JPS58216124A - プロプラノロ−ル試験用プロプラノロ−ルイムノゲン及びプロプラノロ−ル化合物並びにそれらを用いる試験法 - Google Patents
プロプラノロ−ル試験用プロプラノロ−ルイムノゲン及びプロプラノロ−ル化合物並びにそれらを用いる試験法Info
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- JPS58216124A JPS58216124A JP58090847A JP9084783A JPS58216124A JP S58216124 A JPS58216124 A JP S58216124A JP 58090847 A JP58090847 A JP 58090847A JP 9084783 A JP9084783 A JP 9084783A JP S58216124 A JPS58216124 A JP S58216124A
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- C07D295/04—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms
- C07D295/12—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by singly or doubly bound nitrogen atoms
- C07D295/125—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by singly or doubly bound nitrogen atoms with the ring nitrogen atoms and the substituent nitrogen atoms attached to the same carbon chain, which is not interrupted by carbocyclic rings
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- C07H17/065—Benzo[b]pyrans
- C07H17/075—Benzo[b]pyran-2-ones
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
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- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
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- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
薬理学的に活性な薬剤は、その所望の特徴的効果を得る
ためには、その作用位置において適正な濃度で存在しな
ければならない。生体内における薬剤の濃度は膜力され
る薬剤量の関数であるばかシでなく、又その吸着、分配
、組織内の結合、生体内変化および排泄の程度および速
度の関数である。治療上の有効性のための適正な投与量
を決定するためには、生理学的液体、例えば血液あるい
は尿の薬剤濃度を測定することが必要である。
ためには、その作用位置において適正な濃度で存在しな
ければならない。生体内における薬剤の濃度は膜力され
る薬剤量の関数であるばかシでなく、又その吸着、分配
、組織内の結合、生体内変化および排泄の程度および速
度の関数である。治療上の有効性のための適正な投与量
を決定するためには、生理学的液体、例えば血液あるい
は尿の薬剤濃度を測定することが必要である。
薬剤の測定は螢光分析、気液クロマトグラフィー、質量
分析および競合的蛋白結合試験（”免疫試験″）をはじ
めとする種々の技術によって達成することができる。生
理学的液体中の薬剤濃度を測定する免疫試験技術は、こ
のような技術が処理する臨床試料に対して非常に感度が
よく、特異的であり、かつ技術的に適用可能であるので
、広範表種類の薬剤に対して次第に使用されるようにな
ってきている。免疫試験技術は、ある薬剤に対して特異
的であシ、すなわちその薬剤に対して強い親和力で結合
するが、生理的液体中に存在する関連の薬剤および代謝
物に対しては結合しないかまたは弱く結合する抗体を使
用する。
分析および競合的蛋白結合試験（”免疫試験″）をはじ
めとする種々の技術によって達成することができる。生
理学的液体中の薬剤濃度を測定する免疫試験技術は、こ
のような技術が処理する臨床試料に対して非常に感度が
よく、特異的であり、かつ技術的に適用可能であるので
、広範表種類の薬剤に対して次第に使用されるようにな
ってきている。免疫試験技術は、ある薬剤に対して特異
的であシ、すなわちその薬剤に対して強い親和力で結合
するが、生理的液体中に存在する関連の薬剤および代謝
物に対しては結合しないかまたは弱く結合する抗体を使
用する。
ハブテンは、それ自身抗体の生成を刺激できな □
いがイムノゲン担体と結合するとき抗体の生成を刺激で
きる小分子と定義される。
いがイムノゲン担体と結合するとき抗体の生成を刺激で
きる小分子と定義される。
薬剤のようなハブテンに対する抗体を調製する（７）
技術水準については、ウニインリプ、他著、［ドラッグ
・メタボリズム・レビューズＪＩＯ巻（７）２．２７１
頁、１９７９年（Ｗｅｉｎｒｙｂ ｅｔ、ａｌ、、 Ｄ
ｒｕｇＭｅｔａｂｏ目ａｍ Ｒｅｖｉｅｗｓ 、 １
０（２） ： ２７１ （１９７９’））；プレイフェ
ア他著、「プル・メト・プル４３０巻、２４頁、１９７
４年（Ｐｌａｙｆａｌｒ ｅＬ、 ａｌ、、 Ｂｒ、
Ｍｅｄ。
・メタボリズム・レビューズＪＩＯ巻（７）２．２７１
頁、１９７９年（Ｗｅｉｎｒｙｂ ｅｔ、ａｌ、、 Ｄ
ｒｕｇＭｅｔａｂｏ目ａｍ Ｒｅｖｉｅｗｓ 、 １
０（２） ： ２７１ （１９７９’））；プレイフェ
ア他著、「プル・メト・プル４３０巻、２４頁、１９７
４年（Ｐｌａｙｆａｌｒ ｅＬ、 ａｌ、、 Ｂｒ、
Ｍｅｄ。
Ｂｕｌｌ、 ３０ ： ２４（１９７４））： プラ
ウトン他著「タリノ・ケム」 ２２巻の６．７２６頁、
１９７６年（Ｂｒｏｕｇｈｔｏｎ ｅｔ、ａｌ、、 Ｃ
ｌ１ｎ、 Ｃｈｅｍ、、 ２２／６ ニア２６（１９７
６）） ：およびパトラ−著「ジェイ・イムツル・メス
」７巻、１頁、１９７５年（Ｂｕｔｌｅｒ。
ウトン他著「タリノ・ケム」 ２２巻の６．７２６頁、
１９７６年（Ｂｒｏｕｇｈｔｏｎ ｅｔ、ａｌ、、 Ｃ
ｌ１ｎ、 Ｃｈｅｍ、、 ２２／６ ニア２６（１９７
６）） ：およびパトラ−著「ジェイ・イムツル・メス
」７巻、１頁、１９７５年（Ｂｕｔｌｅｒ。
Ｊ、 １ｍｍｕｎｏｌ； Ｍ６ｔｈ、、 ７ ： １
（１９７り ））に示されている。
（１９７り ））に示されている。
このような技術によって試験できる薬剤の一態様がプロ
プラノセールである。
プラノセールである。
プロプラノロールは式：
（８）
を有するβ−アドレナリン作用抑制物質である。
プロプラノロールは、高血圧、心臓脈動障害、狭心症、
甲状腺機能亢進等の多くの疾病の治療に広く用いられる
。同一の投薬濃度でさえ血漿中に存在するプロプラノロ
ールの濃度が個々に変化するのが一般的であることが判
明している。また薬剤が肝臓中で代謝する程度が大きく
変化することもある。その結果、特定量投与後の血漿濃
度あるいはプロプラノロールの効果を予測することは必
らずしも可能ではない。これらの要因によシ、免疫試験
技術がプロプラノロールの循環濃度を測定するために臨
床的に有用な方法であることが判明している。
甲状腺機能亢進等の多くの疾病の治療に広く用いられる
。同一の投薬濃度でさえ血漿中に存在するプロプラノロ
ールの濃度が個々に変化するのが一般的であることが判
明している。また薬剤が肝臓中で代謝する程度が大きく
変化することもある。その結果、特定量投与後の血漿濃
度あるいはプロプラノロールの効果を予測することは必
らずしも可能ではない。これらの要因によシ、免疫試験
技術がプロプラノロールの循環濃度を測定するために臨
床的に有用な方法であることが判明している。
米国特許第４，０２６，８７９号は、架橋腕を介して水
酸基でイムノゲン（ｉｍｍｕｎｏｇｅｎ、免疫原）担体
物質に結合するプロプラノロールのイムノゲ７に関する
ものである。特許請求されたイムノゲンは構造： ０ ′ ０ を有する。
酸基でイムノゲン（ｉｍｍｕｎｏｇｅｎ、免疫原）担体
物質に結合するプロプラノロールのイムノゲ７に関する
ものである。特許請求されたイムノゲンは構造： ０ ′ ０ を有する。
米国特許第４，０７０，４９２号は宿主動物に上記米国
特許第４，０７０，４８９号において特許請求されたイ
ムノゲンを注入することによシ調製されたプロプラノロ
ール抗体に関するものである。
特許第４，０７０，４８９号において特許請求されたイ
ムノゲンを注入することによシ調製されたプロプラノロ
ール抗体に関するものである。
米国特許第４，２４１，１７７号は、結合腕（ロ）を介
してアミンの窒素原子でイムノゲン担体物質に結合され
たプロプラノロールのイムノゲンに関するものである。
してアミンの窒素原子でイムノゲン担体物質に結合され
たプロプラノロールのイムノゲンに関するものである。
その特許請求されたイムノゲンは構造：を有する。
本発明はプロプラノロール免疫試験に用いる試薬を提供
するものである。本発明は式： （式中、Ｒは結合基、Ｘはイムノゲン担体物質、および
ｐは平均値として約１〜５０の数を表わす。）を有スる
３−（１−ナフトキシ）−２，−ヒドロキシブロビルア
ミンイムノゲン；および式−〔式中、Ｒ′は炭素数１〜
１２のアルキレン、アルケニレン又はフェニレン部分（
ｍｏｉｅｔｙ ）であシ、Ｘは上記と同義である。〕 を有する３−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−（を−ナフト
キシ）−１−プロピルコアミノ酪酸イムノゲンを包含す
る。
するものである。本発明は式： （式中、Ｒは結合基、Ｘはイムノゲン担体物質、および
ｐは平均値として約１〜５０の数を表わす。）を有スる
３−（１−ナフトキシ）−２，−ヒドロキシブロビルア
ミンイムノゲン；および式−〔式中、Ｒ′は炭素数１〜
１２のアルキレン、アルケニレン又はフェニレン部分（
ｍｏｉｅｔｙ ）であシ、Ｘは上記と同義である。〕 を有する３−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−（を−ナフト
キシ）−１−プロピルコアミノ酪酸イムノゲンを包含す
る。
また本発明は上記イムノゲンに対して調製される抗体；
３−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−（１−す７トキシ）−
