JPH04211098A - 融合蛋白質、組換ｄｎａ、組換ベクター、微生物、融合蛋白の取得法及びｈｉｖ−抗体−検出試薬 - Google Patents

融合蛋白質、組換ｄｎａ、組換ベクター、微生物、融合蛋白の取得法及びｈｉｖ−抗体−検出試薬

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JPH04211098A
JPH04211098A JP3009782A JP978291A JPH04211098A JP H04211098 A JPH04211098 A JP H04211098A JP 3009782 A JP3009782 A JP 3009782A JP 978291 A JP978291 A JP 978291A JP H04211098 A JPH04211098 A JP H04211098A
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】
［０００１］
【産業上の利用分野】本発明はＨＩＶＩ及びＨＩＶ２の
ｇａｇ−１ｅｎｖ−及びｐｏｌ−域からのポリペプチド
の、宿主細胞としての微生物中での発現の改良に関する
。更に、本発明は人体液中の抗−ＨＩＶ−抗体の検出法
及び検出試薬に関する。 ［０００２］ ［従来の技術］　ＨＩＶＩ又はＨＩＶ２での感染は通常
人体液中の抗−ＨＩＶ−抗体の存在により証明される。 抗ＨＩＶ−抗体の検出のためにはＨＩＶ−ポリペプチド
が必要である。従って、エイズ（ＡＩＤＳ）−試験を多
数実施するためには、免疫原として作用するＨＩＶ−ポ
リペプチドを十分量で製造することが必要である。この
製造は一般にバクテリア中での遺伝子技術的方法により
行なわれる。 ［０００３］　こうして、西独特許公開第３７２４０１
６号公報から“非融合蛋白質″（ヘテロ原融合部分なし
）としてＨＩＶｌ及びＨＩＶ２からの抗原の大腸菌中で
の発現は公知である。この方法の欠点は、多くの場合Ｈ
Ｉ■−ポリペプチドの発現が非常にわずかに行なわれる
にすぎないということである。更に、ＨＩＶ−ポリペプ
チドはしばしばその疎水性により難溶性であり、これに
より精製することが困難である。 ［０００４］更に、ＨＩＶ−ポリペプチドをＨＩＶ一部
分とバクテリアポリペプチド部分とを有する融合蛋白質
として製造することも公知である。これにより、多くの
場合発現の程度の改良が達せられる。こうして、ヨーロ
ッパ公開特許第３１６６５９号明細書から、ＨＩＶＩ及
びＨＩＶ２からの決定基、特にマウスのジヒドロフオレ
ートレダクターゼ又は大腸菌クロラムフェニコール−ア
セチルトランスフェラーゼから由来する担体ポリペプチ
ド部分及び親和性−ポリペプチド部分、有利にヒスチジ
ン残基を有する融合蛋白質の発現が公知である。しかし
ながら、抗−ＨＩＶ−抗体の検出のためにこの種の融合
蛋白質を使用することは制限される。それというのも使
用した融合パートナ−に対する抗体が人正常血清中に生
じることがあり、このことは誤まったプラスのテスト結
果に導びくためである。 ［０００５］
【発明が解決しようとする課題】従って、本発明の課題
は、ＨＩＶ−融合ポリペプチドがＨＩＶ−テストを妨害
することのある免疫学的決定基を有することにより人正
常血清と反応する、ということなしに、ＨＩＶ−融合ポ
リペプチドの高い発現を達成することである。 ［０００６］
【問題を解決するための手段】従って、本発明の課題は
Ｎ−末端成分としてテトラペプチド配列ＮＨ２ＭｅｔＴ
ｙｒ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕを含有する、ＨＩＶＩ又は／及び
ＨＩＶ２のｅｎｖ−１ｇａｇ−又は／及びｐｏｌ域から
の抗原又は／及び免疫原決定基を少なくとも１つ有する
融合蛋白質である。 ［０００７］Ｎ−末端成分として大腸菌からのラクトー
スペルミアーゼ（１ａｃＹ）のアミノ酸配列ＮＨ２Ｍｅ
ｔ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−ＬｅｕがＨＩＶＩ又は／及びＨＩ
Ｖ２の抗原又は／及び免疫原決定基を少なくとも１つ有
するＨＩＶ−融合蛋白質の安定性を高め、こうして宿主
細胞としての大腸菌中での発現度の明らかな改良に作用
する。こうしてテトラペプチド配列ＮＨ２ＭｅｔＴｙｒ
−Ｔｙｒ−ＬｅｕのＮ−末端融合によりＨＩＶＩ及びＨ
ＩＶ２融合蛋白質の発現度は好適な発現ベクターの使用
において約１０のファクターで高められる。人正常血清
中では、この種の本発明による融合蛋白質に対する高め
られた反応性は全く見い出されない。 ［０００８１更に、本発明による融合蛋白質は付加的な
成分として多くの、有利に４〜３０の帯電した親水性ア
ミノ酸のクラスターを有する。このようにして、疎水性
ＨＩＶ−融合蛋白質の溶解性は著しく改良されることが
でき、かつこれにより不溶性蛋白質−凝集物の形成は十
分に、もしくは完全に阻止され、このことにより単離及
びＨＩＶ−テストにおける使用に関して、この融合蛋白
質の取り扱かい易さは改良された。 ［０００９］特に有利であるのは、Ｃ−末端が塩基性ア
ミノ酸（Ｌｙｓ及びＡｒｇ）４〜３０の連続を有してい
る本発明による融合蛋白質である。このことにより蛋白
質の等電点を著しく塩基性の値に移動させ、これにより
イオン交換クロマトグラフィーによる精製を著しく容易
にする。Ｃ−末端ポリ（Ａｒｇ、Ｌｙｓ）−尾部は場合
によりあとからカルボキシペプチダーゼＢで再び除去す
ることができる（Ｂｒｅｗｅｒ及び５ａｓｓｅｎｆｅｌ
ｄ、　Ｇ、　Ｄ、　　５ｅａｒ　ｌ　ｅ、ヨーロッパ公
開特許第００８９６２６Ａ２号明細書；Ｂｒｅｗｅｒ及
びＳａｓｓｅｎｆｅｌｄ、Ｇｅｎｅ、第３２巻、１９８
４年、第３２１〜３２７頁；Ｂｒｅｗｅｒ及び５ａｓｓ
ｅｎｆｅｌｄ、Ｔｒｅｎｄｓ　　　ｉｎ　　Ｂｉｏｔｅ
ｃｈｎｏｌｏｇｙ１第３巻、１９８５年、第１１９〜１
２２頁）。 ［００１０１本発明による融合蛋白質はＨＩＶＩ又は／
及びＨＩＶ２のｅｎｖ−１ｇａｇ−又は／及びｐｏｌ域
からの免疫原決定基少なくとも１つを含有する。この種
の決定基をコードするＤＮＡ−配列はＨＩＶＩもしくは
ＨＩＶ２のプロウィルスゲノムから通常の分子生物学的
方法により得られる。この種のＤＮＡ配列は読み取り枠
中のテトラペプチド配列ＮＨ２Ｍｅ　ｔ　−Ｔｙ　ｒ　
−Ｔｙ　ｒ　−Ｌ　ｅ　ｕ　（ＭＹＹＬ）をコードする
配列の後方で好適な発現ベクター中にコードされること
ができ、こうして本発明による融合蛋白質をコードする
組換遺伝子が得られる。ＨＩＶｌ−ゲノムからはＤＮＡ
−配列域Ａ′Ｂ′及びＣ′が有利である。 ［００１１１ＤＮＡ−配列Ａ′はＨＩＶＩのｇａｇ−域
からの長さ約９６０ＢｐのＰｖｕ／ＢｇＩ　Ｉ　Ｉ−フ
ラグメントであり、かつアミノ酸３１８個をコードする
。 Ａ’はＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：９に示されたＤＮＡ配
列Ａ中に包含され、この配列ＡはＮ−末端テトラペプチ
ド配列ＭＹＹＬ、ベクターのアミノ酸３個、ＨＩＶＩの
ｇａｇ−域からのアミノ酸３１７個及びアミノ酸１３個
のＣ末端ベクター配列からなるアミノ酸配列Ｉ　　（Ｓ
ＥＱＩＤ　　ＮＯ：１）を有する融合蛋白質をコードす
る。 ［００１２］　ＤＮＡ配列Ｂ′はＨＩＶＩのｐｏｌ−域
からの長さ約７１０ＢｐのＰｖｕＩ　Ｉ／ＢｓｐＭＩ−
フラグメントであり、これはアミノ酸２３４個をコード
する。Ｂ′はＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：１０中に図示さ
れたＤＮＡ−配列Ｂ中に包含され、このＤＮＡ−配列Ｂ
はＮ末端テトラペプチド配列ＭＹＹＬ、ベクターのアミ
ノ酸３個、ＨＩＶＩのｐｏｌ−域からのアミノ酸２３４
個及びアミノ酸６個のＣ−末端ベクター配列からなるア
ミノ酸配列ＩＩ　　（ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：２）を
有する融合蛋白質をコードする。 ［００１３］　ＤＮＡ配列Ｃ′はＨＩＶＩのｅｎｖ−域
からの長さ約３１０ＢｐのＲｓ　ａ　Ｉ／Ｈｉ　ｎｄ　
Ｉ　Ｉ　Ｉ−フラグメントであり、これはアミノ酸１０
１個をコードする。ＤＩ’ＪＡ−配列Ｃ′はＳＥＱ　　
ＩＤ　　ＮＯ：１１に示されたＤＮＡ−配列Ｃ中に包含
され、このＤＮＡ−配列ＣはＮ−末端テトラペプチド配
列ＭＹＹＬ、ベクターのアミノ酸２２個、ＨＩＶＩのｅ
ｎｖ−域からのアミノ酸１０１個及びアミノ酸１２個の
Ｃ−末端ベクター配列からなるアミノ酸配列ＩＩＩ　　
（ＳＥＱＩＤ　　ＮＯ：３）を有する融合ポリペプチド
をコードする。 ［００１４］構造により必然的にペプチド配列ＭＹＹＬ
をコードするＤＮＡ−配列とＨＩＶ−ＤＮＡの間で、Ｈ
ＩＶ−ＤＮＡ−フラグメントの３′−側に更にベクター
からの配列域がある。このベクター配列は有利にアミノ
酸約５０個より多くをコードすべきではない。このアミ
ノ酸配列が人払体から認識され、こうしてＨＩＶ−テス
トにおいて妨害する抗原決定基を形成することができな
いということは重要である。 （００１５］免疫原ＨＩＶ−決定基をコードするＤＮＡ
配列は以下に詳細を記載するように合成オリゴヌクレオ
チドからも製造することができる。ＨＩＶ２のｅｎＶ域
から合成的に製造されたＤＮＡ−配列Ｄ’　　（例２参
照）はアミノ酸１１５個をコードする。Ｄ′は５ＥＱＩ
Ｄ　　ＮＯ：１２中に示されたＤＮＡ−配列り中に包含
され、このＤＮＡ−配列りはＮ−末端テトラペプチド配
列ＭＹＹＬ、ベクターのアミノ酸２個、ＨＩＶ２のｅｎ
Ｖ−域からのアミノ酸１１５個及びアミノ酸９個のＣ末
端ベクター配列からなるアミノ酸配列ＩＶ（ＳＥＱＩＤ
ＮＯ：　４）を有する融合ポリペプチドをコードする。 ［００１６］更に、本発明はＮ−末端融合配列の他に同
時にＨＩＶＩ及び／又はＨＩＶ２のｇａｇ−１ｐｏｌ及
びｅｎｖ−域の多数の抗原決定基を有する“多官能性Ｈ
ＩＶ−融合蛋白質”の製造及び使用にも関する。このこ
とは多くの異なるＨＩＶ−ポリペプチドもしくは蛋白質
のかわりに、わずかに１つの多官能性ＨＩＶ−融合蛋白
質を発酵させ、精製し、かつＨＩＶ−抗体検出テストに
使用することができるという利点を有し、このことは著
しい費用の減少を意味する。多官能性融合蛋白質がＨＩ
ＶＩ及びＨＩＶ２の決定基を含有しているのが特に有利
であり、こうしてテストにおいてＨＩＶＩ及びＨＩＶ２
に対する抗体を同時に検出可能である。多官能性融合蛋
白質は免疫原としても、特にＨＩＶ−ワクチンのための
免疫原としても興味深い。アミノ酸配列及びこれをコー
ドする特に有利な多官能性融合蛋白質のＤＮＡ配列は配
列記録のＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：５〜８もしくは５Ｅ
ＱＩＤ　　ＮＯ：１３〜１６から明らかである。アミノ
酸配列■はＨＩＶＩのｅｎｖ−（アミノ酸１０１）及び
ｇａｇ−（アミノ酸３１７）域からの決定基を有するＨ
ＩＶ融合蛋白質を示す。このアミノ酸配列はＤＮＡ−配
列Ｃ′及びＡ′を包含するＤＮＡ−配列Ｅに相応する。 アミノ酸配列ＶＩ及びこれをコードするＤＮＡ−配列Ｆ
（ＤＮＡ−配列Ｄ′及びＢ′を有する）はＨＩＶ２のｅ
ｎｖ−域（アミノ酸１１４）及びＨＩＶＩのｐｏｌ−域
（アミノ酸２３４）からの決定基を有するＨＩＶ−融合
蛋白質を示す。アミノ酸配列ＶＩＩ及びこれをコードす
るＤＮＡ−配列Ｇ　（ＤＮＡ−配列Ｄ′、Ｂ′、Ｃ′及
びＡ′を有する）はＨＩＶ２のｅｎｖ−域（アミノ酸１
１４）並びにＨＩＶＩのｐｏｌ−（アミノ酸２３４）、
ｅｎｖ−（アミノ酸１０１）及びｇａｇ−（アミノ酸３
１７）域からの決定基を有するＨＩＶ−融合蛋白質を示
す。 ［００１７１更に、本発明の課題は本発明による融合蛋
白質をコードする組換ＤＮＡ−分子である。このＤＮＡ
配列はテトラペプチド配列ＮＨ２Ｍｅｔ−ＴｙｒＴｙｒ
−ＬｅｕをコードするＤＮＡ−配列、場合により構成に
より導入されたベクター配列、ＨＩＶ−決定基をコード
するＤＮＡ−配列及び場合により多くの帯電したアミノ
酸のクラスターをコードするＤＮＡ−配列からなる。こ
れに関する例はアミノ酸配列ＶＩＩＩ及びこれをコード
するＤＮＡ−配列Ｈ（ＤＮＡ−配列Ｄ’、Ｂ’及びＣ／
、並びにＤＮＡ配列Ａ′の大部分を有する）であり、こ
れはＨＩＶ２のｅｎｖ−域（アミノ酸１１４）、ＨＩＶ
Ｉのｐｏｌ−（アミノ酸２３４）　、ｅｎｖ−（アミノ
酸１０１）及びｇａｇ−（アミノ酸２８７）からの決定
基並びにＣ−末端ポリ（Ｌｙｓ、Ａｒｇ）−配列（アミ
ノ酸１３）を有するＨＩＶ−融合蛋白質を示す。 ［００１８］免疫原ＨＩＶ−決定基をコードするＤＮＡ
配列は前記のように、プロウィルスＤＮＡから直接又は
化学的遺伝子合成により得られる。第１図は本発明によ
り特に有利なプロウィルスＤＮＡ−配列が由来するＨＩ
Ｖ１の領域もしくは相応するＨＩＶ２の領域を示す。 発現の更なる改良のためには相応するＨＩＶ−ポリペプ
チドをコードする合成りＮＡ−配列を宿主有機体（例え
ば大腸菌）の専門家に公知のコドン利用を考慮して製造
することができる。更に、合成遺伝子の設計の際には二
次構造の形成を最少とし、有利に好適な単独の制限切断
位を導入することもできるように考慮する。合成りＮＡ
配列Ｄ′の製造のために使用したデスオキシオリゴヌク
レオチド及びクローン化法は第２図、配列記録１７〜２
６及び例２．２中に詳細に記載されている。 ［００１９］更に、本発明の課題は１つ又は複数の本発
明による組換ＤＮＡ−配列のコピー少なくとも１つを有
する組換ベクターである。このベクターは宿主細胞のゲ
ノム中に統合されることができ（例えば、大腸菌中のバ
クテリオファージ人のベクター）、有利にはこのベクタ
ーは染色体外に、特に有利には高いコピー数で存在する
。この組換ベクターは有利には微生物、特に大腸菌中で
の遺伝子発現のために好適であり、このために必要な遺
伝技術要素（例えば複製のオリジン、選択マーカープロ
モーター、ターミネータ−等）を有する。 ［００２０１特に有利であるのは、その中で本発明によ
る融合蛋白質をコードするＤＮＡ−配列が調節可能なプ
ロモーターの制御下にある（例えば大腸菌中の遺伝子発
現のためのｔｒｐ／１ａｃ−融合プロモーター）ベクタ
ーである。更に、組換ベクターが融合遺伝子の３′−末
端に転写ターミネータ−を１個又は複数個有する場合が
有利である（例えば大腸菌ｒｒｎＢリポゾームＲＮＡオ
ペロンからのターミネータ−Ｔ１及びＴ２、Ｂｒｏｓ　
ｉｕＳ等著、Ｊ、　　Ｍｏ１．　　Ｂｉｏｌ、、第１４
８巻、１９８１年、第１０７〜１２７頁）。大腸菌中の
特に好適な発現ベクターの例は調節可能なｔｒｃ−プロ
モーター及びターミネータ−Ｔ１及びＴ２を有するｐＫ
Ｋ２３３２　（ＬＫＢ−Ｐｈａｒｍａｃ　ｉ　ａ）であ
る。 ［００２１１本発明のもう１つの課題は本発明による組
換ベクター又は本発明による組換ＤＮＡ−分子で形質転
換した微生物である。有利には、この微生物は大腸菌細
胞である。 ［００２２１大腸菌株としては、例えば菌株ＲＭ８２１
１ａｃ　　（ＥＤ８６５４のメチオニン及びラクトース
の復帰突然変異体、Ｍｕｒｒａｙ等著、Ｍｏ１．　　Ｇ
ｅｎ、Ｇｅｎｅｔ、　、第１５０巻、１９７７年、第５
３〜６１頁）、ＨＢＩＯＩ　（Ｍａｎｉａｔｉｓ等著、
１９８２年、Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　　Ｃｌｏｎｉｎｇ：
Ａ　　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　　Ｍａｎｕａｌ、　　Ｃ
ｏｌｄＳｐｒｉｎｇ　　ＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏ
ｒｙ　　Ｐｒｅｓｓ社、Ｃｏ１ｄ　　Ｓｐｒｉｎｇ　　
Ｈａｒｂｏｒ、ニューヨーク）、及びに１６５　（Ｎｅ
ｉｄｈａｒｄｔ及びＶａｎＢｏｇｅ　ｌｅｎ著、Ｂｉｏ
ｃｈｅｍ、　　ＢｉｏｐｈｙＳ、　　Ｒｅｓ、　　Ｃｏ
ｍｍｕｎ、、第１００巻、１９８１年、第８８４〜９０
０頁）、並びに他の菌株が好適である。 ［００２３１本発明の有利な実施形においては形質転換
された大腸菌株を更なる適合性プラスミドで共形質転換
する。ラクトースにより調節可能なプロモーター（例え
ば、１ａｃ−プロモーター、ｔｒｐ／１ａｃ−融合プロ
モーター）の使用の際に、適合性プラスミドは例えば１
ａＣＩ−（Ｆａｂａｕｇｈ著、Ｎａｔｕｒｅ第２７４巻
、１９７８年、第７６５〜７６９頁）又は１ａｃＩリプ
レツサー遺伝子（Ｃａｌｏｓ、Ｎａｔｕｒｅ第２７４巻
、１９７８年、第７６２〜７６５頁）を含有する。例え
ばプラスミドｐＦＤＸ５００は１ａｃＩ　　−リプレッ
サーを含有するｐＡＣＹＣ１７７−誘導体（ｃｈａｎｇ
及びＣｏｈｅｎ著、Ｊ、ＢａＣｔｅｒｉＯｌ、第１３４
巻、１９７８年、第１１４１〜１１５６頁）又は大腸菌
ＪＭ１０９からのＦ′−エピワーム（Ｙａｎｉｓｃｈ−
Ｐｅｒｒｏｎ等著、Ｇｅｎｅ第３３巻、１９８５年、第
１０３〜１０９頁）を含有する。 ［００２４］そのようなリプレッサープラスミドの付加
的な存在はＨＩＶ−融合蛋白質の発現を改良することが
できる。しかしながら、付加的に大腸菌中にまれなｔＲ
ＮＡ−Ａｒｇ　（アンチコドン：ＡＧＡ、ＡＧＧ）に関
する遺伝子を含有する共形質転換リプレッサープラスミ
ド、例えばｄｎａＹ−１ａｃＩ　　−プラスミドｐＵＢ
ｓ５００（ヨーロッパ公開特許第０３６８３４２号明細
書）を使用することもできる。ＨＩＶ−融合蛋白質の発
現がｄｎａＹ−１ａｃＩ　　−プラスミドの存在により
更に改良されることができるということが意外にも見い
出された。 ［００２５１更なる本発明の課題はＨＩＶ−融合蛋白質
の取得法であり、この方法においては好適な微生物、有
利に大腸菌細胞を、本発明によるＨＩＶ−融合蛋白質を
