JPS59206765A - 尿素結合免疫原複合体、その抗体及びその製造方法 - Google Patents
尿素結合免疫原複合体、その抗体及びその製造方法Info
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- JPS59206765A JPS59206765A JP59057524A JP5752484A JPS59206765A JP S59206765 A JPS59206765 A JP S59206765A JP 59057524 A JP59057524 A JP 59057524A JP 5752484 A JP5752484 A JP 5752484A JP S59206765 A JPS59206765 A JP S59206765A
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- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、特定のハプテンに対する抗体の産生を促進す
る上で使用される、新規な免疫原複合体の製造技術に関
する。更に新規な免疫原複合体及び該複合体によシ産生
される抗体が提供される。
る上で使用される、新規な免疫原複合体の製造技術に関
する。更に新規な免疫原複合体及び該複合体によシ産生
される抗体が提供される。
かかる抗体は、免疫試験用の試薬として特に有用である
。
。
免疫試験とは、適当な方法で得られた抗体によって目的
とする分析対象物を特異的に認識することに基礎をおい
た分析方法をいう。抗原性分析対象物に対する抗体は、
ウサギのような動物の血流中に抗原を注入することによ
り得られる。抗原は動物の免疫系において異物として認
識されるが、該免疫系はしかるべく刺激されて、抗原と
結合しそれを中和する抗体を産生ずる。したがって、か
かる動物から得られる血清中には、応答を銹起する抗原
に対し高い結合親和性を有する免疫グロブリン蛋白質（
体液性抗体）が含まれることになる（ Ｌｉｇａｎｄ
Ａｓ５ａｙ、 Ｊ、 Ｌａｎｇａｎ ａｎｄ Ｊ、Ｊｌ
ｌＣｌａｐｐ。
とする分析対象物を特異的に認識することに基礎をおい
た分析方法をいう。抗原性分析対象物に対する抗体は、
ウサギのような動物の血流中に抗原を注入することによ
り得られる。抗原は動物の免疫系において異物として認
識されるが、該免疫系はしかるべく刺激されて、抗原と
結合しそれを中和する抗体を産生ずる。したがって、か
かる動物から得られる血清中には、応答を銹起する抗原
に対し高い結合親和性を有する免疫グロブリン蛋白質（
体液性抗体）が含まれることになる（ Ｌｉｇａｎｄ
Ａｓ５ａｙ、 Ｊ、 Ｌａｎｇａｎ ａｎｄ Ｊ、Ｊｌ
ｌＣｌａｐｐ。
Ｅｄａ、、 Ｍａｓｓｏｎ Ｐｕｂｌ、 ＵＳＡ、
Ｉｎｃ、 （Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、 １９８１）。
Ｉｎｃ、 （Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、 １９８１）。
ｐ、ｉ以下参照〕。比較的低分子量（例えば、１５００
未満）の物質は、しかしながら、抗原性が非常に弱いか
、あるいは全く抗体産生を刺激することができない。し
かし、そのような低分子量物質を抗原キャリア分子（通
常、蛋白質又はポリペプチド）に共有結合させて生成せ
しめた複合体で免疫すると、かかる小さな分子（ハプテ
ンと称される）に対しても抗体を産生ずることができる
。最も一般的な蛋白質性キャリアとしては各種の血清ア
ルブミン、ヘモシアニン、チログロブリン及びフィブリ
ノーゲンがあるＣ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍ
ｏｌｏｇｙ。
未満）の物質は、しかしながら、抗原性が非常に弱いか
、あるいは全く抗体産生を刺激することができない。し
かし、そのような低分子量物質を抗原キャリア分子（通
常、蛋白質又はポリペプチド）に共有結合させて生成せ
しめた複合体で免疫すると、かかる小さな分子（ハプテ
ンと称される）に対しても抗体を産生ずることができる
。最も一般的な蛋白質性キャリアとしては各種の血清ア
ルブミン、ヘモシアニン、チログロブリン及びフィブリ
ノーゲンがあるＣ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍ
ｏｌｏｇｙ。
Ｖｏｌ、７０． Ｈ，Ｖａｎ Ｖｕｎａｋｉｓ ａｎｄ
Ｊ、Ｊ、Ｌａｎｇｏｎｅ、 Ｅｄａ、。
Ｊ、Ｊ、Ｌａｎｇｏｎｅ、 Ｅｄａ、。
Ａｃａｄｅｍｉｃ ｐｒｅｓｓ （Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ
、 １９８０ ）、 ｐ ８５ ：ｌ。
、 １９８０ ）、 ｐ ８５ ：ｌ。
ハプテンがいかなるタイプの結合でキャリアに結合して
いるかは、最適な抗体産生を行う上で重要である。アミ
ド結合によりノ・ブテンを蛋白質の末端アミン又はカル
ボキシル官能基に結合させると、高い抗原性を有する複
合体が得られることが報告されているが、おそらくその
理由は、この結合型では、ハプテンは該巨大分子の表面
に位置しその位置でハプテンがリンパ様細胞のレセプタ
ーにより近づき易くなるためであろう［： Ｎ、 Ｈａ
ｎｎａｅも ａｌ、 ｐｒｏｃ、 ８００． Ｅｘ
ｐ、 Ｂｉｏｌ、 Ｍｅｄ、 １４０（］）：８
９−９２ （１９７２）］。カルボニルジイミダゾール
をはじめとする、ペプチド化学に適用された多くの試薬
が、カルボキシル−又はアミン基含有ハプテンと蛋白質
とを結合させるために用いられている。これらの方法は
、全て、アミド結合形成のだめのカルボキシル成分の活
性化に基づいている。
いるかは、最適な抗体産生を行う上で重要である。アミ
ド結合によりノ・ブテンを蛋白質の末端アミン又はカル
ボキシル官能基に結合させると、高い抗原性を有する複
合体が得られることが報告されているが、おそらくその
理由は、この結合型では、ハプテンは該巨大分子の表面
に位置しその位置でハプテンがリンパ様細胞のレセプタ
ーにより近づき易くなるためであろう［： Ｎ、 Ｈａ
ｎｎａｅも ａｌ、 ｐｒｏｃ、 ８００． Ｅｘ
ｐ、 Ｂｉｏｌ、 Ｍｅｄ、 １４０（］）：８
９−９２ （１９７２）］。カルボニルジイミダゾール
をはじめとする、ペプチド化学に適用された多くの試薬
が、カルボキシル−又はアミン基含有ハプテンと蛋白質
とを結合させるために用いられている。これらの方法は
、全て、アミド結合形成のだめのカルボキシル成分の活
性化に基づいている。
（Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ、 Ｖｏｌ、１． Ｅ、Ｇ
ｒｏｓｓ ａｎｄ ＪｌＭｅｉｅｎ−ｈｏｆｅｒ、 Ｅ
ｄａ、、 Ａｃａｄｅｍｉｃ ｐｒｅｓｓ、 ＮｅＷ
ＹＯｒｋ、 １９７９゜ｐ、５５： ａｎｄ ｌＪ、Ａ
ｘｅｎ、 ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ ５（１）
： ４５−７ （１９７４）：］。しかしながら、こ
の方法をアミノ基含有ハプテンを蛋白質に結合させよう
とすると、問題が生じる。すなわち、蛋白質はアミノ基
及びカルボキシル基の双方を含むため、蛋白質のカルボ
キシル基を活性化すると（％に、カルボジイミドによっ
て）、分子内及び分子間アミド結合が形成されて蛋白質
が高分子化もしくは架橋さねその結果しばしば、不溶性
複合体が形成される傾向がある［ Ｓ、 Ｂａｕｍｉｎ
ｇｅｒ ａｎｄ Ｍ、 Ｗｉｌｃｈｅｃｋ、 Ｍｅｔｈ
−ｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ、 ７０ （Ｐａｒｔ Ａ）
： １５９ （１９８０） ）。
ｒｏｓｓ ａｎｄ ＪｌＭｅｉｅｎ−ｈｏｆｅｒ、 Ｅ
ｄａ、、 Ａｃａｄｅｍｉｃ ｐｒｅｓｓ、 ＮｅＷ
ＹＯｒｋ、 １９７９゜ｐ、５５： ａｎｄ ｌＪ、Ａ
ｘｅｎ、 ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ ５（１）
： ４５−７ （１９７４）：］。しかしながら、こ
の方法をアミノ基含有ハプテンを蛋白質に結合させよう
とすると、問題が生じる。すなわち、蛋白質はアミノ基
及びカルボキシル基の双方を含むため、蛋白質のカルボ
キシル基を活性化すると（％に、カルボジイミドによっ
て）、分子内及び分子間アミド結合が形成されて蛋白質
が高分子化もしくは架橋さねその結果しばしば、不溶性
複合体が形成される傾向がある［ Ｓ、 Ｂａｕｍｉｎ
ｇｅｒ ａｎｄ Ｍ、 Ｗｉｌｃｈｅｃｋ、 Ｍｅｔｈ
−ｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ、 ７０ （Ｐａｒｔ Ａ）
