＩＬｇ−Ｏ５酪１．４１
Ｆ、上記で得られたＨ−Ｌａｇ−Ｌａｇ−ＡＬａ　−Ｇ
Ｚｓ−Ｏｌｌ及びトリエチルアミン０．３６−をジメチ
ル本ルムア！ド５Ｑｄに溶かし、室温で２０時間攪拌す
る。ジメチル本ルムアΣドを留去して、残渣ＫＩＮクエ
シ酸を加え、析出する結晶を一取し、熱メタノールで洗
浄して１．Ｚ−ＩＬｅ−Ｌａｗｂ−Ｌｅｇ−ＡＬａ−Ｇ
Ｌｓ　−ＯＨ１−１７９を得る。

Ｒｆ、０．６１ Ｒｆ、０．７１ 元素分析値（Ｃ願’５４　Ｎ６’９として）計算値（−
）　　（：’５９．１１　　Ｎ７．８７　　Ｎ１２．１
６実橢値（チ）　　Ｃ５９，２３Ｎ７．８０　　Ｎ１２
．０２５（ａ）、　　Ｈ−Ｈａ　−Ｌａｗ−Ｌａｓｈ−
ＡＬａ−ＧＬｎ−ＯＨＯ製造Ｚ−１１ａ−Ｌａ謳−（、
ｍｕ−ＡＬａ−ＧＬ辱−０＃１．１０ｆに２５１臭化水
素含有酢酸１５ＭＩを加え、室温で１時間攪拌する。反
応液に乾燥エーテルを加えて、析出する固体をＶ取して
Ｈ−Ｉｒｅ−Ｌｅｓｌ−ＬｇｔＬ−ＡＬａ　−ＧＬ％−
Ｕを得る。

Ｒｆ、０．２５ ５（Ａ）、　　Ｚ−Ｌａｗ−ＩＬａ−Ｌａｓ−Ｌｇｕ−
Ａｌａ−ＧＬｎ−ＯＫの製造 Ｚ　−Ｌａｗ−Ｏ５ｔｂ　Ｏ，６９Ｆ　、上記テ得らｔ
ＬりＨ−Ｈａ−Ｌ−誌−Ｌｇ藁−４Ｌ＊−ＯＬ％−ＯＨ
及びトリエチルアニシ０、２２　ａｊをジメチルホルム
アニド５０−にとかし、室温で２０時間攪拌する。ジメ
チル本ルムア！ドを留去して、残渣にＩＮコハク酸を加
え、析出物質を一取し、Ｆｉｌが中性に表るまで水で洗
浄乾燥する。熱メタノールで洗浄して１．Ｚ−Ｌｍｓ−
ＩＬｇ　−Ｌａｓ−Ｌａｗ−ｊｊｇ　−ＧＬｎ　−ＯＨ
１−１０ｆを得る。

Ｒｆ”　：　０．５８ Ｊ／”：０．７１ 元素分析値（Ｃ４゜４４〜Ｏ□。とじて）計算値（１Ｇ
）　　Ｃ５９，７５ｆｆ８．１５　　Ｎ１２．１９実欄
値（−）　　Ｃ５９，６０ＫＢ、０２　　＃１１．９２
６、　　Ｈ−Ｌａ１１−ＩＺａ−ＬａＩｌ＆−Ｌａｗ−
ＡＬａ−ＧＬｎ−ＯＨの製造Ｚ−Ｌａｖａ−ＩＬｍ−Ｌ
ａｇ−Ｌａｗ−ｊｊｇ−ＧＬｎ−ＯＫｏ、５Ｏｆをメタ
ノール５Ｑｍ及び１０嘔酢酸ｌＯ−に溶かし、パラジウ
ムを触媒として接触還元して、Ｈ−Ｌａｓ　−ＩＬａ−
Ｌａｓ−Ｌａｗ　−ＡＪｇ　−ＧＺｓ−ＯＨを得る。以
下これを「ベプチＦｊＪと呼ぶ。

Ｅｌｆ”　：　０．２：５ ｊ／”：０．６１ 元素分析値（Ｃ，２に、、Ｎ、０．・２Ｉ２０として）
計算値（１ｇ）　　Ｃ５４，４５Ｎ８．９９　　Ｎ　１
３．８９実測値Ｃｍ）Ｃ５４，３０７８，８１ｆ　１’
Ｓ、９８製造例　２ １、　　Ｂａｇ　−ｊｌａ−ＮＨＮＨ２Ｏ製造Ｂｅｅ−
ＡＺｇ　−ＯＫ　４．９９　ｔ％ＮＨ２−ＭＨ−Ｚ　４
．３６　ｆ及びジシクロへ中ジルカルボシイニド５．４
４Ｆをブト５ヒト０フ５ン１５０−に溶層し、４℃で２
０時間攪拌する。析出する固体をｒ去し、Ｐ波を留去し
、エーテルを加えて沈殿をＦｉｌし、エーテルと石油エ
ーテルから再沈殿させて、Ｅａｔ−ＡＬａ−ＮＨＮＨｌ
　７．　ＯＳ　Ｆを得る。

１１／、０．７９ ｊＥ／、０．８１ 元素分析値（Ｃ，、ｊｒ！３ｊｖ３０５１して）計算値
（１１）　　Ｃ５６，９６Ｎ６．８７　　Ｎ　１２．４
５夷測値（チ）　　Ｃ５６，８１Ｎ６．４９　　Ｎ　１
２．３４２　（ｇ）、　　Ｈ−Ａｒｍ　−ＮＩＩＮＨｌ
　４Ｄ　製造１ｉｎｅ−ノＬ＠−ＪｉＫＮＩＺ　’Ｊ−
００ｔをトリプルオ０酢酸１０−に溶解、１５分間富振
温放置後トリフルオロ酢酸を留去し乾燥してＨ−ＡＬ　
ａ　−ＮＨＮＨｌを得る。

Ｒｆ、０．５１ ２（４，Ｂｅｅ−ｊｒｙ（Ｎｏ２）−ＡＬｇ−ＮＨＮＨ
２Ｏ製造Ｉｈｅ−Ｉｖｙ（ＮＯ２）　−ＯＮ　２．８４
　ｆをブト５ヒト０フ５ン４０−およびＮ−メチルモす
本リンＱ、９１ｓｄＳ＊に解かし、−１５℃に冷却後イ
ソプチルク００本ルメイト１．１７−を加え３０秒間激
しく攪拌する。これ（１−ｊＪ　ｇ　−ＮＨＮＨｌ　Ｏ
ジメチル本ルムア！ド２〇−溶液及びトリ１チルアニン
１．２４−溶箪を加え、１分間攪拌する。０℃で５分間
次いで４０℃で２分間温めた後、電電で１５分間攪拌す
る。テト５しド０フ５シ及びジメチルホルムアニドを留
去後、酢酸エチルで抽出する。抽出液をＩＮクエン酸つ
づいて飽和炭酸水素ナトリウム次いで飽和食塩水で洗浄
後、酢酸エチルを留去、酢酸工ｆｋ−’Ｌ−？ＪＬ、ｆ
再沈殿してＢａｃ−Ａｒｇ（ＮＯ２）−ＡＬａ−ＮＫＮ
Ｈｌ　５．７　Ｏｆを得る。

Ｒｆ”　：　０．６＆ Ｒｆ”　：　０．７９ 元素分析値（’２２　Ｈ３ａ、’８’５１として）計算
値（１り　　Ｃ４９，０６Ｎ６．５６　　Ｎ２０．８０
実測値（−）　　Ｃ４９，４０Ｎ６．７２　　＃２０．
４３３（ｇ）、　　Ｈ−Ａｒｌ（ＮＯ２）−ＡＬｍ−Ｎ
ＨＮＨ２Ｏ製造Ｂｅｅ−Ａｒｇ（ＮＯ２）−ＡＬａ−Ｎ
ＨＮＨｌ　３−６７　ｆをトリフルオロ酢酸１５ｍに溶
解し、１５分間ｉＩ温に放置後、乾燥エーテルを一見結
晶化し、結晶をＦＩＬ”Ｃｊｒ　−Ｉｖｙ　（１１０ａ
　）　−７Ｊｇ　−１１１１１１１１２ｔ　１１　ｂ。