コードする遺伝子がその上に存在する本発明による組換
ＤＮＡ−分子又はベクターで形質転換し、かつこの融合
蛋白質を通常の生物学的方法により細胞又は培地から獲
得する。 ［００２６］　この際、分離手段、例えば帯電アミノ酸
のクラスターを有する本発明による融合蛋白質はイオン
交換クロマトグラフィーにより他の細胞性成分から容易
に分離される。 ［００２７］本発明によるＨＩＶ−融合蛋白質を取得す
るための有利な方法においては、増殖期の間融合蛋白質
をコードする遺伝子の発現を、例えばリプレッサーの存
在により抑圧する。次いで、遺伝子発現は誘発において
、例えば誘発剤の添加によりはじめて開始する。 ［００２８］更に、組換融合蛋白質をコードする遺伝子
及びリプレッサー遺伝子が同時に（例えば１つのプラス
ミド上で、又は２つの適合性プラスミド上で）この中に
存在する微生物を使用する方法が有利である。こうして
、リプレッサープラスミド、例えば１ａｃＩ　　−リプ
レッサープラスミドｐＦＤＸ５００で共形質転換された
細胞からＨＩＶ−融合蛋白質を取得することができる。 このようにして、遺伝子発現のより良好な抑圧を増殖期
の間達成することができる。 ［００２９］微生物が本発明による組換遺伝子、リプレ
ッサー遺伝子及び付加的に大腸菌ｄｎａＹ−遺伝子（ｔ
ＲＮＡ−Ａｒｇ）を含有する方法も有利である。このた
めには、例えばｐＦＤＸ５００のかわりにｄｎａＹ−１
ａｃＩ　　−プラスミドｐＵＢｓ５００で共形質転換さ
れた細胞を使用することができる。形質転換した微生物
中のｄｎａＹ−遺伝子の存在は本発明による融合蛋白質
の発現の更なる上昇に導びくことができる。
【００３０】更に、本発明の課題は抗−ＨＩＶ−抗体の
測定用試薬である。 ［００３１１この試薬は、 （ａ）　　ＨＩＶｌ又は／及びＨＩＶ２の抗原又は／及
び免疫原決定基を少なくとも１つ有し、かつ固相に結合
しているか又は恒温保持工程の間好適な特異的固相に容
易に軽く結合するように変性されている融合蛋白質１種
又は複数種、 （ｂ）　　融合蛋白質の抗原決定基への抗−ＨＩＶ−抗
体の生理学的結合を容認し、かつ同時に非特異的結合を
抑圧する恒温保持緩衝液、 （Ｃ）　　抗原−結合抗体を認識するための検出試薬及
び（ｄ）　　結合した特異的抗体の定量用システム、を
含有する。 ［００３２］　この抗原は、例えば抗原−ハブテン−複
合体として存在していてよく、一方ハブテンと反応する
分子が固相上に固定されている。有利に、本発明による
抗原がビオチンと複合体を形成し、これによりストレプ
トアビジンで被覆された反応容器に高い親和性で結合す
る。しかしながら、抗原を他の通常公知の方法により固
体マトリックスに直接結合することも同様に可能である
（比較例６）。恒温保持緩衝剤としてはすべての免疫化
学反応に通常使用される緩衝液が好適である。１０％小
牛血清及び０．０５％ツウィーン２０を含有するＰＢＳ
（０，１５ｍｏ　ｌ／ｌ　　Ｎａ−ホスフェート、０．
９％ＮａＣＬ　ｐＨ７，２）を使用するのが有利である
。 ［００３３］抗原−結合抗体を認識するための検出試薬
としては酵素（例えばペルオキシダーゼ）と人−ＩｇＧ
のＦｃγ一部に対するポリクローナル抗体とからなる複
合体又は酵素結合ＨＩＶ−抗原が好適である。 ［００３４］抗−Ｆｃγ−抗体もしくはＨＩＶ−抗原結
合酵素で分解され、その反応が測定可能である基質の添
加により、結合した特異的抗−ＨＩＶ−抗体を定量的に
測定することができる。ペルオキシダーゼを酵素として
使用する場合、基質としては例えば登録商標ＡＢＴＳ（
２，２’−アジノージ−［３−エチル−ベンズチアゾリ
ン−スルホン酸（６）］−ジアンモニウム塩）が好適で
ある。 ［００３５］次の実施例は本発明を配列記録１〜２６及
び図１及び図２との関連において明らかにする（この際
ＡＳニアミノ酸、Ｂ：塩基を表わす）。 ［００３６］　ＨＩＶＩのｇａｇ−域からの決定基（Ａ
Ｓ８〜ＡＳ３２４、Ｂ２０〜Ｂ９７２）を有するＨＩＶ
融合蛋白質（ＨＩＶｌｇａｇ−Ｂ１７−Ｂ２４−ｐｉ５
）のアミノ酸−配列（Ｉ）；ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：
１及びＤＮＡ−配列（Ａ）；ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：
９；ＨＩＶ１のｐｏｌ−域からの決定基（ＡＳ８〜２４
１、Ｂ２１〜７２５）を有するＨＩＶ−融合蛋白質（Ｈ
Ｉ　Ｖ　１ｐｏｌ−Ｂ３２）のアミノ酸−配列（ＩＩ）
；５ＥＱＩＤ　　ＮＯ：２及びＤＮＡ−配列（Ｂ）；Ｓ
ＥＱ　　ＩＤＮ０：　１０　；ＨＩＶＩのｅｎｖ−域か
らの決定基（ＡＳ２７〜１２７、Ｂ７９〜３８３）を有
するＨＩＶ−融合蛋白質（ＨＩＶｌｅｎｖ−ｇｐ４１）
のアミノ酸−配列（ＩＩＩ）；ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ
：３及びＤＮＡ−配列（Ｃ）；ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ
：１１；ＨＩＶ２のｅｎＶ−域からの決定基（ＡＳ７〜
１２１、Ｂ１９〜３６３）を有するＨＩＶ−融合蛋白質
（ＨＩＶ２ｅｎｖ−ｇｐ３２）のアミノ酸−配列（ＩＶ
）；ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：４及びＤＮＡ−配列（Ｄ
）；ＳＥＱ　　ＩＤ　　Ｎｏ：１２；ＨＩＶＩのｅｎｖ
−域及びｇａｇ−域からの決定基（ＡＳ２７〜４４５、
Ｂ７９〜１３３５）を有するＨＩＶ−融合蛋白質（ＨＩ
ＶＩ　（ｅｎｖ−ｇｐ４１）（ｇａｇ−ｐ　１７−Ｂ２
４−ｐ　１５）　）のアミノ酸−配列（Ｖ）；ＳＥＱ　
　ＩＤＮ０：５及びＤＮＡ−配列（Ｅ）；ＳＥＱ　　Ｉ
Ｄ　　ＮＯ：１３；ＨＩＶ２のｅｎｖ域及びＨＩＶＩの
ｐｏｌ−域からの決定基（ＡＳ７〜３５９、Ｂ１９〜１
０７９）を有するＨＩＶ−融合蛋白質（ＨＩＶ２　（ｅ
ｎｖ−ｇｐ３２）　−ＨＩＶＩ　（ｐｏｌｐ３２））の
アミノ酸−配列（ＶＩ）；ＳＥＱ　　ＩＤＮ０：６及び
ＤＮＡ−配列（Ｆ）；ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：１４　
；ＨＩＶ２のｅｎｖ−域及びＨＩＶＩのｐｏｌ、ｅｎｖ
−及びｇａｇ−域からの決定基（ＡＳ６〜７８６、Ｂ１
９〜２３５８）を有するＨＩＶ−融合蛋白質（ＨＩＶ２
　（ｅｎｖ−ｇｐ３２）−ＨＩＶＩ　（ｐｏｌ−ｐ３２
）−（ｅｎｖ−ｇｐ４１）−（ｇａｇ−ｐ１７−ｐ２４
−ｐ１５））のアミノ酸−配列（ＶＩＩ）；ＳＥＱ　　
ＩＤ　　ＮＯニア及びＤＮＡ−配列（Ｇ）；５ＥＱＩＤ
　　ＮＯ：１５；ＨＩＶ２のｅｎｖ−域、ＨＩＶＩのｐ
ｏｌ−１ｅｎｖ−及びｇａｇ−域からの決定基（ＡＳ７
〜７５６、Ｂ１９〜２２６８）及びＣ末端ポリ（Ｌｙｓ
、Ａｒｇ）−配列（ＡＳ７５８〜末端、Ｂ２２７２〜末
端）を有するＨＩＶ−融合蛋白質（ＨＩＶ２　（ｅｎｖ
−ｇｐ３２）−ＨＩＶＩ　（ｐｏｌ−ｐ３２）−（ｅｎ
ｖ−ｇｐ４１）−（ｇａｇ−ｐ１７−ｐ２４−ｐ１５）
−ポリ（Ｌｙ　ｓ、　Ａｒ　ｇ）　）のアミノ酸−配列
（ＶＩＩＩ）；ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：８及びＤＮＡ
−配列（Ｈ）；ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：１６合成ＨＩ
Ｖ２　（ｅｎｖ−ｇｐ３２）　−ＤＮＡ−配列（Ｄ′）
の合成のために使用されたデスオキシオリゴヌクレオチ
ドのヌクレオチド配列、ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：１７
〜２６゜［００３７］　ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：１　
　（アミノ酸配列■）、配列の種類ニアミノ酸配列、配
列長さニアミノ酸３３７、類型：１本鎖 ［００３８］
【化１１】 Ｍａｔ　’ｒｙｒ　′ｌ１ｙｒ　Ｌａｕ　ａｌｕ　Ｐｈ
ａ　Ｐｒｏ　Ａｇｐ　Ｌｙｓ　Ｇａｙ　触ｎ　ｓｓｒ　
ｓａｒ　Ｇｌｎ　Ｖ２Ｌｌ　ｓｅｒ　１６Ｇｌｎ　Ａｇ
ｎ　ＴＹｒ　Ｐｌ”６　　ｘｌｅ　’Ｖ＆ｌ　　Ｇｌｌ
’ｌ　ＡＳｎ　　Ｅａｕ　Ｇｌｎ　Ｇｌｙ　Ｇｘｎ　Ｍ
ａｔ　Ｖａｌ　　ＭｉＧ　　Ｇｉｎ　　：１２λｌａ　
Ｉｌｅ　Ｓｅｒ　Ｐｒｏ　Ａｒｇ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　Ａ
ｓｎ　Ａｌａ　Ｔｒｐ　’Ｖａｎ　Ｌｙｓ　Ｖａｎ工１
ｅ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　４８ＬＹＩＢ　Ａｌｌ　ｐｈ＠ｓ
ｅｒ　ｐｒｏ　Ｇｌｕ　ＶａｌＡｌａ　ｐｒｏ　ｎｅｔ
　ｐｈａ　ＳｅｒＡｌａ　Ｘａｕ　Ｓ＠’に’　Ｇｌｕ
　６４ＧＩＹ　Ａｌａ　Ｔｏｒ　Ｐｒｏ　Ｇｌｎ　Ａ、
ｐ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　’ｒｈｒ　Ｍｅｔ　ｌｕｕ　Ａ！
ｉｎ　’ｍｒ　Ｖａｌ　ＧＡＹ　ｃｌｙ　ａ。 ）ｉｉｓ　Ｇｉｎ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ｍｅｔ　ａｌ、ｎ
　Ｍｅｔ　Ｉｎａｕ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ｔｂｒ　Ｉｌａ
　Ａｓｎ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ａｌａ　９６λｌａ　ｃｌ
ｕ　’ｒｒｐ　Ａｇｐ　Ａｒｇ　Ｖａｌ　Ｈｌｓ　Ｐｒ
　ｖａＩＨｌｓ　Ａｌａ　Ｇ１７　Ｐｒｏ　Ｘ１ｅ　Ｊ
ｄａ　Ｐｒｏ　１１２Ｇｌｙ　Ｇｉｎ　Ｍｅｔ　Ａｒｇ
　Ｇｌｕ　Ｐｒｏ　ｋｑ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ａｓｐ　Ｉ
ｌａ　Ａｌａ　Ｇａｙ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　ｓｅｒ　１２
８Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　Ｇｌｎ　Ｇｌｕ　Ｇｌｎ工Ｉ＠Ｇｌ
ｙ　’Ｉ”ｒｐ　Ｍｅｔ　’ｒｈｒ　ＡＳｎ　Ａ！ｉｎ
　ｐｒｏ　ｐｒｏ工ｍｅ　Ｐｒｏ　１４４’Ｖａ工Ｇｌ
ｙ　Ｇｌｕ　Ｉｌｅ　Ｔｙｒ　Ｌｙｓ　Ａｘｑ　Ｔｒｐ
　ｌｉｅｉｉｓ　Ｌｅｕ　ＧＬｙ　Ｌｓｕ　Ａｓｎ　Ｌ
ｙｓ　Ｉｌａ　１６０ＶａＩＡｒｇ　Ｍｅｔ　町ｒ　Ｅ
＠ｒ　Ｐｒｏ　Ｖａｌ　Ｓａｒ　Ｉｌａ　Ｌａｕ　Ａｓ
ｐ工１ｅ　Ａｒｇ　Ｇｉｎ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　１７６Ｌ
ｙｇ　Ｇｌｕ　Ｐｒｏ　＄’ｈ＠　Ａｒｇ　Ａｓｐ　’
ｒｙｒ　Ｖａｌ　Ｍｐ　Ａｒｇ　Ｐｈａ　５ｒ　Ｌ７ｇ
　Ｔｈｒ　ｆ＋＋ａｕ　社ｇ　１９２Ａｌａ　Ｇｌｕ　
ＧｉｎにＬａ　Ｓｅｒ　Ｇｉｎ　Ｇｌｕ　’Ｖａｌ　Ｉ
＋ｙｇＡｓｎ　Ｔｒｐ　Ｍａｔ　’ｌ”ｈｒ　Ｇｌｕ　
Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　２０８Ｉａ＠ｌｕ　’Ｉ／ａｌ　Ｇｉ
ｎ　Ａｇｎ　ＡＬａ　Ａｓｎ　　Ｐｒｏ　Ａ＠ｐ　Ｃｙ
ｓ　　Ｌｙｅ　Ｔｈｒ　工１＠工ａｕ　Ｌｙｓ　入１ａ
　Ｌｅｕ　２２４ＧＩＹ　Ｐｒｏ　Ａ１１ｌ　Ａｌａ　
’Ｉ’ｈｒ　Ｌａｕ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　ａａｔ　ｍａｔ
　Ｔｈ！−人１ａ　Ｃ’ｙｓ　Ｇｉｎ　Ｇａｙ　Ｖａｌ
　２４０Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｕｙ　Ｈｌｓ　ｔ
、ｙｓ　Ａｌａ　Ａｒｇ　Ｖａｌ　Ｉ４ｕ　Ａｌａ　Ｇ
ｌｕ　Ａｌａ　Ｍｅｔ　Ｓａｒ　Ｇｉｎ　２５６Ｖａｌ
　　’ｒｈｒ　Ｊｋｇｎ　　８ｃＴ　Ａｌａ　　Ｔｈｒ
　　工ｌ＠　Ｍｅｔ　Ｍａｔ　　Ｇｉｎ　Ａｒｇ　Ｇｌ
ｙ　八ｓｎ　　ｆ’ｈｅ　λｑ　Ａｓｎ　　２７２Ｇｉ
ｎ　Ｌｙｓ　！、ｙｇ　Ｔｈｒ　Ｖａｎ　Ｌｙｓ　Ｃｙ
ｇ　Ｐｈｅ　Ａｓｎ　Ｃｙｓ　Ｇｌｙ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ
　Ｇｌｙ　Ｈｉｓ工ｌａ　２８８Ａｌａ　Ｌｙｓ　Ａｓ
ｎ　ｃｙｓ　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　ｋｒｑ　ｔ、ｙ
ｓ　Ｌｙｓ　ＧＩＹ　ＣＹｓ　ＴＴＩ　Ｌｙｇ　ａｙｓ
　ｃｌｙ　３０４Ｌｙ＠Ｃ１ｕ　Ｇ：Ｌｙ　Ｈｉｓ　Ｇ
ｉｎ　Ｍｅｔ　ＬＹ！Ｉ　Ａｓｐ　ｅｙｇ　Ｔｈｒ　Ｇ
ｌｕ　ｈｒｑ　Ｇｕｎ　Ａｌａ　ＡｓｎＰｈ１３２０Ｌ
ａｕ　ｃｌｙ　ＬＹ９工Ｒｅ　ｓ＠ｒ　Ｌａｕ　Ａｌａ
　ｖａＩＩａｕ　Ａｈａ　Ａｓｐ　Ｇ：Ｌｕ　ＡＱ　ｉ
ｒｇ　ｐｈａ　ｓａｒ　３３６ｌａ ［００３９］　ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：２　　（アミ
ノ酸配列■■）、配列の種類ニアミノ酸配列、配列長さ
ニアミノ酸２４７、類型：１本鎖
【００４０】
【化１２】 Ｍｅｔ　智ｒ　’ｊｙｒ　Ｌａｕ　Ｇｌｕ　Ｐｈ＠Ａｒ
ｇ　Ｃｙｓ　Ａｓｐ　Ｌｙｓ　Ｃｙｓ　Ｇｉｎ　Ｌｅｕ
　Ｌｙｓ　Ｇｌｙ　Ｃ１ｕ　１６Ａｌａ　Ｍｅｔ　１ｌ
ｉｓ　Ｇｌｙ　Ｇｉｎ　Ｖａｌ　ｈｓｐ　Ｃｙｓ　Ｓｓ
ｒ　Ｐｒｏ　ＧＩＹＩｉｓ　Ｔｒｐ　Ｇｉｎ　Ｌｔｕ　
触ｐ　３２ｃｙｓ　　Ｔｈｒ　　Ｈｌｓ　　Ｅａｕ　Ｇ
ｌｕ　　Ｇｌｙ　　Ｌｙｓ　　工Ｉｓ　　Ｉｌａ　　Ｌ
ａｕ　’Ｖａｎ　　ＡＬａ　’ｔ／ａｌ　　Ｈｌｇ　　
’Ｖｉａｌ　　Ａ１１ｌ　　４８Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　’Ｑ
ｒ工Ｘｓ　Ｇｌｕ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　ＩＩｓ　
１Ｐｒｏ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　’Ｉ’ｈｒ　Ｇｌｙ　ＧＡ
ＹＩ　Ｇｌｕ　ｅｉ４Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ｔｙｒ　Ｐｈ＠
Ｉｌａ　Ｌａｕ　Ｌｙｅ　Ｌｅｕ　Ａｌａ　Ｃ１ｙ　Ａ
ｒｇ　Ｔｒｐ　Ｐｌ”ｏ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ｖａｎ　８
０１１ｅ　Ｈｌｓ　’Ｉｈｒ　Ａｓｐ　Ａｓｎ　Ｇｕｙ
　Ｂａｒ　Ｍｎ　Ｐｈａ　’ａｒ　Ｓａｒ　笥ｒ〒ｈｒ
　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ａｌａ　９６Ｊｕａ　ｃｙｓ　’Ｉ
ｒｐ　Ｔｒｐ　ｊｕａ　ｅｌｙ　ＩＩｓ　Ｌｙｇ　Ｇｌ
ｎ　Ｇｌｕ　Ｐｈｅ　Ｇｌｙ　ＩＩｓ　Ｐｒｏ　Ｔｙｒ
　Ａｓｎ　１１２Ｐｒｏ　Ｇｌｎ　Ｓｅｒ　Ｇｕｎ　Ｇ
ｌｙ　Ｖａｌ　Ｖａｌ　Ｇｌｕ　Ｓｅｌ：　Ｍｅｔ　Ａ
ｓｎ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ｉａｕ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　１２
８１１ｅ　ＩＩｓ　Ｇｌｙ　Ｇｉｎ　Ｖａｎ　Ａｒｇ　
Ｊｋｇｐ　Ｇｉｎ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　）Ｉｉｓ　Ｌｓｕ
　Ｌｙｇ　？ｈｒＡｒｇ　Ｖａｌ　　１４４Ｇｌｎ　Ｍ
ａｔ　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｐｈ＠工Ｉｓ　Ｈｉｓ　Ａａｎ
　Ｐｈｅ　Ｌｙｓ　Ａｒｑ　Ｌｙｓ　Ｇｌｙ　Ｇａｙ　
Ｉｌａ　Ｇｌｙ　１６０Ｇｌｙ　’ｒｙｒ　Ｂａｒ入１
ａ　ＧＩＹ　Ｇｌｕ　Ａｒｇ　ＩＩｓ　ｖａｌ　ｊｋｓ
ｐ　Ｉｌｅ　Ｘｌａ　Ａｌａ　’ｚｈｒ八５ｐへｍｅ　
１７６Ｇｉｎ　Ｔｈｒ　Ｌ７１！ｌ　ＧｌｕｒＡｕ　Ｇ
ＡＹＩ　Ｌｙｇ　Ｇｌｎ　　工Ｒｅ　Ｉｌｅ　Ｌｙｓ　
：［ｌａ　ＧＡＹＩ　Ａｓｎ　Ｐｈａ　Ａｒｇ　１９２
Ｖａｌ　Ｔｙｒ　Ｔｙｒ　Ａｒｇ　ＡＧＰ　８ｅｒ　Ａ
ｒｇ　Ａｓｐ　Ｐｒｏ　Ｉａｕ　’Ｉ’ｒｐ　Ｌｙｓ　
Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ａｌａ　Ｌｙｇ　２０８Ｌ６ｕ　Ｌｅ
ｕ　Ｔｌ’ｐ　Ｌ’ｆＧ　ＧＩＹ　ｃｌｕ　ＩＪｙ　Ａ
１２Ｌ　ｖａｌｖａｌｌｌａ　Ｇｉｎ　Ａｓｐλｓｎ　
ｓｓｒ　Ｇｌｕ　２２４１１＠Ｌｙｓ　Ｖａｎ　ｖａｌ
　Ｐｒｏ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　Ａｌａ　Ｌｙｅ　
Ｉｌａ　：Ｃ１ａ　Ａｒｇ　Ａｓｐ　ｑｒ　Ｇｌｙ　２
４０ＬＹ！ｌ　Ｈｉｓ　（：ｌｙ　ｃｙｓＰｈｅ　Ｇｌ
ｙ　Ｇｌｙ［００４１１ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：３　
　（アミノ酸配列■■■）、配列の種類ニアミノ酸配列
、配列長さニアミノ酸１３９、類型：１本鎖 ［００４２］
【化１３】 Ｍａｔ　’Ｐｙｒ　Ｔ７？　ＴＡｕ　Ｇｌｕ　Ｐｈａ　
Ｇｉｎ　−ｎ　９＊ｒλ１ａ　ｉｌｙ　Ｍｌ）ｒ　ｍｉ
ｓ　Ｔｙｒ　Ｇｉｎ　１６ｒｕ　Ｖａｌ　’Ｆｒｐ　Ｃ
ｙｓ　Ａｒｇ　１Ｓｌｙ　１；ａｒ　ｌ’ｌａｒ　Ａｒ
ｇ　ＷａｌＧＩｎ　Ｔｈｌ”　Ａｒｇ　Ｇｌｎ　Ｌａｕ
　Ｌｅｕ　３２ｓｅｒ　に１７１１ｅ’Ｖａｌ　Ｇｌｎ
　Ｇｉｎ　Ｇｌｎ　Ａ５ｒｌ　Ａｓ！’Ｉ　Ｌｅｕ　’
Ｌｅｕ　ｈｒｑ　Ａｌａ工ｌｅ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　４８
