JPS5830542B2 - 抗体の製造法 - Google Patents
抗体の製造法Info
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- JPS5830542B2 JPS5830542B2 JP527377A JP527377A JPS5830542B2 JP S5830542 B2 JPS5830542 B2 JP S5830542B2 JP 527377 A JP527377 A JP 527377A JP 527377 A JP527377 A JP 527377A JP S5830542 B2 JPS5830542 B2 JP S5830542B2
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は新しいガストリン誘導体−蛋白複合体から成る
抗原から抗体を製造する方法に関する。
抗原から抗体を製造する方法に関する。
本発明者らはかねてよりラジオイムノアッセイ法によっ
て人のガス） ＩＪンを定量する方法につき種々研究を
重ねてきた。
て人のガス） ＩＪンを定量する方法につき種々研究を
重ねてきた。
その過程において本発明者らが新たに合成単離したガス
トリン誘導体を特定のジアルデヒドを介在させて蛋白と
結合させて得られる複合体は、人のガス） ＩＪンに対
し特異的に反応する抗体を哺乳動物体内に産出させる抗
原として作用するという事実、及びかくして産出される
抗体は、ガス） ＩＪン類似の例えばコレシストキニン
ーパンクレオミン（ＣＣＫ−ＰＺ）やペンタガス） Ｉ
Ｊン等に対しては交叉性を示さず、ガストリンにのみ特
異的反応性を示し、それ故ラジオイムノアッセイ法によ
る人体内ガストリンの正確な定量を可能とし、ガストリ
ンの定量による診断薬等として有用であることを見い出
した。
トリン誘導体を特定のジアルデヒドを介在させて蛋白と
結合させて得られる複合体は、人のガス） ＩＪンに対
し特異的に反応する抗体を哺乳動物体内に産出させる抗
原として作用するという事実、及びかくして産出される
抗体は、ガス） ＩＪン類似の例えばコレシストキニン
ーパンクレオミン（ＣＣＫ−ＰＺ）やペンタガス） Ｉ
Ｊン等に対しては交叉性を示さず、ガストリンにのみ特
異的反応性を示し、それ故ラジオイムノアッセイ法によ
る人体内ガストリンの正確な定量を可能とし、ガストリ
ンの定量による診断薬等として有用であることを見い出
した。
本発明はこの新しい知見に基づいて完成されたものであ
る。
る。
即ち本発明は、式％式％
（１）
で表わされるガス） ＩＪン誘導体に一般式ＯＨＣ−（
ＣＨ２） ｎ−ＣＨＯ−・−・叩〔式中ｎは１〜５の整
数を示す〕で表わされるジアルデヒド類及び蛋白質を反
応させて得られるガス） ＩＪン誘導体−蛋白複合体か
ら成る抗原を嘩乳動物に投与し生成する抗体を採取する
ことを特徴とする抗体の製造法に係る。
ＣＨ２） ｎ−ＣＨＯ−・−・叩〔式中ｎは１〜５の整
数を示す〕で表わされるジアルデヒド類及び蛋白質を反
応させて得られるガス） ＩＪン誘導体−蛋白複合体か
ら成る抗原を嘩乳動物に投与し生成する抗体を採取する
ことを特徴とする抗体の製造法に係る。
本発明方法において出発原料として用いる上記ガストリ
ン誘導体即ちクリシルーリジルーグルタミニルークリシ
ループロリルートリプトフイルーロイシルーグルタミル
ーグルタミルーグルタミルグルタミルーグルタミルーア
ラニルーナロシルグリシルートリプトフイルーメナオニ
ルーアスパルナルーフェニルアラニンアミドは、本発明
者らが新たに合成単離した文献未載の新規化合物である
。
ン誘導体即ちクリシルーリジルーグルタミニルークリシ
ループロリルートリプトフイルーロイシルーグルタミル
ーグルタミルーグルタミルグルタミルーグルタミルーア
ラニルーナロシルグリシルートリプトフイルーメナオニ
ルーアスパルナルーフェニルアラニンアミドは、本発明
者らが新たに合成単離した文献未載の新規化合物である
。
これは一般のポリペブタイドの合成法例えば末端アミノ
酸に順次１個づつアミノ酸を縮合させる所謂ステップワ
イズ法、数個のフラグメントＯご分けてカップリングさ
せていく方法等に従い容易に製造できる。
酸に順次１個づつアミノ酸を縮合させる所謂ステップワ
イズ法、数個のフラグメントＯご分けてカップリングさ
せていく方法等に従い容易に製造できる。
また上記縮合方法自体も当分骨で一般に用いられている
慣用手段を例えばジシクロカルポジイミド法、アジド法
、混合酸無水物法、活性エステル法例えばｐ−ニトロフ
ェニルエステル法、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドエス
テル法、ｐ−ニトロフェニルエステル法、シアンメチル
エステル法等を適宜に採用できる。
慣用手段を例えばジシクロカルポジイミド法、アジド法
、混合酸無水物法、活性エステル法例えばｐ−ニトロフ
ェニルエステル法、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドエス
テル法、ｐ−ニトロフェニルエステル法、シアンメチル
エステル法等を適宜に採用できる。
また上記縮合反応に当り原料アミノ酸は、そのアミノ基
又はカルボキシル基のいずれか一方を保護するか或はカ
ルホキシル基を活性化して使用される。
又はカルボキシル基のいずれか一方を保護するか或はカ
ルホキシル基を活性化して使用される。
この原料ア□ノ酸υつアミン基の保護は之を例えばトシ
ル基、ベンジルオキシカルボニル基、第３級ブナルオキ
シ基、トリチル基等の如き通常の保護基と置換させるこ
とにより行なわれ、またアミノ酸のカルボキシル基の保
護は一般に之をエステル化することにより行なわれる。
ル基、ベンジルオキシカルボニル基、第３級ブナルオキ
シ基、トリチル基等の如き通常の保護基と置換させるこ
とにより行なわれ、またアミノ酸のカルボキシル基の保
護は一般に之をエステル化することにより行なわれる。
エステルとしては例えばメチルエステル、エチルエステ
ル、イソプロピルエステル、第３級ブナルエステル等の
低級アルキルエステル、ベンジルエステルの如きアラル
キルエステル等が挙げられる。
ル、イソプロピルエステル、第３級ブナルエステル等の
低級アルキルエステル、ベンジルエステルの如きアラル
キルエステル等が挙げられる。
また原料アミノ酸のカルボキシル基の活性化は通常之を
例えば酸クロライド、アジド、混合酸無水物等の形で用
いることによって行なわれる。
例えば酸クロライド、アジド、混合酸無水物等の形で用
いることによって行なわれる。
上記縮合反応においては、また例えばジシクロへキシル
カルボジイミド、テトラエナルビロホスフイト等の縮合
剤を用いることができ、この場合には上述の如くアミノ
酸のカルボキシル基を活性化せずして直接カルボキシル
基をアミン基と縮合させることが可能である。
カルボジイミド、テトラエナルビロホスフイト等の縮合
剤を用いることができ、この場合には上述の如くアミノ
酸のカルボキシル基を活性化せずして直接カルボキシル
基をアミン基と縮合させることが可能である。
上記縮合反応により生成するペプタイドの保護基の脱離
は、通常の脱離方法により容易に行なうことができ、具
体的に例えは接触還元、液体アンモニア−ナトリウム還
元法、加水分解等が挙げられる。
は、通常の脱離方法により容易に行なうことができ、具
体的に例えは接触還元、液体アンモニア−ナトリウム還
元法、加水分解等が挙げられる。
本発明方法は上記により得られるガス） ＩＪン誘導体
に上記一般式ＣＩ）で表わされるジアルデヒド類及び蛋
白質を反応させる。
に上記一般式ＣＩ）で表わされるジアルデヒド類及び蛋
白質を反応させる。
ここでジアルデヒド類としては、炭素数３〜７のジアル
デヒドがいずれも使用できる。
デヒドがいずれも使用できる。
例えはマロンアルデヒド、スクシノアルデヒド、グルタ
ルアルデヒド、アジポアルテヒド等を例示できる。
ルアルデヒド、アジポアルテヒド等を例示できる。
また蛋白質としては、通常の各種蛋白質が使用でき、例
えば馬血清アルフミン、牛血清アルブミン、兎血清アル
ブミン、ヒト血清アルブミン、馬血清グロブリン、牛血
清グロブリン、兎血清グロブリン、ヒト血清グロブリン
等を例示できる。
えば馬血清アルフミン、牛血清アルブミン、兎血清アル
ブミン、ヒト血清アルブミン、馬血清グロブリン、牛血
清グロブリン、兎血清グロブリン、ヒト血清グロブリン
等を例示できる。