Ｒｆ、０．２０ ！ｌ（４，Ｉｈｃ−Ａｒｃ（ＮＯ，）−Ａｒｇ（ＮＯ２
）−ＡＬａ−ＮＫＮＨｌの製造 ｌｉｍｅ−Ａｒｇ（ＮＯ２）　−ＯＫ　２−１７　ｆを
テトラしドＯフ５ン５０−とＮ−メナルｔル本すシ０．
６９―溶液に溶かし、−１５℃に冷却後イソづチル２０
０本ルメイト０．８９−を加え５０秒閏激しく攪拌する
。

ｅｔＬＫ上ｆｆ１（→で褥すし＊Ｈ−ＡｒｙＣＮｏ２）
−ｉｔｓ−ｔｍｔｘｚＯ！；メチル本ルムア：ド３０−
およびトリエチルアニン０．９１１Ｊｉ１ｍｌを加え１
分間攪拌する。０℃で５分間、次いで４０℃で２分間温
めた後、電電でｌう分間攪拌する。テトラしドロブラシ
及びジメチル本ルムアエドを留去し、残渣を酢酸エチル
で抽出する。抽出液をＩＮ−クエシ酸及び飽和炭酸水素
ナトリウム水溶液で順次洗浄後、酢酸エチルを留去する
。酢酸エチル−エーテルにより再沈殿させてＢｅｅ−Ｉ
ｖｙ（ＮＯ２）　−ｊｒｙ　ＣＮＯ，）−ｊａｍ　−Ｎ
ＨＮＨｌ３．７０ｆを得る。

Ｒｆ、０．５８ Ｒｆ、０．７５ 元素分析値（’ａｅ’＋ｓＮ□３０エエとして）計算値
＜ｆｋ’）　　Ｃ４５，４６１６，１３Ｎ２４．６１実
測値（チ）　　Ｃ４５，１３ｆｆ５−７１　　Ｎ２４．
５１４（ｇ）、　　Ｈ−ｊｒｙ（＃０．）−Ａｒｃ（Ｎ
Ｏ２）−ＡＬａ　−ＮＩＩＮＨｌ　　Ｑ製造 Ｂｅｔ　−Ａｒｇ　（ＮＯ２）　−Ａｒｇ　（ＮＯａ）
　−ＡＬａ　−ＮＨＮＨｌ　３−００ｔをトリフルオロ
酢酸２０−に溶、解し、１５分間室温で放置後、乾燥エ
ーテルを加えて結晶化する・結晶をＰｉｌｌて、Ｈ−Ａ
ｒｃ　（ＮＯ２）−Ａｒｙ　（ＮＯ２）　−ＡＬｔ　−
ｘｉｒｘｘｚを得る。

ｊｊ／’　：　０．１１ ４（４，Ｉｈｅ−ｊａｍ−ｌｅｇ（ＮＯ２）−Δ’ｊ（
ＮＯ２）−ｊＬｇ　−ＮＨＪＩＨｌ　ＯＩＩ造 １−Ａｒｌ（Ｎ（アａ）−Ａｔｙ　（＃（）ａ）−ＡＬ
ａ　−ＮＨＩｚ　ｔ　ＤＭ　Ｆ５０ｍＫとかし、それに
トリエチルアニン０．５６−とｆｌｅｅ−ｊｚｓ−０１
Ｈ５２−１７ｆとを加え、２０時間璽温で放置する。ジ
メ予ル本ルムアミドｔｌＩ去し、残液をブタノールで抽
出する。抽出液を２ｓ酢酸で洗浄後、エーテルを加えて
結晶化し、結晶を一取して、メタノール−酢酸よ）再沈
殿してＢｍｃ　−ｊｚｓ　−Ｉｖｙ　（ＮＯ，）−Ｉｖ
ｙ　（ＮＯ２）　−Ａｌｔｘ　−ＮＨＮＨｌ　２．６４
　ｆを得る。

Ｅｌｆ”　：　０．４０ Ｎ１７”：０．７２ 元素’ｋ　析１［（Ｃ３；ａ’ｗｓ工’１５’ｘｓとし
て）計算値（１１）　　Ｃ４５，０１Ｎ６．０２　　Ｎ
２４．６０実測値（１Ｇ）　　ＣＩｋ４．８ＯＮ５．８
５　Ｎ２４．１２４（Ｃ）、　　Ｂｅｅ−７ｚｎ−Ａｒ
ｃ−Ａｒｃ−ノＪ　＠　−ＪＩＨｊＯらＯ製造Ｂｅｅ−
ｊＪｇ−Ａデｌ　ＣＮ０２）−１１１（ＮＯ２）−ＡＬ
ａ−ＮＨＮＨ１２，５０ｔをメタノール４３０−と５〇
−酢酸とＯ温ｔＫ溶かし、パラジウムを触媒として接触
還元しテＥｙｅ−ｊＩＩｓ−Ｉｖｙ　−Ａｒｃ　−ｊＪ
ｇ　−ＮＨ）ＩＮ、　２．２０　ｆを得る・ Ｒｆ、０．０６ ｆｆ／”　：　０．４０ 元素分析値（Ｃ２１，Ｈ，、）ｔ工、へ・２ｃＨコＣす
、ｎ２ｏとして） 計算値（−）　　Ｃ４３，８ＯＮ７．４８　３ｒ２’３
．７１夷橢値（１１）　　Ｃ４５，４Ｎ７．６２　　Ｎ
２５，４５５、　　Ｚ−Ｚｇｍ−６１ｙ−ＱＣ２Ｉ５０
ｍ造Ｉ−メチルｔル本すシ１．８６−をナト５ヒドロフ
５５６０１１１Ｅとかし、ツレＫ　、Ｚ−Ｌａ絡−ＯＮ
　４．８５ｆを加える。−１５℃に冷却して、イシプチ
ルク００ネルメイト２．４１１１Ｊを加え３０秒間激し
く攪拌する。これｖｃＨ−ＧＬｙ　−ＱＣ２Ｍ、　−Ｈ
ＣＬ　２．５４　ｆ　Ｏタメチル本ルムアミド４０ｄｉ
１ｍ＆びトリエチルア！：ン２．う６−を加え、１分間
攪拌する。０℃で５、＃鴎、次いで４０℃で２分間温め
た後、室温で重５５分間攪拌る。ナト５ヒト０フラン及
びジメチル本ルムア？：Ｆを留去し、残渣ＫＩＭクエク
エン酸え、析出する結晶をＰＩ！する。Ｐ液が中性にな
るまで水洗し、析出した結晶をｒ取乾燥し、酢酸エチル
−エーテルで再沈殿してＺ−Ｌａｗｓ−Ｇり−ＱＣ２１
，４，６８ｔを得る。

Ｊｊ／”：０．８０ Ｊ／”：０．７７ 元素分析値（Ｃｘａ’ａｔｈ’ａＯｓ　トＬ　テ）計ｊ
ｌＥ１１　（１Ｇ）　　Ｃ６１，７０Ｊｒ７．４８　　
Ｎ７．９９実欄値（嘔）　　Ｃ６１，５１ＪＦ７．３２
　　ｆｆ７．８０６（→、　　ｆｆ−Ｌｓｓｓ−にＪｙ
−ＯＣ２ｆｆ５Ｏ製造Ｚ−Ｌ＠ｗ−ＧＬｙ−ＱＣ２Ｊｒ
５５．１２　ｆをＮ５１）−Ｊ／うＯｄとＩＩ埠酸８．
９０−とに涛かし、パラジウムな触媒として接触還元し
て、Ｈ−Ｌａｇ−Ｃｄｙ−αｔＨ５豐得るＱ Ｒｆ”　：　０．４１ ６（４，Ｚ−５ａｙ−Ｌｇｓ−Ｇｌｙ−αシーの製造Ｚ
；−５ａｙ−ＮＨＮＨａ　２−４８　ｆをジメチル本ル
ムア：ド２〇−及び６Ｎ塩酸／ジオ中サン４．８９−に
濶解し、−１５℃に冷却後、亜硝酸イソアミル１．３１
−を加え、う分間攪拌する。次いでトリエデルア！！シ
鴫、１１−を加えて中和する。上記（→で得られ＊　ｌ
−Ｌａ５−ＧＬｙ　−ＱＣ，１，”　Ｉ　ＨＣＬとトリ
エチルアミ：１１．２４ｍ０ジメ予ル本ルムア＝ドｌ〇
−溶液に、上記ｔ）Ｋ応波を加え、４℃で２０時間攪拌
する。