１−プロピルコアミノ酪酸の標識化複合体（１ａｂｅｌ
ｌｅｄ ｏｏｎｊｕｇａｔｅ ） ；上記イムノゲンの
合成に用いられる中間体；免疫試験法、試験キットおよ
び試験具も包含する。
３−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−（１−す７トキシ）−
１−プロピルコアミノ酪酸の標識化複合体（１ａｂｅｌ
ｌｅｄ ｏｏｎｊｕｇａｔｅ ） ；上記イムノゲンの
合成に用いられる中間体；免疫試験法、試験キットおよ
び試験具も包含する。
本発明は、イムノゲン担体に結合されたプロプラノロー
ル誘導体であるイムノゲンを動物に注入することによシ
調製されるプロプラノロールに対する抗体を用いるプロ
プラノロールの免疫試験に関する。プロプラノロール誘
導体はイムノゲン担体に結合された３−（１−ナフトキ
シ）−２−ヒドロキシプロピルアミンまたは３−Ｎ−（
２−ヒドロキシ−３−（１−す７トキシ）−１−プロピ
ルコアミノ酪酸である。
ル誘導体であるイムノゲンを動物に注入することによシ
調製されるプロプラノロールに対する抗体を用いるプロ
プラノロールの免疫試験に関する。プロプラノロール誘
導体はイムノゲン担体に結合された３−（１−ナフトキ
シ）−２−ヒドロキシプロピルアミンまたは３−Ｎ−（
２−ヒドロキシ−３−（１−す７トキシ）−１−プロピ
ルコアミノ酪酸である。
ヒトロキシブロビルアミンーイムノゲンハ式−ＯＨ＼
１”ｆｒ’邑ＣＨ，−ＣＭ −ＣＨ，−［−Ｒ−ｉ−Ｘ
（式中、Ｒ％ＰおよびＸは先に定義したとおシである。
（式中、Ｒ％ＰおよびＸは先に定義したとおシである。
）
を有する。
アミノ酪酸−イムノゲンは式：
（式中、Ｒ′、ＰおよびＸは先に定義したとおりである
。） また、中間体は、プロプラノロール免疫試験において検
出可能な試薬として働く標識化複合体を形成するために
使用できる。
。） また、中間体は、プロプラノロール免疫試験において検
出可能な試薬として働く標識化複合体を形成するために
使用できる。
イムノゲン担体物質は従来知られているものの中から選
択できる。はとんどの場合、担体は蛋白またはポリペプ
チドであるが充分な大きさと免疫性を有する炭水化物、
ポリサッカライド（多糖類）、リポポリサッカライド（
リボ多糖類）、核酸等の他の物質も同様に使用できる。
択できる。はとんどの場合、担体は蛋白またはポリペプ
チドであるが充分な大きさと免疫性を有する炭水化物、
ポリサッカライド（多糖類）、リポポリサッカライド（
リボ多糖類）、核酸等の他の物質も同様に使用できる。
大抵の場合、イムノゲン蛋白およびポリペプチドは ５
，０００〜１０．０００，０００ 、好ましくは１５
、０００を超える、さらに一般的には５０，０００を超
える分子量を有する。通常、ある動物種から取り出した
蛋白は、もう１つの種の血液流に導入されるとイムノゲ
ンにガるであろう。特に有用ガ蛋白はアルブミン類、グ
ロブリン類、酵素類、ヘモシアニン類、グロブリン類、
充分な非蛋白性成分を有する蛋白、例えば糖蛋白等であ
る。分子量３０，０００〜２００，０００のアルブミン
類およびグロブリン類が特に好ましい。さらに、従来の
イムノゲン相体物質およびハプテンの担体物質への結合
法に関する技術水準については下記文献を参照してもよ
い。すなわち、バーカー著「ラジオイムノアセイ・オブ
・バイオロジカリー・アクティブ・コンパウンダ」プレ
ンティス−ホール（エングルウッド・クリフス、ニュー
シャーシー、アメリカ合衆国、１９７６）（ＣＩｉｆｆ
ａ、 Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ ＵＳＡ、 １９７６
） ） ：パトラ−著「ジエイ・イムツル・メス」７巻
、１頁、１９７５年（Ｂｕｔｌｅｒ、 Ｊ、 Ｉｍｍｕ
ｎｏｌｏＭｅき７ ： １ （１９７５））；ウニイン
リプ及びシュロフ共著［ドラッグ・メタプ・レプＪＩＯ
巻の２． ２７１頁、１９７９年（Ｗｅｉｎｒｙｂ ａ
ｎｄ ５ｈｌｏｆｆ、 Ｄｒｕｇ ＭｅＬａｂ、Ｒｅｖ
、、 Ｉ Ｑ（２）： ２７１（１９７９））：
プラウトン及びストロング共著「クリソ・タム４２２巻
＋７）６，７２６頁。
，０００〜１０．０００，０００ 、好ましくは１５
、０００を超える、さらに一般的には５０，０００を超
える分子量を有する。通常、ある動物種から取り出した
蛋白は、もう１つの種の血液流に導入されるとイムノゲ
ンにガるであろう。特に有用ガ蛋白はアルブミン類、グ
ロブリン類、酵素類、ヘモシアニン類、グロブリン類、
充分な非蛋白性成分を有する蛋白、例えば糖蛋白等であ
る。分子量３０，０００〜２００，０００のアルブミン
類およびグロブリン類が特に好ましい。さらに、従来の
イムノゲン相体物質およびハプテンの担体物質への結合
法に関する技術水準については下記文献を参照してもよ
い。すなわち、バーカー著「ラジオイムノアセイ・オブ
・バイオロジカリー・アクティブ・コンパウンダ」プレ
ンティス−ホール（エングルウッド・クリフス、ニュー
シャーシー、アメリカ合衆国、１９７６）（ＣＩｉｆｆ
ａ、 Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ ＵＳＡ、 １９７６
） ） ：パトラ−著「ジエイ・イムツル・メス」７巻
、１頁、１９７５年（Ｂｕｔｌｅｒ、 Ｊ、 Ｉｍｍｕ
ｎｏｌｏＭｅき７ ： １ （１９７５））；ウニイン
リプ及びシュロフ共著［ドラッグ・メタプ・レプＪＩＯ
巻の２． ２７１頁、１９７９年（Ｗｅｉｎｒｙｂ ａ
ｎｄ ５ｈｌｏｆｆ、 Ｄｒｕｇ ＭｅＬａｂ、Ｒｅｖ
、、 Ｉ Ｑ（２）： ２７１（１９７９））：
プラウトン及びストロング共著「クリソ・タム４２２巻
＋７）６，７２６頁。
１９７６年（Ｂｒｏｕｇｈｔｏｎ ａｎｄ Ｓｔｒｏｎ
ｇ、 ｃｌｉｎ、Ｃｈｅｍ。
ｇ、 ｃｌｉｎ、Ｃｈｅｍ。
２２（６）： ７２６（１９７６））； およびプレ
イフェア他者「プル・メト・グルＪ３０巻、２４Ｊｊ、
１９７４年（Ｐｌａｙｆａｉｒ、 ａｔ、 ａｌ、、
Ｂｒ、 Ｍ＠ｄ、 Ｂｕｌｌ、。
イフェア他者「プル・メト・グルＪ３０巻、２４Ｊｊ、
１９７４年（Ｐｌａｙｆａｉｒ、 ａｔ、 ａｌ、、
Ｂｒ、 Ｍ＠ｄ、 Ｂｕｌｌ、。
−リ： ２４（１９７４））である。
表示ｐは担体に結合されたプロプラノロール残基の平均
の数を表わす。その数ｐはイムノゲンのエピトープ密度
と称されることもあシ、通常の状態では平均して１〜約
５０さらに普通には１〜約２５である。イムノゲンの合
成及び抗体応答の容易さ及び再現性を考慮すると最適の
エピトープ密 度は約２〜約２０、さらに一般的に
は５〜１５の間にある。
の数を表わす。その数ｐはイムノゲンのエピトープ密度
と称されることもあシ、通常の状態では平均して１〜約
５０さらに普通には１〜約２５である。イムノゲンの合
成及び抗体応答の容易さ及び再現性を考慮すると最適の
エピトープ密 度は約２〜約２０、さらに一般的に
は５〜１５の間にある。
ヒドロキシプロピルアミンは当業界において公知の技術
によって結合基Ｒを介してイムノゲン担体に結合できる
。例えば薬剤部分のアミノ基は、トルエン−２，４−ジ
イソシアネート〔シー・エッチ・ダブリュ十ハース及び
ニス拳エヌＱテイマシェフ共著「メソツズ・イン・エン
ザイモル」２５巻、パートＢ、６２５頁、１９７２年（
Ｃ，Ｈ，Ｗ、Ｈｉｒｓａｎｄ Ｓ、Ｎ、Ｔｉｍａｓｈｅ
ｆｆ、 Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎ＋ｇｙｍｏ１．、
２５（Ｐａｒｔ Ｂ）： ６２５（１９７２）））：
４．４’−ジフルオロ−３，３′−ジニトロジフェ
ニルスルホン〔ヒー・カトルカサス他藩「ジエイ・パイ
オル・ケム」２４１４巻、４０６頁、１・９６９年（Ｐ
、Ｃｕａｔｒｅｏａｓａｓ、 ｅｔ、ａｌ、。
によって結合基Ｒを介してイムノゲン担体に結合できる
。例えば薬剤部分のアミノ基は、トルエン−２，４−ジ
イソシアネート〔シー・エッチ・ダブリュ十ハース及び
ニス拳エヌＱテイマシェフ共著「メソツズ・イン・エン
ザイモル」２５巻、パートＢ、６２５頁、１９７２年（
Ｃ，Ｈ，Ｗ、Ｈｉｒｓａｎｄ Ｓ、Ｎ、Ｔｉｍａｓｈｅ
ｆｆ、 Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎ＋ｇｙｍｏ１．、
２５（Ｐａｒｔ Ｂ）： ６２５（１９７２）））：
４．４’−ジフルオロ−３，３′−ジニトロジフェ
ニルスルホン〔ヒー・カトルカサス他藩「ジエイ・パイ
オル・ケム」２４１４巻、４０６頁、１・９６９年（Ｐ
、Ｃｕａｔｒｅｏａｓａｓ、 ｅｔ、ａｌ、。
Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈ＠ｍ、、２４４：４０６（１９６９
）））： ゲルタールアルデヒド〔エル働エイ・フロ
ーマン他藩「エンドクリノル」８７巻、１０５５頁、１
９７０年（Ｌ、Ａ、Ｆｒｏｈｍａｎ、 ｅＬ、ｉｆ、、
Ｅｎｄｏａｒｉｎｏｌ、、 ８７ ： ＩＱ５５
（１９７（１） ：ビスーイミドエステル類〔エイ・ダ
ットン他藩「バイオケム・バイオフイズ・レス・コム」
２３巻、７３０頁、１９６６年（Ａ。
）））： ゲルタールアルデヒド〔エル働エイ・フロ
ーマン他藩「エンドクリノル」８７巻、１０５５頁、１
９７０年（Ｌ、Ａ、Ｆｒｏｈｍａｎ、 ｅＬ、ｉｆ、、
Ｅｎｄｏａｒｉｎｏｌ、、 ８７ ： ＩＱ５５
（１９７（１） ：ビスーイミドエステル類〔エイ・ダ
ットン他藩「バイオケム・バイオフイズ・レス・コム」
２３巻、７３０頁、１９６６年（Ａ。
Ｄｕｔｔｏｎ、 ａｔ、ａｌ、、 Ｂｉｏａｈｅｍ、
Ｂｉｏｐｈｙａ、 Ｒａｇ、 Ｃｄｍｍ、。
Ｂｉｏｐｈｙａ、 Ｒａｇ、 Ｃｄｍｍ、。
２３ニア３０（１９６６）））： またはクロロトリ
アジン〔ジー・ケイ及びイー・エム・クルーク共著「ネ
イチャー」２１６巻、５１４頁、１９６７年（Ｇ、Ｋａ
ｙ ａｎｄ Ｅ、Ｍ、Ｃｒｏｏｋ、 Ｎａｔｕｒｅ、
２１６ ：５１４（１９６７））） 等の二官能性試
薬によって蛋白等のアミノ含有イムノゲン担体に付着で
きる。
アジン〔ジー・ケイ及びイー・エム・クルーク共著「ネ
イチャー」２１６巻、５１４頁、１９６７年（Ｇ、Ｋａ
ｙ ａｎｄ Ｅ、Ｍ、Ｃｒｏｏｋ、 Ｎａｔｕｒｅ、
２１６ ：５１４（１９６７））） 等の二官能性試
薬によって蛋白等のアミノ含有イムノゲン担体に付着で
きる。
またヒドロキシプロピルアミンのアミノ基は、「ペプタ
イズ」グツドマン及びマイエンホファー編ジョン０ワイ
リー・アンド・サンズ発行、ニューヨーク、１９７７年
、６頁以下（”Ｐｅｐｔｉｄｅｓ″ ａｄ。
イズ」グツドマン及びマイエンホファー編ジョン０ワイ
リー・アンド・サンズ発行、ニューヨーク、１９７７年
、６頁以下（”Ｐｅｐｔｉｄｅｓ″ ａｄ。
Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｍｅｉｎｈｏｆｅｒ、 Ｊｏ
ｈｎ Ｗｉｌａｙ ＆ ５ｏｎｓ。
ｈｎ Ｗｉｌａｙ ＆ ５ｏｎｓ。
