JPH04225923A - エリスロポイエチンの水性医薬製剤及びその使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 【０００１】本発明は精製エリスロポイエチン、特にヒ
ト天然及び組換えヒトエリスロポイエチン（ｒｈ　　Ｅ
ＰＯ）、の水性医薬製剤に関する。本発明の製剤は、外
来タンパク質、糖、アミノ酸又は他の常用安定剤を含ま
ずに、４〜８℃の温度で少なくとも１年間にわたりそれ
らの原活性の少なくとも約７８％を留める。 【０００２】エリスロポイエチン（ＥＰＯ）は１６６個
のアミノ酸、アミノ酸２４、３８及び８３位に３つのグ
リコシル化部位並びに約３４，０００の分子量を有する
糖タンパク質である。ＥＰＯはヒト尿のような天然源か
ら単離されるか〔例えば、Ｍｉｙａｋｅ　ｅｔ　ａｌ．
，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，ｖｏｌ．２５２（１９７
７），５５５８−５５６４参照〕又は遺伝子工学プロセ
スで製造される〔例えば、ＥＰ‐Ａ　　１４８，６０５
及びＥＰ‐Ａ　　２６７，６７８明細書参照〕。エリス
ロポイエチンの水溶液は約３℃〜室温の温度で不安定で
ある。 【０００３】腎不全患者はＥＰＯを形成できず、このた
め貧血をおこす。ＥＰＯ投与でこのＥＰＯ供給不足を補
いかつ貧血症状を軽減するとの試みは既に成功を収めて
いる。更に臨床使用では、悪性疾患の化学療法及び放射
線療法後における医原性貧血のためにｈＥＰＯを投与す
る。１回分用量のＥＰＯはわずか数マイクログラムの量
である。静脈内投与後の短い半減期のため、生理学的血
漿レベルは皮下注射で最も良く達成されうる。 【０００４】今までに報告又は利用されたエリスロポイ
エチンの医薬製剤は更に界面活性剤及び／又はタンパク
質、糖又はポリアルコール類を含んでいるが、これらは
一方でＥＰＯを安定化させ、他方で貯蔵容器（即ち、ア
ンプル）内壁へのＥＰＯ吸着を妨げるためである〔ＥＰ
‐Ｂ　　１７８，５７６及びＥＰ‐Ａ　　１７８，６６
５明細書；Ｇ．Ｋｒｙｓｔａｌ　ｅｔ　ａｌ．，Ｂｌｏ
ｏｄ，ｖｏｌ．６７（１９８６），１，７１−７９　〕
。このように安定化されたＥＰＯの皮下又は筋肉内投与
は、肉芽腫の形成と共に局所的炎症をおこす。既知プロ
セスで製造された高純度ＥＰＯ〔ＥＰ‐Ａ　　２３６，
０５９；ＵＳ‐Ａ４，６６７，１５９；ＰＣＴ／ＵＳ　
　８６／１３４２（＝ＷＯ　　８６／７５９４）明細書
〕は２４℃の貯蔵で１週間以内にその活性の２５％以上
を失う。ＥＰ‐Ｂ１７８，５７６号明細書は１４Ｃ‐ホ
ルムアルデヒドで還元メチル化されたヒトエリスロポイ
エチンのＰＢＳ溶液についても開示している；実験１及
び２参照。 【０００５】本発明が基本にする目的は、常用安定化添
加剤を含まず、それにもかかわらず約３℃〜室温の温度
で十分な安定性を有し、特に皮下又は筋肉内投与に適し
た精製エリスロポイエチンの水性医薬製剤を提供するこ
とである。 【０００６】精製エリスロポイエチン（純度約９９％）
、特に精製天然又は組換えヒトエリスロポイエチンは、
シールされた試験管又はガラスアンプル内において、生
理学上許容されるハロゲン化アルカリ金属を含み他に安
定化添加剤を含まないｐＨ６〜８の生理学上許容される
水性リン酸緩衝液中４〜８℃の温度で長期間安定である
ことが意外にも発見された。 【０００７】このため本発明は、生理学上許容されるハ
ロゲン化アルカリ金属を含み他に安定化添加剤を含まな
いｐＨ６〜８の生理学上許容される水性リン酸緩衝液中
の精製エリスロポイエチンからなる、水性医薬製剤に関
する。５０ｍＭリン酸ナトリウム、１００ｍＭＮａＣｌ
からなるｐＨ７．８の緩衝液が特に好ましい。水性緩衝
液中におけるエリスロポイエチンの濃度は５０〜１００
０μｇ／ｍｌ緩衝液である。 【０００８】生理学上許容される水性リン酸緩衝液の例
はリン酸ナトリウム緩衝液及びリン酸カリウム緩衝液、
好ましくはリン酸ナトリウム緩衝液である。生理学上許
容されるハロゲン化アルカリ金属の例は塩化ナトリウム
及び塩化カリウム、好ましくは塩化ナトリウムである。 好ましいリン酸緩衝液はｐＨ７．８の５０ｍＭリン酸ナ
トリウム、１００ｍＭＮａＣｌを含有した緩衝液である
。この緩衝液は簡略化のためＰＢＳとも呼ばれる。ＰＢ
Ｓ中エリスロポイエチンの水溶液は皮下又は筋肉内投与
用に非常によく適する。 【０００９】本発明は更に皮下又は筋肉内投与用注射品
を製造する水性医薬製剤の用法に関する。皮下投与が特
に好ましいが、その理由はタンパク質で安定化された既
知製剤と異なりそれが刺激又は炎症性痛みをおこさない
からである。これは臨床試験から判明した。 【００１０】下記例は本発明について示す。 例１ ｒｈ　　ＥＰＯの精製 ｒｈ　　ＥＰＯの精製はＥＰ‐Ａ　　２６７，６７８明
細書の第６頁４５行目〜第９頁５行目で記載されたプロ
セスでｒｈ　　ＥＰＯ産生動物細胞によりならされた血