ジメ予ル本ルムア！ドを留去後、残留物を酢酸エチルで
抽出し、抽出液をＩＪＩ−クエン酸及び飽和食塩水で順
次洗浄後、硫酸マグネシウムで乾燥する。酢酸エチルを
留去後、酢酸エチルよシ再沈殿シ？　Ｚ　−Ｓｅ　ｒ　
−Ｌｍ　＠−ＧＡ　ｙ　−□Ｃａ１ｌｓ　２−６４　ｆ
を得る。

Ｊｉ／、０．７８ ｊ／”：０．＄５ 元素分析値（’２ｊＬ’３□Ｎ３０７として）１　　　
　　計算値（１Ｇ）　　Ｃ５７，６５ｆｆ７．１４　　
Ｎ９．６０夷欄値（ｍｌ）　　Ｃ５７，６０Ｈ６，８８
Ｎ９．６３７（ａ）、　　Ｈ−Ｂａｒ−Ｌａｗ　−Ｃｄ
ｙ−ＯＣ２Ｊｒ５０ＩＩ造Ｚ−５ａｙ−Ｌａｗ　−ＧＬ
ｙ−ＤＣ２Ｊｒ５２．５０　ｆ　ｔ　１０　％　酢１１
１０―及びメタノール５０ｓｌに溶がし、パラジウムを
触媒として接触還元して、Ｈ−５ｅｔ−Ｌｅｇ　−ＧＬ
Ｉ−ＯＣ２ＩＩ５を得る。

ｆｆｉ／”：０．３１ ７（ｈ）、　　Ｚ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−５ａｙ−ｆ、ｍｕ
−ＧＬｙ−ＱＣ２Ｈ，Ｏ製造Ｚ−Ｔｈｒ−Ｈｉｐ−ＮＨ
ＮＨ２２，５４ｆをジメチルホルムアミド２０ｍ１及び
６Ｎ−塩酸７５才辛サシ４．１９−に溶解し、−１５℃
に冷却後、亜硝酸イソアミル０．８４−を加え、５分間
攪拌する。次いでトリエチルアミン３．５１ｓｌを加え
中和する。上記（４で得られ九Ｈ−５ａｔ−Ｌａｇ−Ｇ
Ｌｙ−ＱＣ２Ｎ５とトリエチルアミ２１０．７９−のジ
メチルホルムアミド２ｏＷ１１溶筐に、上記０反応液を
加え、４℃で２０時間攪拌する。ジメナルネルムアニド
を留去後、残渣をブタノールで抽出し、抽出ｉｌ管水洗
する。溶媒を留去して、メタノール−酢酸エチルで再結
晶して、Ｚ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−５ａｙ−Ｌｇｗｒ−Ｇｌ
ｙ　−ＤＣ２に５４−５１９を得る。

Ｊ／、０．３５ ｆｆｉ／”　：　０．７１ ７ｅ３１＋析ｆｌｉ　（Ｃ，、Ｈ，Ｊ、０．−　ｘ、ｏ
　ト（、テ）計算値（−）　　Ｃ６４，０ＯＨ８，１４
＃１６．８５実測１１１Ｃ％）　　Ｃ６４，４８ｆ８．
１０　　Ｎ１６−５４８（→、　　ｚ−ｒみｖ−Ｉｒｉ
ｓ−５ａｙ−Ｌａｗ−Ｇｌｙ−ＮＨＮＪｒ２０製造Ｘ−
Ｔｈｅ−Ｉｒｉｓ−５ａｙ−Ｌａｗ−ＧＺｙ　−ＤＣ，
ＩＩｓ　４−３　Ｏｆをメタノール２０ｍＫ溶かし、ヒ
ト５！；シ・！水和物５．１８Ｍ１ｌを加え、型温で２
０時間放置する０反応液にニーデルを加えて析出する結
晶をＦｉｌし、乾燥する。Ｉ＆メタノールで洗浄してＺ
−Ｔムｒ−ｘｉｅ−５ｅｔ−Ｌａｗ　−ＧＬｙ−ＮＩＩ
ＮＨ２２−５５ｆを得る。

Ｒｆ、０．１７ ７１／、９．５７ 元素分析値（Ｃ２９ＩＩ、３Ｎ、０９として）計算値（
ｆｋ）　　Ｃ５２，６４Ｈ６，５５ｆｆ１９．０５実−
億（１１＋）　　Ｃ５２，５５Ｈ６，４４＃１９．０９
８（ｂ）、　　　Ｈ−ｊａｎ−Ａｒｙ−Ａｒｇ−Ａｌｅ
−Ｌａｓ−ＩＬａ　−Ｌａｗ　−Ｌ−１−ノＪａ−ＧＬ
＊−０ＨＯ製造 Ｉｈｅ　−ｊａｓ−ｊｒ、−ｊｒ、ｙ−ｊＬａ−ＮＩＮ
Ｋ２０．７８　ｆ　ｔジメチル本ルムアミド８Ｎｔ及び
６Ｎ−塩酸／ジオ十すン１．０３ｍＫ溶解し、−１５℃
に冷却後、亜硝酸イソアミル０．１６１１１を加え、５
分間攪拌する。

次いでトリエチルア″！、７０．８７ｉｕを加え中和す
る。

ペプ？ＦｊｌｌちＩＩ−Ｌ−謡−７Ｊ＃　−Ｌａｗ−１
ｍ賂−，４１ｇ−ＧＬ＊−０１，）ジエチルアミン０．
８フ ムア！！　Ｆ　２　０ｍ及びへ中サメナルリシ酸トリア
！ドｔｏｉｅｓ合諌に、上記の反応液を加え、４℃で２
４時間攪拌し、さらにＢｅｅ　−Ａｓｈ　−Ａｒｃ−Ａ
ｒｙ−ＡＬａ−瓦ｆｆｆｆ２０．　３　９　Ｆをアジド
に変換したものを加えて４８時間攪拌する。ジメチルホ
ルムアミドを留去し、ＩＩＩＩＩｋをブタノールで抽出
する。抽出液を水洗して、ブタノールを留去する。残渣
にエーテルを加えて結晶化させ、析出結晶な一取する。

水洗し、う酸化リンで乾燥する。得られたＢｏｅ　−ｊ
＃５−ｊｒｙ−Ａｒｃ−ｊＪ＠−Ｌａｓ−　ＩＩｓ−Ｌ
ｅｇ　−　Ｌａｗ−ノＪｇ−ＧＪｓ−ＯＸをトリフルオ
ロ酢酸１ａｊＫ１１１解し、１５分間室温で放置後、乾
燥エーテルを加えて沈殿を析出させ、これを−職乾燥後
セファデックスＧ−２５（溶出ＩＥ５０嘩酢酸）で精製
して、Ｈ−Ａｒｍ−Ａｇ−Ａｒｇ−ＡＬａ−Ｌａｗ−Ｉ
Ｌａ−Ｌａｇ−Ｌａｇ−ＡＬａ−ＧＪＢ−ＯＨ１２０ｑ
を得る。