（ＮｅｗＹｏｒｋ、 １９７７ ）ｐ、 ６６ｔａａｑ
、）に記載されている如き標準的なペプチド結合形成反
応によって担体中に存在するカルボキシル基に結合でき
る。
、）に記載されている如き標準的なペプチド結合形成反
応によって担体中に存在するカルボキシル基に結合でき
る。
加うるに、チオール基はアミン基をＮ−サクシミジル３
−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート〔ジエイ・カ
ールソン他藩「バイオケム・ジェイ」１７３巻、７２３
頁、１９７８年（Ｊ、 Ｃａｒｌｓａｏｎ。
−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート〔ジエイ・カ
ールソン他藩「バイオケム・ジェイ」１７３巻、７２３
頁、１９７８年（Ｊ、 Ｃａｒｌｓａｏｎ。
ａｔ８ｍｌ、、 Ｂｉｏｅｈｅｍ、Ｊ、、 １７３
： ７２３（１９７８）））と反応させることによって
薬剤誘導体内に導入でき、これを二硫化交換反応〔マー
チン他著「バイオケム」２０巻、４２２９頁′、１９８
１年（Ｍａｒｔｉｎ。
： ７２３（１９７８）））と反応させることによって
薬剤誘導体内に導入でき、これを二硫化交換反応〔マー
チン他著「バイオケム」２０巻、４２２９頁′、１９８
１年（Ｍａｒｔｉｎ。
ａｔ、ａｌ、、 Ｂｉｏｏｈｅｍ、、 ２０：４２
２９（１９８１１））によってチオール含有担体に結合
できる。
２９（１９８１１））によってチオール含有担体に結合
できる。
アミノ酪酸は当業界において公知の技術によってイムノ
ゲン担体に直接結合できる。例えばアミノ酪酸は標準的
なペプチド結合形成反応（上記グツドマン、マイエンホ
ファー著）を介してイムノゲン担体に結合できる。
ゲン担体に直接結合できる。例えばアミノ酪酸は標準的
なペプチド結合形成反応（上記グツドマン、マイエンホ
ファー著）を介してイムノゲン担体に結合できる。
また、担体に付着させるに当って、以下に記載するよう
に”スペーサー″Ｒ’ （ここでＲ′は炭素原子数が約
１〜１２でありうる）を使用できる。
に”スペーサー″Ｒ’ （ここでＲ′は炭素原子数が約
１〜１２でありうる）を使用できる。
Ｒ’がアルキレンのとき還元アルキル化反応を用いるこ
とができる。下記化合物： Ｈ を、適正なケト−アルカン酸と反応させることができる
。例えば上記アミンと７−ケドオクタン酸〔オー・ワラ
ク著「アン」３４５巻、１４１頁、１９０６年（０，Ｗ
ａｌｌａｃｈ、 Ａｎｎ、、 ３４５ ：１４１ （１
９０６））〕をシアンホウ化水素ナトリウム〔アール・
エフ・ポーチ他者「ジェイ・アメル・ケム・ツク」９３
巻、２８７９頁、１９７１年（ＲｏＦ、Ｂｏｒｃｈ。
とができる。下記化合物： Ｈ を、適正なケト−アルカン酸と反応させることができる
。例えば上記アミンと７−ケドオクタン酸〔オー・ワラ
ク著「アン」３４５巻、１４１頁、１９０６年（０，Ｗ
ａｌｌａｃｈ、 Ａｎｎ、、 ３４５ ：１４１ （１
９０６））〕をシアンホウ化水素ナトリウム〔アール・
エフ・ポーチ他者「ジェイ・アメル・ケム・ツク」９３
巻、２８７９頁、１９７１年（ＲｏＦ、Ｂｏｒｃｈ。
ａｔ、 ａｌ、、 Ｊ、 Ａｍｅｒ、 Ｃｈｅｍ、
Ｓｏｃ、、 ９３ ：２８９７（１９７１’））］の
存在下反応させて、従来のペプチド結合形成反応によっ
てアミン含有担体に付着することができる下記化合物： を得ることができる。
Ｓｏｃ、、 ９３ ：２８９７（１９７１’））］の
存在下反応させて、従来のペプチド結合形成反応によっ
てアミン含有担体に付着することができる下記化合物： を得ることができる。
Ｒ′がアルケニレンであるとき、先の合成を、ケト−ア
ルカン酸をケト−アルケン酸に代えることによシ修正し
てアルケニレン結合基を得ることができる。例えば上記
還元アルキル化反応において □９−オキソー２−
デセノン酸〔エム・バービアー他者「コンブト・レング
ス」２５１巻、１１３５頁、１９６０年（Ｍ、 Ｂａｒ
ｂｉｅｒ、 ａｔ、 ａｌ、、 Ｃｏｍｐｔ、 Ｒｅ
ｎｄｕ。
ルカン酸をケト−アルケン酸に代えることによシ修正し
てアルケニレン結合基を得ることができる。例えば上記
還元アルキル化反応において □９−オキソー２−
デセノン酸〔エム・バービアー他者「コンブト・レング
ス」２５１巻、１１３５頁、１９６０年（Ｍ、 Ｂａｒ
ｂｉｅｒ、 ａｔ、 ａｌ、、 Ｃｏｍｐｔ、 Ｒｅ
ｎｄｕ。
２５１ ：１１３５（１９６（１）’） を用いるこ
とにより、アミン含有ポリマーに付着できる下記化合物
：が得られる。
とにより、アミン含有ポリマーに付着できる下記化合物
：が得られる。
Ｒ′がフェニレンのとき、ケト−アルカン酸またはケト
−アルケン酸を適正な芳香族ケト酸に代えることによっ
て先の例を修正できる。例えばアミノ化合物を４−（２
−（３−カルボキシプロピル）フェニル〕−２−ブタノ
ン〔アール・ティー・バラフラー他藩「ユアロピアン・
ジエイ・メト・ケム」１２巻、４６５頁、１９７７年（
ＲｏＴ、Ｂｕｅｋｌ＠ｒ。
−アルケン酸を適正な芳香族ケト酸に代えることによっ
て先の例を修正できる。例えばアミノ化合物を４−（２
−（３−カルボキシプロピル）フェニル〕−２−ブタノ
ン〔アール・ティー・バラフラー他藩「ユアロピアン・
ジエイ・メト・ケム」１２巻、４６５頁、１９７７年（
ＲｏＴ、Ｂｕｅｋｌ＠ｒ。
ｓｔ、 ａｌ、、 Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊ、 Ｍｅｄ
、 Ｃｈｅｍ、、 １２ ： ４６５（１９７７））
） により還元アルキル化して下記結合腕： 中にフェニレン基を含有するカルボキシル官能化プロプ
ラノロール誘導体を得ることができる。
、 Ｃｈｅｍ、、 １２ ： ４６５（１９７７））
） により還元アルキル化して下記結合腕： 中にフェニレン基を含有するカルボキシル官能化プロプ
ラノロール誘導体を得ることができる。
プロプラノロール抗体
本発明のイムノゲン複合体を用いる特異的抗体の調製は
従来の技術に従って行うことができる。
従来の技術に従って行うことができる。
抗体形成を誘導する基本的な観点を記載している多くの
テキストが入手可能であシ例えば、バーカー著［ラジオ
イムノアセイ・オブ・バイオロジカリー・アクティブ・
コムパウンズ プレンティスホール（エングルウッド
クリフス、ニューシャーシー、アメリカ合衆国、１９７
６年） （Ｐａｒｋｅｒ。
テキストが入手可能であシ例えば、バーカー著［ラジオ
イムノアセイ・オブ・バイオロジカリー・アクティブ・
コムパウンズ プレンティスホール（エングルウッド
クリフス、ニューシャーシー、アメリカ合衆国、１９７
６年） （Ｐａｒｋｅｒ。
Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓａａｙ ｏｆ’ Ｂｉｏｌ
ｏｇ’１ｃａｌｌｙ Ａｏｔｉｖ’ａ４、 Ｐｒｅｎｔ
ｉ ｃｅ−ｈａ ｌ １ （’ Ｅｎｇｌ ＠ｗｏｏ
ｄ Ｃ１ｉｆｆ ｓ 。
ｏｇ’１ｃａｌｌｙ Ａｏｔｉｖ’ａ４、 Ｐｒｅｎｔ
ｉ ｃｅ−ｈａ ｌ １ （’ Ｅｎｇｌ ＠ｗｏｏ
ｄ Ｃ１ｉｆｆ ｓ 。
Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｓｙ ＵＳＡ、 １９７６） ） Ｊ
を参照できる。通常の場合、ウサギ、ヤギ、マウス、モ
ルモットまたはウマ等の宿主動物に、１またはそれ以上
の異なった位置にイムノゲン複合体を通常はアジュバン
トと混合して注入する。さらに同一あるいは異なる位置
に、規則的または不規則な間隔で注入が行なわれ、その
後最適の滴定量に達したことが測定されるまで抗体滴定
量を評価するために採血が行なわれる。
を参照できる。通常の場合、ウサギ、ヤギ、マウス、モ
ルモットまたはウマ等の宿主動物に、１またはそれ以上
の異なった位置にイムノゲン複合体を通常はアジュバン
トと混合して注入する。さらに同一あるいは異なる位置
に、規則的または不規則な間隔で注入が行なわれ、その
後最適の滴定量に達したことが測定されるまで抗体滴定
量を評価するために採血が行なわれる。
宿主動物から採血して好適な量の特異的抗血清を得る。
望ましい態様では、抗血清が実際の試験の実施に使用す
るために好適と考えられる前に非特異的抗体等の望まし
くない物質を除去するために精製工程を設けでもよい。
るために好適と考えられる前に非特異的抗体等の望まし
くない物質を除去するために精製工程を設けでもよい。
この抗体は体細胞融合法（ｓｏｍａｔｉｏ ｏｅｌｌ
ｂｙｄ −ｒｉｄｉｇａｔｉｏｎ ） によっても得
ることができ、このような抗体は単クローン性抗体と通
称される。このような単クローン性抗体技術の報告は「
リンホザイト・バイブリドマス」、メルヒヤー他編、ス
プリンゲルーフエアラークにューヨーク、１９７８年）
発行（Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔａ Ｈｙｂｒｉｄｏｍｉｇ、
ａｄ、 Ｍａｌｏｈｅｒａ。
ｂｙｄ −ｒｉｄｉｇａｔｉｏｎ ） によっても得
ることができ、このような抗体は単クローン性抗体と通
称される。このような単クローン性抗体技術の報告は「
リンホザイト・バイブリドマス」、メルヒヤー他編、ス
プリンゲルーフエアラークにューヨーク、１９７８年）
発行（Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔａ Ｈｙｂｒｉｄｏｍｉｇ、
ａｄ、 Ｍａｌｏｈｅｒａ。
ａｔ、 ａｌ、、 Ｓｐｒｉｎｇａｒ−Ｖｅｒｌａｇ
（ＮｅｗＹｏｒｋ、 １９７８））；「ネイチャー」
２６６巻、４９５頁、１９７７年［Ｎｎ−凹１世：４９
５（１９７’ｌ）： ｒサイエンス］２０８巻、６９２
頁、１９８０年（５ｃｉｅｎｃｅ、 ２０８：６９２（
１９８０））：および「メソッズ・イン・エンザイモロ
ジー」７３巻Ｂ、３頁、１９８１年（Ｍｅｔｈｏｄｓｉ
ｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、 ７３（Ｂ）： ３ （１
９８１））に見出される。
（ＮｅｗＹｏｒｋ、 １９７８））；「ネイチャー」
２６６巻、４９５頁、１９７７年［Ｎｎ−凹１世：４９
５（１９７’ｌ）： ｒサイエンス］２０８巻、６９２
頁、１９８０年（５ｃｉｅｎｃｅ、 ２０８：６９２（
１９８０））：および「メソッズ・イン・エンザイモロ
ジー」７３巻Ｂ、３頁、１９８１年（Ｍｅｔｈｏｄｓｉ
ｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、 ７３（Ｂ）： ３ （１
９８１））に見出される。
免疫試験法
本発明の３−（１−ナフトキシ）−２−ヒドロキシプロ
ピルアミンおよび３−Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１
−ナフトキシ）−１−プロピルコアミノ酪酸から調製さ
れる抗体及び相当する試薬は、凝集反応法、放射性免疫