： １５９ （１９８０） ）。
架橋の問題を解決するだめの一つの方法カニ文献に発表
されているが、その方法は、カルボキシル基又は他の官
能基を活性化しない二官能性試薬によって、蛋白質キャ
リアのアミン基にアミン基含有ハプテンを結合せしめる
ものである。多くのそのような試薬が公知になっており
、例えば、トルエアー２．４−ジインシアネートｒ Ｃ
４（、Ｗ、Ｈｉｒｇ。
されているが、その方法は、カルボキシル基又は他の官
能基を活性化しない二官能性試薬によって、蛋白質キャ
リアのアミン基にアミン基含有ハプテンを結合せしめる
ものである。多くのそのような試薬が公知になっており
、例えば、トルエアー２．４−ジインシアネートｒ Ｃ
４（、Ｗ、Ｈｉｒｇ。
ａｎｄ Ｓ、Ｎ、 Ｔｉｍａｓｈｅｆｆ、 Ｍｅｔｈｏ
ｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ、 ２５ （Ｐａｒｔ Ｂ）：
６２５ （１９７２） 〕； ジフルオロジニトロ
ベンゼ７ （Ｉ（、Ｓ、 Ｔａｇｅｒ、 Ａ’ｎａ１．
Ｂｉｏｃｈｅｍ、 ７１ （２）：３６７−７５
（１９７６） ）； グ ル タ ル ア ルデ
ヒ ドＣＬ、Ａ、Ｆｒｏｈｍａｎ ｅｔ ａｌ、 Ｅ
ｎｄｏｃｒｉｎｏｌ、 ８７：１０５５（１９７０）
］： ）リクｏｏトリアジｙ Ｃ’ｌ’、Ｌａｎｇ
ｅＬａｌ、 Ｊ、Ｃ，Ｓ、Ｐｅｒｋｉｎ Ｉ ： ２Ｂ
８９ （１９７７） ］ ： ４−フルオロ−３−ニ
トロフェニルスルホンＣｕａｔｒｅｏａｓａｓ ｅｔ
ａｌ， Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ． ２ ４ ４ ：
４ ０ ６（１９６９））： 及び２，２′−ジカル
ボキシ−４．４’−アゾフェニルジインチオシアネート
（ Ｈ． Ｆａｓｏｌｄ。
ｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ、 ２５ （Ｐａｒｔ Ｂ）：
６２５ （１９７２） 〕； ジフルオロジニトロ
ベンゼ７ （Ｉ（、Ｓ、 Ｔａｇｅｒ、 Ａ’ｎａ１．
Ｂｉｏｃｈｅｍ、 ７１ （２）：３６７−７５
（１９７６） ）； グ ル タ ル ア ルデ
ヒ ドＣＬ、Ａ、Ｆｒｏｈｍａｎ ｅｔ ａｌ、 Ｅ
ｎｄｏｃｒｉｎｏｌ、 ８７：１０５５（１９７０）
］： ）リクｏｏトリアジｙ Ｃ’ｌ’、Ｌａｎｇ
ｅＬａｌ、 Ｊ、Ｃ，Ｓ、Ｐｅｒｋｉｎ Ｉ ： ２Ｂ
８９ （１９７７） ］ ： ４−フルオロ−３−ニ
トロフェニルスルホンＣｕａｔｒｅｏａｓａｓ ｅｔ
ａｌ， Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ． ２ ４ ４ ：
４ ０ ６（１９６９））： 及び２，２′−ジカル
ボキシ−４．４’−アゾフェニルジインチオシアネート
（ Ｈ． Ｆａｓｏｌｄ。
Ｂｉｏｃｈｅｍ、 Ｚ、 ３４２：２８８ （１９６５
） ］が挙げられる。しかしながら、かかる試薬を使用
すると、他の複雑な事態を招く。すなわち、かかる二官
能性結合基によって形成される構造残基によって、該免
疫原内に別のハプテン性部分もしくは抗原決定基が生じ
るＣ Ｍ、Ｂ、Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ、 Ｊ、Ａｎｔｉｂ
ｉｏｔｉｏｓ３４ ：８９７ （１９８１） ；Ｃｈｅ
ｍ、、Ａｂｓｔ、 ９５ ；９５２５１ｔ（１９８１）
］。 免疫試験用の標識化ハプテン複合体を製造するた
めに同じ結合基を用いた場合には、ハプテン自身の特徴
的な形態に加えて結合基も識別されるようになるため、
得られる抗体の親和性が遊離の分析対象物に対するよシ
も標識化誘導体に対して高くなシ、免疫分析における感
受性が消失してしまうことになる。したがって、高い感
受性が要求される免疫試験において外部標識を標識物質
として使用する場合には、いつでも、不活性もしくは作
用が緩徐な架橋を行う必要性がある〔Ｊ、Ｅ、Ｔ、Ｃｏ
ｒｒｉｅ ｅｔ ａｔ、 Ｊ、 Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ
、 ８７ ： ８ ｐ（１９８０）］。
） ］が挙げられる。しかしながら、かかる試薬を使用
すると、他の複雑な事態を招く。すなわち、かかる二官
能性結合基によって形成される構造残基によって、該免
疫原内に別のハプテン性部分もしくは抗原決定基が生じ
るＣ Ｍ、Ｂ、Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ、 Ｊ、Ａｎｔｉｂ
ｉｏｔｉｏｓ３４ ：８９７ （１９８１） ；Ｃｈｅ
ｍ、、Ａｂｓｔ、 ９５ ；９５２５１ｔ（１９８１）
］。 免疫試験用の標識化ハプテン複合体を製造するた
めに同じ結合基を用いた場合には、ハプテン自身の特徴
的な形態に加えて結合基も識別されるようになるため、
得られる抗体の親和性が遊離の分析対象物に対するよシ
も標識化誘導体に対して高くなシ、免疫分析における感
受性が消失してしまうことになる。したがって、高い感
受性が要求される免疫試験において外部標識を標識物質
として使用する場合には、いつでも、不活性もしくは作
用が緩徐な架橋を行う必要性がある〔Ｊ、Ｅ、Ｔ、Ｃｏ
ｒｒｉｅ ｅｔ ａｔ、 Ｊ、 Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ
、 ８７ ： ８ ｐ（１９８０）］。
薬物のようなハプテンに対する抗体を産生ずるための技
術的水準（従来技術）は次に示す文献に示されている。
術的水準（従来技術）は次に示す文献に示されている。
Ｗｅｉｎｒｙｂ ｅＬ ａｌ、 Ｄｒｕｇ Ｍｅｔａｂ
ｏｌｉｓｍＲｅｖｉｅｗｓ １０ ： ２７１
（１９７９） ：Ｐｌａｙｆａｉｒ ｅｔ ａ
ｌ。
ｏｌｉｓｍＲｅｖｉｅｗｓ １０ ： ２７１
（１９７９） ：Ｐｌａｙｆａｉｒ ｅｔ ａ
ｌ。
Ｂｒ、 Ｍｅｄ、 １３ｕｌｌ、 ３０ ：
２４ （１９７４） ；１３ｒｏｕｇｈも０ｎｅ
ｔ ａｌ、 （：ｌｉｎ、Ｃｈｅｍ、 ２２ ： ７２
６ （１９７６） ； ａｎｄ］３ｕもｌｅｒ、 Ｊ、
）ｍｍｕｎｏｌ、 Ｍｅｔｈ、 ７ ： １ （１９
７６） ａｎｄＰｈａｒｍａｃｏｌ、 Ｒｅｖ、 ２９
（２）： １０３ （１９７８） 。
２４ （１９７４） ；１３ｒｏｕｇｈも０ｎｅ
ｔ ａｌ、 （：ｌｉｎ、Ｃｈｅｍ、 ２２ ： ７２
６ （１９７６） ； ａｎｄ］３ｕもｌｅｒ、 Ｊ、
）ｍｍｕｎｏｌ、 Ｍｅｔｈ、 ７ ： １ （１９
７６） ａｎｄＰｈａｒｍａｃｏｌ、 Ｒｅｖ、 ２９
（２）： １０３ （１９７８） 。
カルボニルジイミダゾールの使用をはじめとする各種結
合経路を経る、ジー、トリー又はテトラペプチドのアミ
ノメチル化ポリマーへの結合についてＡ、Ｑｒｌｏｗｓ
ｋａ ａｎｄ Ｓ、 １）ｒａｂａｒｅｋ、 Ｐｏｌ、
Ｊ。
合経路を経る、ジー、トリー又はテトラペプチドのアミ
ノメチル化ポリマーへの結合についてＡ、Ｑｒｌｏｗｓ
ｋａ ａｎｄ Ｓ、 １）ｒａｂａｒｅｋ、 Ｐｏｌ、
Ｊ。
Ｃｈｅｍ、 ５４ ：２３２９−３６ （１９８０）
； Ｃｈｅｍ、 Ａｂｓｔ。
； Ｃｈｅｍ、 Ａｂｓｔ。
９５：８１５０６Ｆ （１９８１）に記載されている。
本発明の特異性は、特にアミノ基含有ノ・ブテンが実質
的に不活性又は作用が緩徐な結合基によって抗原性蛋白
質もしくはポリペプチドキャリアと共有結合した免疫原
複合体を提供する点にある。この免疫原複合体は、次式
： 〔式中、−・ブテン−はアミン基（通常、第１アミン基
）を介して結合されたハプテンを表し、−（ＮＨ）キャ
リアは、そのアミノ基を介して直接結合された抗原性蛋
白質もしくはポリペプチドを表し、ｐは、平均して、１
からキャリア中の有効なアミン基の数まで（通常、約１
−約５０）を表す〕 で示される。
的に不活性又は作用が緩徐な結合基によって抗原性蛋白
質もしくはポリペプチドキャリアと共有結合した免疫原
複合体を提供する点にある。この免疫原複合体は、次式
： 〔式中、−・ブテン−はアミン基（通常、第１アミン基
）を介して結合されたハプテンを表し、−（ＮＨ）キャ
リアは、そのアミノ基を介して直接結合された抗原性蛋
白質もしくはポリペプチドを表し、ｐは、平均して、１
からキャリア中の有効なアミン基の数まで（通常、約１
−約５０）を表す〕 で示される。
ハプテンとキャリアとで形成される尿素結合によって、
二つのアミン基を結合することができる最小限の官能基
、すなわち−個のカルボニル基が生ずるだけである。そ
の結果、本発明方法の免疫原複合体は、従来のアミン−
アミン間を結合する二官能性試薬を用いて製造された複
合体よりも数多くの利点を有している。すなわち、尿素
結合によって電荷を有する基が巨大分子中に生じない。
二つのアミン基を結合することができる最小限の官能基
、すなわち−個のカルボニル基が生ずるだけである。そ
の結果、本発明方法の免疫原複合体は、従来のアミン−