上記反応は、水溶液もしくはｐＨ６〜８の通常の緩衝液
中好ましくはｐＨ６〜８の通常の緩衝液中Ｏ〜４０℃好
ましくは室温付近で行なわれ、１〜１５時間程度で完結
する。
中好ましくはｐＨ６〜８の通常の緩衝液中Ｏ〜４０℃好
ましくは室温付近で行なわれ、１〜１５時間程度で完結
する。
上記において緩衝液としては例えば１／１５ＭＩＪン酸
二水素カリウム−１／１５Ｍ四ホウ酸ナトリウム緩衝液
、１／１５Ｍリン酸二水素カリウムー１／１５リン酸水
素二ナトリウム緩衝液、０．２Ｍリン酸二水素カリウム
−０，２Ｎ水酸化ナトリウム緩衝液、０．２Ｍホウ酸−
０，２Ｍ塩化カリウム−０，２Ｎ水酸化ナトリウム緩衝
液、０．１Ｍ酢酸アンモニウム緩衝液等を例示できる。
二水素カリウム−１／１５Ｍ四ホウ酸ナトリウム緩衝液
、１／１５Ｍリン酸二水素カリウムー１／１５リン酸水
素二ナトリウム緩衝液、０．２Ｍリン酸二水素カリウム
−０，２Ｎ水酸化ナトリウム緩衝液、０．２Ｍホウ酸−
０，２Ｍ塩化カリウム−０，２Ｎ水酸化ナトリウム緩衝
液、０．１Ｍ酢酸アンモニウム緩衝液等を例示できる。
上記反応において各試薬の使用割合は、特に限定されな
いが通常式〔１〕で表わされるガストリン誘導体に対し
一般式叩で表わされるジアルデヒド類３〜１０倍モル及
び蛋白質３〜１０倍重量好ましくは３〜５倍重量使用す
るのがよい。
いが通常式〔１〕で表わされるガストリン誘導体に対し
一般式叩で表わされるジアルデヒド類３〜１０倍モル及
び蛋白質３〜１０倍重量好ましくは３〜５倍重量使用す
るのがよい。
上記反応によりガス） ＩＪン誘導体−蛋白複合体から
成る抗原を収得できる。
成る抗原を収得できる。
得られる抗原は反応後常法に従い、例えば透析法、ゲル
濾過法、分別沈殿法等により容易に単離精製できる。
濾過法、分別沈殿法等により容易に単離精製できる。
また該抗原は通常の凍結乾燥法により保存できる。
本発明は次いで上記により得られる抗原を哺乳動物に投
与し、生体内に抗体を産生させ、之を採取する。
与し、生体内に抗体を産生させ、之を採取する。
抗体の製造に供される哺乳動物としては特に制限はない
が、通常兎やモルモットを用いるのが望ましい。
が、通常兎やモルモットを用いるのが望ましい。
抗体の産生に当っては、上記により得られる抗原の所定
量を生理食塩水で適当濃度に希釈し、フロイントの補助
液（ＣｏｍｐｌｅｔｅＦ ｒｅｕｎｄｓ’Ａｄ ｊｕｖ
ａｎｔ ）と混合して懸濁液を調整し、之を哺乳動物に
投与すればよい。
量を生理食塩水で適当濃度に希釈し、フロイントの補助
液（ＣｏｍｐｌｅｔｅＦ ｒｅｕｎｄｓ’Ａｄ ｊｕｖ
ａｎｔ ）と混合して懸濁液を調整し、之を哺乳動物に
投与すればよい。
例えば兎に上記懸濁液を皮肉注射（抗原の量として０．
５〜２■／回）し、以後２週間毎に２〜１０ケ月好まし
くは４〜６ケ月間投与し免疫化させればよい。
５〜２■／回）し、以後２週間毎に２〜１０ケ月好まし
くは４〜６ケ月間投与し免疫化させればよい。
抗体の採取は、上記懸濁液の最終投与後洗体が多量産出
される時期、通常上記最終投与１〜２週間経過後、免疫
化された動物から採血し、之を遠心分離後血清を分離採
取することにより行なわれる。
される時期、通常上記最終投与１〜２週間経過後、免疫
化された動物から採血し、之を遠心分離後血清を分離採
取することにより行なわれる。
以下本発明の抗体を製造するための抗原の製造例及び該
抗原を製造するための原料であるガストリン誘導体の製
造例を参考例として、また本発明抗体の製造例を実施例
として挙げる。
抗原を製造するための原料であるガストリン誘導体の製
造例を参考例として、また本発明抗体の製造例を実施例
として挙げる。
尚各参考例に示すシリカゲル薄層クロマトグラフィー（
ＴＬＣ）分析結果は、次の条件で測定されたものである
。
ＴＬＣ）分析結果は、次の条件で測定されたものである
。
シリカゲル薄層板： Ｍｅｒｃｋ Ｇタイプ６０〔メル
ク社製） ＲｆＩ；展開溶媒としてｎ−ブタノール−酢酸水（４二
１：５）を使用 Ｒｆｎ；展開溶媒としてｎ−ブタノール−酢酸水ピリジ
ン（１５：３：１２：１０）を 使用 また参考例において、各種アミノ酸はグリシンを除き全
て１体であり、Ｚはカルボベンゾキシ基を、Ｂｓ１はベ
ンジル基を、Ｂａｃは第３級ブトキシカルボニル基を、
Ｍｅはメチル基を、ｔ−Ｂｕは第３級ブナル基を、夫々
表わす。
ク社製） ＲｆＩ；展開溶媒としてｎ−ブタノール−酢酸水（４二
１：５）を使用 Ｒｆｎ；展開溶媒としてｎ−ブタノール−酢酸水ピリジ
ン（１５：３：１２：１０）を 使用 また参考例において、各種アミノ酸はグリシンを除き全
て１体であり、Ｚはカルボベンゾキシ基を、Ｂｓ１はベ
ンジル基を、Ｂａｃは第３級ブトキシカルボニル基を、
Ｍｅはメチル基を、ｔ−Ｂｕは第３級ブナル基を、夫々
表わす。
参考例 １
（１）ＺＰｈｅＮＨ２の合成
ＺＰｈｅＯＨ７，４６９とＮ−メチルモルホリン２．８
１ｍ１のテトラヒドロフラン（ＴＨＦ ） ７０−溶液
を一１５°Ｃに冷却し、攪拌下クロルギ酸イソブチル３
．６４ｄを滴下する。
１ｍ１のテトラヒドロフラン（ＴＨＦ ） ７０−溶液
を一１５°Ｃに冷却し、攪拌下クロルギ酸イソブチル３
．６４ｄを滴下する。
３０秒後Ｎヒドロキシコハク酸イミド４．３１［の冷Ｔ
ＨＦ２０１ｒＬｌ溶液を加え０℃で５分、次いで室温で
１５分間攪拌する。
ＨＦ２０１ｒＬｌ溶液を加え０℃で５分、次いで室温で
１５分間攪拌する。
２８％アンモニア水１５．２１ｒＬｌの冷水５０ＴＬｌ
溶液を加え室温で２０時間攪拌する。
溶液を加え室温で２０時間攪拌する。
ＴＨＦを留去し飽和重曹を約２００１７１７加え、枦取
、水洗、乾燥する。
、水洗、乾燥する。
メタノール（Ｍｅ ０Ｈ）−酢酸エチルエステル（Ａｃ
ＣＥｔ） より再沈殿し５．３２９を得る（収率７１
．４０％）。
ＣＥｔ） より再沈殿し５．３２９を得る（収率７１
．４０％）。
融点：１５９−１６０℃、Ｒｆｌ：０．９４゜Ｒｆｎ：
０．９６ 、 （α）ｂ’＝ｓ、０°（濃度０．５０゜
Ｍｅ ＯＨ） 元素分析値（Ｃｌ７Ｈ１８Ｎ２０３として）ＣＨＮ 計算値（％） ６８．４４ ６．０８ ９．３９実測
値（％） ６８．５９ ６．２１ ９．４４（２）Ｚ
Ａｓｐ （ＯＢｚｌ）−ＰｈｅＮＨ２の合成２５％ＨＢ
ｒ−Ａｃ０Ｈ２０−を用いＺＰｈｅＮＨ２４，６１，９
を脱カルボベンゾキシ化（脱Ｚ化）する。
０．９６ 、 （α）ｂ’＝ｓ、０°（濃度０．５０゜
Ｍｅ ＯＨ） 元素分析値（Ｃｌ７Ｈ１８Ｎ２０３として）ＣＨＮ 計算値（％） ６８．４４ ６．０８ ９．３９実測
値（％） ６８．５９ ６．２１ ９．４４（２）Ｚ
Ａｓｐ （ＯＢｚｌ）−ＰｈｅＮＨ２の合成２５％ＨＢ
ｒ−Ａｃ０Ｈ２０−を用いＺＰｈｅＮＨ２４，６１，９
を脱カルボベンゾキシ化（脱Ｚ化）する。
ＲｆＩ：０．５４ＺＡｓ ｐ （ＯＢｚ １ ）ＯＨ５
，５１９とＮ−メチ／Ｌ’モルホリン１．５７ＴＬｌの
ＴＨＦ５０ＴＬｌ溶液を一１５℃に冷却し、攪拌下にり
田しギ酸イソブナル２０４ＴＬｌを滴下する。
，５１９とＮ−メチ／Ｌ’モルホリン１．５７ＴＬｌの
ＴＨＦ５０ＴＬｌ溶液を一１５℃に冷却し、攪拌下にり
田しギ酸イソブナル２０４ＴＬｌを滴下する。
３０秒後上記ＨＢｒ塩とトリエチルアミン（ＴＥＡ）２
．１６ｍｌの冷ジメナルホルムアミド（ＤＭＦ）３０ｍ
ｌ溶液を加えて０℃で５分間、次いで室温で１５分間攪
拌する。
．１６ｍｌの冷ジメナルホルムアミド（ＤＭＦ）３０ｍ
ｌ溶液を加えて０℃で５分間、次いで室温で１５分間攪
拌する。
ＴＨＦ及びＤＭＦを留去し、残渣をＡｃ０Ｅｔに溶解し
、該溶液をＩＮ−クエン酸、飽和炭酸水素ナトリウム水
（ＮａＨＣＯ２）、飽和食塩水（ＮａＣｌ）で洗浄後無
水硫酸す） ＩＪウム（Ｎａ ２ Ｓ ０４）で乾燥す
る。
、該溶液をＩＮ−クエン酸、飽和炭酸水素ナトリウム水
（ＮａＨＣＯ２）、飽和食塩水（ＮａＣｌ）で洗浄後無
水硫酸す） ＩＪウム（Ｎａ ２ Ｓ ０４）で乾燥す
る。
Ａｃ０Ｅｔを留去して固化する。
生成物をエタノール（ＥｔＯＨ，）より再結晶して６．
９２．９を得る（収率８９．０６％）。
９２．９を得る（収率８９．０６％）。
融点：１７０−１７１°Ｃ，Ｒｆｌ：０．９６゜Ｒｆ”
： ０．９８ 、 （α〕貨＝−２５，２°（濃度１．
００ＤＭＦ） 元素分析値（Ｃ２８Ｎ２９ Ｎｓ Ｏａとして）ＣＨＮ 計算値（％） ６６．７９ ５，８０ ８．３４実測
値（％） ６７．１４ ５．９４ ’８．４０３）
ＢｏＣＭｅｔ−Ａｓｐ−ＰｈｅＮＨ２の合成ＺＡｓ ｐ
（ＯＢｚ ｌ ）−Ｐｈ ｅ ＮＨ２６，８２ｇのＭ
