JPH04188045A

JPH04188045A - 検体測定装置

Info

Publication number: JPH04188045A
Application number: JP2318989A
Authority: JP
Inventors: Atsushi Saito; 斉藤　厚志; Yoshiyuki Azumaya; 良行東家; Tatsuya Yamazaki; 達也山崎; Yuji Ito; 勇二伊藤
Original assignee: Canon Inc
Current assignee: Canon Inc
Priority date: 1990-11-21
Filing date: 1990-11-21
Publication date: 1992-07-06

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】［産業上の利用分野］本発明は個々の検体に光を照射し光学的測定を行うこと
で検体の解析を行う検体測定の分野に関する。

［従来の技術］検体検査装置の一例としてフローサイトメータが従来か
ら知られており、生物学分野や医療分野などで広（用い
られている。

このフローサイトメータの典型的な構成を第６図に示す
。血液等のサンプル液を前処理として蛍光試薬等で染色
処理し適切な反応時間及び希釈濃度に調整する。そして
これをサンプル液容器１１５に入れる。また、蒸留水や
生理食塩水等のソース液はシース液容器１１４に入れる
。サンプル液容器１１５及びシース液容器１１４は各々
不図示の加圧機構により加圧される。そして、シースフ
ロー原理により、フローセル１０４内でサンプル液がシ
ース液に包まれて細い流れに収斂され、フローセル１０
４内の流通部のほぼ中央部を通過する。

この時、サンプル液に含まれる個々の被検粒子（細胞、
微生物、担体粒子など）すなわち検体は分離されて１粒
或いは１塊ずつ順次流れる。この被検粒子の流れに対し
て、レーザ光源１０１から出射されたレーザ光が、母線
方向が各々流通部方向、流通部方向と直交したシリンド
リカルレンズ１０２．１０３の組によって任意の形状に
収斂され照射される。被検粒子に照射される光ビームの
形状は、一般には流れに対して直交する方向に長径を有
する楕円形状であることが好ましい。これは個々の被検
粒子の流れの位置が流体中で若干変動しても、被検粒子
に均一の強度で光ビームが照射されるようにするためで
ある。

被検粒子に光ビームが照射されると散乱光が生じる。前
記散乱光の内、光路前方方向に発する前方散乱光は集光
レンズ１０５、光検出器１０６によって測光される。な
お照射された光ビームが直接、光検出器１０６に入射す
るのを防ぐため、光路中葉光レンズ１０５の手前には光
吸収性の微小なストッパ１００が設けられ、照射光源か
らの直接光、及び被検粒子を光透過した透過光を除去す
るようになっている。これにより被検粒子からの散乱光
のみを測光することができる。

また前記散乱光の内、レーザ光軸及び被検粒子の流れに
それぞれ直交する側方方向に発する光は集光レンズ１０
７で集光される。集光された光はダイクロイックミラー
１０８で反射され、散乱光の波長即ちレーザ光の波長（
Ａｒ＋レーザであれば４８８ｎｍ）を選択的に透過させ
るバンドパスフィルタ１２１を経て光検出器１１１にて
側方散乱光が測光される。また被検粒子が蛍光染色され
ている場合には、散乱光と共に発生する複数色の蛍光を
測光するため、集光レンズ１０７によって集光され、ダ
イクロイックミラー１０８を通過した蛍光の内、ダイク
ロイックミラー１０９、緑色蛍光波長用（５３０ｎｍ付
近）のバンドパスフィルタ１２２、光検出器１１２の組
によって緑色蛍光が検出され、また全反射ミラ−１１０
１赤色蛍光波長用（５７Ｏｎｍ付近）のバンドパスフィ
ルタ１２３、光検出器１１３の組によって赤色蛍光が検
出される。光検出器１０６．１１１．１１２．１１３の
信号は各々演算回路１１６に人力され、該演算回路１１
６において、粒子の種類や性質等の解析、あるいは抗原
抗体反応の測定等の演算が行なわれる。