試験、不均一系酵素免疫試験（米国特許第３ 、６５４
、０９０号参照）、不均一系螢光性免疫試験（米国特
許第４．２０１，７６３号、４，１７１，３１１号、４
，１３３，６３９号及び３，９９２．６３１号参照）お
よび均一系（非分離）免疫試験をはじめとするプロプラ
ノロールを測定するための免疫試験法に使用できる。均
一系免疫試験は特に好ましく、螢光消光または螢光増加
（米国特許第４，１６０，０１６号参照）、螢光分極〔
「ジエー・エクスポ・メト−１１２２巻、１０２９頁、
１９６５年（Ｊ、Ｅｘｐ、Ｍａｄ、、１２２：１０２９
（１９６５））参照〕、 ゛酵素基質−標識化免疫
試験（米国特許第４，２７９゜９９２号及び英国特許明
細書＠ｔ、：ｓｓ２，６ｏｓ・号参照）、補欠分子族−
標識化免疫試験（米国特許第４，２３８ 、５６５号参
照）、例えば抑制剤標識を用いる酵素活性調節基−標識
化免疫試験（米国特許第４゜１３４ 、７９２号及び４
，２７３，８６６号参照）、酵素−標識化免疫試験（米
国特許第３，８１７．８３７号参照）、エネルギー移動
免疫試験（米国特許第３，９９６，３４５号参照）、化
学的励起螢光免疫試験（米国特許第４．２３８，１９５
号参照）および二抗体立体障害免疫試験（米国特許第３
，９３５，０７４号、及び３，９９８゜９４３号参照）
等の技術を包含する。
ピルアミンおよび３−Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１
−ナフトキシ）−１−プロピルコアミノ酪酸から調製さ
れる抗体及び相当する試薬は、凝集反応法、放射性免疫
試験、不均一系酵素免疫試験（米国特許第３ 、６５４
、０９０号参照）、不均一系螢光性免疫試験（米国特
許第４．２０１，７６３号、４，１７１，３１１号、４
，１３３，６３９号及び３，９９２．６３１号参照）お
よび均一系（非分離）免疫試験をはじめとするプロプラ
ノロールを測定するための免疫試験法に使用できる。均
一系免疫試験は特に好ましく、螢光消光または螢光増加
（米国特許第４，１６０，０１６号参照）、螢光分極〔
「ジエー・エクスポ・メト−１１２２巻、１０２９頁、
１９６５年（Ｊ、Ｅｘｐ、Ｍａｄ、、１２２：１０２９
（１９６５））参照〕、 ゛酵素基質−標識化免疫
試験（米国特許第４，２７９゜９９２号及び英国特許明
細書＠ｔ、：ｓｓ２，６ｏｓ・号参照）、補欠分子族−
標識化免疫試験（米国特許第４，２３８ 、５６５号参
照）、例えば抑制剤標識を用いる酵素活性調節基−標識
化免疫試験（米国特許第４゜１３４ 、７９２号及び４
，２７３，８６６号参照）、酵素−標識化免疫試験（米
国特許第３，８１７．８３７号参照）、エネルギー移動
免疫試験（米国特許第３，９９６，３４５号参照）、化
学的励起螢光免疫試験（米国特許第４．２３８，１９５
号参照）および二抗体立体障害免疫試験（米国特許第３
，９３５，０７４号、及び３，９９８゜９４３号参照）
等の技術を包含する。
さらに、本発明のヒドロキシプロピルアミン及びアミノ
酪酸は、上述した種々の免疫試験を実施するために必要
な標識化複合体を調製するために使用できる。適正々誘
導体は、標準的方法に従って放射性標識または螢光性部
分を用いて標識できる。同様に好ましい均一法のための
適正な標識部分、例えば酵素基質、補欠分子族、酵素活
性調節基または酵素（蛋白であυ、上述したようにイム
ノゲン担体に同様に結合できる）をヒドロキシプロピル
アミンに結合させて標識化複合体を得ることができる。
酪酸は、上述した種々の免疫試験を実施するために必要
な標識化複合体を調製するために使用できる。適正々誘
導体は、標準的方法に従って放射性標識または螢光性部
分を用いて標識できる。同様に好ましい均一法のための
適正な標識部分、例えば酵素基質、補欠分子族、酵素活
性調節基または酵素（蛋白であυ、上述したようにイム
ノゲン担体に同様に結合できる）をヒドロキシプロピル
アミンに結合させて標識化複合体を得ることができる。
アミノ酪酸化合物を包含する好ましい標識化複合体は結
合基としてピペラジン部分を有する下記β−ガラクトシ
ル−ウンベリフェロン（βＧＵ）−ヒドロキシプロピル
アミン酪酸： である。
合基としてピペラジン部分を有する下記β−ガラクトシ
ル−ウンベリフェロン（βＧＵ）−ヒドロキシプロピル
アミン酪酸： である。
ヒドロキシプロピルアミン化合物を包含する好ましい標
識化複合体は以下の βＧＵ化合物：である。
識化複合体は以下の βＧＵ化合物：である。
本発明の試薬は、本発明に包含される所望のプロプラノ
ロール免疫試験法を行なうために必要なすべての必須の
化学的要素よりなる。この試薬は試薬が共存できる範囲
で組成物または混合物として箱詰め状の市販品の形で、
試験具の構造で、又は試験キットすなわち必要な試薬を
保持する１″！たけそれ以上の容器の箱詰め組合わせと
して提供される。所望の結合反応系に適する試薬、例え
ば本発明の抗体および標識化複合体が試薬に包含される
。もちろん試薬は、尚業界で公知の、かつ緩衝液、希釈
液、標準液等の商業的およびユーザーの見地から望まし
い他の物質を含有できる。本発明のプロプラノロール抗
体（−）およびその抗体と結合するとき変化する検出可
能な性質を有する標識化ヒドロキシプロピルアミン複合
体（ｂ）よりなる本発明の均一系競合的結合免疫試験用
の試験キットが特に好ましい。本発明のプロプラノロー
ル抗体及びその抗体と結合するとき変化する検出可能な
性質を有する標識化プロプラノロール複合体とを含有す
る試薬組成物およびその試薬組成物を包含せしめた固体
担体部材よりなる試験具も好ましい。
ロール免疫試験法を行なうために必要なすべての必須の
化学的要素よりなる。この試薬は試薬が共存できる範囲
で組成物または混合物として箱詰め状の市販品の形で、
試験具の構造で、又は試験キットすなわち必要な試薬を
保持する１″！たけそれ以上の容器の箱詰め組合わせと
して提供される。所望の結合反応系に適する試薬、例え
ば本発明の抗体および標識化複合体が試薬に包含される
。もちろん試薬は、尚業界で公知の、かつ緩衝液、希釈
液、標準液等の商業的およびユーザーの見地から望まし
い他の物質を含有できる。本発明のプロプラノロール抗
体（−）およびその抗体と結合するとき変化する検出可
能な性質を有する標識化ヒドロキシプロピルアミン複合
体（ｂ）よりなる本発明の均一系競合的結合免疫試験用
の試験キットが特に好ましい。本発明のプロプラノロー
ル抗体及びその抗体と結合するとき変化する検出可能な
性質を有する標識化プロプラノロール複合体とを含有す
る試薬組成物およびその試薬組成物を包含せしめた固体
担体部材よりなる試験具も好ましい。
このような試験具の種々の態様は、ここに参考のために
包含されている１９８０年１０月３０日に出願された米
国特許出願筒２０２ 、３７８号に記載されている。好
ましい試験キットおよび試験具に用いられる特異的標識
は、上述されたように以下の技術に依存する。
包含されている１９８０年１０月３０日に出願された米
国特許出願筒２０２ 、３７８号に記載されている。好
ましい試験キットおよび試験具に用いられる特異的標識
は、上述されたように以下の技術に依存する。
本発明は以下の実施例により説明されるが、これに限定
されるものではない。
されるものではない。
実施例！
２０ ｆ （０，１４ｍｏｌ ）の１−ナフトール、３
８．６（２７） ？ （０，４２ｍｏｌ ）のエピクロルヒドリンおよ
び０．４−のピペラジンを５時間還流し、次いで室温に
冷却した（［ジエイ・ケム・ンクＪ １５７１頁、１９
５４年（Ｊ、印呪０士正、、１５７１．１９５４）参照
）。反応混合物を減圧下蒸発させて油状物質を得、これ
を５０ｓｔｊのクロロホルムに取シ、次いで５０−の濃
塩酸と共に９０分攪拌した。有機層を分離し、水洗後飽
和塩化す） ＩＪウム溶液で洗浄し、乾燥、ろ過し、次
いで蒸発させた。残渣を蒸発蒸留して２５２（収率７２
チ）の対応するクロロヒドリンを粘性の黄色油状物質と
して得た。この油状物質を１５（ｌｄの乾燥ジメチルホ
ルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、２８ｆ （０，１５ｍ
ｏｌ）のカリウムフタルイミドと結合させ、次いで反応
物を還流下１日間攪拌した。減圧下で溶媒を除去し、半
固状残渣を水とこね合わせた。存在する不溶物をエタノ
ールより２回再結晶して１９？（収率５５チ）の１−
（１−ナフトキシ）−２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−７タ
ルイミド）プロパンを融点１５４℃の白色針状結晶とし
て得た。
８．６（２７） ？ （０，４２ｍｏｌ ）のエピクロルヒドリンおよ
び０．４−のピペラジンを５時間還流し、次いで室温に
冷却した（［ジエイ・ケム・ンクＪ １５７１頁、１９
５４年（Ｊ、印呪０士正、、１５７１．１９５４）参照
）。反応混合物を減圧下蒸発させて油状物質を得、これ
を５０ｓｔｊのクロロホルムに取シ、次いで５０−の濃
塩酸と共に９０分攪拌した。有機層を分離し、水洗後飽
和塩化す） ＩＪウム溶液で洗浄し、乾燥、ろ過し、次
いで蒸発させた。残渣を蒸発蒸留して２５２（収率７２
チ）の対応するクロロヒドリンを粘性の黄色油状物質と
して得た。この油状物質を１５（ｌｄの乾燥ジメチルホ
ルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、２８ｆ （０，１５ｍ
ｏｌ）のカリウムフタルイミドと結合させ、次いで反応
物を還流下１日間攪拌した。減圧下で溶媒を除去し、半
固状残渣を水とこね合わせた。存在する不溶物をエタノ
ールより２回再結晶して１９？（収率５５チ）の１−
（１−ナフトキシ）−２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−７タ
ルイミド）プロパンを融点１５４℃の白色針状結晶とし
て得た。
（２８）
上記の如く得られた１ ５ ｆ （４３ｍｍｏｌ ）の
フタルイミドプロパンと２０−の８０チヒドラジンのメ
タノール溶液１５０ｍｊ！を４時間還流した。減圧下で
メタノール溶媒を除去し、残渣な０．５Ｎの水酸化ナト
リウム３０〇−中で１ｏ分間攪拌した。
フタルイミドプロパンと２０−の８０チヒドラジンのメ
タノール溶液１５０ｍｊ！を４時間還流した。減圧下で
メタノール溶媒を除去し、残渣な０．５Ｎの水酸化ナト
リウム３０〇−中で１ｏ分間攪拌した。
存在する不溶物をろ過、水洗した。不溶物を３００−の
水に再度懸濁し、３０分間攪拌した。ろ過および空気乾
燥によシ固体物質を得、これをトルエンから再結晶して
６ｔ（収率６４チ）の３−（１−ナフトキシ）−２−ヒ
ドロキシプロピルアミンを融点１０６℃の白色板状結晶
として得た。
水に再度懸濁し、３０分間攪拌した。ろ過および空気乾
燥によシ固体物質を得、これをトルエンから再結晶して
６ｔ（収率６４チ）の３−（１−ナフトキシ）−２−ヒ