ｅＯＨ（１００ｍ１） ｃ！： Ｉ Ｎ−ＨＣｌ１３．
５４ｍｌ溶液中パラジウム黒の存在下常温常圧で２０時
間接触還元する。
： ０．９８ 、 （α〕貨＝−２５，２°（濃度１．
００ＤＭＦ） 元素分析値（Ｃ２８Ｎ２９ Ｎｓ Ｏａとして）ＣＨＮ 計算値（％） ６６．７９ ５，８０ ８．３４実測
値（％） ６７．１４ ５．９４ ’８．４０３）
ＢｏＣＭｅｔ−Ａｓｐ−ＰｈｅＮＨ２の合成ＺＡｓ ｐ
（ＯＢｚ ｌ ）−Ｐｈ ｅ ＮＨ２６，８２ｇのＭ
ｅＯＨ（１００ｍ１） ｃ！： Ｉ Ｎ−ＨＣｌ１３．
５４ｍｌ溶液中パラジウム黒の存在下常温常圧で２０時
間接触還元する。
Ｒｆ、Ｉ：０．３８ＢｏＣＭｅｔＯＨ４，０５ｇ、Ｎ−
メチルモルホリン１．６５ｍ１及びクロルギ酸イソブナ
ル１．９７ｍ１を用いＴＨＦ５０ｒｒＬＡ中にて常温で
調製した混合酸無水物溶液に、上記で得た還元体（！：
ＴＥＡ１．８９ｍ１の冷ＤＭＦ３０１ｒＬｌ溶液を加え
て上記（２）と同様に攪拌、次いで処理して得られる生
成物を熱ＭｅＯＨで洗浄し６．０９９を得る（収率８８
．０７％）。
メチルモルホリン１．６５ｍ１及びクロルギ酸イソブナ
ル１．９７ｍ１を用いＴＨＦ５０ｒｒＬＡ中にて常温で
調製した混合酸無水物溶液に、上記で得た還元体（！：
ＴＥＡ１．８９ｍ１の冷ＤＭＦ３０１ｒＬｌ溶液を加え
て上記（２）と同様に攪拌、次いで処理して得られる生
成物を熱ＭｅＯＨで洗浄し６．０９９を得る（収率８８
．０７％）。
融点：１９６−１９８°Ｇ、Ｒｆｌ：０．９０゜Ｒｆ”
：０．８５ 、（α）”１’３−−３６．０°（濃度０
．５０ 、 ＤＭＦ ） 元素分析値（Ｃ２３Ｈ３４Ｎ２０□Ｓとして）ＨＮ 計算値（％） ５４．１０ ６．７１ １０．９７実
測値（％） ５４．０３ ６．９６ １０．８１４）
ＢｏＣＴｖｐ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ＝ＰｈｅＮＨ２Ｂｏ Ｃ
Ｍｅ ｔ−Ａｓ ｐ −Ｐｈ ｅ ＮＨ２６，０７ｊｉ
を無水トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）２４ｍｌに溶解して
室温にて２０分間放置する。
：０．８５ 、（α）”１’３−−３６．０°（濃度０
．５０ 、 ＤＭＦ ） 元素分析値（Ｃ２３Ｈ３４Ｎ２０□Ｓとして）ＨＮ 計算値（％） ５４．１０ ６．７１ １０．９７実
測値（％） ５４．０３ ６．９６ １０．８１４）
ＢｏＣＴｖｐ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ＝ＰｈｅＮＨ２Ｂｏ Ｃ
Ｍｅ ｔ−Ａｓ ｐ −Ｐｈ ｅ ＮＨ２６，０７ｊｉ
を無水トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）２４ｍｌに溶解して
室温にて２０分間放置する。
無水エーテルを加え、枦取、乾燥する。
ＲｆＩ：０．４５ＢｏＣＴｒｐＯＨ４，３５Ｌ Ｎ−メ
チルモルホリン１．４５ｍ１及びクロルギ酸インブナル
１．７３−を用いＴＨＦ５０ｍｌ中にて常温で調製した
混合酸無水物溶液に、上記で得たトリペプタイドＴ Ｆ
Ａ（！： Ｔ ＥＡ １．６７ｍｌの冷ＤＭＥ３０ｍ
ｌ溶液を加えて０℃で５分間、次いで室温で２０分間攪
拌する。
チルモルホリン１．４５ｍ１及びクロルギ酸インブナル
１．７３−を用いＴＨＦ５０ｍｌ中にて常温で調製した
混合酸無水物溶液に、上記で得たトリペプタイドＴ Ｆ
Ａ（！： Ｔ ＥＡ １．６７ｍｌの冷ＤＭＥ３０ｍ
ｌ溶液を加えて０℃で５分間、次いで室温で２０分間攪
拌する。
ＴＨＦ及びＤＭＦを留去し、残渣にＩＮ−クエン酸溶液
約２００ｍ１を加え枦取、水洗、乾燥する。
約２００ｍ１を加え枦取、水洗、乾燥する。
生成物を熱ＥｔＯＨで洗浄し４．７０ｇを得る（収率５
６．６８％）。
６．６８％）。
融点二２０１−２０３°Ｃ、Ｒｆ Ｉ：０．９６ 。
Ｂｆｍ ：０．８６ 、 Ｃα）”’−−３７．９°（
濃度Ｏ１Ｏ，５１、ＤＭＦ ） 元素分析値（Ｃ３４Ｈ４４Ｎ６０８Ｓとして）ＨＮ 計算値（％） ５８．６０ ６．３６ １２．０５実
測値（％） ５８，４８ ６．６０ １２．０７（５
）ＺＴｙｒ−ＧｌｙＯＭｅの合成 ＺＴｙ ｒＯＨ９，４６ｇ、ＨＧ ｌ ｙ ＯＭｅ 、
ＨＣ１３，７５９とＴＥＡ４．２０ｍ１の冷ＣＨ２Ｃ
ｌ２１５０ｒＩＬｌ溶液にジシクロへキシルカルボンイ
ミド６．１６．１’ｌを加え４℃で２０時間攪拌する。
濃度Ｏ１Ｏ，５１、ＤＭＦ ） 元素分析値（Ｃ３４Ｈ４４Ｎ６０８Ｓとして）ＨＮ 計算値（％） ５８．６０ ６．３６ １２．０５実
測値（％） ５８，４８ ６．６０ １２．０７（５
）ＺＴｙｒ−ＧｌｙＯＭｅの合成 ＺＴｙ ｒＯＨ９，４６ｇ、ＨＧ ｌ ｙ ＯＭｅ 、
ＨＣ１３，７５９とＴＥＡ４．２０ｍ１の冷ＣＨ２Ｃ
ｌ２１５０ｒＩＬｌ溶液にジシクロへキシルカルボンイ
ミド６．１６．１’ｌを加え４℃で２０時間攪拌する。
析出物を枦去、枦液を濃縮し残渣を上記（２）と同様に
処理後生成物をＡｃ０Ｅｔ−エーテルより再沈殿を行な
い７．６１ｇを得る（収率６５．６５％）。
処理後生成物をＡｃ０Ｅｔ−エーテルより再沈殿を行な
い７．６１ｇを得る（収率６５．６５％）。
融点：１３６−１３８°Ｃ、Ｒｆ Ｌｏ、９２ 。
Ｒｆｌ’ ：０．９５ 、 （α）２１−−２２．９°
（濃度Ｏ，５３、ＤＭＦ ） 元素分析値（Ｃ２０Ｈ２２Ｎ２０ａとして）ＣＨＮ 計算値（％） ６２，１７ ５．７４ ７．２５実測
値（％） ６２，１５ ５．９７ ７．４４（６）
ＺＡＩ ａ Ｔｙ ｒ−Ｇｌ ｙＯＭｅの合成ＺＴ
ｙ ｒ −Ｇ １ ｙ ＯＭｅ ７．６０９をＭｅＯＨ
１００ＴＬｌ及びＩ Ｎ −ＨＣｌ １９．６７ｍｌに
溶解し上畝３）と同様にして接触還元する。
（濃度Ｏ，５３、ＤＭＦ ） 元素分析値（Ｃ２０Ｈ２２Ｎ２０ａとして）ＣＨＮ 計算値（％） ６２，１７ ５．７４ ７．２５実測
値（％） ６２，１５ ５．９７ ７．４４（６）
ＺＡＩ ａ Ｔｙ ｒ−Ｇｌ ｙＯＭｅの合成ＺＴ
ｙ ｒ −Ｇ １ ｙ ＯＭｅ ７．６０９をＭｅＯＨ
１００ＴＬｌ及びＩ Ｎ −ＨＣｌ １９．６７ｍｌに
溶解し上畝３）と同様にして接触還元する。
ＲｆＩ：０．５５ＺＡｌａＯＨ５，２５，９，Ｎ−メナ
ＩＬ／ モ／Ｌ／ホリン２．３９７７１１及びりＯＷＬ
／ギ酸イソジイソブチル２ｍ１を用いＴＩ（Ｆ６０１ｒ
Ｌｌ中にて常温で調製した混合酸無水物溶液に、上記で
得たトリペプタイド塩酸塩とＴＥＡ２．７４ｍ１の冷Ｄ
ＭＦ４０ｍＡ溶液を加えて０°Ｃで５分間、次いで室温
で２０分間攪拌する。
ＩＬ／ モ／Ｌ／ホリン２．３９７７１１及びりＯＷＬ
／ギ酸イソジイソブチル２ｍ１を用いＴＩ（Ｆ６０１ｒ
Ｌｌ中にて常温で調製した混合酸無水物溶液に、上記で
得たトリペプタイド塩酸塩とＴＥＡ２．７４ｍ１の冷Ｄ
ＭＦ４０ｍＡ溶液を加えて０°Ｃで５分間、次いで室温
で２０分間攪拌する。
以下上記（５）と同様にして６．８２９を得る（収率７
６．０６％）。
６．０６％）。
融点：１４５−１４６°Ｃ，Ｒｆｌ：０．９４゜Ｒｆ川
：０．９４．（α）１８−−１７．１°（濃度Ｏ，５３
、ＤＭＦ ） 元素分析値（Ｃ２３Ｈ２□Ｎ３０７として）ＣＨＮ 計算値（％） ６０，３９ ５，９５ ９．１９実測
値（％） ６０．８９ ６．５５ ９．４２（７）
ＺＧｌｕ（０−ｔ−Ｂｕ） −Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｇｌ
ｙＯＭｅの合成 ＺＡＩ ａ −Ｔｙ ｒ −Ｇｌ ｙＯＭｅ ３．３０
ｊｉをＭｅＯＨ５０ｒｎｌに溶解し上記（３）と同様
にして接触還元する。
：０．９４．（α）１８−−１７．１°（濃度Ｏ，５３
、ＤＭＦ ） 元素分析値（Ｃ２３Ｈ２□Ｎ３０７として）ＣＨＮ 計算値（％） ６０，３９ ５，９５ ９．１９実測
値（％） ６０．８９ ６．５５ ９．４２（７）
ＺＧｌｕ（０−ｔ−Ｂｕ） −Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｇｌ
ｙＯＭｅの合成 ＺＡＩ ａ −Ｔｙ ｒ −Ｇｌ ｙＯＭｅ ３．３０
ｊｉをＭｅＯＨ５０ｒｎｌに溶解し上記（３）と同様
にして接触還元する。
ＲｆＩ：０．４０上記で得られる還元体とＴＥＡｌ、０
１ｍ１のＤＭＦ４０ｙｄ溶液に、ＺＧｌｕ （０−ｔ
−Ｂｕ ）ＯＮＨ８（ＮＨ８はＮ−ヒｆｊｏキシコハク
酸エステルを意味する）３．１３．９を加え、室温にて
２０時間放置する。
１ｍ１のＤＭＦ４０ｙｄ溶液に、ＺＧｌｕ （０−ｔ