アミン間を結合する二官能性試薬を用いて製造された複
合体よりも数多くの利点を有している。すなわち、尿素
結合によって電荷を有する基が巨大分子中に生じない。
その上、それは親水性の官能基であって、親水性の結合
基は、同様の巨大分子系において非特異的結合効果を減
少させることが知られている［ Ｐ。
基は、同様の巨大分子系において非特異的結合効果を減
少させることが知られている［ Ｐ。
０’Ｃａｒｒａ ｅｔａｌ、 ＦｇＢＳ ｔ＋ｅｔｔ、
４３ ：１６９ （１９７４）］、。
４３ ：１６９ （１９７４）］、。
その大きさが小なることは、それが、ノ・ブテン−キャ
リア複合体に対し抗原決定基としてほとんど働かないこ
とを保証している。更に、尿素官能基は安定な結合基で
あり、不必要なキャリアの変性又はハプテンの化学変化
を避けた条件下で形成することができる。このように該
結合はノ・ブテンを抗原性蛋白質に付加するだめの理想
的な不活性もしくは作用が緩徐な結合である。
リア複合体に対し抗原決定基としてほとんど働かないこ
とを保証している。更に、尿素官能基は安定な結合基で
あり、不必要なキャリアの変性又はハプテンの化学変化
を避けた条件下で形成することができる。このように該
結合はノ・ブテンを抗原性蛋白質に付加するだめの理想
的な不活性もしくは作用が緩徐な結合である。
本発明方法は、一般に、いかなる所望のノ・ブテン性分
析対象物のだめの免疫原複合体を製造する場合にも適用
できる。分析対象物自体が有効な反応性の第１又は第２
アミノ基を有する場合は、該分析対象物は本発明特有の
尿素結合によりキャリアと結合されたー・ブテンとして
使用し得る。もう一つの場合、すなわち、分析対象物が
有効な反応性アミン基を有しない場合は、まず従来公知
の方法でアミノ官能基を有する誘導体を製造し、次いで
キャリアと結合されるノ・ブテンとして使用する。
析対象物のだめの免疫原複合体を製造する場合にも適用
できる。分析対象物自体が有効な反応性の第１又は第２
アミノ基を有する場合は、該分析対象物は本発明特有の
尿素結合によりキャリアと結合されたー・ブテンとして
使用し得る。もう一つの場合、すなわち、分析対象物が
有効な反応性アミン基を有しない場合は、まず従来公知
の方法でアミノ官能基を有する誘導体を製造し、次いで
キャリアと結合されるノ・ブテンとして使用する。
本発明によりキャリアと結合されるノ・ブテンは、通常
、約１００〜約１５００の分子量を有する。
、約１００〜約１５００の分子量を有する。
本発明の免疫原複合体は、通常、まずアミン基含有ハプ
テンを当量のカルボニルジイミダゾール類〔通常、非置
換の１，１′−カルボニルジイミダゾール類（１，，１
’−カルボニル−ビスーＩＨ−イミダゾール）〕と反応
せしめることにより製造されるが、蟲該技術分野におい
てホスゲン相当物とされティる他の試薬、例えば、１．
１’−カルボニルジー１．２．４− トリアゾール及び
１，１′−カルボニルジー１．２．３−ベンゾトリアゾ
ール［Ｇ、Ｓ、 Ｂｅｔｈｅｌｌ ｅｔａｌ、 Ｊ、
（：ｈｒｏｍａｔｏｇｒ、 ２１９：３５３ （１９８
１） ：］のよう表アルキル又はアリール置換カルボニ
ルジイミダゾール類を使用してもよい［（：：ｈｅｍ。
テンを当量のカルボニルジイミダゾール類〔通常、非置
換の１，１′−カルボニルジイミダゾール類（１，，１
’−カルボニル−ビスーＩＨ−イミダゾール）〕と反応
せしめることにより製造されるが、蟲該技術分野におい
てホスゲン相当物とされティる他の試薬、例えば、１．
１’−カルボニルジー１．２．４− トリアゾール及び
１，１′−カルボニルジー１．２．３−ベンゾトリアゾ
ール［Ｇ、Ｓ、 Ｂｅｔｈｅｌｌ ｅｔａｌ、 Ｊ、
（：ｈｒｏｍａｔｏｇｒ、 ２１９：３５３ （１９８
１） ：］のよう表アルキル又はアリール置換カルボニ
ルジイミダゾール類を使用してもよい［（：：ｈｅｍ。
Ａｂｓｔ、 ６６ ： ３７９１１４ （１９６７）
］。中間体として生成するイミダゾイル尿素誘導体
は、通常、単離せずに、選択された抗原性蛋白質もしく
はポリペプチドキャリアと直接反応させて、免疫原複合
体を製造する。同様に作用して尿素結合を有する免疫原
を製造することができる他のホスゲン相当物には、ｐ−
ニトロフェニルクロロホルメ−） ［Ｎ。
］。中間体として生成するイミダゾイル尿素誘導体
は、通常、単離せずに、選択された抗原性蛋白質もしく
はポリペプチドキャリアと直接反応させて、免疫原複合
体を製造する。同様に作用して尿素結合を有する免疫原
を製造することができる他のホスゲン相当物には、ｐ−
ニトロフェニルクロロホルメ−） ［Ｎ。
Ｋｏｒｎｂｌｕｍ ａｎｄ Ａ、３ｃｏｔｔ、Ｊ、Ｏｒ
ｇ、Ｃｈｅｍ、４２二３９９ （１９７７））及び１，
１′−スクシンイミジルカーボネ − ト （Ｈ，Ｏｇ
ｕｒａ ｅｔ ａｌ、 ’ｐｅも、 Ｌｅｔｔ
、 ４７４５（１９７９）） がある。
ｇ、Ｃｈｅｍ、４２二３９９ （１９７７））及び１，
１′−スクシンイミジルカーボネ − ト （Ｈ，Ｏｇ
ｕｒａ ｅｔ ａｌ、 ’ｐｅも、 Ｌｅｔｔ
、 ４７４５（１９７９）） がある。
本発明は、通常、実質的にいかなるノ・ブテン性物質（
％に、免疫試験法が重要となる薬物及びホルモンなどの
・・ブテン性分析対象物）に対する免疫原複合体の製造
にも適用される。有効なアミノ基をそれ自体が含み、そ
のため本発明によってキャリアと直接に結合させること
ができる上記の物質としては、チロキシン、リオチロニ
ン、スルファメトキシピリダジン、４−アミノアンチピ
リン及びニドルブラジン（ｎ１ｔｕｒｐｒａｚｉｎｅ
）がある。カルボニルジイミダゾー・ル法による結合に
適したアミノ基がないハプテンは、特有のハプテン決定
基を変化させずに官能基を導入するために、化学的に変
性させなければなら彦い。ある種の薬物に関するアミノ
基含有ノ・ブテンの代表的合成例が、文献公知となって
いる。例えば、フェニトイン（Ｒ。
％に、免疫試験法が重要となる薬物及びホルモンなどの
・・ブテン性分析対象物）に対する免疫原複合体の製造
にも適用される。有効なアミノ基をそれ自体が含み、そ
のため本発明によってキャリアと直接に結合させること
ができる上記の物質としては、チロキシン、リオチロニ
ン、スルファメトキシピリダジン、４−アミノアンチピ
リン及びニドルブラジン（ｎ１ｔｕｒｐｒａｚｉｎｅ
）がある。カルボニルジイミダゾー・ル法による結合に
適したアミノ基がないハプテンは、特有のハプテン決定
基を変化させずに官能基を導入するために、化学的に変
性させなければなら彦い。ある種の薬物に関するアミノ
基含有ノ・ブテンの代表的合成例が、文献公知となって
いる。例えば、フェニトイン（Ｒ。
Ｃ，Ｗｏｎｇ ｅｔ ａｌ、 ＣＨｎ、 Ｃｈｅｍ、
２５−６８６ （１９７９） ］：フエノバルビター／
ｌ／ ［： Ｌ、Ｍ、Ｋｒａｕｓｚ ｅｔ ａｌ。
２５−６８６ （１９７９） ］：フエノバルビター／
ｌ／ ［： Ｌ、Ｍ、Ｋｒａｕｓｚ ｅｔ ａｌ。
Ｔｈｅｒｎｐ、Ｄｒｕｇ Ｍｏｎ１むｏｒｉｎｇ ２：
２６１ （１９８０）］ ；テオフィリン［Ｔ、Ｍ、
Ｌｉ ｅｔ ａｌ、 Ｃｌ１ｎ、Ｃｈｅｍ、 ２７：２
２ （１９８１））などがそうである。他のアミノ基含
有ハプテンは、以下の如く製造することができる：キニ
ジンは３ｍａｌ１等の方法［Ｊ、 Ｍｅｄ、 Ｃｈｅｍ
。
２６１ （１９８０）］ ；テオフィリン［Ｔ、Ｍ、
Ｌｉ ｅｔ ａｌ、 Ｃｌ１ｎ、Ｃｈｅｍ、 ２７：２
２ （１９８１））などがそうである。他のアミノ基含
有ハプテンは、以下の如く製造することができる：キニ
ジンは３ｍａｌ１等の方法［Ｊ、 Ｍｅｄ、 Ｃｈｅｍ
。
２２：］０１９ （１９７９））により脱メチル化する
ことができる。得られた脱メチル化合物はＮ−（３−ブ
ロモプロピル）フタルイミドでアルキル化し、次いでヒ
ドラジンで処理し、適切なアミン基誘導体とすることが
できる。ジベンズアゼピンはホスゲンと反応させてクロ
ロカルボニル誘導体とし、これは、１，４−ジアミノブ
タンで処理すると、有用なアミノ基誘導体となる。テオ
フィリンはＮ−（３〜ブロモプロピル）フタルイミドで
アルキル化し、生成物をヒドラジンと反応させることに
よシ、７−アミノプロビルテオフイリンとなる。クロラ
ム７ ：Ｘ、 ＝ ：ｌ−／ｌ／は、Ｎ１ｅｌｓｅｎら
の方法〔ＡＣｔａＣｈｅｍ、 ５ｃａｎｄ、 Ｂ ２９
： ６６２ （１９７５） ］ で接接触水化する
と、アミン誘導体が得られる。エストリオールは、テト
ラヒドロフランに溶解し、アクリロニトリル及びカリウ
ムエトキシドと反応させるとシアノエチルケトンとなり
、次いで、これを水素化アルミニウムで還元すると３−
アミノプロピルエーテルが得られる。５．５− （Ｔ）
−メトキシフェニルフェニル）ヒダントインハ、ジメチ
ルホルムアミド中、プロピオラクトン及びナトリウムエ
トキシドでアルキル化すると、３− （２−カルボキシ