〔発明が解決しようとしている課題］しかしながら、従来は複数色の蛍光を測光するのに各蛍
光毎に専用の光検出器を使用している。

これまでは赤色蛍光と緑色蛍光の２色、あるいはこれに
黄色蛍光を加えた３色を同時に測光する構成が一般的で
あったが、近年、更なる多色化の要望が高まり、新たな
蛍光剤の開発も進んでいる。

これにより同時に使用する蛍光チャンネル数が増加する
と、それに応じて光検出器の数も増加してしまうことに
なる。即ち、光学配置が複雑化し、フォトマル等の高価
な光検出器が多数必要となってしまう問題点があった。

そこで本願出願人は特願平１−３２５００１号等におい
て、複数の種類の光を共通の光検出器で時系列に検出す
ることで、光検出器の数量上の測定パラメータが得られ
る装置を提案した。本発明は該提案した装置の更なる改
良を目的とする。

［目的を達成するための手段］上記目的を達成する本発明の検体測定装置は、個々の検
体を順次移動させる手段と、第１の照射光を生成し、検
体が移動する第１の位置に照射する第１照射手段と、第
２の照射光を生成し、前記第１の位置とは異なる第２の
位置に照射する第２照射手段と、前記第１、第２の位置
を通過する検体から発する第１１第２の光学特性の光を
同一光検出器で時系列に検出する光検出手段と、前記第
１１第２のそれぞれの位置に複数の検体がほぼ同時に通
過したことを判断する判断手段と、該判断手段の判断に
基づいて、前記光検出手段での検出をキャンセルする手
段とを有することを特徴とする。

［実施例］以下、本発明の実施例を図面を用いて詳細に説明する。

第１図、第２図は第１の実施例の構成図を表わす。第１
図は実施例の基本的な構成図であり、前方の光学系、流
体系、制御系等を有する全体システムを表わす。同図に
おいて１はサンプル液中の被検粒子（例えば生体細胞や
担体粒子）をシース液で包み込むようにして１個ずつ分
離して順に流す、いわゆるシースフローを形成するため
のフローセルで、フローセルｌ内の流通部を被検粒子が
紙面上方から下方に向けて流れる。シースフローを形成
するための流体系の構成は、血液試料や免疫反応液等の
サンプル液を蓄積するサンプル液容器１５０、それを加
圧するためのポンプ１５２、サンプル液の流量を調節す
る電気式レギュレータ１５４、生理食塩水等のシース液
を蓄積するシース液容器１５１、それを加圧するポンプ
１５３、シース液の流量を調節する電気式レギュレータ
１５５、そしてこれらを流体的に接続しフローセルｌ内
に導（ためのチューブから成る。サンプル液容器１５０
内をポンプ１５２によって加圧してサンプル液を押出し
、一方、ンース液容器１５１内をポンプ１５３で加圧し
てシース液を押出し、レギュレータ１５４．１５５の各
々による流量調節によりフローセルｌ内での状態、すな
わち流れ速度や個々の粒子の流れ間隔等が設定される。

なお上記のようなポンプとレギュレータによる加圧機構
に限らず、特開昭２−２１３７４４号公報に示されるよ
うなシリンジを用いた構成を採用して、シリンジの押出
し速度を調節するようにしても良い。

さて、次に前方の光学系について説明する。２゜３は波
長の異なるレーザ光源であり、この分野では一般的なＡ
ｒ＋レーザ、Ｈｅ−Ｎｅレーザ、色素レーザ、半導体レ
ーザ等のレーザ、更にはレーザに限らず様々な光源が利
用できる。なお第５図（Ｄ）のように、レーザ光源を３
つ以上用意して各光源からのレーザビームを測定条件に
応じて選択的に照射光路に導くようにすれば、更に多目
的な測定が可能な汎用性の高いシステムとなる。第５図
（Ｄ）において、７４は全反射ミラー、７５はハーフミ
ラ−１７６は光シャッタである。

第１図、第２図に戻って、４ａ、４ｂは照射光ビームを
フローセル部の被検領域に結像する集光レンズであり、
レーザ光源２及び３からのレーザビームをそれぞれフロ
ーセル中のｌａ、ｌｂの位置に結像する。結像ビームの
形状としては流れに直交する方向に長径を持つ楕円形状
が好ましい。