清含有又は無血清培地から出発した。そのプロセスは以
下である： （１）培地の清澄化、濃縮及び透析； （２）イオン交換クロマトグラフィー；（３）調製的逆
相ＨＰＬＣ；及び （４）ゲル濾過クロマトグラフィー； ゲル濾過クロマトグラフィーの場合、カラムはＰＢＳ、
即ちｐＨ７．８の５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液、１
００ｍＭＮａＣｌで平衡化させた。この緩衝液でｒｈ　
　ＥＰＯは一対称ピークとして溶出した（２８０ｎｍで
溶出液の測定）。得られたｒｈ　　ＥＰＯはＳＤＳ‐Ｐ
ＡＧＥによると少なくとも純度９９％であった。 （５）希釈 ゲル濾過ステップ（４）から合わせたｒｈ　　ＥＰＯ分
画はＥＰＯ　　０．１〜０．８ｍｇ／ｍｌ　を含有して
おり、ｐＨ７．８のリン酸ナトリウム／塩化ナトリウム
緩衝液（ＰＢＳ）を用いて１回分の用量１００μｇ／ｍ
ｌで分配された。 【００１１】例２ 安定性試験 例１の場合のようにして得られたｒｈ　　ＥＰＯのＰＢ
Ｓ溶液の安定性は、様々な安定剤と比較して、無菌ガラ
ス管内で１回分用量の貯蔵後に試験した。ｒｈＥＰＯの
活性は常法に従いフェニルヒドラジンで処理されたマウ
ス脾臓細胞内への３Ｔ取込みにより測定した。下記表で
示されたデータは使用ｒｈ　　ＥＰＯの初期活性率＝１
００％と比較している。 【００１２】 （ａ）４〜８℃で貯蔵 　　　　　　安定剤　　　　　　　　　　　　　１００
μｇ　ＥＰＯ／ｍｌ　ＰＢＳに対する　　　　　　　　
１２月間後　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　安定剤の量（ＥＰＯと比較したｗｔ／ｗｔ）　
　　　の活性率％ＰＢＳ単独　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　‐　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　７８．５　ＰＢＳ＋ソルビ
トール　　　　　　　　　　　　　５０００　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５１　ＰＢＳ
＋グリセロール　　　　　　　　　　　　　６１５０　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０
　ＰＢＳ＋ヘマセル　　　　　　　　　　　　　　　　
　　１００　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　６８　 【００１３】 （ｂ）３７℃で貯蔵（加速試験） 　　　　　　安定剤　　　　　　　　　　　　安定剤　
　　　　　１　　　　　　２　　　　　　３　　　　　
　６　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　の量　　　　　　　　　　　　月間後の活性率％　　
　　　　ＰＢＳ単独　　　　　　　　　　　　　　　　
‐　　　　　　　８６．３　　　　３９　　　　　　１
１．２　　　　　９．９　ＰＢＳ＋ソルビトール　　　
　　５０００　　　　　　３３．５　　　　１０．７　
　　　　５．１　　　　　０　ＰＢＳ＋ヘマセル　　　
　　　　　　　１００　　　　　　４２　　　　　　１
４．８　　　　　６．０　　　　　５．１　注：ヘマセ
ル（ＨａｅｍａｃｃｅｌＲ　）　は分解ゼラチンである
。 【００１４】安定剤の追加なしにＰＢＳ（ｐＨ７．８）
中でのｒｈ　　ＥＰＯの驚くほど良好な安定性は表から
明らかである。

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】生理学上許容されるリン酸アルカリ金属及
   びハロゲン化アルカリ金属を含み他に安定化添加剤を含
   まないｐＨ６〜８の生理学上許容される水性緩衝液中の
   精製エリスロポイエチンからなる、水性医薬製剤。
2. 【請求項２】水性緩衝液が５０ｍＭリン酸ナトリウム、
   １００ｍＭＮａＣｌ、ｐＨ７．８からなる、請求項１に
   記載の製剤
3. 【請求項３】エリスロポイエチンがヒト天然又は組換え
   エリスロポイエチンである、請求項１又は２に記載の製
   剤。
4. 【請求項４】エリスロポイエチンの濃度が５０〜１００
   ０μｇ／ｍｌ緩衝液である、請求項１〜３のいずれか一
   項に記載の製剤。
5. 【請求項５】注射品製造のための請求項１〜４のいずれ
   か一項に記載の精製エリスロポイエチンの水性製剤の使
   用。
6. 【請求項６】ｐＨ６〜８の生理学上許容される水性緩衝
   液に純度９９％以上のエリスロポイエチンを溶解させる
   ことからなり、上記緩衝液が生理学上許容されるリン酸
   アルカリ金属及びハロゲン化アルカリ金属を含み他に安
   定化添加剤を含まないものである、請求項１に記載され
   たエリスロポイエチンの安定医薬製剤の製造法。