エチル） −５，５−（ｐ−メトキシフェニルフェニル
）ヒダントインとなる［ Ｂｕｃｋｌｅｒ ｅＬ ａｌ
。
ことができる。得られた脱メチル化合物はＮ−（３−ブ
ロモプロピル）フタルイミドでアルキル化し、次いでヒ
ドラジンで処理し、適切なアミン基誘導体とすることが
できる。ジベンズアゼピンはホスゲンと反応させてクロ
ロカルボニル誘導体とし、これは、１，４−ジアミノブ
タンで処理すると、有用なアミノ基誘導体となる。テオ
フィリンはＮ−（３〜ブロモプロピル）フタルイミドで
アルキル化し、生成物をヒドラジンと反応させることに
よシ、７−アミノプロビルテオフイリンとなる。クロラ
ム７ ：Ｘ、 ＝ ：ｌ−／ｌ／は、Ｎ１ｅｌｓｅｎら
の方法〔ＡＣｔａＣｈｅｍ、 ５ｃａｎｄ、 Ｂ ２９
： ６６２ （１９７５） ］ で接接触水化する
と、アミン誘導体が得られる。エストリオールは、テト
ラヒドロフランに溶解し、アクリロニトリル及びカリウ
ムエトキシドと反応させるとシアノエチルケトンとなり
、次いで、これを水素化アルミニウムで還元すると３−
アミノプロピルエーテルが得られる。５．５− （Ｔ）
−メトキシフェニルフェニル）ヒダントインハ、ジメチ
ルホルムアミド中、プロピオラクトン及びナトリウムエ
トキシドでアルキル化すると、３− （２−カルボキシ
エチル） −５，５−（ｐ−メトキシフェニルフェニル
）ヒダントインとなる［ Ｂｕｃｋｌｅｒ ｅＬ ａｌ
。
Ｊ、 Ｍｅｄ、 Ｃｂｅｍ、 ２１ ：１２５４ （１
９７８） ）。この中間体をアジ化ナトリウム／硫敵で
処理し、次いでメトキシ基を臭化水素で開裂させると、
フェニトインの主代謝産物であるｓ、ｓ−（ｐ−ヒドロ
キシフェニルフェニル）ヒダントイン（ＨＰＰＩ（）
（７）３−（２−アミノエチル）誘導体が得られる。
９７８） ）。この中間体をアジ化ナトリウム／硫敵で
処理し、次いでメトキシ基を臭化水素で開裂させると、
フェニトインの主代謝産物であるｓ、ｓ−（ｐ−ヒドロ
キシフェニルフェニル）ヒダントイン（ＨＰＰＩ（）
（７）３−（２−アミノエチル）誘導体が得られる。
必要に応じ、抗体産生用の・・ブテン性物質の適切なア
ミン誘導体を製造することは、当業者の技術範囲内に含
まれる。
ミン誘導体を製造することは、当業者の技術範囲内に含
まれる。
抗原性キャリア物質は、この目的のために従来知られて
いるあらゆる蛋白質もしくはボリペプチドから選択する
ことができる。大部分の抗原性蛋白質及びポリペプチド
は、５ 、０００〜１０，０００，０００好ましくは１
５ 、０００以上、更に好ましくは５０，０００以上の
分子量を有する。
いるあらゆる蛋白質もしくはボリペプチドから選択する
ことができる。大部分の抗原性蛋白質及びポリペプチド
は、５ 、０００〜１０，０００，０００好ましくは１
５ 、０００以上、更に好ましくは５０，０００以上の
分子量を有する。
一般に、ある動物種から採取した蛋白質は、他種の血流
中に導入された場合に抗原となる。特に有用な蛋白質に
は、アルブミン、グロブリン、酵素、ヘモシアニン、グ
ルテリン、か々りの非蛋白質成分を有する蛋白質（例え
ば、糖蛋白質）などがある。分子量３０，０００〜２０
０，０００のアルブミン及びグロブリンが特に好ましい
。合成ポリペプチドを使用してもよい。従来の抗原性キ
ャリア物質に関する技術を示す他の参考文献としては、
以下のものが挙げられる。： ｐａｒｋｅｒ、 Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ
ｏｒ ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙＡｃｔｉｖｅ Ｃｏｍ
ｐｏｕｎｄｓ、 Ｐｒｅｎｔｉｃｅ−Ｈａｌｌ （ＦＪ
ｎｇｌｅｗｏｏｄＣｌｉｆｆｓ、 Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅ
ｙ ＵＳＡ、 １９７６） ； Ｂｕｔｌｅｒ、 Ｊ。
中に導入された場合に抗原となる。特に有用な蛋白質に
は、アルブミン、グロブリン、酵素、ヘモシアニン、グ
ルテリン、か々りの非蛋白質成分を有する蛋白質（例え
ば、糖蛋白質）などがある。分子量３０，０００〜２０
０，０００のアルブミン及びグロブリンが特に好ましい
。合成ポリペプチドを使用してもよい。従来の抗原性キ
ャリア物質に関する技術を示す他の参考文献としては、
以下のものが挙げられる。： ｐａｒｋｅｒ、 Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ
ｏｒ ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙＡｃｔｉｖｅ Ｃｏｍ
ｐｏｕｎｄｓ、 Ｐｒｅｎｔｉｃｅ−Ｈａｌｌ （ＦＪ
ｎｇｌｅｗｏｏｄＣｌｉｆｆｓ、 Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅ
ｙ ＵＳＡ、 １９７６） ； Ｂｕｔｌｅｒ、 Ｊ。
工ｍｍｕｎｏ１．Ｍｅｔｈ、 ７ ： １−２４ （１
９７５） ： Ｗｅｉｎｒｙｂａｎｄ ５ｈｒｏｆｆ、
Ｄｒｕｇ Ｍｅもａｂ、 Ｒｅｖ、 １０ ： ２７
１２８３（１９７５） ； Ｂｒｏｕｇｈｔｏｎ ａｎ
ｄ Ｓｔｒｏｎｇ、 Ｃｌ１ｎ、 Ｃｈｅｍ。
９７５） ： Ｗｅｉｎｒｙｂａｎｄ ５ｈｒｏｆｆ、
Ｄｒｕｇ Ｍｅもａｂ、 Ｒｅｖ、 １０ ： ２７
１２８３（１９７５） ； Ｂｒｏｕｇｈｔｏｎ ａｎ
ｄ Ｓｔｒｏｎｇ、 Ｃｌ１ｎ、 Ｃｈｅｍ。
２２ ： ７２６−７３２ （１９７６） ： ａ
ｎｄ ｐｌａｙｆａｉｒ、ｅｔａｌ、 Ｂｒ、 Ｍｅ
ｄ、 Ｂｕｌｌ、 ３０ ： ２４−３１ （１
９７４） 。
ｎｄ ｐｌａｙｆａｉｒ、ｅｔａｌ、 Ｂｒ、 Ｍｅ
ｄ、 Ｂｕｌｌ、 ３０ ： ２４−３１ （１
９７４） 。
抗原決定基（エビトーフジ密度、すなわちキャリアに結
合したハプテン部分の平均数（前記式Ａの参照記号Ｐで
示される）は、理論的には、選択されたキャリア分子上
の有効な結合部位数によってのみ制限される。しかしな
がら、キャリアがアルブミンの如き天然蛋白質であるよ
うな通常の場合は、Ｐは平均して、１〜約５０、より普
通には２〜約２０である。
合したハプテン部分の平均数（前記式Ａの参照記号Ｐで
示される）は、理論的には、選択されたキャリア分子上
の有効な結合部位数によってのみ制限される。しかしな
がら、キャリアがアルブミンの如き天然蛋白質であるよ
うな通常の場合は、Ｐは平均して、１〜約５０、より普
通には２〜約２０である。
本発明の免疫原複合体を用いる特定の抗体の産生法は、
いかなる従来技術に従ってもよい。抗体生成の誘起に関
する基本的な考え方を記載した数多くの文献があるが、
例えば、パーカー（ｐａｒｋｅｒ）のＲａｄｉｏｉｍｍ
ｕｎｏａｓｓａｙ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ
ＡｃｔｉｖｅＣｏｍｐｏｕｎｄｓ、 Ｐｒｅｎｔｉｃｅ
−）（ａｌｌ （ｇｎｇｌｅｗｏｏｄ Ｃ１１ｆｆｓ
。
いかなる従来技術に従ってもよい。抗体生成の誘起に関
する基本的な考え方を記載した数多くの文献があるが、
例えば、パーカー（ｐａｒｋｅｒ）のＲａｄｉｏｉｍｍ
ｕｎｏａｓｓａｙ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ
ＡｃｔｉｖｅＣｏｍｐｏｕｎｄｓ、 Ｐｒｅｎｔｉｃｅ
−）（ａｌｌ （ｇｎｇｌｅｗｏｏｄ Ｃ１１ｆｆｓ
。
Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ ＵＳＡ、 １９７６）を参照す
ることができる。通常の場合、ウサギ、ヤギ、マウス、
モルモツ） （ｇｕｉｎｅａ ｐｉｇ ）及びウマのよ
うな宿主動物に、免疫原複合体を、通常、アジュバント
と混合した上で、１以上の各種部位に注射する。更Ｋ、
同−又は異なる部位から規則的又は不規則的間隔で注射
を行い、しかる後、採血して、最適なカ価釦達したこと
が測定される壕で抗体力価を調べる。宿主動物から採血
して、適切な容量の特定の抗血清を得る。所望であれば
、実際の分析を行う際に使用する抗血清として適切であ
るが否かを判断する前に、ＮＭ工程において、非特異的
抗体のような望ましくない物質を除去してもよい。
ることができる。通常の場合、ウサギ、ヤギ、マウス、
モルモツ） （ｇｕｉｎｅａ ｐｉｇ ）及びウマのよ
うな宿主動物に、免疫原複合体を、通常、アジュバント
と混合した上で、１以上の各種部位に注射する。更Ｋ、
同−又は異なる部位から規則的又は不規則的間隔で注射
を行い、しかる後、採血して、最適なカ価釦達したこと
が測定される壕で抗体力価を調べる。宿主動物から採血
して、適切な容量の特定の抗血清を得る。所望であれば
、実際の分析を行う際に使用する抗血清として適切であ
るが否かを判断する前に、ＮＭ工程において、非特異的