ここで両照射位置１ａ、Ｉｂの間の距離は１００μｍ程
度であり、これは測定する粒子のサイズよりは大きく、
順次流れる粒子の流れ間隔よりは十分に短いものである
。ビーム直進方向に配置される部材５ａ、５ｂはレーザ
光源２．３からのレーザビームをそれぞれ遮断し暗視野
光学系を形成するための光ストッパであり、６は前方散
乱光を集光する集光レンズ、７は視野絞りで、ｌａ、ｌ
ｂの位置に対応する共役位置にそれぞれ開ロアａ。

７ｂが設けられる。８ａ、８ｂはｌａ、ｌｂ位位置らの
前方散乱光を検知する光検出器である。

なお２本のレーザビームを形成するのに必ずしも２個の
レーザ光源を用意する必要はない。例えば第５図（Ａ）
（Ｂ）（Ｃ）のように単一レーザ光源からのビームを、
ミラ一部材によって２本に分岐しても良い。この時、第
５図（Ｂ）（Ｃ）ような形態を取れば波長の異なる複数
のビームが得られる。第５図（Ａ）は短波長のシングル
モードレーザからのレーザビームをハーフミラ−７１と
全反射ミラー７２によって同−波長の２光束を作り出す
光学系である。又、第５図（Ｂ）はレーザビームをハー
フミラ−７１と全反射ミラー７２によって２光束に分岐
して、それぞれの分岐ビームを波長変換部材７７２．７
７ｂ　（非線形光学素子やＡＯなど）によって波長変換
することにより異なる波長の２光束を作り出す光学系で
ある。更に第５図（Ｃ）は複数波長のマルチモードレー
ザがらのレーザビームをダイクロイックミラー７３で興
なる波長の２光束に分岐して、異なる波長の２光束を作
り出す光学系である。

第１図の構成において、レーザ光源２より出射されたレ
ーザ光は集光レンズ４ａにより集光され被検領域１ａに
照射される。この被検領域１ａに被検粒子が通過すると
該被検粒子によって光散乱が起き、この時、被検粒子が
蛍光染色されていれば蛍光も励起されて散乱光と共に発
生する。前記発生する散乱光の内の一部は光路前方方向
に進み前方散乱光となる。この前方散乱光は集光レンズ
６、及び視野絞り７の開口部７ａを経て、光検出器８ａ
により強度検出され第１の前方散乱信号が得られる。同
様にして、レーザ光源３より出射されたレーザ光は集光
レンズ４ｂにより集光され被検領域１ｂに照射される。

この被検領域１ｂに被検粒子が通過すると、前方散乱光
は開口部７ｂを経て、光検出器８ｂにより強度検出され
第２の前方散乱信号が得られる。

又、１６０は入力設定手段であり、システムの各種モー
ド、被検粒子の流速や通過間隔、使用する蛍光剤の種類
、測定項目等、様々な測定条件を入力設定する。１６１
は記憶演算回路であり、光検出器８ａ、８ｂの出力、お
よび後述の側方の光学系の光検出器２５．２３の出力が
、ゲイン切換え可能な増幅アンプ、ピークホールド回路
、積分回路、Ａ／Ｄコンバータ等を介して取込まれ、ピ
ーク値や積分値のデジタルデータが記憶手段に記憶され
る。このデータを基に後に粒子解析の演算がなされ、こ
の結果はＣＲＴやプリンタ等の出力手段に出力される。

解析方法に関してはヒストグラムやサイトグラムを用い
た統計的処理が一般的であるが、詳細な説明はここでは
省略する。又、該記憶演算手段１６１は２つの前方散乱
光の検出出力タイミングから流速の算出、誤測定データ
の取込みキャンセル等を行なう機能も備えている。１６
２はコントロール手段でありシステムの各種動作手段の
総合的なコントロールを行なう。具体的には、ポンプ１
５２，１５３の駆動、電気式レギュレータ１５４，１５
５の調節、レーザ光源２，３の各々の０Ｎ１０ＦＦ制御
、後述する蛍光検出レベルの切換え等である。

