JPH0430797A - 発酵法によるアデノシンの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、発酵法によるアデノシンの製造法に関する。

〔従来の技術〕

発酵法によるアデノシン生産に関しては、イソロイシン
要求性を有するバチルス・ズブチリスによるアデノシン
製造法（昭和３９年度日本農芸化学大会）やキサンチン
、ヒスチジン及びスレオニン要求性を有し、かつ８−ア
ザキサンチン耐性を有するバチルス・ズブチリスによる
アデノシン製造法（Ａｇｒｔｃ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅ
ｗ、、　３５．１９０６　（１９７１））、更には、グ
アニン要求性を有し、かつ８−アザアデニン又は６−メ
チルアミノプリン耐性を有する変異株を用いる方法（特
願昭５８−１８５３１３号）が知られていた。

しかしながら、これらの製造法は、いずれもアデノシン
の蓄積濃度が低く、また菌株の安定性に問題があった。

〔発明を解決しようとする課題］ 本発明は、アデノシン生産能の更に高い微生物によるア
デノシンの発酵法を掃供することを目的とする。

〔課題を解決するための手段〕

本発明者の上述の課題を解決すべく鋭意研究の結果、バ
チルス属に属し、イソロイシン要求性、ヒスチジン要求
性及びアルギニン要求性を有する変異株並びに、ピリミ
ジンアナログ耐性を有する変異株を使用すれば、前記の
目的を達成し得ることを見出し、本発明を完成した。

すなわち、本発明は、バチルス属に属し、インロイシン
要求性、ヒスチジン要求性及びアルギニン要求性を有し
、かつアデノシン生産能を有する微生物又は、バチルス
属に属し、ピリミジンアナログ耐性を有し、かつアデノ
シン生産能を有する微生物を培養して培養液中にアデノ
シンを生成蓄積せしめ、これを採取することを特徴とす
る発酵法によるアデノシンの製造法に関する。

以下、本発明について詳述する。

本発明で使用できる菌株は上述の微生物であれば特に限
定されるものではなく、該微生物の採取は、例えば次の
ようにして行なうことができる。

すなわち、バチルス・ズブチリスのグアニン要求性を有
し、かつ８−アザアデニン耐性がっ６−メチルアミノプ
リン耐性を有する菌株を通常の方法で変異処理（Ｎ−メ
チル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン等）に付
して菌株の生育にグアニン及びアミノ酸を要求する菌株
又は、各種薬剤耐性株を採取する。これらの中から、ス
クリーニングにより生育のためにイソロイシン、ヒスチ
ジン、アルギニンを要求する菌株又はプリミジンアナロ
グ耐性を有する菌株が、著量のアデノシンを培養液中に
蓄積するものであることが確認できる。

プリミジンアナログとしては、４−アミノピラゾロ〔３
，４−α〕−ピリミジン、４−アミノ−６−メルカプト
とラゾール（３，４−ｄ）ピリミジン、４−アミノピラ
ゾロ（３，４−ｄ）ピリミジン２′デオキシ−リボシト
等から選ばれる。

こうして得られた菌株は、例えばグアニン要求性、８−
アザアデニン耐性及び６−メチルアミノプリン耐性を有
するバチルス・ズブチリスＡＪ１２０５０（ＦＥＲＭ　
Ｐ−７１４９）を親株とし、これを変異処理した以下の
菌株がある。

（１）イソロイシン要求、ヒスチジン要求、アルギニン
要求性を有する菌株： バチルス・ズブチリスＡＪ　１２５１Ｂ　（ＦＥＲＭ　
Ｐ−ｕ４−’７３）（２）４−アミノピラゾロ（３，４
−ｄ）−ピリミジン耐性を有する菌株： バチルス・ズブチリスＡＪ　１２５１９　（ＦＥＲＭ　
Ｐ−１＋今？＋）本発明で例示された菌株のアミノ酸に
対する要求性及び薬剤に対する耐性度を示す実験例を以
下に示す。

実験例 下記の基本培地にアミノ酸を第１表に示す濃度に、又、
薬剤を第１表に示す濃度になるようにそれぞれ添加した
培地を調製し、試験管に３　ＩＩｌずつ分注し殺菌後、
各菌株を接種し、３４°Ｃ，２０時間振とう培養を行っ
た。

基本培地 グルコース　　　　　　　２　　　ｇ／ａ塩化アンモニ
ウム　　　０．５〃 リン酸第−カリウム　　０．ｌ〃 硫酸マグネシウム　　　０．０４　　〃クエン酸ソーダ
　　　　０．０５　　〃Ｌ−グルタミン酸　　　０．１
　　ｇ／ｄ１グアニン　　　　　　　０．０１　　〃ｐ
ｅ４４　、　　Ｍｎ４４　（各）　　　２　　　ｐｐｍ
ｐＨ（ＫＯｔｌ）　　　　　　　　７．　Ｏ〃この培養
により得られた各菌株の生育状況を第表及び第２表に相
対生育値で示す。