Ｒｆ、０．０Ｉ Ｒｆ、０．３５ 元素分析値（ｃ５工Ｈ９４Ｎ工、！ｈＯ□３・２ＣもＣ
偏・５Ｈ２０として） 計ｊＥ１１　（１１）　　Ｃ４７，９５Ａ８．１９　　
＃１８．３０実測値（ＩＩ）　　Ｃ４７，６６＃８．４
１　１８．６２〔α）　　、−１８５，４４（（’−０
，５７，１Ｍ酢酸）９、　　　Ｈ−ＴｈデーＳｈｅ−５
ａｙ−Ｌａｗｓ−Ｇｌｙ−Ａｓｓ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａ
ｌｅ−Ｌｇｍ−ＩＬａ−ＬａＩ＆−ＬａＫ−Ａｌｘ−Ｇ
ｉｎ−ＯＫ　　（）製造 Ｚ−Ｔｈｒ−Ｈｉｐ−５ａｙ−Ｚｇｓ−ＧＺｙ−ＨＥＭ
Ｅ２１２５　　可をジメチル本ルムア！ド１ＱＩＩｄ及
び６Ｎ−塩酸／ジオ中サン０．１２５ｍに溶かし、−１
５℃に冷却後亜硝酸イソアニル０．０２５−を加え５分
間攪拌−する０次いでトリエチルアニル０．１０５−を
加え中和する。Ｉ−Ｊａｎ　−ｊｒｙ　−ｊｒｙ−ＡＬ
ａ−Ｌａｗ−ＩＬａ−Ｌａｗ−Ｌａｇ　−ＡＬａ−ＧＪ
ｍ−０１１１０”ｌとトリエチｂｙ＝ン０．０１５ｍと
のジメチル本ルムア！ド１０−及びへ中サメチルリン酸
トリア！ドローの溶液に、上記反応源を加え、４℃で２
４時間攪拌する。さらＫＺ−Ｔｈｒ−１ｈａ−５ａｙ−
Ｌａｓ−ＧＪｙ−ＮＨＮＨ２１２５”ＩＦのアジド化し
良もＯを加え４８時間攪拌する。ジメチル本ルムア＝ド
を留去し、残渣をブタノールで抽出する。抽出液を水洗
する。ブタノールを留去−Ｚｇｓ−ＩＬｅ−ＬａＫ−Ｌ
ａｇ−ＡＬｇ−Ｇｉｎ−ＯＨをメタノール５０ｓＱヒ１
０　＄６酸１０１ｇ１ＫＩｌカｔ、、バ５ごラムを触媒
として接触還元する。触媒をＶ去つづいてメタノールを
留去し、得られた残渣をｔファヂヲクスＧ−２５Ｃ溶出
液５〇−酢酸）で精製して、Ｈ−Ｔｈｒ−Ｈｉｐ−５ａ
ｒ−Ｌａｇ−ＧＬｙ−Ａｓｈ−Ａｒｔｌ　−Ｉｖｙ　−
Ａｌｅ−Ｌｅｌｌｌ−１１ａ−Ｌｇｍ−Ｌａｓ−ＡＬａ
−（Ｊｓ−ＯＮ　１２５１１Ｆを得る。以下これを「ペ
プチドＢ」と呼ぶ。

Ｒｆ、ｏ、ｏｔ Ａ１．Ｏ，’＄８ 元素分析値（Ｃ，２Ｈ□２７Ｎ２５０２゜−２ＣＨ３Ｃ
Ｏ０Ｈ−４Ｈ２０として） 計算値（＊）　　Ｃ４９，２１Ａ７．７７　　＆１８．
８７実測値（チ）　　Ｃ４９，６０Ｎ７．９２　　Ｎ１
８．５４（ＩＩ）　　、−６６，７６（（：”寵０．４
２、！Ｉ酢酸）り 製造例　３ １（→、　　Ｈ−ＧＪｍ−１１ＨＪｒＨＢｏｃの製造Ｚ
−ＧＪｓ　−ＮＪＩＮｌｌＥｔｓｅ　７−００　ｔ　ｔ
　ｊ　ｊ　／−ＪＬＩ　５　Ｑｓ／に溶かし、パラジウ
ムを触媒として接触還元してＨ−ＧＪ　ｓ　−ＮＪＩＮ
ＨＥａ　ｃを得る。

ｆｆｉ／、０．３７ Ｎ４．　　Ｚ−Ｐｒｅ−ＧＬｓ−ＮＨＮＩｍ−ｃの製造
Ｚ−ｐｅａ−０１４−４１ｆをナト５ヒト０）５：１５
０−及びＮ−メチルでル本リン１．８０７に溶かし、−
１５℃に？Ｈ１後、イソプチルクＯＯネルメイト２．５
４ＭＩを加え、３０秒間激しく攪拌する。これに上記（
→で得られたＨ−ＧＺｓ　−ＮＨＮＨＩｈｅ　Ｏ！；メ
チル本ルムア！Ｆ３〇−溶液を加え、１分間攪拌する。

０℃で５分間、次いで４０℃で２分間温めた後、室温で
１５分間攪拌する。ナト５ヒト０）５シ及びごメチルホ
ルムアミドを留去して、残渣を少量のブタノール含有酢
酸エチルで抽出する。抽出波ｔｌＪＩ−クエシ酸、飽和
炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で順次洗浄後
熱酢酸エチルで洗浄して、Ｚ　−ｐｒｅ　−ＧＬｓ　−
ＮＨＮＭｋ　５−６７　ｆを得る。

Ｒ７”：０．６０ Ｒｆ、０．７６ 元素分析値（Ｃ２３Ｈ，３Ｎ５０７として）計算値（−
）　　Ｃ５６，２０Ｈ６，７７Ｎ１４．２５実１１１１
１１［（＊）　　Ｃ５５，９７Ｈ６，６８＃１４．＋５
２（ｇ）、　　Ｈ−Ｐｒｏ−ＧＺｓ−ＮＨＩＵＩ＆ｃの
製造Ｚ　−ｐｒｙ　−ＧＪｓ　−ＮＨＮＨＢ−ｃ　５−
５０　ｔをメタノール５〇−に溶かし、バラ！；ウムを
触媒として接触還元して、Ｈ−？ｖａ　−Ｇｊ　ｓ　−
ＮｌＮ１へを得ル。

Ｒｆ”　：　０．０９ ２（４，Ｚ−Ｌａｇ−ｐｒｙ−ＧＪｓ−ＪＩＨＮＨＢ−
ｄＤ製造Ｚ　−Ｌａｇ　−０ＪＩＨ５４−０５ｔを上記
（−）で得九Ｈ−Ｐｒｔｓ−ＧＪ　ｓ　−ＮＨｊｒｌＢ
−ｔｏジメ予ル本ルムア！ド１００−及びトリエチルア
ニン１．５６　ｍ溶液に加え、２０時間室温にて放置す
る。ジメチル本ルムア！ドを留去後、残渣會酢酸エチル
で抽出する。抽出液をｌＮ−クエシ酸及び飽和食塩水で
順次洗浄する。酢酸Ｉチルーエーテルで再沈殿させてＺ
−Ｌａｗ−ｐｒ。

−Ｇｌ　ｓ　−ＮＨｊｒｌＢ−ｃ　３．７２　Ｆを得る
。

Ｊ／”：０．６８ ｊｊ／”：０．８０ 元素分析値（Ｃ２，ｊｒ４４Ｎ６０８として）計算１１
１Ｃ％＞　　０５７．６０　　Ｈ７，３３Ｎ１３．９０
実測値（１１）　　Ｃ５７，２１Ｈ７，０８Ｎ１３．５
８５（→、　　Ｈ−Ｌａｇ−ｐｒｅ　−ＧＪ５−ＮＩＩ
ＮＩｊ８ａｃの製造Ｚ　−ｊｇｓ　−ｐｒｅ　−ＧＪｓ
−ＮＨＮＩ＆ａｃ３．５　Ｏｆをメタノール５０ｓｇｊ
Ｋｉｌかし、パラジウムを触媒として接触還元してＪｒ
−Ｌａｍ−ｐｒｙ−ＧＪｓ−ｍ龜を得る。

Ｎ／、０．１４ ３（ｈ）、　　Ｚ−Ａｓｐ（ＯＣＨ２−Ｃ６Ｉ５）−Ｌ
ａｓｔ−ｐｒｙ−ＧＺｓ　−ＮＩＩＮＨＩｈｅ　Ｏ製造 Ｚ−ＡｚｐＣＯＣＨ２−Ｃ６ＨＪ−ＯＫ　２．２７１を
ナト５ヒト０フ５シ３〇−及びＮ−メチルモル本リン０
、６５１１７に溶かし、−１５℃に冷却後イソづ予ルク
００本ルメイト０．８４Ｍｔを加え３０秒間激しく攪拌
する。これに上記（６）で得られ九Ｈ−Ｌａｗ−ｐｒｅ
−Ｇｌ　ｓ　−ＮＨＮＩＩｌｋのジメチル本ルムア！ド
２０−及びトリエチルアニン０．８１ｄｉｌ液を加え、
１分間攪拌する。０℃で５分間次いで４０℃で２分関温
めた後、室温で１５分間攪拌する。テトラしド０フ５シ
及びジメチル本ルムア！ドを留去して、残液を酢酸Ｘチ
ルで抽出する。抽出液をｌＮ−クエシ酸、飽和炭酸水素
ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で順次洗浄し、抽出液
を留去する。酢酸エチル−エーテル−石油エーテルで再
沈殿してＺ−Ａｓｐ（ＯＣＨ３−Ｃ６ｆ５）−Ｌａｗ−
Ｐｒｅ　−０１％−ＮＩＩＮＨＢθｃ　　４．０Ｏｆを
得る。