抗体のような望ましくない物質を除去してもよい。
抗体（例えば、通常、モノクローン抗体と称される抗体
）は、体細胞交配（融合）技術（ｓｏｍａｔｉｃｃｅｌ
ｌ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ
ｓ ）により得ることもできる。このモノクローン抗体
技術の概要は、Ｌｙｍｐｈｏｃｙもｅ Ｈｙｂｒｉｄｏ
ｍａｓ、 ｅｄ、 Ｍｅｌｃｈｅｒｓ ｅｔ ａｌ。
）は、体細胞交配（融合）技術（ｓｏｍａｔｉｃｃｅｌ
ｌ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ
ｓ ）により得ることもできる。このモノクローン抗体
技術の概要は、Ｌｙｍｐｈｏｃｙもｅ Ｈｙｂｒｉｄｏ
ｍａｓ、 ｅｄ、 Ｍｅｌｃｈｅｒｓ ｅｔ ａｌ。
Ｓｐｒｉｎｇｅｒ −Ｖｅｒｌａｇ （Ｎｅｗ Ｙｏｒ
ｋ １９７．８） 、 Ｎａｔｕｒｅ２６６：４９５
（１９７７）、５ｃｉｅｎｃｅ ２０８−：６９２（１
９８０）、及び、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ ｌｉ；ｎｚｙ
ｍｏｌｏｇｙ７３（Ｐａｒｔ Ｂ） ： ３−４６ （
１９８１）に記載されている。
ｋ １９７．８） 、 Ｎａｔｕｒｅ２６６：４９５
（１９７７）、５ｃｉｅｎｃｅ ２０８−：６９２（１
９８０）、及び、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ ｌｉ；ｎｚｙ
ｍｏｌｏｇｙ７３（Ｐａｒｔ Ｂ） ： ３−４６ （
１９８１）に記載されている。
本発明により得られる抗体類は、各種の異なった使い方
をすることができるが、しかし、それらは免疫試験に用
いると、特に、有利である。これらの抗体は、いかなる
所望の免疫試験法においても非常に有用であるが、かか
る免疫試験法としては、例えば、凝集反応法、放射線免
疫試験法、不均一系酵素免疫試験法（米国特許第３，６
５４，０９０号参照）、不均一系螢光免疫試験法（米国
特許第４．２０１，７６３号；第４，１７１，３１１号
；第４，１３３゜６３９号；第３，９９２，６３１号参
照）、螢光量減衰もしくは増大法のような均−系（分離
不要）免疫試験（米国特許第４，１６０，０１６号参照
）、螢光分極法（Ｊ、 ＥＸＩＴ、 Ｍｅｄ、 １２２
： １０２９ （１９６５）参照〕、酵素基質標識免
疫試験法（米国特許第４，２７９ 、９９２号及び英国
特許明細書筒１，５５２，６０７号参照）、補欠分子族
標識免疫試験法（米国特許第４．２３８，５６５号）、
例えば、阻害剤標識を用いる酵累活性調節物標識免疫試
験法（米国特許第４゜１３４ 、７９２号及び第４，２
７３，８６６号参照）、酵素標識免疫試験法（米国特許
第３，８１７，８３７号参照）、エネルギー移動免疫試
験法（米国特許第３，９９６゜３４５号）及び二重抗体
立体障害免疫試験法（米国特許第３，９３５，０７４号
及び第３，９９８，９４３号）がある。均−系免疫試醗
法は、通常、分析対象物とその分析対象物の標識化複合
体とを、競争的に、抗体に結合せしめることによって実
施されるが、標識化複合体と抗体とが結合した際に検出
可能な標識物質の性質が変化するという点に特徴がある
。
をすることができるが、しかし、それらは免疫試験に用
いると、特に、有利である。これらの抗体は、いかなる
所望の免疫試験法においても非常に有用であるが、かか
る免疫試験法としては、例えば、凝集反応法、放射線免
疫試験法、不均一系酵素免疫試験法（米国特許第３，６
５４，０９０号参照）、不均一系螢光免疫試験法（米国
特許第４．２０１，７６３号；第４，１７１，３１１号
；第４，１３３゜６３９号；第３，９９２，６３１号参
照）、螢光量減衰もしくは増大法のような均−系（分離
不要）免疫試験（米国特許第４，１６０，０１６号参照
）、螢光分極法（Ｊ、 ＥＸＩＴ、 Ｍｅｄ、 １２２
： １０２９ （１９６５）参照〕、酵素基質標識免
疫試験法（米国特許第４，２７９ 、９９２号及び英国
特許明細書筒１，５５２，６０７号参照）、補欠分子族
標識免疫試験法（米国特許第４．２３８，５６５号）、
例えば、阻害剤標識を用いる酵累活性調節物標識免疫試
験法（米国特許第４゜１３４ 、７９２号及び第４，２
７３，８６６号参照）、酵素標識免疫試験法（米国特許
第３，８１７，８３７号参照）、エネルギー移動免疫試
験法（米国特許第３，９９６゜３４５号）及び二重抗体
立体障害免疫試験法（米国特許第３，９３５，０７４号
及び第３，９９８，９４３号）がある。均−系免疫試醗
法は、通常、分析対象物とその分析対象物の標識化複合
体とを、競争的に、抗体に結合せしめることによって実
施されるが、標識化複合体と抗体とが結合した際に検出
可能な標識物質の性質が変化するという点に特徴がある
。
本発明を以下の実施例により説明するが、本発明はこれ
らに限定されるものではない。
らに限定されるものではない。
実施例
免疫原複合体の製造
２−エチル−２−メチルスクシンイミ）” ２ ｒ （
１４ミリ−Ｅ ル（ｍｍｏ ｌ ） ：）、Ｎ−（４−
ブロモブチル）フタルイミド２．９８ｆ（１０ｆｆ皿ｏ
１）及び炭酸カリウム１．４５９ （１０，５ｍｍｏｌ
）の混合物を、２５−のジメチルホルムアミド（ＤＭＦ
）中、６５℃で４時間加熱した。反応混合物を冷却し、
溶媒を高真空下で除去した。残渣を塩化メチレンに溶解
し、得られた溶液を無水硫酸マグネシウムを用いて乾燥
し、ヂ過した後蒸発すると、結晶性の残渣が得られた。
１４ミリ−Ｅ ル（ｍｍｏ ｌ ） ：）、Ｎ−（４−
ブロモブチル）フタルイミド２．９８ｆ（１０ｆｆ皿ｏ
１）及び炭酸カリウム１．４５９ （１０，５ｍｍｏｌ
）の混合物を、２５−のジメチルホルムアミド（ＤＭＦ
）中、６５℃で４時間加熱した。反応混合物を冷却し、
溶媒を高真空下で除去した。残渣を塩化メチレンに溶解
し、得られた溶液を無水硫酸マグネシウムを用いて乾燥
し、ヂ過した後蒸発すると、結晶性の残渣が得られた。
これを、エーテル−ヘキサンから再結晶化すると、白色
固体として標題のビスイミドが得られた。ｍｐ ７９〜
８０℃ 元素分析 計算値（ｃ、。Ｈ２２Ｎ、Ｏ，）： Ｃ，６６，７５
；Ｈ，６，４５：Ｎ、８゜１８実測値：
Ｃ，６６，４７：Ｈ，６，６４：Ｎ、８．１８前記のビ
スイミド４．９５ ？ （１４ｍｍｏｌ）及び８５％
ヒドラジン０．５ｄ （１５ｍｍｏｌ）を無水エタノー
ル５０ｍ１に溶解して、溶液を調製したー。アルゴン雰
囲気下、７０℃で３時間加熱した後、反応混合物を室温
に冷却し、−夜装置した。溶媒を除去し、残渣をシリカ
ゲル２００２を用いたクロマトグラフィーに付し、クロ
ロホルム：メタノール：濃水酸化アンモニウム６０：１
０：１ （ｖ／Ｖ／りで溶出させた。１７−ずつの両
分を集めた。画分番号６５〜１００を一つにし、蒸発し
、ゴム状の残渣を塩酸のメタノール溶液で処理して塩酸
塩にした。蒸発するとゴム状物が得られるが、これは、
放置すると、結晶化した。これを乾燥させると、白色固
体としての標題アミンの塩酸塩が２．３２得られた。ｍ
ｐ １０８〜１１０℃ 元素分析 計算値（ＣＩ ｌＨ２ＯＮ２Ｏ２・ＨＣｌ） ；Ｃ，５
３，１１：Ｈ，８，５１；Ｎ、 １１．２６実測値：
Ｃ，５３，０３；Ｈ，８，７２：Ｎ、 １１．１７工
トサクシミドーＢＳＡ複合体 無水ＤＭＦ０．６−中のＮ−（４−アミノブチル）−２
−エチル−２−メチルスクシンイミドの塩酸塩９２．１
７ｑのスラリーに、アルゴン雰囲気下、室温でトリエチ
ルアミン１０７マイクロリツトル（μｔ）を加えた。得
られた懸濁液を１５分間攪拌し、次いで、ＤＭＦｏ、６
−中のカルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）１８０．２
■の溶液をシリンジで一度に加えた。得られた懸濁液を
室温で５０分間攪拌し、イミダゾールの生成を完結せし
めた。次いで、これを、ｐＨ４，５で５℃の水１０８ゴ
中のマイルス・ベンテックス（Ｍｉ １ｅ８ｐｅｎｔｅ
４商標名）結晶性牛血清アルブミン（ＢＳＡ）、（マイ
ルス・ラボラドリース社、ニルクツ・−ト、インジアナ
州、米国）２５０■の攪拌溶液に、８分間かけて滴下し
た。
固体として標題のビスイミドが得られた。ｍｐ ７９〜
８０℃ 元素分析 計算値（ｃ、。Ｈ２２Ｎ、Ｏ，）： Ｃ，６６，７５
；Ｈ，６，４５：Ｎ、８゜１８実測値：
Ｃ，６６，４７：Ｈ，６，６４：Ｎ、８．１８前記のビ
スイミド４．９５ ？ （１４ｍｍｏｌ）及び８５％
ヒドラジン０．５ｄ （１５ｍｍｏｌ）を無水エタノー
ル５０ｍ１に溶解して、溶液を調製したー。アルゴン雰
囲気下、７０℃で３時間加熱した後、反応混合物を室温
に冷却し、−夜装置した。溶媒を除去し、残渣をシリカ
ゲル２００２を用いたクロマトグラフィーに付し、クロ
ロホルム：メタノール：濃水酸化アンモニウム６０：１
０：１ （ｖ／Ｖ／りで溶出させた。１７−ずつの両