次に第２図を用いて側方の光学系の説明を行なう。第２
図は第１図を側方から見た図であり側方の光学系を詳細
に表わしている。図中、１１は集光レンズであり、レー
ザ光源２，３からの照射レーザビーム直進方向と直交す
る側方方向に発する光を集光する。１３は視野絞りで、
ｌａ、ｌｂの両位置に対応した共役位置に開口部１３ａ
、１３ｂが設けられる。１４ａ、１４ｂは平行平板、１
５ａ。

１５はレンズであり、両部材の組によってｌａｌ。

１ｂからのそれぞれの光が平行光束に変換される。

２１ａ、２１ｂ、３１ａ、３１ｂは被検粒子より生じた
側方散乱光及び蛍光を色分解するためのダイクロイック
ミラー、２２ａ、２２ｂ、３２ａ。

３２ｂはそれぞれの蛍光の波長を選択するバンドパスフ
ィルタであり、このダイクロイックミラーとバンドパス
フィルタの組合わせによりそれぞれの検出光波長が選択
される。２６ａ、２６ｂ、３６ａ。

３６ｂはそれぞれ所定の透過率を有するＮＤフィルタで
ある。２４．３４はレンズ、２５．３５は側方散乱光及
び蛍光を検知するための光検出器であり、該光検出器と
しては検出感度の高いフォトマルチプライヤが好適であ
る。該光検出器２５゜３５は記憶演算手段６１に接続さ
れている。ここで位置１ａから発した光は開口部１３ａ
で一旦結像し、ダイクロイックミラー２１ａ、３１ａ、
バンドパスフィルタ２２　ａ、３２　ａＳＮＤフィルタ
２６ａ、３６ａの光路を通って光検出器２５．２５に導
かれてここで再結像する。一方、１トから発した光は開
口部１３ｂで一旦結像し、ダイクロイックミラー２１ｂ
、３１ｂ、バンドパスフィルタ２２ｂ、３２ｂ、ＮＤフ
ィルタ２６ｂ、３６ｂの光路を通って光検出器２５．２
５に導かれて再結像する。

第３図は上記側方光学系の変形例であり、第１図を上方
から見た図である。なお、前方光学系は図では省略しで
ある。図中、先の図と同一の符号は同一あるいは同等の
部材を表わす。

レーザ光源２からのレーザの照射位置１ａから側方に発
する光は一旦、図中上方の光路に引き回され、コーナー
キューブやポロプリズム等の反射部材９９を経て、開口
絞り１３ａで一旦結像し、光検出器２５．３５で再結像
して入射する。一方レーザ光源３からのレーザの照射位
置１ｂから側方に発する光は図中下方の光路に導かれ、
開口絞り１３ｂで一旦結像し、共通の光検出器２５．３
５で再結像して検出される。本例は基本的には先の第２
図の光学系と同等であるが、１ａからの蛍光と１ｂから
の蛍光を検出する光路とを明確に分離して光学配置した
ところに特徴がある。

第４図は被検粒子の通過に際して各光検出器で得られる
検出パルスの一例である。第４図（Ａ）、第４図（Ｂ）
はそれぞれ光検出器８ａ、８ｂで得れれる前方散乱光の
検出出力、第４図（Ｃ）、第４図（Ｆ）はそれらを所定
閾値と比較して作り出したタイミングパルス、第４図（
Ｅ）、第４図（Ｆ）はそれぞれ光検出器２５．３５で得
られる蛍光の検出出力を示す。各光検出器２５．３５に
よる蛍光の検出出力は被検粒子がｌａ、Ｉｂ位置を通過
する際に時系列的に得られ、これを先のタイミングパル
スを利用してそれぞれ別々に時系列に取込む。