Ｇｉｎ　Ｇｉｎ　Ｈｌｓ　Ｌａｕ　Ｌｅｕ　Ｇｉｎ　Ｌ
ａｕ　’ｍｒ　Ｖａｌ　Ｔｒｐ　ＧｌｙＬｙｓ　Ｌｙｓ
　Ｇｉｎ　Ｌｅｕ　Ｇｌｎ　６４Ａｌａ　　入ｒｇ　　
Ｖａｌ　　ＴＡｕ　　Ａｌａ　　Ｖａｌ　Ｇｌｕ　　ｊ
ｌｚｇ　　Ｔｙｒ　　Ｌｅａ　　Ｇｌｎ　　入ｓｐ　　
Ｇｌｎ　　Ａｒｇ　Ｔａｕ　　Ｌａｕ　　８０Ｇｌｙ　
Ｘｉ＠τｒｐＧＩＹ　Ｃｙｓ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｌｙｓ
　ＴＪ＆Ｍ　：［ｌｅ　Ｃｆａ　’ｒｈｒ　布ｒ　Ｔｈ
ｒ　Ｖａｎ　Ｐｒｏ　９６Ｔｒｐ　Ａｓｎ　Ｔｈｒ　　
Ｓａｒ　Ｔｒｐ　　Ｓａｒ　Ａｓｎ　　Ｌｙｓｓ　　Ｓ
ｓｒ　　Ｉａｕ　Ａｓｐ　’［’ｈｒ　Ｉｌａ　Ｔｒｐ
　Ｅ土ｍ　　Ａｇｎ　　１１２Ｍａｔ　’ｒｈｒ　Ｔｌ
Ｍａｔ　Ｇｌｕ　’ｊ’ｒｐ　Ｇｌｕ　鯉ｇ　Ｇｌｕ　
１１ａ　Ｍｐ　Ａｇｎ　ＴＹＩ”　’ｒｈｒ　ｓｅｗ　
Ｌｅｕ　１２８＾１ａ　Ｖａ１ｔ＠ｕ　Ａｌａ　Ａｌａ
Ｐ　Ｇｌｕ　Ａｑ　Ａｒｇ　Ｐｈｅｓａｒ入ＩＩ＆［０
０４３］　ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：４　（アミノ酸配
列■■）、配列の種類ニアミノ酸配列、配列長さニアミ
ノ酸１３９、銀型：１本鎖 ［００４４］
【化１４】 Ｍｅｔ　　’ｒｙｒ　　’Ｉｙｒ　　Ｌａｕ　　Ｇｌｕ
　　Ｉ’ｈａ　　Ｇｉｎ　　Ｇｉｎ　　ｃａｎ　　Ｇｌ
ｎ　　Ｇｉｎ　　Ｌａｕ　　Ｉａｕ　　Ａｓｐ　　ｖａ
ユ　’Ｖａｌ　　１６Ｌｙｓ　Ａｒｇ　Ｇｉｎ　Ｇｉｎ
　Ｇｌｕ　Ｉａｕ　ｔａｕ　Ａｒｇ　ｔａｕ　Ｔｈｒ　
Ｖａｌ　Ｔｒｐ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｌｙｓ　ｘｓｎ　３
２ｙｎ　Ｇｉｎ　Ａｌａ　Ａｒｇ　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ａ
ｌａ＝ｌｅ　Ｇｌｕ　Ｌｙｓ　Ｔｙｒ　Ｌａｕ　Ｇｌｎ
　Ａｓｐ　Ｇ１ｍλ１ａ４８Ａｒｑ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　
Ｓｅｒ　’［’ｒｐ　Ｇｌｙ　Ｃｙｓ　Ａｌａ　Ｐｈａ
　Ａｒｇ　Ｇｉｎ　Ｖａｌ　Ｃｙｓ　Ｒｉｇ　Ｔｈｒ　
’Ｌ”ｈｒ　６４ＶａＩＰｒｏ　Ｔｒｐ　Ｖａｌ　Ａｇ
ｎ　ｌａｐ　５ａｒ　Ｉａｕ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ａｓｐ
　Ｔｒｐ　Ａｓｐ　ｊｋｇｎ　Ｍａｔ　’ｒｈｒ　ｓ。 Ｔｒｐ　Ｇｉｎ　Ｇ工Ｕテｒｐ　Ｇｌｕ　Ｌｙｓ　Ｇｉ
ｎ　’Ｖａｎ　Ａｒｇ　′］１ＩｙｒＩａｕ　Ｇｌｎ　
Ａｌａ　Ａｓｎ　Ｉｌｅ　ｅａｒ　９６Ｌｙｓ　ｓｅｒ
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Ｇｌｎ　Ｇｉｎ　Ｇｌｕ　ＬＡＧ　Ａｓｎ　Ｍａｔ　Ｔ
ｙｒ　Ｇｌｕ　１１２Ｌｅｕ　Ｇｌｎ　Ｌ７ＲＬｅｕ　
Ａｇｎ　ｓｅｒ　’ｒイＡｓｐ　Ｘｉｓ　紅ｇ　Ｓｓｒ
　Ｌｙｓ　Ｌｌ！ｕ　Ｇｌｙ　ｃｙｇ　Ｐｈａ　１２８
ＧＩＹ　ＧＩＹ ［００４５］　ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：５　　（アミ
ノ酸配列■）、配列の種類ニアミノ酸配列、配列長さニ
アミノ酸４５８、銀型：１本鎖 ［００４６］
【化１５】 Ｍｅｔ　Ｔｙｒ　１ｒｙｒ　Ｉａｅｕ　Ｇｌｕ　ｔｈｅ
　Ｇｉｎ　Ｉａｕ　Ｓａｒ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　
町ｒ　Ｈｉｓ　’ｒｙｒ　Ｇｌｎ　１６Ｌ＠ｕ　Ｖａｌ
　’Ｉ’ｒｐ　ＣＹｓ　Ａｒｇ　Ｇａｙ　　Ｓａｒ　Ｓ
ａｒ　Ａｒｇ　’Ｖａｌ　　Ｇｌｎ　Ｔｈｒ　ｈｒｑ　
Ｇｌｎ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　３２ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｉｌｅ
　’Ｖａｌ　Ｇｉｎ　Ｇｉｎ　Ｃ１！’Ｉ　ＡＳｎ　Ａ
ｓｒ＞　Ｉ＋ｅｕ　Ｌｅｕ　Ａ内Ｊｋｌａ工１ａ　Ｇｌ
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ｅｕ　　Ｌａｕ　　Ｇｉｎ　　Ｉａｕ　　Ｔｈｒ　　Ｖ
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ｉｎ　　Ｉａｕ　　Ｇｌｎ　　６４Ａｌａ　Ａｒｇ　Ｖ
ａｌ　Ｌｅｕ　Ａｌａ　Ｖａｌ　　Ｇｌｕ　Ａｒｇ　Ｔ
ｙｒ　Ｌｅｕ　Ｇｌｎ　Ａｇｐ　ｃｌｎ　八ｒｇ　Ｌｅ
ｕ　Ｌｅｕ　８０Ｇｕｙ　Ｉｌｅ　Ｔｒｐ　Ｇｌｙ　Ｃ
ｙｓ　Ｓｅｒ　Ｇｕｙ　Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　：Ｃ１ｅ　Ｃ
ｙｓ　Ｔｈｒ　’＆ｒ　’Ｉ’ｈｒ　Ｖａｌ　Ｐｒｏ　
９６Ｔｒｐ　Ａｓｎ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｔｒｐ　ＦＥ＠
ｒ　Ａｓｎ　Ｌｙｓ　Ｓｉｒ　Ｌｅｕ　Ａｓｐ　Ｔｈｒ
Ａｒｇ　Ｔｒｐ　１ｌｉｌｉ　Ａｓｎ　１１２Ｍ＠ｔ　
’Ｃ’ｈｒ　Ｔｒｐ　Ｍａｔ　Ｇｌｕ　Ｔｒｐ　Ｇｌｕ
　Ａｒｇ　Ｇｌｕ　ＩＩｓ　Ａｓ、ｐλｇｎ　Ｔｙｒ　
’Ｔｈｒ　Ｓａｒ　Ｓａｒ　１２８１Ａｓｐ　Ｌｙｓ　
Ｇｌｙ　Ａｓｎ　Ｓａｒ　Ｓｅｒ　Ｇｌｎ　Ｖａｌ　Ｓ
ａｒ　Ｇｌｎ　Ａｓｎ　Ｔｙｒ　Ｐｒｏ工ｉｓ　Ｖａｌ
　Ｇｌｎ　１４４λｓｎ　Ｌａｕ　Ｇｕｎ　Ｇｌｙ　Ｇ
ｕｎ　Ｍａｔ　Ｖａｌ　Ｈｉｓ　Ｇｉｎ　Ａｌａ工１ａ
　Ｓｓｒ　１ｌｒＯＡｌ”ｅｌ　Ｔｈ３”　シｕ　１６
０λｓｎ　Ａｌａ　Ｔｒｐ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ｖａｌ　
Ｉｌｅ　Ｇｌｕ　ｃｌｕ　Ｉ＋ｙｓに、ａ　Ｐｈｓ　Ｓ
ｓｒ　Ｐｒｏ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　１７６エ１ａ　　Ｐｒ
ｏ　　Ｍｅｔ　　Ｐｈａ　　Ｓｅｒ　　Ａｌａ　　Ｌｅ
ｕ　　Ｓａｒ　　Ｇｌｕ　　ｃｚｙ　Ａｌａ　　’Ｉ’
ｈｒ　　ｐｒｏ　　Ｇｉｎ　　Ａｓｐ　　Ｉａｕ　　１
９２Ａｌｎ　　Ｔｈｒ　　Ｍｅｔ　　Ｌｅｕ　　Ａｓｎ
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、配列の種類ニアミノ酸配列、配列長さニアミノ酸３７
６、銀型：１本鎖 ［００４８］
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５１１ 【化１８］ Ｔｈｒ　’ｒｈｒ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　Ｐｒｏ　ＴＩ　Ａ
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　Ａｌａ　Ｊｋｓｐ　Ｇｌｕ＾岡λｒｇ　Ｐｈａ　Ｓｓ
ｒ　Ａｌａ［００５２］　ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：８
　　（アミノ酸配列ＶＩ　Ｉ　Ｉ）　、配列の種類ニア
ミノ酸配列、配列長さニアミノ酸７７０、銀型：１本鎖 ［００５３］ 【化１９】 Ｍｅｔ　Ｔｙｒ　Ｔｙｒ　Ｌａｕ　Ｇｌｕ　１’ｈ＊　
ｃ：Ｌｎ　Ｇｌｎ　Ｇｌｌ’ｌ　Ｇｉｎ　Ｇｉｎ　Ｌａ
ｕ　Ｌｅｕ　Ａｓｐ　Ｖａｌ　Ｖａｌ　１６Ｌｙｓ　Ａ
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　Ｌｙｓ　　工ｌｐ　　工１ａ　　Ｇｌｙ　　Ｇｌｎ　
　ｖａｘ　　Ａｒｇ　　Ａｓｐ　　Ｇｌｎ　　Ａｌａ　
　Ｇｌｕ　　２５６Ｈｉｓ　琺ｕ　Ｌｙｇ　Ｔｈｒ　Ａ
ｌａ　Ｖａｌ　Ｇｉｎ　Ｍａｔ　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｐｈ
ｅ工１ｅ　Ｈｉｓ　Ａｇｎ　Ｐｈｅ　Ｌｙｓ　２７２ｋ
ｑ　　Ｌｙｓ　　Ｇｌｙ　　Ｇｌｙ　　Ｉｌｅ　　Ｇｌ
ｙ　　Ｇｌｙ　　Ｔｙｒ　　Ｓａｒ　　Ａｌａ　　Ｇｌ
ｙ　　Ｇｌｕ　Ａｒｇ　　工１ｅ　　Ｖａｌ　　Ａｓｐ
　　２８８工Ｒｅ　　工ｉｓ　　Ａｌａ　　Ｔｈｒ　　
Ａｓｐ　　ＩＩｓ　　Ｇｌｎ　　Ｔｈｒ　　Ｌｙｇ　　
Ｇｌｕ　　Ｌｅｕ　　Ｇｌｎ　　Ｉ、ｙｇ　　Ｇｌｎ　
　Ｉｌｅ　　工１ｅ　　３０４Ｌｙｇ　ＩＩｓ　Ｇｌｎ
　Ａｓｎ　Ｐｈａλｒｑ　Ｖａｌ　ｙ、、　７２１”　
ｋｌＡｓｐ　Ｂｅｒ　社ｑ　Ａｓｐ　ｐｒｏ　Ｌａｕ　
：１２０Ｔｒｐ　　Ｌｙｓ、Ｃ１ｙ　　Ｐｒｏ　　ＡＩ
ＪＩ　　Ｌｙｓ　　Ｌｅｕ　　Ｌｅｕ　　Ｔｒｐ　　Ｌ
Ｙｇ　ＧｌＹ　　Ｇｌｕ　　Ｇｌｙ　　Ａｌａ　　Ｖａ
ｌ　　Ｖａｎ　　）３６エユｅ　　Ｇｌ！’Ｉ　　Ａｌ
ｐ　　Ａ！ｉｎ　　Ｓｅｒ　　Ｇｌｕ　　Ｉｌａ　　Ｌ
ＹＳ　　Ｖａｌ　Ｖａｌ　　Ｐｒｏ　　Ａｒｇ　　Ａｒ
ｅＪ　　ＬＹＳ　　Ａｌａ　ＬｙＳ　　３５２工ｉｓ　
Ｉｌｅ　Ａｒｇ　Ａｓｐ　ｒｙｒ　Ｇｌｙ　Ｌｙｓ　Ｇ
ｉｎ　Ｓｅｒ　Ａｓｐ　Ａｒｇ　Ｓｓｒ　ｓｅｒ　Ａ）
：ＣＩ　Ｖａｌ　Ｇｌｎ　３６８’ｒｈｒ　ａｒｇ　Ｇ
ｌｎ　ＩＪｕ　ＬＱｕ　ＳＱｒ　ｃ１ｙ工１ｅ　ｖａｌ
　Ｇ１ｎＣ１ｎ　Ｇｌｎλａｎ　Ａｓｎ　Ｌｅｕ　細ｕ
　：（８４Ａｒｇ　　Ａｌａ　　工ｍｅ　　Ｇｌｕ　　
’ｒｈｒ　　Ｇｌｎ　　Ｇｌｎ　　Ｈｘｓ　　ＬＱｕ　
　Ｌｅｕ　　ｃｌｎ　　Ｌａｕ　　Ｔｂｒ　　Ｖａｌ　
　Ｔｒｐ　　Ｇｌｙ　　４００工Ｉｓ　Ｌｙｇ　Ｇｉｎ
　Ｌａｕ　Ｃ１ｎ　Ａｌａ　Ａｒｇ　ＶａｌＬｅｕ入１
ａ　Ｖａｌ　Ｇｌｕ　ｘｒｇ　ＴＹＩ”　Ｌｅｕ　Ｇｌ
ｎ　４１６［００５４］
【化２０】 ＪＶ；ｐ　ｃ１’ｎ　ｍｇ　ｔｅ’ｕ　Ｌｅｌｌ　Ｇｌ
ｙ　Ｉｌａ　’Ｉ’ｒｐ　Ｇｌ’ｙ　Ｃｙａ　Ｓａｒ　
ＧｌＹ　ＬＹＥ　Ｌｅｕ　Ｉｌａ　Ｃｙｓ　４３２Ｔｈ
ｒ　Ｔｈｒ　Ｔｂ）”　Ｖａｌ　Ｐｒｏ　ｒｒｐ　Ａｓ
ｎ　Ｔｈｒ　Ｓａｒ　−１Ｓａｒ　ＡＢｎ　Ｌｙｓ　ｓ
ｅｒ　Ｌａｕ　Ａｓｐ　４４８’ｒｈｒ工１＠　’Ｉ’
ｒｐ　Ｈｉｓ　Ａｓｎ　Ｍｅｔ　ＴＡＬＬ”　Ｔｒｐ　
Ｍａｔ　Ｇｌｕ　ｒｒｐ　Ｇｌｕ　Ａｒｇ　Ｇｌｕ　Ｉ
ｌａ　Ａｓｐ　４６４Ａ！ｌｌｎ　’ｌｉ’ｉ　Ｔｈｒ
　Ｓｅｒ　Ｓｉｒ　ＭＰ　ＬＹ９　ｃｌｙ　Ａｇｎ　Ｓ
ｅｒ　ｓｅｒ　Ｇｌｎ　Ｖａｌ　ｓｏｒ　ＧＩＴｈ　Ｍ
ｎ　４８０Ｔｙｒ　Ｐｒｏ　Ｉｌａ　Ｖａｌ　Ｇ１．ｎ
　Ａｇ！’ｌ　Ｌｉｅｕ　Ｇｌｎ　Ｇｌｙ　ｔａｎ　Ｍ
ａｔ　Ｖａｌ　Ｈｉｓ　Ｇｌｎ　Ａｌａ　１１ａ　４９
６５１ｋｒ　Ｐｒｏ　Ａｒｇ　Ｔｈｒ　Ｌａｕ　入ａｎ
　Ａｌａ　Ｔｒｐ　Ｖａｌ　Ｌｙｇ　Ｖａｌ　　工１ｅ
　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　ｈｙｇ　Ａｌａ　　５：Ｌ２ｔｈ＠
Ｓｉｒ　Ｐｒｏ　ｃｌｕ　ｖａｌ工１＠Ｐｒｏ　Ｍｅｔ
　Ｐｈｅ　Ｓｅｒ　Ａｉａ　Ｌｅｕ　Ｓｉｒ　Ｇｌｕ　
Ｇｌｙ　Ａｌａ　５２８Ｔｈｒ　Ｐｒｏ　Ｇｌｒｌ　ｈ
ａｐ　Ｉａｕ　Ａｓｎ　Ｔｈｒ　Ｍｅｔ　Ｉａｕ　ＡＢ
ｎ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　ＧｌｙＧｌｙＨｉｓ　Ｇｌｎ　５
４４Ａｌａλｌａ　Ｍｅｔ　Ｇｉｎ　Ｍｅｔ　Ｌａｕ　
Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ｉｌａ　Ａｓｎ　Ｃ１ｕ　Ｇ
ｌｕ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　５６０ｙｇ　　Ａｓｐ
　　Ａｒｇ　　Ｖａｌ　　Ｈｉｓ　　Ｐｒｅ　　Ｖａｌ
　　Ｂｉｇ　　ｕａ　　Ｇｌｙ　　Ｐｒｏ　　工１ｅ　
Ａｌａ　　Ｐｒｏ　　ＧｌＹ　　Ｇｌｌ’ｌ　　５７６
Ｍｅｔ　Ａｒｇ　Ｇｌｕ　Ｐｒｅ　Ｌｅｇ　Ｇｕｙ　ｓ
ａｒ　Ａｓｐ　ＩＩｓ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｔｈ
ｒ　Ｓｕｒ　Ｔｈｒ　ＬＱｕ　５９２Ｇｌｎ　Ｇｌｕ　
Ｇｉｎ　工ｉ＠Ｇｌｙ　Ｔｒｐ　Ｍｅｔ　Ｔｈｒ　Ａｓ
ｎ　Ａｓｎ　ｐｒｏ　　ｐｒｏ　　工ｌａ　Ｐｒｏ　Ｖ
ａｎ　Ｇｌｙ　６０ＢＧｌｕ　Ｉｌｅ　ｒｙｒ　Ｌ７ｓ
　Ａｒｇ　Ｔｒｐ　Ｉｌｅ工Ｉｓ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｉ
ａｕ　Ｍｎ　Ｌｙｓ工ｌａ　Ｖａｌ　Ａｒ（Ｊ　６２４
Ｍｅｔ　Ｔｙｒ　Ｓｅｒ　Ｐｒｏ　Ｖａｌ　Ｓａｒ　Ｉ
ｌ＠Ｌ＠ｕ　Ａｓｐ　Ｉｌａ　Ａｉ＋ｇＧｉｎ　Ｇｕｙ
　Ｐｒｏ　Ｌｙｇ　Ｇｌｕ　６４０Ｐｌ”ｏ　Ｐｈ＠Ａ
ｒｇ　Ａｓｐ　ｌ１ｌｙｒ　Ｖａｌ　Ａｓｐ　Ａｒｇ　
Ｐｈｓ　Ｔｙｒ　Ｌｙｓ　Ｔｈｒ　ｋｕ　Ａｒｇ　Ａｌ
ａ　ＧＬｕ　６５６Ｇｌｎ　Ａｌａ　　Ｓｉｒ　　Ｇｉ
ｎ　　Ｇｌｕ　　’Ｉ／ａｌ　　Ｌｙｓ　　Ａｓｈ　　
’Ｌ’ｒｐ　　Ｎｅｔ　　ＴＭｒ　　Ｇｌｎ　　Ｔｈｒ
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ｓｎ　Ａｌａ　Ａｓｎ　Ｐｒｏλｌａｐ　Ｃ！１５１　
ＬｙＩ！　’ｒｈｒ　Ｉｌａ　Ｌｅｕ　Ｌｙｓ　Ａｌａ
　Ｌａｕ　Ｇｌｙ　ＰｒｏｔｓｓａＡｌａ　Ａｌａ　’
［’ｈｒ　Ｌａｕ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ｍａｔ　Ｍｅｔ　
Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ｃｙｓ　Ｇｌｎ　Ｇｌｙ　Ｖａｎ　ｅ
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Ｇｌｕ　Ａｌａ　ＭＱｔ　ｓｓｒ　Ｇｕｎ　Ｖａｌ　Ｔ
ｈｌ”　？２０Ａｓｎ　　Ｓａｒ　　Ａｌａ　　Ｔｈｒ
　　工ｌ＠　Ｍｅｔ　　Ｍａｔ　　ＧＬｎ　　Ａｒｇ　
　Ｇｌｙ　ｉｇｎ　　Ｐｈｏ　　ｋｇ　　Ａｓｎ　　Ｇ
ｌｎ　　Ｌｙｓ　　７コ６Ｌｙｇ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　Ｌ
ｙｇ　Ｃｙｇ　ｌ’ｈｅ　Ａｓｈ　Ｃｙｓ　Ｇｌｙ　Ｌ
ｙｒ、　Ｇｌｕ　Ｃ１ｙ　Ｈ１ｓ工Ｒｅ　Ａｌａ　ＬＹ
８７５２Ａｇｎ　ｃｙ５　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ｓｅｒ　Ａ
ｒｇＩ＋７８　Ｌｙｓ　ｈ’！’ｑ　Ａ内Ａｒｇ　Ｌｙ
ｓ　Ｌｙｓ　Ａ！”９　Ａｒｇシｙｇ　７６８Ｌｙ日Ｌ
ｙｓ ［００５５］　　ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：９　　（ヌ
クレイン酸配列Ａ）、配列の種類：ヌクレオチド配列、
配列長さ：塩基対１０１４、銀型：１本鎖 （００５６］
【化２１】 ［００５７］　　ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：１０　　（
ヌクレイン酸配列Ｂ）、配列の種類：ヌクレオチド配列
、配列長さ：塩基対７４４、銀型：１本鎖 ［００５８］
【化２２】 ［００５９］　　ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：１１　　（
ヌクレイン酸配列Ｃ）、配列の種類：ヌクレオチド配列
、配列長さ：塩基対４２０、銀型：１本鎖 ［００６０１
【化２３】 （００６１１ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：１２　　（ヌク
レイン酸配列Ｄ）、配列の種類：ヌクレオチド配列、配
列長さ：塩基対３９３、銀型：１本鎖 ［００６２］
【化２４】 ［００６３］　　ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：１３　　（
ヌクレイン酸配列Ｅ）、配列の種類：ヌクレオチド配列
、配列長さ：塩基対１３７７、銀型：１本鎖 ［００６４］
【化２５】 ［００６５］　　ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：１４　　（
ヌクレイン酸配列Ｆ）、配列の種類：ヌクレオチド配列
、配列長さ：塩基対１１３１．鎖型：１本鎖 ［００６６］
【化２６】 ［００６７］　　ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：１５　　（
ヌクレイン酸配列Ｇ）、配列の種類：ヌクレオチド配列
、配列長さ：塩基対２４００、銀型：１本鎖 ［００６８］
【化２７】 ［００６９］　　ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：１６　　（
ヌクレイン酸配列Ｈ）、配列の種類：ヌクレオチド配列
、配列長さ：塩基対２３１３、銀型：１本鎖 ［００７０］
【化２８】 （００７１１ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：１７　（オリゴ
ヌクレオチド１）、配列の種類：ヌクレオチド配列、配
列長さ：塩基対１００、銀型：１本鎖、トポロジー：直
鎖状［００７２］
【化２９】 ［００７３］　ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：１８　（オリ
ゴヌクレオチド２）、配列の種類：ヌクレオチド配列、
配列長さ：塩基対１００、銀型：１本鎖、トポロジー：
直鎖状・［００７４］
【化３０】 ［００７５］　ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：１９　（オリ
ゴヌクレオチド３）、配列の種類：ヌクレオチド配列、
配列長さ：塩基対９６、銀型：１本鎖、トポロジー：直
鎖状［００７６］