分を集めた。画分番号６５〜１００を一つにし、蒸発し
、ゴム状の残渣を塩酸のメタノール溶液で処理して塩酸
塩にした。蒸発するとゴム状物が得られるが、これは、
放置すると、結晶化した。これを乾燥させると、白色固
体としての標題アミンの塩酸塩が２．３２得られた。ｍ
ｐ １０８〜１１０℃ 元素分析 計算値（ＣＩ ｌＨ２ＯＮ２Ｏ２・ＨＣｌ） ；Ｃ，５
３，１１：Ｈ，８，５１；Ｎ、 １１．２６実測値：
Ｃ，５３，０３；Ｈ，８，７２：Ｎ、 １１．１７工
トサクシミドーＢＳＡ複合体 無水ＤＭＦ０．６−中のＮ−（４−アミノブチル）−２
−エチル−２−メチルスクシンイミドの塩酸塩９２．１
７ｑのスラリーに、アルゴン雰囲気下、室温でトリエチ
ルアミン１０７マイクロリツトル（μｔ）を加えた。得
られた懸濁液を１５分間攪拌し、次いで、ＤＭＦｏ、６
−中のカルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）１８０．２
■の溶液をシリンジで一度に加えた。得られた懸濁液を
室温で５０分間攪拌し、イミダゾールの生成を完結せし
めた。次いで、これを、ｐＨ４，５で５℃の水１０８ゴ
中のマイルス・ベンテックス（Ｍｉ １ｅ８ｐｅｎｔｅ
４商標名）結晶性牛血清アルブミン（ＢＳＡ）、（マイ
ルス・ラボラドリース社、ニルクツ・−ト、インジアナ
州、米国）２５０■の攪拌溶液に、８分間かけて滴下し
た。
自動滴定器（ＨＣｌ）によシ、この混合中及び混合後に
わたって−を４．５に維持した。５℃、ｐＨ４゜５の条
件下に１８時間保った後、透明又は半透明の反応混合物
を水酸化す） ＩＪウム溶液で−１８に調整し、次いで
、−８２の５０ミリモル濃度（ｍ Ｍ）のトリス緩１ｉ
（）リス（ヒドロキシメチル）アミノメタン〕中のセフ
ァデックスＧ−２５Ｆゲル（ファルマシア、ビスキャッ
トアウェイ、ニューシャーシー、米国）を用いた３、０
Ｘ６２ｃｒｎカラムに付した。流速１７！／―でカラム
にこの緩衝液を流し、１０−ずつの両分を集めた。
わたって−を４．５に維持した。５℃、ｐＨ４゜５の条
件下に１８時間保った後、透明又は半透明の反応混合物
を水酸化す） ＩＪウム溶液で−１８に調整し、次いで
、−８２の５０ミリモル濃度（ｍ Ｍ）のトリス緩１ｉ
（）リス（ヒドロキシメチル）アミノメタン〕中のセフ
ァデックスＧ−２５Ｆゲル（ファルマシア、ビスキャッ
トアウェイ、ニューシャーシー、米国）を用いた３、０
Ｘ６２ｃｒｎカラムに付した。流速１７！／―でカラム
にこの緩衝液を流し、１０−ずつの両分を集めた。
波長２８０ ｎｍにおける吸光度を監視し、強いＵＶ吸
収を示す物質を含む両分１１〜１４を一つにした。この
一つに合わせた免疫原含有液を、少量のエチレンジアミ
ン四酢酸（ＥＤＴＡ） を含ｔｒｌｔの水の中で煮沸洗
浄し、しかる抜水ですすぎ洗いした、直径２５．５ ｔ
ｅａ （１号）のスペクトレーパ−（３ｐｅｃｔｒａｐ
ｏｒ、商標名）薄膜チューブ（サイエンティフィック番
プロダクツ、シカゴ、イリノイ州、米国）の中に入れた
。この生成物を、ｐＨ８，２，５℃で４日間、５０ｍＭ
）ＩＪス緩衝液を用い、透析液を２回代えて透析した。
収を示す物質を含む両分１１〜１４を一つにした。この
一つに合わせた免疫原含有液を、少量のエチレンジアミ
ン四酢酸（ＥＤＴＡ） を含ｔｒｌｔの水の中で煮沸洗
浄し、しかる抜水ですすぎ洗いした、直径２５．５ ｔ
ｅａ （１号）のスペクトレーパ−（３ｐｅｃｔｒａｐ
ｏｒ、商標名）薄膜チューブ（サイエンティフィック番
プロダクツ、シカゴ、イリノイ州、米国）の中に入れた
。この生成物を、ｐＨ８，２，５℃で４日間、５０ｍＭ
）ＩＪス緩衝液を用い、透析液を２回代えて透析した。
次いで、それを、ナルジ（Ｎａｌｇｅ、商標名）０２μ
無菌フイルター（サイエンディフィック・フロタクツ）
で無菌済過し、５℃で保存した。
無菌フイルター（サイエンディフィック・フロタクツ）
で無菌済過し、５℃で保存した。
十廂消アルブミンに対するアミノ基含有ハブテン（上記
）の各種一度比に対する、２７８ｎｍ（Ａ２７ｇ）の吸
光度に対する４ ２ Ｑ ｎｍ （Ａ、□。）の吸光度
の比についての４点標準曲線を作成した（標準誤差＝ｏ
、ｏ１ｇ）。ＢＳＡに対するハブテンの比は２５５〜０
である。この曲線において、Ａ４２０ ： Ａ２□８は
免疫原複合体における抗原決定基（エピトープ）密度が
２６であることを示している。
）の各種一度比に対する、２７８ｎｍ（Ａ２７ｇ）の吸
光度に対する４ ２ Ｑ ｎｍ （Ａ、□。）の吸光度
の比についての４点標準曲線を作成した（標準誤差＝ｏ
、ｏ１ｇ）。ＢＳＡに対するハブテンの比は２５５〜０
である。この曲線において、Ａ４２０ ： Ａ２□８は
免疫原複合体における抗原決定基（エピトープ）密度が
２６であることを示している。
蛋白質回収率は、Ａ２．ｏＫ対するｓｏｍＭ）ＩＪス緩
衝液中の牛血清アルブミン濃度についての５点曲線に照
らして、２８０ ａｍにおける吸光度によって測定され
たが、その量は３１４μｍｏＡ （３，５％）で抗体の
産生 免疫原（１■／ｍ１．） ６−を、フロイント完全アジ
ュバント（Ｆｒａｕｎｄｓ （：：ｏｍｐｌｅｔｅ Ａ
ｄｊｕｖａｎｔ ） １２ ｒｎｌ！。
衝液中の牛血清アルブミン濃度についての５点曲線に照
らして、２８０ ａｍにおける吸光度によって測定され
たが、その量は３１４μｍｏＡ （３，５％）で抗体の
産生 免疫原（１■／ｍ１．） ６−を、フロイント完全アジ
ュバント（Ｆｒａｕｎｄｓ （：：ｏｍｐｌｅｔｅ Ａ
ｄｊｕｖａｎｔ ） １２ ｒｎｌ！。
及び食塩水６−と混合した。複数のウサギをこの混合物
２ｒｎｌずつで同時に免疫した。３週間後、それらのウ
サギを、不完全フロインドアジュバントを用いて調製し
た同様の混合物で再免疫した。補助注射による免疫操作
（ｂｏｏｓｔｅｒ ｉ＋ｔ＋ｍｕｎｉｚｎｔｉｏｎ）を
５週間ごとに繰返した。試験採血は、各補助注射後１週
間して行った。適切な力価を有する抗血清は初免疫後、
４力月目寸でに得ら力、た。
２ｒｎｌずつで同時に免疫した。３週間後、それらのウ
サギを、不完全フロインドアジュバントを用いて調製し
た同様の混合物で再免疫した。補助注射による免疫操作
（ｂｏｏｓｔｅｒ ｉ＋ｔ＋ｍｕｎｉｚｎｔｉｏｎ）を
５週間ごとに繰返した。試験採血は、各補助注射後１週
間して行った。適切な力価を有する抗血清は初免疫後、
４力月目寸でに得ら力、た。
標識複合体の製造
無水ＤＭＦ １０−中の７−β−ガラクトシルクマリン
−３−カルボン酸［Ｊ、 Ｆ、 Ｂｕｒｄ、 ｅＬ ａ
ｌ。
−３−カルボン酸［Ｊ、 Ｆ、 Ｂｕｒｄ、 ｅＬ ａ
ｌ。
Ｃｌ１ｎ、 Ｃｈｅｍ、 ２３ ：１４０２ （１９７
７） ） ３２０ Ｑ（１ｍｍｏｌ）及びトリエチルア
ミン１当景の溶液を、アルゴン雰囲気下で攪拌しながら
水浴上で冷却した。これに、クロロギ酸イソブチル１２
０■（０、９２ｍｍｏｌ ）を滴下した。冷却しながら
１５分間攪拌を続け、混合無水物の生成を完結せしめた
。
７） ） ３２０ Ｑ（１ｍｍｏｌ）及びトリエチルア
ミン１当景の溶液を、アルゴン雰囲気下で攪拌しながら
水浴上で冷却した。これに、クロロギ酸イソブチル１２
０■（０、９２ｍｍｏｌ ）を滴下した。冷却しながら
１５分間攪拌を続け、混合無水物の生成を完結せしめた
。
アミノブチルスクシンイミド誘導体の塩酸塩（前記）
（２ｏｏ＋ｙ、 ０．８ｍｍｏｌ）及びトリエチルア
ミン１当量を無水ＤＭＦ ３−に溶解し、得られた混合
無水物溶液と混合した。１時間後、溶媒を蒸発し、残渣
をシリカゲル７０２を用いたクロマトグラフィーに付し
、２−プロパツール：ＩＭトリエチルアンモニウム重炭
酸塩水溶液９７ ： ３ （ｖ／ｖ）で溶出させた。１
５−ずつの画分を集めた。両分１８〜３０を一つにし、
これを蒸発すると、残渣が得られ、との残渣はエタノー
ルで処理すると結晶化した。乾燥させると、白色結晶と
しての螢光標識化試薬複合体が２３０■得られた。”Ｐ
１６２〜１６３℃ 免疫試験 エトサクシミドについての均一系基質標識化螢光免疫試
験（ＳＬＦＩＡ−米国特許第４．２７９，９９２号）を
、以下のようにして行った。
（２ｏｏ＋ｙ、 ０．８ｍｍｏｌ）及びトリエチルア
ミン１当量を無水ＤＭＦ ３−に溶解し、得られた混合
無水物溶液と混合した。１時間後、溶媒を蒸発し、残渣
をシリカゲル７０２を用いたクロマトグラフィーに付し
、２−プロパツール：ＩＭトリエチルアンモニウム重炭
酸塩水溶液９７ ： ３ （ｖ／ｖ）で溶出させた。１
５−ずつの画分を集めた。両分１８〜３０を一つにし、
これを蒸発すると、残渣が得られ、との残渣はエタノー
ルで処理すると結晶化した。乾燥させると、白色結晶と
しての螢光標識化試薬複合体が２３０■得られた。”Ｐ
１６２〜１６３℃ 免疫試験 エトサクシミドについての均一系基質標識化螢光免疫試
験（ＳＬＦＩＡ−米国特許第４．２７９，９９２号）を
