JPH04188043A

JPH04188043A - 検体測定装置

Info

Publication number: JPH04188043A
Application number: JP2318986A
Authority: JP
Inventors: Yoshiyuki Azumaya; 良行東家; Atsushi Saito; 斉藤　厚志; Tatsuya Yamazaki; 達也山崎; Yuji Ito; 勇二伊藤
Original assignee: Canon Inc
Current assignee: Canon Inc
Priority date: 1990-11-21
Filing date: 1990-11-21
Publication date: 1992-07-06

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】［産業上の利用分野コ本発明は個々の検体に光を照射し光学的測定を行うこと
で検体の解析を行う検体測定の分野に関する。

［従来の技術］検体検査装置の一例としてフローサイトメータが従来か
ら知られており、生物学分野や医療分野などで広く用い
られている。

このフローサイトメータ、の典型的な構成を第６図に示
す。血液等のサンプル液を前処理として蛍光試薬等で染
色処理し適切な反応時間及び希釈濃度に調整する。そし
てこれをサンプル液容器１１５に入れる。また、蒸留水
や生理食塩水等のシース液はシース液容器１１４に入れ
る。サンプル液容器１１５及びシース液容器１１４は各
々不図示の加圧機構により加圧される。そして、シース
フロー原理により、フローセル１０４内でサンプル液が
シース液に包まれて細い流れに収斂され、フローセル１
０４内の流通部のほぼ中央部を通過する。

この時、サンプル液に含まれる個々の被検粒子（細胞、
微生物、担体粒子など）すなわち検体は分離されて１粒
或いはｌ塊ずつ順次流れる。この被検粒子の流れに対し
て、レーザ光源１０１から出射されたレーザ光が、母線
方向が各々流通部方向、流通部方向と直交したシリンド
リカルレンズ１０２．１０３の組によって任意の形状に
収斂され照射される。被検粒子に照射される光ビームの
形状は、一般には流れに対して直交する方向に長径を有
する楕円形状であることが好ましい。これは個々の被検
粒子の流れの位置が流体中で若干変動しても、被検粒子
に均一の強度で光ビームが照射されるようにするためで
ある。

被検粒子に光ビームが照射されると散乱光が生じる。前
記散乱光の内、光路前方方向に発する前方散乱光は集光
レンズ１０５、光検出器１０６によって測光される。な
お照射された光ビームが直接、光検出器１０６に入射す
るのを防ぐため、光路中集光レンズ１０５の手前には光
吸収性の微小なストッパ１００が設けられ、照射光源か
らの直接光、及び被検粒子を光透過した透過光を除去す
るようになっている。これにより被検粒子からの散乱光
のみを測光することができる。

また前記散乱光の内、レーザ光軸及び被検粒子の流れに
それぞれ直交する側方方向に発する光は集光レンズ１０
７で集光される。集光された光はダイクロイックミラー
１０８で反射され、散乱光の波長即ちレーザ光の波長（
Ａｒ＋レーザであれば４８８ｎｍ）を選択的に透過させ
るバンドパスフィルタ１２１を経て光検出器１１１にて
側方散乱光が測光される。また被検粒子が蛍光染色され
ている場合には、散乱光と共に発生する複数色の蛍光を
測光するため、集光レンズ１０７によって集光され、ダ
イクロイックミラー１０８を通過した蛍光の内、ダイク
ロイックミラー１０９、緑色蛍光波長用（５３０ｎｍ付
近）のバンドパスフィルタ１２２、光検出器１１２の組
によって緑色蛍光が検出され、また全反射ミラー１１０
．赤色蛍光波長用（５７Ｏｎｍ付近）のバンドパスフィ
ルタ１２３、光検出器１１３の組によって赤色蛍光が検
出される。光検出器１０６．１１１．１１２．１１３の
信号は各々演算回路１１６に入力され、該演算回路１１
６において、粒子の種類や性質等の解析、あるいは抗原
抗体反応の測定等の演算が行なわれる。