【化３１】 ［００７７］　ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：２０　（オリ
ゴヌクレオチド４）、配列の種類：ヌクレオチド配列、
配列長さ：塩基対９７、銀型：１本鎖、トポロジー：直
鎖状［００７８］
【化３２】 ［００７９］　ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：２１　（オリ
ゴヌクレオチド５）、配列の種類：ヌクレオチド配列、
配列長さ：塩基対４８、銀型：１本鎖、トポロジー：直
鎖状［００８０１
【化３３］ （００８１１ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：２２　（オリゴ
ヌクレオチド６）、配列の種類：ヌクレオチド配列、配
列長さ：塩基対９６、銀型：１本鎖、トポロジー：直鎖
状［００８２］ 【化３４】 ［００８３］　ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：２３　（オリ
ゴヌクレオチド７）、配列の種類：ヌクレオチド配列、
配列長さ：塩基対４８、銀型：１本鎖、トポロジー：直
鎖状［００８４］
【化３５】 ［００８５］　ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：２４　（オリ
ゴヌクレオチド８）、配列の種類：ヌクレオチド配列、
配列長さ：塩基対５０、銀型：１本鎖、トポロジー：直
鎖状［００８６］
【化３６】 ［００８７］ オチド９）、 さ：塩基対１ ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：２５　（オリゴヌクレ配列の
種類：ヌクレオチド配列、配列長００、銀型：１本鎖、
トポロジー：直鎖状［００８８］
【化３７】 ［００８９］　ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：２６　（オリ
ゴヌクレオチド１０）、配列の種類：ヌクレオチド配列
、配列長さ：塩基対５０、銀型：１本鎖、トポロジー：
直鎖状［００９０１
【化３８］ ［００９１］ 【実施例】例　１ １、　　ＨＩＶ−抗原 ＤＮＡ操作に当り、文献に記載の標準方法を利用した［
Ｍａｎｉａｔｉｓ　　及びその他共著、Ｍｏ１ｅｃｕｌ
ａｒ　　Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ　　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｍａｎｕａｌ　　（１９８２）、Ｃｏ１ｄ　　Ｓｐｒｉ
ｎｇ　　Ｈａｒｂｏｒ　　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｃｏ
１ｄ　　Ｓｐｒｉｎｇ　　Ｈａｒｂｏｒ、Ｎｅｗ　　Ｙ
ｏｒｋ在及びＳｈｅ　ｒｍａｎ及びその他共著、Ｍｅｔ
ｈｏｄｓ　　ｉｎ　　Ｙｅａｓｔ　　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ
　（１９８６）、Ｃｏ１ｄ　　Ｓｐｒｉｎｇ　　Ｈａｒ
ｂｏｒ　　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｃ。 ｌｄ　　Ｓｐｒｉｎｇ　　Ｈａｒｂｏｒ、Ｎｅｗ　　Ｙ
ｏｒｋ在］。 ［００９２］ １．１　　使用したＨＩＶＩ−ＤＮＡフラグメントの特
徴使用したＨＩＶＩプロウィルスＤＮＡはＢ、　Ｈ，バ
ーン研究室（Ｈａｈｎ、アラバマ・アット・バーミンガ
ム大学、Ｂｉ　ｒｍｉｎｇｈａｍ、ＵＳＡ在）からのＨ
ＩＶＩ−λファージクローンλＷＦ１．１３から由来す
る。λＷＦ１．１３クローンは交換されていないほぼ完
全なプロウィルスＤＮＡ　（長さ約９ｋＢｐの５ｓｔＩ
／Ｓｓｔ■制限エンドヌクレアーゼフラグメント）を含
有する。 このプロウィルスＤＮＡはＡＩＤＳで死亡した患者の末
梢血液細胞からのウィルス単離体から由来する。λＷＦ
１．１３ＤＮＡの部分域（長さ約９ｋＢｐのＳｓ　ｔ　
Ｉ／５ｓｔＩ−、長さ約５．３ｋＢｐの５ｓｔＩ／Ｅｃ
ｏＲ■−及び長さ約３．７ｋＢｐのＥｃ　ｏＲＩ／Ｓ　
ｓ　ｔ　Ｉフラグメント）をＰｒｏｆ、　　Ｄｒ、　　
Ｈ，ヴオルフ（Ｗｏｌｆ）の研究室（Ｐｅｔｔｅｎｋｏ
ｆｅｒ　　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔ、　　Ｍｕｅｎｃｈｅｎ在
）でＥ、コリベクターｐＵＣ１８の長さ約２．７ｋＢｐ
の５ｓｔＩ−もしくは５ｓｔＩ／ＥｃｏＲＩ−ベクター
フラグメント［Ｙａｎｔ　５ｃｈ−Ｐｅｒｒｏｎ及びそ
の他共著、Ｇｅｎｅ３３．１０２〜１１９　（１９８５
）、Ｖｉｅｉｒａ及びＭｅｓｓｉｎｇ共著、Ｇｅｎｅ１
９，２５９〜２６８（１９８２）］　にサブクローン化
した。この構造はｐＵＣ１８ＷＦ１１３　５ｓｔＩ／５
ｓｔＩ−９，ｐＵｃ１８　　ＷＦ１１３　５ｓｔＩ／Ｅ
ｃｏＲＩ−１９及びｐＵＣ１８ＷＦ１１３　　ＥｃｏＲ
Ｉ／５ｓｔＩ−２８と表わされた。ＨＩＶｌ−融合蛋白
質の発現に使用されるレトロウィルスＤＮＡの部分領域
ｇａｇ−（約９６０ＢｐのＰｖｕ　Ｉ　Ｉ／Ｂｇ　ｌ　
Ｉ　Ｉ−フラグメント）、ｐｏｌ（約７１０ＢｐのＰｖ
ｕＩ　Ｉ／ＢｓｐＭＩ−フラグメント）及びｅｎｖ領域
（約３１０ＢｐのＲｓａＩ／ＨｉｎｄＩＩＩ−フラグメ
ント）のＤＮＡ配列はザンガーによるジデオキシ連鎖切
断反応［Ｓａｎｇｅｒ及びその他共著、Ｊ、　　Ｍｏ１
．　　　Ｂｉｏｌ、、１４３，１６１〜１７８　（１９
８０）］により配列決定した。ＨＩＶゲノム上でのこれ
らのフラグメントの局在化は図１から明らかである。ｇ
ａｇ領域からのフラグメントＡ′はＤＮＡ配列Ａ中に含
まれかつ融合蛋白質■のＨＩＶＩ免疫原決定因子をコー
ドする。ｐｏｌ領域からのフラグメントＢ′はＤＮＡ配
列Ｂ中に包含されかつ融合蛋白質ＩＩのＨＩＶＩ免疫原
決定因子をコードする。ｅｎｖ領域からのフラグメント
Ｃ′はＤＮＡ配列Ｃ中に包含されかつ融合蛋白質ＩＩＩ
のＨＩＶＩ免疫原決定因子をコードする。 ［００９３］ １．２　　ウィルス単離体ＷＦ１．１３のｅｎｖ領域か
らの、使用されるＨＩＶＩ−ｇｐ４１ＤＮＡのサブクロ
ーン化（ＤＮＡ配列Ｃ′） プラスミドｐＵｃ１８　　ＷＦ１１３　　ＥｃｏＲＩ／
５ｓｔＩ−２８から約３１０Ｂｐの“エンベロープ″領
域のＲｓ　ａ　Ｉ／Ｈｉ　ｎｄ　Ｉ　Ｉ　Ｉ−フラグメ
ントを単離し、かつ２．７ｋＢｐのｐＵｃ１８Ｈｉｎｃ
Ｉ　Ｉ／ＨｉｎｄＩＩＩ−ベクターフラグメントに連結
した（構造：　ｐＵｃ１８　　ＷＦ１１３　　ＲｓａＩ
／ＨｉｎｄＩＩＩ）。ウィルス単離体ＷＦ１．１３のＲ
ｓａＩ／ＨｉｎｄＩ　Ｉ　Ｉフラグメントのサブクロー
ン化ＤＮＡ配列は部位１６３８〜１９４３のウィルス単
離体ＷＭＪ−１のＤＮＡ配列に相当する［５ｔａｒｃｉ
ｃｈ及びその他共著、Ｃｅ１１．４５，６３７〜６４８
　（１９８６）］。プラスミドｐＵｃ１８　　ＷＦ１１
３　　ＲｓａＩ／ＨｉｎｄＩＩＩから長さ約３１０のＢ
ａｍＨＩ／ＨｉｎｄＩ　Ｉ　Ｉ−フラグメントを単離し
、かつ引続いてＢａｍＨＩ及びＨｉｎｄＩＩＩで切断し
た５、２ｋＢｐのｐＵＲ２８８［Ｒｕｅｔｈｅｒ及びＭ
ｕｅｌ　１ｅｒ−Ｈｉ　ｌ　１共著、ＥＭＢＯＪｏｕｒ
ｎａｌ、２．１７９１〜１７９４　（１９８３）］のベ
クターフラグメントに連結した（構造：ｐＵＲ２８８Ｗ
Ｆ１１３　　ＢａｍＨＩ／ＨｉｎｄＩＩ■）。再構成に
より生成したＤＮＡ転移を配列決定した。 ［００９４］　　１．　３　　ウィルス単離体ＷＦ１．
１３のｇａｇ領域からの、使用されるＨＩＶＩ−ｐ１７
−ｐ２４ｐ１５のサブクローン化（ＤＮＡ配列Ａ’）プ
ラスミドｐＵｃ１８　　ＷＦ１１３　５ｓｔＩ／Ｅｃ。 ＲＩ−１９をＰｖｕＩＩで消化させ、ＤＮＡ末端にＥｃ
ｏＲＩリンカ−（５’　−ＧＧＡＡＴＴＣＣ−３”）を
設け、プラスミドＤＮＡをＢｇｌＩＩで後切断しかつＢ
ｇＩＩＩ切断位の突出５′末端をフレノウポリメラーゼ
で充填した。その後、ＥｃｏＲＩで後切断し、約９６０
ＢｐのＥｃｏＲＩ／Ｂｇｌ　Ｉ　Ｉ　　（プラント）−
フラグメントを単離しかつ約４．６ｋＢｐのＥｃｏＲＩ
／ＨｉｎｄＩＩＩ　　（プラント）　ｐＫＫ２３３−２
／ＭＹＹＬ−ベクターフラグメント（例２．４参照）に
連結した（構造＝ｐＫＫ２３３−２／ＭＹＹＬ−ｐ１７
−ｐ２４−ｐｉ５）　。ＥｃｏＲＩ／ＨｉｎｄＩ　Ｉ　
Ｉ　　（プラント）ｐＫＫ２３３−２／ＭＹＹＬベクタ
ーフラグメントを製造するにはプラスミドｐＫＫ２３３
−２／ＭＹＹＬをＨｌｎｄＩＩＩで消化させ、Ｈｉｎｄ
ＩＩＩ切断位の突出５′末端をフレノウポリメラーゼで
充填し、プラスミドＤＮＡをＥｃｏＲＩで後切断し、か
つその後でベクターフラグメントを単離した。 ［００９５］　　１．４　　ウィルス単離体ＷＦ１．１
３のｐＯ１領域からの、使用されるＨＩＶｌｐｏ　１−
ｐ３２ＤＮＡのサブクローン化（ＤＮＡ配列Ｂ’）プラ
スミドｐＵｃ１８　　ＷＦ１１３　５ｓｔＩ／Ｅｃ。 ＲＩ−１９から、使用される約７１０ＢｐのＰｖｕＩＩ
／ＢｓｐＭＩ−フラグメントを含有する、ＨＩＶＩの”
ｐｏｌ”領域からの約９７０ＢｐのＡｓｐ７１８Ｉ／Ｎ
ｄｅＩ−フラグメントを単離し、突出している５′末端
をフレノウポリメラーゼで充填しかつｐＵＣ１８ベクタ
ー［Ｙａｎｉ　５ｃｈ−Ｐｅｒｒｏｎ及びその他共著、
前記文献（１９８５）］のＨｉｎｃＩＩ切断部位に連結
した（構造：ｐＵＣ１８ＷＦ１１３　　ＩＮＴ）。 ［００９６］プラスミドｐＵｃ１８　　ＷＦ１１３　　
ＩＮＴをＰｖｕＩＩで消化させ、ＤＮＡ末端にＥｃｏＲ
Ｉリンカ−（５’−ＣＧＧＡＡＴＴＣＣＧ−３”）を設
け、プラスミド−ＤＮＡをＢｓｐＭＩで消化させかつＢ
ｓｐＭＩ切断位の突出５′末端をフレノウポリメラーゼ
で充填した。その後、ＥｃｏＲＩで後切断し、約７２０
ＢｐのＥｃｏＲＩ／ＢｓｐＭＩ　　（プラント）−フラ
グメントを単離し、かつ４．６ｋＢｐのＥｃｏＲＩ／Ｈ
ｉｎｄＩＩＩ（プラント）−Ｉ）ＫＫ２３３−２／ＭＹ
ＹＬベクターフラグメントに連結した（構造：　ｐＫＫ
２３３−２／ＭＹＹＬ−ｐｏ　１−ｐ３２）、ＥｃｏＲ
Ｉ／ＨｉｎｄＩＩＩ−（プラント）−ｐＫＫ２３３−２
／ＭＹＹＬベクターフラグメントを製造するに当り、プ
ラスミドｐＫＫ２３３−２／ＭＹＹＬをＨｉｎｄＩＩＩ
で消化させ、ＨｉｎｄＩＩＩ切断部位の突出５′末端を
８１−ヌクレアーゼで除去し、ＤＮＡをＥｃｏＲＩで後
切断し、かつその後ベクターフラグメントを単離した。 ［００９７］ 例２ ＨＩＶ２抗原 ２．１　　抗原域の選択及び遺伝子設計ＨＩＶ２　　Ｄ
ＮＡ配列（Ｌ、　Ｍｏｎ　ｔ　ａｇｎ　ｉ　ｅ　ｒ研究
グループが発表）及びその誘導蛋白質配列［Ｇｕｙａｄ
ｅｒ及びその他共著、Ｎａｔｕｒｅ、３２６，６６２〜
６６８　　（１９８７）］に基いて、ＨＩＶ２“エンベ
ロープ″蛋白質ｇｐ３２のトランスメンブラン域から、
抗原インデックス分析［Ｊ　ａｍｅ　ｓ　ｏ　ｎ及びＷ
ｏｌｆ共著、ＣＡＢＩＯ８，４，１８１〜１８６　（１
９８８）；Ｗ。 Ｉｆ及びその他共著、ＣＡＢＩＯ８，４，１８７〜１９
１（１９８８）］によりアミノ酸４８〜１６２のＨＩＶ
２ｇｐ３２域を選択した。合成ＨＩＶ２−ｇｐ３２部分
遺伝子を“コドン使用法″に関して、ＨＩＶ２−ｇｐ３
２部分蛋白質の発現用の宿主微生物及び酵母の有用なコ
ドンに適合させた。遺伝子設計では二次構造の形成を最
小にし、かつ更に融合蛋白質に関して好適な単一の制限
エンドヌクレアーゼ切断部位を導入した。 ［００９８］　２．　２　　遺伝子合成合成りＮＡ配列
Ｄ′の製造に使われるデオキシオリゴヌクレオチド及び
クローン化法は配列表ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：１７〜
２６及び図２に図示されている。 ［００９９］原理：それぞれ５個のデオキシオリゴヌク
レオチドを末端にそれぞれ好適な制限切断部位を有する
２個の約２００Ｂｐの遺伝子ブロックに接合し、ゲル電
気泳動により精製し、制限酵素で切断しかつＥ、コリｐ
ＵＣ１８ベクターのポリリンカー領域中にサブクローン
化した。ＤＮＡ配列決定により、サブクローン化した両
方の遺伝子ブロックのＤＮＡ配列を確定した。その後、
両方のＤＮＡフラグメントをｐＵｃ１８ベクター中で単
−ＫｐｎＩ切断部位を介して連結した（構造：ｐＵＣ１
８ＨＩＶ２−ｇｐ３２）。 ［０１００１２，３プラスミドｐＵｃ１８　　ＨＩＶ２
ｇｐ３２の構成 Ａ）　デオキシオリゴヌクレオチド１（ＳＥＱＩＤＮＯ
：１７）、２　（ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：１８）、１
０（ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：２６）、９　（ＳＥＱＩ
ＤＮＯ：２５）及びｓ　（ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：２
４）（図２参照）を反応バッチ（反応緩衝液：１２．５
ｍｏｌ／１トリス／ＨＣＩ、ｐＨ７，０及び１２．　５
ｍｏ　ｌ　／　１ＭｇＣ１）中でアニーリングし、ハイ
ブリッド化生成物をＢａｍＨＩ及びＫｐｎＩで消化させ
、約２００ＢｐのＢａｍＨＩ／ＫｐｎＩ−フラグメント
を単離しかつＢａｍＨＩ及びＫｐｎＩで消化させたｐＵ
ｃ１８−ベクターフラグメント中にサブクローン化した
（構造：ｐＵＣ１８ＨＩＶ２／ＢＫ）。
【０１０１】Ｂ）　デオキシリボヌクレオチド３　（Ｓ
ＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：１９）、４（ＳＥＱ　　ＩＤ　
　ＮＯ：２０）、７　（ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：２３
）、６　（ＳＥＱＩ　ＤＮＯ：　２２）及び５　（ＳＥ
Ｑ　　ＩＤ　　ＮＯ：２１）（図２参照）を前記のＡ）
に記載したようにアニーリングし、ハイブリッド化生成
物をＫｐｎＩ及びＨｉｎｄＩＩＩで消化させ、約２００
ＢｐのＫｐｎ　Ｉ　／Ｈｉ　ｎｄ　ｌｌｌ−フラグメン
トを単離し、かつＫｐｎＩ及びＨｉｎｄＩＩＩで消化し
たｐＵｃ１８−ベクターフラグメント中にサブクローン
化した（構造：ｐＵＣ１８ＨＩＶ２／ＫＨ）。 ［０１０２１Ｃ）　　プラスミドｐＵｃ１８　　ＨＩＶ
２／ＫＨから約２００ＢｐのＫｐｎＩ／ＨｉｎｄＩ　Ｉ
　Ｉ−フラグメントを単離しかつ約２．７ＫＢｐのＫｐ
ｎＩ／ＨｉｎｄＩＩＩ　　ｐＵｃ１８　　ＨＩＶ２／Ｂ
Ｋ−ベクターフラグメントに連結した（構造：ｐＵＣ１
８ＨＩＶ２ｇｐ３２）。 ［０１０３］構造ｐＵｃ１８　　ＨＩＶ２−ｇｐ３２中
ではＨＩＶ２−ｇｐ３２ＤＮＡは１ａｃ−プロモータ／
オペレータ制御下にある。ＨＩＶ２−ｇｐ３２ＤＮＡは
ｐＵＣ１８ポリリンカーの１　ａｃＺ−α−ペプチドと
転写解読枠を形成し、それ故Ｅ、コリ中で発現させる際
に１ａｃＺ（αペプチド）−ＨＩＶ２−ｇｐ３２融合蛋
白質が合成される。Ｎ末端１ａｃＺ（αペプチド）部は
アミノ酸１３個である。 ［０１０４］　２．４　　基本発現プラスミドｐＫＫ２
３３２／ＭＹＹＬの構成 Ｅ、コリＡＴＧ発現ベクターｐＫＫ２３３−２　（ｔｒ
ｃプロモータ、ＮｃｏＩ−Ｐｓｔ　ｌ−ＨｌｎｄＩ　Ｉ
　Ｉポリリンカー、５８−ｒＲＮＡ遺伝子及び転写ター
ミネータＴ１及びＴ２を有するｒｒｎＢフラグメント）
はＬＫＢファルマシア（Ｐｈａｒｍａｃｉａ；Ｕｐｐｓ
ａｌａ）に由来する。ｐＫＫ２３３−２中の単一のＥｃ
ｏＲ■制限切断部位をＥｃｏＲＩによる制限切断、突出
５′末端のフレノウポリメラーゼによる充填及び引続く
“プラントエンド″連結により破壊した（構造：ｐＫＫ
２３３−２／Ｅ）。プラスミドｐＫＫ２３３−２／Ｅ中
のＮｃｏＩ−Ｐｓ　ｔ　ｌ−ＨｌｎｄＩ　Ｉ　Ｉポリリ
ンカーをＮｃｏＩ−ＥｃｏＲＩ　−ＸｂａＩ−Ｈｉｎｄ
Ｉ　Ｉ　Ｉポリリンカーと交換した（構造：　ｐＫＫ２
３３−２／ＭＹＹＬ）。これは、Ｎ末端がラクトースパ
ーミアーゼ（ｌａｃＹ）のＮ末端アミノ酸４個で開始す
る融合蛋白質の構成を可能にする。 ［０１０５］プラスミドｐＫＫ２３３−２／ＭＹＹＬを
製造するに当り、プラスミドｐＫＫ２３３−２／ＥをＮ
ｃｏＩ及びＨｉｎｄＩＩＩで消化させ、約４．６ｋＢｐ
のｐＫＫ２３３−２／Ｅ　　ＮｃｏＩ／ＥｃｏＲＩ−ベ
クターフラグメントを単離し、かつＮｃｏＩ　−Ｅｃｏ
ＲＩＸｂａＩ−ＨｉｎｄＩ　Ｉ　Ｉポリリンカーと連結
させた。ＮｃｏＩ−ＥｃｏＲＩ−ＸｂａＩ−ＨｉｎｄＩ
　Ｉ　Ｉポリリンカーはハイブリッド化により次の２つ
のデオキシオリゴヌクレオチドから製造した。 ［０１０６］ ＸｂａＩ （ＮｃｏＩ）　　　　　　　　　　ＥｃｏＲＩ　　　　
　ＨｉｎｄＩ　Ｉ　ＩＣＡＴＧＴＡＣＴＡＴＴＴＡＧＡ
ＡＴＴＣＴＡＧＡＡＴＧＡＴＡＡＡＴＣＴＴＡＡＧＡＴ
ＣＴＴＣＧＡＭｅｔＴｙｒＴｙｒＬｅｕ　　−−−−−
−＞２．５　　プラスミドｐＫＫ２３３−２／ＭＹＹＬ
　　ＨＩＶ２−ｇｐ３２の構成 約４．６ｋＢｐのｐＫＫ２３３−２／ＭＹＹＬ　　Ｅｃ
。 ＲＩ／ＨｉｎｄＩＩＩベクターフラグメントにｐｕｃ１
８　　ＨＩＶ−ｇｐ３２からの約４００ＢｐのＥｃ　ｏ
ＲＩ／ＨｉｎｄＩＩＩ−フラグメントを連結した。ｌ　
ａｃＹ−ＨＩＶ２融合蛋白質ＩＶはＳＥＱ　　ＩＤ　　
ＮＯ：４にかつコードするＤＮＡ配列りは５ＥＱＩＤＮ
Ｏ：　１２に示されている。 ［０１０７］　２．６　　ＨＩＶ２−ｇｐ３２融合蛋白
質をＥ、コリ中で発現 宿主菌株として公知のＥ、コリに１２菌株ＲＭ８２１ａ
ｃ　　［ｍｅ　ｔ　、ｌ　ａｃ　　　ＥＤ８６５４の復
帰変異体；Ｍｕｒｒａｙ及びその他共著、Ｍｏ１．　　
Ｇｅｎ、Ｇｅｎｅｔ、、１５０．５３〜６１　（１９７
７）］、ＨＢＩ０１　［Ｍａｎｉａｔｉｓ及びその他共
著、前記文献（１９８２）］及びに１６５　［Ｎｅ１ｄ
ｈａｒｄｔ及びＶａｎ　　Ｂｏｇｅｌｅｎ共著、Ｂ　ｉ
