JPH0411895A - ベタニンの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野コ 本発明は、ＲｉプラスミドのＴ−ＤＮＡがアカサトウダ
イコンのゲノムに組み込まれた毛状根を利用して、ベタ
ニンを効率よく安定して生産する生物工学的方法に関す
るものである。

［従来の技術と問題点〕 アカサトウダイコンは北アメリカ、　ソ連、東欧諸国、
イスラエルなどで栽培されており、ベタニンはその８！
茎より抽出されている。　しかし、栽培Ｍ物によるベタ
ニンの生産には、広大な圃場を必要とし、しかもその品
質は気候、ｍ王など人為的制御の困難な自然環境条件に
より大きく左右される欠点があるから、これらの欠点を
克服する新しいベタニンの生産技術の開発が望まれてい
る。

［問題点を解決するための手段］ 本発明は、Ｒｉプラスミドを持つ江。お二１■Ｊ属ある
いは江田霞Ｊ属の細菌を７カサトウダイコンに５染させ
、Ｒｉラプラスミド中Ｔ−ＤＮＡが植物ゲノムに組み込
まれた毛状根を誘導し、これを無菌的に継代培養して、
高増殖性でペタニンを高濃度に含有する毛状根を反復選
抜し、得られた高生産性毛状根を用いてベタニンを効率
よく、しかも安定的に生産するための製造方法に関する
ものである。

使用する細菌は　　　　ｔｒ′ｕ　ルムユＩＬｃＪＡ４
株、１５８３４株、８１９６株、２６５９株などＲｉプ
ラスミドを保有する天然のすべての菌株、あるいは江二
す己」ユ■　はｎ旦旦」由来のＲｉプラスミドを人工的
に導入された　　ｂ　ｔｅ゛　　ロＬｈ左匡ｕあるいは
１１１」属等の細菌を接種源として利用することができ
る。

本発明によりアカサトウダイコンに上記の細菌を感染さ
せると、Ｒｉプラスミド由来のＴ−ＤＮＡが植物ゲノム
に組み込まれた毛状根を誘導することができる。

誘導した毛状根を光照射下、２５℃で植物ホルモン無添
加Ｌ　Ｓ　（Ｌｉｎｓｍａ！ｅｒ−！ｌｉｋｏｏｇ）寒
天培地あるいはｙｔ　Ｓ　（Ｍｕｒａｓｈｉｇｅ−５ｋ
ｏｏｇ）寒天培地などで培養し、生育速度が早く、かつ
ベタニン産生能の高い毛状根を選抜する。誘導に使用し
た接種細菌は、　　乞状根を抗生物質を含む培地で培養
するか、あるいは毛状根の先端部のみの培養を反復する
ことにより除去することができる。

得られた個々の毛状根は、　　Ｒ１プラスミドによって
形質転換した１個あるいは数個の細胞に由来していると
考えられる。得られる毛状根の多くは、当初は遺伝的に
ヘテロな集団と考えられるから、根の先端の分裂組織を
切り出して、生育速度が早くかつベタニン産生能も高い
毛状根の選抜を植物ホルモン無添加培地上で反復すれば
、最終的には遺伝的に均一な細胞からなる色素産生能の
高い毛状根クローンを得ることができる。

［実施例］ アカサトウダイコンＢｅｔａ　ｖｕｌｇａｒｉｓ　ｖａ
ｒ、ｒｕｂｒａの展開葉を、流水および中性洗剤で葉面
を充分に洗浄した。次に７０％エタノール溶液に３０秒
間、２％次亜塩素酸ナトリウム溶液に２０分間浸して葉
面を減菌した。滅菌葉を減菌水で充分に洗浄し、（以下
余白） ペーパタオル上で水分を除いた後、ペーパパンチを用い
て葉脈を含む小円盤を打ち抜き、多数のリーフディスク
を作製した。　　一方、アグロバクテリウム培養用培地
（１％　Ｂａｃｔｏ−ｔｒｙｐｔｏｎ、　　０．５！　
　Ｙｅａｓｔ　　ｅｘｔｒａｃｔ、ＩＫ　　５ｕｃｒｏ
ｓｅ、　　１０　　ａＭＭＥＳ、ｐＨ５２）で−晩培養
した　　ｍ　ｍ　　Ａ ４株培養液に、上記のリーフデ、イスクを全体が沈むよ
うに１０分間浸した０次ぎにリーフディスクを細菌液か
ら取り出し、ディスク表裏面に付着した過剰の接覆蔚液
をろ紙で除いｆ：ｆＪｋ、これをＭｗＩ水の■ みを含む培養容器（プランテックス、東洋紡社）に移植
し、２５℃、光照射下（１２ｈｒ／ｄａｙ）で３日間靜
■ １ランテツクスにディスクを移し、同条件下で培養を続
けたところ、接種約２週間後に葉脈の切断面よりカルス
状組織が現れ、約３週間後にそのカルス状組織より毛状
根の分化が認められた。

得られた多数の毛状根の先端組織をそれぞれ約５１−ず
つ切取り、抗生物質無添加のＬＳ寒天培地上で培養した
。赤色を呈し、生育が良好な毛状根の先端組織的５１を
上記のＬＳ寒天培地（二移植培養し、更にその先端組織
の培養を１５回以上反復することにより、安定してベタ
ニンを生産する無菌の毛状根を選抜することに成功した
。これら毛状根のベタニン含量は乾燥重量当り０．８π
〜１．３にであり、原植物根茎中のベタニン含量′（約
０．５π）４こ比べ、同等かそれ以上であった。

以上のようにして選抜された毛状根２ｇを、ＬＳ液体培
地７５ｍ　ｌを含む３００ｍ　ｌマイヤーフラスコに移
植し、　３週間、２５℃、明所培養することによりベタ
ニンを含む毛状根２０ｇを得ることができた［発明の効
果］ 本発明によれば、アカサトウダイコン栽培のための広大
な土地を必要とせず、また季節や天候に左右されること
なく、一定の品質を持つベタニンを安定的に、　しかも
効率的に製造することができる。

本発明は計画的かつ工業的なベタニンの製造方法として
きわめて有効である。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. アカサトウダイコン（Ｂｅｔａｖｕｌｇａｒｉｓｖａｒ
   ．ｒｕｂｒａ、別名赤ビート）に、Ｒｉプラスミドを持
   つＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属あるいはＲｈｉｚｏｂ
   ｉｕｍ属の細菌を感染させ、ＲｉプラスミドのＴ−ＤＮ
   Ａが植物ゲノムに組み込まれて誘発される毛状根を植物
   ホルモン無添加培地上で無菌的に反復培養して、ベタニ
   ン産生能の高い毛状根を選抜し、この毛状根を用いてベ
   タニンを生産することを特徴とするベタニンの製造法。