［発明が解決しようとしている課題］しかしながら、従来は複数色の蛍光を測光するのに各蛍
光毎に専用の光検出器を使用している。

これまでは赤色蛍光と緑色蛍光の２色、あるいはこれに
黄色蛍光を加えた３色を同時に測光する構成が一般的で
あったが、近年、更なる多色化の要望が寓まり、新たな
蛍光剤の開発も進んでいる。

これにより同時に使用する蛍光チャンネル数が増加する
と、それに応じて光検出器の数も増加してしまうことに
なる。即ち、光学配置が複雑化し、フォトマル等の高価
な光検出器が多数必要となってしまう問題点があった。

そこで本願出願人は特願平１−３２５００１号等におい
て、複数の種類の光を共通の光検出器で時系列に検出す
ることで、光検出器の数以上の測定パラメータが得られ
る装置を提案した。本発明は該提案した装置の更なる改
良を目的とする。

［目的を達成するための手段］上記目的を達成する本発明の検体測定装置は、個々の検
体を順次移動させる移動手段と、第１の照射光を生成し
、検体が移動する第１の位置に照射する第１照射手段と
、第２の照射光を生成し、前記第１の位置とは異なる第
２の位置に照射する第２照射手段と、前記第１１第２の
位置を通過する検体から発する第１、第２の光学特性の
光を同一光検出器で時系列に検出する光検出手段と、検
体が前記第１と第２の位置を通過する時間差から、検体
の移動速度を検知する速度検知手段とを有することを特
徴とする。

［実施例］以下、本発明の実施例を図面を用いて詳細に説明する。

第１図、第２図は第１の実施例の構成図を表わす。第１
図は実施例の基本的な構成図であり、前方の光学系、流
体系、制御系等を有する全体システムを表わす。同図に
おいてｌはサンプル液中の被検粒子（例えば生体細胞や
担体粒子）をシース液で包み込むようにして１個ずつ分
離して順に流す、いわゆるシースフローを形成するため
のフローセルで、フローセル１内の流通部を被検粒子が
紙面上方から下方に向けて流れる。シースフローを形成
するための流体系の構成は、血液試料や免疫反応液等の
サンプル液を蓄積するサンプル液容器１５０、それを加
圧するためのポンプ１５２、サンプル液の流量を調節す
る電気式レギュレータ１５４、生理食塩水等のシース液
を蓄積するシース液容器１５１、それを加圧するポンプ
１５３、シース液の流量を調節する電気式レギュレータ
１５５、そしてこれらを流体的に接続しフローセル１内
に導くためのチューブから成る。サンプル液容器１５０
内をポンプ１５２によって加圧してサンプル液を押出し
、一方、シース液容器１５１内をポンプ１５３で加圧し
てシース液を押出し、レギュレータ１５４．１５５の各
々による流量調節によりフローセルｌ内での状態、すな
わち流れ速度や個々の粒子の流れ間隔等が設定される。

なお上記のようなポンプとレギュレータによる加圧機構
に限らず、特開昭２−２１３７４４号公報に示されるよ
うなシリンジを用いた構成を採用して、シリンジの押出
し速度を調節するようにしても良い。

さて、次に前方の光学系について説明する。２゜３は波
長の異なるレーザ光源であり、この分野では一般的なＡ
ｒ＋レーザ、Ｈｅ−Ｎｅレーザ、色素レーザ、半導体レ
ーザ等のレーザ、更にはレーザに限らず様々な光源が利
用できる。なお、第５図（Ｄ）のように、レーザ光源を
３つ以上用意して各光源からのレーザビームを測定条件
に応じて選択的に照射光路に導（ようにすれば、更に多
目的な測定が可能な汎用性の高いシステムとなる。

第５図（Ｄ）において、７４は全反射ミラー、７５はハ
ーフミラ−１７６は光シャッタである。

第１図、第２図に戻って、４ａ、４ｂは照射光ビームを
フローセル部の被検領域に結像する集光レンズであり、
レーザ光源２及び３からのレーザビームをそれぞれフロ
ーセル中のｌａ、ｌｂの位置に結像する。結像ビームの
形状としては流れに直交する方向に長径を持つ楕円形状
が好ましい。