ドロキシプロピルアミンを融点１０６℃の白色板状結晶
として得た。
分析（ｃ、Ｉｎ、５Ｎｏ１）
計算値： Ｃ，？１．８６ ； Ｈ，６，９６： Ｎ
、 ６．４５実験値： Ｃ，？１．９８ ： Ｈ，
６，８６； Ｎ、 ６．２４上記入に記載したように
調製されたＮＨＰＡ を以下の方法によシ仔牛血清アル
ブミンに結合させた。８３僧のヒドロキシプロピルアｉ
ンヲ下記化金物、すなわち３−のメタノール、０．２−
のトリエチルアミンおよび１８８岬のジメチルアジピミ
デートニ塩酸塩と混合し、約１．５〜２時間室温に放置
した。
、 ６．４５実験値： Ｃ，？１．９８ ： Ｈ，
６，８６； Ｎ、 ６．２４上記入に記載したように
調製されたＮＨＰＡ を以下の方法によシ仔牛血清アル
ブミンに結合させた。８３僧のヒドロキシプロピルアｉ
ンヲ下記化金物、すなわち３−のメタノール、０．２−
のトリエチルアミンおよび１８８岬のジメチルアジピミ
デートニ塩酸塩と混合し、約１．５〜２時間室温に放置
した。
メタノール溶媒を真空下で除去し、残渣な１−の新たな
メタノールに溶解させた。この溶液６゜μｔを０．２Ｍ
ＸｐＨ８，５のビロリン酸ナトリウム緩衝液３ｆｎｔに
溶解した１００ｙの修生血清アルブミン（マイシス・ラ
ボラトリーズ、エルクハート、インヂアナ（Ｍｉｌｅｓ
Ｌａｂｒａｔｏｒｉｅａ、 ＥｌｋｈａｒＬ、 Ｉｎ
−ｄｉａｎａ））を含有する攪拌溶液に滴下した。混合
物を一晩室温に保持し、次いで０．ＩＭ、ｐＨ７，０の
リン酸ナトリウムで平衡化したセファデックスＧ２５
（５ｓｐｈｉｄｅｘ Ｇ２５） （ファルマシア・フ
ァインＯケ２カルズ（Ｐｈａｒｍａｏｉａ Ｆｉｎｅ
（：ｈｅｍｉｏａｌｇ ） ）の２．５Ｘ５５ｔＭ の
カラムでクロマトグラフに付した。
メタノールに溶解させた。この溶液６゜μｔを０．２Ｍ
ＸｐＨ８，５のビロリン酸ナトリウム緩衝液３ｆｎｔに
溶解した１００ｙの修生血清アルブミン（マイシス・ラ
ボラトリーズ、エルクハート、インヂアナ（Ｍｉｌｅｓ
Ｌａｂｒａｔｏｒｉｅａ、 ＥｌｋｈａｒＬ、 Ｉｎ
−ｄｉａｎａ））を含有する攪拌溶液に滴下した。混合
物を一晩室温に保持し、次いで０．ＩＭ、ｐＨ７，０の
リン酸ナトリウムで平衡化したセファデックスＧ２５
（５ｓｐｈｉｄｅｘ Ｇ２５） （ファルマシア・フ
ァインＯケ２カルズ（Ｐｈａｒｍａｏｉａ Ｆｉｎｅ
（：ｈｅｍｉｏａｌｇ ） ）の２．５Ｘ５５ｔＭ の
カラムでクロマトグラフに付した。
２８０ ｎｍに吸光度を有する最初のピークの溶出物質
を集め、圧力透析により濃縮した。この物質の光吸収ス
ペクトルは２７９ ｎｍと３１７ ｎｍに最大値があっ
た。この吸収測定は、約４モルのＮＨＰＡが１モルの蛋
白担体に結合したこと、すなわちＰ＝４を示す。
を集め、圧力透析により濃縮した。この物質の光吸収ス
ペクトルは２７９ ｎｍと３１７ ｎｍに最大値があっ
た。この吸収測定は、約４モルのＮＨＰＡが１モルの蛋
白担体に結合したこと、すなわちＰ＝４を示す。
上記Ｂに記載したように調製された約ＩＩＩｖのＮＨＰ
ム仔牛修生アルプミンイムノゲンを溶解した−７．０．
０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液０．５−と７０イ／ド
・アジュバント（Ｆｒ５ｕｎｄａ ａｄｊｕｖａｎｔ
）０．５−を混合し、ラビットに混合物を皮下注入する
ことによってイムノゲンに対する抗体を得た。
ム仔牛修生アルプミンイムノゲンを溶解した−７．０．
０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液０．５−と７０イ／ド
・アジュバント（Ｆｒ５ｕｎｄａ ａｄｊｕｖａｎｔ
）０．５−を混合し、ラビットに混合物を皮下注入する
ことによってイムノゲンに対する抗体を得た。
４週間の間隔に強化免疫誘発剤（ｂｏｏｓｔｓｒ １ｍ
ｍｕ−ｎｉｇａｔｉｏｎａ ）を投与した。最適の抗体
滴定量に達した後ラビットから採血して投与したイムノ
ゲンに特異的な抗血清の適切量を得た。
ｍｕ−ｎｉｇａｔｉｏｎａ ）を投与した。最適の抗体
滴定量に達した後ラビットから採血して投与したイムノ
ゲンに特異的な抗血清の適切量を得た。
２０−の乾燥ＤＭＦに溶解した７−β−ガラクトシルク
マリン−３−カルボン酸７３７■（２ｍｍｏｌ）及びト
リエチルアミン２０２ ｗｑ（２ｍｍｏｌ） ′
の溶液を不活性雰囲気下で攪拌しながら一１０℃に冷却
した。これにクロロギ酸イソブチル２７３ｉｙ （２ｍ
ｍｏｌ ）を一度に添加した。−１０℃で２０分間攪拌
後トリエチルアミン塩酸塩の白色沈澱物が形成されるが
、これは上記酸が混合無水物に転化したことを示す。こ
の無水物を上記Ａに記載したように調製したヒドロキシ
プロピルアミン６３１ｔｑ （３ｍｍｏｌ ）と結合さ
せ、−１０℃で１時間攪拌し、次いで室温に放置して暖
めた後頁に１時間攪拌した。反応混合物をＤＭＦ２０−
で希釈し、シリカゲル８ｔを添加した。溶媒を高真空下
で除去し、含浸されたシリカゲルを、酢酸エチルで調製
した２００９のシリカゲル充填カラムの頂部に置いた。
マリン−３−カルボン酸７３７■（２ｍｍｏｌ）及びト
リエチルアミン２０２ ｗｑ（２ｍｍｏｌ） ′
の溶液を不活性雰囲気下で攪拌しながら一１０℃に冷却
した。これにクロロギ酸イソブチル２７３ｉｙ （２ｍ
ｍｏｌ ）を一度に添加した。−１０℃で２０分間攪拌
後トリエチルアミン塩酸塩の白色沈澱物が形成されるが
、これは上記酸が混合無水物に転化したことを示す。こ
の無水物を上記Ａに記載したように調製したヒドロキシ
プロピルアミン６３１ｔｑ （３ｍｍｏｌ ）と結合さ
せ、−１０℃で１時間攪拌し、次いで室温に放置して暖
めた後頁に１時間攪拌した。反応混合物をＤＭＦ２０−
で希釈し、シリカゲル８ｔを添加した。溶媒を高真空下
で除去し、含浸されたシリカゲルを、酢酸エチルで調製
した２００９のシリカゲル充填カラムの頂部に置いた。
このカラムをエタノール１ｔから酢酸エチルＩＬｔでの
徐々に変化する混合比をもった混合溶媒で溶離し、１０
−の両分を集めた。１０９〜１３５の両分をひとまとめ
にし、蒸発させた。残渣をメタノールよシ再結晶して４
５０Ｉｖ（収率３９チ）のβＧＵ−ＮＨＰＡとして表示
される所望の標識化複合体を黄かっ色結晶として得た。
徐々に変化する混合比をもった混合溶媒で溶離し、１０
−の両分を集めた。１０９〜１３５の両分をひとまとめ
にし、蒸発させた。残渣をメタノールよシ再結晶して４
５０Ｉｖ（収率３９チ）のβＧＵ−ＮＨＰＡとして表示
される所望の標識化複合体を黄かっ色結晶として得た。
尚、融点は２００〜２１０℃（徐々に軟化）であった。
プロプラノロールに対して特異的である抗体を生成する
に当っての、上記Ｂに記載したように調製Ｌ＊ａ−（ｔ
−ナフトキシ）−２−ヒドロキシプロピルアミン修生血
清アルブミンイムノゲンの有効性を以下の方法によって
測定した。
に当っての、上記Ｂに記載したように調製Ｌ＊ａ−（ｔ
−ナフトキシ）−２−ヒドロキシプロピルアミン修生血
清アルブミンイムノゲンの有効性を以下の方法によって
測定した。
ＮＨＰＡに対する抗体の滴定
０．０１ ａ ％ （ｖ／りの界面活性剤、例えばジェ
イ・ティー・ベイカー、フィリップスバーブ、ニューシ
ャーシー（Ｊ、Ｔ、Ｂａｋｅｒ、 Ｐｈ１ｌｌｉｐｓ’
ｂｕｒｇ、 ＮｓｗＪｅｒｓｅｙ ）より商品名ライ−
７２０（Ｔｗｓｅｎ ２０ ）として市販されているポ
リオキシエチレンソルビタンモノオレイン酸エステルお
よび上記Ｃに記載したように調製した、３４０ ｎｍに
０．０００２３の吸光度を与える濃度の標識化複合体を
含有する、カルバイオケムーベーリング、ラジョーラ、
カリフォルニア（Ｃａｒｂｉｏｅｈｓｍ −Ｂｅｈｒｉ
ｎｇ、 Ｌａｊｏ−１１ａ、 ｃａｌｉｆｏｒ−ｎｉａ
）より商品名バイシン（Ｂｉｅｉｎの）として市販さ
れているｐ）ｌ ｇ、 ５．０．０５ＭのＮ、Ｎ−ビス
−（２−ヒドロキシエチル）グリシン緩衝液３．０５−
中で抗体結合反応を行なった。上記Ｂ４Ｃ記載したよう
にして得られた種々の容積の抗血清を適正な反応混合物
に添加し、次いで０．５単位／−のβ−ガラクトシダー
ゼ０．０５−を各反応混合物に添加した。１単位のβ−
ガラクトシダーゼは、２５℃で１分当り１μｍｏｌ
のβ−Ｄ−ガラクトシルーＯ−二トロフェノールを加水
分解する。この反応物を雰囲気温度で３０分間放置し、
次いで励起用の４００ ｎｍの光と発光用の４５０ ｎ
ｍの光を用いて螢光を記録した。β−ガラクトシダーゼ
を除くすべての試薬を用いた対照試験を操作に従って行
い、バックグラウンド螢光値を得、上記反応物について
測定された螢光からそのバックグラウンド螢光値を差し
引いた。結果を以下の第１表に要約する。
イ・ティー・ベイカー、フィリップスバーブ、ニューシ
ャーシー（Ｊ、Ｔ、Ｂａｋｅｒ、 Ｐｈ１ｌｌｉｐｓ’
ｂｕｒｇ、 ＮｓｗＪｅｒｓｅｙ ）より商品名ライ−
７２０（Ｔｗｓｅｎ ２０ ）として市販されているポ
リオキシエチレンソルビタンモノオレイン酸エステルお
よび上記Ｃに記載したように調製した、３４０ ｎｍに
０．０００２３の吸光度を与える濃度の標識化複合体を
含有する、カルバイオケムーベーリング、ラジョーラ、
カリフォルニア（Ｃａｒｂｉｏｅｈｓｍ −Ｂｅｈｒｉ
ｎｇ、 Ｌａｊｏ−１１ａ、 ｃａｌｉｆｏｒ−ｎｉａ
）より商品名バイシン（Ｂｉｅｉｎの）として市販さ
れているｐ）ｌ ｇ、 ５．０．０５ＭのＮ、Ｎ−ビス
−（２−ヒドロキシエチル）グリシン緩衝液３．０５−
中で抗体結合反応を行なった。上記Ｂ４Ｃ記載したよう
にして得られた種々の容積の抗血清を適正な反応混合物
に添加し、次いで０．５単位／−のβ−ガラクトシダー
ゼ０．０５−を各反応混合物に添加した。１単位のβ−
ガラクトシダーゼは、２５℃で１分当り１μｍｏｌ
のβ−Ｄ−ガラクトシルーＯ−二トロフェノールを加水
分解する。この反応物を雰囲気温度で３０分間放置し、
次いで励起用の４００ ｎｍの光と発光用の４５０ ｎ
ｍの光を用いて螢光を記録した。β−ガラクトシダーゼ
を除くすべての試薬を用いた対照試験を操作に従って行
い、バックグラウンド螢光値を得、上記反応物について
測定された螢光からそのバックグラウンド螢光値を差し
引いた。結果を以下の第１表に要約する。
第１表
抗血清μｔ 正味の螢光
０ ８０
２ ４６
５ ２０
１０ ８
２０ ３標識化機合体
すなわちβＧＵ−ＮＨＰＡは酵素β−ガラクトシダーゼ
により分解されて螢光性生成物を放出する。抗体によっ
てヒドロキシプロピルアミンと結合すると、複合体は酵
素に対する基質として不活性となる。
すなわちβＧＵ−ＮＨＰＡは酵素β−ガラクトシダーゼ
により分解されて螢光性生成物を放出する。抗体によっ
てヒドロキシプロピルアミンと結合すると、複合体は酵
素に対する基質として不活性となる。
それゆえ抗血清（抗体）の濃度が増加するにつれて螢光
濃度が減少し、このことはイムノゲンによって生成され
た抗体が標識化複合体と結合することを示す。
濃度が減少し、このことはイムノゲンによって生成され