　ｏｃｈｅｍ、　Ｂ　ｉ　ｏｐｈｙｓ、Ｒｅｓ、Ｃｏｍ
ｍｕｎ、、１００，８８４〜９００（１９８１）］を使
用した。ＨＩＶ２−ｇｐ３２融合蛋白質の発現は１ａｃ
Ｉ　　リプレッサープラスミドｐＦＤＸ５００（前記文
献、第８頁参照）の不存在及び存在において試験した。 ＲＭ８２１ａｃ、ＨＢｌｏｌ及びに１６５もしくは１ａ
ｃＩ　　リプレッサープラスミドｐＦＤＸ５００で同時
形質転換されたＲＭ８２１　ａ　ｃ、　ＨＢｌｏｌ及び
に１６５をそれぞれＨＩＶ２−ｇｐ３２発現プラスミド
ｐＵｃ１８　　ＨＩＶ２−ｇｐ３２及びｐＫＫ２３３−
２／ＭＹＹＬ　　ＨＩＶ２−ｇｐ３２で形質転換し、か
つ引続いて５０ｍｇ／ｌアンピシリンもしくは５０ｍｇ
／ｌアンピシリン＋５０ｍｇ／ｌカナマイシンを追加し
たＤＹＴ培地（１１当りバクトドリプトン１６ｇ、酵母
エキスＬｏｇ、ＮａＣ１５ｇ）中３０℃で培養した。光
学密度０．６〜０．８１５５０ｎｍの達成後、細胞をＩ
ＰＴＧ（イソプロピル−β−Ｄ−チオガラクトピラノシ
ド、最終濃度１　ｍｍｏ　１　／　１　）で誘導した。 ５〜２０時間の誘導後に試料１ｍｌを採取し、細胞を遠
心分離し、１０ｍｍｏ１／ｌリン酸塩緩衝液ｐＨ６，８
で洗浄しかつ更に加工処理するまで一２０℃で貯蔵した
。 ［０１０８］　２．　７　　細胞砕壊、５ＤＳ−ポリア
クリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）及びウェスタン
プロット分析 細胞ペレットを１０ｍｍｏｌ／ｌリン酸塩緩衝液ｐＨ６
，８及び１ｍｍｏｌ／１ＥＤＴＡ０．２５ｍ１中に再懸
濁させ、かつ細胞を超音波処理により砕解した。遠心分
離後、上澄みに１１５容量の５ＸＳＤＳ試料緩衝液（Ｉ
ＸＳＤＳ試料緩衝液＝５０ｍｍｏｌ／ｌ　トリス／ＨＣ
Ｉ、ｐＨ６，８，１％ＳＤＳ、１％メルカプトエタノー
ル、１０％グリセリン、０．００１％ブロムフェノール
ブルー）を加え、不溶の細胞砕解フラクションを０．３
ｍｌのｌＸ５ＤＳ試料緩衝液及び６ｍｏ１／ｌ尿素中に
再懸濁させ、試料を９５℃で５分間恒温保持し、遠心分
離し、蛋白質を５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳
動により分離し［Ｌａｅｍｍｌ　ｉ、　　Ｎａｔｕｒｅ
、２２７，６８０〜６８５　（１９７０）］、かつ引続
いてクマシーブリリアントブルーＲで染色した。交互に
もしくは平行して電気泳動により分離した蛋白質をニト
ロセルロースフィルター上に移し、固定させ［Ｔｏｗｂ
ｉｎ及びその他共著、Ｐｒｏｃ、　　Ｎａｔ　１．　　
Ａｃａｄ、　　　Ｓｃｉ、、７６．４３５０（１９７９
）］かつヒトＨ■■１もしくはＨＩＶｌ及びＨＩＶ２血
清のパネルに対するＨＩＶ融合蛋白質の免疫反応性を確
認した。 ［０１０９］構成物ｐＵｃ１８　　ＨＩＶ２−ｇｐ３２
に関しては試験したＥ、コリ宿主菌株中でＥ、コリの全
蛋白質に対して０．　１〜１％の非常に僅かなＨＩＶ２
−ｇｐ３２発現がそれぞれ認められた。１ａｃＩ　　リ
プレッサープラスミドｐＦＤＸ５００の存在においては
発現値〈０．１％が明らかになった。
【０１１０】構成物ｐＫＫ２３３−２／ＭＹＹＬ　　Ｈ
ＩＶ２−ｇｐ３２に関しては菌株に１６５中で１ａｃＩ
リプレツサープラスミドの不存在において最良の発現値
（Ｅ、コリ全蛋白質に対して５〜１０％）が認められた
。１ａｃＩ　　リプレッサープラスミドｐＦＤＸ５００
の存在では発現値は２〜５％に低下した。 ［０１１１］　ＨＩＶ２−ｇｐ３２ポリペプチドはＥ、
コリ中で専ら不溶性の蛋白質の凝集物［“封入体″　“
屈折体”　（ＲＢｓ）：Ｍａｒｓｔｏｎ著、Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ。 Ｊ、、２４０．１〜１２（１９８６）］　として合成さ
れ、これは不溶性細胞砕壊フラクションから１×ＳＤＳ
試料緩衝液もしくは６ｍｏｌ／ｌ尿素を含有する１×Ｓ
ＤＳ試料緩衝液で溶解した。ＨＩＶ２−ｇｐ３２融合蛋
白質はヒトＨＩＶ２血清とだけ反応し、かつウェスタン
プロット分析においてヒトＨＩＶＩ血清との交叉反応を
呈示しなかった。 ［０１１２］　２．８　　ＨＩＶ２−ｇｐ３２ポリペプ
チドの大規模な精製 プラスミドｐＫＫ２３３−２／ＭＹＹＬ　　ＨＩＶ２−
ｇｐ３２で形質転換されたＥ、コリに１６５細胞を５１
発酵槽中の５０ｍｇ／ｌアンピシリン及び１％グルコー
スを含有するＤＹＴ培地で３０℃でｐＨ安定化下（ｐＨ
７，５；接種菌１％静置予備培地）に培養した。光学密
度０．８〜１．０１５５０ｎｍを達成したら細胞を１ｍ
ｍｏｌ／ｌ　　ＩＰＴＧ（最終濃度）で誘導した。誘導
期１５時間後に細胞（バイオマス収量湿式重量２０ｇ／
発酵培地ｌ）を遠心分離により収穫し、かつ１０ｍｍｏ
　１／ｌリン酸塩緩衝液ｐＨ６，８で洗った。細胞壁を
リゾチームで消化させ、かつ引続いて細胞を機械的に（
フレンチプレス）砕壊した。その後、不溶性ＨＩＶ２−
ｇｐ３２ＲＢｓを、遠心分離しかつ洗浄した細胞砕壊フ
ラクションから６〜８ｍｏｌ／ｌ尿素で抽出しくヨーロ
ッパ特許公開第０３６１４７５号明細書、例１参照）、
かつ引続いて常法により［イオン交換クロマトグラフィ
及び６〜８ｍｍｏｌ／ｌ尿素中でゲル濾過、Ｍａｒｓｔ
ｏｎ及びその他共著、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ２
，８００〜８０４　（１９８４）；Ｃａｂｒａｄｉ　ｌ
　ｌａ及びその他共著、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ４
，１２８〜１３３　（１９８６）］純皮〉９８％に精製
した。 ［０１１３］ 例３ ＨＩＶＩ−ｇｐ４１融合蛋白質 ３．１　　プラスミド：ｐＵＣ１８ＷＦ１１３　　Ｒｓ
ａＩ／ＨｉｎｄＩＩＩ 構造ｐＵｃ１８　　ＷＦ１１３　　ＲｓａＩ／Ｈｉｎｄ
ＩＩ■　（例１参照）中にＨＩＶＩ−ｇｐ４１ＤＮＡ　
（ＲｓａＩ／ＨｉｎｄＩＩＩ−フラグメント）がｌａｃ
プロモータの制御下に存在する。ＨＩＶＩ−ｇｐ４１Ｄ
ＮＡはｐＵＣ１８ポリリンカーの１ａｃＺ−ａペプチド
ＤＮＡと転写解読枠を形成し、それ故Ｅ、コリ中で発現
させる際にＮ末端及びＣ末端にＨＩＶＩＤＮＡでコード
されなかったアミノ酸をそれぞれ１７個及び８３個含有
する１ａｃＺ（αペプチド）−ＨＩＶＩ−ｇｐ４１融合
蛋白質が合成される。しかしながらこのＨＩＶＩ−ｇｐ
４１ポリペプチドの発現は試験Ｅ、コリ宿主菌株ＪＭＩ
　０９、ＨＢｌｏｌ及びＲＭ８２１ａｃ中で付加的な１
ａｃＩ　　リプレッサープラスミドの不存在及び存在に
おいて（Ｆ’エピソーム　ＪＭ１０９中もしくはプラス
ミドｐＦＤＸ５００との同時形質転換、例２参照）検出
限界下にあった。 ［０１１４］　３．２　　プラスミドｐＫＫ２３３−２
／ＭＹＹＬ−ｇｐ４１の構成 約４．６ｋＢｐのｐＫＫ２３３−２／ＭＹＹＬ　　Ｅｃ
。 ＲＩ／Ｈｉｎｄ　Ｉ　Ｉ　Ｉ−ベクターフラグメント（
構造ｐＫＫ２３３−２／ＭＹＹＬ、例２参照）にプラス
ミドｐＵＲ２８８ＷＦ１１３　　ＢａｍＨＩ／Ｈｉｎｄ
ＩＩＩからの約３２０ＢｐのＥｃｏＲＩ／ＨｉｎｄＩ　
Ｉ　Ｉ−フラグメント（例１参照）を連結する。このプ
ラスミドにはＨＩＶＩ−ｇｐ４１ＤＮＡがｔｒｃプロモ
ータの制御下に存在する。ＨＩＶｌ−ｇｐ４１ＤＮＡは
プラスミドｐＫＫ２３３−２／ＭＹＹＬ中のポリリンカ
ーの１ａｃＹ　　ＤＮＡと転写解読枠を形成し、それ故
Ｅ、コリ中で発現させる際に、ラクトースパーミアーゼ
（ｌａｃＹ）の４個のＮ末端アミノ酸ＭｅｔＴｙｒＴｙ
ｒＬｅｕ、融合部位に構造に由来する２２個のアミノ酸
、エンベロープｇｐ４１膜蛋白質からの１０１個のアミ
ノ酸及びＣ末端に構造上のアミノ酸１２個より成るＨＩ
Ｖｌ−ｇｐ４１融合蛋白質が形成する。この蛋白質をコ
ードするＤＮＡ配列ＣはＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：１１
及びそれから誘導される蛋白質配列ＩＩＩはＳＥＱ　　
ＩＤ　　ＮＯ：３に示されている。 ［０１１５］プラスミドｐＫＫ２３３−２／ＭＹＹＬｇ
ｐ４１で形質転換したＥ、コリＨＢ　１０１宿主細胞で
は１ａｃＩ　　リプレッサープラスミドｐＦＤＸ５００
（同時形質転換）が存在する場合だけＨＩＶＩ−ｇｐ４
１融合蛋白質が合成した（発現高さ：Ｅ、コリ全蛋白質
に対して１〜２％）。発現分析（細胞培養、誘導、５Ｄ
Ｓ−ＰＡＧＥ及びウェスタンプロット分析）を例２に記
載したように実施した。付加的に宿主細胞中にＥ、コリ
中で稀なアルギニン−ｔＲＮＡ−Ａｒｇ　（アンチコド
ン：ＡＧＡ、ＡＧＧ）の遺伝子を導入する場合に、ＨＩ
Ｖｌ−ｇｐ４１融合蛋白質の発現をＥ、コリ全蛋白質の
２０％以上に高めることができ驚異的であった。これは
、プラスミドｐＦＤＸ５００　（前記文献、第８頁参照
）の代りにｄｎａＹ−１ａｃＩ　　−プラスミドｐＵＢ
Ｓ５００　（ヨーロッパ公開特許第０３６８３４２号公
報）で同時形質転換することにより達成された。 ［０１１６］ 例４ “多官能性”ＨＩＶ融合蛋白質 原理ニレコンビナンドＤＮＡ工学により、数種のプロウ
ィルス遺伝子領域のＤＮＡ部分域から成りかつ転写解読
枠を形成する人工ＨＩＶ融合遺伝子を製造する。これに
より、１つのウィルスの異なるレトロウィルス蛋白質の
所望の抗原域（例えばＨＩＶＩのｇａｇ、ｐｏｌ及びｅ
ｎｖ領域から）及び／又は例えばＨＩＶＩ及びＨＩＶ２
のような２種のウィルスの所望の抗原域を有する多官能
性ＨＩＶ融合蛋白質が生成する。多官能性融合抗原の開
発は生産上の理由（経費節約）で非常に興味深い。更に
、これらの融合抗原では構成の際にもたらされる外来蛋
白質配列の割合が減少した。 ［０１１７］　４．Ｉ　　ＨＩＶ２　（ｅｎｖｇｐ３２
）　−ＨＩＶＩ　（ｐｏｌｐ３２）融合蛋白質 発現プラスミドｐＫＫ２３３−２／ＭＹＹＬ　　ｇｐ３
２ｐｏｌｐ３２の構成プラスミドｐＵＣＷＦｌ　１３Ｉ
ＮＴ（例１参照）をＢａｍＨＩ及びＢｓｐＭＩで消化さ
せ、ＢａｍＨＩ−及びＢｓｐＭＩ切断部位の突出５′末
端をフレノウポリメラーゼで充填し、約７３０ＢｐのＢ
ａｍＨＩ（プラント）／ＢｓｐＭＩ（プラント）−フラ
グメントを単離しかつ発現ベクターのｐＫＫ２３３２／
ＭＹＹＬ　　ＨＩＶ２−ｇｐ３２　（例２参照）の単一
のＥｃｏＲＶ切断部位に連結した。所望の構造、ｐＫＫ
２３３−２／ＭＹＹＬ　　ｇｐ３２　　ｐｏｌｐ３２　
（挿入されたＢａｍＨＩ（プラント）／ＢｓｐＭＩ（プ
ラント）−フラグメントの正しい配向）は制限エンドヌ
クレアーゼＥｃｏＲＩ及びＸｂａＩで切断することによ
り確定した。コードするＤＮＡ配列ＦはＳＥＱ　　ＩＤ
　　ＮＯ：１４から及びＨＩＶ２　（ｅｎｖｇｐ３２）
　−ＨＩＶｌ　（ｐｏｌｐ３２）融合抗原の蛋白質配列
は５ＥＱＩＤＮｏ：　６から明らかである。 ［０１１８］ ４．２　　ＨＩＶＩ　　（ｅｎｖｇｐ４１）　−（ｇａ
ｇｐ１７ｐ２４−ｐ１５）融合蛋白質 発現プラスミドｐＫＫ２３３−２／ＭＹＹＬ　　ｇｐ４
１ｐ２４の構成プラスミドｐＵｃ１８　　ＷＦ１１３　
　Ｓｓ　ｔ　Ｉ／ＥｃｏＲＩ−１９（例１参照）をＢｇ
ｌＩＩで消化させ、ＢｇｌＩＩ切断部位の突出５′末端
をフレノウポリメラーゼで充填し、該プラスミドをＰｖ
ｕＩＩで後切断し、約９６０のＰｖｕ　Ｉ　Ｉ／Ｂｇ　
Ｉ　Ｉ　Ｉ　（プラント）−フラグメントを単離しかつ
発現ベクターｐＫＫ２３３−２／ＭＹＹＬ　　ｇｐ４１
　　（例３参照）のＨＩＶＩｇｐ４１の単一のＨｉｎｄ
Ｉ　Ｉ　Ｉ切断部位に、Ｈ１ｎｄＩＩＩ切断部位の突出
５′末端の充填後に連結した。 所望の構造ｐＫＫ２３３−２／ＭＹＹＬ　　ｇｐ４１　
　ｐ２４（挿入したＰｖｕ　Ｉ　Ｉ／Ｂｇ　Ｉ　Ｉ　Ｉ
　　（プラント）フラグメントの正しい配向）は制限エ
ンドヌクレアーゼＥｃｏＲＩ及びＰｓｔＩで制限分析す
ることにより確定した。コードするＤＮＡ配列ＥはＳＥ
Ｑ　　ＩＤ　　Ｎｏ：１３にかつＨＩＶＩ　（ｅｎｖｇ
ｐ４１）−（ｇａｇｐ１７−ｐ２４−ｐ　１５）融合蛋
白質の蛋白質配列■はＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：５に示
されている。
【０１１９】 ４．３　　ＨＩＶ２　（ｅｎｖｇｐ３２）−ＨＩＶＩ　
　（ｐ。 １ｐ３２−ｅｎｖｇｐ４１−ｇａｇｐ１７−ｐ２４−ｐ
１５）融合蛋白質 発現プラスミドｐＫＫ２３３−２／ＭＹＹＬ　　ｇｐ３
２ｐｏｌｐ３２　　ｇｐ４１　　Ｄ２４の構成プラスミ
ドｐＫＫ２３３−２／ＭＹＹＬ　　ｇｐ３２　　ｐｏ１
ｐ３２　（例４．１参照）からは約４．７ｋＢｐのＢｇ
　Ｉ　Ｉ　Ｉ／Ｐｖｕ　Ｉ−ベクターフラグメントをか
つプラスミドｐＫＫ２３３−２／ＭＹＹＬ　　ｇｐ４１
　　ｐ２４（例４．２参照）からは約２．２ｋＢｐのＢ
ａｍＨＩ／ＰｖｕＩ−ベクターフラグメントを単離した
。その後、両方のベクターフラグメントを連結しかつ所
望のプラスミド構造（ｐＫＫ２３３−２／ＭＹＹＬ　　
ｇｐ３２　　ｐｏ１ｐ３２−ｇｐ４１　　ｐ２４）を制
限エンドヌクレアーゼＥｃｏＲＩ、ＡｐａＩ及びＰｖｕ
Ｉで制限分析することにより確定した。コードするＤＮ
Ａ配列Ｇは５ＥＱＩＤ　　ＮＯ：１５にかつそれから誘
導したＨＩＶ２（ｅｎｖｇｐ３２）−ＨＩＶＩ　（ｐｏ
ｌｐ３２−ｅｎｖｇｐ４１−ｇａｇｐ１７−ｐ２４−ｐ
１５）融合蛋白質ＶＩＩの蛋白質配列は５ＥＱＩＤ　　
ＮＯニアに示した。 ［０１２０１多官能性ＨＩＶ融合蛋白質を発現するに当
り、ｄｎａＹ−１ａｃＩ　　プラスミドｐＵＢｓ５００
で同時形質転換したＥ、コリＲＭ８２１ａｃ細胞を使用
した。融合蛋白質はＥ、コリの全蛋白質の２０％まで合
成し、不溶性（ＲＢｓ）かつ免疫学的に活性であった。 融合蛋白質中に存在するＨＩＶＩのｇａｇ−１ｐｏｌ−
及びｅｎｖ領域及びＨＩＶ２のｅｎｖ−領域の抗原決定
因子はすべて免疫学的に反応性である。検出は特異的な
モノクロナール抗体（ｇａｇ）及びヒトＨＩＶＩ　（ｅ
ｎｖ、ｐｏｌ）及びＨＩＶ２　（ｅｎｖ）血清を介して
行なった。発現分析（細胞培養、誘導、５ＤＳ−ＰＡＧ
Ｅ及びウェスタンプロット分析）は例２と同様に実施し
た。 ［０１２１］例５ 精製手段を有するＨＩＶポリペプチド プラスミドｐＫＫ２３３−２／ＭＹＹＬ　　ｇｐ３２　
　ｐｏ１ｐ３２　　ｇｐ４１　　ｐ２４−ポリＡｒｇＬ
ｙｓプラスミドｐＫＫ２３３−２／ＭＹＹＬ−ｇｐ３２
　　ｐｏｌｐ３２−ｇｐ４１−ｐ２４の単一のＡｐａＩ
切断部位中に１３個の塩基性アミノ酸（Ｌｙｓ及びＡｒ
ｇ）をコードするポリリンカーを連結した。 ［０１２２］ ｄｎａＹ−１ａｃＩ　　プラスミドｐＵＢｓ５００で同
時形質転換されているＲＭ８２１ａｃ細胞中のＨＩＶ２
　（ｅｎｖｇｐ３２）−ＨＩＶＩ　（ｐｏｌｐ３２−ｅ
ｎｖｇｐ４１−ｇａｇｐ１７−ｐ２４−ｐ１５−ポリ　
（Ａｒｇ−Ｌｙｓ）融合蛋白質の発現及びこの融合蛋白
質のヒトＨＩＶＩ及びＨＩＶ２血清に対する免疫学的挙
動はＨＩＶ２　（ｅｎｖｇｐ３２）−ＨＩＶＩ　（ｐｏ
ｌｐ３２ｅｎｖｇｐ４１−ｇａｇｐ１７−ｐ２４−ｐ１
５）融合蛋白質に相当した（例４参照）。コードするＤ
ＮＡ配列ＨはＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：１６からかつそ
れから誘導されるＨＩＶ２　（ｅｎｖｇｐ３２）−ＨＩ
ＶＩ　　（ｐｏｌｐ３２−ｅｎｖｇｐ４１−ｇａｇｐ１
７−ｐ２４−ｐ１５ポリ（Ａｒｇ−Ｌｙｓ）融合蛋白質
の蛋白質配列ＶＩＩＩはＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：８か
ら明らかである。 ［０１２３］ 例６ 抗−ＨＩＶ−抗体の免疫学的測定 微量滴定板（Ｄｉｎａｔｅｃｈ）に塗布するために、１
００　ｍｍｏ　ｌ　／　１炭酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ
９，６）中の抗原含有溶液を濃度４μｇ／ｍｌに稀釈し
かつ室温で１８時間恒温保持する。 ［０１２４］引続いて室温で１時間牛血清アルブミン（
１０ｍｇ／ｍｌ）と共にリン酸塩で緩衝させた食塩溶液
（ＰＢＳ　：　０．　１５ｍｏ　ｌ　／　１リン酸ナト
リウム；０．９％ＮａＣ１；ｐＨ７，２）中で後恒温保
持する。 ［０１２５］ヒト血清又はヒト血しようと恒温保持する
前及び試験段階の間にそれぞれ３回０．５％ツイーン２
０含有脱鉱物水で洗浄する。 ［０１２６］試料（ヒト血清又はヒト血しよう）を１０
：％牛血清を含有するＰＢＳ中で１００倍に稀釈しかつ
３７℃で２時間塗布した微量滴定板で恒温保持する。引
続いて３回洗浄溶液（脱鉱物水中０．５％ツイーン２０
）で洗浄する。 ［０１２７］第２段階でペルオキシダーゼ及びヒトＩｇ
ＧのＦｅ２部に対するポリクロナール抗体の複合体（Ｐ
ＯＤ複合体）　　（ＰＢ８１ｍｌ当りペルオキシダーゼ
約３０ｍＵ）と共に３７℃で１時間恒温保持しかつ洗浄
溶液で３回洗浄する。 ［０１２８］基質溶液［１，６ｍｍｏｌ／ｌ　　ＡＢＴ
Ｓ（登録商標：２，２’−アジノージ−［３−エチルベ
ンゾチアゾリン−スルホン酸（６）］−ジアンモニウム
塩）；　９５ｍｍｏｌ／ｌリン酸塩−クエン酸塩緩衝液
ｐＨ４，４；　３．　１ｍｍｏ　ｌ　／　１過硼素酸ナ
トリウム］を加え、室温で１時間恒温保持しかつ試料中
に存在する特異的抗体の尺度として４９２ｎｍで吸光度
を測定する。 結果を表■に示す。 ［０１２９］
【表１】 表　　　■ 種々のＨＩＶ抗体の免疫反応性 （ＥＬＩＳＡ−結果［ｍＥ　（４９２ｎｍ）　］　）９
　　ウ　　　　　　　１−旧“　　１常１清−ｊｔＬＪ
ｔａ　　　（ｎ−９８、・　　　相対′ルＨＩＶ１ｅｎ
ｖ−ｇｐ４１　（例３．１）　　　　　１０５２　　　
　１４７す４１　　　　　７−２Ｂ］Ｖｌｅｎｖ−ｇｐ
４１　　（例３．２）　　　　　　１３０８　　　　１
０１±１６　　　　　１３．ＯＨＪＶｌｇａｇ−ｐ１７
−ｐ２４−ｐ１５　　　　　１７５８　　　　６１±２