ここで両照射位置１ａ、Ｉｂの間の距離は１００μｍ程
度であり、これは測定する粒子のサイズよりは大きく、
順次流れる粒子の流れ間隔よりは十分に短いものである
。ビーム直進方向に配置される部材５ａ、５ｂはレーザ
光源２．３からのレーザビームをそれぞれ遮断し、暗視
野光学系を形成するための光ストッパであり、６は前方
散乱光を集光する集光レンズ、７は視野絞りで、ｌａ、
ｌｂの位置に対応する共役位置にそれぞれ開ロアａ。

７ｂが設けられる。８ａ、８ｂはｌａ、ｌｂ位置からの
前方散乱光を検知する光検出器である。

なお２本のレーザビームを形成するのに必ずしも２個の
レーザ光源を用意する必要はない。例えば第５図（Ａ）
（Ｂ）（Ｃ）のように単一レーザ光源からのビームを、
ミラ一部材によって２本に分岐しても良い。この時、第
５図（Ｂ）（Ｃ）ような形態を取れば波長の異なる複数
のビームが得られる。第５図（Ａ）は短波長のシングル
モードレーザからのレーザビームをハーフミラ−７１と
全反射ミラー７２によって同一波長の２光束を作り出す
光学系である。又、第５図（Ｂ）はレーザビームをハー
フミラ−７１と全反射ミラー７２によって２光束に分岐
して、それぞれの分岐ビームを波長変換部材７７２．７
７ｂ　（非線形光学素子やＡＯなど）によって波長変換
することにより異なる波長の２光束を作り出す光学系で
ある。更に第５図（Ｃ）は複数波長のマルチモードレー
ザからのレーザビームをダイクロイックミラー７３で異
なる波長の２光束に分岐して、異なる波長の２光束を作
り出す光学系である。

第１図の構成において、レーザ光源２より出射されたレ
ーザ光は集光レンズ４ａにより集光され被検領域１ａに
照射される。この被検領域１ａに被検粒子が通過すると
該被検粒子によって光散乱が起き、この時、被検粒子が
蛍光染色されていれば蛍光も励起されて散乱光と共に発
生する。前記発生する散乱光の内の一部は光路前方方向
に進み前方散乱光となる。この前方散乱光は集光レンズ
６、及び視野絞り７の開口部７ａを経て、光検出器８ａ
により強度検出され第１の前方散乱信号が得られる。同
様にして、レーザ光源３より出射されたレーザ光は集光
レンズ４ｂにより集光され被検領域１ｂに照射される。

この被検領域１ｂに被検粒子が通過すると、前方散乱光
は開口部７ｂを経て、光検出器８ｂにより強度検出され
第２の前方散乱信号が得られる。

又、１６０は入力設定手段であり、システムの各種モー
ド、被検粒子の流速や通過間隔、使用する蛍光剤の種類
、測定項目等、様々な測定条件を入力設定する。１６１
は記憶演算回路であり、光検出器８ａ、８ｂの出力、お
よび後述の側方の光学系の光検出器２５．２３の出力が
、ゲイン切換え可能な増幅アンプ、ピークホールド回路
、積分回路、Ａ／Ｄコンバータ等を介して取込まれ、ピ
ーク値や積分値のデジタルデータが記憶手段に記憶され
る。このデータを基に後に粒子解析の演算がなされ、こ
の結果はＣＲＴやプリンタ等の出力手段に出力される。

解析方法に関してはヒストグラムやサイトグラムを用い
た統計的処理が一般的であるが、詳細な説明はここでは
省略する。又、該記憶演算手段１６１は２つの前方散乱
光の検出出力タイミングから流速の算出、誤測定データ
の取込みキャンセル等を行なう機能も備えている。１６
２はコントロール手段でありシステムの各種動作手段の
総合的なコントロールを行なう。具体的には、ポンプ１
５２，１５３の駆動、電気式レギュレータ１５４，１５
５の調節、レーザ光源２．３の各々の０Ｎ１０ＦＦ制御
、後述する蛍光検出レベルの切換え等である。