−Ｂｕ ）ＯＮＨ８（ＮＨ８はＮ−ヒｆｊｏキシコハク
酸エステルを意味する）３．１３．９を加え、室温にて
２０時間放置する。
ＤＭＦを留去し、残渣を上記（２）（ｌ！：同様に処理
後Ｍｅ ０Ｈ−Ａ ｃ ＯＥ ｔより再沈殿を行ない、
４．３１ｇを得る（収率９３．１５％）。
後Ｍｅ ０Ｈ−Ａ ｃ ＯＥ ｔより再沈殿を行ない、
４．３１ｇを得る（収率９３．１５％）。
融点：１５０−１５０°Ｃ，ＲｆＩ： ０．９６ 。
ＲｆＩＩ： ０．９８ 、 （α）２’＝−１７，９°
（濃度Ｏ１Ｏ，５０、ＤＭＦ ） 元素分析値（Ｃ３□Ｈ４２Ｎ４０１ｏとして）ＣＨＮ 計算値（％） ５９．８０ ６．５９ ８．７２実測
値（％） ５９．６７ ６．９９ ８．８５８）
ＺＧｌｕ（０−ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｕ（０−ｔ−Ｂｕ）−
Ａ ｌ ａ−Ｔｙ ｒ −Ｇｌ ｙ ＯＭｅの合成ＺＧ
Ｉ ｕ （０−ｔ−Ｂｕ ）−Ａｌ ａ −Ｔｙ ｒ−
ＧｌｙＯＭｅ３．００９をＭｅ ＯＨ５０ｒｒｄｌ中に
て上記（３）と同様にして接触還元する。
（濃度Ｏ１Ｏ，５０、ＤＭＦ ） 元素分析値（Ｃ３□Ｈ４２Ｎ４０１ｏとして）ＣＨＮ 計算値（％） ５９．８０ ６．５９ ８．７２実測
値（％） ５９．６７ ６．９９ ８．８５８）
ＺＧｌｕ（０−ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｕ（０−ｔ−Ｂｕ）−
Ａ ｌ ａ−Ｔｙ ｒ −Ｇｌ ｙ ＯＭｅの合成ＺＧ
Ｉ ｕ （０−ｔ−Ｂｕ ）−Ａｌ ａ −Ｔｙ ｒ−
ＧｌｙＯＭｅ３．００９をＭｅ ＯＨ５０ｒｒｄｌ中に
て上記（３）と同様にして接触還元する。
ＲｆＩ ： ０．７０上記で得られる還元体とＴＦＡｏ
、６５ＴＬｌのＤＭＦ ３０ＴｒＬｌ溶液にＺＧｌｕ
（０−ｔ−Ｂｕ ）ＯＮＨ８２，０３ｇを加え、室温に
て２０分間放置し、以下上記（７）（ｌ！：同様にして
２．７９ｇを得る（収率７２．２８％）。
、６５ＴＬｌのＤＭＦ ３０ＴｒＬｌ溶液にＺＧｌｕ
（０−ｔ−Ｂｕ ）ＯＮＨ８２，０３ｇを加え、室温に
て２０分間放置し、以下上記（７）（ｌ！：同様にして
２．７９ｇを得る（収率７２．２８％）。
融点：１６４−１６６°Ｃ，Ｒｆｌ： ０．９５ 。
Ｒｆｌ： ０．９８ 、 （α〕２１−−２１．２°（
濃度０．５７ 、 ＤＭＦ ） 元素分析値（Ｃ，１Ｈ，□Ｎ５０１３として）ＣＨＮ 計算値（％） ５９．４８ ６．９４ ８．４６実測
値（％） ５９．１４ ７，２５ ８．５２９）Ｂｏ
ＣＧｌｕ（０−ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｕ（０−ｔ−Ｂｕ）−
Ｇｌ ｕ （０−ｔ−Ｂｕ ） −Ａｌ ａ−Ｔｙｒ−
ＧｌｙＯＭｅ。
濃度０．５７ 、 ＤＭＦ ） 元素分析値（Ｃ，１Ｈ，□Ｎ５０１３として）ＣＨＮ 計算値（％） ５９．４８ ６．９４ ８．４６実測
値（％） ５９．１４ ７，２５ ８．５２９）Ｂｏ
ＣＧｌｕ（０−ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｕ（０−ｔ−Ｂｕ）−
Ｇｌ ｕ （０−ｔ−Ｂｕ ） −Ａｌ ａ−Ｔｙｒ−
ＧｌｙＯＭｅ。
Ｈ２０の合成
ＺＧＩ ｕ （０−ｔ−Ｂｕ ）−Ｇｌ ｕ （０−ｔ
−Ｂｕ ）Ａｌａ−Ｔｙｒ−ＧｌｙＯＭｅ １．７０
９をＭｅＯＨ５０１ｎｌに溶解し上記（３）と同様にし
て接触還元する。
−Ｂｕ ）Ａｌａ−Ｔｙｒ−ＧｌｙＯＭｅ １．７０
９をＭｅＯＨ５０１ｎｌに溶解し上記（３）と同様にし
て接触還元する。
ＲｆＩ：０．６０ＢｏＣＧｌｕ（０−ｔ−Ｂｕ）ＯＨ０
，７５ｊｉ、Ｎ−メチルモルホリン０．２５ＷＬｌ及び
クロルギ酸イソブチル０．２９ｒｒＬｌを用いＴＨＦ２
０ｒＩＬｌ中にて常温で調製した混合酸無水物溶液に、
上記で得た還元体ａＴＥＡ０．２９１ｒＬ７の冷ＤＭＦ
２０ｍｌ溶液を加えて０℃で５分間、次いで室温で２０
分間攪拌する。
，７５ｊｉ、Ｎ−メチルモルホリン０．２５ＷＬｌ及び
クロルギ酸イソブチル０．２９ｒｒＬｌを用いＴＨＦ２
０ｒＩＬｌ中にて常温で調製した混合酸無水物溶液に、
上記で得た還元体ａＴＥＡ０．２９１ｒＬ７の冷ＤＭＦ
２０ｍｌ溶液を加えて０℃で５分間、次いで室温で２０
分間攪拌する。
次いで上記（８）に準じて行ない、ＡｃｏＥｔ石油ベン
ジンにて再沈殿を行ないＬ７２ｇを得る（収率８４．１
４％）。
ジンにて再沈殿を行ないＬ７２ｇを得る（収率８４．１
４％）。
融点：１９９−２００℃、Ｒｆｌ：０．９８゜Ｒｆｎ
：０．９８ 、 Ｃα］２０＝ −２４，７°（濃度Ｏ
，４７、ＤＭＦ ） 元素分析値（Ｃ４７Ｈ７４Ｎ６０１６・Ｈ２Ｏとして）
ＣＨＮ 計算値（％） ５６．６１ ７，６８ ８．４３実測
値（％） ５６．９７ ７．９４ ８．４４（１０）
ＢｏＣＧｌ ｕ （０−ｔ−Ｂｕ ）−Ｇｌｕ （０
−ｔ−Ｂｕ ）Ｇｌ ｕ （０−ｔ−Ｂｕ ）−Ａｌ
ａ−Ｔｙ ｒ−ＧｌｙＮ）ｌ’ＪＨ２の合成 りｏＣＧｌ ｎ （０−ｔ −Ｂｕ ）−Ｇｌ ｕ （
０−ｔ−Ｂｕ ）Ｇｌ ｕ （０−ｔ−Ｂｕ ）−Ａ
ｌ ａ −Ｔｙ ｒ−Ｇｌ ｙ ＯＭｅ ・Ｈ２Ｏ１，
５２ｇをＭｅＯＨに溶解し、ＮＨ２ＮＨ２・Ｈ２Ｏ０，
３８ｒＩｌｌを加えて室温にて２０時間放置する。
：０．９８ 、 Ｃα］２０＝ −２４，７°（濃度Ｏ
，４７、ＤＭＦ ） 元素分析値（Ｃ４７Ｈ７４Ｎ６０１６・Ｈ２Ｏとして）
ＣＨＮ 計算値（％） ５６．６１ ７，６８ ８．４３実測
値（％） ５６．９７ ７．９４ ８．４４（１０）
ＢｏＣＧｌ ｕ （０−ｔ−Ｂｕ ）−Ｇｌｕ （０
−ｔ−Ｂｕ ）Ｇｌ ｕ （０−ｔ−Ｂｕ ）−Ａｌ
ａ−Ｔｙ ｒ−ＧｌｙＮ）ｌ’ＪＨ２の合成 りｏＣＧｌ ｎ （０−ｔ −Ｂｕ ）−Ｇｌ ｕ （
０−ｔ−Ｂｕ ）Ｇｌ ｕ （０−ｔ−Ｂｕ ）−Ａ
ｌ ａ −Ｔｙ ｒ−Ｇｌ ｙ ＯＭｅ ・Ｈ２Ｏ１，
５２ｇをＭｅＯＨに溶解し、ＮＨ２ＮＨ２・Ｈ２Ｏ０，
３８ｒＩｌｌを加えて室温にて２０時間放置する。
エーテルを加えて炉取、乾燥する。生成物を冷ＭｅＯＨ
ｊこより洗浄して１．３１９を得る（収率８６．２１％
）。
ｊこより洗浄して１．３１９を得る（収率８６．２１％
）。
融点：２０１−２０２°Ｃ，Ｒｆｌ：０．９０゜Ｒｆ川
：ｏ、９６．Ｃα〕２０＝−２６，０°（濃度Ｏ９Ｏ，
５６、ＤＭＦ ） 元素分析値（Ｃ４６Ｈ７４Ｎ８ ｏ１５・Ｈ２Ｏ（！：
して）ＨＮ 計算値（％） ５５．３５ ７．７８ １１．２２実
測値（％） ５５．４８ ７．９６ １１．１７（１
１） ＨＧＩ ｕ −Ｇｌ ｕ−Ｇｌ ｕ−Ａｌ ａ
−Ｔｙ ｒ −Ｇｌ ｙ−Ｔｒｐ −Ｍｅ ｔ−Ａｓｐ
−ＰｈｅＮＨ２の合成りｏＣＴｒｐ −Ｍｅ ｔ−Ａｓ
ｐ−ＰｈｅＮＨ２０，５５ｇをＴＦＡ５ＴＬｌ、！：、
アニソール０．１ ｍｌに溶解して室温にて１５分間放
置する。
：ｏ、９６．Ｃα〕２０＝−２６，０°（濃度Ｏ９Ｏ，
５６、ＤＭＦ ） 元素分析値（Ｃ４６Ｈ７４Ｎ８ ｏ１５・Ｈ２Ｏ（！：
して）ＨＮ 計算値（％） ５５．３５ ７．７８ １１．２２実
測値（％） ５５．４８ ７．９６ １１．１７（１
１） ＨＧＩ ｕ −Ｇｌ ｕ−Ｇｌ ｕ−Ａｌ ａ
−Ｔｙ ｒ −Ｇｌ ｙ−Ｔｒｐ −Ｍｅ ｔ−Ａｓｐ
−ＰｈｅＮＨ２の合成りｏＣＴｒｐ −Ｍｅ ｔ−Ａｓ
ｐ−ＰｈｅＮＨ２０，５５ｇをＴＦＡ５ＴＬｌ、！：、
アニソール０．１ ｍｌに溶解して室温にて１５分間放
置する。
この溶液に無水エーテルを加え枦取乾燥する。
Ｒｆ Ｉ ：０．６６ＢｏＣＧ１ ｕ （０−ｔ−Ｂｕ
）−Ｇｌ ｕ （０−ｔ −Ｂｕ ）Ｇｌ ｕ （０
−ｔ−Ｂｕ ）−Ａｌ ａ −Ｔｙ ｒ −Ｇ１ｙＮＨ
ＮＨ２０，７８ｇと６Ｎ−ＮＣ１−ジオキサン０．４０
ｙｄのＤＭＦ５ｒｒｌｌ溶液を一１５℃に冷却する。
）−Ｇｌ ｕ （０−ｔ −Ｂｕ ）Ｇｌ ｕ （０
−ｔ−Ｂｕ ）−Ａｌ ａ −Ｔｙ ｒ −Ｇ１ｙＮＨ
ＮＨ２０，７８ｇと６Ｎ−ＮＣ１−ジオキサン０．４０
ｙｄのＤＭＦ５ｒｒｌｌ溶液を一１５℃に冷却する。
亜硝 く酸イソアミル０．１２ｄを加え５分間攪拌後Ｔ
ＥＡ０．３４ｙｄを加えて中和する。
ＥＡ０．３４ｙｄを加えて中和する。
上記で得たテトラペプタイドＴＥＡ塩とＴＥＡｏ、１１
ＴＬｌの冷ＤＭＦ５ｍｌ溶液を加え４℃にて２０時間攪
拌する。
ＴＬｌの冷ＤＭＦ５ｍｌ溶液を加え４℃にて２０時間攪
拌する。
ＤＭＦを留去した後ブタノール（ＢｕＯＨ）−２％酢酸
（ＡｃＯＨ）系による向流分配を行いＢｕ ＯＨ層を濃
縮する。
（ＡｃＯＨ）系による向流分配を行いＢｕ ＯＨ層を濃