た抗体が標識化複合体と結合することを示す。
第１表に示された抗体螢光関係を用いて以下に記載する
ようにプロプラノロールについての基質−標識化螢光性
免疫試験法（ＳＬＦＩＡ）を確立した。
ようにプロプラノロールについての基質−標識化螢光性
免疫試験法（ＳＬＦＩＡ）を確立した。
ＳＬＦＩＡ
この５ＬＦＩＡは、プロプラノロール及び標識化複合体
であるβＧＵ−ヒドロキシプロピルアミンすなわちβＧ
Ｕ−ＮＨＰＡに対する抗体の競合的結合に基づいている
。次の試薬を調製した。
であるβＧＵ−ヒドロキシプロピルアミンすなわちβＧ
Ｕ−ＮＨＰＡに対する抗体の競合的結合に基づいている
。次の試薬を調製した。
抗体／酵素試薬
ｐＩ（８，５の５０ｍＭグリシン緩衝液、０．０１６％
モノオレイン酸エステル界面活性剤、種々の濃度のプロ
プラノロール及び３４０ ｎｍで０．０００２３の吸光
度（３５） を与える濃度のＮ−３−（１−ナフトキシ）−２−ヒド
ロキシプロピル−７−β−ガラクトシル−クマリン−３
−カルボキシアミドを含有する一連のキュベツト中で、
競合的結合反応（３，１ｍ／）が行われた。抗血清１０
μｔを各キュベツトに添加し内容物を混合した。β−ガ
ラクトシダーゼ（０，５単位／−）５Ｏ−を添加し、反
応物を雰囲気温度で３０分間温装した。各キュベツトに
酵素を添加した３０分後に螢光を記録した。酵素なしで
対照試験を行ない対照について測定された螢光を、対応
する酵素反応についての値から減じた。
モノオレイン酸エステル界面活性剤、種々の濃度のプロ
プラノロール及び３４０ ｎｍで０．０００２３の吸光
度（３５） を与える濃度のＮ−３−（１−ナフトキシ）−２−ヒド
ロキシプロピル−７−β−ガラクトシル−クマリン−３
−カルボキシアミドを含有する一連のキュベツト中で、
競合的結合反応（３，１ｍ／）が行われた。抗血清１０
μｔを各キュベツトに添加し内容物を混合した。β−ガ
ラクトシダーゼ（０，５単位／−）５Ｏ−を添加し、反
応物を雰囲気温度で３０分間温装した。各キュベツトに
酵素を添加した３０分後に螢光を記録した。酵素なしで
対照試験を行ない対照について測定された螢光を、対応
する酵素反応についての値から減じた。
以下筒■表に示された下記試験結果が得られた。
第■表
９
３２ １２１５８
２８６０４
４９競合的結合試験法はプロプラノロールと
（Ａｂ−（３６） との間の結合量を利用する。プロプラノロールの存在量
を用いて螢光の抑制を軽減する量を測定することができ
る場合、この試験系は試料中に存在するプロプラノロー
ル量を測定するために充分鋭敏である。第■表に示され
ているように、プロプラノロールの量が増加するにつれ
て存在する抗血清によって螢光の抑制が軽減され、螢光
量が増大した。このように、本発明の試薬を用いて試料
中に存在するプロプラノロールの量を測定する試験が提
供された。
２８６０４
４９競合的結合試験法はプロプラノロールと
（Ａｂ−（３６） との間の結合量を利用する。プロプラノロールの存在量
を用いて螢光の抑制を軽減する量を測定することができ
る場合、この試験系は試料中に存在するプロプラノロー
ル量を測定するために充分鋭敏である。第■表に示され
ているように、プロプラノロールの量が増加するにつれ
て存在する抗血清によって螢光の抑制が軽減され、螢光
量が増大した。このように、本発明の試薬を用いて試料
中に存在するプロプラノロールの量を測定する試験が提
供された。
実施例■
実施例ＩＯＡに記載したようにして調製されたクロロヒ
ドリン２．６１ ？ （１１，Ｏｍｍｏｌ ） 、アメ
リカ合衆国、ライスコンシン州、ミルウオーキーのアル
ドリッチ・ケミカル・カンパニー（ＡｌｄｒｉｃｈＣｈ
ｅｍｉｃａｌ Ｃｏ、、 ＭＩｌｗａｕｋａｅ、Ｗ
ｉｓｏｏｎｓｉｎ、Ｕ、Ｓ、Ａ、）よシ市販の３−アミ
ノ酪酸１．１０ ？ （１１ｍｍｏｌ）及び無水エタノ
ール５０−に溶解した重炭酸ナトリウム１．８５ ｆ
（２２ｍｍｏｌ ）の混合物を還流温度、アルゴン雰囲
気下で２日間攪拌した。西独国、ダルムシュタット、イ
ー・メルク・アクチェン・ゲゼルシャフト（Ｅ、 Ｍａ
ｒｏｋ ＡＧ、 ＤａｒｍｓｔａｄＬ、Ｇｅｒｍａｎｙ
）よシ市販のシリカゲル６０ （ｓｉｌｉｏａｇｅｌ
６０）を反応混合物に添加し、溶媒を高真空下で蒸発さ
せた。
ドリン２．６１ ？ （１１，Ｏｍｍｏｌ ） 、アメ
リカ合衆国、ライスコンシン州、ミルウオーキーのアル
ドリッチ・ケミカル・カンパニー（ＡｌｄｒｉｃｈＣｈ
ｅｍｉｃａｌ Ｃｏ、、 ＭＩｌｗａｕｋａｅ、Ｗ
ｉｓｏｏｎｓｉｎ、Ｕ、Ｓ、Ａ、）よシ市販の３−アミ
ノ酪酸１．１０ ？ （１１ｍｍｏｌ）及び無水エタノ
ール５０−に溶解した重炭酸ナトリウム１．８５ ｆ
（２２ｍｍｏｌ ）の混合物を還流温度、アルゴン雰囲
気下で２日間攪拌した。西独国、ダルムシュタット、イ
ー・メルク・アクチェン・ゲゼルシャフト（Ｅ、 Ｍａ
ｒｏｋ ＡＧ、 ＤａｒｍｓｔａｄＬ、Ｇｅｒｍａｎｙ
）よシ市販のシリカゲル６０ （ｓｉｌｉｏａｇｅｌ
６０）を反応混合物に添加し、溶媒を高真空下で蒸発さ
せた。
含浸されたシリカゲルを９５チエタノール中で調製され
た３００？のシリカゲル６０を充填したカラムの頂部に
置いた。９５チエタノールを用いてクロマトグラフィー
を行ない画分２０ ｍｌを集めた。
た３００？のシリカゲル６０を充填したカラムの頂部に
置いた。９５チエタノールを用いてクロマトグラフィー
を行ない画分２０ ｍｌを集めた。
両分２８０と４２５をひとまとめにし、蒸発させて淡黄
色油状物を得た。この油状物を少量のメタノールに溶解
し、室温で一週間放置した。このＮＨＡＢ生成物を溶液
から結晶し、ろ過によシ集めて１９６℃で融解する白色
固体５２５ツ（収率１５．７％）を得た。
色油状物を得た。この油状物を少量のメタノールに溶解
し、室温で一週間放置した。このＮＨＡＢ生成物を溶液
から結晶し、ろ過によシ集めて１９６℃で融解する白色
固体５２５ツ（収率１５．７％）を得た。
分析（ＣＩ？ Ｈ２１ＮＯ４）
計算値： Ｃ，６７，３１； Ｈ，６，９８Ｓ
Ｎ、 ４．６２実験値： Ｃ，６６，８８： Ｈ，
６，８６： Ｎ、 ４．６１赤外吸収スヘクトＡ、
（Ｋｃｔ） ： １６００ｉ’ （′ｃ＝０）１５８
０ ｃｍ−’ （、Ｃ＝ ０ ）上記人に記載したよう
にして調製したＮＨＡＢを以下の方法〔シー・ボウフー
ン他藩、「クリニ・シム・アクタ」５７巻、２６３頁、
１９７４年（Ｃ，Ｂｏｈｏｕｎ、 ｅｔ、 ａｌ、、
Ｃｌ１ｎ、 Ｃｈｉｎ、 Ａｃｔａ、 ５７゜２６３
（１９７４’））参照〕にょジメチル化仔牛血清アルブ
ミンに結合させた。メチル化修生力清アルブミン９０■
の水溶液２ｍ／（ｐｉ（５，５：４℃）〔ジエイ・ディ
ー・マンデル及びニー・ディー・バージ１ｔｉｌＦｒア
ナル・バイオヶム」１巻、６６頁、１９６０年（Ｊ、
Ｄ、 Ｍａｎｄｅｌｌ ａｎｄ Ａ、、 Ｄ、 Ｈｅｒ
８ｈａｙ。
Ｎ、 ４．６２実験値： Ｃ，６６，８８： Ｈ，
６，８６： Ｎ、 ４．６１赤外吸収スヘクトＡ、
（Ｋｃｔ） ： １６００ｉ’ （′ｃ＝０）１５８
０ ｃｍ−’ （、Ｃ＝ ０ ）上記人に記載したよう
にして調製したＮＨＡＢを以下の方法〔シー・ボウフー
ン他藩、「クリニ・シム・アクタ」５７巻、２６３頁、
１９７４年（Ｃ，Ｂｏｈｏｕｎ、 ｅｔ、 ａｌ、、
Ｃｌ１ｎ、 Ｃｈｉｎ、 Ａｃｔａ、 ５７゜２６３
（１９７４’））参照〕にょジメチル化仔牛血清アルブ
ミンに結合させた。メチル化修生力清アルブミン９０■
の水溶液２ｍ／（ｐｉ（５，５：４℃）〔ジエイ・ディ
ー・マンデル及びニー・ディー・バージ１ｔｉｌＦｒア
ナル・バイオヶム」１巻、６６頁、１９６０年（Ｊ、
Ｄ、 Ｍａｎｄｅｌｌ ａｎｄ Ａ、、 Ｄ、 Ｈｅｒ
８ｈａｙ。
Ａｎａｌ、Ｂｉｏｅｈｅｍ、、 １ ：６６ （１９
６０））参照〕に、ＤＭＦ ０．２ ｒｎｌに溶解した
カルボン酸誘導体１５■の溶液中のスラリーとしての１
−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボ
ジイミド塩酸塩〔ミズリー州、セントルイスのシグマ・
ケミカ／Ｉ／、カンパニー （Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉ
ｏａｌ Ｃｏ、、 ＳＬ。
６０））参照〕に、ＤＭＦ ０．２ ｒｎｌに溶解した
カルボン酸誘導体１５■の溶液中のスラリーとしての１
−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボ
ジイミド塩酸塩〔ミズリー州、セントルイスのシグマ・
ケミカ／Ｉ／、カンパニー （Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉ
ｏａｌ Ｃｏ、、 ＳＬ。
Ｌｏｕｉｇ、 Ｍｉｓｇｏｕｒｉ） ：） ５０ ｑ
のスラリーを添加した。
のスラリーを添加した。
最終の−を５，５に調整し、反応物を４℃の暗所で一夜
攪拌した。得られたＮＨＡＢイムノゲン複合体を、ＮＨ
ＰＡイミノゲン複合体について先述したようにセファデ
ックスＧ−２５を用いてクロマトグラフを行なうことに
よシ精製できる。
攪拌した。得られたＮＨＡＢイムノゲン複合体を、ＮＨ
ＰＡイミノゲン複合体について先述したようにセファデ
ックスＧ−２５を用いてクロマトグラフを行なうことに
よシ精製できる。
イムノゲンに対する抗体を、実施例ＩのＢのＮＨＡＢイ
ムノゲン複合体について先述したようにして得ることが
できる。
ムノゲン複合体について先述したようにして得ることが
できる。
以下に記載のように実施例Ｉのイムノゲンに対する抗体
を任意に用いることができる。
を任意に用いることができる。
後述するように、以下の合成法に従って標識化複合体を
調製した。
調製した。
乾燥ジオキサン４００−に溶解したアルドリッチ・ケミ
カル（Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｏａｌ）よシ市販の
ｔ−ブチル−＋１−（４，６−シメチルビリミジンー２
−イル）チオカーボネート（冒）１００Ｆ（０，４２ｍ
ｏｌ）の溶液を、ジオキサン３６０−に溶解した１、４
−ビス−（３−アミノプロピル）ピペラジン（１）１８
２ ’？ （０，９１ｍｏｌ） ｃｒ）溶液に室ｉテロ
時間に亘って滴下した。−夜攪拌後反応物をろ過し蒸
発させて黄色油状物質を得た。この油状物質を蒸留水２
Ｌに溶解し、アンバーライトＩＲＣ−５０（Ａｘｎｂ
ｅ山ｔｏ ｌＲｅ−５０）イオン交換樹脂（ＮＨ，ｅ型
）の９０ｍＸ５ｃＩｎのカラムに付した。このカラムを
５００−の水で洗浄し、次いで水２ｔから０゜５Ｍ水Ｉ
Ｉ化アンモニウム２Ａ’ｔでの徐々に変化する混合比を
もった混合溶媒で溶出した。適正な画分を集め蒸発させ
てアミン（１） ６５ ｔを淡黄色油状物質として得た
。
カル（Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｏａｌ）よシ市販の
ｔ−ブチル−＋１−（４，６−シメチルビリミジンー２