次に第２図を用いて側方の光学系の説明を行なう。第２
図は第１図を側方から見た図であり側方の光学系を詳細
に表わしている。図中、１１は集光レンズであり、レー
ザ光源２，３からの照射レーザビーム直進方向と直交す
る側方方向に発する光を集光する。１３は視野絞りで、
ｌａ、ｌｂの面位置に対応した共役位置に開口部１３ａ
、１３ｂが設けられる。１４ａ、１４ｂは平行平板、１
５ａ。

１５はレンズであり、両部材の組によってｌａｌ。

ｌｂからのそれぞれの光が平行光束に変換される。

２１ａ、２１ｂ、３１ａ、３１ｂは被検粒子より生じた
側方散乱光及び蛍光を色分解するためのダイクロイック
ミラー、２２ａ、２２ｂ、３２ａ。

３２ｂはそれぞれの蛍光の波長を選択するバンドパスフ
ィルタであり、このダイクロイックミラーとバンドパス
フィルタの組合わせによりそれぞれの検出光波長が選択
される。２６ａ、２６ｂ、３６ａ。

３６ｂはそれぞれ所定の透過率を有するＮＤフィルタで
ある。２４．３４はレンズ、２５．３５は側方散乱光及
び蛍光を検知するための光検出器であり、該光検出器と
しては検出感度の高いフォトマルチプライヤが好適であ
る。該光検出器２５゜３５は記憶演算手段６１に接続さ
れている。ここで位置１ａから発した光は開口部１３ａ
で一旦結像し、ダイクロイックミラー２１ａ、３１ａ、
バンドパスフィルタ２２　ａ、３２　ａ１ＮＤフィルタ
２６ａ、３６ａの光路を通って光検出器２５．２５に導
かれてここで再結像する。一方、１トから発した光は開
口部１３ｂで一旦結像し、ダイクロイックミラー２１ｂ
、３１ｂ、バンドパスフィルタ２２ｂ、３２ｂ、ＮＤフ
ィルタ２６ｂ、３６ｂの光路を通って光検出器２５．２
５に導かれて再結像する。

第３図は上記側方光学系の変形例であり、第１図を上方
から見た図である。なお、前方光学系は図では省略しで
ある。図中、先の図と同一の符号は同一あるいは同等の
部材を表わす。

レーザ光源２からのレーザの照射位置１ａから側方に発
する光は一旦、図中上方の光路に引き回され、コーナー
キューブやポロプリズム等の反射部材９９を経て、開口
絞り１３ａで一旦結像し、光検出器２５．３５で再結像
して入射する。一方レーザ光源３からのレーザの照射位
置１ｂから側方に発する光は図中下方の光路に導かれ、
開口絞り１３ｂで一旦結像し、共通の光検出器２５．３
５で再結像して検出される。本例は基本的には先の第２
図の光学系と同等であるが、１ａからの蛍光と１ｂから
の蛍光を検出する光路とを明確に分離して光学配置した
ところに特徴がある。

第４図は被検粒子の通過に際して各光検出器で得られる
検出パルスの一例である。第４図（Ａ）、第４図（Ｂ）
はそれぞれ光検出器８ａ、８ｂで得れれる前方散乱光の
検出出力、第４図（Ｃ）、第４図（Ｄ）はそれらを所定
閾値と比較して作り出したタイミングパルス、第４図（
Ｅ）、第４図（Ｆ）はそれぞれ光検出器２５．３５で得
られる蛍光の検出出力を示す。各光検出器２５．３５に
よる蛍光の検出出力は被検粒子がｌａ、ｌｂ位置を通過
する際に時系列的に得られ、これを先のタイミングパル
スを利用してそれぞれ別々に時系列に取込む。