第１表 ＡＪ　　１２０５０　　　　　　　　１００　　　　　
　　　　　　９６ＡＪ　１２５１８　　　　　２５　　
　　　　１００（注）生育値は培養液の２０時間培養後
の吸光度について、 ＡＪ　１２０５０菌では、アミノ酸無添加の場合を１０
０゜ＡＪ　１２５１８菌では、アミノ酸添加の場合を１
００゜とした相対生育度で示した。

第２表 ＡＪ　　１２０５０　　　　　１００　　　　　　　　
　２０ＡＪ　　１２５１９　　　　　１００　　　　　
　　　　７０（註）生育値は、培養液の２０時間培養後
の吸光度の増加値について薬剤無添加の場合を１００と
した相対生育度で示した。

これらの菌株を用いてアデノシンを生産するには次のよ
うな方法が用いられる。培地としては、炭素源、窒素源
、無機塩類、グアニンおよび必要ならば更にその他の微
量栄養素を含有する通常の液体培地である。炭素源とし
ては、グルコース、糖蜜、デンプン加水分解液などの炭
水化物、酢酸、プロピオン酸、ピルビン酸、クエン酸等
の有機酸、エタノール、プロパツールなどのアルコール
類、さらに菌によっては炭化水素なども使用できる。

窒素源としては硫安、硝安、塩安、リン安等のアンモニ
ューム塩、硝酸塩、尿素、アンモニアガス等の無機態窒
素もしくはカゼイン加水分解物、アミノ酸等の有機態窒
素等が使用できる。また、栄養要求物質としてのグアニ
ンは、グアニン、グアニン鉱酸塩、グアノシン、グアニ
ル酸、リボ核酸等のいずれも使用可能である。また、必
要に応じてビタミン類、アミノ酸、核酸塩基などの微量
栄養素を添加すればアデノシンの蓄積量を増すことがで
きる場合が多い。特に本発明のアミノ酸要求株を用いる
場合にはその要求物質を添加しなければならない。培養
方法は好気的条件が良く、また、培養温度は２０°Ｃ〜
４０°Ｃの範囲がよい。場合によっては発酵途中にて発
酵温度を若干変更させてもよい。培養開始時および培養
中のｐＨを５．０〜９．０の範囲の最適値に調節して培
養するのが望ましい。ｐｔｌの調整は無機酸、有機酸あ
るいはアルカリ、さらに尿素、炭酸カルシューム、アン
モニア水、アンモニアガスなどを使用することができる
。

かくして２〜５日間培養すれば著量のアデノシンが培地
中に蓄積される。更に残炭素源濃度を０．５〜２ｇ／ｄ
ｉに管理し、炭素源を連続フィードすることによりアデ
ノシンの蓄積を著しく高めることができる。

発酵液よりアデノシンを採取するには、例えば菌体を分
離除去し、アニオン交換樹脂、カチオン交換樹脂等の樹
脂処理あるいは濃縮・冷却晶析法の併用等によりアデノ
シンを単離する。あるいは、常法の活性炭吸着法および
再結晶法を用いて精製してもよい。

以下、本発明を実施例により更に説明する。

〔実施例〕

第３表の組成のシード培地５０ｍ１を入れた５００ｓｆ
容フラスコに第４表に示す菌株を１白金耳摺種し、３４
°Ｃにて１６時間培養した。

この培養液を、上記主発酵培地２０＋１を入れた５００
＋ｌＩ４２容フラスコに１　ｍｌ添加し３４°Ｃにて７
２時間培養した。この培養液中のアデノシンを、液体ク
ロマトグラフィーにて定量したところ第４表に示すアデ
ノシン量が生成蓄積した。更に、ＡＪ−１２５１９の培
養で残糖を０．５−２．０ｇ／ａに管理し、炭素源を連
続フィードすることにより、アゾ高めることができた。

上記と同様の方法によって得た菌株＾Ｊ　１２５１９の
培養液１０Ｉ！より菌体を遠心分離法で除いた後、上清
をエバポレーターにて２２まで濃縮した。この濃縮液を
５°Ｃに放置してアデノシンの結晶を生成させた。得ら
れたアデノシンの結晶を水に溶解し、更に活性炭に吸着
せしめ常法により溶出しアデノシン画分を採取し、濃縮
冷却晶析することにより、アデノシンの結晶９９ｇを得
た。

第 表 菌 株 アデノシン蓄積濃度 （ｇ　／　ｌ　） ＡＪ １１．５ ＡＪ　１２５１８　（要求株） ＡＪ　１２５１９　（耐性株） １４．８ １４．６ 〔発明の効果］ 本発明の菌株を使用することにより、アデノシンの蓄積
量が向上することから工業レベルでの実用化が期待され
る。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）バチルス属に属し、イソロイシン要求性、ヒスチ
   ジン要求性及びアルギニン要求性を有し、かつアデノシ
   ン生産能を有する微生物を培養して培養液中にアデノシ
   ンを生成蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする
   発酵法によるアデノシンの製造法。
2. （２）バチルス属に属し、ピリミジンアナログ耐性を有
   し、かつアデノシン生産能を有する微生物を培養して培
   養液中にアデノシンを生成蓄積せしめ、これを採取する
   ことを特徴とする発酵法によるアデノシンの製造法。