−イル）チオカーボネート（冒）１００Ｆ（０，４２ｍ
ｏｌ）の溶液を、ジオキサン３６０−に溶解した１、４
−ビス−（３−アミノプロピル）ピペラジン（１）１８
２ ’？ （０，９１ｍｏｌ） ｃｒ）溶液に室ｉテロ
時間に亘って滴下した。−夜攪拌後反応物をろ過し蒸
発させて黄色油状物質を得た。この油状物質を蒸留水２
Ｌに溶解し、アンバーライトＩＲＣ−５０（Ａｘｎｂ
ｅ山ｔｏ ｌＲｅ−５０）イオン交換樹脂（ＮＨ，ｅ型
）の９０ｍＸ５ｃＩｎのカラムに付した。このカラムを
５００−の水で洗浄し、次いで水２ｔから０゜５Ｍ水Ｉ
Ｉ化アンモニウム２Ａ’ｔでの徐々に変化する混合比を
もった混合溶媒で溶出した。適正な画分を集め蒸発させ
てアミン（１） ６５ ｔを淡黄色油状物質として得た
。
分析：
質量スペクトル（７０ｍ、Ｖ、） ： ｍ／ｅ ３０
ｔ（ＭＨ） ： ２０１ ［ＭＨ−ＣＯＯＣ（Ｃ１（
、）、］３−Ｎ−［：３−（１−ナフトキシ−２−ヒド
ロキシプロピル〕アミノ酪酸（ＶＤ ９０９ ｑ （３
ｍ ｍｏｌ）及び１−（３−アミノプロピル）−４−（
ａ−を−ブトキシ−カルボニルアミノプロピル）ピペラ
ジｙ（１） １．２ ｆ （４ｍｍｏｌ ）の混合物を
乾燥ＤＭＦ ３５−に懸濁し、不活性雰囲気下で攪拌し
ながら一１０℃に冷却した。これに９８チのジフェニル
ホスホリルアジド９０８■（３，３ｍｍｏｌ ）を添加
した。
ｔ（ＭＨ） ： ２０１ ［ＭＨ−ＣＯＯＣ（Ｃ１（
、）、］３−Ｎ−［：３−（１−ナフトキシ−２−ヒド
ロキシプロピル〕アミノ酪酸（ＶＤ ９０９ ｑ （３
ｍ ｍｏｌ）及び１−（３−アミノプロピル）−４−（
ａ−を−ブトキシ−カルボニルアミノプロピル）ピペラ
ジｙ（１） １．２ ｆ （４ｍｍｏｌ ）の混合物を
乾燥ＤＭＦ ３５−に懸濁し、不活性雰囲気下で攪拌し
ながら一１０℃に冷却した。これに９８チのジフェニル
ホスホリルアジド９０８■（３，３ｍｍｏｌ ）を添加
した。
−１０℃で１５分間保持した後反応物をケイ酸１５Ｆと
ひとまとめにし、真空ポンプに取付けられた回転蒸発器
を用いて溶媒を除去した。含浸さ 。
ひとまとめにし、真空ポンプに取付けられた回転蒸発器
を用いて溶媒を除去した。含浸さ 。
れた吸着剤を９５チエタノールで調製したケイ酸１００
ｆを充填したカラムの頂部に置いた。このカラムを９５
％のエタノール２ｔから７／３ＣＶ／りのエタノール／
ＩＭのトリエチルアンモニウム重炭酸塩水溶液２ｔまで
の直線的に徐々に変化する混合比をもった混合溶媒で溶
出し、画分２０−を集めた。６５〜８０の両分を集め、
蒸発させてピペラジン（至）６５０１１５＋（収率３７
％）を透明な油状物として得た。
ｆを充填したカラムの頂部に置いた。このカラムを９５
％のエタノール２ｔから７／３ＣＶ／りのエタノール／
ＩＭのトリエチルアンモニウム重炭酸塩水溶液２ｔまで
の直線的に徐々に変化する混合比をもった混合溶媒で溶
出し、画分２０−を集めた。６５〜８０の両分を集め、
蒸発させてピペラジン（至）６５０１１５＋（収率３７
％）を透明な油状物として得た。
ｔ−ブトキシカルボニルアミノ誘導体（至）（６４５ｙ
ｑ、 １．１ｍｍｏｌ ）を５０ｔｄのナシ形フラス
コに入れ、不活性雰囲気下′で一１０℃に冷却した。ト
リフルオロ酢酸無水物（２０ｄ）を添加し、混合物を上
記温度で３時間攪拌した。攪拌終了後、この溶液を真空
ポンプに取付けられた回転蒸発器を用いて０℃で蒸発さ
せた。トリフルオロ酢酸アミン塩■を淡赤色油状物とし
て得たが同定しなかった。これを２５−の水に取り、溶
液の−をＮａＯＨ溶液によシ８．０に調整した。
ｑ、 １．１ｍｍｏｌ ）を５０ｔｄのナシ形フラス
コに入れ、不活性雰囲気下′で一１０℃に冷却した。ト
リフルオロ酢酸無水物（２０ｄ）を添加し、混合物を上
記温度で３時間攪拌した。攪拌終了後、この溶液を真空
ポンプに取付けられた回転蒸発器を用いて０℃で蒸発さ
せた。トリフルオロ酢酸アミン塩■を淡赤色油状物とし
て得たが同定しなかった。これを２５−の水に取り、溶
液の−をＮａＯＨ溶液によシ８．０に調整した。
乾燥ＤＭＦ １５−に、７−β−ガラクトシルクマリン
−３−カルボン酸（３）〔シエイ・エフ・）く−ド他藩
「クリニ・ケばｊ ２３ （８）巻、１４０２頁、１９
７７年（Ｊ、 Ｆ、Ｂｕｒｄ、 ｅＬ、 ｍｌ、、 Ｃ
ｌ１ｎ、Ｃｈｓｍ。
−３−カルボン酸（３）〔シエイ・エフ・）く−ド他藩
「クリニ・ケばｊ ２３ （８）巻、１４０２頁、１９
７７年（Ｊ、 Ｆ、Ｂｕｒｄ、 ｅＬ、 ｍｌ、、 Ｃ
ｌ１ｎ、Ｃｈｓｍ。
２３（８）： １４０２（１９７７））） ４１０１１
１１ （１，１ｍｍｏｌ）及びＮ−ヒドロキシサクシン
イミド２５０■（２゜２ｍｍｏｌ） を溶解すること
によシ第２溶液を調製した。この溶液を一１０℃に冷却
し、ジシクロへキシルカルボジイミド２５２Ｗ （１，
２ｍｍｏｌ）を添加した。冷却浴を除去し、フラスコの
内容物を室温に放置して暖め３時間攪拌した。
１１ （１，１ｍｍｏｌ）及びＮ−ヒドロキシサクシン
イミド２５０■（２゜２ｍｍｏｌ） を溶解すること
によシ第２溶液を調製した。この溶液を一１０℃に冷却
し、ジシクロへキシルカルボジイミド２５２Ｗ （１，
２ｍｍｏｌ）を添加した。冷却浴を除去し、フラスコの
内容物を室温に放置して暖め３時間攪拌した。
アミン（至）の水溶液（−８，０）を０℃に冷却し、活
性化エステル（３）を含有するＤＭＦ溶液を１０分間に
亘って滴下した。ＮａＯＨ溶液によシーを７．０に調整
し、室温で一夜攪拌を続けた。ケイ酸１５ｆを添加し、
減圧下で溶媒を除去した。含浸された吸着剤を９５チエ
タノールで調製した１００ｆケイ酸を充填したカラムの
頂部に置いた。このカラムを５００−の溶媒で洗浄し、
次いで９５４ｍタノール２ｔから４／１（ｖ／ｖ）の９
５チ工タノール／ＩＭ）す）エチルアンモニ゛ワム重炭
酸塩水溶液２ｔまでの直線的に徐々に変化する混合比を
もった混合溶媒で溶出した。画分１５−を集めた。
性化エステル（３）を含有するＤＭＦ溶液を１０分間に
亘って滴下した。ＮａＯＨ溶液によシーを７．０に調整
し、室温で一夜攪拌を続けた。ケイ酸１５ｆを添加し、
減圧下で溶媒を除去した。含浸された吸着剤を９５チエ
タノールで調製した１００ｆケイ酸を充填したカラムの
頂部に置いた。このカラムを５００−の溶媒で洗浄し、
次いで９５４ｍタノール２ｔから４／１（ｖ／ｖ）の９
５チ工タノール／ＩＭ）す）エチルアンモニ゛ワム重炭
酸塩水溶液２ｔまでの直線的に徐々に変化する混合比を
もった混合溶媒で溶出した。画分１５−を集めた。
３５〜６０の画分を集め蒸発させて複合体（２）４２０
８９を淡黄かっ色非品物として得た。これをメタノール
５−に溶解し、メタノールで平衡化したセファデックス
ＬＨ−２０のカラム（９０ｃＦＲＸ２．５Ｉ０１ｎ）に
付した。メタノール（流速１．３ｄ／ｍ１ｎ）で溶出す
る一方１０ｒｎｔの画分を集めた。
８９を淡黄かっ色非品物として得た。これをメタノール
５−に溶解し、メタノールで平衡化したセファデックス
ＬＨ−２０のカラム（９０ｃＦＲＸ２．５Ｉ０１ｎ）に
付した。メタノール（流速１．３ｄ／ｍ１ｎ）で溶出す
る一方１０ｒｎｔの画分を集めた。
３０〜３９の画分をひとまとめにし、蒸発させ、高真空
下で乾燥させて複合体（ＸＱ２００ｆｉ９（収率１９チ
）を淡黄かっ色非品物として得た。
下で乾燥させて複合体（ＸＱ２００ｆｉ９（収率１９チ
）を淡黄かっ色非品物として得た。
分析（Ｃ４１１Ｈ６１ＮＩ Ｏｒいビス−炭酸塩）計算
値： Ｃ，５５，７２： Ｈ，６，３４： Ｎ、
７．２２実験値： Ｃ，５４，９８： Ｈ，６，
１３： Ｎ、 ７．００質量スペクトル（電場脱離（
ｆｉｅｌｄ ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ）； ｍ／ｓ ８３
６（Ｍ” ） ： ６７４（Ｍ”−Ｃ，Ｈ，。０５〕旋
光度：αＤ＝３２．６２°（Ｃ１、ｏ、 ｃ鳥ＯＨ）■
による抗体 定 ３−（１−ナフトキシ）−２−ヒドロキシプロピルアミ
ン仔牛血清アルブミン複合体に対する抗体をＩにより滴
定した。−１８，５の５０ｍＭグリシン緩衝液３． Ｏ
ＷＬｔおよび抗血清０〜１５μｔを入れた一連のキュベ
ツトを用意した。０．００３％のモノオレイン酸エステ
ル界面活性剤を含むグリシン緩衝液に溶解したＸＩ １
００μｔ（３４０％ｍにおける吸光度が０．０１１であ
った。）を各キュベツトに添加し、内容物を混合した。
値： Ｃ，５５，７２： Ｈ，６，３４： Ｎ、
７．２２実験値： Ｃ，５４，９８： Ｈ，６，
１３： Ｎ、 ７．００質量スペクトル（電場脱離（
ｆｉｅｌｄ ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ）； ｍ／ｓ ８３
６（Ｍ” ） ： ６７４（Ｍ”−Ｃ，Ｈ，。０５〕旋
光度：αＤ＝３２．６２°（Ｃ１、ｏ、 ｃ鳥ＯＨ）■
による抗体 定 ３−（１−ナフトキシ）−２−ヒドロキシプロピルアミ
ン仔牛血清アルブミン複合体に対する抗体をＩにより滴
定した。−１８，５の５０ｍＭグリシン緩衝液３． Ｏ
ＷＬｔおよび抗血清０〜１５μｔを入れた一連のキュベ
ツトを用意した。０．００３％のモノオレイン酸エステ
ル界面活性剤を含むグリシン緩衝液に溶解したＸＩ １
００μｔ（３４０％ｍにおける吸光度が０．０１１であ
った。）を各キュベツトに添加し、内容物を混合した。
β−ガラクトシダーゼ（０，００５単位／＋＋Ｊ１００
μｔを添加し、雰囲気温度で２０１分間反応物を装置し
た。温置終了後励起用の４００％ｍ光及び発光用の４５
Ｑ ｎｍ光を用いて螢光を記録した。
μｔを添加し、雰囲気温度で２０１分間反応物を装置し
た。温置終了後励起用の４００％ｍ光及び発光用の４５
Ｑ ｎｍ光を用いて螢光を記録した。
抗血清（μｔ） 正味の螢光
０ ８９
３ ６７
６ ４８
９ ３７
１２ ３４
１５ ３３
これらの結果は抗血清濃度が増加するにつれて螢光が減
少することを示す。
少することを示す。
Ｉを用いる競合的結合試験法
以下の試薬を調製した。すなわち、螢光性試薬−０，０
０３％のツイーン２０ （Ｔｗｅｅｎ ２０）を含有
する−４．５の５ｍＭギ酸ナトリウム−ギ酸緩衝液に溶
解した１１（３４０％ｍの吸光度が０．０１１であった
。）、抗体／酵素試薬−β−ガラクトシダーゼ（０，０
０５単位／−）及び抗体１０．８μｔ／ｐ＋（８，５，
５０ｍＭグリシン緩衝液１−、プロプラノロール検定液
−プロプラノロール１μｆ／ｐｉ（８，５，５ＱｍＭグ
リシン緩衝液１ｄ。
０３％のツイーン２０ （Ｔｗｅｅｎ ２０）を含有
する−４．５の５ｍＭギ酸ナトリウム−ギ酸緩衝液に溶
解した１１（３４０％ｍの吸光度が０．０１１であった
。）、抗体／酵素試薬−β−ガラクトシダーゼ（０，０
０５単位／−）及び抗体１０．８μｔ／ｐ＋（８，５，
５０ｍＭグリシン緩衝液１−、プロプラノロール検定液
−プロプラノロール１μｆ／ｐｉ（８，５，５ＱｍＭグ
リシン緩衝液１ｄ。
試験法
θ〜１００μを分量のプロプラノロール検定液を、ｐＨ