以上のように本実施例では側方２個の検出器で４チヤン
ネル検出が可能で、これに２つの前方散乱光を加えた計
６種類の異なる光学特性の光が検出可能となる。

なお、以上の説明では側方の光検出器の数が２個の実施
例を示したが、検出器の個数はこれに限定されるもので
は無い。１個であれば一般的な従来例と同様、２色の蛍
光を単一の光検出器で得ることができ　　− 装置構成が非常に簡略なものとなる。又、光検出器の数が３個以上であれば更に多くのパ
ラメータを得ることができる。又、側方の光検出器で検
出するのは蛍光には限らず側方散乱光を検出するように
しても良い。

さて以上はシステムの基本的な形態の説明であるが、次
に実施例のシステムの特徴的な機能についてそれぞれ説
明する。

（１）１　　　に、じたレーザ本実施例のシステムを多目的に使用する場合、測定目的
や使用する蛍光剤の種類によっては、必ずしも２つのレ
ーザ光波長は必要ではな（片方だけで事足りる場合もあ
る。あるいは第１１図（Ｄ）のように３種類以上の光源
からのレーザービームを選択的に照射する形態を取った
場合は、使用しないレーザ光波長は不必要である。

そこで本実施例のシステムでは、使用用途に応じて複数
の測定モードを切換え、使用しないレーザ光源をＯＦＦ
にする機能を有している。具体的には２本のレーザ光を
同時に照射して時系列的な測定を行なう第１のモードと
、どちらか一方のレーザ光を照射して他方を非作動にす
る第２のモードとに切換えることができる。これは入力
設定手段１６０において設定された測定条件に応じて、
コントロール手段１６２が各レーザ光源の照射の○Ｎ１
０ＦＦを独立して行ない、非使用のレーザ光源をスリー
ブモードにするか、あるいはレーザ光源の電源を遮断す
る。これによってシステムの低電力消費化およびレーザ
寿命の延長を達成している。

（２）１１立二１１２つのレーザ照射位置１ａとｌｂの両地点間の距離は一
定値（約１００μｍ）であるので、前方散乱光検出器８
ａ、８ｂの出力から作られる第４図（Ｃ）、第４図（Ｄ
）に示す両タイミングパルスの発生タイミングを比較し
、その時間差から被検粒子の通過速度すなわち流速を求
めることができる。このタイミングの比較と流速の算出
は記憶演算回路１６１で行ない、コントロール手段１６
２ではこの流速を常時フィードバックして、入力設定手
段１６０で設定された流速となるように電気式レギュレ
ータ１５４，１５５の調節を行なう。

これにより設定された流速に常に正確に保つことができ
、安定性及び測定精度を向上させることができる。

なおポンプと電気式レギュレータとによる加圧機構には
限らず、シリンジを用いた加圧機構を用いても良い。そ
の場合シリンジの押出し速度を調節するようにする。

（３）　データの　゛み　ヤンセル次々と流れる被検粒子の流れ間隔は、２か所の照射位置
１ａ、Ｉｂの間隔（１００μｍ程度）よりは十分に太き
（設定されているが、稀にあまり間隔を置かずに流れて
（る場合もあり、両位置にほぼ同時にそれぞれの粒子が
差し掛かることもあり得る。この場合には両位置からそ
れぞれ散乱光及び蛍光が発生して共通の光検出器に混在
して入射し混在データ検出されてしまう。

そこでこれを防ぐために本実施例では、Ｉａ。

１ｂの位置に検体がほぼ同時に通過したことを検知して
、はぼ同時に通過したと判断されたら、検出手段からの
データをキャンセルして取込まないような手段を設けて
いる。具体的には、記憶演算手段１６１において、第４
図（Ｃ）、第４図（Ｄ）に示すタイミングパルスの発生
タイミングがもし一致あるいは非常に接近している場合
は、ｌａ。