以上のように本実施例では側方２個の検出器で４チヤン
ネル検出が可能で、これに２つの前方散乱光を加えた計
６種類の異なる光学特性の光が検出可能となる。

なお、以上の説明では側方の光検出器の数が２個の実施
例を示したが、検出器の個数はこれに限定されるもので
は無い。１個であれば一般的な従来例と同様、２色の蛍
光を単一の光検出器で得ることができ　　　　　　　　
　　　　　　−一装置構成が非常に簡略なものとなる。又、光検出器の数が３個以上であれば更に多くのパ
ラメータを得ることができる。又、側方の光検出器で検
出するのは蛍光には限らず側方散乱光を検出するように
しても良い。

さて以上はシステムの基本的な形態の説明であるが、次
に実施例のシステムの特徴的な機能についてそれぞれ説
明する。

（１）１　　　に、じたレーザ本実施例のシステムを多目的に使用する場合、測定目的
や使用する蛍光剤の種類によっては、必ずしも２つのレ
ーザ光波長は必要ではなく片方だけで事足りる場合もあ
る。あるいは第１１図（Ｄ）のように３種類以上の光源
からのレーザービームを選択的に照射する形態を取った
場合は、使用しないレーザ光波長は不必要である。

そこで本実施例のシステムでは、使用用途に応じて複数
の測定モードを切換え、使用しないレーザ光源をＯＦＦ
にする機能を有している。具体的には２本のレーザ光を
同時に照射して時系列的な測定を行なう第１のモードと
、どちらが一方のレーザ光を照射して他方を非作動にす
る第２のモードとに切換えることができる。これは入力
設定手段１６０において設定された測定条件に応じて、
コントロール手段１６２が各レーザ光源の照射の０Ｎ１
０ＦＦを独立して行ない、非使用のレーザ光源をスリー
ブモードにするか、あるいはレーザ光源の電源を遮断す
る。これによってシステムの低電力消費化およびレーザ
寿命の延長を達成している。

（２）流］し２二つ【化２つのレーザ照射位ｆｉｌ　１　ａと１ｂの両地点間の
距離は一定値（約１００μｍ）であるので、前方散乱光
検出器８ａ、８ｂの出力から作られる第４図（Ｃ）、第
４図（Ｄ）に示す両タイミングパルスの発生タイミング
を比較し、その時間差から被検粒子の通過速度すなわち
流速を求めることができる。このタイミングの比較と流
速の算出は記憶演算回路１６１で行ない、コントロール
手段１６２ではこの流速を常時フィードバックして、入
力設定手段１６０で設定された流速となるように電気式
レギュレータ１５４，１５５の調節を行なう。

これにより設定された流速に常に正確に保つことができ
、安定性及び測定精度を向上させることができる。

なおポンプと電気式レギュレータとによる加圧機構には
限らず、シリンジを用いた加圧機構を用いても良い。そ
の場合シリンジの押出し速度を調節するようにする。

（３）；データの　゛みキャンセル次々と流れる被検粒子の流れ間隔は、２か所の照射位置
１ａ、ｌｂの間隔（１００μｍ程度）よりは十分に大き
く設定されているが、稀にあまり間隔を置かずに流れて
くる場合もあり、両位置にほぼ同時にそれぞれの粒子が
差し掛かることもあり得る。この場合には両位置からそ
れぞれ散乱光及び蛍光が発生して共通の光検出器に混在
して入射し混在データ検出されてしまう。

そこでこれを防ぐために本実施例では、ｌａ。

Ｉｂの位置に検体がほぼ同時に通過したことを検知して
、はぼ同時に通過したと判断されたら、検出手段からの
データをキャンセルして取込まないような手段を設けて
いる。具体的には、記憶演算手段１６１において、第４
図（Ｃ）、第４図（Ｄ）に示すタイミングパルスの発生
タイミングがもし一致あるいは非常に接近している場合
は、ｌａ。

Ｉｂの両位置に２個の被検粒子がほぼ同時に通過したと
判断して、この時の各光検出器のデータはキャンセルし
て取込まないようにしている。

あるいは別法として次のような方法でも良い。

粒子が１ａからｉｂに移行するまでの時間はほぼ一定と
考えられる。そこで粒子が１ａを通過する時の検出パル
ス（光検出器８ａの出力）が発生してから、その粒子が
１ｂに移行して通過するだけの所定期間の間に、再びｌ
ａ（光検出器８ａの出力）から検出パルスが発生したら
、粒子が続けて流れてきたと判断して、データ取込みを
キャンセルする。