、以下のようにして行った。
Ａ、試薬
１ 抗体／酵素試薬
０．１単位／−のβ−ガラクトシダーゼ、抗血清が存在
しないときの螢光量を約１５％減少させるに十分な量の
、エトサクシミド免疫原に対する抗血清及び１５．４
ｍＭのナトリウムアジドからなるｐＨ８，３，５０ｍＭ
のバイシフ （Ｂｉｃｉｎｅ）緩衝液（Ｎ、Ｎ−ビス（
２−ヒドロキシエチル）グリシン、カルビオケムーベー
リング社、ラホーラ、カリフォルニア州、米国〕 ２、複合体試薬 ｏ、ｏ Ｏ１％ （ｖ／ｖ）のツイーン（Ｔｗｅｅｎ
） ２０界面活性剤（シグマ・ケミカル社、セントルイ
ス、ミズリー州、米国）、０．１３μＭの標識化複合体
及び１５．４ｍＭのナトリウムアジドからなるｐＨ３，
５，３０ｍＭのギ酸緩衝液 ３、 エトサクシミド標準液 ５０ｍＭバイシン緩衝液で５１倍希釈され、１５．４ｍ
Ｍのナトリウムアジドを含む正常なヒトの血清に加えら
れたＵＳＰ参照標準エトサクシミド Ｂ、試験方法 キュベツト中の抗体／酵素試薬３．１−に希エトサクシ
ミド標準液１００μｔを加えた。次いで、反応を開始さ
せるために、複合体試薬１００μｔを各々のキュベツト
に混合し々から添加した。２０分後、螢光強度を各々の
キュベツトについて測定した（励起４ Ｑ Ｑ ｎｍ
、放出４５０ ｎｍ ）。
しないときの螢光量を約１５％減少させるに十分な量の
、エトサクシミド免疫原に対する抗血清及び１５．４
ｍＭのナトリウムアジドからなるｐＨ８，３，５０ｍＭ
のバイシフ （Ｂｉｃｉｎｅ）緩衝液（Ｎ、Ｎ−ビス（
２−ヒドロキシエチル）グリシン、カルビオケムーベー
リング社、ラホーラ、カリフォルニア州、米国〕 ２、複合体試薬 ｏ、ｏ Ｏ１％ （ｖ／ｖ）のツイーン（Ｔｗｅｅｎ
） ２０界面活性剤（シグマ・ケミカル社、セントルイ
ス、ミズリー州、米国）、０．１３μＭの標識化複合体
及び１５．４ｍＭのナトリウムアジドからなるｐＨ３，
５，３０ｍＭのギ酸緩衝液 ３、 エトサクシミド標準液 ５０ｍＭバイシン緩衝液で５１倍希釈され、１５．４ｍ
Ｍのナトリウムアジドを含む正常なヒトの血清に加えら
れたＵＳＰ参照標準エトサクシミド Ｂ、試験方法 キュベツト中の抗体／酵素試薬３．１−に希エトサクシ
ミド標準液１００μｔを加えた。次いで、反応を開始さ
せるために、複合体試薬１００μｔを各々のキュベツト
に混合し々から添加した。２０分後、螢光強度を各々の
キュベツトについて測定した（励起４ Ｑ Ｑ ｎｍ
、放出４５０ ｎｍ ）。
Ｃ１結果
試験を行ったところ次の結果が得られた。
０ ３１．３
２０ ４７・５
５０ ６５．２１００
８０．１１５０
９０．０この免役試験は、血清試料中のエトサク
シミド濃度の測定に用いることができた。
８０．１１５０
９０．０この免役試験は、血清試料中のエトサク
シミド濃度の測定に用いることができた。
Claims (9)
- （１） アミン基を含有した特定のハプテンに対する
抗体を産生ずるために用いられる免疫原複合体であって
、 次式： （式中、ハプテン−はアミノ基を介して結合されたハプ
テンを表し、−（ＮＨ）キャリアはそのアミノ基を介し
て直接結合源れた抗原性蛋白質もしくはポリペプチドを
表し、ｐは、平均して、１からキャリア中の有効なアミ
ン基の数までを表す） で示されることを特徴とする免疫原複合体。 - （２）ハプテンが臨床的に重要な分析対象物又は臨床的
に重要な分析対象物のアミノ基含有誘導体である特許請
求の範囲第１項記載の複合体。 - （３）Ｐが、平均して、１〜約５０である特許請求の範
囲第１項記載の複合体。 - （４）抗原性蛋白質もしくはポリペプチドがアルブミン
である特許請求の範囲第１項記載の複合体。 - （５）ハプテンが約１００〜約１５００の範囲の分子量
を有する特許請求の範囲第１項記載の複合体。 - （６）特許請求の範囲第１項記載の免疫原複合体に対し
て産生された抗体。 - （７）特許請求の範囲第３項記載の免疫原複合体に対し
て産生された抗体。 - （８）特許請求の範囲第５項記載の免疫原複合体に対し
て産生された抗体。 - （９）ハプテンをカルボニルジイミダゾールと反応させ
、次いで得られた活性ハプテンを抗原性蛋白質もしくは
ポリペプチドと接触せしめる工程からなる、特許請求の
範囲第１項記載の免疫原複合体の製造方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US479757 | 1983-03-28 | ||
| US06/479,757 US4486344A (en) | 1983-03-28 | 1983-03-28 | Urea-linked immunogens, antibodies, and preparative method |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59206765A true JPS59206765A (ja) | 1984-11-22 |
Family
ID=23905299
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59057524A Pending JPS59206765A (ja) | 1983-03-28 | 1984-03-27 | 尿素結合免疫原複合体、その抗体及びその製造方法 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4486344A (ja) |
| EP (1) | EP0123114A1 (ja) |
| JP (1) | JPS59206765A (ja) |
| AU (1) | AU546757B2 (ja) |
| CA (1) | CA1212900A (ja) |
| ES (1) | ES8605156A1 (ja) |
| IL (1) | IL70968A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01165961A (ja) * | 1987-12-22 | 1989-06-29 | Baiteku Res:Kk | ビリルビン抗原、そのモノクローナル抗体、それらの製造方法およびその用途 |
| US5175697A (en) * | 1986-06-02 | 1992-12-29 | Minolta Camera Kabushiki Kaisha | Spectrophotometer for accurately measuring light intensity in a specific wavelength region |
| JPH08211058A (ja) * | 1994-10-28 | 1996-08-20 | Boehringer Mannheim Gmbh | 競合免疫検定における使用のための生物発光標識ハプテン |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4650771A (en) * | 1983-11-04 | 1987-03-17 | Miles Laboratories, Inc. | Immunogens, antibodies, labeled conjugates, and related derivatives for lidocaine and analogs thereof |
| US4670406A (en) * | 1984-01-06 | 1987-06-02 | Becton Dickinson And Company | Tracers for use in assays |
| AU600432B2 (en) * | 1984-11-27 | 1990-08-16 | Dade Behring Marburg Gmbh | Divalent hapten derivatives, process for preparing and use of them |
| US4762915A (en) * | 1985-01-18 | 1988-08-09 | Liposome Technology, Inc. | Protein-liposome conjugates |
| US4824659A (en) * | 1985-06-07 | 1989-04-25 | Immunomedics, Inc. | Antibody conjugates |
| FR2601141A1 (fr) * | 1986-07-02 | 1988-01-08 | Centre Nat Rech Scient | Produit de couplage a base d'haptene, utile notamment comme substance immunogene, anticorps correspondants et applications |