１ｂの両位置に２個の被検粒子がほぼ同時に通過したと
判断して、この時の各光検出器のデータはキャンセルし
て取込まないようにしている。

あるいは別法として次のような方法でも良い。

粒子がｌａからｌｂに移行するまでの時間はほぼ一定と
考えられる。そこで粒子が１ａを通過する時の検出パル
ス（光検出器８ａの出力）が発生してから、その粒子が
１ｂに移行して通過するだけの所定期間の間に、再び１
−ａ（光検出器８ａの出力）から検出パルスが発生した
ら、粒子が続けて流れてきたと判断して、データ取込み
をキャンセルする。

以上のような手段を設けることにより、誤データの取込
みが無いため、より確実な測定が行なえる。

（４）　　　レベルの　　え　ｌ一般に蛍光と散乱光の強度レベルは大きく異なり、又、
蛍光色素の種類によっても発生する蛍光光量が大きく異
なる。よって、これらを共通の光検出器で時系列に検出
するためには非常にダイナミックレンジの広い検出器が
必要になってしまう。

そこで本実施例では光検出器に至る各光路中に、使用す
る蛍光の発光量に応じて通過光量を調節する通過光量調
節手段（ＮＤフィルタ２６ａ、２６ｂ。

３６　ａ、　　３６　ｂ）をそれぞれ設け、光検出器に
入射するそれぞれの光量の差が小さ（なるようにしてい
る。これにより大きなダイナミックレンジを有する高価
な光検出器を使用する必要がな（なり、よりローコスト
なシステムとすることができる。

なお、ＮＤフィルタには限らず、光路の遮光面積を制限
する光マスクによって通過光量を調節するようにしても
良い。

又、ＮＤフィルタを交換できる機構を設けるかあるいは
通過光量を自由に可変調節できる機構を用い、使用する
蛍光色素に応じてこれを調節するようにすればより汎用
性の高いシステムとなる。

（５）　　　レベルの　　え　２本実施例では上記強度レベルの切換えに関し、ＮＤフィ
ルタの他に更に光検出器の増幅率を測定光の種類によっ
て切換える回路も有している。これは記憶演算回路１６
１に光検出器２５．３５の出力を取込む際に、増幅アン
プのゲインをｌａ、ｌｂの粒子の通過に同期して切換え
る回路を設け、光の発光量に応じて検出感度を切換える
ようにしている。このゲインは自由に調節することによ
って幅広い測定に対応することができ、入力設定手段１
６０から入力される測定条件に応じて増幅のゲインを決
定するようになっている。

さて、以上の２つの実施例は本発明の基本的構成の例で
あるが、より具体的な幾つかの使用例を以下説明する。

なお、使用できる蛍光色素の種類及び組合わせがこれら
に限定されるものではないことは言うまでもない。

使」Ｌ例」２本例では、検体を３種類の蛍光色素で同時染色して、側
方光学系の２個の光検出器で４チヤンネル検出するもの
である。

第１図、第２図において、レーザ光源２及び３に波長４
８８ｎｍの２個の同−Ａｒ＋レーザ光源を用いる。なお
、レーザ光源を２個用意せずに第１１図（Ａ）のように
単一の光源からのレーザビームをハーフミラ−と全反射
ミラーを用いて光学的に２光束に分けるような構成とし
ても良い。この時、２本のレーザビームの強度比を変え
て各蛍光剤の励起効率に適した強度とすると更に好まし
い。

被検粒子を染色する蛍光色素の種類は波長４８８　ｎｍ
の励起光で励起される蛍光を選択する。例えばＦＩＴＣ
（５３０ａｍ）、ＰＥ　　（５７０ａｍ）、ＤＣ和遡ｄ
午罐ｉ（６１０ａｍ）の３種類の蛍光で染色するものと
すると、被検粒子からは４８８ａｍ、５３０ａｍ。

５７０ａｍ、６１０ａｍの４種類の波長の光が同時に発
生することになる。なお、ＤＣは直接４８８ｎｍの波長
では励起されないが、−旦ＰＥが励起されて発生する蛍
光（５７０ａｍ）でＤＣが励起されるという段階的な励
起過程を有する。