Ｒｆ”　：　０．６８ Ｒｆ、Ｏ，’ｌＴ 元素分析値（ＣＩＫ）’５５’？’ｕとして）計算値（
幻　Ｃ５９，３２Ｈ６，８４＃１２．１１実測値（ＩＧ
）　　０５Ｂ、８８　　Ｈ６，６５＆１１．７２４（ａ
）、　　ｊｒ−ｌａｐ−Ｌａｇ−Ｐｒｏ　−Ｇｌｓ−Ｎ
ＨＮＨＢｏｃｔ）製造Ｚ　−７ＪＦｐ　（０ＣＩＩａ　
−Ｃｔ、Ｉｓ　）　−Ｌ＃　ｓ　−ｐｒ　ｅ　−０１％
−ＫＭ）ＩＨＢａｃ２．０Ｏｆをメタノール５０ｍ及び
１〇−酢酸１０−に溶かし、バ５ジウム黒を触媒として
接触還元してＨ−Ｊｂｐ　−Ｌａｗ　−ｐｒｏ−ＧＬｎ
−７１ｒＨＮＩＩＬｔを得る。

Ｒｆ、０．０８ ４（Ａ）、　　Ｚ−５ａｙ−Ａｓｐ−Ｌａｇ−ｐｒｅ　
−（Ｊｓ−ＮＨＮＨＢｏｅ（）製造 Ｚ−５ａｙ−ＮＩＮＨ２０−７５ｆをジメチル本ルムア
ヱド１５−及び６Ｎ−塩酸／ジオ中サシ１．４８−に溶
かし、−１５℃に冷却後、亜硝酸イソアニル０．３９−
を加え５分間攪拌する。次いでトリエチルアミシト２４
−加え中和する。上記（−）で得られたＨ−ｌａｐ−Ｌ
ａｇ　−ｐｒｏ　−ＧＪｓ−ＮＩＮＭｋのジメチル本ル
ムア！ド１Ｑｓｄ及びトリエチルアニン０．）４−溶液
に、上記の反応液を加え、４℃で２０時間攪拌する。ジ
メチルホルムアミドを留去し、残渣をブタノールで抽出
する。抽出液を水洗し、ブタノールを留去する。メタノ
ール−酢酸エチルよ）再結晶して、Ｚ−５ａｔ−ｌａｐ
−Ｌａｓ−ｐｒＯ−ＧＬｎ−ＮＨＮＨＩｈｃｌ、５２Ｆ
を得る。

Ｒｆ”　：　０．４５ Ｒｆ、０．６７ ５、　　ｌｌ−５ａｙ−Ａｓｐ−Ｌｓｓ−ｐｒｅ　−Ｇ
Ｚｓ−Ｔｈｒ−Ｈｉｔ−５ａｔ−Ｌａｓ　−ＧＬｎ−Ａ
＃ｍ−ｊｒｙ−Ａｒｃ−ＡＬａ−Ｌａｓ−ＩＬａ　−Ｌ
ａｍ−Ｌａｗ、−ｊＪｇ−にｊｓ−ＯＫの製造Ｚ−５ａ
ｙ−Ａｓｐ−Ｌａｓ−ｐｒｅ　−ＧＬｓ−ＮＨＮＨＥｏ
ｃ　１１６　ＷｌｌをＴｌＡ２−によ）脱Ｂｅｏ化無水
エーテルを加えて得られ為沈殿をＰ本乾燥しジメチル本
ルムアエＦ　５ｍ１ＣＦ　６　ＩＩ−塩酸／　’ｉ　オ
＋　９　：Ｊ　Ｏ，０７２ｄ　Ｋ溶解し、−１５℃に冷
却後亜硝酸イソアニル０．０１９−を加え５分間攪拌す
る働次いでトリエチルアニン０．０８１−を加え中和す
る。

べづチドＢ即ちＨ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−５ｅｔ−Ｌａｇ−
ＧＬｙ　−Ａｚｔｈ−Ａｒｃ−Ａｒ１−ＡＬｇ−Ｌａｗ
−ＩＬｇ−Ｌａｗ−Ｌａｇ−Ａｉｍ　−ＧＪｓ−ＯＨ８
０キの！；メチル本ルムア！ド５ｄ及びへ＋サメチルリ
ン酸トリアミド６ｄ溶液に１上記反応液を加え、４℃で
２０時間攪拌する。さらにＺ−５ａｙ　−Ａｓｐ−Ｌｇ
ｔＬ−ｐｒｏ　−ＧＬｎ−ＮＨＮＨ＆に、をアジド化し
たものの１１６膏を加え、２８時間攪拌する。ジメチル
ホルムアミドを留去し、残渣をづタノールで抽出する。

抽出液を水洗し、ブタノールを留去し、残渣に石油エー
テルを加えて結晶化し、析出結晶をｒ取し、メタノール
−酢酸エチルで再沈駿させる。

得られたＺ−５ｔｙ　−ｌａｐ−Ｌｇｗ　−ｐｒｙ　−
Ｇｌｎ　−ＴＡｒ−１１ｉｐ−５ａｙ−ＬｅＩＩ−ＧＬ
ｙ−Ａｐｎ−ｊｒｙ−ノｒ！−ノ１ｍ−Ｌｅａ−１ｔａ
−Ｌａｗ−Ｌａｘ−ＡＬａ−ＧＬｎ−ＯＨｔ　ｊ　５　
／　−ｋ　３０　ｄ　ト１Ｇ−酢酸３０１１ｊＫｍｌか
し、バ５ジウムで接触遺しテ５８　ａｔ　ＯＨ−５ａｙ
　−Ａｓｐ−Ｌａｗ−ｐｒ−−ＧＪｓ−ＴＡｒ　−Ｊｌ
ｉｚ−５ａｙ−ＬｅｗｌＬ−ＧＬｙ　−ｊｚｓ−ｊｒｙ
−Ａｒｇ−ＡＬａ−Ｌｇｍ　−１１ａ　−Ｌａｗ−Ｌａ
ｇ　−ＡＺａ−ＧＬｓ−ＯＨｆｉル。以下コレを「ペプ
チドＣ」と呼ぶ。

Ｒｆ”　：　０．０１ Ｒｆ”：０．３７ 元素分析値（Ｃ９５Ｎ、、Ｎ３，０２９−２０Ｈ，Ｃ０
ＯＨ−７Ｈ２０として） 計算値（１Ｇ）　　Ｃ４８，５４＃７．６１　　＃１７
．７２実１ｍ値（＊）　　０４８．１４　　Ｎ７．５０
　　＃１７．４８〔ｇ＞７：　−８５，７０＜ｃ−ｏ、
２３、Ｉ　ｘ酢酸）製造例　４ １（→、　　Ｈ−５ａｙ　−Ａｓｐ−Ｌａｇ−Ｐｒｍ−
Ｇｌｍ−ＮＨＮＭＪａｃの製造 Ｚ−５ａｙ−Ａｓｐ−Ｌｇｈ−ｐｒｙ−（Ｊｓ−ＮＨＮ
１１３ｅｃ１．Ｏ：５　ｆをメタノール５０−に溶かし
、パラジウムを触媒として接触還元して、Ｈ−５ａｙ−
Ａｓｐ−Ｌａｇ−ｐｒｏ　−Ｇｔｓ−Ｈ瓜を得る。