０　　　　２９．０ＨＩＶ１ｐｏｌ　−ｐ３２　　　　
　　　　　　９０２　　　　９８±１７　　　　　９−
ＯＨ９−０ＨＩＶ２ｅｎｖ−１７０６１２１±３１　　
　　１４．０＊試験したヒト正常血清の数 （０１３０１表１から、使用した蛋白質配列■、ＩＩ、
ＩＩＩ及びＩＶ（ＳＥＱＩＤ　　ＮＯ：１．２．３及び
４参照）を含有するＨＩＶＩ及びＨＩＶ２融合蛋白質は
ヒト正常血清と免疫学的交叉反応をしないことが明らか
である。 ［０１３１］ 例７ ウェスタンプロット測定［Ｅｎｚｙｍｏ　１ｏｇｙ１９
２．３７７〜３９１　　（１９８３）の方法による］抗
原特異的免疫反応を検出するに当り、抗体含有試料を室
温で一晩、０．０５％ツイーン２０含有ＰＢＳ中で抗原
担持ニトロセルロース片と一緒に恒温保持する。 ［０１３２］３回洗浄後ＰＯＤ複合体（例６参照；約５
ＯｍＵ／ｍ１）と恒温保持する。洗浄溶液（例６）で更
に３回洗浄した後で４−クロル−１−ナフトールを加え
、室温で１５分間恒温保持しかっ色形成を視覚的に測定
する。 ［０１３３１色色濃一応じて免疫反応を陰性（−）、弱
い（＋／−）　、明瞭（＋）、強い（＋＋）及び非常に
強い（＋＋＋）に区分した。結果を表ＩＩに示す。 ［０１３４］表ＩＩは、本発明による融合蛋白質が特異
的にモノクロナール及びポリクロナール抗−ＨＩＶ−抗
体と反応することを示す。 ［０１３５］
【表２】 表　　　　　　　■ ［０１３６］ 例８ ヒト血清又はヒト血しよう中の抗−ＨＩＶ−抗体の測定
用試薬 試薬は次のものを含有する： 溶液１：１０％牛血清を含有する恒温保持用緩衝液（Ｐ
ＢＳ）中の抗原及びビオチンからの複合体０．１〜１μ
ｇ／ｍｌ 溶液２：ＰＢＳ中のＰＯＤ複合体（ペルオキシダーゼと
、ヒト■ｇＧのＦｃ７部に対するポリクロナール抗体か
らの複合体、ＰＯＤ３０ｍＵ／ｍ１）基質溶液［１，６
ｍｍｏｌ／ｌ　　ＡＢＴＳ　（ｕ録商標）；リン酸塩−
クエン酸塩緩衝液ｐＨ４，４；３．　１ｍｍｏｌ／１過
硼素酸ナトリウム］ 試料０．０１ｍ１をストレプタビジンで塗布したポリス
チレン小管（ヨーロッパ特許公開第０２６９０９２号明
細書により製造）中に装入しかつ室温で１時間溶液１１
ｍ１と一緒に恒温保持する。０．０５％ツイーン２０を
含有するＰＢＳで３回洗浄した後で室温で１時間溶液２
　１ｍｌと一緒に恒温保持する。０．０５％ツイーン２
０を含有するＰＢＳで３回洗浄後、室温で１時間溶液２
と恒温保持しかつ再度３回洗浄する。基質溶液［１゜６
ｍｍｏｌ／Ｉ　　ＡＢＴＳ　（登録商標）　　；　９５
ｍｍｏ　１／１リン酸塩−クエン酸塩−緩衝液ｐＨ４，
４；３．　１ｍｍｏ　１／１過硼素酸ナトリウム］を加
え、室温で１時間恒温保持しかつ試料中に存在する特異
的抗体の尺度として４９２ｎｍの吸光度を測定する。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１はＨＩＶＩゲノム上のＨＩＶ−決定基の位
置を示す図である。
【図２】図２はＨＩＶ２　（ｅｎｖ−ｇｐ３２）−ＤＮ
Ａ配列（Ｄ′）を製造するためのクローン化法を示す図
である。 フロントページの続き

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 【請求項１］　　Ｎ−末端成分としてテトラペプチド配
    列ＮＨ２Ｍｅｔ　　Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕを含有する
    ことを特徴とするＨＩＶＩ又は／及びＧＩＹ２のｅｎｖ
    −１ｇａｇ−又は／及びｐｏｌ−域からの抗原又は／及
    び免疫原決定基を少なくとも１つ有する融合蛋白質。 【請求項２］　　ＨＩＶＩのｇａｇ−域からの決定基を
    有するアミノ酸配列■ 【化１】 ＳＥＱ　　ＩＤ　　　ＮＯ＝　１ ｅ列の種類ニアミノ酸配列 配列の長さ二３３７　アミノ酸 鎧型ニー水銀 Ｍａｔ　Ｔａｒ　’Ｉ’ｆｒ　Ｉａｕ　Ｇｌｕ　Ｐｈａ
    　Ｐｒｏ　Ａｌ！ｐ　Ｌｙｅ　Ｇｌｙ　ｋｍＳｓｒ　Ｓ
    ｓｒ　ｃｌｎ　ｖａｌｌｉａｒ１６Ｇ１ｎ　Ａｓｎ　ｌ
    ’ｙｒ　Ｐｒｏ　ＩｌｅＶａｌ　Ｇｌｎ　Ａｒ、ｎ　Ｉ
    ａｕ　Ｇｌｎ　Ｇｌｙ　Ｇｉｎ　Ｍｅｔ　Ｖａｌ　Ｈｌ
    ｓ　Ｇｌｎ　３２λｌａ工１ｅ　Ｓｅｒ　Ｅ’ｒｏ　Ａ
    ｒｇ　ロ「Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ａｌａ　ｒｒｐ　Ｖａｌ　
    Ｌｙｓ　ＶａｌＩｌｅ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　４８Ｌｙｓ　
    Ａｈａ　Ｐｈｅ　ｅａｒ　Ｐｒｏ　Ｇｌｕ　Ｖａｎ工Ｉ
    ｓ　Ｐｒｏ　Ｍａｔ　Ｐｈａ　Ｓｅｒ　Ａｌａ　Ｉａｕ
    　５＊ｒ　Ｇｌｕ　６４Ｇｌｙ　Ａｌｍ　Ｔｈｒ　Ｐｒ
    ｏ　Ｇｌｎ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　Ａｇｎ　Ｔｈｒ　Ｍａｔ
    　Ｌｌｉｌｕλ！ＩｎＴｈｒ　ｖａｌ　ＧｌｙＧＩＹ　
    ｇ。 Ｈｌｓ　Ｇｌｎ　Ｊｌｄａ　Ａｌａ　Ｍａｔ　Ｇｉｎ　
    Ｍａｔ　Ｌａｕ　Ｌｙｅ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ工１ｅ　Ａｓ
    ｎ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕλ１ａ９６ｘｌａ　Ｇｌｕ　’Ｉｒ
    ｐ　Ａｓｐ　Ａｒｇ　Ｖａｌ　Ｗｉｇ　Ｐｒｏ　Ｖａｌ
    　Ｈｉｓ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｉｌｅ　Ａｌａ　
    Ｐｒｏ　１１２ＧＩＹ　Ｇｌｎ　Ｍｅｔ入ｒ９　Ｇｌｕ
    　Ｐｒｏ　Ａｒｑ　ＧＩＹ　Ｓ＠ｒ　Ａｓｐ工１ａλｌ
    ａ　Ｇｌｙ　ｒｈｒ　’ｒｈｒ　Ｓｅｒ　１２Ｂ’ｆ’
    ｈｒ　Ｌｅｕ　　Ｇｌｎ　　Ｇｌｕ　　Ｇｉｎ　　：Ｃ
    １ｅ　　Ｇｌｙ　　Ｔｒｐ　Ｍｅｔ　Ｔｈｒ　Ａｓｎ　
    Ａｓｎ　Ｐｒｏ　　Ｐｒｏ　　工Ｉｓ　　Ｐｒｏ　　１
    ４４Ｖａｌ　ＧＩＹ　Ｇｌｕ工Ｒｅ　Ｔｙｒ　Ｌｙｓ　
    Ａｒｑ　Ｔｒｐ　ｘ１ａ工１ｅ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｉａ
    ｕ　Ａｓｎ　Ｌｙｇ　Ｉｌａλ６゜Ｖａｌ　ｘｒｇ　Ｍ
    ｅｔ　ｌ’ｙｒ　ｓａｒ　ｐｒｏ　Ｖａｌ　ｓｅｒ　Ｉ
    ｌｅ　ＴＡｕ　Ａｌｐ　Ｉｌｅ　ＡＨＧｉｎ　Ｇｌｙ　
    Ｐｒｏ　１７６Ｉ、ｙｓ　Ｇｌｕ　Ｐｒｏ　Ｐｈｅ　Ａ
    ｒｇＡｇｐ　Ｔｙｒ　ＶａｌＡｓｐ　Ａｒｇ　Ｐｈｅ　
    Ｔｙｒ　Ｉ＋ｙＳ　’Ｉｈｒ　Ｉａｕ　；Ａｒｑ　：Ｌ
    ９２Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ｇｉｎ　Ａｌａ　ｇｅｒ　Ｇｉｎ
    　Ｇｌｕ　Ｖａｎ　Ｌｙｓλｓｎ　’Ｉ’ｒｐ　Ｍａｔ
    　Ｔｈｒ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　−ｕ　２０１１Ｌ＠ｕ　Ｖ
    ａ：ＬＧＧｌｎＡｓｎ　Ａｌａ　ｈｓｎ　ｐｒｏ　ＡＳ
    ＩＰ　Ｃｙｉｓ　　Ｌｙｓ　’！’ｈｒ　：Ｃ１＠　Ｉ
    ａｕ　Ｌｙｓ　ｘｌａ　Ｌｅｕ　２２４Ｇｌｙ　Ｐｒｏ
    　Ａｈａ　Ａｌａ　’［’ｈｒ　ＩＡｕ　Ｇｌｕ　Ｇｌ
    ｕ　Ｍａｔ　Ｍａｔ　笥ｒλｌａ　Ｃｙｓ　Ｇｉｎ　Ｇ
    ｌｙ　Ｖａｌ　２４０ＧＩＹ　ＧＩＹ　Ｐｒｏ　Ｇｕｙ
    　Ｉ（ｉ！Ｉ　Ｌｙｇ　Ａｌａ　Ａｒｇ　’Ｖａｎ　　
    Ｌｅｕ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ａｌａ　Ｍｅｔ　ｅ＠ｒ　Ｇ
    ｉｎ　２５６Ｖａｌ　’ｒｈｒ　ｕｎ　ｓｅｔ　Ａｌａ
    　’ｒｈｒ　ｌｉｅ　ｗｅｔ　ｎｅｔ　Ｇｌｎ　Ａ内Ｇ
    ＩＹ　Ａｓｎ　Ｐｈａ　ｘｒｇ　Ａｓｎ　２７２Ｇｉｎ
    　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　’ａｒ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ｃｙｓ　
    Ｐｈａ　Ａｓｎ　Ｃｙｓ　Ｇｌｙ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ｇ
    ｌｙ　Ｈｉｓ　Ｉｌａ　２８８Ａｌａ　Ｌｙｓ　Ａｓｎ
    　Ｃｙｓ　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　
    Ｌｙｓ　Ｓｌｙ　Ｃｙｓ　Ｔｒｐ　７．＋ｙｓ　Ｃｙｓ
    　Ｇｌｙ　３０４Ｌｙｓ　ｅｍｕ　Ｇｌｙ　Ｈｌｓ　Ｇ
    ｉｎ　Ｗｅｔ　ＬｙｓＡｓｐ　Ｃｙｓ　ｆｉｒ　ｃｌｕ
    　Ａｒｇ　Ｇｉｎ　Ａｌａλａｎ　Ｐｈａ　３２０Ｌ＠
    ｕ　ＧＩＹ　ＬＹ！！　ｌｆｌ＊　ｓａｒ　Ｌｅｕ　Ａ
    ｌａ　Ｖａｌ　Ｌａｕ　Ａｌａ　ａｓｐ　Ｇｌｕ　Ａｒ
    ｅｉ　Ａ内ｐｈｅ　ｓｉｒ　３３６ｌａ を有する請求項１記載の融合蛋白質。 ［請求項３］　　ＨＩＶＩのｐｏｌ−域からの決定基を
    有するアミノ酸配列ＩＩ 【化２】 ＳＥＱ　　ＩＤ　　　ＮＯ：２ 配列の種類ニアミノ酸配列 配列の長さ：２４７　アミノ酸 鎧型ニー水銀 Ｍａｔ　Ｔｙｒ　Ｔｙｒ　Ｌａｕ　Ｇｌｕ　ＰｈｅＡｒ
    ｇ　Ｃｙｓ　Ａｓｐ　Ｌｙｓ　Ｃｙｓ　Ｇｉｎ　ｋｕ　
    Ｌｙｓ　Ｇａｙ　Ｇｌｕ　１６Ａｌａ　Ｈａｔ　Ｉ（ｉ
    ｓ　（Ｓｌｙ　Ｇｌｎ　Ｖａｌ　Ａｓｐ　Ｃｙｍ　Ｓｅ
    ｒ　Ｐｒｏ　ＧｌｙＬｙｅ　Ｔｒｐ　Ｇｕｎ　Ｌｅ＋ｕ
    　Ｊｕｓｐ　３２Ｃｙｓ　Ｔｈｒｍｉｓ　ＴＡｕ　Ｇｍ
    ｕ　ＧＩＹ　Ｌｙｓ　Ｉｌｅ　Ｉｌｅ　Ｌｅｕ　Ｖａｌ
    　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｈｌｓ　Ｖａｌ　Ａｌａ　ａｓＳ＠
    ｒ　Ｇｌｙ　Ｔｙｒ　ＩｌｅＧｌｕ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　
    Ｖａｌ　　工Ｒｅ　Ｐｒｏ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　
    Ｇｌｙ　Ｇｌｎ　Ｇｌｕ　　６４’Ｊ”ｈｒ　Ａｌａ　
    Ｔｙｒ　Ｐｈｅ　Ｉｌｅ　ＴＡｕ　！ｌ’！／！Ｉ　！
    ｊＱＬ＾ｌａＧ工ｙ　オηＴｒｐ　ｈｏ　Ｖａｌ　Ｌｙ
    ！Ｉ　Ｖａｌ　８０工１＠Ｈｉｓ　Ｔｈｒ　Ａｓｐ　Ａ
    ｓｎ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ａｓｎ　Ｐｈｉ　Ｔｈｒ　Ｓｉ
    ｒ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　　Ｌｙｓ　Ａｌａ　　９
    ６Ａｌａ　Ｃｙｓ　Ｔｒｐ　’Ｉ’ｒｐ　Ａｌａ　Ｇｌ
    ｙ　］：１ａ　ｈｙｓ　Ｇｌｒ＋　ａｌｕ　Ｔｈｅ　Ｇ
    ＩＹ　ｆｌａ　Ｐｒｏ　Ｔｙｒ　Ｍｎ　１ｎｐｒｏ　Ｇ
    ｌｎ　　ｓａｒ　Ｇｉｎ　ＧＩＹ　Ｖａｌ　　’Ｖａｌ
    　　Ｃ１ｕ　５ａｒ　Ｈａｔ　Ａ１１ｌＺ’ｋ　Ｌｙｅ
    　　ＧＬｕ　ｔａｕ　　ｒ、ｙｓ　　ＬＹｓ　　１２８
    工１＠工１＠Ｇ１ｙｃ１ｎ　ｖａｔ　ｘｒｇ　ＡＧｐ　
    Ｇｌｎ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ｈ１５１ｆＪＱｕ　Ｌ７Ｂ　
    Ｔｈｒ　Ａｌｍ　Ｖａｌ１４４Ｇｌｎ　Ｍｅｔ　Ａｌａ
    　Ｖａｌ　Ｐｈｅ工１ｍ　Ｈｉｓ　Ａｓｎ　Ｐｈｅ　Ｌ
    ｙｓ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｉｌａ　Ｇｌ
    ｙ　Ｌ６０Ｇｌｙ　Ｔｙｒ　Ｓｅｒ　Ａｌａ　ＧＩＹ　
    ＧＩＬＬ　Ａｒｇ　Ｉｌａ　Ｖａｌ　Ａｓｐ　１１１ａ
    工１ａ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ａｓｐ　Ｉｌａ　１７ｇＧｌ
    ｎ　Ｔｈｒ　Ｌｙｓ　ＧｌｕＬａｕ　Ｇｉｎ　Ｌｙｓ　
    Ｇｉｎ　　工Ｒｅ工ｌｌａ　Ｌｙｓ工ｌ＠Ｇｉｎ　Ａａ
    ｎ　Ｐｈｉ　Ａｒｇ　１９２Ｖａ工　Ｔｙｒ　Ｔｙｒ　
    入ｒｇ　Ａｓｐ　　ｅａｒ　Ａｒｇ　Ａｓｐ　Ｐｒｏ　
    　Ｌａｕ　’ｌ”ｒｐ　Ｌｙｓ　　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ａ
    Ｌａ　　Ｌｙｓ　　２０８Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　’ｌ’ｒｐ
    　Ｌｙｓ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　ＡＬａ　Ｖａｌ　
    Ｖａｌ　Ｉｌａ　Ｇｉｎ　Ａｓｐ　Ａｓｎ　Ｂｅａｒ　
    Ｇｌｕ　２２４ＩＩ＠Ｌｙｓ　Ｖａｌ　Ｖａｎ　Ｐｒｏ
    　ｋｘｇ　Ａｒｇ　Ｌｙｅ＾ｌａ　Ｉ＋ｙｓτ１ｅ工ｌ
    ａ　Ａｒｇ　Ａｇｐ　？Ｉｎ”　Ｇｌｙ２４０Ｌｙｓ　
    Ｒｌｇ　Ｃ１ｙ　ｃｙｓ　Ｐｈａ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙを有
    する請求項１記載の融合蛋白質。 ［請求項４］　　ＨＩＶＩのｅｎｖ−域からの決定基を
    有するアミノ酸配列ＩＩＩ 【化３】 ＳＥＱ　　ＩＤ　　　ＮＯ：３ 配列の種類ニアミノ酸配列 配列の長さ：１３９　アミノ酸 類型ニー水銀 Ｎｅｔ　Ｔｙｒ　’ｌ’ｙｒ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ｐｈｅ
    　ｃｌｎ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒムｌａ　Ｇｌｙ　ｈｘｑ　Ｔ
    ｙｒ　Ｈｉｓ　Ｔｙｒ　Ｇｉｎ工６Ｌａｕ　ｖａｌ　’
    ｊｒｐ　Ｃｙｓ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ｂ’ａｒ　Ｃ３＊）
    ”　Ａｒｇ　Ｖａｌ　Ｇｌｎ　ＴｈｒＡｒｇ　Ｇｌｎ　
    Ｌａｕ　ｔａｕ　３２Ｓａｒ　Ｇｌｙ　ＩＩＱＶａｌ　
    Ｇｌｎ　ｅｌｎ　Ｇｉｎ　Ａｌ！ｒｌ　Ａｓｎ　′ＩＡ
    ｕ　Ｌｅｕ　Ａｒｇ　Ａｌａ　：［ｌａ　Ｇｌｕ　Ｔｈ
    ｒ　４８Ｇｌｎ　Ｇｉｎ　Ｉ（ｉｓ　Ｌａｕ　Ｉ＋＠！
    ｕ　Ｇｌｎ　Ｌａｕ　Ｉｈｒ　Ｖａｌ　Ｔｒｐ　ＧＩＹ
    　ＩＩＱ　Ｉ＋ｙｇ　Ｇｌｎ　Ｌａｕ　Ｇｌｎ　６４Ａ
    ｌａ　Ａｒｇ　Ｖａｌ　Ｌａｕ　Ａｌａ　Ｖａｎ　Ｇｌ
    ｕ　）ａ−ｇ　’ｒｙｒ　Ｉｊｌｕ　Ｇｌｎ　Ａｇｐ　
    Ｇｌ！’Ｉ　Ａｒｇ　Ｌｅｕ　Ｌａｕ　ａ。 Ｇａｙｃｙｇ　Ｔｒｐ　Ｇｌｙ　Ｃｙｓ　Ｓａｒ　ａｌ
    ｙ　Ｌｙｅ　Ｌａｕ　：Ｃ１＊　ｃｙｇ　Ｔｈｒ　Ｔｈ
    ｒ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　Ｐｒｏ　９６’ｊｒｐ　Ａｓｎ　
    Ｔｈｒ　Ｓｓｒ　ＴりＳａｒ　Ａｓｎ　Ｌｙｓ　ｓｅｒ
    　−ｕ　Ａｓｐ　Ｔｈｒ　Ｉｌｅ　’Ｉ’９）Ｅｉｓ　
    ＆！ｉ０１１２Ｎｅｔ　笥ｒ　Ｔ′ｒｐＭｅｔ　Ｇｌｕ
    　Ｔｒｐ　Ｇｌｕ　ａａ’ｇ　Ｇｌｕ　ＩＩｓ　Ａｓｐ
    　ｊｌａｎ　Ｔｙｒ　’ｒｈｒ　８ｅｒ　Ｌｅｕ　１２
    ８Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｌａｕ　Ｊｕｎ　Ａｇｐ　Ｇｌｕ　
    Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ｐｈｅ　Ｓｅｒ　Ａｌａを有する請求
    項１記載の融合蛋白質。 ［請求項５］　　ＧＩＹ２のｅｎｖ−域からの決定基を
    有するアミノ酸配列ＩＶ 【化４】 ＳＥＱ　　ＩＤ　　　ＮＯ：４ 配列の種類ニアミノ酸配列 配列の長さ：１３０　　アミノ酸 類型ニー水銀 Ｍ４ｋｔ　’ｒｙｒ　’ｒｙｒ　Ｌｌａｕ　Ｇｌｕ　ｐ
    ｈｅ　Ｇｌｌ’ｌ　Ｇｉｎ　Ｇｌｌ’ｌ　Ｇｌｎ　Ｇｌ
    ｎＬＱｕ　ＩＪｕ　Ａｌｐ　”Ｖａｌ　Ｖａｌ　Ｌ６Ｌ
    ％　Ａｒｇ　Ｇｉｎ　Ｇｌｎ　Ｇｌｕ　Ｌａｕ　Ｌｅｕ
    　Ａｒｑ　Ｌａｕ　’ｒｈｒ　’１Ｆａｌ　ＴＱ　ＧＩ
    Ｙ　’ｒｈｒ　Ｌｙｓ　Ａｓｎ　３２ＬＱｕ　ａｌｎ　
    Ａｌａ　Ａｒｇ　Ｖａｎテｈｒ　Ａｌａ　ＩＩＱＧｌｕ
    　Ｌｙｓ　’ｊｙｒ　Ｌａｕ　Ｇｌ−ｎ　Ａｓｐ　Ｇｌ
    ｎ　Ａｌａ　４１Ａｒｇ　Ｌａｕ　Ａｓｎ　５＠ｒ　Ｔ
    ｒｐ　Ｇｌｙ　Ｃｙｓ　Ａｌａ　Ｐｈｅ　Ａｒｇ　Ｇｉ
    ｎ　Ｖａｌ　Ｃｙｓ　ｌＥｉｇ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　６４
    ＶａｌＰｒｏ　’ｌ’ｒｐ　Ｖａｎ　ｋｓｎ　Ａｊｐ　
    Ｓａｒ　Ｉｎｕλｌａ　Ｐｒｏ　Ａｓｐ〒１λｓｐ　Ａ
    ｓｎ　Ｍａｔ　ａｔＢｅＴｒｐ　Ｇｌｎ　Ｇｌｕ　Ｔｒ
    ｐ　Ｇｌｕ　Ｌｙｅ　Ｇｉｎ　Ｖａｌ　Ａｒｇ　’！’
    ｙｒシ＝ｕ　Ｇｌｕ　Ａｌａ　Ａｇｎ　Ｉｌｅ　Ｓｅｔ
    　９６Ｌ７ｇ　　ｓｅｒ　　Ｌａｕ　　Ｇｌｕ　　ＧＩ
    ＹＩ　　Ａｌａ　　Ｇｉｎ　　ｆＬａ　　Ｇｌｎ　　Ｇ
    ｌｎ　　Ｇｌｕ　　ＬｙＳ　　ｉｓｎ　　ａｃｔ　　Ｔ
    ｙｒ　　Ｇｌｕ　　１１２Ｌｅｕ　Ｇｉｎ　Ｌｙｓ　Ｌ