前処理として検体を上記３種の蛍光で染色した後に、本
実施例の装置で測定を行う。ここでダイクロイックミラ
ー２１ａ、２１ｂ、３１ａ、３１ｂの光分別波長をそれ
ぞれ、５１０ａｍ、５９０ａｍ。

４５０ａｍ、６５０ａｍ程度に設定し、バンドパスフィ
ルタ２２　ａ、　２２　ｂ、　　３２　ａ、　　３２　
ｂとしてそれぞれ５３０ａｍ、４８８ａｍ、５７０ａｍ
。

６１０ａｍ付近の波長の光を選択的に透過させる特性の
ものを用いて、それぞれの光学系でＦＩＴＣ。

ＳＳ（側方散乱光）、ＰＥ、ＤＣの強度検出を行なう。

被検粒子が１ａの位置を通過する時、上記４種類の光が
発生するが、この時゛、　　　　　　　　・　　　　−、検出器２５においてはバンドパスフィルタ２２ａで選択さ
れたＦＩＴＣの蛍光強度が検出され、検出器３５におい
てはバンドパスフィルタ３２ａで選択されたＰＥの蛍光
強度が検出される。次に同一被検粒子が１ｂの位置を通
過する時には＃キｎパ。

−゛、検出器２５においてはノくンドパスフィルタ２２ｂで選択されたＳＳ強度が検出され
、検出器３５においてはバンドパスフィルタ３２ｂで選
択されたＤＣの蛍光強度が検出される。

こうして２個の検出器で４種類の異なる光学特性の光の
測定値を得ることができる。これに光検出器８ａ、８ｂ
で得られる２種類の前方散乱光強度を加えて、計６種類
の測定パラメータが得られる。

吏且五遣次に側方光学系で４種類の蛍光色素で同時染色した検体
を測定できる、６チヤンネル検出が可能な使用例を説明
する。

第２図の構成に側方検出系をもう一つ付加して３個の光
検出器を有する光学系において、第２図でレーザ光源２
として波長４８８ｎｍのＡｒ＋レーザ光源を、またレー
ザ光源３として波長６００ｎｍの色素レーザ光源を用い
る。なお、第５図（Ｂ）あるいは第５図（Ｃ）のような
形態をとれば一層簡略な装置になる。

被検粒子を染色する蛍光色素の種類は、波長４８８ｎｍ
の励起光で励起される蛍光、及び波長６００ｎｍで励起
される蛍光を選択する。例えば４８８ａｍに適したもの
としてＦＩＴＣ（５３０ａｍ）、ＰＥ（５７０ａｍ）を
用い、６００ａｍに適したものとしてＴＲ（６１０ｎｍ
）　、　ＡＰＣ（６６０ｎｍ）を用い、計４種類の蛍光
で染色する。

前処理として検体を上記４種の蛍光で染色した後に、本
実施例の装置で測定を行う。ここで、ダイクロイックミ
ラー２１ａ、２１ｂ、３１ａ、３１ｂの光分別波長をそ
れぞれ、５７０ａｍ、６０５ａｍ。

５５０ａｍ、６３０ａｍ程度に設定し、バンドパスフィ
ルタ２２　ａ、　２２　ｂ、　　３２　ａ、　　３２　
ｂ、　　４２　ａ。

４２ｂとしてそれぞれ４８８ａｍ、６００ａｍ。

５３０ａｍ、６１０ａｍ、５７０ａｍ、６６０ａｍ付近
の波長の光を選択的に透過させる特性のもの選択する。

被検粒子がＡｒ＋レーザ光が照射されるｌａの位置を通
過する時、４８８ａｍの照射光でＦＩＴＣ。

ＰＥが励起され、４８８ａｍ、５３０ａｍ、５７０ａｍ
の３種類の光が発生する。この時゛　　′＋＋゛　　　　　、検出器２５にてＳＳ（４８８ａｍ）が、
検出器３５でＦＩＴＣが、検出器４５でＰＥがそれぞれ
検出される。次に所定時間の後に同一の被検粒子が色素
レーザ光が照射される１ｂの位置を通過する時は、６０
０ａｍの照射光でＴＲ。