| DE3727987A1 (de) * | 1987-08-21 | 1989-03-02 | Sleytr Uwe B | Pharmazeutische struktur |
| US5595732A (en) * | 1991-03-25 | 1997-01-21 | Hoffmann-La Roche Inc. | Polyethylene-protein conjugates |
| US5382657A (en) * | 1992-08-26 | 1995-01-17 | Hoffmann-La Roche Inc. | Peg-interferon conjugates |
| DE4447484C2 (de) * | 1994-04-08 | 1997-07-17 | Deutsches Krebsforsch | Mittel zur Hemmung von Apoptose |
| US7011940B1 (en) | 1999-04-14 | 2006-03-14 | Medical Discovery Partners Llc | Quality control for cytochemical assays |
| KR20080072686A (ko) * | 2005-11-29 | 2008-08-06 | 말린크로트, 인코포레이티드 | 이관능성 금속 킬레이팅 컨쥬게이트 |
| US20070141723A1 (en) * | 2005-12-16 | 2007-06-21 | Sompuram Seshi A | Immunohistochemistry staining controls |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS4941526A (ja) * | 1972-05-15 | 1974-04-18 | ||
| JPS5366417A (en) * | 1976-11-25 | 1978-06-13 | Dainippon Pharmaceut Co Ltd | Haptene antigens |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CH396316A (de) * | 1960-07-12 | 1965-07-31 | Wander Ag Dr A | Verfahren zur Herstellung von Impfstoffen |
| SE337223B (ja) * | 1967-05-23 | 1971-08-02 | Pharmacia Ab | |
| US4041076A (en) * | 1974-10-23 | 1977-08-09 | Hoffmann-La Roche Inc. | Immunoassay for pharmacologically active phenethylamines |
| DE2862449D1 (en) * | 1977-08-22 | 1984-11-22 | Nat Res Dev | Macromolecular covalent conjugates, methods for preparing and pharmaceutical compositions containing them |
| US4192799A (en) * | 1977-09-21 | 1980-03-11 | The Upjohn Company | Conjugates formed by reacting a prostaglandin mimic compound with a carrier molecule |
| US4218436A (en) * | 1977-09-21 | 1980-08-19 | The Upjohn Company | Compounds and methods |
| US4276206A (en) * | 1979-01-18 | 1981-06-30 | Scripps Clinic & Research Foundation | Immunochemical conjugates: method and composition |
| IL65556A (en) * | 1981-05-20 | 1985-07-31 | Robins Co Inc A H | Pharmaceutical compositions containing n-(aryloxyalkyl)-n'-(aminoalkyl)ureas or salts thereof and some such novel compounds |
| US4533493A (en) * | 1981-08-27 | 1985-08-06 | Miles Laboratories, Inc. | Theophylline immunogens, antibodies, labeled conjugates, and related derivatives |
-
1983
- 1983-03-28 US US06/479,757 patent/US4486344A/en not_active Expired - Fee Related
-
1984
- 1984-01-17 CA CA000445453A patent/CA1212900A/en not_active Expired
- 1984-02-15 IL IL70968A patent/IL70968A/xx unknown
- 1984-03-05 AU AU25272/84A patent/AU546757B2/en not_active Ceased
- 1984-03-16 EP EP84102905A patent/EP0123114A1/en not_active Withdrawn
- 1984-03-23 ES ES530899A patent/ES8605156A1/es not_active Expired
- 1984-03-27 JP JP59057524A patent/JPS59206765A/ja active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS4941526A (ja) * | 1972-05-15 | 1974-04-18 | ||
| JPS5366417A (en) * | 1976-11-25 | 1978-06-13 | Dainippon Pharmaceut Co Ltd | Haptene antigens |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5175697A (en) * | 1986-06-02 | 1992-12-29 | Minolta Camera Kabushiki Kaisha | Spectrophotometer for accurately measuring light intensity in a specific wavelength region |
| US5305233A (en) * | 1986-06-02 | 1994-04-19 | Minolta Camera Kabushiki Kaisha | Spectrophotometer for accurately measuring light intensity in a specific wavelength region |
| JPH01165961A (ja) * | 1987-12-22 | 1989-06-29 | Baiteku Res:Kk | ビリルビン抗原、そのモノクローナル抗体、それらの製造方法およびその用途 |
| JPH08211058A (ja) * | 1994-10-28 | 1996-08-20 | Boehringer Mannheim Gmbh | 競合免疫検定における使用のための生物発光標識ハプテン |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA1212900A (en) | 1986-10-21 |
| AU2527284A (en) | 1984-10-11 |
| IL70968A (en) | 1986-10-31 |
| ES8605156A1 (es) | 1986-03-16 |
| IL70968A0 (en) | 1984-05-31 |
| ES530899A0 (es) | 1986-03-16 |
| EP0123114A1 (en) | 1984-10-31 |
| US4486344A (en) | 1984-12-04 |
| AU546757B2 (en) | 1985-09-19 |
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