Ｒｆ”　：　０．０６ ０４、　　　Ｚ−Ｔｙｒ−５ａｙ−ｌａｐ−ＬａＩＩＩ
−Ｐｒｅ　−Ｇｌｍ−ＮＨＮＨＢ−ｃＯＩｌ造 ｚ−ｒｙデー０ＮＨ５０，７９ｆを上記（６）で得られ
たｌ−５ａｙ−ｌａｐ　−１１ｍ　−Ｐｒｏ　−ＧＪｓ
−１ｒｘＨ＆Ｃｏジメチル本ルムアミド２〇−溶液に加
え２０時間室温で放置する。ジメチル本ルムア！ドを留
去後、残渣を酢酸エチルで抽出する。抽出波をｌＮ−ク
エン酸及び−和食塩水で順次洗浄して、酢酸エチルを留
去する。メタノール−酢酸エチルで再沈歎してＺ−Ｔｙ
ｒ−５ａｖ−Ａｓｐ−Ｌａｓ−ｐｒｙ　−ＧＬｖｈ　−
ＮＨＮＨＢｏｃ　５８　Ｂ　”ｆを得る・ ｆｆｉ／”　：　０．５１ Ｊ／、０．６９ 元素分析値（へ、１６．Ｘ、Ｏ工、として）計算値（ｓ
）　　Ｃ５８，９１Ｈ６，５６＃１１．８９夷測値（−
）　　（：’５８．５３　　Ｈ６，２２ｆｆ１２．２８
２、　　　　Ｈ−Ｔｙｒ−５ａｙ−ｔｌｚｐ−４ｇｓ−
ｐｒｅ　−Ｇｌｍ−Ｔｈｒ−ＨｉｓＳａｙ−Ｘ、ａｓ−
ＧＬｙ−ｊａｎ−Ａｒｃ−Ａｒｌ−ＡＬａ−Ｌａｗ　−
ＩＬｇ　−Ｌａｗ−Ｌｍｓ−ＡＬａ−ＧＪｓ−ＯＨＯｍ
ｌ造Ｚ−Ｔｙｒ−５ａｙ　−１ａｐ−Ｌａｔｈ　−ｐｒ
ｅ　−（Ｊｓ−ＮＨＮＩＩＢａｃ４４雫を≦メチル本ル
ムアニド′３−及び６Ｎ−塩酸／ジオ中すンＯ，０２２
５ｍＫ溶解し、−１５℃に冷却後亜硝駿イソアミル０．
００６０−を加え、５分間攪拌する０次いでトリエチル
アミン０．０２５２１１７を加え中和する。

ベプ予ドＢ即ちＨ−Ｔｈｒ−Ｈｉｐ−５ａｙ−Ｌｇｍ−
ＧＺｙ　−Ａｒｌ−Ａｒｌ−Ａｇ−Ａｌａ−Ｌａｍ−Ｉ
Ｌａ　−Ｌｇｍ−Ｌａｇ−ＡＬｇ　−Ｇｌｖｂ−ＯＮ、
　２５　’ＩＩの５メチル本ルムアミド５−及びへ十サ
メチルリン酸トリアニドｚ＊ｓｉｉに、上記反応波を加
え、４℃で２０時間攪拌する。さらにこれにＺ−Ｔｙｒ
−５ａｙ　−Ａｓｐ−Ｌａｗ−ｐｒｏ−ＧＬｈ−ＮＨＮ
ＩＩＥｋ４４　ｑをアジド化しえものを加え、２４時間
攪拌する。溶媒を留去して、残渣をブタノール−水で抽
出し、エーテルを加え、析出する結晶をＰＮＲする。

得られ九Ｚ−Ｔｙｒ−５ｅｔ−〕＃Ｆ　−Ｌｇｍ　−Ｐ
ｒｏ　−ＧＬｈ−Ｔふｒ−Ｉｈｚ−５ａｙ−Ｌａｗ−Ｇ
Ｌｙ　−Ａｚｍ−Ａｒｇ　−Ａｒｇ　−ＡＬａ　−Ｌｇ
ｓ　−溶かし、パラジウムを触媒として接触還元する。

触媒を一去、メタノールを留去して得られた残渣をセフ
ァダツクスＧ−２５ＣＷＩ出波５０−酢ｍｌ）絖ｉてＬ
Ｈ−２０（ＩＩ出Ｉｌシ’ｚｏｏｏ　’塩酸）で精製し
て、Ｈ−Ｔｙｒ−５ａｙ−Ａｓｐ−Ｌａｍ−ｐｒｏ　−
（Ｊｓ−Ｔｈｅ　−１１ｉｅ−３ａｙ−Ｌａｗ−Ｇｌｙ
　−ｊＪＰｓ−Ａｇ　−Ａｒｇ　−ＡＬｍ−Ｌａｗ　−
ＩＬａ−Ｌａｍ−Ｌａｌ＆−）Ｌｍ−Ｇｌｍ−ＯＨ１８
”ｆ　を得る。以下これを「ペプチドＤ」と呼ぶ。

Ｒｆ”　：　０．０１ ｆｆ／”：（Ｌ３８ 元素分析値（Ｃ□０４に、６９’３２　’３□・２　Ｃ
Ｈ，Ｃ０ＯＨ・５ｊｒ２ｏとして） 計算値Ｃ％’）　　Ｃ５０，４０Ｍ　７．３２　　Ｎ　
１７．４１実欄値（−）　　Ｃ５０，７２Ｈ７，６７Ｎ
　１７．０３［５）Ｊ９．−７７．８８　（Ｃ−０，２
２，１Ｍ酢酸）〈抗Ｊｌ［Ｏ製造〉 製造例　！ ペプチドの合成製造例１で得たペプチドｌの５岬及び牛
血清アルプミシ（以下「Ｂ　５　ｊＪと略記する）ｏ１
５ｓｗを酢酸アンでニウム緩衝液（０，１モル、ｐＨ７
，０’）２−にとかす。この溶ｆ１１に０４モルのタル
タールアルデヒド溶液０．１１−を加え、室温で５時間
攪拌する。そＯ後反応混合物を４８時間、４℃で水１１
で透析する。透析中５回水を交換する。その後、ペプチ
ド−蛋白質複合体を含有する溶液を凍結乾燥してヒトリ
ム本プラストイドイシターフエ０シ抗Ｎ（以下「抗原Ｉ
」と呼ぶ）１８３ｗを得る。

この抗ＭＩは、ＢＳＪＩＩモルに対してペプチドｌが千
４１２←ル結合し喪ものである。

製造例　２ ペプチド合成製造例２で得九ペプチドｊｌ）５ｑ及びＩ
ｔｓノ０２ＯＮを酢酸アンモニウム緩衝液（０，１！ル
、ＰＪｒ７．０）２ＭＩＫとかす。ｅｏｓ液に０．１℃
ルＯクルタールアルダ七トド溶液０１１ｍを加え、室温
で５時間攪拌する。その後反応混合物を４８時間、４Ｃ
で水１ｔで透析する。透析中５回水を交換する。その後
、ペプチド−蛋白質複合体を含む溶液な凍結乾燥してヒ
トリム本プ５ストイドイシターフエ０シ抗原（以下「抗
原■」と呼ぶ）２５ｑを得る。

得られ丸抗厘■は、ＢＳｊｌ　１　’ｅルに対してべづ
チド１が平均９ｔ！ル結合したものである。

製造例　５ ペプチド合成製造例３で得九ぺづチドＣ０４，５■及び
ＢＳＡの２５１ｑを酢酸アシをニウム緩衝波（０，１！
ル、ｐ　Ｈ７，０）　２ｍＫとかす。この溶液に０．１
１ルのクルタールアルデヒド溶液１．０−を加え、室温
で５時間攪拌する。その後反応混合物を４８時間、４℃
で水１ｔで透析する。透析中５回水を交換する。その後
、ペプチド−蛋白質複合体を含む溶液を凍結乾してしト
リム本づ５ストイドインターフエロン抗原（以下「抗原
■」と呼ぶ）２７ｑを得る。

得られた抗原■は、ＢＳＡｌｅルに対してペプチドＣが
平均ｌＯ℃ル結合し喪ものである。

製造例　４ ペプチド合成製造例４でｌＩえペプチドＤの５ｑ及びＢ
ＳＡの２５１１Ｆを酢酸アン上ニウム緩衝液（０，ｌｔ
＆、７　Ｈ７，０）　２　ＭＩ　Ｋｉｌカｔ。ｃｏ溶液
に０．１ｔルＯｊルタールアルチヒドｉｌｉ［０，１１
ｍを加え、室温で５時間攪拌する。そ０後反応混合物を
４８時間、４℃で水ＩＬで透析する。透析中５１水を交
換する。その後、ぺづチドー蛋白質複合体を含む溶液を
凍結乾燥してヒトリム本プラストイドインターフェロン
抗ＩＩ（以下「抗原■」と呼ぶ）２８ｓｗを得る。