    ｅｕ　ＡＳｎ　ｓｅｒ　Ｉ’ｒｐＡｌｐ　Ｉｌａ　Ａ丙
    ｓｅｒ　ＬＹ８　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｃ’７Ｆ！　Ｐｈｅ
    　１２ａＧａｙ　Ｇａｙ を有する請求項１記載の融合蛋白質。 ［請求項６］　　ＨＩＶＩのｅｎｖ−域及びｇａｇ−城
    からの決定基を有するアミノ酸配列Ｖ 【化５】 ＳＥＱ　　ＩＤ　　　ＮＯ：５ 配列の種類ニアミノ酸配列 配列の長さ：４５８　アミノ酸 銀型ニー木調 Ｍｎｔ　Ｔｙｒ　Ｔｙｒ　ＴＡｕ　ＧＬｕ　Ｐｈａ　Ｇ
    ｉｎ　Ｌｅｕ　Ｓａｒ　ｌａ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　’ｌ’
    ｙｒ　Ｈｉｓ　Ｔｙｒ　Ｇｉｎ　１６ＬＱｕ　ｖａｌ　
    ＴｒｐＣｙｓ　１ＭＧ１７　Ｓｅｌ”　Ｓｅｒ　Ａｒｇ
    　Ｖａｌ　Ｇｌｎ　Ｔｈｒ　）ｋｒｅｉ　ｅｘｎ　Ｌｅ
    ｕ　シｕ　３２８＠ｒ　Ｇｌｙ工１＠Ｖａｌ　（：ｌｎ
    　Ｇｉｎ　Ｇ１ｎＭｎ１ａｒｌ　Ｌｅｕ　Ｌａｕ　Ａｒ
    ｇ　…ａ工ｉｓ　Ｇｌｕ　’Ｉ’ｈｒ　４８Ｇｌ！’ｌ
    　Ｇ：Ｌｎ　）Ｈｉｓ　Ｌａｕ　Ｌｅｕ　Ｇｉｎ　ｙｕ
    　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　ｒｊ、　Ｇｌｙ　Ｈｌｓ　Ｌｙｓ　
    Ｇｉｎ　Ｌａｕ　Ｇｉｎ　６４Ａｌａ　Ａｒｇ　Ｖａｎ
    　Ｌｅｕ　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｇｌｕ　Ａｒｇ　’Ｑｒ　
    ｔａｕ　Ｇｌｎ　Ａｓ１ｐ　Ｇｉｎ　ｈｒｑ　Ｌａｕ　
    ｒａｕ　ｇ。 Ｇｌｙ　Ｉｌｅ　Ｔｒｐ　Ｇｌｙ　Ｃ７ｓ　Ｓａｒ　Ｇ
    ｌｙ　Ｌｙｓ　ｆｕ工１＠　ｅｙｓ　笥ｒ　Ｔｈｒ　Ｔ
    ｂｒ　Ｖａｌ　Ｐｒｏ　９６Ｔｒｐ　Ａｓｎ　’［’ｈ
    ｒ　Ｓｉｒ　Ｔｒｐ　８＠ｒ　ＭｎＬｙｓ　Ｓｅｒ　Ｌ
    ｅｕ　Ａｓｐ　Ｔｈｒ　ＩＩｓ　Ｔｒｐ　１ｉｉｓ　ｍ
    ｎ　１１２Ｍ＠ｔ　Ｔｈｒ　ｌ［Ｉｒｐ　Ｍａｔ　Ｇｌ
    ｕ　Ｔｒｐ　Ｇｌｕ　Ａｒｇ　Ｇｌｕ工１ｅ　Ａｓｐ　
    Ａｓｎ　’Ｐｙｒ　笥ｒ　５ｅｒ　Ｓｉｒ　１２８Ａｓ
    ｐ　Ｌｙｓ　Ｇｌｙ　Ａｓｎ５ｅｒ　８ａｒ　Ｇｉｎ　
    Ｖａｎ　Ｓｏｒ　Ｇｉｎ　ｘＳｎ　Ｔｙｒ　Ｐｒｏ　ｎ
    ａ　’Ｖａｌ　Ｇｌｎ　：Ｌ４４Ａｓｎ　Ｌａｕ　Ｇｉ
    ｎ　Ｇａｙ　Ｇｌｎ　Ｍａｔ　’Ｖａｎ　Ｈｉｓ　Ｇｉ
    ｎ　Ａｌａ　：Ｃ１ａ　Ｓｅｒ　Ｐｒｏ　Ａｒｇ　Ｔｈ
    ｒ　Ｉａｕ　１６０Ａｓｎ　Ａｌａ　Ｔｒｐ　Ｖａｌ　
    Ｉ＋％　Ｖａｌ　ｆｆ１ｅ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ｌｙｓ　
    Ａｌａ　Ｐｈｅ　Ｓｔｒ　Ｐｒｏ　Ｇｌｕ　Ｖａｎ　１
    ７６エエ＠　ｐｒｏ　Ｍｅｔ　Ｐｈ＠ｓｉｒ　Ａｌａ　
    Ｌａｕ　Ｓａｒ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ｐ
    ｒｏ　Ｇｉｎ　Ａｌａｐ　Ｉａｕ　！９２Ｍｎ　’ｆ’
    ｈｒ　ｍｅｔ　Ｌａｕ　Ａｓｎ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　Ｇｌ
    ｙ　Ｇｌｙ　Ｈｌｓ　Ｇｉｎ　ｕａλｌａ　ｗｅｔ　Ｇ
    ｌｎ　Ｍｅｔ　２０ａＬｅｕ　Ｌｙｓ　Ｇｌｎ　Ｔｈｒ
    　ＩＩＪλｓｎ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ａｌａ　Ａ１１ｌ　
    Ｇｌｕ　Ｔｒｐλｓｐ　Ａｒｑ　’Ｖａ１ｍｉｓ　２２
    ４Ｐｒｏ　Ｖａｎ　！ｉ＠Ａｌａ　ｃｌｙ　ｐｒＯｒｌ
    ａ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ｇｉｎ　ｘａｔ　Ａｒｇ
    　Ｇｌｕ　Ｐｒｏ　ｋｑ　２４０Ｇｌｙ　　Ｓａｒ　　
    Ａｇｐ　　ｒｌａ　　Ａｈａ　　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　　Ｔ
    ｈｒ　　Ｓａｒ　　’ｆｈｒ　　Ｌｅｕ　　Ｇｌｎ　　
    Ｇｌｕ　　Ｇｌｎ　　Ｉｌａ　　Ｇａｙ　　２５６ＴＱ
    　Ｍｅｔ　’ｒｈｒ　ＡＳｎ　ＡｊＩｎ　ｐｒｏ　Ｐｒ
    ｏ工ｌ＠Ｐｒｏ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ｉｌａ　Ｔ
    ｙｒ　ＬＹＩ！　Ａｒｇ　２７２Ｔｒｐ工ｌｅ　ＩＩｓ
    　Ｌａｕ　Ｃ１ｙ　Ｌｅｕ　ＡＳｎ　Ｌｙｓ　Ｉｌａ　
    Ｖａｔ　Ａｒｇ　Ｍａｔ町ｒ　Ｓｅｒ　Ｐｒｏ　ｖａｌ
    　２８１１Ｓｅｒ　　Ｉｌａ　Ｌａｕ　Ａｓｐ　　工１
    ＠　ムｒｇ　Ｇｉｎ　　Ｇｌｙ　　ｐｌ”ｅｌ　　Ｌｙ
    ｓ　　ｃｔｕ　Ｐｒｏ　　ｐｈｅ　Ａｒ９　Ａｓｐ　Ｑ
    ｒ　　コロ４Ｖａ工Ａｇｐ　ンηＰｈ＠　町ｒ　Ｌｙｅ
    　’ｒｈｒ　−ｕ　ｘｒｇ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ｇｉｎ　
    Ａｌａ　ｓｓｒ　Ｇｉｎ　Ｇｌｕ　３２０Ｖａｌ　　Ｌ
    ｙｓ　Ａｓｎ　’Ｉｒｐ　ｌ＋Ｉ＋ａｔ　Ｔｈｒ　　Ｇ
    ｌｕ　’Ｉｈｒ　　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｖａｌ　　Ｇｉｎ
    　Ａａｎ　Ａｌａ　Ａｓｈ　　Ｐｒｏ　３３６＾ｓｐ　
    　Ｃ７Ｆ５　　Ｌｙｅ　　Ｔｈｒ　　Ｉｌａ　Ｌｅｕ　
    Ｌｙｓ　　Ａｌａ　　Ｌｅｕ　ＧＬｙ　　Ｐｒｏ　Ａｌ
    ａ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ｌｌｌｕ　Ｇｌｕ　コ５２ＧＬｕ
    　Ｍｅｔ　：［ｅｔ　’ｒｈｒ　Ａｌａ　ｃｙｓ　ａｌ
    ｎ　Ｇｌｙ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｃ１ｙ
    　Ｈｉｓ　Ｌｙ８Ａｌａ　３６８ｈｒｑ　Ｖａｌ　　Ｌ
    ｅｕ　Ａ１５Ｌ　Ｇｌｕ　Ａｌｌ　Ｍｅｔ　ｓａｒ　Ｇ
    ｉｎ　”／ａｌ　Ｔｈｒ　ｘｓｎ　Ｓｕｒ　入１ａ　Ｔ
    ｈｒ　工ｍｅ　　３８４Ｍａｔ　Ｍｅｔ　Ｑｌｎ　Ａｔ
    ｇ　Ｇｌｙ　Ａｓｎ　Ｐｈａ　Ａｔｇ　八ｓｎ　Ｇｌｎ
    　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　　Ｌｙｓ　Ｃｙ
    ｓ　　４００Ｐｈ＠　Ａｓｎ　　ＣＹ！ｌ　　ＧＡＹ　
    　ＬＹｇ　Ｇｌｎ、Ｇｌｙ　　１（１ｓ　　Ｉｌｅ　　
    Ａｌａ　シｙａ　　Ａｓｎ　　ＣＹｓ　　ｋｒ：ｑ　　
    Ａｈａ　　Ｐｒｏ　　４１６Ａｒｇ　ＬｙＧＬｙｓ　Ｇ
    ｌｙ　Ｃｙｓ　Ｔｒｐ　Ｌｙｓ　Ｃｙｓ　ＧＩＹ　Ｌｙ
    ｓ　ＧＬｕ　Ｇｕｙ　Ｈｉｓ　Ｇｕｎ　Ｍａｔ　Ｌｙｓ
    　４３２八、Ｇｐ　　Ｃｙｓ　　Ｔｈｒ　　Ｇ：Ｌｕ　
    　Ａｒｇ　　Ｇｌｎ　　Ａｌａ　　Ａｓｎ　　Ｐｈａ　
    　ＸＪｋｕ　　Ｇｌｙ　　Ｌｙｅ　　ＩＩｓ　　ｓｅｒ
    　　Ｌｅｕ　　Ａｌａ　　４４８Ｖａｌ　Ｌｅｕ　Ａｌ
    ａ　Ａｓｐ　Ｃ１ｕ　Ａｒｇ　ｘｒｇ　　Ｐｈｉ　Ｓｉ
    ｒ　Ａｌａを有する請求項１による融合蛋白質。 ［請求項７］　　ＨＩＶ２のｅｎｖ−域及びＨＩＶｌの
    ｐｏｌ−域からの決定基を有するアミノ酸配列ＶＩ【化
    ６】 ＳＥＱ　　ＩＤ　　　ＮＯ：６ 配列の種類ニアミノ酸配列 配列の長さ：３７６　アミノ酸 調型ニー末鎖 Ｍｅｔ　　ＴＹＬ”　ＴＹｙ　Ｌｅｕ　　Ｇｌｕ　　Ｐ
    ｈｅ　　Ｇｌｎ　　Ｇｉｎ　　Ｇｉｎ　　Ｇｌｎ　　Ｇ
    ｌｎ　　Ｌｅｕ　　Ｌｅｕ　　Ａｓｐ　　ｖａユ　’Ｖ
    ａｌ　　１６Ｌｙｓ　Ａｒｇ　Ｇｉｎ　Ｇｉｎ　Ｇｌｕ
    　ＴＡｕ　ｘａｕ　Ａｒｑ　Ｌａｕ　Ｔｈｒ　ＶａＩＴ
    ｒｐ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｌｙｒ、八ａｎ　３２Ｌ＠ｕ　
    Ｇｌｎ　Ａｌａ　ＪＲｇ　Ｖａｌ　Ｔｂｒ　Ａｈａ　Ｉ
    ｌａ　Ｇｌｕ　Ｌｙｓ　’ｌ’ｙｒ　Ｌａｕ　Ｇｌｎ　
    Ａｓｐ　Ｇｉｎ　ＡＩＺＬ　４８ＡｒｇＬｅｕ　Ａｓｎ
    　ｓｅｒ　’Ｉ’ｒｐ　ＧＩＹ　ＣＹｓ　ＡＬａ　Ｐｈ
    ｔ　Ａ丙Ｇｉｎ　’Ｖａｌ　ＣＹＢ　Ｈｉｓ　’Ｉ’ｈ
    ｒ　ＴＴｈｒ　６４Ｖａｌ　ｐｒｏ　Ｔｒｐ　１／ａｌ
    　ＪＬｌｉｎ　ＡＳｐ　Ｓａｒ　Ｌａｕ　入１ａ　Ｐｒ
    ｏ　Ａｇｐ　’Ｉ”ｒｐ　八ｇｐ　Ｍｎ　Ｍｅｔ　Ｔｈ
    ｚ　ｎ。 ’Ｊ’ｒｐ　Ｇｌｎ　Ｇｌｕ　Ｔｒｐ　Ｇｌｕ　Ｉ、ｙ
    ｓ＋　ｃｌ−ｎ　Ｖａｌ　ｈｘｑ　Ｔｙｒ　Ｌｅｕ　Ｇ
    ｌｕ　Ａｈａ　Ｊｋｓｎ　Ｉｌｅ　Ｓｓｒ　９６Ｌｙｆ
    ｓＳｅｒ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ｇｌｎ　Ａｌａ　Ｇｌｎ　
    Ｈｌｓ　Ｇｉｎ　Ｇｕｎ　Ｇｌｕ　Ｌｙｍλｓｎ　Ｍａ
    ｔ　’Ｃ’ｙｒ　Ｇｌｕ　ｌ：Ｌ２Ｌ＠ｕ　Ｇｉｎ　Ｌ
    ｙｓ　Ｉａｕ　ｈｓｎ　Ｇ＠’Ｅ　Ｔｌ’ｐ　Ａｓｐ　
    ｘｓｐ　Ｐｒｏ　Ｌｓｕ　Ｇｌｕ　ｓｓｒ　Ｃｙｓ　Ａ
    ｑ　ＩＪＹＩ！　１２８Ｃｙｓ　Ｃ１ｎ　Ｌｅｕ　Ｌｙ
    ａ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　入：Ｌａ　Ｍｅｔ　Ｈｉｓ　　Ｇ
    ｌｙ　Ｇｉｎ　’Ｖａｌ　ＡＳｐ　Ｃｙｒ、Ｓａｒ　Ｐ
    ｒｏ　　１４４Ｇｌｙ工１ａ　Ｔｒｐ　Ｇｉｎ　ＬＱｕ
    　Ａ１１ｐ　ｃｙｇ　Ｔｈｒ　Ｈｉｓ　ＸＡｕ　Ｇｌｕ
    　Ｇｌｙ　Ｌ７１ｊｌ　Ｉｌｅ　Ｉｌｅ　ＬＱｕ　１６
    ゜Ｖａｌ　ＡＬａ　’Ｖａｌ　　Ｈｉｓ　’Ｖａｌ　　
    ＡＬａ　　ｇｅｒ　Ｇａｙ　　’Ｉ’ｙｒ　Ｉｌａ　Ｇ
    ｌｕ　入１ａ　　Ｇｌｕ　Ｖａｎ　　Ｉｌｏ　　Ｐｒｏ
    　　１フロＡｌａ　Ｇｉｎ　’ｒｈｒ　ＧｌｙＧｉｎ　
    ｍｕ　Ｔｈｒ入１ａ　Ｔｙｒ　ｔｈ＠：Ｃ１＊　Ｌｅｕ
    　Ｌｙｓ　Ｉａｕ　、１ｋｌａ　ｄｌｙ　：Ｌ９２λ、
    ｒｇ　Ｔｒｐ　Ｐｒｏ　Ｖａｌ　　Ｌｙｇ　　Ｖａｌ　
    　工Ｘｓ　Ｈｌｓ　’Ｘ’ｋａ：　Ａｓｐ　ＡＩＩｎｃ
    ｌｙ　　ｓａｙ　八ｓｎ　Ｐｈａ　Ｔｈｒ　　２０８ｓ
    ｅｒ　Ｔｂｒ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　　Ｌｙｓ　λ１ａ入１
    ａ　　Ｃｙｓ　Ｔｒｐ　Ｔｒｐ　Ａｌａ　ＧＩＹ　　Ｉ
    ｌｅ　　Ｌｙｓ　　Ｇｉｎ　Ｇｌｕ　　２２４Ｐｈａ　
    Ｇｌｙ　ＩＩｓ　Ｐｒｏ　’Ｉ’ｙｒ　ｊｋｓｎ　Ｐｒ
    ｏ　Ｇｉｎ　Ｓｅｒ　Ｇｉｎ　Ｇａｙ　Ｖａｎ　Ｖａｌ
    　Ｇｌｕ　Ｓａｒ　Ｍａｔ　２４０ｘｓｎ　Ｌｙｓ　Ｇ
    ｌｕ　Ｌａｕ　Ｌｙｓ　Ｌｙｇｌ　　工１自　工１ａ　
    ＧＬｙ　Ｇｌｎ　Ｖａ工　Ａｒｇ　Ａｇｐ　Ｇｌｎ　Ａ
    Ｌａ　ＧＬｕ　２５６Ｈｉｇ　Ｉａｕ　Ｌｙｇ　Ｔｈｒ
    　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｇｌｎ　Ｍｅｔ　Ａｌａ　Ｖａｌ　
    Ｐｈｅ　］：１＋ａ　Ｈｌｓ　Ａｓｎ　Ｐｈａ　Ｌｙｓ
    　２７２ＡＲＬｙｓ　Ｇｌｙ　ＧｌｙＩｌａ　Ｇｌｙ　
    Ｇｌｙ　’！７ｒ　Ｓｅｒ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　
    Ａｒｇ　Ｉｌｅ　Ｖａｌ　Ａ！ＩＰ　２８８工ｌａ　、
    Ｔｌａ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ａｓｐ　　工Ｒｅ　Ｇｌｎ　
    ’ｒｈｒ　Ｌｉ／ｓ　Ｇｌｕ　Ｉａｕ　Ｇｉｎ　Ｌｙｓ
    　Ｇｌｎ　工Ｉｓ　　Ｈｌｓ　３０４）：、ｙｓ　：ｔ
    ｌ自Ｇｘｎ　ａｓｈ　　ｐｈａ　Ａｉ　Ｖａｎ　　Ｔｙ
    ｒ　Ｔｙｒ　Ａｒｇ　Ａｓｐ　Ｓａｒ　Ａｒｇ　Ａｓｐ
    　ｐｒｏ　　Ｌ４＝ｕ　コ２０ｆｆｒｐ　Ｌｙｇ　ＧＩ
    Ｙ　Ｐｒｏλｌａ　Ｌｙｓ　ＴＪｇｋｕ　Ｌａｕ　’Ｉ
    ’ｒｐ　Ｌｙｓ　ＧＩＹ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ａｈａ　Ｖ
    ａｌ　Ｖａｌ　３３６エ１ｅ　Ｇｉｎ　Ａｓｐ　Ｌ＋ｎ
    　Ｓｅｒ　（：ｌｕ工Ｒｅ　Ｌｙｅ　Ｖａｌ　Ｗａｎ　
    Ｐｒｏ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ｌｙｇ　Ａｌａ　Ｌ’ｙｓ　
    ３５２工１ｅ　Ｉｌｅ　Ａｒｇ　Ａｓｐ　Ｔｙｒ　ＧＬ
    ｙ　Ｌｙｓ　Ｇｌｎ　Ｓｓｒ　Ａｓｐ　Ｌｌｋｕ　ｓｉ
    ｒ　Ｐｈｅ　ｐｒｏ　Ｖａｌ　Ｌｅｕ　３６ｆｌＡｌａ
    　ｈｓｐ　（：ｌｕ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ｐｈｅ　Ｓｓｒ
    　Ａｌａを有する請求項１記載の融合蛋白質。 ［請求項８］　　ＨＩＶ２のｅｎｖ−域、ＨＩＶＩのｐ
    Ｏｌ−域、ｅｎｖ−域及びｇａｇ−域からの決定基を有
    するアミノ酸配列ＶＩＩ 【化７】 ＳＥＱ　　ＩＤ　　　ＮＯニア 配列の種類ニアミノ酸配列 配列の長さ＝７９９　アミノ酸 鎖をニー末鎖 Ｎｅｔ　Ｔｙｒ　’ｒｙｒ、　Ｌａｕ　Ｇｌｕ　ｐｈｅ
    　ｅｉｎ　Ｇｌｒｌ　Ｇｉｎ　Ｇｌｎ　Ｇｉｎ　Ｌｓｕ
    　Ｌｅｕ　Ａｓｐ　Ｖａｌ　’Ｖａｌ　１ｓｔ＋ｙｓ　
    ｘｒｇ　Ｇｌｍ　Ｇｌｎ　Ｇｌｕ　ＸＡｕ　ｍｕ　Ａｒ
    ｇ　Ｌａｕ　ｔｈｒ　Ｖａ１’Ｉ’ｒｐ　ＧＩＹ　Ｔｆ
    ｉｒ　Ｌｙｓ　ｍｎ　３２Ｌｅｕ　ｃｌｎ　Ａｈａ　ｍ
    ｇ　Ｖａｎ　Ｔｂｒ　Ａｌａ　ＩＩｓ　Ｇｌｕ　Ｌｙｅ
    　Ｔｙｒ　Ｌａｕ　Ｇｉｎ　Ａｓｐ　Ｇｌｎ　Ａｌａ　
    ４８Ａｒｇ　ｌ１ｅｕ　Ａｓｎ　Ｓａｙ：　Ｔｒｐ　Ｇ
    ｌｙ　Ｃｙｓ　Ａｈａ　Ｐｈｅ　Ａｒｇ　ｃｌｎ　ｖａ
    ｌ　Ｃｙｅ　Ｈｉｓ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　６４’Ｖａｌ−
    Ｐｒｏ　ｒｒｐ　ＶａＩＡｓｎ　ＭＰ　Ｓａｒ　Ｌａｕ
    　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ａｓｐ　Ｔｒｐ　Ａｓｐ　Ａｓｎ　
    Ｍａｔ　Ｔｈｒ　８０Ｔｒｐ　Ｇｉｎ　Ｇｌｕ　’Ｆｒ
    ｐ　Ｇｌｕ　Ｌｙｇ　Ｇｌｎ　Ｖａｌ　ｋｇ　Ｔｙｒ　
    Ｉａｕ　Ｇｌｕ　Ａｌａ　Ａｇｎ　Ｉｌａ　Ｓａｒ　９
    ６ＬＹ８５ＱＩ−′Ｌ＠ｕ　Ｇｌｕ　Ｇｌａ　Ａｌａ　
    ｃ１ｎ工ｌａ　Ｇｌｎ　Ｇｉｎ　Ｇｌｕ　Ｌｙｌｌ　Ｊ
    ｋＧｎ　Ｍｅｔ　’ｒｙｒ　Ｇｌｕ　１工２ｔａｕ　Ｇ
    ｉｎ　Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　ｓｅｒ　１ｌｌｒｐ　
    Ａｓｐ　Ａｓｐ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　ｓａｒ　Ｃ
    ’１８　ｋｐシｙｓ　１２８Ｃｙｓ　Ｇｉｎ　Ｌｅｕ　
    Ｌｙｓ　Ｇ１７　Ｇｌｕ　Ａｌａ　Ｍａｔ　Ｈｉｓ　Ｇ
    ＩＹ　ＧｌれＶａｎ　Ａｒ、ｐ　ａｙｓ　Ｓｅｒ　Ｐｒ
    ｏ　１４４Ｇｌｙ　１工＠Ｔｒｐ　Ｇｌｎ　！Ｊｕ　Ａ
    ｓｐ　ｃｙｓ　Ｔｈｒ　ｈｉｓ　−ｕ　Ｇｌｕ　ＧＩＹ
    　Ｌｙｓ工１ｅ工Ｉｓ　Ｌｅｕ　１６０Ｖａｌ　Ａｌａ
    　’Ｖａｌ　Ｈｌｓ　Ｖａｎ　ｉｌａ　Ｂａｒ　Ｇｌｙ
    　Ｔｙｒｘｒｇ　Ｇｌｕ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｈ
    ｌｓ　Ｐｒｏ　１７６Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ
    　Ｇｌｎ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　’Ｉ７ｒ　ｐｈｅ
    工１＠ＴＡｕ　ｚｙｓ　Ｌｅｕ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　１９
    ２Ａｒｇ　’ｊｒｐ　　Ｐｒｏ　Ｖａｌ　　Ｌｙｓ　　
    Ｖａｌ　ｎ白　Ｈｉｍ　’［’ｂｒ　Ａｓｐ　Ａｓｎ　
    　Ｇｌｙ　５ｅｒ　Ａｓ＋ｎ　Ｐｈｓ　　〒ｈｒ　　２
    ０８Ｓａｒ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ａｌａ
    　Ａｌａ　Ｃｙｓ　Ｔｒｐ　Ｔｒｐ　Ａｌａ　ＧｕｙＬ
    ｙｅ　ｈｙｓ　Ｇｉｎ　Ｇｌｕ　２２４ｐｈａ　ＧＩＹ
    　Ｉｌａ　Ｐｒｏ　Ｔｙｒ：Ａｇｎ　Ｐｒｏ　Ｇｉｎ　
    Ｅａｒ　Ｇｉｎ　Ｇｌｙ　ＶａＬ　Ｖａｌ　Ｇｌｕ　８
    ｅｒ　Ｍｅｔ　２４０Ａｓｎ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　ＩＪａ
    ｕ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　ＩＩｓ　ｆｆ１ｅ　Ｇｌｙ　Ｇｉ
    ｎ　Ｖａｌ　Ａｒｇ　Ａｓｐ　Ｇｌｎ　Ａｌａ　Ｇ工ｕ
    ２５６Ｘｉ！　Ｌｅｕ　ｒ、＋ｙ！ｉ　１！ｈｒ　Ａｌ
    ａ　Ｖａｌ　Ｇｉｎ　ｍａｔ　Ａｌａ　Ｖａｎ　Ｐｈｅ