ＡＰＣが励起され、６００ａｍ、６１０ａｍ、６６０ａ
ｍの３種類の光が発生する。この時点では、奔ｉ悸−１
１、゛　　　　　　　　　　。

！− 検出器２５にてＳＳ（６００ｎｍ）が、検出器３５でＴ
Ｒが、検出器４５でＡＰＣがそれぞれ検出される。以上
のように本実施例では側方３個の検出器で側方散乱光２
チヤンネル、蛍光４チヤンネルの計６チヤンネル検出が
可能で、これに前方散乱光を加えた計７種類の異なる光
学特性の光が検出可能となる。

使」Ｌ外」− 上記使用例２と同様に、側方光学系で４種類の蛍光色素
で同時染色した検体を測定できる、６チヤンネル検出が
可能な別の使用例を説明する。

レーザ光源２として波長６３３ｎｍのＨｅ−Ｎｅレーザ
光源、また光源３として波長４８８　ｎｍのＡｒ＋レー
ザ光源を用い、被検粒子を染色する蛍光色素の種類は、
６３３　ｎｍの励起光に適したものとしてＡＰＣ（６６
０ｎｍ）、ＵＬ千判１Ｔ調４キ峙−（６９５ｎｍ）を選
択し、４８８ｎｍの励起光に適したものとしてＦＩＴＣ
（５３０ｎｍ）、ＰＩ（６２０ｎｍ）を選択して、これ
ら４種の蛍光色素で検体を多重染色する。

そしてダイクロイックミラー２１ａ、２１ｂ。

３１ａ、３１ｂの光分割波長をそれぞれ、６４０ｎｍ。

５００ｎｍ、６７０ｎｍ、５５０ｎｍ程度に設定し、バ
ンドパスフィルタ２２　ａ、　２２　ｂ、　　３２　ａ
。

３２ｂ、４２ａ、４２ｂとしてそれぞれ６３３ｎｍ。

４８８ｎｍ、６６０ｎｍ、５２０ｎｍ、６９５ｎｍ。

６２０　ｎｍ付近の波長の光を選択的に透過させる特性
のもの用いる。

これにより、上記使用例２と同様に、３個の光検出器を
有する側方光学系で６チヤンネルの検出が行える。

［発明の効果コ以上本発明によれば、検体の移動速度を検知することが
き、より安定性の高い装置を提供することができる。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の実施例の構成図、第２図は実施例の側方の光学系の構成図、第３図は側方
の光学系の変形例の図、第４図は実施例の信号波形図、第５図は照射光学系の変形例の図、第６図は従来例の構成図、であり、図中の主な符号は、１・・・・フローセル、２．３・・・・レーザ光源、８・・・・光検出器、２２．３２・・・・バンドパスフィルタ、２５．３５・
・・・光検出器、２６．３６・・・・ＮＤフィルタ、笛５図

Claims

【特許請求の範囲】

（１）個々の検体を順次移動させる移動手段と、第１の
照射光を生成し、検体が移動する第１の位置に照射する第１照射手段と、第２の照射光を生成し、前記第１の位置とは異なる第２の位置に照射する第２照射手段と、前記第１、第２の位置を通過する検体から発する第１、第２の光学特性の光を同一光検出器で時系
列に検出する光検出手段と、検体が前記第１と第２の位置を通過する時間差から、検体の移動速度を検知する速度検知手段と、を有することを特徴とする検体測定装置。
（２）前記速度検知手段で検知された移動速度をフィー
ドバックして前記移動手段を制御して設定速度に保つ制
御手段を有する請求項（１）記載の検体測定装置。
（３）前記速度検知手段は、検体が前記第１の位置を通
過するタイミングを検出する手段と、検体が前記第２の
位置を通過するタイミングを検出する手段と、両者のタ
イミングの差から移動速度を算出する手段を有する請求
項（１）記載の検体測定装置。