得られた抗原■は、ＢＳＡＩＥルに対してぺづチドＤが
平均９℃ル結合し丸ものである。

製造例　５ ペプチド合成製造例３で得たべづチドＣ（Ｄ４．５岬及
びＩＳＡ２５１ＭＩを水４ｍＫ溶解する。乙の溶ｔｌＫ
”Ｊシ９ＣＪへ中シルカーボ”；イＥドＣＩ）ＣＣ）２
００ｉＩＦを加え、室温で５時間攪拌する。次に反応混
合物を水２を用い４℃にて４８時−要して透析する。透
析中５回水を交換する。その後ペプチド−蛋白質複合体
を含む溶液を凍結乾燥してヒトリム本ブうストイドイン
ターフェロン抗ｊ［（以下「抗原■」と呼ぶ）２７．５
ｑ會得る。

得られた抗原Ｖは、ｊ５１％ｒ−ルに対してべづチドＣ
が平均１２’ｅル結合したものである。

製造例　６ ベづチド合成製造例４で得たべづナトＤの４．５岬及Ｉ
ＦＢｓＡ２５Ｍｆを水１１ｊｌｌｃ溶解する。このＳ液
にジシクロへ中シシ力−′４シイ＝ド（ＤＣＣ）２００
ｑを加え、室温で５時間攪拌する。次に反応混合愉を水
２を用い４℃にで４８時間要して透析する。透析中５回
水を交換する。そ０後ぺづチドー資自質複合体を含む溶
液を凍結乾燥してヒトリム本プラス・トイドイシターフ
エ０シ抗原（以下「抗原■」と呼ぶ）２９ｑを得る。

得られ九抗原■は、ｘｓｉ１ｖニルに対してべづチドＤ
が平均９ｅル結杏しえものである６〈抗体Ｏ製造〉 製造例　１ 抗原の製造例１で得丸抗原ｌ０１００μｔを１．５Ｍｌ
０生理食塩水に溶解後、之に７０インドの補助１１１．
５−を加えて筒製しぇ懸濁液を、５羽の兎（２，５〜３
．０ｋ）Ｋ皮下投与し、２週間毎に６闘同量投与する。

更にその後ｌカ月毎に’［、最初投与し丸量と同量を投
与する。最終投与後７日経過してＯち試験動物から＃Ｉ
Ｌ皇し、遠心分離して抗血清を採取し、本発明のヒトリ
ム本プラストイドインターフエ０シ抗体（以下「抗体Ｉ
」と呼ぶ）を得る。

製造例　２ 抗ｓｏｍ造例２で得九抗原■の２０＃ｆを１．５−〇生
理食塩水に溶解後、之にフロイシドの補助波１．１ｊを
加えて調灸し良悪濁液を、７羽Ｏ兎（２，５〜３．０１
ｆｔ　’）　Ｋ皮下投与し、２週間毎に６ＷＡ同量投与
する。更にそのｉｌｌカ月毎に３回、最初投与した量と
同量を投与する。最終投与後７日経過してのち試験動物
から採血し、遠心分離して抗血清を採取し、本発明のヒ
トリム本プ５ストイドイシターフエ０シ抗体（以下「抗
体■」と呼ぶ）を得る。

製造例　５ 抗原Ｏ製造例３で得た抗原ｍｔ）２０μＶを１．５ＩＩ
ｄＯ生履食塩水に濤解後、之にフロイシドの補助波！・
５３１７を加えて調製し良悪濁液を、７羽の兎（２，５
〜５．０４　）　Ｋ皮下投与し、２週間毎に６回同量投
与する。更にその後１カ月毎に３回、最初投与した量と
同量を投与する。鍛終投与後７日経過してのち試験動物
から採血し、遠心分離して抗血清を採取し、本発明のし
トリムホづ５ストイドインタ一フエ０シ抗体（以下「抗
体■」と呼ぶ）を得る。

製造例　今 抗原Ｏ製造例３で得た抗原■の１００−１を１．５Ｍｌ
０生息食塩水に溶解後、之に７０イシドの補助波１．５
　ｍを加えて調製し良悪濁液を、３羽の兎（２，５〜５
．０　！　）に皮下投与し、２週間毎に６回同量投与す
る。更にそ０後ｌ力月毎に５回、最初投与した量と同量
を投与する。最終投与後７日経過してのち試験動物から
採血し、遠心分離して抗血清をｍ散し、本発明ＯＬ）リ
ム本プ５ストイドインターフエＯシ抗体（以下「抗体■
」と呼ぶ）を得る。

製造例　５ 抗原の製造例４で得た抗原ｆｆ０２０１１Ｆを１．５−
の生理食塩水に溶解後、之にフロインドの補助液１．５
−を加えて調製し良悪濁液を、７羽の兎（２，５〜５．
０４　）　Ｋ皮下投与し、２週間毎に６回同量投与する
。更にその後１カ月毎に３回、最初投与した量と同量を
投与する。最終投与ｖｋＴ日経過してＯち試験動物から
採血し、遠心分離して抗血清を採取し、本発明のヒトリ
ム本プラストイドイシターフエロン抗体（以下「抗体■
」と呼ぶ）を得る。

製造例　６ 抗原ＯＳＳ何例で得九抗厘■の１００μｆを１．５ｍＯ
生鳳食塩水に溶解後、之にフ０イシドＯ補助波１１ｓｊ
を加えて調製し良悪濁液を、３羽の兎（２，５〜３．０
ＩＥｔ　）に皮下投与し、２週間毎に６回同量投与する
。更にその１ｌｌｊ）１毎に３回、最初投与し大量と同
量を投与する。最終投与後７日経過してのち試験動物か
ら採血し、遠心分離して抗血清を採取し、本発明のしト
リム本プラストイトイ：Ｉ９−フエＯン抗体（以下「抗
体■」と呼ぶ）を得る。

製造例　７ 抗Ｊ［０製造例うで得た抗１［Ｖ、０２０μｆｔ用い上
記製造例３と同様にして、ヒトリムホブ５ス十イトイ〉
ターフエロシ抗体（以下「抗体ｌ」と呼ぶ）を得る。

製造例　８ 抗１［（）ＩＩ造例うで得丸抗原マ０１００声ｆｔＭい
、上記製造例４と同様にして、しトリム本プラストイＦ
インターフＩｎシ抗体（以下「抗体マ厘」と呼ぶ）を得
る。

製造例　９ 抗原ｏｓｇａ例６で得た抗原１０２０ｐｌを用い、上記
製造例５と同様にして、シトリム本プ５ストイドインタ
ーフェロン拭体（以下「抗体区」と呼ぶ）をＩＩゐ。

製造例　１０ 抗原Ｏ製造例６でＩＩえ抗原１４０１００μｆを用い、
上記８１１＠４と同様にして、５羽の兎を免役化せしめ
てＯち試験動物から採ムし、遠心分離して抗血清を採堆
し、本発明のしトリム本プ５ストイドインターフエ０シ
抗体（以下「抗体ｌ」と呼ぶ）を得る。

０標識ベプ予ドの製造 Ｈ−Ｔｙｒ−５ｅｔ−Ａｓｐ−Ｌａｗｎ−ｐｒｙ−０１
％−ＴＪｈｒ−Ｈｉｓ　−５ａｒ−Ｚｇｓ−（Ｊｙ−Ａ
ｓｓ−Ａｒｃ　−Ａｒｔｙ−ＡＬａ−Ｚａｓ−ＩＬｇ　
−Ｌａｖｈ−Ｌａｇ−ｊｕｇ−Ｇｊｍ−０１１即ちぺづ
チドＤをり０５！シＴを用いる方法で以下の通り標識化
する。

即ち上記ペプチド５ｐｔ００．５℃ルのリン酸塩緩衝Ｉ
Ｉ（Ｐ　ＩＩ　７．Ｏ）　２０５ｔｌｌｃＮａ　（１５
ｉ　）（ｃａｒｒｉｅｒ　ｆｒｏｍ　１１．１１．Ｎ、
　）　ｌマイクロ中ユーリーの０．５　’ｅルリン酸塩
緩衝液を加え、次にクロ５！ニジ１７０８１／１ｄｌＤ
０．５℃ルリン酸塩緩衝液２０　ｐＬを加える。１１温
で３０秒間攪拌して６Ｑｑ／ｍのメタ重亜硫酸ナトリウ
ム（Ｎ＆、５２０５）の０．５　Ｍリン酸塩緩＠ＩＩＥ
５０４１を加えることで反応を終わらせる０次いで反応
液に１ｌＩＯ冷沃化ナトリウム水溶波１０Ｇ＃Ｌを加え
、反応混合物をセファダックλＧ−２５０力５ム（１，
０Ｘ５０ａｔ）にかける（溶出＊０．２５％ＢＳＡ、１
０ｍ１　ＩＩＤ’ｒｌ及び０−０２１１　Ｎ＠ｐｓを含
む０．０５１！ルリン酸塩緩衝筐、ＰＨ７−４）＊　第
１３及Ｕ　ｌ　４７５’）！ｉ”３：ｉ＃”’Ｉで標識
されえ上記ペプチドである。