８，５，５０ｍＭグリシン緩衝液３．０−を含有する一
連のキュベツトに添加した。抗体／酵素試薬ｉｏｏμｔ
を各キュベツトに添加し、内容物を混合した。螢光性試
薬１００μｔを加え、反応物を雰囲気温度に２０分間放
置した。この装置終了後螢光を記録した。
８，５，５０ｍＭグリシン緩衝液３．０−を含有する一
連のキュベツトに添加した。抗体／酵素試薬ｉｏｏμｔ
を各キュベツトに添加し、内容物を混合した。螢光性試
薬１００μｔを加え、反応物を雰囲気温度に２０分間放
置した。この装置終了後螢光を記録した。
プロプラノロールｎ１Δ式験 正味螢光０
３５５
４０１０
４５２０ ５２４
０ ６３８０
７０１００
７ ０プロプラノロ一ル濃度が増加するに
つれて螢光が増大し、薬剤と化合物Ｉが抗体結合部位に
対して競合したことを示す。
３５５
４０１０
４５２０ ５２４
０ ６３８０
７０１００
７ ０プロプラノロ一ル濃度が増加するに
つれて螢光が増大し、薬剤と化合物Ｉが抗体結合部位に
対して競合したことを示す。
第１頁の続き
０発 明 者 ロバート・ジョセフ・キャリコアメリカ
合衆国インヂアナ４６５１ ４エルクハート・シルバー・ス トリー） ５４２５６ １４５−
合衆国インヂアナ４６５１ ４エルクハート・シルバー・ス トリー） ５４２５６ １４５−
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 （１） 式： （式中、Ｒは結合基、又はイムノゲン担体物質、かつｐ
は平均値として約１〜５０の数を表わす。） を有するプロブラノロールイムノゲン。 （２）前記Ｘが蛋白またはペプチドである特許請求の範
囲第１項記載のイムノゲン。 （３）Ｒが式： （式中、ｎは２〜１０の数を表わす。）のビス−イミデ
ートであシ、かつＸがアミノ基を介して結合している特
許請求の範囲第１項記載のイムノゲン。 （４）ｐが平均値として約１〜２５である特許請求の範
囲第１項記載のイムノゲン。 （５）前記Ｘが修生血清アルブミンである特許請求の範
囲第１項記載のイムノゲン。 （６）式： （式中、担体線アミノ基を介して結合した修生血清アル
ブミン・であり、かつｐは平均値として約１〜５０の数
を表わす。） を有するプロプラノロールイムノケン。 （７）特許請求の範囲第１項のイムノゲンに対して調製
された抗体。 （８）特許請求の範囲第５項のイムノゲンに対して調製
された抗体。 （９）特許請求の範囲第６項のイムノゲンに対して調製
された抗体。 （１０）式： （式中、Ｘはイムノゲン担体物質であシ、かつｐは平均
値として約１〜５０の数を表わす。）を有するプロプラ
ノロールイムノケン。 （３） （式中、Ｒ′は約１〜１２個の炭素原子を有するアルキ
レン基、アルダニ１／ン基およびフェニレン基よシなる
グループよシ選ばれ、Ｘはイムノゲン担体物質を示し、
かっｐは平均値として約１〜５０の数を表わす。） を有するプロプラノロールイムノケン。 （１２）前記Ｘが蛋白またはペプチドである特許請求の
範囲第１０項記載のイムノゲン。 （１３） ｐが平均値として約１〜２５である特許請求
の範囲第１０項記載のイムノゲン （１４）前記Ｘが修生血清アルブミンである特許請求の
範囲ｆｊｇｌｏ項記載のイムノゲン。 （１５）特許請求の範囲第１０項のイムノゲンに対して
調製された抗体。 （１６）特許請求の範囲第１１項のイムノゲンに対して
調製された抗体。 （１７）特許請求の範囲第１４項のイムノゲンに対
“して調製された抗体。 （１８）式： （４） を有する３−Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ナフト
キシ）−１−プロピル〕アミノ酪酸。 （１９）式： のプロプラノロール誘導体。 （２０）抗体として特許請求の範囲第７項の抗体を用い
ることを特徴とする試料中のプロプラノロールを測定す
るための免疫試験法。 （２１）抗体として特許請求の範囲第１５項の抗体を用
いることを特徴とする試料中のプロプラノロールを測定
するための免疫試験法。 （２２）抗体として特許請求の範囲第７項の抗体を用い
ることを特徴とする試料中のプロプラノロールを測定す
るだめの試薬。 （２３）抗体として特許請求の範囲第１５項の抗体を用
いることを特徴とする試料中のプロプラノロールを測定
するための試薬。 （２、特許請求の範囲第７項の抗体及び前記抗体と結合
するとき変化する検出可能な性質を有する標識化プロプ
ラノロール複合体よりなることを特徴とする均一系免疫
試験によるプロプラノロールを測定するための試験キッ
ト。 （２、特許請求の範囲第１５項の抗体及び前記抗体と結
合するとき変化する検出可能な性質を有する標識化プロ
プラノロール複合体よりなることを特徴とする均一系免
疫試験によるプロプラノロールを測定するための試験キ
ット。 （２６） （ａ）特許請求の範囲第７項の抗体及び前記
抗体と結合するとき変化する検出可能な性質を有する標
識化プロプラノロール複合体を含有する試薬組成物及び
（ｂ）前記試薬組成物を包含せしめた固体担体部材より
なることを特徴とする均一系免疫試験によるプロプラノ
ロールを測定するだめの試験具。 （２７） （ａ）特許請求の範囲第１５項の抗体及び前
記抗体と結合するとき変化する検出可能な性質を有する
標識化プロプラノロール複合体を含有する試薬組成物及
び（ｂ）前記試薬組成物を包含せしめた固体担体部材よ
シなることを特徴とする均一系免疫試験によるプロプラ
ノロールを測定するための試験共。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/383,340 US4472301A (en) | 1982-05-27 | 1982-05-27 | Propranolol immunogen and antibodies |
| US383340 | 1982-05-27 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58216124A true JPS58216124A (ja) | 1983-12-15 |
Family
ID=23512680
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58090847A Pending JPS58216124A (ja) | 1982-05-27 | 1983-05-25 | プロプラノロ−ル試験用プロプラノロ−ルイムノゲン及びプロプラノロ−ル化合物並びにそれらを用いる試験法 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4472301A (ja) |
| EP (1) | EP0095639A3 (ja) |
| JP (1) | JPS58216124A (ja) |
| AU (1) | AU1113983A (ja) |
| ES (1) | ES522722A1 (ja) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4650675A (en) * | 1983-08-18 | 1987-03-17 | The Children's Medical Center Corporation | Oligonucleotide conjugates |
| FR2562671B1 (fr) * | 1984-04-10 | 1986-07-25 | Immunotech Sa | Procede pour le dosage immunologique des monoamines |
| ATE147400T1 (de) * | 1991-08-13 | 1997-01-15 | Bayer Ag | Fluoreszierendes etikett |
| US5587472A (en) * | 1991-08-13 | 1996-12-24 | Bayer Corporation | Coumarin-labeled nucleoside 5'-triphosphates |
| CA2109224A1 (en) * | 1991-12-20 | 1993-06-21 | Karin Elisabeth Peuschel | Using the immunoactivating activity of 3-naphthyloxy-2-hydroxy-propylamines, in particular for providing cell immunity, e.g. against viral infections |
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| US3935074A (en) * | 1973-12-17 | 1976-01-27 | Syva Company | Antibody steric hindrance immunoassay with two antibodies |
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-
1982
- 1982-05-27 US US06/383,340 patent/US4472301A/en not_active Expired - Fee Related
-
1983
- 1983-02-04 AU AU11139/83A patent/AU1113983A/en not_active Abandoned
- 1983-05-16 EP EP83104791A patent/EP0095639A3/en not_active Withdrawn
- 1983-05-25 JP JP58090847A patent/JPS58216124A/ja active Pending
- 1983-05-26 ES ES522722A patent/ES522722A1/es not_active Expired
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|---|---|---|---|---|
| JPS5735522A (en) * | 1980-08-08 | 1982-02-26 | Syva Co | Propranolol antigen conjugate and antibody |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0095639A3 (en) | 1984-08-08 |
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| EP0095639A2 (en) | 1983-12-07 |
| US4472301A (en) | 1984-09-18 |
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