縮する。
エーテルを加えて沈殿酒取、乾燥する。
生成物をＭｅＯＨ洗浄し枦取、乾燥する。
この結晶をＴＦＡ４ｍｌ及びアニソール０．５ ｍｌ溶
液に溶解し室温にて１時間放置する。
液に溶解し室温にて１時間放置する。
無水エーテルを加えて沈殿、Ｐ取、乾燥する。
この結晶をＢｕＯＨ−２％ＡｃＯＨ系による向流分配を
行い目的物０．４５９を得る。
行い目的物０．４５９を得る。
（収率４１．７４％）。
Ｒｆ Ｉ ：０．３５ 、 Ｒｆｎ： ０．５０ 。
〔α）２０＝ ２５．ｏｏ（濃度０．５１．５０％Ａ
ｃ０Ｈ） 元素分析値（Ｃ５８Ｈ７４Ｎｌ□０１９Ｓ・４Ｈ２０と
して） ＨＮ 計算値（％） ５２．１６ ６．４６ １２．１３実
測値（％） ５１．．７０ ６．１３ １２．４７得
られるアミノ酸の分析結果を次に示す。
ｃ０Ｈ） 元素分析値（Ｃ５８Ｈ７４Ｎｌ□０１９Ｓ・４Ｈ２０と
して） ＨＮ 計算値（％） ５２．１６ ６．４６ １２．１３実
測値（％） ５１．．７０ ６．１３ １２．４７得
られるアミノ酸の分析結果を次に示す。
Ａｓｐ：１．００、Ｇｌｕ：３．０１、Ｇｕｙ ： １
．０１、Ａｌａ：１．０６ 、 Ｍｅ ｔ 二 １．０
２ 、 Ｔｙｒ：０．８３ 、Ｐｈｅ：０．９１ （１２） ＺＧＩ ｕ （０−ｔ −Ｂｕ ）−Ｇｌ
ｕ （Ｏｔ−Ｂｕ ）ＯＥｔの合成 ＺＧＩ ｕ （０−ｔ−Ｂｕ ）ＯＥｔ ４．５０
、！ｉ’をＭｅＯＨ８Ｏｒｎｌ中にて上脇３）と同様に
して接触還元する。
．０１、Ａｌａ：１．０６ 、 Ｍｅ ｔ 二 １．０
２ 、 Ｔｙｒ：０．８３ 、Ｐｈｅ：０．９１ （１２） ＺＧＩ ｕ （０−ｔ −Ｂｕ ）−Ｇｌ
ｕ （Ｏｔ−Ｂｕ ）ＯＥｔの合成 ＺＧＩ ｕ （０−ｔ−Ｂｕ ）ＯＥｔ ４．５０
、！ｉ’をＭｅＯＨ８Ｏｒｎｌ中にて上脇３）と同様に
して接触還元する。
Ｒｆｌ：０．７０
得られた還元体のＴＨＦ３０１ｒＬｌ浴液にＺＧＩ ｕ
（Ｏｔ Ｂｕ ） ０ＮＨ８５，３４＆を加え室温に
て２０時間放置する。
（Ｏｔ Ｂｕ ） ０ＮＨ８５，３４＆を加え室温に
て２０時間放置する。
以下上記（２）と同様に処理して油状の目的物５．９１
ｇを得る。
ｇを得る。
ＲｆＩ：０８５Ｒｆ ｍ： 〇、９０
（１３） ＢｏＣＬｅ ｕ−Ｇｌ ｕ （０−ｔ−Ｂｕ
）−Ｇｌ ｕ （０−ｔ−Ｂｕ）ＯＥｔの合成 ＺＧＩ ｕ （０−ｔ−Ｂｕ ）−Ｇｌ ｕ （０−ｔ
−Ｂｕ ） ＯＥ ｔ５．９１ｇをＭｅＯＨｌ ００ｍ
１中にて上記（３）と同様にして接触還元する。
）−Ｇｌ ｕ （０−ｔ−Ｂｕ）ＯＥｔの合成 ＺＧＩ ｕ （０−ｔ−Ｂｕ ）−Ｇｌ ｕ （０−ｔ
−Ｂｕ ） ＯＥ ｔ５．９１ｇをＭｅＯＨｌ ００ｍ
１中にて上記（３）と同様にして接触還元する。
Ｒｆｌ：０．７２ＢｏＣＬｅｕＯＨ−Ｈ２Ｏ３，２０ｇ
、Ｎ−メチルモルホリン１．３１ｍ１及びクロルキ酸イ
ソブナル１．５２ｍ１を用いＴＨＦ３０ｍＡ中にて常温
で調製した混合酸無水物溶液に、上記で得た還元体とＴ
ＥＡｌ、５０ｍ１の冷ＴＨＦ２０ｍ溶液を加えて０°Ｃ
で５分間、次いで室温で２０分間攪拌する。
、Ｎ−メチルモルホリン１．３１ｍ１及びクロルキ酸イ
ソブナル１．５２ｍ１を用いＴＨＦ３０ｍＡ中にて常温
で調製した混合酸無水物溶液に、上記で得た還元体とＴ
ＥＡｌ、５０ｍ１の冷ＴＨＦ２０ｍ溶液を加えて０°Ｃ
で５分間、次いで室温で２０分間攪拌する。
以下上記（２）と同様に処理後石油ベンジンを加えて固
化する。
化する。
Ａｃ０Ｅｔ−石油ベンジンより再沈殿して４．６３９を
得る（収率６８．７１％）。
得る（収率６８．７１％）。
融点：１１４−１１５°Ｃ，Ｒｆｌ二０．９３゜Ｒｆｌ
ｌ ：０．７５ 、 （α）２２＝−３６，２°（濃度
Ｏ，５４，、ＭｅＯＨ） 元素分析値（Ｃ３１Ｎ５５ Ｎ３０ｔｏ として）ＣＨ
Ｎ 計算値（％） ５９．１０ ８．７９ ６．６７実測
値（％） ５９．１１ ９．３７ ６．７０（１４）
ＢｏＣＬｅ ｕ−Ｇｌ ｕ （０−ｔ−Ｂｕ ）−Ｇ
ｌ ｕ （０−ｔ−Ｂｕ）ＮＨＮＨ２の合成 りｏ ＣＬｅ ｕ−Ｇｌ ｕ （０−ｔ−Ｂｕ ）−Ｇ
ｌ ｕ （０−ｔ−Ｂｕ ）ＯＥｔＯ，９４ｇをＭｅ
ＯＨ１０ｍｌ！に溶解し、ＮＨ２ＮＨ２・Ｎ２００．８
３ ｍｌを加えて２０時間放置する。
ｌ ：０．７５ 、 （α）２２＝−３６，２°（濃度
Ｏ，５４，、ＭｅＯＨ） 元素分析値（Ｃ３１Ｎ５５ Ｎ３０ｔｏ として）ＣＨ
Ｎ 計算値（％） ５９．１０ ８．７９ ６．６７実測
値（％） ５９．１１ ９．３７ ６．７０（１４）
ＢｏＣＬｅ ｕ−Ｇｌ ｕ （０−ｔ−Ｂｕ ）−Ｇ
ｌ ｕ （０−ｔ−Ｂｕ）ＮＨＮＨ２の合成 りｏ ＣＬｅ ｕ−Ｇｌ ｕ （０−ｔ−Ｂｕ ）−Ｇ
ｌ ｕ （０−ｔ−Ｂｕ ）ＯＥｔＯ，９４ｇをＭｅ
ＯＨ１０ｍｌ！に溶解し、ＮＨ２ＮＨ２・Ｎ２００．８
３ ｍｌを加えて２０時間放置する。
次いでエーテルを加えて沈殿、秤取、乾燥する。
この結晶をＭｅＯＨ−エーテルにより再沈殿して０．７
２ｇを得る（収率７８．００％）。
２ｇを得る（収率７８．００％）。
融点：２４４−２４５°Ｃ２Ｒｆ」二〇、８３゜Ｒｆ川
：ｏ、ｓ５．（α〕２２−−１６．９°（濃度Ｏ，５３
、ＤＭＦ ） 元素分析値（Ｃ２，Ｈ，Ｎ５０．として）ＣＨＮ 計算値（％） ５６．５７ ８．６８ １１．３７実
測値（％） ５６．６５ ８．６３ １１．１１（１
５） ＨＬｅ ｕ−Ｇｌ ｕ−Ｇｌ ｕ−Ｇｌ ｕ −
Ｇｌ ｕ−Ｇｌ ｕ −Ａｌ ａ−Ｔｙ ｒ−Ｇｌｙ−
Ｔｒ ｐ −Ｍｅ ｔ −Ａｓ ｐ −ＰｈｅＮＨ２・
５Ｈ２０の合成 りｏ ＣＬｅ ｕ−Ｇｌ ｕ （０−ｔ −Ｂｕ ）−
Ｇｌ ｕ （０−ｔＢｕ ） ＮＨ２Ｈ２３１６Ｔｎ９
．６Ｎ−ＨＣｌ−ジオキサ７０．２６ＴＬｌ及び１０％
亜硝酸インアミル−ＤＭＦｏ、６９ｄを使用し、ＤＭＦ
５７７２７１！中にて常法により得られたアジド溶液を
還元体デカペブタイド（上記（１１）で得られるもの）
と１０％ＴＥＡ−ＤＭＦＯ，８６ｍ１のＤＭＦ８１ｎｌ
及び０．１ｍｌの水溶液の混合液に加えて４℃にて２０
時間攪拌する。
：ｏ、ｓ５．（α〕２２−−１６．９°（濃度Ｏ，５３
、ＤＭＦ ） 元素分析値（Ｃ２，Ｈ，Ｎ５０．として）ＣＨＮ 計算値（％） ５６．５７ ８．６８ １１．３７実
測値（％） ５６．６５ ８．６３ １１．１１（１
５） ＨＬｅ ｕ−Ｇｌ ｕ−Ｇｌ ｕ−Ｇｌ ｕ −
Ｇｌ ｕ−Ｇｌ ｕ −Ａｌ ａ−Ｔｙ ｒ−Ｇｌｙ−
Ｔｒ ｐ −Ｍｅ ｔ −Ａｓ ｐ −ＰｈｅＮＨ２・
５Ｈ２０の合成 りｏ ＣＬｅ ｕ−Ｇｌ ｕ （０−ｔ −Ｂｕ ）−
Ｇｌ ｕ （０−ｔＢｕ ） ＮＨ２Ｈ２３１６Ｔｎ９
．６Ｎ−ＨＣｌ−ジオキサ７０．２６ＴＬｌ及び１０％
亜硝酸インアミル−ＤＭＦｏ、６９ｄを使用し、ＤＭＦ
５７７２７１！中にて常法により得られたアジド溶液を
還元体デカペブタイド（上記（１１）で得られるもの）
と１０％ＴＥＡ−ＤＭＦＯ，８６ｍ１のＤＭＦ８１ｎｌ
及び０．１ｍｌの水溶液の混合液に加えて４℃にて２０
時間攪拌する。
ＤＭＦを留去し、ＢｕＯＨ−２％ＡｃＯＨ系による向流
分配を行い、ＢｕＯＨ層を濃縮した後エーテルを加えて
秤取、乾燥する。
分配を行い、ＢｕＯＨ層を濃縮した後エーテルを加えて
秤取、乾燥する。
Ｍｅ ０Ｈ−Ａｃ ＯＥ ｔにより再沈殿する。
収量２５７７％
この結晶をＴＥＡ３ｍｌとアニソール０．２ｒｕｌｌ溶
液に溶解し室温にて１時間放置する。
液に溶解し室温にて１時間放置する。
無水エーテルを加えてＰ取、乾燥する。
この生成物を１−ＢｕＯＨ：ＭｅＯＨ：Ｎ２０ （１：
１ ： １ ）溶液１５０Ｔｌｌに溶解しＩＲＡ−４
１０樹脂を用い酢酸型に変換後セファーデツクスＧ−２
５カラム（３Ｘ１９０ｃＩｒＬ）にかけ５０％酢酸を溶
出液として１０ｇずつ分取する。
１ ： １ ）溶液１５０Ｔｌｌに溶解しＩＲＡ−４
１０樹脂を用い酢酸型に変換後セファーデツクスＧ−２
５カラム（３Ｘ１９０ｃＩｒＬ）にかけ５０％酢酸を溶
出液として１０ｇずつ分取する。
フラクションＡ６５〜７１を集めて凍結乾燥する。
収量８１ Ｉｖ（収率２４．１１ ％） 、 Ｒｆ Ｉ
：０４０゜Ｒｆ” ： ０．６１ 。
：０４０゜Ｒｆ” ： ０．６１ 。
Ｃａ ）”−−４２，２°（濃度０．５３，５０％Ａｃ
０Ｈ） 元素分析値（Ｃ７４Ｈ９９Ｎｌ ５０２６ Ｓ・５Ｈ２
０として） ＨＮ 計算値（％） ５１．１７ ６．３２ １２．０９実
測値（％） ５１．２１ ５．８８ １１．５９（１
６）ＺＧｌｙ−Ｐｒｏ−ＴｒｐＯＨの合成ＺＧｌｙ−Ｐ
ｒｏＯＨ３，０６９１Ｎ−メナルモルホリン１．０２１
ｒＬｌ及びクロルギ酸インブチル１．３２ｄを用い、Ｔ