０力価Ｏ測定 上記で得られる抗体の力価を次ｏｒｂ測定する・即ち抗
体をそれぞれ生理食塩水でｔ（Ｌ　１０’％　１０３．
１０’？　１Ｇ’・・・・倍に希釈（イニシャル）シ、
これらＯ夫々１００ｐｔｌｌＣ，１＠＠ペプチド（上記
で得られる標識ペプチドを約９５００ｅμになるように
希釈し九−〇）０．１ｍ及び０．０５℃ルリン酸塩−１
１ｉｌ（Ｆｊｒ−７，４）（０，２５１ｊｌｌ、１０ｍ
Ｍ　１１１２１１及び０．０２１１　ＩＩ＠Ｎ、を含む
〕０．２−を加え、４℃で２４時岡イシ中ユベートし、
生成しえ抗体と■　標識抗原とＯ結合体を、ヅ中スト５
シー活性炭法及び遠心分離法（４℃、５０分間、３ｏｏ
ｏｒｐＩＩＩＩ＞ｙｃよ〕未反応（結合しない）１１２
５榔識ベプチＦから分離し、その放射線をカラシトし、
各希釈濃度における抗体ＯＩ　　標識ペプチドとの結合
率（−）を測定する。縦軸に抗体ＯＩ″４標識ペプチド
とＯ結合率（ｓ）及び横軸に抗体の希釈倍率（イニシャ
ル濃度）をと〕、各々０＊＊において結合率をプロット
する。結合率が５０ｓとなる抗体の希釈倍率即ち抗体の
力価を求める。結果を下記第１Ｉ！に示す。

第　　１　　表 ｏａ体ｏｔトリム本プラストイＦイシターフＩ口）特異
性試験 供試試料として各―濃１１０ｔ）β層インターフｒ：ｏ
：ｙ（東京ＩＩＪＩ金臨ＷＬｉｌｔ究所製、ｋｌｒ、Ｆ
Ｂ性Ｓ　ｘＩＥＪ’Ｋｉ／’Ｉプロティン）、ベプチＦ
Ｏ会Ｉｌｔｍ！麿例３で慢えペプチＦＣ即ちしトリム本
プラストイＦイシター７ｘＯンＯペプチＦ鎖及びしトー
濃インターフェロン〔林ｊＩＩＬ′１ｉＩＩ！！所製、
リム本プラストイドインター７エロｙ　Ｌｅｔ、　Ｎｏ
、　８００９２８及びカンチル（Ｃａ５ｔａＬ社製）〕
を使用する。ｔえ標準希釈剤として０．２５１１３５ｊ
、５ｍＭ　ＥＤＴＡ及び０−０２１１（）　Ｊｉｇ’ｓ
を含む０．０５℃ルリシ酸塩緩衝液（ｐｊｒ７．４）を
使用する。

各々の試験管に、標準希釈剤０．２ｍ１Ｊ、供試試料０
．１ｍ、抗体０１１１ｋ例４１得た抗体ｉｏ０．１１１
ｊ（力価２０万）及び１１２５標識ペプチド（上記で得
られる標識ペプチドを約２８００　ｅｐｌｍになるよう
ＫＩｋ釈した一〇）０．１−を入れ、４℃で７２時間イ
ン中１ベートし先後、ノーマルブタ血清（ｍｅｒｗｓａ
Ｌ　ｐｅｒｅｉｓｍ　ｅａｒｎｓ　）を０．１−加え、
次いでデ中ストラシで被膜し大活性炭の懸濁液０．５−
を加え、４℃で５０分間放置し、次に４℃、３０００ｒ
ｐｍＩＯ条件下に３０分間遠心分離を行１に％ｆ％、抗
体と１１２５標識べづチドとの結合体及び未反応（結合
し表い）１１２５標識べづチドを分離し、その放射線を
カラシトし、用いえ抗体の力価に相当する結合重（ｊｌ
ａ）を１００−として、各供試試料の濃度及び希釈率に
おける抗体と１１２５標鐵べづチドとの結合体（Ｊｉ）
の百分率を求める。得られる結果を第１図に示す、第１
図中縦軸は結合−（Ｂ／Ｂｏ　Ｘ　ｇｏｏ　）を、横軸
は供試試料（前記ペプチドの合成製造例３で得たペプチ
ドＣ即ちヒトリム本プ５ストイドのペプチド鎖、ヒトβ
蓋インターフエ０シ及びヒ）ａｌｌイシターフエ０シ）
の濃度を示す。ま九該ａＫかいて自ＩＩ（イ）はペプチ
ドＣ即ちヒトリム本プラストイドイシターフエ０２１０
ペプ予ド鎖を、曲線（０）はヒトａｍインターフエ０シ
（カンチル社製）を、６ｍ（ハ）ａｔ）ｇｌ［イ：’　
ｊ　＝　）Ｘ　Ｏ、：／（林厚硝宛１１８りを、ｔえ１
線（ニ）はヒトβ層インターフｘＯ〉を大々示す、第１
Ｉｌよ）抗体層は、し）ｆＪ１インターフＩＯンに対す
る反Ｅｅ１としトβ履インターフエΩ：１Ｋｊｔする！
Ｌ広性にお−て明確に区別される曲線を示し、このこと
よルしトβ麿インターフＩｏ：Ｉとは３．ＯＸ　１０’
ｌニツト／−まで交叉しｔｋ％ｆｋ４１１＃＆性Ｏ高い
抗体で参ることが判る。

崗上記抗原０ＩＩＩａ例１乃至６で得られる抗原Ｉ乃Ｉ
Ｉ鷺におけるペプチＦＪ：ＢｓＡとの結合重は、得られ
る番挑鳳を更ＫｔファデックスＧ−５０＜＃ｌ出績：＊
場食撫本、検出：ＯＪ２８０ｍｌｌｌ、流出速度：５ｍ
ｇ／時間、分取量　１ｍずつ）でゲシー過し丸際、未反
応１１５ｊ及びベプツＦの存在は認められ１に−ことよ
シ、該ゲル枦遥によってａｓｉｙｃ紬舎し良ペプチＦＯ
フラクシ３ンとＩＩｋＯ生成体（ペプチＦ０２魚体）Ｏ
フラクシヨンとを分離し、ベプチＦ２量体ＯｓＩ準濃度
Ｏ検量線を作成して、上記ｚ量体Ｏ量を求め、これを出
発原料としてＦＡい大ペプチドＯ量から差し引％／％丸
値がすべてＩＳｊに結合しているとして求めえものｅ６
る。

ａｉｉｒｏ■単１説明 第ｉｌｌは本発明によって得られゐ七トリム本プラスト
イＦＩＥ体Ｏ特異性を示すＪ）５フである。

（以　上）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ■　一般式 ％式％ 〔式中Ｒは水素原子、Ｈ−Ｔｋｖ−Ｈｉｔ−５ａｙ−Ｌ
   ｅｇ−ＧＬｙ−Ａｚｎ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ基、Ｈ
   −５ａｙ　−Ａｓｐ−Ｌａｗ−Ｐｒｏ　−ＧＬｎ−Ｔｋ
   ｒ−Ｈｉｐ−５ａｔ−Ｌａｌ＆−Ｇｌｙ　−Ａｚｎ−Ａ
   ｒｇ　−Ａｒｇ−Ａｒｇ基、又はＨ−Ｔｆｒ−５ａｔ−
   Ａｓｐ−Ｌｖｕ−Ｐｒｏ　−ＧＬｎ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−
   ５ａｙ−Ｌａｗ−Ｇｌｙ−ＡｚＦ＆−Ａｒｇ−Ａｒｇ　
   　−Ａｒｇ基を示す。〕 で表わされるしトリム本プラストイドイシターフエ０シ
   ＯＮ末端ペプチドおよびその誘導体の少なくとも１１１
   を、ハづテシー担体結舎試１１０存在下に担体と反応さ
   せて、ヒトリム本プラストイドイシターフエ０シ抗原を
   得ることを特徴とする抗原の製造法◎