以上のような手段を設けることにより、誤データの取込
みが無いため、より確実な測定が行なえる。

（４）　　　レベルの　　−１一般に蛍光と散乱光の強度レベルは大きく異なり、又、
蛍光色素の種類によっても発生する蛍光光量が太き（異
なる。よって、これらを共通の光検出器で時系列に検出
するためには非常にダイナミックレンジの広い検出器が
必要になってしまう。

そこで本実施例では光検出器に至る各光路中に、使用す
る蛍光の発光量に応じて通過光量を調節する通過光量調
節手段（ＮＤフィルタ２６ａ、２６ｂ。

３６　ａ、　　３６　ｂ）をそれぞれ設け、光検出器に
入射するそれぞれの光量の差が小さ（なるようにしてい
る。これにより大きなダイナミックレンジを有する高価
な光検出器を使用する必要がなくなり、よりローコスト
なシステムとすることができる。

なお、ＮＤフィルタには限らず、光路の遮光面積を制限
する光マスクによって通過光量を調節するようにしても
良い。

又、ＮＤフィルタを交換できる機構を設けるかあるいは
通過光量を自由に可変調節できる機構を用い、使用する
蛍光色素に応じてこれを調節するようにすればより汎用
性の高いシステムとなる。

（５）　　　レベルの　　え　２本実施例では上記強度レベルの切換えに関し、ＮＤフィ
ルタの他に更に光検出器の増幅率を測定光の種類によっ
て切換える回路も有している。これは記憶演算回路１６
１に光検出器２５．３５の出力を取込む際に、増幅アン
プのゲインをｌａ。

１ｂの粒子の通過に同期して切換える回路を設は光の発
光量に応じて検出感変を切換えるようにしている。この
ゲインは自由に調節することによって幅広い測定に対応
することができ、入力設定手段１６０から入力される測
定条件に応じて増幅のゲインを決定するようになってい
る。

さて、以上の２つの実施例は本発明の基本的構成の例で
あるが、より具体的な幾つかの使用例を以下説明する。

なお、使用できる蛍光色素の種類及び組合わせがこれら
に限定されるものではないことは言うまでもない。

使」Ｌ皿」工本例では、検体を３種類の蛍光色素で同時染色して、側
方光学系の２個の光検出器で４チヤンネル検出するもの
である。

第１図、第２図において、レーザ光源２及び３に波長４
８８ｎｍの２個の同−Ａｒ＋レーザ光源を用いる。なお
、レーザ光源を２個用意せずに第１１図（Ａ）のように
単一の光源からのレーザビームをハーフミラ−と全反射
ミラーを用いて光学的に２光束に分けるような構成とし
ても良い。この時、２本のレーザビームの強度比を変え
て各蛍光剤の励起効率に適した強度とすると更に好まし
い。

被検粒子を染色する蛍光色素の種類は波長４８８ｎｍの
励起光で励起される蛍光を選択する。例えばＦＩＴＣ（
５３０ｎ”）・ＰＥ（５７０°″）・Ｄ０虫１＝−（（
６１０Ｊｍ）の３種類の蛍光で染色するものとすると、
被検粒子からは４８８Ｊｍ、５３０Ｊｍ。

５７０Ｊｍ、６１０Ｊｍの４種類の波長の光が同時に発
生することになる。なお、ＤＣは直接４８８ｎｍの波長
では励起されないが、−旦ＰＥが励起されて発生する蛍
光（５７０Ｊｍ）でＤＣが励起されるという段階的な励
起過程を有する。

前処理として検体を上記３種の蛍光で染色した後に、本
実施例の装置で測定を行う。ここでダイクロイックミラ
ー２１ａ、２１ｂ、３１ａ、３１ｂの光分側波長をそれ
ぞれ、５１０Ｊｍ、５９０Ｊｍ。