ＨＦ４０ｄ中にて常法により調製した混合酸無水物溶液
にＮ−ヒドロキシコハク酸イミド１．７：ｌのＴＨＦ１
０１ｎｌ溶液を加え０℃にて５分間、次いで室温にて２
０分間攪拌する。
０Ｈ） 元素分析値（Ｃ７４Ｈ９９Ｎｌ ５０２６ Ｓ・５Ｈ２
０として） ＨＮ 計算値（％） ５１．１７ ６．３２ １２．０９実
測値（％） ５１．２１ ５．８８ １１．５９（１
６）ＺＧｌｙ−Ｐｒｏ−ＴｒｐＯＨの合成ＺＧｌｙ−Ｐ
ｒｏＯＨ３，０６９１Ｎ−メナルモルホリン１．０２１
ｒＬｌ及びクロルギ酸インブチル１．３２ｄを用い、Ｔ
ＨＦ４０ｄ中にて常法により調製した混合酸無水物溶液
にＮ−ヒドロキシコハク酸イミド１．７：ｌのＴＨＦ１
０１ｎｌ溶液を加え０℃にて５分間、次いで室温にて２
０分間攪拌する。
この溶液にＨＴｒｐＯＨ２，０４ｇとＴＥＡｌ、４０７
ｄの水５ｍ１．：！： ＤＭＦ ２０ｍｌ！の混合溶液
を加え室温にて２０時間放置する。
ｄの水５ｍ１．：！： ＤＭＦ ２０ｍｌ！の混合溶液
を加え室温にて２０時間放置する。
ＴＨＦ及びＤＭＦを留去しＮａＨＣＯ３溶液でｐｌ−１
８としＡｃ０Ｅｔ抽出を行った後水層を３Ｎ−クエン酸
により酸性とし、次いでＡｃ０Ｅｔ抽出を行う。
８としＡｃ０Ｅｔ抽出を行った後水層を３Ｎ−クエン酸
により酸性とし、次いでＡｃ０Ｅｔ抽出を行う。
Ｎａ２８０４ にて乾燥後Ａｃ０Ｅｔを留去し、次いで
エーテルを加えて秤取、乾燥する。
エーテルを加えて秤取、乾燥する。
Ａｃ０Ｅｔ−エーテルより再沈殿を行い、３．４１を得
る（収率６９．２３ ％）。
る（収率６９．２３ ％）。
融点：１６０−１６１°Ｃ，Ｒｆｌ二０．８０゜Ｒｆ”
二〇、７７、（α）２’＝−３８，０°（濃度Ｏ，５０
、ＭｅＯＨ） 元素分析値（Ｃ２６ＨＨＮ４０ａとして）ＨＮ 計算値（％） ６３．３５ ５．７７ １１．１６実
測値（％） ６３．４０ ５．７３ １１．３８（１
７）ＺＬｙｓ（ＢｏＣ）−ＧｌｎＯＨの合成ＺＬｙｓ（
ＢｏＣ）ＯＨ２，２８ｇ、Ｎ−メナルモルホリン０．６
１ｍ１及びクロルギ酸インブチル０．７３−を用い、Ｔ
ＨＦ ２０Ｉｎｌ中にて常法により調製した混合酸無水
物溶液にＮ−ヒドロキシコハク酸イミド０．８６ｇのＴ
ＨＦ ５ｙｄ溶液を加え０℃にて５分間、次いで室温に
て２０分間攪拌する。
二〇、７７、（α）２’＝−３８，０°（濃度Ｏ，５０
、ＭｅＯＨ） 元素分析値（Ｃ２６ＨＨＮ４０ａとして）ＨＮ 計算値（％） ６３．３５ ５．７７ １１．１６実
測値（％） ６３．４０ ５．７３ １１．３８（１
７）ＺＬｙｓ（ＢｏＣ）−ＧｌｎＯＨの合成ＺＬｙｓ（
ＢｏＣ）ＯＨ２，２８ｇ、Ｎ−メナルモルホリン０．６
１ｍ１及びクロルギ酸インブチル０．７３−を用い、Ｔ
ＨＦ ２０Ｉｎｌ中にて常法により調製した混合酸無水
物溶液にＮ−ヒドロキシコハク酸イミド０．８６ｇのＴ
ＨＦ ５ｙｄ溶液を加え０℃にて５分間、次いで室温に
て２０分間攪拌する。
この溶液にＨＧｌｎＯＨｏ、７３ ｇとＴＥＡ ０．７
０ ｍｌｌの水３０１１Ｌｌ溶液を加え室温にて２０時
間放置する。
０ ｍｌｌの水３０１１Ｌｌ溶液を加え室温にて２０時
間放置する。
ＴＨＥ’を留去し残渣を上記（２）と同様に処理後Ｍｅ
０Ｈ−Ａ ｃ ＯＥ ｔより再沈殿して１．５０．９
を得る（収率５９．００％）。
０Ｈ−Ａ ｃ ＯＥ ｔより再沈殿して１．５０．９
を得る（収率５９．００％）。
融点：１７７−１７８°Ｃ，Ｒｆｌ：０．７０゜Ｒｆｌ
ｌ：０．７２ 、 （α）”−−１５，５°（濃度Ｏ，
５２、ＭｅＯＨ） 元素分析値（Ｃ２４Ｈ３６Ｎ４０８として）ＨＮ 計算値（％） ５６．６８ ７．１４ １１．０２実
測値（％）５６．６３ ７．０６ １０．８８（１８）
ＢｏＣＧｌｙ−Ｌｙｓ（ＢｏＣ）−ＧｌｎＯＨ−Ｈ２０
の合成 Ｚｌｙｓ（ＢｏＣ）−ＧｌｎＯＨ１，３０ｆｔをＭｅ
ＯＨ５０Ｔｌｌに溶解し上記（３）と同様にして接触還
元する。
ｌ：０．７２ 、 （α）”−−１５，５°（濃度Ｏ，
５２、ＭｅＯＨ） 元素分析値（Ｃ２４Ｈ３６Ｎ４０８として）ＨＮ 計算値（％） ５６．６８ ７．１４ １１．０２実
測値（％）５６．６３ ７．０６ １０．８８（１８）
ＢｏＣＧｌｙ−Ｌｙｓ（ＢｏＣ）−ＧｌｎＯＨ−Ｈ２０
の合成 Ｚｌｙｓ（ＢｏＣ）−ＧｌｎＯＨ１，３０ｆｔをＭｅ
ＯＨ５０Ｔｌｌに溶解し上記（３）と同様にして接触還
元する。
ＲｆＩ：０．４１得られる還元体とＴＥＡｏ、３５−の
２５ＴＬｌ水溶液にＢｏＣＧｌｙＯＮＨ８０，６９＆の
ＴＨＦ ２５縦溶液を加え室温にて２０時間放置する。
２５ＴＬｌ水溶液にＢｏＣＧｌｙＯＮＨ８０，６９＆の
ＴＨＦ ２５縦溶液を加え室温にて２０時間放置する。
ＴＨＦを留去し残渣を１−ＢｕＯＨ−２％ＡｃＯＨ：系
による向流分配を行い、１−ＢｕＯＨ層を濃縮する。
による向流分配を行い、１−ＢｕＯＨ層を濃縮する。
石油ベンジンを加えて固化する。Ａｃ０Ｅｔ−石油ベン
ジンより再沈殿を行い１．０２ｇを得る（収率７２．８
６％）。
ジンより再沈殿を行い１．０２ｇを得る（収率７２．８
６％）。
融点：１１５−１１９°Ｃ，ＲｆＩ：０．７０ 。
Ｒｆ”：０．６９ 、 （α〕２３−−７，１°（濃度
Ｏ，５６、Ｍｅ ＯＨ） 元素分析値（Ｃ２３Ｈ４１Ｈ５０９として）ＣＨＮ 計算値（％） ５０．２６ ７．８９ １２．７４実
測値（％） ４９．９４ ８．０９ １２．６４（１
９） Ｂｏ ＣＧＩ ｙ −Ｌｙ ｓ （Ｂｏ Ｃ）−
Ｇｌ ｎ−Ｇ１ ｙＰｒｏ−ＴｋｐＯＨ−Ｈ２０の合成 ＺＧＩ ｙ−Ｐｒ ｏ−Ｔｒ ｐＯＨ５８６７％’をＭ
ｅＯＨ５０ＴＬｌ及び水１０ｒｒＬｌ中にて上記３）と
同様にして接触還元する。
Ｏ，５６、Ｍｅ ＯＨ） 元素分析値（Ｃ２３Ｈ４１Ｈ５０９として）ＣＨＮ 計算値（％） ５０．２６ ７．８９ １２．７４実
測値（％） ４９．９４ ８．０９ １２．６４（１
９） Ｂｏ ＣＧＩ ｙ −Ｌｙ ｓ （Ｂｏ Ｃ）−
Ｇｌ ｎ−Ｇ１ ｙＰｒｏ−ＴｋｐＯＨ−Ｈ２０の合成 ＺＧＩ ｙ−Ｐｒ ｏ−Ｔｒ ｐＯＨ５８６７％’をＭ
ｅＯＨ５０ＴＬｌ及び水１０ｒｒＬｌ中にて上記３）と
同様にして接触還元する。
Ｒｆｌ：０．３６ＢｏＣＧｌｙ −Ｌｙ ｓ （ＢｏＣ
） −Ｇｌ ｎＯＨ６９６ｍｆｉｌ、Ｎ−メチルモルホ
リン０．１３ｍ１及びクロルギ酸イソブナルｏ、１６ｒ
ｒＬｌを用い、ＴＨＦｌ ５ｍｌ中にて常法により調製
した混合酸無水物溶液にＮ−ヒドロキシコハク酸イミド
１６４■のＴＨＦ Ｓ就溶液を加え０℃にて５分間、次
いで室温にて２０分間攪拌する。
） −Ｇｌ ｎＯＨ６９６ｍｆｉｌ、Ｎ−メチルモルホ
リン０．１３ｍ１及びクロルギ酸イソブナルｏ、１６ｒ
ｒＬｌを用い、ＴＨＦｌ ５ｍｌ中にて常法により調製
した混合酸無水物溶液にＮ−ヒドロキシコハク酸イミド
１６４■のＴＨＦ Ｓ就溶液を加え０℃にて５分間、次
いで室温にて２０分間攪拌する。
この溶液に上で得られる還元体とＴＥＡｏ、１７ｍ１の
ＤＭＦ１０ＴＬｌ溶液を加え室温にて２０時間放置する
。
ＤＭＦ１０ＴＬｌ溶液を加え室温にて２０時間放置する
。
ＴＨＦ及びＤＭＤＭＦを留去し残渣をＡｃ０Ｅｔに溶解
し、ＩＮ−クエン酸、飽和ＮａＣｌて洗浄しＮａ２ＳＯ
４にて乾燥する。
し、ＩＮ−クエン酸、飽和ＮａＣｌて洗浄しＮａ２ＳＯ
４にて乾燥する。
Ａｃ０Ｅｔを留去しエーテルを加えて枦取、乾燥する。
Ｍｅ ０Ｈ−Ａ ｃ ＯＥ ｔより再沈殿して８６１ｍ
ｇを得る。
ｇを得る。
（収率８１．３０％）。融点：１４７℃（分解）、Ｒｆ
ｌ：０．６９゜Ｒｆｎ：０．７０ 、（α’］２４−−
１８．３°（濃度Ｏ，５５、ＤＭＦ ） 元素分析値（Ｃ４１Ｈ６１Ｈ９ｏ１□・Ｈ２０として）
ＨＮ 計算値（％） ５５．３３ ７．１４ １４．１．６
実測値（％） ５４．８２ ７．０２ １３．７１（
３）） ＨＧＩ ｙ −Ｌｙ ｓ −Ｇｌ ｎ−Ｇｌｙ
−Ｐｒ ｏ−ＴｒｐＬ ｅ ｕ −Ｇ ｌ ｕ −Ｇ
ｌ ｕ −Ｇ ｌ ｕ −Ｇ ｌ ｕ −−Ｇ Ｉ ｕ
Ａ ｌ ａ−Ｔｙ ｒ−Ｇｌ ｙ−Ｔｒ ｐ−Ｍｅ ｔ
−Ａｓ ｐ −ＰｈｅＮＨ２・ＣＨ３ＣＯ０Ｈ・１０Ｈ
２０の合成（本発明化合物の合成） Ｂｏ ＣＧＩ ｙ −Ｌｙ ｓ （ＢｏＣ） −Ｇｌ
ｎ−Ｇ１ ｙＰｒｏ−ＴｒｐＯＨｌ １２ｍ９及びＮ−
ヒドロキシコハク酸イミド１５■の冷ＴＨＦ１０−溶液
にジシクロへキシルカルボジイミド２６■を加え４℃に
て２０時間攪拌する。
ｌ：０．６９゜Ｒｆｎ：０．７０ 、（α’］２４−−
１８．３°（濃度Ｏ，５５、ＤＭＦ ） 元素分析値（Ｃ４１Ｈ６１Ｈ９ｏ１□・Ｈ２０として）
ＨＮ 計算値（％） ５５．３３ ７．１４ １４．１．６