    　Ｘ１ｅ　Ｈｌｓ　Ａｓｎ　Ｐｈａ　Ｌｙｇ　２７２λ
    ｒ９　　Ｌｙｇ　　ｃｌｙ　　ｃｌｙ　　工１ａ　　Ｇ
    ｌｙ　　Ｇｌｙ　　ＴＹｒ　　ｓｅｒ　　Ａｌａ　　Ｇ
    Ａ／　　Ｇｌｕ　　）ａ：ｑ　　工１＠　Ｖａｌ　　Ａ
    ｓｐ　　２ｇ８工１ｏ　　ＩＩｓ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ａ
    ｓｐ　工Ｉｓ　　ｃｕｎ　’ｒｈｒ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　
    Ｌａｕ　Ｇｉｎ　Ｌｙｇ　Ｇｌｎ　Ｉｌｅ　工１ａ　３
    ０４ＬＹ８工１１！　Ｇｕｎ　Ｊｌｇｎ　Ｐｈｅ　Ａｒ
    ｃｌ　Ｖａｌ　’ｒｙｒ　’ｒｙｒ　Ａｒｇ　Ａｊｐ　
    ５ｅｒ　ＡｒｅＪ＾ｓｐ　Ｐｒｏ　Ｌａｕ　３２０Ｔｒ
    ｐ　Ｌｙｓ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ａｌａ　ＬｙｓＬａｕ　
    Ｌｅｕ　Ｐｒｏ　Ｌｙｓ　Ｇａｙ　Ｇｌｕ　ａｎｙ　Ａ
    ｌａ　ＶａＬ　Ｖａｌ　３３６１１ａ　Ｇｉｎ　Ａｓｐ
    　Ａｓｎ　Ｓａｒ　Ｇｌｕ　ＩｌａＬｙｒａ　Ｖａｌ　
    ｖａｌ　Ｐｒｏ　Ａｔｇ八ｒへ　Ｌｙｓ　Ａｌａ　Ｌｙ
    ｓ　’３５２１１ｅ工Ｒｅ　Ａｒｇλｃｐ　Ｔｙｒ　Ｇ
    ｌｙ　Ｌｙｓ＋　ｅｘｎ　ｓａｒ　Ａｓｐ　Ａｒｇ　Ｂ
    ａｒ　Ｓａｒ　Ａｒｇ　’Ｖａｎ　ｄｉｎ　３６８Ｔｈ
    ｒ　Ａ！″ｇ　Ｇｉｎ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ｇａ
    ｙ　工ｉｓ　Ｖａｌ　Ｇｉｎ　ｃｌｎ　　Ｇｉｎ　入５
    ｌｊｌλｒｐｎ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　：１８４Ａｒｇ　Ａ
    ｌａ工１ａ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ｇｉｎ　Ｇｉｎ　Ｈｉｓ
    　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｇｌｎ　Ｌｅｕ　Ｔｈｒ　’Ｖａｎ
    　Ｔｒｐ　Ｇｌｙ　４００工ｉｓ　Ｉ、ＹＱ　Ｇｌｒｌ
    　−ｕ　Ｇｉｎ　Ａｌａ　Ａ内Ｖａｌ　Ｘ４ｕ入１ａ　
    ＶａＩＧｌｕ　Ａｒ（ｌ　Ｔａｒ　Ｌｅｕ　Ｇｉｎ　ａ
    ｘ６Ａｓｐ　Ｇｌｎ　Ａｒｇ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　ＧＬｙ
    Ｌｙｇ　Ｔｒｐ　Ｇｌｙ　ＣＹｓ　Ｓａｒ　Ｇｌｙ　Ｉ
    、ｙｇ　Ｌｅｕ　：Ｃ１ｅ　ＣＹｓ　４３２【化８］ Ｔｈｌ”　Ｔｈｒ　Ｔｈ１ｌ”　Ｖａｌ　Ｐｒｏ　Ｔｒ
    ｐ　Ａｓｎ　’［’ｈｒ　８ｅｒ　Ｔｒｐ　Ｓｓｒゑｓ
    ｎ　Ｌｙｓ　Ｓｉｒ　Ｌｅｕ　Ａｓｐ　４’４Ｂ’ｒｂ
    ｒ工ｌｌａ　ＴｒｐＨｌｓ　ａｓｎ　ＭＱｔ　Ｔｈｒ　
    Ｔｒｐ　Ｈｉ比Ｇｌｕ　Ｔｒｐ　Ｇｌｕ　Ａｒｇ　Ｇｌ
    ｕ　Ｉｌａ　Ａｓｐ　４６４Ａｓｎ　Ｔｙｒ　Ｔｈｒ　
    Ｂａｒ　Ｓｉｒ　Ａ！ＩＰ　　ｋｓ　ＧＩＹ　入ｓｎ　
    ｅａｒ　Ｓｓｒ　Ｇｉｎ　Ｖａｌ　ｇｅｒ　Ｇｌれ入ｓ
    ｎ　４８０Ｔｙｒ　Ｐｒｏ　ＩＩｓ　’Ｖａｌ　ｃｌｎ
    　Ａｓｎ　ＩＪａｕ　Ｇｉｎ　ＧＩＹ　Ｇ１１ｍ　）Ｍ
    ａｔ　Ｖａｌ　ｌ１１ｇ　Ｇｉｎ　Ａｌａ　Ｉｌａ　４
    ９６Ｓａｒ　Ｐｒｏλｒ９　Ｔｈｒ　Ｌａｕ　Ａｌｕｍ
    　ｘｌａ　’ｒｒｐ　Ｖａｌ　Ｌｙｅ　ＶａｌＡｌａ　
    Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ｌｙｇ入１ａ　５１２Ｐｈｅ　Ｓｅｒ
    Ｐｒｏ　Ｇｌｕ　ＶａｌＡｌａ　ｌ’ｒｏ　Ｍａｔ　Ｐ
    ｈａ　ｓ＠ｒ　Ａｌａ　ＩＪａｕ　Ｓｅｒ　Ｇｌｕ　Ｇ
    ｌｙ　Ａｌａ　５２Ｂ’Ｉ’ｈｒ　Ｐｒｏ　Ｇｉｎ　Ａ
    ｓｐ　Ｉａｕ　Ａｓｎ　’ａｒ　Ｎｅｔ　ｋｕ　Ａｓｎ
    　Ｔｈｒ　Ｖａｎ　Ｇｌｙ　Ｇ：Ｌｙ　Ｈｉｍ　Ｇｌｎ
    　５４４Ｊｋｌａ　Ａｌａ　ＭＱｔ　Ｇｉｎ　Ｍｅｔ　
    Ｌｅｕ　Ｉｌａ／８　Ｇｌｕ　？ｈｒＡｒｇ　Ｊｋｇｎ
    　Ｇｌｕ　ｃｌｕ　ＡｌａにＩＧＧｌｕ５６０’ｊｒｐ
    　　Ａｓｐ　　ｈｘｑ　　Ｖａｌ　　Ｈｉｓ　　Ｐｒｏ
    　　’Ｖａｌ　　日ｉｓ　　Ａｌａ　　Ｇｌｙ　　１ｌ
    ｒｏ　　Ｉｌａ　　Ａｌａ　　ｐｒｏ　　ＧＩＹ　　ｒ
    ｗユｎ　５７６ｍｅｔ　Ａｒｇ　Ｇｌｕ　Ｐｒｏ　ｈｒ
    ｑ　ＧＩＹ　Ｓｅｒ　Ａｓｐ　：Ｅｌａ　Ａｌａ　Ｇａ
    ｙ封６　Ｔｈｒ　Ｓｅｘ　部ホーｕ　５９２Ｇｉｎ　Ｏ
    ｌｕ　Ｇｌｎ　：Ｃ１！　Ｇ１７　’Ｉ’印Ｍｅｔ　ｎ
    ｒ　Ａｓｎ　Ａｓｎ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ工１ｅ　Ｐｒｏ　
    ’Ｖａｌ　Ｇｌｙ　６ｏａＧｌｕ　Ｉｌａ　’［’ｙｒ
    　Ｌｙｅ　Ａｒｇ　’ｌ’ｒｐ工ｌａ工ｌｅ　Ｌｅｕ　
    ＧｌｙＬｅｕ　Ａ５ｎ　ＬＹＳ工１ａ　Ｖａｌゑ司６２
    ４Ｍｅｔ　Ｔｙｒ　ｓａｒ　ｐｒｏ　ｖａｌ　ｓ＆ｒ　
    Ｉｌｅ　Ｌｅｕ　Ａｓｐ　：１．Ｌｅ　Ａｒｇ　Ｇｉｎ
    　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｌｙｇ　Ｇｌｕ　６４０Ｐｒｏ　Ｐ
    ｈｅ　ｈｘｑ　Ａｓｐ　Ｔｙｒ　Ｖａｌ　Ａｓｐ　Ａｒ
    ｇ　Ｐｈａ　’Ｉ’ｙｒ　Ｌｙｓ　ｍｒ　Ｌｅｕ　Ａｒ
    ｑ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　６５６Ｇ１ｎ　入１ａ　Ｂａｒ　
    Ｇｉｎ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　　Ｌｙｅ　Ａｓｎ　’ｒ；Ｐ
    ）Ｍａｔ　’！’ｈｒ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ｌａｕ　ｂｅ
    ｕ　Ｖａｌ　　６７２Ｇｉｎ　Ａｓｎ　Ａｌａ　ｘｓｎ
    　Ｐｒｏ　Ａｓｐ　Ｃｙｓ　Ｌｙｓ　Ｔｈｒ工１ｍ　ｋ
    ｕ　Ｌｙｓ　Ａｌａ　Ｌａｕ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　６８８
    Ａｌａ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　ｌＡｕ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　ｍ
    ａｔ　Ｍａｔ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　ｅｙｓ　ｄｌｎ　Ｇｌ
    ｙ　Ｖａｎ　Ｇｌｙ　Ｇｕｙ　７０４Ｐｒｏ　Ｇｕｙ　
    ｌｌｉ＠Ｌｙｓ　Ａｌａ　Ａｒｇ　Ｖａｌシｕ　ｘｌａ
    　ｃｌｕ　Ａｌａ　Ｍｅｔ　Ｂａｒ　Ｇｉｎ　Ｖａｌ　
    Ｔｈｒ　７２０八ｓｎ　Ｓｅｘ　　入１ａ　　Ｔｈｒ　
    　工１ｅ　　Ｍｅｔ　Ｍａｔ　　Ｇｉｎ　　ＡＨＧｌｙ
    　ｈｅｎ　　ｐｈａ　Ａｒ９　八ａｎ　　Ｇｉｎ　　Ｌ
    ｙｓ　　７３６Ｌｙｓ　　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　Ｌｙａ　　
    ｃｙｇ　　Ｐｈａ　Ａｇｎ　　ｃｙｓ　　ｃｌｙ　　Ｌ
    ｙｅ　　Ｇｌｕ　ｃｌｙ　Ｈｌｓ　　工１＊　Ｊｄａ　
    　Ｌｙｓ　　７５２ｘｓｎ　Ｃｙｇ　Ａｒｇ　Ａｌａ　
    ｐｒｏ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ｇｌｙ　Ｃｙｓ　Ｔ
    ｒｐ　Ｌｙｓ　Ｃｙｓ　Ｇｌｙ　Ｉ、ｙｇ　Ｇｌｕ　７
    ６８Ｇａｙ　Ｈｉｓ　Ｇｉｎ　Ｍｅｔ　Ｌｙｓ　Ｊｕｍ
    ｐ　ＣＩＦｌｉ　Ｔｈｒ　Ｇｌｕ　ｘｒｇ　Ｇｌｎ　Ａ
    ｌｌ　）４ｎ　Ｐｈｅ　−ｕ　Ｇ１７７８４Ｌｙｓ工ｌ
    ａ　ｓ＠ｒ　Ｌｅｕ　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｌａｕ　Ａｌａ
    　Ａｓｐ　Ｃ１ｕ　社ｇ　Ａｒｑ　Ｐｈａ　ｓａｒ　Ａ
    ｌａを有する請求項１記載の融合蛋白質。 ［請求項９］　　ＨＩＶ２のｅｎｖ−域、ＨＩＶＩのｐ
    。 ｌ−域、ｅｎｖ−域及びｇａｇ−域を有するアミノ酸配
    列ＶＩＩＩ 【化９】 ＳＥＱ　　ＩＤ　　　ＮＯ：８ 配列の種類ニアミノ酸配列 配列の長さニア７０　アミノ酸 調型ニー末鎖 Ｍｓｔ　Ｔｙｒ　’ｌ’ｙｒ　Ｘａｕ　Ｇｌｕ　Ｐｈｓ
    　Ｇｌｎ　Ｇｕｎ　Ｇｉｎ　ＧｌｎＧｉｎ　Ｌｅｕ　Ｌ
    ｓｕ　Ａｓｐ　Ｖａｌ　ｖａｌ　１６Ｌｙｓ　）ｒｇ　
    Ｇｉｎ　Ｇｌｎ　Ｇｌｕ　ＩＡｕ　Ｌｓｕ　ｈｑ　Ｌｅ
    ｕ　Ｔｈｒ　Ｍａｌｆｒｐ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｌｙｓ　
    Ａｓｎゴ２Ｌ＠ｕ　Ｇｌｎ　Ａｌａ　Ａｒｇ　’Ｖａｎ
    　’ｒｈｒ　Ａｌａ工１ｅ　ａｌｕ　Ｌｙｓ　Ｔｙｒ　
    Ｌａｕ　Ｇｉｎ　Ａｓｐ　Ｇｉｎ　Ａｌａ　４８Ａｒｇ
    　Ｌａｕ　Ａｓｎ　Ｓｉｒ　’Ｉ’ｒｐＧＩＹ　Ｃｙｓ
    　Ａｌａ　Ｐｈｅ　ＡｒｇＧｉｎ　Ｖａｌ　ＣＹｓ　Ｈ
    ｌｓ　’ｒｈｒ　Ｔｈｒ　６４ｖ＆１　　ｋ５　Ｔｒｐ
    ’Ｖａｌ　Ａｆｔｎ　Ａｓｐ　ｓａｒ　Ｌａｕ　入１ａ
    　Ｐｒｏ　入ｇｐ　’Ｅ’ｒｐ　Ａｓｐ　Ａｓｎ　Ｍｅ
    ｔ　Ｔｈｒ　８０ＴＬ”Ｐ　ｃｌｎ　Ｇｌｕ　’ｌ’ｒ
    ｐ　Ｇｌｕ　Ｌｙｓ　Ｇｌｎ　Ｖａｎ　ｘｒｇ　Ｔｙｒ
    　Ｌｓｕ　Ｇｌｕ　ｍａ　Ａｓｎ　Ｉｌｅ　ｅａｒ　９
    ６Ｌｙ５ｓｅｒ　Ｌａｕ　Ｇｌｕ　Ｇｉｎ　Ａｌａ　Ｇ
    ｉｎ　ｘ工＠　Ｇｉｎ　Ｇｌｎ　Ｇｌｕ　Ｌｙｓ　Ａｓ
    ｎ　ｎｅｔ　Ｔｙｒ　Ｇｌｕ　ｘｌｚｕｕ　Ｇｌｎ　Ｌ
    ７ｊｉ　Ｌ＠ｕ入ｇｌｎ　Ｈｅｒ　Ｔ卯Ａｓｐ　Ａｓｐ
    　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　ｓｅｒ　Ｃｆｓ　Ａｓｐ　
    Ｉ＋７！Ｅ　１２８Ｃｙｇ　Ｇｉｎ　Ｌｅｕ　Ｌｙｅ　
    ＧＩＹ　Ｇｌｕ　Ａｌａ　ｍａｔ　ｗｉｇ　ＧＩＹ　Ｇ
    ｉｎ　Ｖａｌ　Ａｓｐ　ａｙｓ　５＊ｒ　Ｐｒｏ　１４
    ４Ｇｌｙ　Ｘｉｓ　’Ｉ’ｒｐ　Ｇｉｎ　ＬＩＩ！ｕ　
    Ａｓｐ　Ｃｙｒ、　’ａｒ　Ｈｌｓ　ｘａｕ　Ｇｌｕ　
    Ｇｌｙ　Ｌｙｓ　！１＊工１６　Ｌａｕ　１６０Ｖａｌ
    　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｅｉｓ　ｖａｌ　　Ａｌａ　　Ｓａ
    ｒ　ＧＩＹ　ｔｙｒ　　工Ｉｓ　Ｇｌｕ　　Ａｌａ　Ｇ
    ｌｕ　Ｖａｌ　　工１ｅ　　ｐｒｏ　　１７６λｌａ　
    Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ｇｉｎ　Ｇｌｕ　’＆ｒ　Ａ
    ｌａ　Ｔｙｒ　Ｐｈｅ　工１ａ　Ｉａｕ　Ｉ、ｙｇ　Ｌ
    ｅｕ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　１９２Ａｒｇ　Ｔｒｐ　　Ｐｒ
    ｏ　Ｖａｌ　　Ｌｙｒ、　ｖａｌ　　Ｉｌｅ　　Ｈｌｓ
    　　Ｔｈｒ　Ａｓｐ　Ａｓ＋ｎ　　ｃｌｙ　Ｓｉｒ　Ａ
    ｓｎ　Ｐｈａ　　’ｊｈｒ　　２０８ｓｓｒ　’ｒｈｒ
    　Ｔｂｒ　ｖａＩＬｙｓ　Ａｌａ轟１ａ　Ｃｙｓ　Ｔｒ
    ｐ　Ｔｒｐ　Ａｌａ　ＧｌｙＬｙｅ　Ｌｙｓ　Ｇｉｎ　
    Ｇｌｕ　２２４Ｐｈａ　Ｇｘｙ工１＠Ｐｒｏ　Ｔｙｒλ
    Ａｎ　Ｉ’ｒＯＧｉｎ　ｓａｔ　Ｇｌｎ　Ｇｌｙ　Ｖａ
    ｌ　Ｖａｌ　Ｇｌｕ　Ｓｓｒ　ＭＱｔ　２４０Ａｓｎ　
    ＩＩＹｓ　Ｇｌｕ　）Ａｕ　ＬＹｓ　　Ｌｙｓ　工ｌｅ
    　　Ｉｌａ　Ｇｕｙ　Ｇｉｎ　Ｖａｌ　Ａｒｇ　Ａｓｐ
    　Ｇｌｎ　入１ａ　ａｘｕ　２５６！Ｉｉｓ　Ｌａｕ　
    Ｌｙｇ　’ｒｈｒ　ＡＩａ’Ｖ＆ｌ　ｃｘｎ　Ｍｅｔ　
    Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｐｈｅ　Ｇｌｕ　Ｈ２Ｓ　Ａｓｎ　Ｐ
    ｈｅ　Ｌｙｓ　２７２Ａｒｇ　　Ｌｙｓ　　Ｇｌｙ　　
    Ｇｌｙ　　ｎ＊　　Ｇｌｙ　　Ｇｌｙ　　Ｔｙｒ　　５
    ｉｌｒ　　Ａｌａ　　ＧＬｙ　　Ｇｌｕ　　Ａｒｇ　　
    Ｉｌｅ　　Ｖａｌ　　Ａｓｐ　　２８８工ｌａ　ｎ＠Ａ
    ｌａ　１ＩＩｈｒ　Ａｓｐ工１ａ　Ｇｌｎ　Ｔｈ）”　
    Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　Ｇ：Ｌｎ　Ｉ、ｙｓ　Ｇｌｎ
    　Ｉｌａ　Ｉｌａ　３０４Ｌｙｓ　　Ｘユ４４　　Ｇｉ
    ｎ　　Ａｓｎ　　Ｐｈｅ　　Ａｒｇ　　’ＶａＩ　Ｔｙ
    ｒ　　Ｔｙｒ　　ｘｒｇ　　Ａｓｐ　　Ｓｅｒ　　Ａｒ
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    ｐ　Ｌｙｓ　Ｇｕｙ　Ｐｒｏ　ＡＬａ　Ｌｙｇ　Ｌａｕ
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    Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　８ｅｒ　ＴｈｒＬａｕ　５９
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    Ｖａ：Ｌ　Ａｓｐ　Ａｒｇ　Ｐｈａ　Ｔｙｒ　Ｌｙｓ　
    Ｔｈｒ　Ｉａｕ　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　６５６Ｇ工
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    　Ａｌａ　Ｌ＋ｎ　Ｐｒｏ　Ａｓｐ　Ｃｙｓ　Ｉ、ｙａ
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    Ｌａｕ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　ＭＱｔ　Ｍａｔ　Ｔｈｒ入１
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    Ｙ　７０４Ｐｒｏ　ｃｌｙ　ｕｉｇ　　Ｌｙｇ　八ｌａ
    　　Ａｒｇ　Ｖａｌ　　Ｌａｕ　Ａｌａ　　Ｇｌｕ　Ａ
    ｌａ　Ｍａｔ　　８ａｒ　Ｇｉｎ　Ｖａｌ　’Ｉ”ｈｒ
    　７２０Ａｓｎ　Ｓａｒ　入１ａ　Ｔｈｒ　ＩＩ＠　Ｍ
    ｅｔ　Ｍｓａｔ　Ｇｌｎ　入ｉ　Ｇａｙ　ｋｓｎ　　ｐ
    ｈｍ　　Ａｒｇ　Ａｆｌｎ　Ｇｉｎ　Ｘ＋ｙｓ　　７コ
    ６Ｌｙｇ　Ｔｈｒ　　Ｖａｌ　　Ｌｙｓ　　Ｃｙｓ　　
    Ｐｈｉ　　Ａｓｎ　　Ｃｙｓ　　Ｇｌｙ　　Ｌｙｓ　　
    Ｇｌｕ　　Ｇｌｙ　　Ｅｉｓ　　ＩＬｅ　　Ａｌａ　　
    Ｌｙｅ　　）５２Ａｇｎ　　Ｃ’ＹＳ　ＡＩ　Ａｌａ　
    　Ｓｅｒ　Ａｒｑ　　ＬＹＳ　　Ｌｙｓ　　Ａｒｇ　Ａ
    ｒｇ　Ａｒｇ　　Ｌｙｓ　　Ｉ、ｙｓ　　Ａｒｇ　Ａｒ
    ｇ　Ｌｙｓ　　フロＢＩ、ｙｓ　’ｆ、ｙｓ を有し、かつＣ−末端はポリ（Ｌｙｓ、Ａｒｇ）配列を
    有する請求項１記載の融合蛋白質。 【請求項１０】　　請求項１から９までのいずれか１項
    記載の融合蛋白質をコードすることを特徴とする組換Ｄ
    Ｎ０ 【請求項１１】　　請求項１０記載の組換ＤＮＡ−配列
    １つ又は複数のコピーを少なくとも１つ有することを特
    徴とする組換ベクター。 【請求項１２】　　請求項１０による組換ＤＮＡ又は請
    求項１１による組換ベクターで形質転換されていること
    を特徴とする微生物。 【請求項１３】　　微生物を請求項１０記載の組換ＤＮ
    Ａ又は請求項１１による組換ベクターで形質転換し、請
    求項１記載の融合蛋白質を通常の生物学的方法により細
    胞又は培地から取得することを特徴とする請求項１から
    ９までのいずれか１項記載の融合蛋白質の取得法。 【請求項１４］　　（ａ）　　請求項１から１１までの
    いずれか１項記載のＨＩＶＩ又は／及びＨＩＶ２の抗原
    又は／及び免疫原決定基を少なくとも１つ有し、かつ固
    相に結合しているか又は恒温保持工程の間好適な特異的
    固相に容易に軽く結合するように変性されている融合蛋
    白質１種又は複数種、 （ｂ）　　融合蛋白質の抗原決定基への抗−ＨＩＶ−抗
    体の生理学的結合を容認し、かつ同時に非特異的結合を
    抑圧する恒温保持緩衝液、 （ｃ）　　抗原−結合抗体を認識するための検出試薬及
    び（ｄ）　　結合した特異的抗体の定量用システム、を
    含有することを特徴とするＨＩＶ−抗体−検出試薬。
JP3009782A 1990-01-30 1991-01-30 融合蛋白質、組換ｄｎａ、組換ベクター、微生物、融合蛋白の取得法及びｈｉｖ−抗体−検出試薬 Ceased JPH089638B2 (ja)

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EP0440207A3 (en) 1993-04-28
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