４５０Ｊｍ、６５０Ｊｍ程度に設定し、バンドパスフィ
ルタ２２　ａ、　２２　ｂ、　　３２　ａ、　　３２　
ｂとしてそれぞれ５３０Ｊｍ、４８８Ｊｍ、５７０Ｊｍ
。

６１０Ｊｍ付近の波長の光を選択的に透過させる特性の
ものを用いて、それぞれの光学系でＦＩＴＣ。

ＳＳ（側方散乱光）、ＰＥ、ＤＣの強度検出を行なう。

被検粒子がｌａの位置を通過する時、上記４種類の光が
発生するが、この時９１０Ｔ亨４□　　。

−−１−、検出器２５においてはバンドパスフィルタ２２ａで選択さ
れたＦＩＴＣの蛍光強度が検出され、検出器３５におい
てはバンドパスフィルタ３２ａで選択されたＰＥの蛍光
強度が検出される。次に同一被検粒子がｌｂの位置を通
過する時には２＝＝；−一番−−−−閉−じ７Ｊ−”２
３　ｂ　、−−°　　　　　　　　、検出器２５におい
てはバンドパスフィルタ２２ｂで選択されたＳＳ強度が
検出され、検出器３５においてはバンドパスフィルタ３
２ｂで選択されたＤＣの蛍光強度が検出される。

こうして２個の検出器で４種類の異なる光学特性の光の
測定値を得ることができる。これに光検出器８ａ、８ｂ
で得られる２種類の前方散乱光強度を加えて、計６種類
の測定パラメータが得られる。

【見丘遣次に側方光学系で４種類の蛍光色素で同時染色した検体
を測定できる、６チヤンネル検出が可能な使用例を説明
する。

第２図の構成に側方検出系をもう一つ付加して３個の光
検出器を有する光学系において、第２図でレーザ光源２
として波長４８８ｎｍのＡｒ＋レーザ光源を、またレー
ザ光源３として波長６００ｎｍの色素レーザ光源を用い
る。なお、第５図（Ｂ）あるいは第５図（Ｃ）のような
形態をとれば一層簡略な装置になる。

被検粒子を染色する蛍光色素の種類は、波長４８８ｎｍ
の励起光で励起される蛍光、及び波長６００ｎｍで励起
される蛍光を選択する。例えば４８８Ｊｍに適したもの
としてＦＩＴＣ（５３０Ｊｍ）、ＰＥ（５７０Ｊｍ）を
用い、６００Ｊｍに適したものとしてＴＲ（６１０Ｊｍ
）、ＡＰＣ（６６０Ｊｍ）を用い、計４種類の蛍光で染
色する。

前処理として検体を上記４種の蛍光で染色した後に、本
実施例の装置で測定を行う。ここで、ダイクロイックミ
ラー２１ａ、２１ｂ、３１ａ、３１ｂの光分側波長をそ
れぞれ、５７０Ｊｍ、６０５Ｊｍ。

５５０Ｊｍ、６３０Ｊｍ程度に設定し、バンドパスフィ
ルタ２２ａ、２２ｂ、３２ａ、３２ｂ、４２ａ。

４２ｂとしてそれぞれ４８８Ｊｍ、６００Ｊｍ。

５３０Ｊｍ、６１０Ｊｍ、５７０Ｊｍ、６６０Ｊｍ付近
の波長の光を選択的に透過させる特性のもの選択する。

被検粒子がＡｒ＋レーザ光が照射される１ａの位置を通
過する時、４８８Ｊｍの照射光でＦＩＴＣ。

ＰＥが励起され、４８８Ｊｍ、５３０Ｊｍ、５７０Ｊｍ
の３種類の光が発生する。この時 −−コ−てτ＝ど２−ｂ。

゛　　　　　、検出器２５にてＳＳ（４８８Ｊｍ）が、
検出器３５でＦＩＴＣが、検出器４５でＰＥがそれぞれ
検出される。次に所定時間の後に同一の被検粒子が色素
レーザ光が照射される１ｂの位置を通過する時は、６０
０　ｎｍの照射光でＴＲ。