実測値（％） ５４．８２ ７．０２ １３．７１（
３）） ＨＧＩ ｙ −Ｌｙ ｓ −Ｇｌ ｎ−Ｇｌｙ
−Ｐｒ ｏ−ＴｒｐＬ ｅ ｕ −Ｇ ｌ ｕ −Ｇ
ｌ ｕ −Ｇ ｌ ｕ −Ｇ ｌ ｕ −−Ｇ Ｉ ｕ
Ａ ｌ ａ−Ｔｙ ｒ−Ｇｌ ｙ−Ｔｒ ｐ−Ｍｅ ｔ
−Ａｓ ｐ −ＰｈｅＮＨ２・ＣＨ３ＣＯ０Ｈ・１０Ｈ
２０の合成（本発明化合物の合成） Ｂｏ ＣＧＩ ｙ −Ｌｙ ｓ （ＢｏＣ） −Ｇｌ
ｎ−Ｇ１ ｙＰｒｏ−ＴｒｐＯＨｌ １２ｍ９及びＮ−
ヒドロキシコハク酸イミド１５■の冷ＴＨＦ１０−溶液
にジシクロへキシルカルボジイミド２６■を加え４℃に
て２０時間攪拌する。
ＴＨＦを留去後エーテルを加えて秤取、乾燥する。
ＨＬｅ ｕ−Ｇｌ ｕ −Ｇｌ ｕ−Ｇｌ ｕ−Ｇｌ
ｕ−Ｇｌ ｕ −Ａｌ ａ−Ｔｙ ｒ−Ｇｌ ｙ −’
、ｒ ｒ ｐ −Ｍｅ ｔ−Ａｓ ｐＰｈｅＮＨ２・５
Ｈ２０７１ｒｎ９のＤＭＦ１５ｒｒＬｌ溶液に上で得ら
れる保護へキサペプタイドの活性エステルを加え室温に
て２０時間攪拌する。
ｕ−Ｇｌ ｕ −Ａｌ ａ−Ｔｙ ｒ−Ｇｌ ｙ −’
、ｒ ｒ ｐ −Ｍｅ ｔ−Ａｓ ｐＰｈｅＮＨ２・５
Ｈ２０７１ｒｎ９のＤＭＦ１５ｒｒＬｌ溶液に上で得ら
れる保護へキサペプタイドの活性エステルを加え室温に
て２０時間攪拌する。
さらに同量の活性エステルを加え２０時間攪拌する。
ＤＭＦを留去し、１−ＢｕＯＨ−１０％ＡｃＯＨ系によ
る向流分配を行い、１−ＢｕＯＨ層を濃縮し、次いでエ
ーテルを加えて秤取、乾燥する。
る向流分配を行い、１−ＢｕＯＨ層を濃縮し、次いでエ
ーテルを加えて秤取、乾燥する。
この結晶をＴＦＡ３ｍｌ及びアニソール０．１ｍｌに溶
解し室温で２０分間放置する。
解し室温で２０分間放置する。
無水エーテルを加えて秤取、乾燥する。
この結晶をセファーデツクスＧ−２５カラム（３×１８
０ｃｒｒＬ）にかけ５０％酢酸を溶出液として１０ｇず
つ分取する。
０ｃｒｒＬ）にかけ５０％酢酸を溶出液として１０ｇず
つ分取する。
フラクション／１６５０〜６０を集めて濃縮、凍結乾燥
する。
する。
次に１−ブタノール二０．１％酢酸：ビリジン（５：１
１ ：３）によるドロップレット カウンター カレン
ト クロマトグラフ−１’−（ＤＣＣＣ）を行い目的物
を２５１ｎ９得る（収率２４．１２％）。
１ ：３）によるドロップレット カウンター カレン
ト クロマトグラフ−１’−（ＤＣＣＣ）を行い目的物
を２５１ｎ９得る（収率２４．１２％）。
ＲｆＩ： ０．１５ 、 Ｒｆ”： ０．５１ 。
〔α）”０＝−４８，５°（濃度０．５１．３Ｍ酢酎耐
素分析値（Ｃ１ｏ５Ｈ１４□Ｎ２４０３３Ｓ−ＣＨ３Ｃ
ＯＯＨ・１０Ｈ２０として） ＨＮ 計算値（％） ５０．５８ ６．４３ １３．２３実
測値（％） ５０．６６ ５．９１ １３．０７得ら
れるアミノ酸の分析結果を次に示す。
素分析値（Ｃ１ｏ５Ｈ１４□Ｎ２４０３３Ｓ−ＣＨ３Ｃ
ＯＯＨ・１０Ｈ２０として） ＨＮ 計算値（％） ５０．５８ ６．４３ １３．２３実
測値（％） ５０．６６ ５．９１ １３．０７得ら
れるアミノ酸の分析結果を次に示す。
Ｌｙ ｓ ： １．１８ 、 ＮＨ３二 ４．９３、
Ａｓｐ ： １．０２ 、Ｇｌ ｕ ： ５．８９
、Ｐｒｏ：１．１４、Ｇｕｙ：３．１２、Ａｌ ａ ：
１．０２、Ｍｅ ｔ ： ０．８８、Ｌｅｕ：０．９
３、Ｔｙｒ：０．９６、Ｐｈ ｅ ： ０．９８、参考
例 ２ 上記参考例１で得たガストリン誘導体５ｍ９及び人血清
α−グロブリン１５ｍｇを０．１ Ｍ酢酸アンモニウム
緩衝液（ｐＨ７，０） ２ｍｌ！に溶解後得られる溶液
に０．０２Ｍグルタルアルデヒド溶液１．３ｄを滴下し
、室温で１５時間攪拌する。
Ａｓｐ ： １．０２ 、Ｇｌ ｕ ： ５．８９
、Ｐｒｏ：１．１４、Ｇｕｙ：３．１２、Ａｌ ａ ：
１．０２、Ｍｅ ｔ ： ０．８８、Ｌｅｕ：０．９
３、Ｔｙｒ：０．９６、Ｐｈ ｅ ： ０．９８、参考
例 ２ 上記参考例１で得たガストリン誘導体５ｍ９及び人血清
α−グロブリン１５ｍｇを０．１ Ｍ酢酸アンモニウム
緩衝液（ｐＨ７，０） ２ｍｌ！に溶解後得られる溶液
に０．０２Ｍグルタルアルデヒド溶液１．３ｄを滴下し
、室温で１５時間攪拌する。
得られる反応液を水２１を用い４°Ｃで２４時間透析す
る（途中８時間毎に水の交換を行なう。
る（途中８時間毎に水の交換を行なう。
）凍結乾燥後白色粉末形態の、ガストリン誘導体−人血
清α−グロブリン複合体である抗原１９．８１ｎ９を得
る。
清α−グロブリン複合体である抗原１９．８１ｎ９を得
る。
得られた抗原ＩＴｒ１ｇは、上記ガストリン誘導体を２
５２μｇ含有する。
５２μｇ含有する。
参考例 ３
参考例１で得たガス） ＩＪン誘導体５■及び牛血清ア
ルブミン２５■を０．２Ｍリン酸二水素カリウム−０，
２Ｎ水酸化ナトリウム緩衝液（ｐＨ７，０）２．５ｒｒ
Ｌｌに溶解後得られる溶液に０．０２Ｍマロンアルデヒ
ド溶液１．５ｍｌを滴下し室温で８時間攪拌する。
ルブミン２５■を０．２Ｍリン酸二水素カリウム−０，
２Ｎ水酸化ナトリウム緩衝液（ｐＨ７，０）２．５ｒｒ
Ｌｌに溶解後得られる溶液に０．０２Ｍマロンアルデヒ
ド溶液１．５ｍｌを滴下し室温で８時間攪拌する。
得られる反応液を参考例２と同様に透析後凍結乾燥して
白色粉末形態のガストリン誘導体−牛血清アルブミン複
合体である抗原２９．６７Ｑを得る。
白色粉末形態のガストリン誘導体−牛血清アルブミン複
合体である抗原２９．６７Ｑを得る。
該抗原１■中には上記ガス） ＩＪン誘導体１６９μｇ
が含有される。
が含有される。
実施例１及び２
参考例２及び３で得た抗原７■を１．８−の生理食塩水
に溶解後２にフロイントの補助液２．７−を加えて調製
した懸濁液を、兎１羽につき■ｒＩｌｌ皮内投与し、２
週間後更に同量を皮肉投与する。
に溶解後２にフロイントの補助液２．７−を加えて調製
した懸濁液を、兎１羽につき■ｒＩｌｌ皮内投与し、２
週間後更に同量を皮肉投与する。
以後２週間間隔で別途に調製した懸濁液（抗原３■、生
理食塩水３ｒＩＬｌ及びフロイントの補助液３ｙｄ）を
同様にして３．５ケ月間投与していき、試験動物を免疫
化する。
理食塩水３ｒＩＬｌ及びフロイントの補助液３ｙｄ）を
同様にして３．５ケ月間投与していき、試験動物を免疫
化する。
最終投与１０日経過後試験動物から採取し、本発明抗体
を得る。
を得る。
得られた抗体の力価を次の通り測定する。
即ち上記抗血清を夫々生理食塩水で１０．１０”１０”
、１０’、及び１０”倍に希釈（イニシャル）し、之等
の夫々１００μｌに １２Ｊ−ガスｌ−ＩＪン（Ｃ，１
，Ｓ、キット、６０００〜７０００ｃｐｍ）１００μｌ
及び０．５ Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，５）（０，５％
ＢＳＡ、０．１％ＮａＮ３及び０．１４ＭＮａＣｌを含
む） ３００ ｆｉｌを加え４℃で４８時間インキユベ
ートシ、生成した抗血清と１２５■ガス） ＩＪンとの
結合体を、デキストラン−活性炭法及び遠心分離法（４
℃、１５分間、３０００ｒｐｍ ）により未反応１２５
■−デキストランから分離し、その放射線をカウントし
、各希釈濃度における抗血清の１２５１−ガストリンと
の結合率■）を測定する。
、１０’、及び１０”倍に希釈（イニシャル）し、之等
の夫々１００μｌに １２Ｊ−ガスｌ−ＩＪン（Ｃ，１
，Ｓ、キット、６０００〜７０００ｃｐｍ）１００μｌ
及び０．５ Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，５）（０，５％
ＢＳＡ、０．１％ＮａＮ３及び０．１４ＭＮａＣｌを含
む） ３００ ｆｉｌを加え４℃で４８時間インキユベ
ートシ、生成した抗血清と１２５■ガス） ＩＪンとの
結合体を、デキストラン−活性炭法及び遠心分離法（４
℃、１５分間、３０００ｒｐｍ ）により未反応１２５
■−デキストランから分離し、その放射線をカウントし
、各希釈濃度における抗血清の１２５１−ガストリンと
の結合率■）を測定する。
結果を第１図に示す。
第１図において縦軸は抗血清の１２５■−ガス） ＩＪ
ンの結合率（％）及び横軸は供試抗血清の希釈倍率（イ
ニシャル）を示す。
ンの結合率（％）及び横軸は供試抗血清の希釈倍率（イ
ニシャル）を示す。
また図中１は参考例２で得た抗原により産出された抗体
（抗体■）及び２は参考例３で得た抗原より産出された
抗体（抗体■）を夫々示す。
（抗体■）及び２は参考例３で得た抗原より産出された
抗体（抗体■）を夫々示す。
上記第１図より結合率（７ｏ）が５０％となる抗血清の
希釈倍率即ち抗体の力価を求めると夫々次の通りとなる
。
希釈倍率即ち抗体の力価を求めると夫々次の通りとなる
。
抗体１ ９０００
抗体ｌ ６５００
く抗体のガス） ＩＪン特異性試験〉
この試験は、一定量のガストリン抗体に結合する標識ガ
ストリンと非標識ガストリンとの比が、溶液中の之等各
ガス） ＩＪン濃度比に一致し、標識ガス） ＩＪン濃
度を一定にした時非標識ガストリン（測定されるべきガ
スｌ−ＩＪン）の濃度か増加するに従い、ガストリン抗
体と結合した結合型標識ガス） ＩＪンの量が減少し、
溶液中に遊離の（結合しない）形態で存在する遊離型標
識ガスｌ−ＩＪンの量は増加するという原理に基づいて
行なわれたものである。
ストリンと非標識ガストリンとの比が、溶液中の之等各
ガス） ＩＪン濃度比に一致し、標識ガス） ＩＪン濃
度を一定にした時非標識ガストリン（測定されるべきガ
スｌ−ＩＪン）の濃度か増加するに従い、ガストリン抗
体と結合した結合型標識ガス） ＩＪンの量が減少し、
溶液中に遊離の（結合しない）形態で存在する遊離型標
識ガスｌ−ＩＪンの量は増加するという原理に基づいて
行なわれたものである。
供試試料としては、合成人ガストリン（標準ガストリン
、Ｄａｌｎａｂｏｔ社製）と、その類似物質としてのペ
ンタガストリン、ＣＣＫ−ＰＺ及びセクレチンとを用い
た。
、Ｄａｌｎａｂｏｔ社製）と、その類似物質としてのペ
ンタガストリン、ＣＣＫ−ＰＺ及びセクレチンとを用い
た。
標識ガス） ＩＪンとしては １２５ ■ガストリン（
Ｃ，１，Ｓ、キット、６０００〜７０００ｃｐｍ）を用
いた。
Ｃ，１，Ｓ、キット、６０００〜７０００ｃｐｍ）を用
いた。
また標準希釈液としては０．２％牛血清アルブミン含有
０．０２モルバルビタール緩衝液を用いた。
０．０２モルバルビタール緩衝液を用いた。
標準希釈液０．２ ｍｌ、 １２５ ■−ガストリン０
０ｌｒｒＬｌ実施例で得た本発明抗体Ｉの０．１ ｍｌ
（希釈率１００００倍）及び上記各供試試料の夫々０．
１ ｒｒｒｌ！を混合し、４°Ｃで２４時間インキュベ
ート後、更に抗体■の０．１ ｒ／Ｌｌを加え４°Ｃで
２４時間インキュベートし、得られる混合物を３０００
Ｏｒｐｍで３０分間遠心分離後、沈殿物（結合型標識ガ
ストリン、Ｂとする）と上澄液（遊離型標識ガストリン
、Ｆとする）との夫々の放射線をカウントし、用いた抗
体Ｉの力価に相当する結合率（Ｂｏ とする）を１００
％として、各供試試料の濃度における結合型標識ガス）
ＩＪン（旬の百分率を求めた。
０ｌｒｒＬｌ実施例で得た本発明抗体Ｉの０．１ ｍｌ
（希釈率１００００倍）及び上記各供試試料の夫々０．
１ ｒｒｒｌ！を混合し、４°Ｃで２４時間インキュベ
ート後、更に抗体■の０．１ ｒ／Ｌｌを加え４°Ｃで
２４時間インキュベートし、得られる混合物を３０００
Ｏｒｐｍで３０分間遠心分離後、沈殿物（結合型標識ガ
ストリン、Ｂとする）と上澄液（遊離型標識ガストリン
、Ｆとする）との夫々の放射線をカウントし、用いた抗
体Ｉの力価に相当する結合率（Ｂｏ とする）を１００
％として、各供試試料の濃度における結合型標識ガス）
ＩＪン（旬の百分率を求めた。
得られた結果を第２図に示す。
第２図において縦軸は結合％（Ｂ／ＢｏＸ１００）を、
横軸は各供試試料の濃度（モル／ｌ）を示す。
横軸は各供試試料の濃度（モル／ｌ）を示す。
また該図中曲線イは、供試試料として合成穴ガス） Ｉ
Ｊンを、曲線口はペンタガス） ＩＪンを、曲線ハはＣ
ＣＫ−ＰＺを、及び曲線二はセクレチンを夫々用いた場
合を示す。
Ｊンを、曲線口はペンタガス） ＩＪンを、曲線ハはＣ
ＣＫ−ＰＺを、及び曲線二はセクレチンを夫々用いた場
合を示す。
第２図から明らかな通り、本発明の抗体はガストリン（
合成穴ガストン、曲線イ）に対する反応性と、他のガス
トリン類似の供試試料（ペンタガスｌ−ＩＪン、ＣＣＫ
−ＰＺ及びセレクナン）に対する反応性において明確に
区別される曲線を示し、このことより上記ガストリン類
似の他の物質とは交叉しない極めて特異性の高い抗体で
あり、上記ガス） ＩＪン類似の他の物質が共存する未
知試料の場合にも、該試料中のガス） ＩＪンを正確に
定量できることが判る。
合成穴ガストン、曲線イ）に対する反応性と、他のガス
トリン類似の供試試料（ペンタガスｌ−ＩＪン、ＣＣＫ
−ＰＺ及びセレクナン）に対する反応性において明確に
区別される曲線を示し、このことより上記ガストリン類
似の他の物質とは交叉しない極めて特異性の高い抗体で
あり、上記ガス） ＩＪン類似の他の物質が共存する未
知試料の場合にも、該試料中のガス） ＩＪンを正確に
定量できることが判る。
しかるに本発明抗体に見られる如き特異性を具備せず、
他の物質と交叉性を示す抗体を用いる場合は、交叉する
ガス） ＩＪン類似物質までもガストリンとして測定す
ることとなり、正確なガス） ＩＪンの定量は困難であ
る。
他の物質と交叉性を示す抗体を用いる場合は、交叉する
ガス） ＩＪン類似物質までもガストリンとして測定す
ることとなり、正確なガス） ＩＪンの定量は困難であ
る。
第１図は、本発明方法により得られた抗体の１２Ｊ−ガ
ストリンとの結合率（％）を示したグラフであり、第２
図は二記抗体がガス） ＩＪンに対して特異性を有する
ことを示すグラフである。
ストリンとの結合率（％）を示したグラフであり、第２
図は二記抗体がガス） ＩＪンに対して特異性を有する
ことを示すグラフである。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １式 ％式％ で表わされるガストリン誘導体に一般式 ０ＨＣ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＨＯ 〔式中ｎは１〜５の整数を示す〕で表わされるジアルデ
ヒド類及び蛋白質を反応させて得られるガストリン誘導
体−蛋白複合体から成る抗原を、哨乳動物に投与し生成
する抗体を採取することを特徴とする抗体の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP527377A JPS5830542B2 (ja) | 1977-01-19 | 1977-01-19 | 抗体の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP527377A JPS5830542B2 (ja) | 1977-01-19 | 1977-01-19 | 抗体の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5391119A JPS5391119A (en) | 1978-08-10 |
| JPS5830542B2 true JPS5830542B2 (ja) | 1983-06-29 |
Family
ID=11606614
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP527377A Expired JPS5830542B2 (ja) | 1977-01-19 | 1977-01-19 | 抗体の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5830542B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6283756U (ja) * | 1985-11-15 | 1987-05-28 | ||
| JPS63199851U (ja) * | 1987-06-15 | 1988-12-22 |
-
1977
- 1977-01-19 JP JP527377A patent/JPS5830542B2/ja not_active Expired
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6283756U (ja) * | 1985-11-15 | 1987-05-28 | ||
| JPS63199851U (ja) * | 1987-06-15 | 1988-12-22 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5391119A (en) | 1978-08-10 |
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