ＡＰＣが励起され、６００Ｊｍ、６１０Ｊｍ、６６０ｎ
ｍの３種類の光が発生する。この時点では、書各４検出
器２５にてＳＳ（６００ｎｍ）が、検出器３５でＴＲが
、検出器４５でＡＰＣがそれぞれ検出される。　以上の
ように本実施例では側方３個の検出器で側方散乱光２チ
ヤンネル、蛍光４チヤンネルの計６チヤンネル検出が可
能で、これに前方散乱光を加えた計７種類の異なる光学
特性の光が検出可能となる。

【１丘ｌ上記使用例２と同様に、側方光学系で４種類の蛍光色素
で同時染色した検体を測定できる、６チヤンネル検出が
可能な別の使用例を説明する。

レーザ光源２として波長６３３ｎｍのＨｅ−Ｎｅレーザ
光源、また光源３として波長４８８ｎｍのＡｒ＋レーザ
光源を用い、被検粒子を染色する蛍光色素の種類は、６
３３ｎｍの励起光に適したものとしてＡＰＣ（６６０ｎ
ｍ）、ＵＬ＝キニ＝ヰ絆（６９５ｎｍ）を選択し、４８
８ｎｍの励起光に適したものとしてＦＩＴＣ（５３０ｎ
ｍ）、ＰＩ（６２０ｎｍ）を選択して、これら４種の蛍
光色素で検体を多重染色する。

そしてダイクロイックミラー２１ａ、２１ｂ。

３１ａ、３１ｂの光分割波長をそれぞれ、６４０ｎｍ。

５００ｎｍ、６７０ｎｍ、５５０ｎｍ程度に設定し、バ
ンドパスフィルタ２２ａ、２２ｂ、３２ａ。

３２ｂ、４２ａ、４２ｂとしてそれぞれ６３３ｎｍ。

４８８ｎｍ、６６０ｎｍ、５２０ｎｍ、６９５ｎｍ。

６２０ｎｍ付近の波長の光を選択的に透過させる特性の
もの用いる。

これにより、上記使用例２と同様に、３個の光検出器を
有する側方光学系で６チヤンネルの検出が行える。

［発明の効果］以上本発明によれば、複数の光照射位置に複数の検体が
ほぼ同時に通過した場合には、検出をキャンセルして取
り込まないため、誤測定データの取り込みが無く、安定
性の高い測定が行える装置を提供することができる。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の実施例の構成図、第２図は実施例の側方の光学系の構成図、第３図は側方
の光学系の変形例の図、第４図は実施例の信号波形図、第５図は照射光学系の変形例の図、第６図は従来例の構成図、であり、図中の主な符号は、１・・・・フローセル、２．３・・・・レーザ光源、８・・・・光検出器、２２．３２・・・・バンドパスフィルタ、２５．３５・
・・・光検出器、２６．３６・・・・ＮＤフィルタ、￥九（３５）喘５図

Claims

【特許請求の範囲】

（１）個々の検体を順次移動させる手段と、第１の照射
光を生成し、検体が移動する第１の位置に照射する第１
照射手段と、第２の照射光を生成し、前記第１の位置とは異なる第２
の位置に照射する第２照射手段と、前記第１、第２の位
置を通過する検体から発する第１、第２の光学特性の光
を同一光検出器で時系列に検出する光検出手段と、前記第１、第２のそれぞれの位置に複数の検体がほぼ同
時に通過したことを判断する判断手段と、該判断手段の判断に基づいて、前記光検出手段での検出
をキャンセルする手段と、を有することを特徴とする検
体測定装置。
（２）前記判断手段は、検体が前記第１の位置を通過す
るタイミングおよび前記第２の位置を通過するタイミン
グを独立に検出し、両者の発生タイミングを比較する手
段を有する請求項（１）記載の検体測定装置。
（３）前記判断手段は、検体が前記第１の位置を通過す
るタイミングを検出する手段と、該タイミングの発生か
ら所定期間内に再び前記第１の位置に検体が通過するか
否かを検出する手段を有する請求項（１）記載の検体測
定装置。